葡糖基甜菊組合物的制作方法
【專利摘要】從甜菊(Stevia rebaudiana Bertoni)的甜菊醇糖苷制得葡糖基甜菊組合物。使用淀粉作為葡萄糖殘基的來源，通過環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行葡糖基化。將葡糖基甜菊組合物純化至>總甜菊醇糖苷的95％含量。組合物可以用作食品、飲料、化妝品和藥品中的甜味增強(qiáng)劑、風(fēng)味劑、風(fēng)味增強(qiáng)劑和甜味劑。
【專利說明】葡糖基甜菊組合物
[0001]發(fā)明背景 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及用于從甜菊(Stevia rebaudiana Bertoni)植物的提取物生產(chǎn)高度純 化的食品成分的方法，及其在各種食品和飲料中的用途。
[0003] 相關(guān)領(lǐng)域的描述
[0004] 由于認(rèn)識(shí)到許多疾病與食用高糖食品和飲料相關(guān)，現(xiàn)在糖替代品正受到日益劇增 的關(guān)注。然而，由于安全性的問題，許多人造甜味劑，如甜精、環(huán)己基氨基磺酸鈉和糖精在一 些國(guó)家被禁止或限制。因此，天然來源的無熱量甜味劑正變得越來越流行。甜味草甜菊 (Stevia rebaudiana Bertoni)產(chǎn)生多種雙砲糖苷，其特征在于優(yōu)于許多其他高效甜味劑 那些的高強(qiáng)度甜味和感官特性。
[0005] 上述甜味糖苷，具有共同的糖苷配基，甜菊醇，并且區(qū)別在于C13和C19位置的碳水 化合物殘基的數(shù)量和類型。甜菊的葉子能夠累積多達(dá)10-20% (基于干重)甜菊醇糖苷。甜菊 葉子中發(fā)現(xiàn)的主要糖苷是萊鮑迪苷A(2-10% )、甜菊苷(2-10% )和萊鮑迪苷C(l-2% )。其他 糖苷，如萊鮑迪苷B、D、E和F，甜菊雙糖苷和甜茶苷，以低得多的水平被發(fā)現(xiàn)(大約0-0.2%)。
[0006] 兩種主要的糖苷-甜菊苷和萊鮑迪苷A得到了廣泛研究，并且就其作為商業(yè)高強(qiáng)度 甜味劑的合適性進(jìn)行了表征。碳酸飲料中的穩(wěn)定性研究證實(shí)了它們的熱和pH穩(wěn)定性(Chang S.S.,Cook,J.M.(1983)Stability studies of stevioside and Rebaudioside A in carbonated beverages (甜菊苷和萊鮑迪苷A碳酸飲料中的穩(wěn)定性研究），J. Agric . Food Chem.31:409-412)〇
[0007] 甜菊醇糖苷彼此的差異不僅在于分子結(jié)構(gòu)，而且還在于其味道特性。通常，發(fā)現(xiàn)甜 菊苷比蔗糖甜110-270倍，萊鮑迪苷Α為150至320倍，而萊鮑迪苷C比蔗糖甜40-60倍。杜克苷 A比蔗糖甜30倍。萊鮑迪苷A具有最少的澀味、最少的苦味和最不持久的余味，因此在主要的 甜菊醇糖苷中具有最受歡迎的感官屬性（Tanaka 0.(1987) Improvement of taste of natural sweetners(天然甜味劑的味道的改良）·Pure Appl ·Chem.69:675-683;Phillips K.C.(1989)Stevia: steps in developing a new sweetener(甜菊：研發(fā)新甜味劑中的步 驟）·見：Grenby Τ·Η·編輯，Developments in sweeteners(甜味劑研發(fā)），vol.3.Elsevier Applied Science，倫敦，1-43)。
[0008] 使用水或有機(jī)溶劑從甜菊植物提取和純化甜味糖苷的方法描述于例如美國(guó)專利 No.4,361,697;4,082,858;4,892,938;5,972,120;5,962,678;7,838,044和7,862,845中。
[0009] 然而，即使在高度純化的狀態(tài)下，甜菊醇糖苷仍然具有不合需要的味道屬性，如苦 味、甜的余味、甘草味等。甜菊甜味劑成功商業(yè)化的主要障礙之一是這些不合需要的味道屬 性。顯示出隨著甜菊醇糖苷濃度的提高，這些風(fēng)味特征變得更突出（Prakash I.，DuBois G.E.,Clos J.F.,ffilkens K.L.,Fosdick L·E·(2008(Development of rebiana,a natural,non-caloric sweetener(甜菊糖(rebiana)的研發(fā)，一種天然、無熱量甜味劑） ?Food Chem.Toxicol·，46，S75_S82.)。
[0010]另一方面，替代制劑中大量的糖帶來了如降低的口感、不完整的風(fēng)味特征等這樣 的問題。因此，高強(qiáng)度低熱量甜味劑的應(yīng)用必須提供方法來解決這些問題。
[0011]因此，如果單個(gè)組合物不僅能夠遞送甜味，而且還具有風(fēng)味增強(qiáng)特性并矯正從食 品和飲料制劑中消除蔗糖相關(guān)的不完整口感，毫無疑問與本領(lǐng)域已知的其他高強(qiáng)度甜味劑 相比將是有利的。
[0012] 當(dāng)新的碳水化合物殘基在C13和C19位置連接初始分子時(shí)，通過使甜菊醇糖苷接受 分子間轉(zhuǎn)糖基作用來降低或消除這些不合需要的特性中的一些。根據(jù)這些位置中的碳水化 合物殘基的數(shù)量，化合物味道的品質(zhì)和效力將改變。
[0013] 支鏈淀粉酶、異麥芽糖酶(Lobov S.V.，Jasai R.，0htani K.，Tanaka O.Yamasaki K· (199 1 )Enzymatic production of sweet stevioside derivatives : transglycosylation by glucosidases(甜味甜菊苷衍生物的酶生產(chǎn):通過葡糖苷酶的轉(zhuǎn) 糖基作用）.Agric.Biol ·Chem. 55:2959-2965)、β-半乳糖昔酶(Kitahata S.，Ishikawa S.， Mi yata T. , Tanaka 0·( 1989(Production of rubusos ide derivatives by transglycosylation of variousP-galactos idase(通過各種β-半乳糖苷酶的轉(zhuǎn)糖基作 用生產(chǎn)甜茶苷衍生物）.Agric. Biol. Chem. 53:2923-2928)和葡聚糖蔗糖酶(Yamamoto Κ.， Yoshikawa K.,0kada S.(1994)Effective production of glucosyl-stevioside bya-1, 6-transglucosylation of dextran dextranase(通過葡聚糖葡聚糖酶的a-1,6-轉(zhuǎn)糖基作 用有效生產(chǎn)葡糖基-甜菊苷）.Biosci .Biotech.Biochem. 58:1657-1661)已經(jīng)用作轉(zhuǎn)糖基 酶，而支鏈淀粉、麥芽糖、乳糖和部分水解的淀粉分別作為糖苷殘基的供體。
[0014] 也可以通過嗜熱脂肪芽抱桿菌(Bacillus stearothermophilus)(美國(guó)專利N0.4， 219,571和7,807,206)產(chǎn)生的環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶(CGT酶）的作用來進(jìn)行甜菊醇糖苷的轉(zhuǎn) 糖基，作為結(jié)果，形成具有高達(dá)10的聚合度的α-1，4-葡糖基衍生物。
[0015] 已經(jīng)顯示出葡糖基衍生物的味道特征和甜味效力很大程度上取決于其他的葡糖 基衍生物的數(shù)量，即，α-1，4_葡糖基鏈的聚合度。a-ι，4_葡糖基殘基數(shù)量的增加提高了味道 品質(zhì)，但同時(shí)降低了甜味水平〇 &1^1?1，1987)。用0-轉(zhuǎn)葡糖基的甜菊苷獲得由單-或二-〇-1， 4_葡糖基衍生物組成的產(chǎn)物(Tanaka，1987)。
[0016] 然而，在這樣的方法中，所得到的產(chǎn)物含有高水平的初始未反應(yīng)的（未修飾的）糖 苷(通常>20% )，這使其不滿足低于15%未反應(yīng)糖苷的法規(guī)要求(α-Glucosyltransferase Treated Stevia(a-葡糖基轉(zhuǎn)移酶處理的甜菊），Japan's Specifications and Standards for Food Additives(日本食品添加劑說明和標(biāo)準(zhǔn)），第VIII版，2009，p. 257)。因此，使用另 外的用于未反應(yīng)甜菊醇糖苷的色譜分離步驟來降低初始的未反應(yīng)(未修飾)糖苷的含量。然 而，色譜分離技術(shù)通常涉及高成本并且不適于大規(guī)模生產(chǎn)。
