一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法；步驟如下：1、在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面劃線接種，作為斜面保藏菌；2、在瓊脂斜面中挑取1個典型的細菌菌落，接種于營養(yǎng)肉湯中得到細菌菌懸液；3、吸取細菌菌懸液，移入裝有PBS的試管中，充分混勻、稀釋后作為接種菌懸液；4、制作加樣袋；5、將加樣袋加入無菌水預(yù)潤濕作為空白對照品，加樣袋中分別加入抗菌蠶砂制品及非抗菌蠶砂制品，加入無菌水預(yù)潤濕作為待測樣品及對照樣品；6、將待測樣品、對照樣品和空白對照品分別置于涂布接種菌懸液的瓊脂平板表面，取少量接種菌懸液滴加于三個樣品上；7、在培養(yǎng)期間，記錄并獲得蠶砂制品的抗菌性能。通過上述方式，本發(fā)明操作簡單、速度快、使用成本低。
【專利說明】
一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及蠶砂制品抗細菌性能，特別是一種操作簡單、速度快、使用成本低的檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蠶砂，又名蠶矢，多產(chǎn)于江蘇、浙江、四川等地，為蠶蛾科昆蟲家蠶蛾幼蟲的干燥糞便。性味甘溫，有燥濕、祛風、化濁、活血定痛之功效。民間用蠶砂作枕芯的填充物，有清肝明目、養(yǎng)目、養(yǎng)腦、治高血壓、耳鳴等功效，嬰幼兒使用效果更為明顯。蠶砂枕采用優(yōu)質(zhì)蠶砂為原料，保持頭部溫度均恒。做到真正涼頭熱腳、健康睡眠，老年人使用可祛風除濕、聰耳明目、和胃化濁。無毒無副作用，常年有效，老幼咸宜。醫(yī)學(xué)證明，蠶砂枕能祛風除濕，涼爽止汗，祛署退火，健腦益智。特別有益于青少年和幼兒枕出健康周正的頭型。但蠶砂制品易發(fā)生腐敗，腐敗后的產(chǎn)品不僅影響其使用功效，嚴重時亦會對人體產(chǎn)生危害，敏感體質(zhì)的人可能會產(chǎn)生過敏反應(yīng)等。因此，蠶砂制品生產(chǎn)廠家將蠶砂用作填充物時一般多采用抗菌抑菌處理以防止其發(fā)生腐敗，以期使得蠶砂制品更好的應(yīng)用于人們?nèi)粘Ｉ钪小?br>[0003]然而，要對蠶砂制品進行抗菌檢測，判斷其抗菌性能及功效，目前沒有現(xiàn)存的檢測方法可以采用，最終無法實施蠶砂制品的抗菌性能評估。為此，本發(fā)明反復(fù)探索了各種抗菌檢測實驗方法，并進行了對比試驗，最終采用瓊脂平皿法實現(xiàn)了對蠶砂制品的抗菌性能檢測。蠶砂大小不一，呈顆粒狀，因而導(dǎo)致其檢測操作困難，針對這一問題，本發(fā)明采用與蠶砂材料類同的家蠶絲綢制成蠶砂試驗套，將蠶砂放入套中完成了蠶砂的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抗菌檢測試驗，為蠶砂抗菌制品的開發(fā)以及對現(xiàn)有的各種抗菌產(chǎn)品的檢測提供基礎(chǔ)，對建立香砂制品抗囷性能的標準檢測方法具有現(xiàn)實意乂。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種操作簡單、速度快、使用成本低的檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法。
[0005]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個技術(shù)方案是一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，具體步驟如下:
步驟I:細菌凍干菌菌粉中加入溶菌肉湯，37 °C ± 1°C恒溫振蕩培養(yǎng)18小時，然后用接種針于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面劃線，37°C±1°C，培養(yǎng)24小時，此斜面可在2?8°C下保存I個月，作為斜面保藏菌；
