22-降-豆甾縮氨硫脲化合物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種22?降?豆甾縮氨硫脲化合物及其制備方法和應(yīng)用，其中22?降?豆甾縮氨硫脲化合物的結(jié)構(gòu)式為：通過(guò)體外抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖活性試驗(yàn)表明，本發(fā)明制備的22?降?豆甾縮氨硫脲化合物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株，如人乳頭甲狀腺癌細(xì)胞、人口腔表皮樣癌細(xì)胞和宮頸癌等癌癥細(xì)胞株具有顯著的抑制作用。同時(shí)，對(duì)人腎上皮細(xì)胞(HEK293T)沒(méi)有細(xì)胞毒性，可用于制備治療癌癥的藥物。
【專利說(shuō)明】
22-降-豆甾縮氨硫脲化合物及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種22-降-豆留縮氨硫脲化 合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 癌癥是危害人類健康的一種主要疾病，攻克惡性腫瘤是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的一個(gè)難題，也 是當(dāng)今制醫(yī)藥工業(yè)最大的挑戰(zhàn)。目前，各種不同類型的抗腫瘤藥物不斷出現(xiàn)并在臨床上獲 得應(yīng)用，但是在臨床上使用的抗腫瘤藥物由于其對(duì)人體組織造成的毒性較大，大大限制了 它們的使用范圍。因此，尋找高效、高選擇性和副作用小的抗癌藥物是抗癌藥物開(kāi)發(fā)的主要 方向。
[0003] 在抗腫瘤藥物中，目前臨床上用于治療前列腺增生的藥物Finasteride，用于治療 晚期前列腺癌的藥物雌莫司汀磷酸鈉 (Estramustine phosphate sodium)、醋酸阿比特龍 和用于治療絕經(jīng)婦女乳腺癌的藥物Exemestane，以及最近由EntreMed公司開(kāi)發(fā)的作為單一 療法用于穩(wěn)定的或復(fù)發(fā)的多發(fā)性骨髓瘤和前列腺癌治療的抗癌藥物2-甲氧雌二醇（商品 名:Panzem)，它們都屬于甾體抗腫瘤藥物。近年來(lái)在抗腫瘤藥物的研究中，出現(xiàn)了不少甾體 芳香雜環(huán)化合物作為抗腫瘤藥物的報(bào)道，其中噻唑雜環(huán)是一類重要的藥效基團(tuán)。例如甾核 A-環(huán)與噻唑環(huán)相連接的具有3-取代噻唑結(jié)構(gòu)的甾體芳雜環(huán)化合物(Elfar M,Elmegeed GA, Eskander EA, Rady HM,Tantawy MA. Novel modified steroid derivatives of androstane as chemotherapeutic anti-cancer agents.Eur J Med Chem 2009,44: 3936-46.);甾核D-環(huán)17-位與噻唑環(huán)相連接的具有噻唑結(jié)構(gòu)的甾體芳雜環(huán)化合物(Abid H.Banday,Shameem A.Shameem B.D.Gupta H.M.Sampath Kumar D-ring substituted 1， 2,3-triazolyl 2〇-keto pregnenanes as potential anticancer agents: Synthesis and biological evaluation.Steroids 2010,75:801_804);在留核支鏈的20-位上引入噻 P坐環(huán)所得到的留體噻唑衍生物（Shingate BB ,Hazra BG，Salunke DB ,Pore VS ,Shirazi F， Deshpande MV.Stereoselective synthesis and antimicrobial activity of steroidal C_20tertiary alcohols with thiazole/pyridine side chain.Eur J Med Chem,2011,46(9):368卜3689)〇

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種22-降-豆留縮氨硫脲化合物及其制備方法和應(yīng)用，通過(guò) 體外抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖活性試驗(yàn)表明，本發(fā)明制備的22-降-豆留縮氨硫脲化合物對(duì)多種 腫瘤細(xì)胞株，如人乳頭甲狀腺癌細(xì)胞、人口腔表皮樣癌細(xì)胞和人宮頸癌等癌癥細(xì)胞株具有 顯著的抑制作用。同時(shí)，對(duì)人腎上皮細(xì)胞(HEK293T)沒(méi)有細(xì)胞毒性。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種22-降-豆留縮氨硫脲化 合物，其結(jié)構(gòu)式為式(ΠΙ):
[0006]
[0007] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法，包括以下步驟：
[0008] 步驟一、將l_2g豆甾醇加入10-20mL吡啶中，完全溶解后，加入5-10mL醋酸酐，室溫 攪拌反應(yīng)24h，待反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，加入15-25mL濃度為lmol/L的稀鹽酸后，將產(chǎn)物移入 分液漏斗中，用10_20mL乙酸乙酯連續(xù)萃取3次，合并有機(jī)層，接著向有機(jī)層中加入10-20mL 水后，分離出有機(jī)層，再將分離出的有機(jī)層依次用10_15mL飽和Na2CO3水溶液、10-20mL水和 10-20mL飽和食鹽水進(jìn)行萃取，再將萃取后的有機(jī)層用5-10g無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，之后過(guò) 濾、分離出有機(jī)溶劑，得到具有式(I)的白色固體化合物；
[0009]
[0010] 步驟二、將1.5-2.5g具有式（I)的白色固體化合物置于充滿氬氣的雙頸茄形反應(yīng) 瓶中，加進(jìn)干燥的正己烷30-50mL，室溫下攪拌使其完全溶解后，將溫度降至-5~-HTC，繼 續(xù)攪拌，另將600_800yL碘代苯和280-350yL溴素依次移入5-10mL正己烷中，充分混勻后冷 卻至-5~-10°C，得到二溴碘苯溶液，然后將二溴碘苯溶液滴加進(jìn)雙頸茄形反應(yīng)瓶中，滴加 過(guò)程反應(yīng)體系溫度為-5~-10°C，2-3小時(shí)加完后，繼續(xù)攪拌1-2小時(shí)，將得到的反應(yīng)液快速 蒸干得到淡黃色油狀物一，向淡黃色油狀物一中加入20_30mL二氯甲烷使其完全溶解，之后 移入帶支管的反應(yīng)燒瓶中，在液氮-乙酸乙酯冷浴中冷至-60~_90°C，在攪拌下通入流量為 2.5-3mL/min的臭氧30-40min，待反應(yīng)完成后，加入2-5mL二甲硫醚，攪拌12-24h后，加入10-20mL冰醋酸和5-8g鋅粉，在室溫下繼續(xù)攪拌2-5h，之后過(guò)濾，將濾液進(jìn)行減壓蒸餾，得到體 積為濾液體積1/6-1/5的殘液，之后將殘液用30-50mL飽和食鹽水萃取1次，分離出的有機(jī)層 再用30-50mL體積比為3:1的乙酸乙酯和石油醚的混合液萃取1次，分離出的有機(jī)層再依次 用20-30mL水、10-15mL飽和碳酸氫鈉水溶液和10-15mL飽和食鹽水分別萃取1次，再將分離 出的有機(jī)層進(jìn)行減壓蒸餾，得到淡黃色油狀物二，之后向淡黃色油狀物二中加入20-25mL甲 醇和3-5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13 %的碳酸鉀水溶液，室溫下攪拌0.5-2小時(shí)，分離出有機(jī)溶劑后，加 入10-20mL蒸餾水，之后用20-30mL乙酸乙酯萃取1次，分離出的有機(jī)層再依次用20-30mL水、 10-20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和、10-20mL飽和食鹽水分別萃取1次后，將分離出的有機(jī)層用 3_5g的無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，得到粗產(chǎn)物一，將粗產(chǎn)物一進(jìn)行柱層析分離，得到具有式(II) 的化合物：