[0017] 還注意到許多葡糖基甜菊產(chǎn)物含有多達(dá)20%的殘留糊精，其不具有實(shí)質(zhì)性的功能 特性并且降低了產(chǎn)物中甜菊醇糖苷的含量。
[0018] 因此，需要研發(fā)具有最佳α-l，4-葡糖基鏈長(zhǎng)和低的未反應(yīng)糖苷水平的高純度產(chǎn) 物，其將遞送甜味效力和風(fēng)味特征的最佳組合。
[0019] 發(fā)明概述
[0020] 本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有的甜菊甜味劑的缺點(diǎn)。本發(fā)明描述了用于從甜菊植物的 提取物生產(chǎn)高純度食品成分的方法，及其在各種食品和飲料中作為甜味和風(fēng)味改良劑的用 途。
[0021 ]本發(fā)明部分涉及包含甜菊植物的甜菊醇糖苷的葡糖基衍生物的成分。甜菊醇糖苷 選自甜菊苷、萊鮑迪苷A、萊鮑迪苷B、萊鮑迪苷C、萊鮑迪苷D、萊鮑迪苷E、萊鮑迪苷F、萊鮑迪 苷X、杜克苷A、甜菊雙糖苷、甜茶苷，以及甜菊植物中發(fā)現(xiàn)的其他甜菊醇糖苷，及其混合物。 [0022]本發(fā)明部分涉及用于生產(chǎn)含有甜菊苷、萊鮑迪苷A、萊鮑迪苷B、萊鮑迪苷C、萊鮑迪 苷D、萊鮑迪苷E、萊鮑迪苷F、萊鮑迪苷X、杜克苷A、甜菊雙糖苷、甜茶苷，以及甜菊植物中發(fā) 現(xiàn)的其他甜菊醇糖苷的葡糖基化形式的成分的方法。該方法可以是使用通過嗜熱脂肪芽孢 桿菌培養(yǎng)物產(chǎn)生的CGT酶的酶轉(zhuǎn)糖基方法。該方法可以包括通過β-淀粉酶或其他酶的另外 的酶處理的步驟。該方法還可以具有脫色、脫鹽和去除低聚麥芽糖的步驟。可以使用活性炭 進(jìn)行脫色?？梢酝ㄟ^離子交換樹脂和/或膜濾器來進(jìn)行脫鹽?？梢酝ㄟ^大孔聚合樹脂來進(jìn)行 低聚麥芽糖的去除。
[0023] 在本發(fā)明中，將PureCirCle(JiangXi)C〇·，Ltd.(中國(guó)）商業(yè)化的含有甜菊苷(28-30%)、萊鮑迪苷A(50-55%)、萊鮑迪苷C(9-12%)、萊鮑迪苷F(l-3%)和總計(jì)至少95%總甜 菊醇糖苷含量的其他糖苷的甜菊提取物用作起始材料?；蛘?，具有不同比例的甜菊醇糖苷 以及高度純化的甜菊醇糖苷(如萊鮑迪苷A、甜菊苷、萊鮑迪苷D、萊鮑迪苷X、甜茶苷等）的甜 菊提取物可以用作起始材料。
[0024]在存在作為葡萄糖供體的淀粉的情況下，使起始材料接受通過環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶 (CGT酶）的作用的酶轉(zhuǎn)糖基作用。作為結(jié)果，形成了 α-1，4_葡糖基衍生物，在一些實(shí)施方案 中，具有高達(dá)20的聚合度。任選地使形成的衍生物接受用β-淀粉酶或其他酶的處理，以產(chǎn)生 具有特定聚合度的α-l，4-葡糖基衍生物。
[0025] 通過Amberlite XAD7HP樹脂，從所獲得的反應(yīng)混合物中除去低聚糖，并且隨后脫 色、去離子、濃縮和噴霧干燥。
[0026] 將所獲得的產(chǎn)物作為甜味劑、甜味增強(qiáng)劑、風(fēng)味劑和風(fēng)味改良劑應(yīng)用于各種食品 和飲料，包括軟飲、冰淇林、餅干、面包、果汁、奶制品、烘焙食品和糖食產(chǎn)品中。
[0027] 應(yīng)當(dāng)明白之前的概述和之后的詳述是示例性和解釋性的，并且打算用來提供所要 求的本發(fā)明的進(jìn)一步解釋。
[0028] 附圖簡(jiǎn)述
[0029]包括附圖來提供本發(fā)明進(jìn)一步的理解?！靖綀D說明】了本發(fā)明的實(shí)施方案并且與說明 書一起用來解釋本發(fā)明的實(shí)施方案的原理。
[0030] 圖1顯示了純化的轉(zhuǎn)葡糖基化甜菊提取物的高性能液相色譜色譜圖，沒有β-淀粉 酶處理，含有長(zhǎng)鏈α-l，4-葡糖基-衍生物，具有多達(dá)九個(gè)α-l，4-葡糖基殘基；
[0031] 圖2顯示了 β-淀粉酶處理后純化的轉(zhuǎn)葡糖基化甜菊提取物的高性能液相色譜色譜 圖，具有甜菊苷和萊鮑迪苷Α的短鏈(含有四個(gè)或更少的α-l，4_葡糖基殘基)衍生物；
[0032]圖3顯示了含有甜菊醇糖苷的單-和二-α-l，4_葡糖基-衍生物以及高水平的未反 應(yīng)的甜菊醇糖苷的淀粉酶處理產(chǎn)物的高性能液相色譜(HPLC)色譜圖；
[0033]圖4顯示了含有甜菊醇糖苷的單-和二-α-l，4_葡糖基-衍生物以及低水平的未反 應(yīng)的甜菊醇糖苷的淀粉酶處理產(chǎn)物的高性能液相色譜(HPLC)色譜圖。
[0034] 發(fā)明詳述
[0035] 從下文中給出的詳述，本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)將變得更清楚。然而，應(yīng)當(dāng)理解詳述和特定的 實(shí)施例盡管表示本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，但只是通過說明的方式給出，因?yàn)楸绢I(lǐng)域技術(shù)人 員從這個(gè)詳述將清楚本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)的各種改變和變化。
[0036] 將PureCircle(JiangXi)Co.，Ltd.(中國(guó)）商業(yè)化的含有甜菊苷(28-30%)、萊鮑迪 苷A(50-55% )、萊鮑迪苷C(9-12% )、萊鮑迪苷F(l-3% )和總計(jì)至少95%總甜菊醇糖苷含量 的其他糖苷(下文總稱為"甜菊醇糖苷"）的甜菊提取物用作起始材料?；蛘?，具有不同比例 的甜菊醇糖苷以及高度純化的甜菊醇糖苷（如萊鮑迪苷A、甜菊苷、萊鮑迪苷D、萊鮑迪苷X、 甜茶苷等)的甜菊提取物可以用作起始材料。
[0037]在某些實(shí)施方案中，甜菊醇糖苷可以被選自羅漢果提取物、Sira itia grosvenorii提取物、羅漢果苷(mogroside)、羅漢果苷IIE、羅漢果苷III、羅漢果苷IV、羅漢 果苷V、羅漢果苷￥1、11-氧-羅漢果苷￥、賽門苷（81&111611〇81(16)1、光果木鱉阜苷 (grosmomoside)I，以及Siraitia grosvenorii植物中發(fā)現(xiàn)的其他萌蘆素(mogrol)或氧-萌 蘆素糖苷及其混合物的化合物部分或完全替代。
[0038] 在配備有Zorbax_NH2(4 · 6 X 250mm)柱的Agilent Technologiesl200系列（USA)液 相色譜儀上進(jìn)行原料和產(chǎn)物的HPLC分析。移動(dòng)相是從80:20，v/v(0-2min)至50:50，v/v(2-70min)的乙腈-水梯度。將設(shè)定在210nm的二極管陣列檢測(cè)儀用作檢測(cè)儀。
[0039] 通過嗜熱脂肪芽抱桿菌（Bacillus stearothermophilus)St_88(PureCircle Sdn Bhd Collection of Industrial Microorganisms-馬來西亞)產(chǎn)生的環(huán)麥芽糖糊精葡聚糖 轉(zhuǎn)移酶(CGT酶;EC 2.4.1.19)來完成轉(zhuǎn)葡糖基化。然而，任何其他CGT或具有分子間轉(zhuǎn)葡糖 基化活性的酶也可以使用。酶可以是無細(xì)胞培養(yǎng)液、濃縮液體無細(xì)胞培養(yǎng)液、噴霧干燥或冷 凍干燥的無細(xì)胞培養(yǎng)液或高純度蛋白的形式?？梢允褂糜坞x或固定的酶制劑。
[0040] 根據(jù)Hale W.S.，Rawlins L.C. (1951)Amylase of Bacillus macerans(浸麻芽抱 桿菌的淀粉酶）.Cerea 1 Chem. 28，49-58中所述的程序測(cè)定CGI1酶制劑的活性。
[0041] 不同來源的淀粉可以用作葡糖基單體的供體，如，源自小麥、玉米、馬鈴薯、木薯和 西米的淀粉。
[0042] 在轉(zhuǎn)葡糖基化反應(yīng)之前，使淀粉接受部分水解(液化）。部分水解淀粉的葡萄糖當(dāng) 量可以在約10-25，優(yōu)選約12-16范圍中。任何能夠淀粉水解的酶可以用于液化，如α-淀粉 酶、淀粉酶等。在一個(gè)實(shí)施方案中，優(yōu)選CGI 1酶和α-淀粉酶混合物作為液化酶。
[0043]以千諾(KiΙο Νονο)α-淀粉酶單位(KNU)來表示α-淀粉酶活性。一KNU是在標(biāo)準(zhǔn)條 件下(pH7.1; 37°C)每小時(shí)糊化5.26g淀粉干物質(zhì)的α-淀粉酶的量。
