從油茶葉中提取3,3′-二甲基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種從油茶葉中提取3,3'?二甲基鞣花酸?4'?O?β?D?葡萄糖醛酸苷的方法。方法為：經(jīng)浸提、D101大孔吸附樹脂分離、硅膠層析分離、DAC色譜分離、硅膠層析分離、再次DAC色譜分離，中間結(jié)合色譜分析，從油茶葉中逐步分離出鞣花酸的純品。本發(fā)明首次從山茶屬植物中成功提取出了鞣花酸，并且該提取方法具有收率高、產(chǎn)品純度高等優(yōu)點。
【專利說明】
從油茶葉中提取3,37 -二甲基鞣花酸-47 -Ο-β-D-葡萄糖醛酸 苷的方法
技術(shù)領域
[0001] 本發(fā)明涉及藥物提取技術(shù)領域，尤其是涉及一種從油茶葉中提取3,3'_二甲基鞣 花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 油茶葉為山茶科植物油茶的葉，其富含多種藥效成分，尤其是黃酮類化合物、苷類 化合物。黃酮類化合物具有多種生物活性，例如心血管系統(tǒng)活性、抗菌及抗病毒活性、抗腫 瘤活性、抗氧化自由基活性、鎮(zhèn)痛活性、保肝活性等。苷類化合物具有祛痰止咳、抗腫瘤、抗 真菌、抑菌及降膽固醇等生物活性。
[0003] 如何從油茶葉中提取出鞣花酸類等生物活性成分，對深度開發(fā)油茶作物極其重 要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供從油茶葉中提取鞣花酸的方法，所述的提取方法首次從油 茶葉中成功提取出了3,3'-二甲基鞣花酸-4'-Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷，并且該提取方法具有 收率高、產(chǎn)品純度高等優(yōu)點。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：
[0006] 從油茶葉中提取3，3 二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，包括以下 步驟：
[0007] A:以乙醇溶液為溶劑，對油茶葉進行浸提，得到粗提液；
[0008] B:以DlO 1大孔吸附樹脂為填料，依次用水、15-25wt %乙醇溶液、75-85wt %乙醇溶 液對所述粗提液進行恒定洗脫；
[0009] C:將所述75_85wt %乙醇溶液洗脫得到的洗脫液進行硅膠層析分離，用10:1~1:3 的二氯甲烷-甲醇進行梯度洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有3,3'_二甲基鞣花 酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的流份段，為第一順序組分；
[0010] D:采用DAC色譜柱，用55-65 %甲醇-7K為流動相對所述第一順序組分進行恒定洗 脫，分段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有3，3 二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷 的流份段，命名為第二順序組分；
[0011] E:對所述第二順序組分進行硅膠層析，用90-110:10-14:1的二氯甲烷-甲醇-水進 行恒定洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有3，3 二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄 糖醛酸苷的流份段，命名為第三順序組分；
[0012] F:采用DAC色譜柱，用65-75%甲醇-水對所述第三順序組分進行恒定洗脫，分段收 集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有3，3 二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的流份段。
[0013] 上述提取方法由粗至精的方式從油茶葉中逐步分離出3,3'_二甲基鞣花酸-4'-0-β-D-葡萄糖醛酸苷(簡稱為C0-5)的純品。
[0014] 以干油茶葉為基準，本發(fā)明對⑶-5的提取率在24.7mg/kg以上，并且產(chǎn)品的純度均 在90%以上。
[0015] 本發(fā)明所述的流動相（即洗脫所用的液體)的比例均指體積比，流動相中的"％"指 非水物質(zhì)所占的體積百分數(shù)，乙醇溶液均指乙醇的水溶液，例如，15-25%乙醇溶液指乙醇 體積百分比為15-25%水溶液。55-65%甲醇-水指甲醇體積百分比為55-65%的水溶液。
[0016] 本發(fā)明所述的恒定洗脫是指流動相的組成比例固定。
[0017] 本發(fā)明所述的梯度洗脫是指在洗脫過程中不斷改變流動相的濃度配比，但起始濃 度和終點濃度是固定的，例如步驟C中的梯度洗脫是指:二氯甲烷-甲醇按照起始濃度為9_ 11:1、洗脫終點濃度為1:2.5-3.5的方式進行梯度洗脫。