[0011]
[0012] 步驟三、將60-80mg具有式（II)的化合物和20-30mg 4,4_二甲基氨基硫脲用20- 25mL無(wú)水乙醇溶解后，滴加 l-2mL冰醋酸，在60-80°C下攪拌反應(yīng)至反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，分 離出有機(jī)溶劑，得到粗產(chǎn)物二，將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離，即得具有式(III)的化合物。 [0013]優(yōu)選的是，所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步 驟二和所述步驟三中檢驗(yàn)反應(yīng)完成的方法為：反應(yīng)過(guò)程中用TLC跟蹤反應(yīng)，待原料點(diǎn)消失 后，即為反應(yīng)完成，所述步驟一中TLC跟蹤反應(yīng)以體積比為1:10-1:5的乙酸乙酯和石油醚為 展開(kāi)劑，所述步驟二和所述步驟三中TLC跟蹤反應(yīng)均以體積比為10:1-5:1的石油醚和乙醚 為展開(kāi)劑。
[0014]優(yōu)選的是，所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步 驟二和所述步驟三中分離出有機(jī)溶劑的方法均為減壓蒸餾。
[0015]優(yōu)選的是，所述的22-降-豆甾縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟二中將粗 產(chǎn)物一、所述步驟三中將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離均以體積比為5:1-3:1的石油醚和乙酸 乙酯為洗脫劑。
[0016]優(yōu)選的是，所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟三中將粗 產(chǎn)物二在300-400目的硅膠柱中進(jìn)行柱層析分離。
[0017] -種22-降-豆甾縮氨硫脲化合物的用途，所述22-降-豆甾縮氨硫脲化合物在制備 治療癌癥藥物制劑中的應(yīng)用。
[0018] 優(yōu)選的是，所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途中，所述藥物制劑為注射劑、 片劑、丸劑、膠囊劑、懸浮劑或乳劑。
[0019] 本發(fā)明至少包括以下有益效果：
[0020] 本發(fā)明通過(guò)體外抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖活性試驗(yàn)表明，本發(fā)明制備的22-降-豆甾縮 氨硫脲化合物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株，如人乳頭甲狀腺癌細(xì)胞、人口腔表皮樣癌細(xì)胞和宮頸癌 等癌癥細(xì)胞株具有顯著的抑制作用。同時(shí)，對(duì)人腎上皮細(xì)胞(HEK293T)沒(méi)有細(xì)胞毒性，可用 于制備治療癌癥的藥物。
[0021] 本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過(guò)下面的說(shuō)明體現(xiàn)，部分還將通過(guò)對(duì)本 發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說(shuō)明書 文字能夠據(jù)以實(shí)施。
[0023]需要說(shuō)明的是，下述實(shí)施方案中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法，所 述試劑和材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得。
[0024] 實(shí)施例1
[0025]本發(fā)明提供一種22-降-豆留縮氨硫脲化合物，其結(jié)構(gòu)式為式(III):
[0026]
[0027] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法，包括以下步驟：
[0028] 步驟一、將1.206g豆甾醇加入IOmL吡啶中，完全溶解后，加入5mL醋酸酐，室溫?cái)嚢?反應(yīng)24h，待反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，加入30mL濃度為lmol/L的稀鹽酸后，將產(chǎn)物移入分液漏 斗中，用15mL乙酸乙酯連續(xù)萃取3次（乙酸乙酯每次用量均為15mL，第一次加入乙酸乙酯后， 溶液分層，分層后把有機(jī)層分出來(lái)，放在錐形瓶里，然后水層用乙酸乙酯繼續(xù)萃取，水層中 萃取完后，再分離出有機(jī)層，向水層中加入乙酸乙酯，再分離出有機(jī)層），合并有機(jī)層，接著 向有機(jī)層中加入15mL水后，分離出有機(jī)層，再將分離出的有機(jī)層依次用IOmL飽和Na2C〇3水溶 液、15mL水和20mL飽和食鹽水進(jìn)行萃?。ㄏ蛴袡C(jī)層中加入飽和Na2C〇3水溶液后，分離出有機(jī) 層，再向分離出的有機(jī)層中加入水，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層中加入飽和食鹽 水，分離出有機(jī)層），再將萃取后的有機(jī)層用5g無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，之后過(guò)濾、分離出有機(jī) 溶劑，得到具有式(I)的白色固體化合物；
[0029]
[0030] 步驟二、將2.2g具有式（I)的白色固體化合物置于充滿氬氣的雙頸茄形反應(yīng)瓶中， 加進(jìn)干燥的正己烷50mL，室溫下攪拌使其完全溶解后，將溫度降至-5°C，繼續(xù)攪拌，另將602 yL碘代苯和295yL溴素依次移入5mL正己烷中，充分混勻后冷卻至-5°C，得到二溴碘苯溶液， 然后將二溴碘苯溶液滴加進(jìn)雙頸茄形反應(yīng)瓶中，滴加過(guò)程反應(yīng)體系溫度為-5°C，2.5小時(shí)加 完后，繼續(xù)攪拌1小時(shí)，將得到的反應(yīng)液快速蒸干得到淡黃色油狀物一，接著向淡黃色油狀 物一中加入30mL二氯甲烷使其完全溶解，之后移入帶支管的反應(yīng)燒瓶中，在液氮-乙酸乙酯 冷浴中冷至-78°C，在攪拌下通入流量為2.5mL/min的臭氧30min，待反應(yīng)完成后，加入2mL二 甲硫醚，攪拌12h后，加入IOmL冰醋酸和6.5g鋅粉，在室溫下繼續(xù)攪拌4h，之后過(guò)濾，將濾液 進(jìn)行減壓蒸餾，得到體積為濾液體積1/5的殘液，考慮到殘液含有大量乙酸，為了避免萃取 過(guò)程中出現(xiàn)乳化狀況，需要加大水相和有機(jī)相的極性差距，具體操作是:將殘液用50mL飽和 