[0044] 液化混合物含有每一個(gè)單位的CGT酶約0.001-0.2KNU，優(yōu)選約0.05-0.1KNU的α-淀 粉酶。
[0045] 液化中使用α-淀粉酶可以在進(jìn)一步的活性炭過濾中獲得較高通量。當(dāng)將CGT酶用 作唯一液化酶時(shí)，過濾速率大約為l〇_15L/hr/lm 2過濾面積。在液化酶混合物(包含α-淀粉 酶和CGI1酶）的情況下，過濾速率快兩倍-大約20-30L/hr/lm 2過濾面積。
[0046] 液化混合物中的淀粉與CGT酶的比例為每一克淀粉約0.1-0.5單位，優(yōu)選每克約 0.2-0.4 單位。
[0047] 液化混合物中的淀粉濃度為約15-40% (wt/wt)，優(yōu)選約20-30%。
[0048] 在約0.5-5小時(shí)，例如，約0.5至2小時(shí)，和優(yōu)選約1-2小時(shí)過程中，在約70-90°C，或 75-80°C下進(jìn)行液化。
[0049]液化后，使反應(yīng)混合物接受低pH條件下的α-淀粉酶的熱滅活。用于滅活的優(yōu)選pH 范圍為約PH2.5至pH3.0,并且優(yōu)選溫度為約95-105°C。熱滅活的持續(xù)時(shí)間為約5-10分鐘。 [0050] 滅活后，將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至約pH5.5-6.5,并且將甜菊醇糖苷加入混合物中 并溶解。優(yōu)選的甜菊醇糖苷與淀粉的比例(每lkg淀粉的甜菊醇糖苷的kg)為約0.5-1.5,優(yōu) 選約 0.8-1.2。
[00511添加第二部分的CGT酶制備物并且在約5-125Γ，如65°C的溫度下進(jìn)行轉(zhuǎn)糖基反應(yīng) 約1至168小時(shí)，如24-48小時(shí)。第二部分的CGT酶的量為每克固體約0.2-4單位的CGT酶，優(yōu)選 每克固體約0. 5-1.2單位。
[0052]添加第二部分的CGT酶制備物后，另外的步驟可以包括任選地滅活反應(yīng)混合物中 的酶;任選將反應(yīng)混合物脫色;和任選地將反應(yīng)混合物濃縮并干燥，以獲得葡糖基甜菊組合 物。在某些實(shí)施方案中，這個(gè)階段的葡糖基甜菊組合物包含具有二十或更少α-I，4_葡糖基 殘基的甜菊醇糖苷。
[0053]轉(zhuǎn)葡糖基化反應(yīng)完成后，可以使用進(jìn)一步的一個(gè)或多個(gè)酶處理和額外的步驟，以 獲得組合物中所需的聚合度和未反應(yīng)的糖苷。
[0054]進(jìn)一步的酶處理可以包括添加淀粉酶、β_淀粉酶、麥芽糖酶、葡糖淀粉酶、呋喃果 糖苷酶、葡萄糖苷酶、葡聚糖酶、葡聚糖酶、轉(zhuǎn)葡糖苷酶、葡糖基轉(zhuǎn)移酶、果糖基轉(zhuǎn)移酶、半 乳糖基轉(zhuǎn)移酶、乳糖酶、半乳糖苷酶、纖維素酶、支鏈淀粉酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、 Maltogenase?、Fungamyi?、Novamyl?、Optimalt?,或其混合物，連同用 于所用的各自一種或多種酶的一種或多種底物一起。反應(yīng)混合物可以在范圍為5-125Γ的 溫度下，孵育范圍為〇. 〇〇〇 1至168小時(shí)的時(shí)間段。
[0055] 附加步驟可以包括通過熱處理滅活反應(yīng)混合物中的酶；任選地將反應(yīng)混合物脫 色;任選地通過將脫色的反應(yīng)混合物與大孔吸附樹脂接觸來除去非-二萜化合物并隨后用 醇或含水醇洗脫吸附的二萜糖苷，以獲得含糖苷洗脫液;任選地用離子交換樹脂將含糖苷 洗脫液脫鹽;任選地從洗脫液中除去醇，獲得含水洗脫液;任選地將含水洗脫液濃縮并干 燥，以獲得干燥的葡糖基甜菊組合物，和任選地將干燥的葡糖基甜菊組合物懸浮于含水醇 中，從懸浮液中分離晶體并干燥，以獲得所需的葡糖基甜菊組合物。
[0056] 根據(jù)多種因素，這些步驟的任何順序可以改變。
[0057]在某些實(shí)施方案中，完成轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)時(shí)，加入每克固體約30-50單位的β-淀粉酶， 并且將反應(yīng)在約35-55°C，優(yōu)選約45°C下持續(xù)約12-16小時(shí)。在這個(gè)階段中，針對(duì)樣品la和 2a，使用大豆β-淀粉酶，同時(shí)將根據(jù)實(shí)施例2制得的β-淀粉酶用于樣品lb和2b。然而，也可以 使用源自包括大麥、細(xì)菌、真菌淀粉酶等的任何其他來源的淀粉酶。
[0058] β_淀粉酶活性單位（1AUN)被定義為在以下條件下每分鐘釋放lOOyg還原糖(通過 右旋糖當(dāng)量來表示）的活性:將lmL酶溶液與5mLl. 2 %淀粉溶液(pH5.5，M/20醋酸鹽緩沖液） 混合并在40 °C下保持20分鐘。
[0059] 通過在約95°C下加熱約15分鐘來滅活酶，以停止反應(yīng)，并且用活性炭處理溶液，以 獲得脫色的反應(yīng)混合物?；钚蕴康牧繛榧s0.02-0.4克/克固體，優(yōu)選約0.05-0.2克/克固體。 可以使用其他合適的脫色方法，如使用離子交換樹脂，膜濾、使用超濾、納濾或反向滲透膜， 或本領(lǐng)域已知的其他方法。
[0060]可以任選地除去非二萜化合物，例如，多個(gè)按序連接的填充大孔吸附樹脂的柱，接 著用水洗滌柱，然后用約10-50% (v/v)乙醇洗滌，分離柱，并且隨后用30-100%乙醇單獨(dú)洗 脫每個(gè)柱。
[0061 ] 通過離子交換樹脂，如Amberlte FPC23(H+型)和Amberlite FPA51(0H-型），將脫色 的反應(yīng)混合物脫鹽。
[0062]通過真空蒸發(fā)器將脫鹽的反應(yīng)混合物進(jìn)一步濃縮，并通過噴霧干燥器干燥?？梢?使用其他合適的濃縮和干燥方法，如膜濾、冷凍干燥或本領(lǐng)域已知的其他方法。
[0063]將干燥的粉末懸浮液含水醇中。粉末與含水醇的比例(wt/vol)為1:1至1: 20,優(yōu)選 1:3至1:10。含水醇含有0-50%(￥〇1)，優(yōu)選1-10%水。將懸浮液在30-100°(：，優(yōu)選50-85°(：下 攪拌1-24小時(shí)，優(yōu)選2-15小時(shí)。然后通過過濾分離懸浮的固體?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的適用 于從液體分離懸浮固體的任何其他技術(shù)，如離心、潷析等。也可以使用本領(lǐng)域已知的任何其 他干燥器?；蛘撸梢詫⒎蛛x的固體溶解于水中，從微量醇中蒸發(fā)并噴霧干燥。
[0064] 本發(fā)明中使用的醇可以選自烷醇，并且優(yōu)選選自甲醇、乙醇、η-丙醇、2-丙醇、1-丁 醇和2-丁醇，或其混合物。
[0065] 在某些實(shí)施方案中，所得到的產(chǎn)物含有低水平的未修飾糖苷、短鏈(含有四個(gè)或更 少，或兩個(gè)或更少的α-1，4_葡糖基殘基)衍生物和低聚麥芽糖的混合物(樣品la和lb)。如本 文中使用的，表述"低水平的未修飾糖苷"或"低水平的未反應(yīng)糖苷"應(yīng)當(dāng)是指低于約20%， 并且優(yōu)選低于約15%的糖苷水平，基于干基。在一些實(shí)施方案中，使用這種方法可以獲得約 12%、約10%或甚至更低的未反應(yīng)糖苷。
[0066] 為了制備具有較高含量的總甜味糖苷(葡糖基化和非葡糖基化糖苷的總和），在脫 鹽處理之前，使用Amberlite XAD7HP除去低聚麥芽糖。甜菊醇糖苷及其葡糖基化衍生物吸 附在樹脂上，并且隨后通過含水醇洗脫。按照以上所述的，隨后將所得到的含有葡糖基甜菊 醇糖苷的含水乙醇洗脫液脫色和脫鹽，并且在蒸發(fā)洗脫溶劑后，通過噴霧干燥將糖苷溶液 粉末化。按照以上所述的，將干燥的粉末懸浮于含水醇中并處理，以除去未修飾的（未反應(yīng) 的)甜菊醇糖苷(樣品2b)。所得到的產(chǎn)物含有低水平的未修飾的糖苷和短鏈(含有四個(gè)或更 少，或兩個(gè)或更少的α-l，4-葡糖基殘基)衍生物(樣品2a和2b)。
[0067]通過樣品la、lb、2a和2b舉例說明的本發(fā)明的實(shí)施方案不含或基本上不含具有超 過4個(gè)或超過2個(gè)葡糖基殘基的較高葡糖基衍生物。根據(jù)本發(fā)明，高度純化的葡糖基甜菊組 合物優(yōu)選包含大于約25 %重量二-、三-和四葡糖基萊鮑迪苷A，和高于約9 %重量三-盒四葡 糖基甜菊苷。在另一個(gè)實(shí)施方案中，高度純化的葡糖基甜菊組合物包含高于約50%重量單-和二葡糖基甜菊醇糖苷。
[0068]使用樣品2a的相似方法，除了 β-淀粉酶處理階段，制備含有未修飾的糖苷和長(zhǎng)鏈 α-1，4_葡糖基-衍生物(具有多達(dá)九個(gè)α-1，4_葡糖基殘基)的產(chǎn)物(樣品3)。