[0018] 本發(fā)明所述的DAC色譜柱指軸向動態(tài)壓縮工業(yè)色譜柱。
[0019] 本發(fā)明所述的提取方法適用于不同種屬的油茶葉，尤其適合普通油茶(Camellia oleifera Abel)，其提取率高。
[0020] 本發(fā)明所述的提取方法的各個步驟可以進一步改進，例如：
[0021] 步驟A中，浸提所用的溶劑、料液比、溫度對粗提液中的雜質(zhì)含量以及有效成分的 提取率都有影響。溶劑優(yōu)選用40-60 %的乙醇-水溶液，更優(yōu)選50 %的乙醇-水溶液。料液比 優(yōu)選為1:2.5-3.5(18固體:2.5-3.51^溶劑），更優(yōu)選1:2.5-3。浸提溫度優(yōu)選為70-80°(：，并 且以回流浸提為最佳。采用以上浸提條件能降低粗提液中的雜質(zhì)含量，提高鞣花酸的提取 率。
[0022]另外，為了降低后期分離的難度，在浸提之后可以濃縮干燥粗提液，除去乙醇。 [0023]步驟B中，每個梯度洗脫所用流動相的體積優(yōu)選為柱體積的3.5-4.5倍，更優(yōu)選為 4-4.5倍，保證待提取成分能夠被充分洗脫出來。所用流動相的濃度優(yōu)選水、15-20 %乙醇溶 液、75-80%乙醇溶液。
[0024]步驟C中，硅膠層析分離為分離手段，色譜分析為評價分離結(jié)果的手段，兩者互相 配合，篩選出含有C0-5目標提取物的洗脫液。篩選通常為粗篩選，一般是經(jīng)色譜分析，先將 色譜圖相似的洗脫液合并，然后與目標提取物的標準品色譜圖對比，從中篩選出含有目標 提取物的洗脫液，將其合并。當然，也可以不經(jīng)過合并，直接與目標提取物的標準品色譜圖 對比來選出有用的洗脫液，這種做法工作量較大，但是結(jié)果更精確。
[0025]所述步驟C中，所用的硅膠的粒徑優(yōu)選為200-300目，所述梯度洗脫優(yōu)選為：用9-10 :1至1:2.5-3梯度的二氯甲烷-甲醇進行梯度洗脫，采用以上進一步優(yōu)化的條件，可以提高 分離度和柱效。
[0026]在所述步驟C中，所述硅膠層析分離之前還包括:將所述75-85%乙醇溶液洗脫得 到的洗脫液濃縮干燥，可以避免乙醇對后續(xù)硅膠層析的干擾。
[0027] 另外，所述步驟C中的色譜分析可以是薄層色譜(TLC)、高效液相色譜等任意能用 于定性的方法，其中后者更準確。
[0028] 另外，在進行硅膠層析時，為了保證待分離物均勻分散在硅膠之中，優(yōu)選將二氯甲 烷-甲醇稀釋待分離物，同時拌入硅膠，之后再水浴蒸干。經(jīng)過以上處理后的物質(zhì)再裝入硅 膠柱中進行層析。
[0029]同樣，所述步驟D、E、F中，經(jīng)色譜分析可以為：高效液相色譜分析，和/或薄層分析 等。
[0030]所述步驟D中，流動相的濃度優(yōu)選55-60%甲醇-水時，具有更高的分離度。
[0031] 所述步驟E中，所用的硅膠的粒徑優(yōu)選為200-300目，所述二氯甲烷-甲醇-水的比 例優(yōu)選為90-100:10-12:1，以提高分離度和柱效。所采用的色譜分析可以為高效液相色譜 分析、薄層分析等。
[0032]所述步驟F中，流動相優(yōu)先用70%甲醇-水，提高柱效。
[0033] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能達到以下技術(shù)效果：
[0034] (1)首次從油茶葉中提取了出高純度的3，3 ' -二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛 酸苷；
[0035] (2)由粗到精的提取方式利于提取方法的規(guī)?；茝V；
[0036] (3)提取收率高。
【附圖說明】
[0037]為了更清楚地說明本發(fā)明【具體實施方式】或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對具體 實施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的 附圖是本發(fā)明的一些實施方式，對于本領域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前 提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0038]圖1為本發(fā)明實施例1提供的80%乙醇洗脫后收集的樣品的液相色譜圖；
[0039] 圖 2 為C0-5 的1H-NMR 譜圖；
[0040] 圖 3 為C0-5 的 13C-NMR 譜圖。
【具體實施方式】