食鹽水萃取1次，分離出有機(jī)層，分離出的有機(jī)層再用40mL體積比為3:1的乙酸乙酯和石油 醚的混合液萃取1次，再分離出有機(jī)層，分離出的有機(jī)層依次用30mL水、飽和碳酸氫鈉水溶 液和飽和食鹽水分別萃取1次（向有機(jī)層中加入水，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層中 加入飽和碳酸氫鈉水溶液，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層中加入飽和食鹽水，分離出 有機(jī)層），再將分離出的有機(jī)層進(jìn)行減壓蒸餾，得到淡黃色油狀物二，之后向淡黃色油狀物 二中加入30mL甲醇和3mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13 %的碳酸鉀水溶液，室溫下攪拌1小時(shí)，分離出有機(jī) 溶劑后，加入25mL蒸餾水，之后用25mL乙酸乙酯萃取1次，分離出的有機(jī)層再依次用30mL水、 飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水分別萃取1次（向有機(jī)層中加入水，分離出有機(jī)層，再向 分離出的有機(jī)層中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層中加入 飽和食鹽水，分離出有機(jī)層)后，將分離出的有機(jī)層用3g的無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，得到粗產(chǎn) 物一，將粗產(chǎn)物一進(jìn)行柱層析分離，得到具有式（II)的化合物；IR(KBr)v/cnf 1:3378，2925， 2896,2864,2704,2357,2332,1719,1540,1454,1433,1376,1057,1021，951 !1H NMR (300MHz，αχη3)δ :0.671 (s，3H, I8-CH3)，0.996(s，3H，19-CH3)，3.486(111，lH，3-CaH) ,5.301 (d，J = 7.2Hz 1H，6-CH) ,9.502-9.558(H，m-CH0) ;13C 匪R(75MHz，CDC13)S :12.8( 18-C)， 13.5(19-0,15.1(21-0,21.0(11-0,24.2(15-0,27.0(16-C),31.5(2-C) ,31.7(7-0 , 31.9(8-0,36.5(10-0,37.2(1-0,38.4(20-0,39.4(12-0,42.2(4-0,42.9(13-0 , 50.1 (9-0,56.2( 17-0,56.2( 14-0,71.6(3-C), 121.3(6-C), 148.8(5-C), 173.3(22-C).〇
[0031]
[0032] 步驟三、將631^具有式（11)的化合物和2511^4,4-二甲基氨基硫脲用2〇1^無(wú)水乙醇 溶解后，滴加兩滴冰醋酸，在60°C下攪拌反應(yīng)至反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，分離出有機(jī)溶劑，得 到粗產(chǎn)物二，將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離，即得具有式（III)的化合物。IR(KBr)VZcnT 1: 3485,2933,2856,1654,1553,1463,1379,1081,876,798,664;? NMR(O)Cl3,300ΜΗζ)δ:0.71 (3H，s，18-CH3)，0.98(3H，d，J = 6.0,2hCH3)，1.03(3H，s，19-CH3)，3.40(3H，s，21-4'-NCH3)，3.46(3H，s，21-4'-NCH 3)，3.49-3.61(lH，m，C3-H)，5.37(lH，d，J=6.0，C6-H),9.60 (1H，s，N-H) ;13CNMR(CDC13,75MHz)S:175.6(C = S)，140.8(C = N)，121.6(5-C)，109.2(6-C),71.8(3-0,57.0,56.3,55.8,51.8,50.1,42.5,42.3,39.6,37.2,36.5,31.9,31.9, 31.7,27.7,24.4,21.0,19.4,11.8；HREIMS m/z:432.3020[M+H] + (calcd. for C25H42N3OS, 432.3049)·。
[0033] 本發(fā)明制備的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的反應(yīng)式為：
[0034]
[0035] 試劑條件：&.啦啶，（013〇))2〇;13.8『2，〇61151;(3.〇3，]^23,211，骱。 ；(1.13￥七.％1(2邙3， CH3OH; e · 4，4-二甲基氨基硫脲，無(wú)水乙醇，冰醋酸。
[0036] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中檢驗(yàn)反應(yīng)完成的方法為:反應(yīng)過(guò)程中用TLC跟蹤反應(yīng)，待原料點(diǎn)消失后，即為反 應(yīng)完成，所述步驟一中TLC跟蹤反應(yīng)以體積比為1:10的乙酸乙酯和石油醚為展開(kāi)劑，所述步 驟二和所述步驟三中TLC跟蹤反應(yīng)均以體積比為10:1的石油醚和乙醚為展開(kāi)劑。
[0037] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中分離出有機(jī)溶劑的方法均為減壓蒸餾。
[0038]所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟二中將粗產(chǎn)物一、所 述步驟三中將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離均以體積比為4:1的石油醚和乙酸乙酯為洗脫劑。 [0039]所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟三中將粗產(chǎn)物二在 300目的硅膠柱中進(jìn)行柱層析分離。
[0040] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途，所述22-降-豆留縮氨硫脲化合物在制備 治療癌癥藥物制劑中的應(yīng)用。
[0041 ]所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途中，所述藥物制劑為注射劑。
[0042] 實(shí)施例2
[0043]本發(fā)明提供一種22-降-豆留縮氨硫脲化合物，其結(jié)構(gòu)式為式(III):
[0044]
[0045] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法，包括以下步驟：
[0046] 步驟一、將1.206g豆留醇加入IOmL吡啶中，完全溶解后，加入5mL醋酸酐，室溫?cái)嚢?反應(yīng)24h，待反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，加入30mL濃度為lmol/L的稀鹽酸后，將產(chǎn)物移入分液漏 斗中，用15mL乙酸乙酯連續(xù)萃取3次（乙酸乙酯每次用量均為15mL，第一次加入乙酸乙酯后， 溶液分層，分層后把有機(jī)層分出來(lái)，放在錐形瓶里，然后水層用乙酸乙酯繼續(xù)萃取，水層中 萃取完后，再分離出有機(jī)層，向水層中加入乙酸乙酯，再分離出有機(jī)層），合并有機(jī)層，接著 向有機(jī)層中加入15mL水后，分離出有機(jī)層，再將分離出的有機(jī)層依次用IOmL飽和Na2C〇3水溶 液、15mL水和20mL飽和食鹽水進(jìn)行萃?。ㄏ蛴袡C(jī)層中加入飽和Na2C〇3水溶液后，分離出有機(jī) 層，再向分離出的有機(jī)層中加入水，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層中加入飽和食鹽 水，分離出有機(jī)層），再將萃取后的有機(jī)層用7g無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，之后過(guò)濾、分離出有機(jī) 溶劑，得到具有式(I)的白色固體化合物；