[0069]作為對(duì)照，使用商業(yè)β_淀粉酶處理的含有未修飾的糖苷和短鏈(含有兩個(gè)或更少 的α-l，4-葡糖基殘基)衍生物的產(chǎn)物(樣品4)。
[0070] 樣品的組成概括于表la和lb中，其中使用上述方法制得的樣品la和2a含有四個(gè)或 更少的α-l，4_匍糖基殘基，而使用上述方法制得的樣品lb和2b含有兩個(gè)或更少的α-l，4_匍 糖基殘基。
[0071] 表la
[0072] 含有4個(gè)或更少的α-l，4_葡糖基殘基的葡糖基甜菊醇糖苷樣品的組成
[0073]
[0074] 使用水溶液，20名小組成員，進(jìn)行了樣品的感官評(píng)價(jià)?；谌w肯定，選擇了最理 想和最不合需要的樣品。結(jié)果顯示于表2a中。
[0075] 表2a
[0076] 水系統(tǒng)中的樣品的感官評(píng)價(jià)
[0078]從表2a的結(jié)果清楚，樣品la和2a的甜味品質(zhì)評(píng)價(jià)為最優(yōu)的。整體上，與具有長(zhǎng)鏈葡 糖基衍生物(樣品3)和兩個(gè)或更少α-1，4_葡糖基殘基短鏈衍生物(樣品4)的樣品相比，具有 短鏈(含有四個(gè)或更少α-1，4_葡糖基殘基)衍生物的樣品（樣品la和樣品2a)具有更好的味 道特征。
[0079]樣品la和2a顯示出與對(duì)照樣品4(150倍）相當(dāng)?shù)奶鹞读Γㄅc5%蔗糖溶液相比，甜 150-160倍）；然而，它們的風(fēng)味特征明顯優(yōu)于對(duì)照樣品。
[0080] 對(duì)含有兩個(gè)或更少α-1，4-葡糖基殘基的樣品lb和2b進(jìn)行了相似分析。根據(jù)實(shí)施例 12制備了樣品5。
[0081] 表lb
[0082] 含有2個(gè)或更少α-l，4_葡糖基殘基的葡糖基甜菊醇糖苷樣品的組成
[0083]
[0084] 使用水溶液，20名小組成員，進(jìn)行了樣品的感官評(píng)價(jià)?；谌w肯定，選擇了最理 想和最不合需要的樣品。結(jié)果顯示于表2b中。
[0085] 表2b
[0086] 水系統(tǒng)中的樣品的感官評(píng)價(jià)
[0088] 從表2b的結(jié)果清楚，樣品lb和2b的甜味品質(zhì)評(píng)價(jià)為最優(yōu)的。整體上，與具有長(zhǎng)鏈葡 糖基衍生物(樣品3)以及短鏈(含有兩個(gè)或更少α-1，4_葡糖基殘基)衍生物和高水平的未反 應(yīng)糖苷的樣品（樣品5)相比，具有短鏈(含有兩個(gè)或更少α-1，4_葡糖基殘基)衍生物和低水 平的未反應(yīng)糖苷的樣品(樣品lb和樣品2b)具有更好的味道特征。
[0089] 樣品lb和2b顯示出與對(duì)照樣品5(160倍)相當(dāng)?shù)奶鹞读Γㄅc5%蔗糖溶液相比，甜 150-160倍）；然而，它們的風(fēng)味特征明顯優(yōu)于對(duì)照樣品5。
[0090] 組合物可以用作各種食品和飲料產(chǎn)品中的甜味增強(qiáng)劑、風(fēng)味劑、風(fēng)味增強(qiáng)劑和甜 味劑。食品和飲料產(chǎn)品的非限制性實(shí)例包括碳酸軟飲料、即飲飲料、能量飲料、等滲飲料、低 熱量飲料、無熱量飲料、運(yùn)動(dòng)飲料、茶、果汁和蔬菜汁、汁液飲料、乳飲料、酸奶飲料、醇飲料、 粉末飲料、烘焙制品、曲奇、餅干、烘焙混合物、谷物、糖食、糖果、太妃糖、口香糖、乳制品、調(diào) 味奶、酸奶、調(diào)味酸奶、發(fā)酵奶、醬油和其他基于大豆的制品、沙拉醬、蛋黃醬、醋、冷凍甜點(diǎn)、 肉制品、魚-肉制品、瓶裝和罐裝食品、桌面甜味劑、水果和蔬菜。
[0091] 另外，組合物可以用于藥物或藥物制劑和化妝品中，包括但不限于牙膏、漱口水、 咳嗽糖漿、咀嚼片、錠劑、維生素制劑等。
[0092] 組合物可以"按原樣(as-is)"使用或與其他甜味劑、風(fēng)味劑和食品成分相結(jié)合。
[0093] 甜味劑的非限制性實(shí)例包括甜菊醇糖苷、甜菊苷、萊鮑迪苷A、萊鮑迪苷B、萊鮑迪 苷C、萊鮑迪苷D、萊鮑迪苷E、萊鮑迪苷F、萊鮑迪苷X、杜克苷A、甜菊雙糖苷、甜茶苷、以及甜 菊植物中發(fā)現(xiàn)的其他甜菊醇糖苷、及其混合物、甜菊提取物、羅漢果提取物、羅漢果苷、高果 糖玉米糖漿、玉米糖漿、轉(zhuǎn)化糖、低聚果糖、菊粉、低聚菊粉、偶聯(lián)糖、低聚麥芽糖、麥芽糖糊 精、玉米糖漿固體、葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、阿斯巴甜、糖精、三氯蔗糖、糖醇，及其 組合。
[0094]風(fēng)味劑的非限制性實(shí)例包括檸檬、橙子、果味、香蕉、葡萄、梨子、菠蘿、苦杏仁、可 樂、肉桂、糖、棉花糖、香草風(fēng)味劑。
[0095] 其他食品成分的非限制性實(shí)例包括風(fēng)味劑、酸味劑、有機(jī)酸和氨基酸、著色劑、填 充劑、改性淀粉、樹膠、組織形成劑、防腐劑、抗氧化劑、乳化劑、穩(wěn)定劑、增稠劑、膠凝劑，及 其組合。
[0096] 以下實(shí)施例說明了本發(fā)明的各種實(shí)施方案。應(yīng)當(dāng)明白本發(fā)明不限于實(shí)施例中列出 的材料、比例、條件和程序，其只是說明性的。
[0097] 實(shí)施例1
[0098] CGI1酶的制備
[0099]將嗜熱脂肪芽孢桿菌St-88的菌株接種于2,000升含有1.0%淀粉、0.25%玉米提 取物、0.5%(NH4)2S〇4和0.2%CaC03(pH 7.0-7.5)的滅菌培養(yǎng)基中，在56°(：下使用持續(xù)通風(fēng) (2，000L/分鐘）和攪拌（150rpm)培養(yǎng)24小時(shí)。使用Kerasep 0 · Ιμπι陶瓷膜(Novasep，法國(guó)）過 濾所獲得的培養(yǎng)液，以分離細(xì)胞。將無細(xì)胞的透過液在Per sep 1 OkDa超濾器(Ore 1 i s，法國(guó)） 上進(jìn)一步濃度2倍。根據(jù)Hale，RawlinS(1951)測(cè)定了酶活性。獲得了具有約2單位/mL活性的 粗制酶制劑。
[0100] 實(shí)施例2
[0101] β-淀粉酶的制備
[0102] 將多粘芽孢桿菌(Bacillus polymyxa)St-3504的菌株接種于2,000升含有1.0% 淀粉、0.5%蛋白胨、0.5%玉米提取物、0.5%恥(：1、0.02%]\111304和0.1%〇&〇)3(口117.0-7.5) 的滅菌培養(yǎng)基中，在32°C下使用持續(xù)通風(fēng)(2,000L/分鐘)和攪拌（150rpm)培養(yǎng)24小時(shí)。使用 Kerasep 0. Ιμπι陶瓷膜(Novasep，法國(guó)）過濾所獲得的培養(yǎng)液，以分離細(xì)胞。將10%的葡萄糖 加入無細(xì)胞透過液中，將其在Persep 10kDa超濾器(0^1丨8，法國(guó)）上進(jìn)一步濃度，并使用<1 1-4LSC冷凍干燥裝置(Christ，德國(guó)）干燥，以獲得具有20,000AUN/g活性的粉末。β-淀粉酶 活性單位（1AUN)被定義為在以下條件下每分鐘釋放100yg還原糖(通過右旋糖當(dāng)量來表示） 的活性:將lmL酶溶液與5mL的1.2 %淀粉溶液(pH 5.5，M/20醋酸鹽緩沖液)混合，并在40°C 下保持20min。
[0103] 實(shí)施例3
[0104] 短鏈葡糖基甜菊組合物的制備
[0105] 將100g木薯淀粉懸浮于300mL水（PH6.5)中。加入2KNU的α-淀粉酶（Termamyl Classic，Novozymes，丹麥)和30單位根據(jù)實(shí)施例1獲得的CGT酶，并且在80°C下進(jìn)行淀粉液 化約一小時(shí)，至約15的右旋糖當(dāng)量。通過鹽酸將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至pH 2.8,并且在5分 鐘的過程中將混合物在100°C下煮沸，使酶滅活。冷卻至65°C后，用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié) 至ρΗ6·0。將通過PureCircle(JiangXi)Co.，Ltd.(中國(guó)）產(chǎn)生的含有甜菊苷29.2%，萊鮑迪 苷A 54.3%、萊鮑迪苷C 9.0%、萊鮑迪苷F(l.7%)和總計(jì)約96.4%總甜菊醇糖苷含量的其 他糖苷的l〇〇g甜菊提取物加入液化淀粉中并攪拌直至獲得均勻的溶液。將200單位的CGI 1酶 加入溶液中，并將混合物在65°C的溫度下在持續(xù)攪拌下保持24小時(shí)。然后將溫度降至45°C， 并將8,〇〇〇單位大豆0-淀粉酶(#15〇〇5，似8386〇1611^61&3印.，日本)加入反應(yīng)混合物中。 將反應(yīng)再繼續(xù)12小時(shí)。將獲得的反應(yīng)混合物在95 °C下加熱15分鐘，使酶滅活。加入20克活性 炭，并將混合物加熱至75°C，并保持30分鐘。將混合物過濾并用水將濾液稀釋至5%固體含 量，并通過填充了Amber 1 ite FPC23(H+)和Amber 1 ite FPA51 (0H-)離子交換樹脂的柱。將脫 鹽的溶液在60°C下真空濃縮，并使用實(shí)驗(yàn)室噴霧干燥器干燥成粉末形式。獲得了 196克產(chǎn)物 (樣品la)。