[0041] 下面將結(jié)合附圖和【具體實施方式】對本發(fā)明的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，但 是本領域技術(shù)人員將會理解，下列所描述的實施例是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的 實施例，僅用于說明本發(fā)明，而不應視為限制本發(fā)明的范圍。基于本發(fā)明中的實施例，本領 域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保 護的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑 或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0042] 本發(fā)明中所述的流動相的比例均指體積比。
[0043] 實施例1
[0044]第一步：
[0045] 將自然陰干的油茶干燥葉粉碎過60目篩，取20kg分兩批用50 %乙醇按料液比1: 3 在70-80°C加熱回流，重復提取2次，每次提取2h，合并所得上清液，過濾獲得上清液，減壓濃 縮至無醇味，得到原體積約一半的粗提液樣品，備用。
[0046]第二步：
[0047]用工業(yè)酒精處理約IOL的DlOl型大孔吸附樹脂，用水洗到無醇味，將第一步得到的 提取液分兩次上樣，依次用水、20 %乙醇、80 %乙醇洗脫，每個梯度洗脫4倍柱體積，根據(jù)TLC 和HPLC分析結(jié)果，各部位合并濃縮。
[0048] 80%乙醇洗脫后收集的樣品濃縮干燥(約150g，其HPLC譜圖如圖1所示，洗脫程序： 0-10min50%甲醇水溶液，10-20min80%甲醇水溶液，20-21 minlOO%甲醇；檢測波長 254nm，進樣量10yL)，溶解于10:1的二氯甲烷-甲醇中，拌入30(^薄層層析硅膠（200~300 目），水浴揮干，分兩次裝柱，其中每次空白層裝填硅膠約800g。
[0049]流動相系統(tǒng)為二氯甲烷-甲醇（10:1至1:3梯度洗脫），每500mL收集為一次，經(jīng)過 TLC檢測合并為1-2+2'（表示:將第一次硅膠柱的第一個流份、第二個流份以及第二次硅膠 柱的第二個流份合并），3-7+3'-7'，8-10+8'-10'，11-13+11'，14-16+12'-13'，17-19+14'， 20-22+15'-18'，19'-21'，23-26+22'-27'，27-40,28'-34'，35'-44'，41-47,48-64,65,66-67,68-70,71，72-78,45'-51'，52'-63'，64'-67'，68'-71'，72'-84'共計24個組分(兩次硅 膠柱的流份用序號后面的符號"'"加以區(qū)分，部分流份進行交叉合并，用加號銜接（同一次 硅膠柱的流份用-銜接），例如，第一次裝柱的提取液經(jīng)洗脫后，收集的液體編號分別為1、 2……78,第二次裝柱的提取液經(jīng)洗脫后，收集的液體編號分別為1'、2'……84'）。
[0050] 第三步：
[00511 27-40利用DAC制備色譜分離，60 %甲醇-水恒定洗脫，得到化合物⑶-1 (56.4mg)， C0-2 (39.2mg)，C0-3 (9. Img)，以及一個含多個化合物的復雜組分fr. A(865mg)。
[0052] 第四步：
[0053]將fr.A流份溶解于一定比例的二氯甲烷-甲醇中，拌入2.5g薄層層析硅膠（200-300目），水浴揮干，空白層裝填硅膠約40g。流動相系統(tǒng)為二氯甲烷-甲醇-水（100:12:1恒定 洗脫），每40mL收集為一個流份，經(jīng)過TLC檢測合并為1，2,3,4-12(編號方法同第二步）。 [0054] 第五步：
[0055]將第四步的4-12利用DAC制備色譜分離，70%甲醇-水恒定洗脫，分段收集洗脫液， 經(jīng)色譜分析，僅收集含有C0-5的流份，得到化合物C0-5 (4.7mg)。
[0056]第六步:表征提取物
[0057]將C0-5進行質(zhì)譜檢測，如圖2所示。
[0058] 將⑶-5進行核磁共振圖譜檢測，⑶-5的1H-匪R、13C-匪R分別如圖2和3所示。經(jīng)檢 測，〇)-5的純度為93.2%。
[0059]結(jié)合上述表征結(jié)果可以確定C0-5的分子式如下式(一）。
[0060]
[0061 ] 實施例2 [0062]第一步：
[0063] 將自然陰干的油茶干燥葉粉碎過60目篩，取20kg分兩批用40%乙醇按料液比1: 2.5在70-80 °C加熱回流，重復提取2次，每次提取2h，合并所得上清液，過濾獲得上清液，減 壓濃縮至無醇味，得到原體積約一半的粗提液樣品，備用。
[0064]第二步：
[0065]用工業(yè)酒精處理約IOL的DlOl型大孔吸附樹脂，用水洗到無醇味，將第一步得到的 提取液分兩次上樣，依次用水、15%乙醇、75%乙醇洗脫，每個梯度洗脫4.5倍柱體積，根據(jù) TLC和HPLC分析結(jié)果，各部位合并濃縮。
[0066] 80%乙醇洗脫后收集的樣品濃縮干燥(約150g)，溶解于10:1的二氯甲烷-甲醇中， 拌入300g薄層層析硅膠(200~300目），水浴揮干，分兩次裝柱，其中每次空白層裝填硅膠約 800g〇