[0047]
[0048] 步驟二、將2.2g具有式（I)的白色固體化合物置于充滿氬氣的雙頸茄形反應(yīng)瓶中， 加進(jìn)干燥的正己烷50mL，室溫下攪拌使其完全溶解后，將溫度降至-5°C，繼續(xù)攪拌，另將602 yL碘代苯和295yL溴素依次移入5mL正己烷中，充分混勻后冷卻至-5°C，得到二溴碘苯溶液， 然后將二溴碘苯溶液滴加進(jìn)雙頸茄形反應(yīng)瓶中，滴加過(guò)程反應(yīng)體系溫度為-7°C，2.5小時(shí)加 完后，繼續(xù)攪拌1小時(shí)，將得到的反應(yīng)液快速蒸干得到淡黃色油狀物一，接著向淡黃色油狀 物一中加入30mL二氯甲烷使其完全溶解，之后移入帶支管的反應(yīng)燒瓶中，在液氮-乙酸乙酯 冷浴中冷至-78°C，在攪拌下通入流量為2.5mL/min的臭氧30min，待反應(yīng)完成后，加入2mL二 甲硫醚，攪拌12h后，加入IOmL冰醋酸和6.5g鋅粉，在室溫下繼續(xù)攪拌4h，之后過(guò)濾，將濾液 進(jìn)行減壓蒸餾，得到體積為濾液體積1/5的殘液，考慮到殘液含有大量乙酸，為了避免萃取 過(guò)程中出現(xiàn)乳化狀況，需要加大水相和有機(jī)相的極性差距，具體操作是:將殘液用50mL飽和 食鹽水萃取1次，分離出有機(jī)層，分離出的有機(jī)層再用40mL體積比為3:1的乙酸乙酯和石油 醚的混合液萃取1次，再分離出有機(jī)層，分離出的有機(jī)層依次用30mL水、飽和碳酸氫鈉水溶 液和飽和食鹽水分別萃取1次（向有機(jī)層中加入水，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層中 加入飽和碳酸氫鈉水溶液，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層中加入飽和食鹽水，分離出 有機(jī)層），再將分離出的有機(jī)層進(jìn)行減壓蒸餾，得到淡黃色油狀物二，之后向淡黃色油狀物 二中加入30mL甲醇和3mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13 %的碳酸鉀水溶液，室溫下攪拌2小時(shí)，分離出有機(jī) 溶劑后，加入25mL蒸餾水，之后用25mL乙酸乙酯萃取1次，分離出的有機(jī)層再依次用30mL水、 飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水分別萃取1次（向有機(jī)層中加入水，分離出有機(jī)層，再向 分離出的有機(jī)層中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層中加入 飽和食鹽水，分離出有機(jī)層)后，將分離出的有機(jī)層用4g的無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，得到粗產(chǎn) 物一，將粗產(chǎn)物一進(jìn)行柱層析分離，得到具有式(Π )的化合物；
[0049]
[0050] 步驟三、將63mg具有式（II)的化合物和25mg 4,4-二甲基氨基硫脲用2511^無(wú)水乙 醇溶解后，滴加兩滴冰醋酸，在60°C下攪拌反應(yīng)至反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，分離出有機(jī)溶劑， 得到粗產(chǎn)物二，將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離，即得具有式(III)的化合物。
[0051] 本發(fā)明制備的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的反應(yīng)式為：
[0052]
[0053] 試劑條件：&.啦啶，（013〇))2〇;13.8『2，〇61151;(3.〇3，]^23,211，骱。 ；(1.13￥七.％1(2邙3， CH3OH; e · 4，4-二甲基氨基硫脲，無(wú)水乙醇，冰醋酸。
[0054]所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中檢驗(yàn)反應(yīng)完成的方法為:反應(yīng)過(guò)程中用TLC跟蹤反應(yīng)，待原料點(diǎn)消失后，即為反 應(yīng)完成，所述步驟一中TLC跟蹤反應(yīng)以體積比為1:10的乙酸乙酯和石油醚為展開(kāi)劑，所述步 驟二和所述步驟三中TLC跟蹤反應(yīng)均以體積比為10:1的石油醚和乙醚為展開(kāi)劑。
[0055]所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中分離出有機(jī)溶劑的方法均為減壓蒸餾。
[0056]所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟二中將粗產(chǎn)物一、所 述步驟三中將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離均以體積比為4:1的石油醚和乙酸乙酯為洗脫劑。 [0057]所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟三中將粗產(chǎn)物二在 400目的硅膠柱中進(jìn)行柱層析分離。
[0058] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途，所述22-降-豆留縮氨硫脲化合物在制備 治療癌癥藥物制劑中的應(yīng)用。
[0059]所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途中，所述藥物制劑為膠囊劑。
[0060] 實(shí)施例3
[0061] 本發(fā)明提供一種22-降-豆留縮氨硫脲化合物，其結(jié)構(gòu)式為式(III):
[0062]
[0063] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法，包括以下步驟：
[0064] 步驟一、將1.206g豆留醇加入IOmL吡啶中，完全溶解后，加入5mL醋酸酐，室溫?cái)嚢?反應(yīng)24h，待反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，加入30mL濃度為lmol/L的稀鹽酸后，將產(chǎn)物移入分液漏 斗中，用15mL乙酸乙酯連續(xù)萃取3次（乙酸乙酯每次用量均為15mL，第一次加入乙酸乙酯后， 溶液分層，分層后把有機(jī)層分出來(lái)，放在錐形瓶里，然后水層用乙酸乙酯繼續(xù)萃取，水層中 萃取完后，再分離出有機(jī)層，向水層中加入乙酸乙酯，再分離出有機(jī)層），合并三次有機(jī)層， 接著向有機(jī)層中加入15mL水后，分離出有機(jī)層，再將分離出的有機(jī)層依次用I OmL飽和Na2CO3 水溶液、15mL水和20mL飽和食鹽水進(jìn)行萃取（向有機(jī)層中加入飽和Na2CO3水溶液后，分離出 有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層中加入水，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層中加入飽和食 鹽水，分離出有機(jī)層），再將萃取后的有機(jī)層用IOg無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，之后過(guò)濾、分離出 有機(jī)溶劑，得到具有式(I)的白色固體化合物；