[0106] 實(shí)施例4
[0107] 高度純化的短鏈葡糖基甜菊組合物的制備
[0108] 將100g木薯淀粉懸浮于300mL水（PH6.5)中。加入2KNU的α-淀粉酶（Termamyl Classic，Novozymes，丹麥)和30單位根據(jù)實(shí)施例1獲得的CGT酶，并且在80 °C下進(jìn)行淀粉液 化約一小時(shí)，至約15的右旋糖當(dāng)量。通過鹽酸將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至pH 2.8,并且在5分 鐘的過程中將混合物在100°C下煮沸，使酶滅活。冷卻至65°C后，用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié) 至ρΗ6·0。將通過PureCircle(JiangXi)Co.，Ltd.(中國(guó)）產(chǎn)生的含有甜菊苷29.2%，萊鮑迪 苷A 54.3%、萊鮑迪苷C 9.0%、萊鮑迪苷F(l.7%)和總計(jì)約96.4%總甜菊醇糖苷含量的其 他糖苷的l〇〇g甜菊提取物加入液化淀粉中并攪拌直至獲得均勻的溶液。將200單位的CGI 1酶 加入溶液中，并將混合物在65°C的溫度下在持續(xù)攪拌下保持24小時(shí)。然后將溫度降至45°C， 并將8,〇〇〇單位大豆0-淀粉酶(#15〇〇5，似8386〇1611^61&3印.，日本)加入反應(yīng)混合物中。 將反應(yīng)再繼續(xù)12小時(shí)。將獲得的反應(yīng)混合物在95 °C下加熱15分鐘，使酶滅活。加入20克活性 炭，并將混合物加熱至75°C，并保持30分鐘。將混合物過濾并用水將濾液稀釋至5%固體含 量，并通過各自填充了4000mL Amberlite XAD 7HP大孔吸附樹脂的柱。用5體積的水和2體 積的20% (v/v)乙醇洗滌柱。用50%乙醇洗脫吸附的糖苷。將獲得的洗脫液通過填充了 Amberlte FPC23(H+)和Amberlite FPA51(0!T)離子交換樹脂的柱。蒸發(fā)乙醇，并將脫鹽和脫 色的水溶液在60°C下真空濃縮，然后使用實(shí)驗(yàn)室噴霧干燥器干燥成粉末形式。獲得了 151克 產(chǎn)物(樣品2a)。
[0109] 實(shí)施例5
[0110]高度純化的長(zhǎng)鏈葡糖基甜菊組合物的制備
[0111] 將100g木薯淀粉懸浮于300mL水（PH6.5)中。加入2KNU的α-淀粉酶（Termamyl Classic，Novozymes，丹麥)和30單位根據(jù)實(shí)施例1獲得的CGT酶，并且在80°C下進(jìn)行淀粉液 化約一小時(shí)，至約15的右旋糖當(dāng)量。通過鹽酸將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至pH 2.8,并且在5分 鐘的過程中將混合物在100°C下煮沸，使酶滅活。冷卻至65°C后，用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié) 至ρΗ6·0。將通過PureCircle(JiangXi)Co.，Ltd.(中國(guó)）產(chǎn)生的含有甜菊苷29.2%，萊鮑迪 苷A 54.3%、萊鮑迪苷C 9.0%、萊鮑迪苷F(l.7%)和總計(jì)約96.4%總甜菊醇糖苷含量的其 他糖苷的l〇〇g甜菊提取物加入液化淀粉中并攪拌直至獲得均勻的溶液。將200單位的CGI 1酶 加入溶液中，并將混合物在65°C的溫度下在持續(xù)攪拌下保持24小時(shí)。將獲得的反應(yīng)混合物 在95 °C下加熱15分鐘，使酶滅活。加入20克活性炭，并將混合物加熱至75 °C，并保持30分鐘。 將混合物過濾并用水將濾液稀釋至5%固體含量，并通過各自填充了400〇11^411*6111七6 XAD 7HP大孔吸附樹脂的柱。用5體積的水和2體積的20 % (v/v)乙醇洗滌柱。用50 %乙醇洗 脫吸附的糖苷。將獲得的洗脫液通過填充了Amber 1 i te FPC23 (H+)和Amber 1 i te FPA51 (0H一） 離子交換樹脂的柱。蒸發(fā)乙醇，并將脫鹽和脫色的水溶液在60°C下真空濃縮，然后使用實(shí)驗(yàn) 室噴霧干燥器干燥成粉末形式。獲得了 165克產(chǎn)物(樣品3)。
[0112] 實(shí)施例6 [0113]低熱量橙汁飲料
[0114] 將橙子濃縮物（35%)、檸檬酸(0.35%)、抗壞血酸(0.05%)、橙紅色素(0.01%)、 橙子香精(〇. 20 % )、萊鮑迪苷A(0.003 % )和不同的葡糖基甜菊組合物(0.03 % )混合，在水 中完全溶解(直至100%)并巴氏殺菌。葡糖基甜菊組合物分別根據(jù)實(shí)施例3、4和5獲得的樣 品la、2a和3來表不；以及樣品4是商業(yè)β-淀粉酶處理的廣物（只含有甜菊醇糖苷的單-和二-α-Μ-葡糖基-衍生物）。
[0115] 樣品的感官評(píng)價(jià)概括于表3中。數(shù)據(jù)表明通過使用高純度短鏈葡糖基甜菊組合物 (含有四個(gè)或更少的α-1，4_葡糖基殘基)衍生物(樣品la和2a)可以獲得最佳結(jié)果。特別地， 用樣品la和2a制得的飲料呈現(xiàn)出圓潤(rùn)和完整的風(fēng)味特征和口感。
[0116] 表3
[0117] 橙汁飲料樣品的評(píng)價(jià)
[0118]
[0119] 相同的方法可以用于從其他水果制備汁液和汁液飲料，如蘋果、檸檬、杏、櫻桃、菠 蘿、芒果等。
[0120] 實(shí)施例7
[0121] 低熱量碳酸飲料
[0122] 制備了根據(jù)以下配方的碳酸飲料。
[0124] 由20名小組成員評(píng)價(jià)了感官特性。結(jié)果概括于表4中。
[0125] 表4
[0126] 低熱量碳酸飲料樣品的評(píng)價(jià)
[0127]
[0128] 以上結(jié)果表明使用樣品la和2a制得的飲料具有最佳感官特征。
[0129] 實(shí)施例8 [0130] 減肥餅干
[0131] 將面粉(50.0%)、人造黃油（30.0%)、果糖（10.0%)、麥芽糖醇（8.0%)、全脂奶 (1.0%)、鹽(0.2%)、發(fā)酵粉(0.15%)、香草(0.1%)和不同的葡糖基甜菊組合物(0.03%) 在面團(tuán)混合機(jī)中充分捏合。將獲得的面團(tuán)模制并在200?？鞠渲泻姹?5分鐘。葡糖基甜菊組 合物分別根據(jù)實(shí)施例3、4和5獲得的樣品la、2a和3來表示；以及樣品4是商業(yè)β-淀粉酶處理 的產(chǎn)物（只含有甜菊醇糖苷的單-和二-α-l，4-葡糖基-衍生物）。
[0132] 通過20名小組成員評(píng)價(jià)了感官特性。在通過高純度短鏈葡糖基甜菊組合物(含有 四個(gè)或更少的α-1，4_葡糖基殘基)衍生物(樣品la和2a)制得的樣品中獲得了最佳結(jié)果。小 組成員標(biāo)注了使用樣品la和2a制得的餅干中圓潤(rùn)和完整的風(fēng)味特征和口感。
[0133] 實(shí)施例9
[0134] 酸奶
[0135] 將不同的葡糖基甜菊組合物(0.03%)和蔗糖(4%)溶解于低脂奶中。葡糖基甜菊 組合物分別根據(jù)實(shí)施例3、4和5獲得的樣品la、2a和3來表示；以及樣品4是商業(yè)β-淀粉酶處 理的產(chǎn)物（只含有甜菊醇糖苷的單-和二-α_1，4-葡糖基-衍生物）。在82°C下巴氏殺菌20分 鐘后，將奶冷卻至37°C。加入發(fā)酵培養(yǎng)物(3% )，并且將混合物在37°C下孵育6小時(shí)，然后在5 °C下孵育12小時(shí)。
[0136] 通過20名小組成評(píng)價(jià)了感官特性。在通過高純度短鏈葡糖基甜菊組合物(含有四 個(gè)或更少的α-1，4_葡糖基殘基)衍生物(樣品la和2a)制得的樣品中獲得了最佳結(jié)果。小組 成員標(biāo)注了使用樣品la和2a制得的樣品中圓潤(rùn)和完整的風(fēng)味特征和口感。
[0137] 實(shí)施例10
[0138] 短鏈葡糖基甜菊組合物的制備