[0067] 流動相系統(tǒng)為二氯甲烷-甲醇(9:1至1:2.5梯度洗脫），每500mL收集為一次，經(jīng)過 TLC檢測合并含有3，3 ' -二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷(C0-5)的流份段，命名為第 一順序組分。
[0068] 第三步：
[0069] 第一順序組分利用DAC制備色譜分離，55 %甲醇-水恒定洗脫，經(jīng)色譜分析，合并含 C0-5的復雜組分，命名為第二順序組分。
[0070] 第四步：
[0071] 將第二順序組分溶解于一定比例的二氯甲烷-甲醇中，拌入2.5g薄層層析硅膠 (200-300目），水浴揮干，空白層裝填硅膠約40g。流動相系統(tǒng)為二氯甲烷-甲醇-水(90:10:1 恒定洗脫），每40mL收集為一個流份，經(jīng)過TLC檢測，將含有C0-5的流份段合并，命名為第三 順序組分。
[0072] 第五步：
[0073]將第四步的第三順序組分利用DAC制備色譜分離，65%甲醇-水恒定洗脫，分段收 集洗脫液，經(jīng)色譜分析，僅收集含有C0-5的流份，得到化合物C0-5(5. Img)。
[0074]第六步:表征提取物
[0075]同樣，采用質(zhì)譜和1H-NML13C-NMR進行表征，結(jié)果與實施例1相同，⑶-5為3，3 二 甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷。
[0076] 實施例3 [0077]第一步：
[0078] 將自然陰干的油茶干燥葉粉碎過60目篩，取20kg分兩批用60%乙醇按料液比1: 3.5在70-80 °C加熱回流，重復提取2次，每次提取2h，合并所得上清液，過濾獲得上清液，減 壓濃縮至無醇味，得到原體積約一半的粗提液樣品，備用。
[0079] 第二步：
[0080] 用工業(yè)酒精處理約IOL的DlOl型大孔吸附樹脂，用水洗到無醇味，將第一步得到的 提取液分兩次上樣，依次用水、25 %乙醇、85 %乙醇洗脫，每個梯度洗脫3.5倍柱體積，根據(jù) TLC和HPLC分析結(jié)果，各部位合并濃縮。
[0081] 80%乙醇洗脫后收集的樣品濃縮干燥(約150g)，溶解于10:1的二氯甲烷-甲醇中， 拌入300g薄層層析硅膠(200~300目），水浴揮干，分兩次裝柱，其中每次空白層裝填硅膠約 800g〇
[0082] 流動相系統(tǒng)為二氯甲烷-甲醇（11:1至1:3.5梯度洗脫），每500mL收集為一次，經(jīng)過 TLC檢測合并含有3，3 ' -二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷(C0-5)的流份段，命名為第 一順序組分。
[0083] 第三步：
[0084] 第一順序組分利用DAC制備色譜分離，65 %甲醇-水恒定洗脫，經(jīng)色譜分析，合并含 C0-5的復雜組分，命名為第二順序組分。
[0085] 第四步：
[0086] 將第二順序組分溶解于一定比例的二氯甲烷-甲醇中，拌入2.5g薄層層析硅膠 (200-300目），水浴揮干，空白層裝填硅膠約40g。流動相系統(tǒng)為二氯甲烷-甲醇-水（110:14: 1恒定洗脫），每40mL收集為一個流份，經(jīng)過TLC檢測，將含有C0-5的流份段合并，命名為第三 順序組分。
[0087] 第五步：
[0088]將第四步的第三順序組分利用DAC制備色譜分離，75%甲醇-水恒定洗脫，分段收 集洗脫液，經(jīng)色譜分析，僅收集含有C0-5的流份，得到化合物C0-5(4.3mg)。
[0089]第六步:表征提取物
[0090] 同樣，采用質(zhì)譜和1H-匪R、13C-NMR進行表征，結(jié)果與實施例1相同，⑶-5為3，3 二 甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷。
[0091]最后應說明的是：以上各實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制； 盡管參照前述各實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，本領域的普通技術(shù)人員應當理解:其 依然可以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分或者全部技術(shù)特征 進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實施例技 術(shù)方案的范圍。
【主權(quán)項】