[0065]
[0066] 步驟二、將2.2g具有式（I)的白色固體化合物置于充滿氬氣的雙頸茄形反應(yīng)瓶中， 加進(jìn)干燥的正己烷50mL，室溫下攪拌使其完全溶解后，將溫度降至-5°C，繼續(xù)攪拌，另將602 yL碘代苯和295yL溴素依次移入5mL正己烷中，充分混勻后冷卻至-5°C，得到二溴碘苯溶液， 然后將二溴碘苯溶液滴加進(jìn)雙頸茄形反應(yīng)瓶中，滴加過(guò)程反應(yīng)體系溫度為-10°C，2.5小時(shí) 加完后，繼續(xù)攪拌1小時(shí)，將得到的反應(yīng)液快速蒸干得到淡黃色油狀物一，接著向淡黃色油 狀物一中加入30mL二氯甲烷使其完全溶解，之后移入帶支管的反應(yīng)燒瓶中，在液氮-乙酸乙 酯冷浴中冷至 -78°C，在攪拌下通入流量為2.5mL/min的臭氧30min，待反應(yīng)完成后，加入2mL 二甲硫醚，攪拌12h后，加入IOmL冰醋酸和6.5g鋅粉，在室溫下繼續(xù)攪拌4h，之后過(guò)濾，將濾 液進(jìn)行減壓蒸餾，得到體積為濾液體積1/5的殘液，考慮到殘液含有大量乙酸，為了避免萃 取過(guò)程中出現(xiàn)乳化狀況，需要加大水相和有機(jī)相的極性差距，具體操作是:將殘液用50mL飽 和食鹽水萃取1次，分離出有機(jī)層，分離出的有機(jī)層再用40mL體積比為3:1的乙酸乙酯和石 油醚的混合液萃取1次，再分離出有機(jī)層，分離出的有機(jī)層依次用30mL水、飽和碳酸氫鈉水 溶液和飽和食鹽水分別萃取1次（向有機(jī)層中加入水，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層 中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層中加入飽和食鹽水，分離 出有機(jī)層），再將分離出的有機(jī)層進(jìn)行減壓蒸餾，得到淡黃色油狀物二，之后向淡黃色油狀 物二中加入30mL甲醇和3mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13 %的碳酸鉀水溶液，室溫下攪拌1.5小時(shí)，分離出 有機(jī)溶劑后，加入25mL蒸餾水，之后用25mL乙酸乙酯萃取1次，分離出的有機(jī)層再依次用 30mL水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水分別萃取1次（向有機(jī)層中加入水，分離出有機(jī) 層，再向分離出的有機(jī)層中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，分離出有機(jī)層，再向分離出的有機(jī)層 中加入飽和食鹽水，分離出有機(jī)層)后，將分離出的有機(jī)層用5g的無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，得 到粗產(chǎn)物一，將粗產(chǎn)物一進(jìn)行柱層析分離，得到具有式(I I)的化合物；
[0067]
[0068] 步驟三、將63mg具有式（II)的化合物和25mg 4,4-二甲基氨基硫脲用2211^無(wú)水乙 醇溶解后，滴加兩滴冰醋酸，在60°C下攪拌反應(yīng)至反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，分離出有機(jī)溶劑， 得到粗產(chǎn)物二，將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離，即得具有式(III)的化合物。
[0069] 本發(fā)明制備的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的反應(yīng)式為：
[0070]
[0071] 試劑條件：&.啦啶，（013〇))2〇;13.8『2，〇61151;(3.〇3，]^23,211，骱。 ；(1.13￥七.％1(2邙3， CH3OH; e · 4，4-二甲基氨基硫脲，無(wú)水乙醇，冰醋酸。
[0072] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中檢驗(yàn)反應(yīng)完成的方法為:反應(yīng)過(guò)程中用TLC跟蹤反應(yīng)，待原料點(diǎn)消失后，即為反 應(yīng)完成，所述步驟一中TLC跟蹤反應(yīng)以體積比為1:10的乙酸乙酯和石油醚為展開(kāi)劑，所述步 驟二和所述步驟三中TLC跟蹤反應(yīng)均以體積比為10:1的石油醚和乙醚為展開(kāi)劑。
[0073] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中分離出有機(jī)溶劑的方法均為減壓蒸餾。
[0074]所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟二中將粗產(chǎn)物一、所 述步驟三中將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離均以體積比為4:1的石油醚和乙酸乙酯為洗脫劑。 [0075]所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟三中將粗產(chǎn)物二在 350目的硅膠柱中進(jìn)行柱層析分離。
[0076] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途，所述22-降-豆留縮氨硫脲化合物在制備 治療癌癥藥物制劑中的應(yīng)用。
[0077] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途中，所述藥物制劑為丸劑。
[0078] 實(shí)施例4
[0079] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物，其結(jié)構(gòu)式為式(III):
[0080]
[0081 ] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法，包括以下步驟：
[0082] 步驟一、將Ig豆甾醇加入IOmL吡啶中，完全溶解后，加入5mL醋酸酐，室溫?cái)嚢璺磻?yīng) 24h，待反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，加入15mL濃度為lmol/L的稀鹽酸后，將產(chǎn)物移入分液漏斗中， 用IOmL乙酸乙酯連續(xù)萃取3次，合并有機(jī)層，接著向有機(jī)層中加入I OmL水后，分離出有機(jī)層， 再將分離出的有機(jī)層依次用IOmL飽和Na2CO3水溶液、IOmL水和IOmL飽和食鹽水進(jìn)行萃取，再 將萃取后的有機(jī)層用5g無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，之后過(guò)濾、分離出有機(jī)溶劑，得到具有式（I) 的白色固體化合物；
[0083]