[0139] 將100g木薯淀粉懸浮于300mL水（pH6.5)中。加入2KNU的α-淀粉酶（Termamyl Classic，Novozymes，丹麥)和30單位根據(jù)實(shí)施例1獲得的CGT酶，并且在80°C下進(jìn)行淀粉液 化約一小時(shí)，至約15的右旋糖當(dāng)量。通過鹽酸將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至pH 2.8,并且在5分 鐘的過程中將混合物在100°C下煮沸，使酶滅活。冷卻至65°C后，用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié) 至ρΗ6·0。將通過PureCircle(JiangXi)Co.，Ltd.(中國(guó)）產(chǎn)生的含有甜菊苷29.2%，萊鮑迪 苷A 54.3%、萊鮑迪苷C 9.0%、萊鮑迪苷F(l.7%)和總計(jì)約96.4%總甜菊醇糖苷含量的其 他糖苷的l〇〇g甜菊提取物加入液化淀粉中并攪拌直至獲得均勻的溶液。將200單位的CGI 1酶 加入溶液中，并將混合物在65°C的溫度下在持續(xù)攪拌下保持24小時(shí)。然后將溫度降至45°C， 并將8，000單位根據(jù)實(shí)施例2獲得的β-淀粉酶加入反應(yīng)混合物中。將反應(yīng)再繼續(xù)12小時(shí)。將 獲得的反應(yīng)混合物在95°C下加熱15分鐘，使酶滅活。加入20克活性炭，并將混合物加熱至75 °C，并保持30分鐘。將混合物過濾并用水將濾液稀釋至5 %固體含量，并通過填充了 Amberlite FPC23(H+)和Amberlite FPA51(0H-)離子交換樹脂的柱。將脫鹽的溶液在60°C下 真空濃縮，并使用實(shí)驗(yàn)室噴霧干燥器干燥成粉末形式。將干燥的粉末懸浮于5體積的95 %含 水乙醇中。將懸浮液在12小時(shí)過程中在80°C下攪拌。然后通過過濾分離懸浮的固體。將獲得 的固體在5小時(shí)過程中在90°C下真空干燥。獲得了 170克產(chǎn)物(樣品lb)。
[0140] 實(shí)施例11
[0141]高度純化的短鏈葡糖基甜菊組合物的制備
[0142] 將100g木薯淀粉懸浮于300mL水（pH6.5)中。加入2KNU的α-淀粉酶（Termamyl Classic，Novozymes，丹麥)和30單位根據(jù)實(shí)施例1獲得的CGT酶，并且在80 °C下進(jìn)行淀粉液 化約一小時(shí)，至約15的右旋糖當(dāng)量。通過鹽酸將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至pH 2.8,并且在5分 鐘的過程中將混合物在100°C下煮沸，使酶滅活。冷卻至65°C后，用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié) 至ρΗ6·0。將通過PureCircle(JiangXi)Co.，Ltd.(中國(guó)）產(chǎn)生的含有甜菊苷29.2%，萊鮑迪 苷A 54.3%、萊鮑迪苷C 9.0%、萊鮑迪苷F(l.7%)和總計(jì)約96.4%總甜菊醇糖苷含量的其 他糖苷的l〇〇g甜菊提取物加入液化淀粉中并攪拌直至獲得均勻的溶液。將200單位的CGI 1酶 加入溶液中，并將混合物在65°C的溫度下在持續(xù)攪拌下保持24小時(shí)。然后將溫度降至45°C， 并將8，000單位根據(jù)實(shí)施例2獲得的β-淀粉酶加入反應(yīng)混合物中。將反應(yīng)再繼續(xù)12小時(shí)。將 獲得的反應(yīng)混合物在95°C下加熱15分鐘，使酶滅活。加入20克活性炭，并將混合物加熱至75 °C，并保持30分鐘。將混合物過濾并用水將濾液稀釋至5%固體含量，并通過各自填充了 4000mL Amberlite XAD 7HP大孔吸附樹脂的柱。用5體積的水和2體積的20%(v/v)乙醇洗 滌柱。用50 %乙醇洗脫吸附的糖苷。將獲得的洗脫液通過填充了Amber 1 i te FPC23 (H+)和 Amberlite FPA51(0!〇離子交換樹脂的柱。蒸發(fā)乙醇，并將脫鹽和脫色的水溶液在60°C下 真空濃縮，然后使用實(shí)驗(yàn)室噴霧干燥器干燥成粉末形式。將干燥的粉末懸浮于5體積的95 % 含水乙醇中。將懸浮液在12小時(shí)過程中在80°C下攪拌。然后通過過濾分離懸浮的固體。將獲 得的固體在5小時(shí)過程中在90°C下真空干燥。獲得了 121克產(chǎn)物(樣品2b)。
[0143] 實(shí)施例12
[0144] 高度純化的短鏈葡糖基甜菊組合物的制備
[0145] 將100g木薯淀粉懸浮于300mL水（ρΗ6·5)中。加入2KNU的α-淀粉酶（Termamyl Classic，Novozymes，丹麥)和30單位根據(jù)實(shí)施例1獲得的CGT酶，并且在80 °C下進(jìn)行淀粉液 化約一小時(shí)，至約15的右旋糖當(dāng)量。通過鹽酸將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至pH 2.8,并且在5分 鐘的過程中將混合物在100°C下煮沸，使酶滅活。冷卻至65°C后，用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié) 至ρΗ6·0。將通過PureCircle(JiangXi)Co.，Ltd.(中國(guó)）產(chǎn)生的含有甜菊苷29.2%，萊鮑迪 苷A 54.3%、萊鮑迪苷C 9.0%、萊鮑迪苷F(l.7%)和總計(jì)約96.4%總甜菊醇糖苷含量的其 他糖苷的l〇〇g甜菊提取物加入液化淀粉中并攪拌直至獲得均勻的溶液。將200單位的CGI 1酶 加入溶液中，并將混合物在65°C的溫度下在持續(xù)攪拌下保持24小時(shí)。然后將溫度降至45°C， 并將8，000單位根據(jù)實(shí)施例2獲得的β-淀粉酶加入反應(yīng)混合物中。將反應(yīng)再繼續(xù)12小時(shí)。將 獲得的反應(yīng)混合物在95°C下加熱15分鐘，使酶滅活。加入20克活性炭，并將混合物加熱至75 °C，并保持30分鐘。將混合物過濾并用水將濾液稀釋至5%固體含量，并通過各自填充了 4000mL Amberlite XAD 7HP大孔吸附樹脂的柱。用5體積的水和2體積的20%(v/v)乙醇洗 滌柱。用50 %乙醇洗脫吸附的糖苷。將獲得的洗脫液通過填充了Amber 1 i te FPC23 (H+)和 Amberlite FPA51(0!〇離子交換樹脂的柱。蒸發(fā)乙醇，并將脫鹽和脫色的水溶液在60°C下 真空濃縮，然后使用實(shí)驗(yàn)室噴霧干燥器干燥成粉末形式。獲得了 154克產(chǎn)物(樣品5)。
[0146] 實(shí)施例13
[0147] 長(zhǎng)鏈葡糖基甜菊組合物的制備
[0148] 將100g木薯淀粉懸浮于300mL水（ρΗ6·5)中。加入2KNU的α-淀粉酶（Termamyl Classic，Novozymes，丹麥)和30單位根據(jù)實(shí)施例1獲得的CGT酶，并且在80°C下進(jìn)行淀粉液 化約一小時(shí)，至約15的右旋糖當(dāng)量。通過鹽酸將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至pH 2.8,并且在5分 鐘的過程中將混合物在100°C下煮沸，使酶滅活。冷卻至65°C后，用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié) 至ρΗ6·0。將通過PureCircle(JiangXi)Co.，Ltd.(中國(guó)）產(chǎn)生的含有甜菊苷29.2%，萊鮑迪 苷A 54.3%、萊鮑迪苷C 9.0%、萊鮑迪苷F(l.7%)和總計(jì)約96.4%總甜菊醇糖苷含量的其 他糖苷的l〇〇g甜菊提取物加入液化淀粉中并攪拌直至獲得均勻的溶液。將200單位的CGI 1酶 加入溶液中，并將混合物在65°C的溫度下在持續(xù)攪拌下保持24小時(shí)。將獲得的反應(yīng)混合物 在95 °C下加熱15分鐘，使酶滅活。加入20克活性炭，并將混合物加熱至75 °C，并保持30分鐘。 將混合物過濾并將濾液在60 °C下真空濃縮，然后使用實(shí)驗(yàn)室噴霧干燥器干燥成粉末形式。 獲得了 197克產(chǎn)物(樣品6)。
[0149] 實(shí)施例14
[0150] 低熱量橙汁飲料
[0151] 將橙子濃縮物（35%)、檸檬酸(0.35%)、抗壞血酸(0.05%)、橙紅色素(0.01%)、 橙子香精(〇. 20 % )、萊鮑迪苷A(0.003 % )和不同的葡糖基甜菊組合物(0.03 % )混合，在水 中完全溶解(直至100%)并巴氏殺菌。葡糖基甜菊組合物分別根據(jù)實(shí)施例1〇、11、5、12和13 獲得的樣品lb、2b、3、5和6來表示。