步驟2:在步驟I得到的瓊脂斜面中挑取I個典型的細菌菌落，接種于20mL營養(yǎng)肉湯中，37 °C ± TC，振蕩培養(yǎng)18?20小時，得到細菌菌懸液;然后利用分光光度法測定細菌濃度，此菌懸液活菌數(shù)應(yīng)達到I X 19?5 X 109CFU/mL;
步驟3:吸取步驟2中的細菌菌懸液1.8mL~2.5mL，移入裝有9mL PBS的試管中，充分混勻，依次進行10倍梯度稀釋，稀釋至活菌數(shù)為200CFU?250CFU的范圍，作為接種菌懸液；
步驟4:剪取真絲圓片，兩片對稱縫制真絲布袋作為加樣袋，真絲邊緣不超過0.3mm，121°〇濕熱滅菌15min;
步驟5:在步驟4中的加樣袋中分別加入抗菌蠶砂制品及非抗菌蠶砂制品，加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預(yù)潤濕，使蠶砂的濕度平衡至90%以上，作為待測樣品及對照樣品。
[0006]步驟6:將步驟4中的加樣袋加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預(yù)潤濕，作為抗菌性能檢測的空白對照品；
步驟7:取步驟3制備的接種菌懸液均勻涂布于瓊脂平板培養(yǎng)基中，將步驟5中的待測樣品、對照樣品及步驟6中的空白對照品分別置于瓊脂平板表面，取少量步驟3制備的接種菌懸液分別滴加于每個待測樣品、對照樣品及空白對照品上，37°C±1°C培養(yǎng)18?24小時，每個樣品至少3個平行試驗；
步驟8:在培養(yǎng)期間，記錄各樣品表面細菌生長情況，將待測樣品、對照樣品和空白對照品培養(yǎng)后的各平行試驗的實際活菌數(shù)值的平均值分別記為數(shù)值A(chǔ)、B和C。按下式計算抗菌蠶砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，獲得蠶砂制品的抗菌性能，以百分率計。
[0007]優(yōu)選的，所述菌株選用金黃色葡萄球菌ATCC6538或大腸桿菌ATCC 11299或大腸桿菌ATCC8739或大腸桿菌ATCC29522。
[0008]優(yōu)選的，步驟3中的細菌菌懸液吸取量，根據(jù)大腸桿菌取吸取量的下限，金黃色葡萄球菌取吸取量的上限。
[0009]優(yōu)選的，步驟4中的真絲加樣袋為GB/T7568.6-2002標準真絲制品，直徑3.8 土0.5 cm，真絲邊緣不超過0.3mm。
[0010]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明所述的一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，操作簡單、速度快、使用成本低;通過利用溶出性抗菌劑可以離開蠶砂制品進入培養(yǎng)皿的特性，采用在蠶砂制品上接種測試菌的方法，利用肉眼及顯微鏡鏡檢等方法觀察蠶砂制品的微生物生長情況，來檢測蠶砂制品的抗細菌性能，從而實現(xiàn)對蠶砂制品的抗細菌性能的評估。適用于抗菌劑整理的蠶砂制品的抗細菌性能評估。
【具體實施方式】
[0011]下面對本發(fā)明的較佳實施例進行詳細闡述，以使本發(fā)明的優(yōu)點和特征能更易于被本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，從而對本發(fā)明的保護范圍做出更為清楚明確的界定。
[0012]本發(fā)明實施例包括:
一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，具體步驟如下:
步驟1:細菌凍干菌菌粉中加入2mL溶菌肉湯，所述菌株選用金黃色葡萄球菌ATCC 6538或大腸桿菌ATCC 11299或大腸桿菌々10:8739或大腸桿菌410:29522;在371€±1°(:恒溫振蕩培養(yǎng)18小時，然后用接種針于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面劃線，37°C ±1°C，培養(yǎng)24小時，此斜面可在2?8°C下保存I個月，作為斜面保藏菌；