[0084] 步驟二、將1.5g具有式（I)的白色固體化合物置于充滿氬氣的雙頸茄形反應(yīng)瓶中， 加進(jìn)干燥的正己烷30mL，室溫下攪拌使其完全溶解后，將溫度降至-5°C，繼續(xù)攪拌，另將600 yL碘代苯和280yL溴素依次移入5mL正己烷中，充分混勻后冷卻至-5°C，得到二溴碘苯溶液， 然后將二溴碘苯溶液滴加進(jìn)雙頸茄形反應(yīng)瓶中，滴加過(guò)程反應(yīng)體系溫度為_(kāi)5°C，2小時(shí)加完 后，繼續(xù)攪拌1小時(shí)，將得到的反應(yīng)液快速蒸干得到淡黃色油狀物一，向淡黃色油狀物一中 加入20mL二氯甲烷使其完全溶解，之后移入帶支管的反應(yīng)燒瓶中，在液氮-乙酸乙酯冷浴中 冷至-60 °C，在攪拌下通入流量為2.5mL/min的臭氧30min，待反應(yīng)完成后，加入2mL二甲硫 醚，攪拌12h后，加入IOmL冰醋酸和5g鋅粉，在室溫下繼續(xù)攪拌2-5h，之后過(guò)濾，將濾液進(jìn)行 減壓蒸餾，得到體積為濾液體積1/6-1/5的殘液，之后將殘液用30mL飽和食鹽水萃取1次，分 離出的有機(jī)層再用30mL體積比為3:1的乙酸乙酯和石油醚的混合液萃取1次，分離出的有機(jī) 層再依次用20mL水、IOmL飽和碳酸氫鈉水溶液和IOmL飽和食鹽水分別萃取1次，再將分離出 的有機(jī)層進(jìn)行減壓蒸餾，得到淡黃色油狀物二，之后向淡黃色油狀物二中加入20mL甲醇和 3mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13%的碳酸鉀水溶液，室溫下攪拌0.5小時(shí)，分離出有機(jī)溶劑后，加入IOmL蒸 餾水，之后用20mL乙酸乙酯萃取1次，分離出的有機(jī)層再依次用20mL水、IOmL飽和碳酸氫鈉 水溶液和、IOmL飽和食鹽水分別萃取1次后，將分離出的有機(jī)層用3g的無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干 燥，得到粗產(chǎn)物一，將粗產(chǎn)物一進(jìn)行柱層析分離，得到具有式(II)的化合物；
[0085]
[0086] 步驟三、將60mg具有式（II)的化合物和20mg 4,4-二甲基氨基硫脲用2〇11^無(wú)水乙 醇溶解后，滴加 ImL冰醋酸，在60°C下攪拌反應(yīng)至反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，分離出有機(jī)溶劑，得 到粗產(chǎn)物二，將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離，即得具有式(III)的化合物。
[0087] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中檢驗(yàn)反應(yīng)完成的方法為:反應(yīng)過(guò)程中用TLC跟蹤反應(yīng)，待原料點(diǎn)消失后，即為反 應(yīng)完成，所述步驟一中TLC跟蹤反應(yīng)以體積比為1:10的乙酸乙酯和石油醚為展開(kāi)劑，所述步 驟二和所述步驟三中TLC跟蹤反應(yīng)均以體積比為10:1的石油醚和乙醚為展開(kāi)劑。
[0088] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中分離出有機(jī)溶劑的方法均為減壓蒸餾。
[0089]所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟二中將粗產(chǎn)物一、所 述步驟三中將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離均以體積比為5:1的石油醚和乙酸乙酯為洗脫劑。
[0090] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟三中將粗產(chǎn)物二在 300目的硅膠柱中進(jìn)行柱層析分離。
[0091] -種22-降-豆甾縮氨硫脲化合物的用途，所述22-降-豆甾縮氨硫脲化合物在制備 治療癌癥藥物制劑中的應(yīng)用。
[0092] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途中，所述藥物制劑為注射劑、片劑、丸 劑、膠囊劑、懸浮劑或乳劑。
[0093] 實(shí)施例5
[0094] 一釉路-百甾縮氤硫脲仆,合物結(jié)抝忒為式（III):
[0095]
[0096] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法，包括以下步驟：
[0097] 步驟一、將2g豆甾醇加入20mL吡啶中，完全溶解后，加入IOmL醋酸酐，室溫?cái)嚢璺?應(yīng)24h，待反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，加入25mL濃度為lmol/L的稀鹽酸后，將產(chǎn)物移入分液漏斗 中，用20mL乙酸乙酯連續(xù)萃取3次，合并有機(jī)層，接著向有機(jī)層中加入20mL水后，分離出有機(jī) 層，再將分離出的有機(jī)層依次用15mL飽和Na 2CO3水溶液、20mL水和20mL飽和食鹽水進(jìn)行萃 取，再將萃取后的有機(jī)層用IOg無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，之后過(guò)濾、分離出有機(jī)溶劑，得到具有 式(I)的白色固體化合物；
[0098]
[0099] 步驟二、將2.5g具有式（I)的白色固體化合物置于充滿氬氣的雙頸茄形反應(yīng)瓶中， 加進(jìn)干燥的正己烷50mL，室溫下攪拌使其完全溶解后，將溫度降至-HTC，繼續(xù)攪拌，另將 800yL碘代苯和350yL溴素依次移入IOmL正己烷中，充分混勻后冷卻至-10°C，得到二溴碘苯 溶液，然后將二溴碘苯溶液滴加進(jìn)雙頸茄形反應(yīng)瓶中，滴加過(guò)程反應(yīng)體系溫度為_(kāi)l〇°C，3小 時(shí)加完后，繼續(xù)攪拌2小時(shí)，將得到的反應(yīng)液快速蒸干得到淡黃色油狀物一，向淡黃色油狀 物一中加入30mL二氯甲烷使其完全溶解，之后移入帶支管的反應(yīng)燒瓶中，在液氮-乙酸乙酯 冷浴中冷至-90°C，在攪拌下通入流量為3mL/min的臭氧40min，待反應(yīng)完成后，加入5mL二甲 硫醚，攪拌24h后，加入20mL冰醋酸和Sg鋅粉，在室溫下繼續(xù)攪拌5h，之后過(guò)濾，將濾液進(jìn)行 減壓蒸餾，得到體積為濾液體積1/5的殘液，之后將殘液用50mL飽和食鹽水萃取1次，分離出 的有機(jī)層再用50mL體積比為3:1的乙酸乙酯和石油醚的混合液萃取1次，分離出的有機(jī)層再 依次用30mL水、15mL飽和碳酸氫鈉水溶液和15mL飽和食鹽水分別萃取1次，再將分離出的有 機(jī)層進(jìn)行減壓蒸餾，得到淡黃色油狀物二，之后向淡黃色油狀物二中加入25mL甲醇和5mL質(zhì) 量分?jǐn)?shù)為13 %的碳酸鉀水溶液，室溫下攪拌2小時(shí)，分離出有機(jī)溶劑后，加入20mL蒸餾水，之 后用3 OmL乙酸乙酯萃取1次，分離出的有機(jī)層再依次用3 OmL水、2 OmL飽和碳酸氫鈉水溶液 和、20mL飽和食鹽水分別萃取1次后，將分離出的有機(jī)層用5g的無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，得到 粗產(chǎn)物一，將粗產(chǎn)物一進(jìn)行柱層析分離，得到具有式(I I)的化合物；
[0100]
[0101] 步驟三、將80mg具有式（II)的化合物和30mg 4,4-二甲基氨基硫脲用2511^無(wú)水乙 醇溶解后，滴加2mL冰醋酸，在80°C下攪拌反應(yīng)至反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，分離出有機(jī)溶劑，得 到粗產(chǎn)物二，將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離，即得具有式(III)的化合物。