[0152] 樣品的感官評(píng)價(jià)概括于表5中。數(shù)據(jù)表明通過使用高純度短鏈葡糖基甜菊組合物 (含有兩個(gè)或更少的α-1，4_葡糖基殘基和低的未反應(yīng)甜菊醇糖苷）（樣品lb和2b)可以獲得 最佳結(jié)果。特別地，用樣品lb和2b制得的飲料呈現(xiàn)出圓潤(rùn)和完整的風(fēng)味特征和口感。
[0153] 表5
[0154] 橙汁飲料樣品的評(píng)價(jià)
[0155]
[0156] 相同的方法可以用于從其他水果制備汁液和汁液飲料，如蘋果、檸檬、杏、櫻桃、菠 蘿、芒果等。
[0157] 實(shí)施例15
[0158] 低熱量碳酸飲料
[0159] 制備了根據(jù)以下配方的碳酸飲料。
[0161] 由20名小組成員評(píng)價(jià)了感官特性。結(jié)果概括于表6中。
[0162] 表6
[0163] 低熱量碳酸飲料樣品的評(píng)價(jià)
[0164]
[0165] 以上結(jié)果表明使用樣品lb和2b制得的飲料具有最佳感官特征。
[0166] 實(shí)施例16
[0167] 減肥餅干
[0168] 將面粉(50.0%)、人造黃油（30.0%)、果糖（10.0%)、麥芽糖醇（8.0%)、全脂奶 (1.0%)、鹽(0.2%)、發(fā)酵粉(0.15%)、香草(0.1%)和不同的葡糖基甜菊組合物(0.03%) 在面團(tuán)混合機(jī)中充分捏合。將獲得的面團(tuán)模制并在200?？鞠渲泻姹?5分鐘。葡糖基甜菊組 合物分別根據(jù)實(shí)施例10、11、5和12獲得的樣品lb、2b、3和5來表示。
[0169] 通過20名小組成員評(píng)價(jià)了感官特性。在通過高純度短鏈葡糖基甜菊組合物(含有 兩個(gè)或更少的α-1，4_葡糖基殘基)衍生物(樣品lb和2b)制得的樣品中獲得了最佳結(jié)果。小 組成員標(biāo)注了使用樣品lb和2b制得的餅干中圓潤(rùn)和完整的風(fēng)味特征和口感。
[0170] 實(shí)施例17
[0171] 酸奶
[0172] 將不同的葡糖基甜菊組合物(0.03%)和蔗糖(4%)溶解于低脂奶中。葡糖基甜菊 組合物分別根據(jù)實(shí)施例1〇、11、5和12獲得的樣品lb、2b、3和5來表示。在82°C下巴氏殺菌20 分鐘后，將奶冷卻至37 °C。加入發(fā)酵培養(yǎng)物(3 % )，并且將混合物在37 °C下孵育6小時(shí)，然后 在5°C下孵育12小時(shí)。
[0173] 通過20名小組成評(píng)價(jià)了感官特性。在通過高純度短鏈葡糖基甜菊組合物(含有兩 個(gè)或更少的α-1，4_葡糖基殘基)衍生物(樣品lb和2b)制得的樣品中獲得了最佳結(jié)果。小組 成員標(biāo)注了使用樣品lb和2b制得的樣品中圓潤(rùn)和完整的風(fēng)味特征和口感。
[0174] 比較實(shí)施例1
[0175] 高度純化的短鏈葡糖基甜菊組合物的制備
[0176] 將100g木薯淀粉懸浮于300mL水（pH6.5)中。加入2KNU的α-淀粉酶（Termamyl Classic，Novozymes，丹麥)和30單位根據(jù)上述程序獲得的CGT酶，并且在80°C下進(jìn)行淀粉液 化約一小時(shí)，至約15的右旋糖當(dāng)量。
[0177] 冷卻至65 °C后，用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié)至pH6.0。將通過PureCircle (JiangXi) Co.，Ltd.(中國(guó)）產(chǎn)生的含有甜菊苷29.2%，萊鮑迪苷A 54.3%、萊鮑迪苷C 9.0%、萊鮑迪 苷F(l. 7%)和總計(jì)約96.4%總甜菊醇糖苷含量的其他糖苷的100g甜菊提取物加入液化淀 粉中并攪拌直至獲得均勻的溶液。將200單位的CGT酶加入溶液中，并將混合物在65°C的溫 度下在持續(xù)攪拌下保持24小時(shí)。
[0178] 然后將溫度降至45°C，并將8,000單位大豆β-淀粉酶（#1500S，Nagase Chemtex Corp.，日本)加入反應(yīng)混合物中。將反應(yīng)再繼續(xù)12小時(shí)。將獲得的反應(yīng)混合物在95°C下加熱 15分鐘，使酶滅活。加入20克活性炭，并將混合物加熱至75 °C，并保持30分鐘。將混合物過濾 并用水將濾液稀釋至5%固體含量，并通過填充了4!1^6^^6??023(!〇和411^64^6 FPA51(0H-)離子交換樹脂的柱，然后通過各自填充了4000mL Amberlite XAD 7HP大孔吸附 樹脂的柱。用5體積的水和2體積的20% (v/v)乙醇洗滌大孔樹脂柱。用50%乙醇洗脫吸附的 糖苷。將獲得的洗脫液的乙醇蒸發(fā)，并在60 °C下真空濃縮，然后使用實(shí)驗(yàn)室噴霧干燥器干燥 成粉末形式。獲得了 114克產(chǎn)物(樣品7)。
[0179]使用HPLC分析了樣品7組成，并使用20名受過訓(xùn)練的小組成員，使用水溶液連同其 他樣品(樣品la、2a、3和4)進(jìn)行了感官評(píng)價(jià)。
[0180] 葡糖基甜菊醇糖苷樣品的組成
[0181]
[0182] 水系統(tǒng)中的樣品的感官評(píng)價(jià)
[0183]
[0184] 比較實(shí)施例2
[0185] 高度純化的短鏈葡糖基甜菊組合物的制備
[0186] 將100g木薯淀粉懸浮于300mL水（ρΗ6·5)中。加入2KNU的α-淀粉酶（Termamyl Classic，Novozymes，丹麥)和30單位根據(jù)上述程序獲得的CGT酶，并且在80°C下進(jìn)行淀粉液 化約一小時(shí)，至約15的右旋糖當(dāng)量。冷卻至65 °C后，用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié)至pH6.0。將通 過PureCircle(JiangXi )Co.，Ltd.(中國(guó)）產(chǎn)生的含有甜菊苷29.2%，萊鮑迪苷A 54.3%、萊 鮑迪苷C 9.0%、萊鮑迪苷F(1.7% )和總計(jì)約96.4%總甜菊醇糖苷含量的其他糖苷的100g 甜菊提取物加入液化淀粉中并攪拌直至獲得均勻的溶液。將200單位的CGT酶加入溶液中， 并將混合物在65°C的溫度下在持續(xù)攪拌下保持24小時(shí)。然后將溫度降至45°C，并將8，000單 位根據(jù)上述程序獲得的淀粉酶加入反應(yīng)混合物中。將反應(yīng)再繼續(xù)12小時(shí)。將獲得的反應(yīng) 混合物在95°C下加熱15分鐘，使酶滅活。加入20克活性炭，并將混合物加熱至75 °C，并保持 30分鐘。將混合物過濾并用水將濾液稀釋至5%固體含量，并通過填充了Amber 1 ite FPC23 (H+)和Amberlite FPA51 (OH-)離子交換樹脂的柱，然后通過各自填充了4000mL Amberlite XAD 7HP大孔吸附樹脂的柱。用5體積的水和2體積的20 % (v/v)乙醇洗滌大孔樹脂柱。用 50 %乙醇洗脫吸附的糖苷。將獲得的洗脫液的乙醇蒸發(fā)，并在60 °C下真空濃縮，然后使用實(shí) 驗(yàn)室噴霧干燥器干燥成粉末形式。將干燥的粉末懸浮于5體積的95%含水乙醇中。將懸浮液 在12小時(shí)過程中在80°C下攪拌。然后通過過濾分離懸浮的固體。將獲得的固體在5小時(shí)過程 中在90°C下真空干燥。獲得了 67克產(chǎn)物(樣品8)。
[0187] 使用HPLC分析了樣品8組成，并使用20名受過訓(xùn)練的小組成員，使用水溶液連同其 他樣品(樣品lb、2b、3和5)進(jìn)行了感官評(píng)價(jià)。
[0188] 葡糖基甜菊醇糖苷樣品的組成
[0189]
[0190]水系統(tǒng)中的樣品的感官評(píng)價(jià)
[0191]