步驟2:在步驟I得到的瓊脂斜面中挑取I個典型的細菌菌落，接種于20mL營養(yǎng)肉湯中，在371:±1°(:，13(^/1^11，振蕩培養(yǎng)18~20小時，得到細菌菌懸液;然后利用分光光度法測定細菌濃度，此菌懸液活菌數(shù)應(yīng)達到I X 19?5 X 109CFU/mL;
步驟3:吸取步驟2中的細菌菌懸液1.8mL~2.5mL，所述細菌菌懸液吸取量，根據(jù)大腸桿菌取吸取量的下限，金黃色葡萄球菌取吸取量的上限;移入裝有9mL PBS的試管中，充分混勻，依次進行10倍梯度稀釋，稀釋至活菌數(shù)為200CFU?250CFU的范圍，作為接種菌懸液；
步驟4:剪取直徑為3.8 ± 0.5cm真絲圓片，兩片對稱縫制真絲布袋作為加樣袋，真絲邊緣不超過0.3臟，121°(^濕熱滅菌15111；[11;
步驟5:在步驟4中的加樣袋中分別加入抗菌蠶砂制品及非抗菌蠶砂制品，加入含有
0.05%非離子潤濕劑的無菌水預(yù)潤濕，使蠶砂的濕度平衡至90%以上，作為待測樣品及對照樣品；
步驟6:將步驟4中的加樣袋加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預(yù)潤濕，作為抗菌性能檢測的空白對照品；
步驟7:取步驟3制備的接種菌懸液均勻涂布于瓊脂平板培養(yǎng)基中，將步驟5中的待測樣品、對照樣品及步驟6中的空白對照品分別置于瓊脂平板表面，在每個待測樣品、對照樣品及空白對照品上分別均勻滴加0.2±0.0lmL接種菌懸液，每個樣品至少3個平行試驗，37°C± 1°C培養(yǎng)18?24h，記錄抗菌性能檢測結(jié)果；
步驟8:在培養(yǎng)期間，記錄蠶砂制品表面細菌增長情況、通過顯微鏡下觀測的微觀增長和通過肉眼范圍內(nèi)觀察的宏觀增長，記錄待測樣品、對照樣品和空白對照品培養(yǎng)后的各平行試驗的實際活菌數(shù)值的平均值，分別記為數(shù)值A(chǔ)、B和C。按下式計算抗菌蠶砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，獲得蠶砂制品的抗菌性能，以百分率計。
[0013]本實施例的具體實施步驟如下，(I)金黃色葡萄球菌凍干菌菌粉中加入2mL溶菌肉湯，37°C 土 1°C恒溫振蕩培養(yǎng)18h，用接種針于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面劃線，37°C 土 1°C，培養(yǎng)24小時，挑取典型的細菌菌落，接種于20mL營養(yǎng)肉湯中，37 °C ± TC，130r/min，振蕩培養(yǎng)18小時，得到活菌數(shù)為2 X 19CFlVmL細菌菌懸液；
(2)吸取2.5mL金黃色葡萄球菌菌懸液，加入含有9mL PBS的試管中，充分混勻，依次10倍稀釋至活菌數(shù)為220CFU的濃度，作為接種菌懸液；
(3)采用GB/T7568.6-2002標準真絲制品，剪取直徑為3.8±0.5cm的真絲圓片，真絲邊緣不超過0.3mm，兩片對稱縫制真絲加樣袋，121°C濕熱滅菌15min;
(4)在加樣袋中分別加入1.5g抗菌蠶砂及1.5g非抗菌蠶砂，加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預(yù)潤濕，使蠶砂的濕度平衡至90%以上，作為待測樣品及對照樣品。以不加蠶砂的加樣袋作為空白對照品。
[0014](5)用涂布棒將ImL濃度為220CFU的金黃色葡萄球菌菌懸液均勻分散于營養(yǎng)瓊脂平板表面，將待測樣品、對照樣品及空白對照品分別置于瓊脂平板表面，在每個待測樣品、對照樣品及空白對照品上分別均勻滴加0.2mL濃度為220CFU的金黃色葡萄球菌菌懸液，每個樣品3個平行試驗，37°C±1°C培養(yǎng)24h，得到抗菌性能檢測結(jié)果。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明所述的一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，操作簡單、速度快、使用成本低;通過利用溶出性抗菌劑可以離開蠶砂制品進入培養(yǎng)皿的特性，采用在蠶砂制品上接種測試菌的方法，利用肉眼及顯微鏡鏡檢等方法觀察蠶砂制品的微生物生長情況，來檢測蠶砂制品的抗細菌性能，從而實現(xiàn)對蠶砂制品的抗細菌性能的評估。適用于抗菌劑整理的蠶砂制品的抗細菌性能評估。