1. 從油茶葉中提取3，3 二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特征在于， 包括以下步驟： A:以乙醇溶液為溶劑，對油茶葉進行浸提，得到粗提液； B:以D101大孔吸附樹脂為填料，依次用水、15-25wt%乙醇溶液、75-85wt%乙醇溶液對 所述粗提液進行恒定洗脫； C:將所述75-85wt%乙醇溶液洗脫得到的洗脫液進行硅膠層析分離，用9-11:1至1: 2.5-3.5梯度的二氯甲烷-甲醇進行梯度洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有3， 3 二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的流份段，為第一順序組分； D:采用DAC色譜柱，用55-65 %甲醇-水為流動相對所述第一順序組分進行恒定洗脫，分 段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有3，3 二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的流份 段，命名為第二順序組分； E:對所述第二順序組分進行硅膠層析，用90-110:10-14:1的二氯甲烷-甲醇-水進行恒 定洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有3，3 二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛 酸苷的流份段，命名為第三順序組分； F:采用DAC色譜柱，用65-75 %甲醇-水對所述第三順序組分進行恒定洗脫，分段收集洗 脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有3，3二甲基鞣花酸-4 '-Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的流份段。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取3,3'_二甲基鞣花酸-4'-〇-i3-D-葡萄糖醛酸 苷的方法，其特征在于，所述步驟A中，浸提的方法為:料液比為1:3,在70-80°C下回流提取， 乙醇溶液優(yōu)選為40-60 %的乙醇-水溶液。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取3,3'_二甲基鞣花酸-4'-〇-i3-D-葡萄糖醛酸 苷的方法，其特征在于，所述步驟B中，每個梯度洗脫所用流動相的體積為柱體積的3.5-4.5 倍。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取3,3'_二甲基鞣花酸-4'-〇-i3-D-葡萄糖醛酸 苷的方法，其特征在于，所述步驟C中，所用的硅膠的粒徑為200-300目；所述梯度洗脫優(yōu)選 為:用9-10:1至1:2.5-3梯度的二氯甲烷-甲醇進行梯度洗脫。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取3,3'_二甲基鞣花酸-4'-〇-i3-D-葡萄糖醛酸 苷的方法，其特征在于，所述步驟D中的經(jīng)色譜分析為:經(jīng)高效液相色譜分析。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的從油茶葉中提取3,3'_二甲基鞣花酸-4'-〇-i3-D-葡萄糖醛 酸苷的方法，其特征在于，所述步驟D中，所述55-65%甲醇-水優(yōu)選為55-60%甲醇-水。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取3,3'_二甲基鞣花酸-4'-〇-i3-D-葡萄糖醛酸 苷的方法，其特征在于，所述步驟E中，所用的硅膠的粒徑為200-300目，所述二氯甲烷-甲 醇-水的比例優(yōu)選為90-100:10-12:1。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取3,3'_二甲基鞣花酸-4'-〇-i3-D-葡萄糖醛酸 苷的方法，其特征在于，所述步驟F中，合并含有3，3 二甲基鞣花酸-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖醛酸 苷的流份段優(yōu)選為:經(jīng)液相色譜分析，合并僅含有槲皮素-3-0-?Η)_葡萄糖苷、槲皮素-3-0-β-D-半乳糖苷的流份段。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取3,3'_二甲基鞣花酸-4'-〇-i3-D-葡萄糖醛酸 苷的方法，其特征在于，所述步驟F中，所述甲醇-水為:65~70%甲醇-水。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取3,3'_二甲基鞣花酸-4'-〇-i3-D-葡萄糖醛酸 苷的方法，其特征在于，在所述步驟C中，所述硅膠層析分離之前還包括:將所述75-85wt % 乙醇溶液洗脫得到的洗脫液濃縮干燥。
【文檔編號】C07H1/08GK105859806SQ201610278240
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月29日
【發(fā)明人】曹清明, 王蔚婕, 劉晨曦, 鐘海雁
【申請人】中南林業(yè)科技大學