[0192] 應(yīng)當(dāng)明白之前的描述和本文中顯示的特定實(shí)施方案僅僅是本發(fā)明最佳方式及其 原理的說明，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地進(jìn)行改變和增加，而不脫離本發(fā)明的精神和 范圍，因此應(yīng)當(dāng)明白本發(fā)明只受所附權(quán)利要求范圍的限制。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 用于生產(chǎn)葡糖基甜菊組合物的方法，包括下列步驟： 將淀粉加入到水中以形成淀粉懸浮液； 將α-淀粉酶和CGT酶的混合物加入到淀粉懸浮液中并在約75-80°C下孵育約0.5至2小 時(shí)，生成液化淀粉懸浮液； 通過低pH熱處理將α-淀粉酶滅活； 將甜菊醇糖苷加入到液化淀粉懸浮液中，生成反應(yīng)混合物;和 將第二批CGT酶加入到反應(yīng)混合物中并在約5-125°C下孵育約1至168小時(shí)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括下列步驟： 加入選自淀粉酶、淀粉酶、麥芽糖酶、葡糖淀粉酶、呋喃果糖苷酶、葡萄糖苷酶、葡聚糖 酶、β-葡聚糖酶、轉(zhuǎn)葡糖苷酶、葡糖基轉(zhuǎn)移酶、果糖基轉(zhuǎn)移酶、半乳糖基轉(zhuǎn)移酶、乳糖酶、半乳糖 苷酶、纖維素酶、支鏈淀粉酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、Ma ltogen.ase_?、Fungamy 1?、 Novamy 1?、Opt iffla11?:,或其混合物的一種或幾種酶;和 將反應(yīng)混合物在約5-125°C下孵育約0.0001-168小時(shí)； 其中葡糖基甜菊組合物包含具有二十個(gè)或更少的α-1，4-葡糖基殘基的甜菊醇糖苷衍 生物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中改變步驟的順序。4. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中α-淀粉酶和CGT酶的混合物含有每一單位CGT酶約0. Οδ-Ο. IKNU 的 α-淀粉酶。5. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中添加的甜菊醇糖苷的重量約等于淀粉的重量。6. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中添加的甜菊醇糖苷選自甜菊苷、萊鮑迪苷A、萊鮑迪苷B、 萊鮑迪苷C、萊鮑迪苷D、萊鮑迪苷Ε、萊鮑迪苷F、萊鮑迪苷X、杜克苷Α、甜菊雙糖苷、甜茶苷， 以及甜菊植物中發(fā)現(xiàn)的其他甜菊醇糖苷，及其混合物。7. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中添加的甜菊醇糖苷被選自羅漢果提取物、Siraitia grosvenorii提取物、羅漢果苷(mogroside)、羅漢果苷ΙΙΕ、羅漢果苷III、羅漢果苷IV、羅漢 果苷V、羅漢果苷￥1、11-氧-羅漢果苷￥、賽門苷（81&111611〇81(16)1、光果木鱉阜苷 (grosmomoside)I，以及Siraitia grosvenorii植物中發(fā)現(xiàn)的其他萌蘆素(mogrol)或氧-萌 蘆素糖苷及其混合物的化合物部分或完全替代。8. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中CGT酶通過嗜熱脂肪芽孢桿菌（Baci Ilus stearothermophi Ius)的培養(yǎng)物來產(chǎn)生。9. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中第二批CGT酶具有每克固體約0.2-4單位的CGT酶。10. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中第二批CGT酶具有每克固體約0.5-1.2單位的CGT酶。11. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中從選自大豆、大麥、真菌和細(xì)菌的來源生產(chǎn)β-淀粉酶。12. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中以每克總固體約30-50單位來添加 β-淀粉酶，并且處理 在約40-60 °C的溫度下進(jìn)行，持續(xù)約3-16小時(shí)的時(shí)間段。13. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中酶處理后，甜菊醇糖苷的葡糖基化衍生物具有四個(gè)或 更少的α-葡糖基殘基。14. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中酶處理后，甜菊醇糖苷的葡糖基化衍生物具有兩個(gè)或 更少的α-葡糖基殘基。15. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中酶處理后，甜菊醇糖苷的葡糖基化衍生物只具有一個(gè) α_葡糖基殘基。16. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，進(jìn)一步包括將酶的底物加入到反應(yīng)混合物中的步驟。17. 權(quán)利要求2的方法，進(jìn)一步包括在孵育反應(yīng)混合物后通過熱處理滅活反應(yīng)混合物中 的酶。18. 權(quán)利要求2的方法，進(jìn)一步包括將反應(yīng)混合物脫色的步驟。19. 權(quán)利要求2的方法，進(jìn)一步包括通過將脫色的反應(yīng)混合物與大孔吸附樹脂接觸來除 去非-二萜化合物并隨后用醇或含水醇洗脫吸附的二萜糖苷，以獲得含糖苷洗脫液的步驟。20. 權(quán)利要求19的方法，進(jìn)一步包括用離子交換樹脂將含糖苷洗脫液脫鹽的步驟。21. 權(quán)利要求20的方法，進(jìn)一步包括從洗脫液中除去醇，獲得含水洗脫液的步驟。22. 權(quán)利要求21的方法，進(jìn)一步包括將含水洗脫液濃縮并干燥以獲得干燥的葡糖基甜 菊組合物的步驟。23. 權(quán)利要求22的方法，進(jìn)一步包括將干燥的葡糖基甜菊組合物懸浮于含水醇中，從懸 浮液中分離晶體并將它們干燥以獲得葡糖基甜菊組合物的步驟。24. 權(quán)利要求18的方法，其中使用活性炭進(jìn)行脫色。25. 根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中使用離子交換樹脂或膜進(jìn)行脫色，所述膜選自超濾、 納濾和反向滲透膜。26. 權(quán)利要求19的方法，其中用多個(gè)按序連接的填充有大孔吸附樹脂的柱，接著用水洗 滌柱，然后用約10-50% (v/v)乙醇洗滌，分離柱，并且隨后用30-100%乙醇單獨(dú)洗脫每個(gè)柱 來進(jìn)行除去非二萜化合物。27. 根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中將洗脫液通過填充有離子交換樹脂的柱或膜來進(jìn)行 脫鹽，所述膜選自超濾、納濾和反向滲透膜。28. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中葡糖基甜菊組合物具有至少約95 %總甜菊醇糖苷，基 于干基。29. 包含通過權(quán)利要求1的方法制得的葡糖基甜菊組合物和另外的甜味劑的組合物，所 述另外的甜味劑選自：甜菊提取物、甜菊醇糖苷、甜菊苷、萊鮑迪苷A、萊鮑迪苷B、萊鮑迪苷 C、萊鮑迪苷D、萊鮑迪苷Ε、萊鮑迪苷F、萊鮑迪苷X、杜克苷Α、甜菊雙糖苷、甜茶苷、甜菊植物 中發(fā)現(xiàn)的其他甜菊醇糖苷及其混合物、羅漢果提取物、羅漢果苷、高果糖玉米糖漿、玉米糖 漿、轉(zhuǎn)化糖、低聚果糖、菊粉、低聚菊粉、偶聯(lián)糖、低聚麥芽糖、麥芽糖糊精、玉米糖漿固體、葡 萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、阿斯巴甜、糖精、三氯蔗糖、糖醇，及其組合。30. 包含通過權(quán)利要求1的方法制得的葡糖基甜菊組合物和另外的芳香劑的風(fēng)味組合 物，所述另外的芳香劑選自但不限于:檸檬、橙子、果味、香蕉、葡萄、梨子、菠蘿、芒果、苦杏 仁、可樂、肉桂、糖、棉花糖、香草，及其組合。31. 包含通過權(quán)利要求1的方法制得的葡糖基甜菊組合物和另外的食品成分的食品成 分，所述另外的食品成分選自：酸味劑、有機(jī)酸和氨基酸、著色劑、填充劑、改性淀粉、樹膠、 組織形成劑、防腐劑、抗氧化劑、乳化劑、穩(wěn)定劑、增稠劑、膠凝劑，及其組合。32. 包含通過權(quán)利要求1的方法制得的葡糖基甜菊組合物的食品、飲料、化妝品或藥品。33. 權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括將反應(yīng)混合物中的酶滅活的步驟。34. 權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括將反應(yīng)混合物脫色的步驟。
【文檔編號(hào)】C12P19/14GK105899670SQ201480061594
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2014年9月26日
【發(fā)明人】A·馬科斯雅恩
【申請(qǐng)人】譜賽科美國(guó)股份有限公司