[0016]以上僅是本發(fā)明的具體應(yīng)用范例，對本發(fā)明的保護范圍不構(gòu)成任何限制。凡采用等同變換或者等效替換而形成的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明權(quán)利保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，其特征在于:具體步驟如下: 步驟1:細菌凍干菌菌粉中加入溶菌肉湯，37°C ± 1°C恒溫振蕩培養(yǎng)18小時，然后用接種針于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面劃線，37°C±1°C，培養(yǎng)24小時，此斜面可在2?8°C下保存I個月，作為斜面保藏菌； 步驟2:在步驟I得到的瓊脂斜面中挑取I個典型的細菌菌落，接種于20mL營養(yǎng)肉湯中，37 °C ± TC，振蕩培養(yǎng)18?20小時，得到細菌菌懸液;然后利用分光光度法測定細菌濃度，此菌懸液活菌數(shù)應(yīng)達到I X 19?5 X 109CFU/mL; 步驟3:吸取步驟2中的細菌菌懸液1.8mL~2.5mL，移入裝有9mL PBS的試管中，充分混勻，依次進行10倍梯度稀釋，稀釋至活菌數(shù)為200CFU?250CFU的范圍，作為接種菌懸液； 步驟4:剪取真絲圓片，兩片對稱縫制真絲布袋作為加樣袋，真絲邊緣不超過0.3mm，121°〇濕熱滅菌15min; 步驟5:在步驟4中的加樣袋中分別加入抗菌蠶砂制品及非抗菌蠶砂制品，加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預(yù)潤濕，使蠶砂的濕度平衡至90%以上，作為待測樣品及對照樣品； 步驟6:將步驟4中的加樣袋加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預(yù)潤濕，作為抗菌性能檢測的空白對照品； 步驟7:取步驟3制備的接種菌懸液均勻涂布于瓊脂平板培養(yǎng)基中，將步驟5中的待測樣品、對照樣品及步驟6中的空白對照品分別置于瓊脂平板表面，取少量步驟3制備的接種菌懸液分別滴加于每個待測樣品、對照樣品及空白對照品上，37°C±1°C培養(yǎng)18?24小時，每個樣品至少3個平行試驗； 步驟8:在培養(yǎng)期間，記錄各樣品表面細菌生長情況，將待測樣品、對照樣品和空白對照品培養(yǎng)后的各平行試驗的實際活菌數(shù)值的平均值分別記為數(shù)值A(chǔ)、B和C。按下式計算抗菌蠶砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，獲得蠶砂制品的抗菌性能，以百分率計。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，其特征在于:所述菌株選用金黃色葡萄球菌ATCC 6538或大腸桿菌ATCC 11299或大腸桿菌ATCC8739或大腸桿菌ATCC29522。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，其特征在于:步驟3中的細菌菌懸液吸取量，根據(jù)大腸桿菌取吸取量的下限，金黃色葡萄球菌取吸取量的上限。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，其特征在于:步驟4中的真絲加樣袋為GB/T7568.6-2002標準真絲制品，直徑3.8 ±0.5cm，真絲邊緣不超過0.3mm。
【文檔編號】C12R1/19GK105925662SQ201610420306
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年6月14日
【發(fā)明人】王毅婧, 董斌
【申請人】蘇州市職業(yè)大學(xué)