[0102] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中檢驗(yàn)反應(yīng)完成的方法為:反應(yīng)過(guò)程中用TLC跟蹤反應(yīng)，待原料點(diǎn)消失后，即為反 應(yīng)完成，所述步驟一中TLC跟蹤反應(yīng)以體積比為1:5的乙酸乙酯和石油醚為展開(kāi)劑，所述步 驟二和所述步驟三中TLC跟蹤反應(yīng)均以體積比為5:1的石油醚和乙醚為展開(kāi)劑。
[0103] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中分離出有機(jī)溶劑的方法均為減壓蒸餾。
[0104] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟二中將粗產(chǎn)物一、所 述步驟三中將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離均以體積比為3:1的石油醚和乙酸乙酯為洗脫劑。
[0105] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟三中將粗產(chǎn)物二在 400目的硅膠柱中進(jìn)行柱層析分離。
[0106] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途，所述22-降-豆留縮氨硫脲化合物在制備 治療癌癥藥物制劑中的應(yīng)用。
[0107] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途中，所述藥物制劑為注射劑、片劑、丸 劑、膠囊劑、懸浮劑或乳劑。
[0108] 實(shí)施例6
[0109] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物，其結(jié)構(gòu)式為式(III):
[0110]
[0111] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法，包括以下步驟：
[0112] 步驟一、將1.5g豆甾醇加入15mL吡啶中，完全溶解后，加入7mL醋酸酐，室溫?cái)嚢璺?應(yīng)24h，待反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，加入20mL濃度為lmol/L的稀鹽酸后，將產(chǎn)物移入分液漏斗 中，用15mL乙酸乙酯連續(xù)萃取3次，合并有機(jī)層，接著向有機(jī)層中加入15mL水后，分離出有機(jī) 層，再將分離出的有機(jī)層依次用12mL飽和Na 2CO3水溶液、15mL水和15mL飽和食鹽水進(jìn)行萃 取，再將萃取后的有機(jī)層用7g無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，之后過(guò)濾、分離出有機(jī)溶劑，得到具有 式(I)的白色固體化合物；
[0113]
[0114]步驟二、將2g具有式(I)的白色固體化合物置于充滿氬氣的雙頸茄形反應(yīng)瓶中，加 進(jìn)干燥的正己烷40mL，室溫下攪拌使其完全溶解后，將溫度降至-7tC，繼續(xù)攪拌，另將700yL 碘代苯和315yL溴素依次移入7mL正己烷中，充分混勻后冷卻至-7°C，得到二溴碘苯溶液，然 后將二溴碘苯溶液滴加進(jìn)雙頸茄形反應(yīng)瓶中，滴加過(guò)程反應(yīng)體系溫度為-7°C，2.5小時(shí)加完 后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，將得到的反應(yīng)液快速蒸干得到淡黃色油狀物一，向淡黃色油狀物一 中加入25mL二氯甲烷使其完全溶解，之后移入帶支管的反應(yīng)燒瓶中，在液氮-乙酸乙酯冷浴 中冷至-75°C，在攪拌下通入流量為2.7mL/min的臭氧35min，待反應(yīng)完成后，加入3mL二甲硫 醚，攪拌18h后，加入15mL冰醋酸和6g鋅粉，在室溫下繼續(xù)攪拌3.5h，之后過(guò)濾，將濾液進(jìn)行 減壓蒸餾，得到體積為濾液體積1/5的殘液，之后將殘液用40mL飽和食鹽水萃取1次，分離出 的有機(jī)層再用40mL體積比為3:1的乙酸乙酯和石油醚的混合液萃取1次，分離出的有機(jī)層再 依次用25mL水、12mL飽和碳酸氫鈉水溶液和12mL飽和食鹽水分別萃取1次，再將分離出的有 機(jī)層進(jìn)行減壓蒸餾，得到淡黃色油狀物二，之后向淡黃色油狀物二中加入22mL甲醇和4mL質(zhì) 量分?jǐn)?shù)為13 %的碳酸鉀水溶液，室溫下攪拌1.2小時(shí)，分離出有機(jī)溶劑后，加入15mL蒸餾水， 之后用25mL乙酸乙酯萃取1次，分離出的有機(jī)層再依次用25mL水、15mL飽和碳酸氫鈉水溶液 和、15mL飽和食鹽水分別萃取1次后，將分離出的有機(jī)層用4g的無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，得到 粗產(chǎn)物一，將粗產(chǎn)物一進(jìn)行柱層析分離，得到具有式(I I)的化合物；
[0115:
[0116] 步驟三、將70mg具有式（II)的化合物和25mg 4,4-二甲基氨基硫脲用2211^無(wú)水乙 醇溶解后，滴加2mL冰醋酸，在70°C下攪拌反應(yīng)至反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，分離出有機(jī)溶劑，得 到粗產(chǎn)物二，將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離，即得具有式(III)的化合物。
[0117] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中檢驗(yàn)反應(yīng)完成的方法為:反應(yīng)過(guò)程中用TLC跟蹤反應(yīng)，待原料點(diǎn)消失后，即為反 應(yīng)完成，所述步驟一中TLC跟蹤反應(yīng)以體積比為3:20的乙酸乙酯和石油醚為展開(kāi)劑，所述步 驟二和所述步驟三中TLC跟蹤反應(yīng)均以體積比為15:2的石油醚和乙醚為展開(kāi)劑。
[0118] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟一、所述步驟二和所 述步驟三中分離出有機(jī)溶劑的方法均為減壓蒸餾。
[0119] 所述的22-降-豆甾縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟二中將粗產(chǎn)物一、所 述步驟三中將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離均以體積比為4:1的石油醚和乙酸乙酯為洗脫劑。
[0120] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法中，所述步驟三中將粗產(chǎn)物二在 400目的硅膠柱中進(jìn)行柱層析分離。
[0121] -種22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途，所述22-降-豆留縮氨硫脲化合物在制備 治療癌癥藥物制劑中的應(yīng)用。
[0122] 所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途中，所述藥物制劑為注射劑、片劑、丸 劑、膠囊劑、懸浮劑或乳劑。
[0123] 試驗(yàn) 1
[0124] 試驗(yàn)實(shí)施例3制備的22-降-豆留縮氨硫脲化合物對(duì)人宮頸癌細(xì)胞株(HeLa)、人乳 頭甲狀腺癌細(xì)胞(TPC-I)和人口腔表皮樣癌細(xì)胞株(KB)的細(xì)胞毒性，與正常細(xì)胞人腎上皮 細(xì)胞(HEK293T)進(jìn)行對(duì)比，采用MTT法，進(jìn)行體外細(xì)胞毒性測(cè)定。在96孔板中培養(yǎng)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng) 期細(xì)胞中加入不同濃度的實(shí)施例3制備的22-降-豆留縮氨硫脲化合物。培養(yǎng)72小時(shí)后，加入 MTT，測(cè)定其吸光度，分別計(jì)算抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖到50 %時(shí)化合物的濃度，以IC5q值表 示，結(jié)果如表1所示：
[0125] 衷1實(shí)施例3制備的化合物體外抗增葙活件（ICso，wmol/L)
[0127] 從表1可以看出，實(shí)施例3制備的化合物對(duì)所測(cè)試的三種腫瘤細(xì)胞均具有明顯的抑 制效果，并且對(duì)正常細(xì)胞人腎上皮細(xì)胞(HEK293T)無(wú)毒性。
[0128] 盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開(kāi)如上，但其并不僅僅限于說(shuō)明書和實(shí)施方式中所列 運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地 實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限 于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的實(shí)施例。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種22-降-豆留縮氨硫脲化合物，其特征在于，其結(jié)構(gòu)式為式(III):2. -種如權(quán)利要求1所述的22-降_顯留縮氨硫脲化合物的制備萬(wàn)法，其特征在于，包括 以下步驟： 步驟一、將l_2g豆留醇加入10-20mL吡啶中，完全溶解后，加入5-10mL醋酸酐，室溫?cái)嚢?反應(yīng)24h，待反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，加入15-25mL濃度為lmol/L的稀鹽酸后，將產(chǎn)物移入分液 漏斗中，用10_20mL乙酸乙酯連續(xù)萃取3次，合并有機(jī)層，接著向有機(jī)層中加入10-20mL水后， 分離出有機(jī)層，再將分離出的有機(jī)層依次用10_15mL飽和Na 2C03水溶液、10-20mL水和10-20mL飽和食鹽水進(jìn)行萃取，再將萃取后的有機(jī)層用5-10g無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，之后過(guò)濾、 分離出有機(jī)溶劑，得到具有式(I)的白色固體化合物；步驟二、將1.5-2.5g具有式（I)的白色固體化合物置于充滿氬氣的雙頸茄形反應(yīng)瓶中， 加進(jìn)干燥的正己烷30-50mL，室溫下攪拌使其完全溶解后，將溫度降至-5~-10°C，繼續(xù)攪 拌，另將600_800yL碘代苯和280-350yL溴素依次移入5-10mL正己烷中，充分混勻后冷卻至-5~-10°C，得到二溴碘苯溶液，然后將二溴碘苯溶液滴加進(jìn)雙頸茄形反應(yīng)瓶中，滴加過(guò)程反 應(yīng)體系溫度為-5~-10°C，2-3小時(shí)加完后，繼續(xù)攪拌1-2小時(shí)，將得到的反應(yīng)液快速蒸干得 到淡黃色油狀物一，向淡黃色油狀物一中加入20-30mL二氯甲烷使其完全溶解，之后移入帶 支管的反應(yīng)燒瓶中，在液氮-乙酸乙酯冷浴中冷至-60~-90°C，在攪拌下通入流量為2.5-3mL/min的臭氧30-40min，待反應(yīng)完成后，加入2-5mL二甲硫醚，攪拌12-24h后，加入10-20mL 冰醋酸和5-8g鋅粉，在室溫下繼續(xù)攪拌2-5h，之后過(guò)濾，將濾液進(jìn)行減壓蒸餾，得到體積為 濾液體積1/6-1/5的殘液，之后將殘液用30-50mL飽和食鹽水萃取1次，分離出的有機(jī)層再用 30-50mL體積比為3:1的乙酸乙酯和石油醚的混合液萃取1次，分離出的有機(jī)層再依次用20-30mL水、10-15mL飽和碳酸氫鈉水溶液和10-15mL飽和食鹽水分別萃取1次，再將分離出的有 機(jī)層進(jìn)行減壓蒸餾，得到淡黃色油狀物二，之后向淡黃色油狀物二中加入20-25mL甲醇和3-5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13%的碳酸鉀水溶液，室溫下攪拌0.5-2小時(shí)，分離出有機(jī)溶劑后，加入10-20mL蒸餾水，之后用20-30mL乙酸乙酯萃取1次，分離出的有機(jī)層再依次用20-30mL水、10-2 OmL飽和碳酸氫鈉水溶液和、10 -20mL飽和食鹽水分別萃取1次后，將分離出的有機(jī)層用3 -5g的無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，得到粗產(chǎn)物一，將粗產(chǎn)物一進(jìn)行柱層析分離，得到具有式(II)的 化合物；步驟三、將60-80mg具有式（II)的化合物和20-30mg 4，4-二甲基氨基硫脲用20-25mL無(wú) 水乙醇溶解后，滴加 l-2mL冰醋酸，在60-80°C下攪拌反應(yīng)至反應(yīng)完成后停止反應(yīng)，分離出有 機(jī)溶劑，得到粗產(chǎn)物二，將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離，即得具有式(III)的化合物。3. 如權(quán)利要求2所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟 一、所述步驟二和所述步驟三中檢驗(yàn)反應(yīng)完成的方法為：反應(yīng)過(guò)程中用TLC跟蹤反應(yīng)，待原 料點(diǎn)消失后，即為反應(yīng)完成，所述步驟一中TLC跟蹤反應(yīng)以體積比為1:10-1:5的乙酸乙酯和 石油醚為展開(kāi)劑，所述步驟二和所述步驟三中TLC跟蹤反應(yīng)均以體積比為10:1-5:1的石油 醚和乙醚為展開(kāi)劑。4. 如權(quán)利要求2所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟 一、所述步驟二和所述步驟三中分離出有機(jī)溶劑的方法均為減壓蒸餾。5. 如權(quán)利要求2所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟 二中將粗產(chǎn)物一、所述步驟三中將粗產(chǎn)物二進(jìn)行柱層析分離均以體積比為5:1-3:1的石油 醚和乙酸乙酯為洗脫劑。6. 如權(quán)利要求2所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟 三中將粗產(chǎn)物二在300-400目的硅膠柱中進(jìn)行柱層析分離。7. -種如權(quán)利要求1所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途，其特征在于，所述22-降-豆留縮氨硫脲化合物在制備治療癌癥藥物制劑中的應(yīng)用。8. 如權(quán)利要求7所述的22-降-豆留縮氨硫脲化合物的用途，其特征在于，所述藥物制劑 為注射劑、片劑、丸劑、膠囊劑、懸浮劑或乳劑。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK105859821SQ201610239773
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月18日
【發(fā)明人】甘春芳, 董新, 劉志平, 盛海兵, 黃燕敏, 崔建國(guó)
【申請(qǐng)人】廣西師范學(xué)院