本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及一種4′,7–二乙基射干苷元的純化方法及制備方法。

背景技術(shù)：

柯薩奇病毒(Coxsachie virus)是一種腸道病毒，分為A型和B型兩種，病毒進入人體于咽部和腸粘膜細胞內(nèi)繁殖后，可侵入血液形成病毒血癥，再散布至中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸道、心臟、肌肉、皮膚等處，可引起無菌性腦膜炎、出疹性發(fā)熱病、急性心肌炎和心包炎、流行性肌痛、上感、疤疹性咽喉炎及嬰兒腹瀉等。

目前，臨床尚無能有效治療柯薩奇病毒的藥物，常用病毒唑等抗病毒藥物以及干擾素、營養(yǎng)性制劑、中藥黃芪參麥注射液等對癥保守治療。

專利CN101723926A公開了4′,7–二乙基射干苷元的制備方法及抗柯薩奇病毒作用，其效果優(yōu)于利巴韋林。但是，其制備方法中，樣品未有溶解、過濾、析晶這一過程，只是用95％乙醇反復(fù)洗脫除去雜質(zhì)，且采用測定方法為面積歸一法，其含量不是真實的含量，其產(chǎn)品真實收率和純度并不高，HPLC外標法含量測定為97.23％，熾灼殘渣1.2％。

因此，為了改善產(chǎn)品收率，并且得到更高純度的產(chǎn)品作為對照品進而控制其質(zhì)量，目前亟需一種4′,7–二乙基射干苷元的純化方法及制備方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種4′,7–二乙基射干苷元的純化方法，它包括以下步驟：

(1)將4′,7–二乙基射干苷元加熱溶解在溶劑中，過濾，取濾液；所述溶劑選自二甲基乙酰胺或氯仿；

(2)向濾液中加入抗溶劑無水乙醇，冷卻析晶，過濾；

(3)取過濾后的固體，采用步驟(1)中相同的溶劑重結(jié)晶；

(4)分離出晶體，干燥即得。

進一步地，所述溶劑與4′,7–二乙基射干苷元的體積重量比為5～10mL：1g。

進一步地，所述溶劑選自二甲基乙酰胺，二甲基乙酰胺與4′,7–二乙基射干苷元的體積重量比為10mL：1g，無水乙醇與4′,7–二乙基射干苷元的體積重量比為5mL：1g。

進一步地，所述溶劑選自氯仿，氯仿與4′,7–二乙基射干苷元的體積重量比為5mL：1g，無水乙醇與4′,7–二乙基射干苷元的體積重量比為10mL：1g。

本發(fā)明的純化方法，通過工藝的篩選，尤其是加入抗溶劑無水乙醇這種析晶方式的特定選擇，可以簡便有效地制備得到高純度的4′,7–二乙基射干苷元，可以作為對照品，為有效控制藥品的質(zhì)量提供了可靠的保障。

本發(fā)明還提供了一種制備4′,7–二乙基射干苷元的方法，它包括以下步驟：

(A)以射干苷元為原料，加入NaOH和乙基化試劑反應(yīng)后得反應(yīng)液；

(B)加酸，調(diào)整反應(yīng)液的pH值至pH＝1～2，加水，過濾，純化得4′,7–二乙基射干苷元。

進一步地，所述純化是按照前述的純化方法進行的。

進一步地，所述射干苷元與氫氧化鈉的重量比為1:1。

進一步地，所述乙基化試劑選自碳酸二乙酯、碘乙烷、溴乙烷或硫酸二乙酯；優(yōu)選硫酸二乙酯。

進一步地，步驟(A)中，所述反應(yīng)的溫度為100℃。

進一步地，所述酸為鹽酸。

射干苷元為5，7，4′三羥基異黃酮化合物，有三個游離的酚羥基存在，烷基化(乙基化)反應(yīng)理論反應(yīng)產(chǎn)物有7個，另外射干苷元C環(huán)的氧鍵在強堿存在下易發(fā)生裂解成為查爾酮，從而使反應(yīng)產(chǎn)物多達10余種。發(fā)明人在制備方法的摸索中，對反應(yīng)過程用薄層層析跟蹤，通過多次實驗，證明射干苷元與氫氧化鈉配料比為1:1時所得反應(yīng)產(chǎn)物副產(chǎn)物少，目標產(chǎn)物4′,7–二乙基射干苷元得率高(薄層條件：固定相為硅膠GF₂₅₄，展開劑為氯仿：甲醇(10：0.5))。薄層層析圖譜見圖1，HPLC圖譜見圖2～5。

從圖1中可以看出，射干苷元：氫氧化鈉(1:1)時的反應(yīng)產(chǎn)物的雜質(zhì)最少。

從圖2中可以看出，射干苷元：氫氧化鈉(1:0.2)時產(chǎn)物有4個副產(chǎn)物，目標產(chǎn)物占總產(chǎn)物83.7％(面積歸一化法)。

從圖3中可以看出，射干苷元：氫氧化鈉(1:0.5)時產(chǎn)物有3個副產(chǎn)物，目標產(chǎn)物占總產(chǎn)物87.9％(面積歸一化法)。

從圖4中可以看出，射干苷元：氫氧化鈉(1:1)時產(chǎn)物有1個副產(chǎn)物，目標產(chǎn)物占總產(chǎn)物90.2％(面積歸一化法)。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

附圖說明

圖1為不同配料比下反應(yīng)產(chǎn)物的薄層圖譜。從左至右依次為點1：射干苷元：氫氧化鈉(1:0.2)時的反應(yīng)產(chǎn)物(4個雜質(zhì)斑點)；點2：射干苷元：氫氧化鈉(1:0.5)時的反應(yīng)產(chǎn)物(3個雜質(zhì)斑點)點3：射干苷元：氫氧化鈉(1:1)時的反應(yīng)產(chǎn)物(1個雜質(zhì)斑點)；點4：4′,7–二乙基射干苷元對照品。

圖2為射干苷元：氫氧化鈉(1:0.2)時反應(yīng)產(chǎn)物的HPLC圖譜。

圖3為射干苷元：氫氧化鈉(1:0.5)時反應(yīng)產(chǎn)物的HPLC圖譜。

圖4為射干苷元：氫氧化鈉(1:1)時反應(yīng)產(chǎn)物的HPLC圖譜。

圖5為4′,7–二乙基射干苷元對照品的HPLC圖譜。

具體實施方式

試劑來源為成都市科龍化工試劑廠，均為分析純。

射干苷元為自制，含量>98％(面積歸一化法)，具體見專利ZL 200910308146.1。

實施例1 4′,7–二乙基射干苷元的制備

稱取射干苷元100g，加NaOH 100g，95％乙醇1000mL，碳酸二乙酯200mL，水浴回流反應(yīng)2小時，取出，用適量36％鹽酸中和至pH＝1～2，加水?dāng)嚢璺爬洌^濾，60℃減壓干燥，得淡黃色粉末，即4′,7–二乙基射干苷元，收率50％，純度60％(HPLC面積歸一化法)。

實施例2 4′,7–二乙基射干苷元的制備

稱取射干苷元100g，加NaOH 100g，95％乙醇1000mL，碘乙烷200mL，水浴回流反應(yīng)30分鐘，取出，用適量36％鹽酸中和至pH＝1～2，加水?dāng)嚢璺爬?，過濾，60℃減壓干燥，得淡黃色粉末，即4′,7–二乙基射干苷元，收率75％，純度78％(HPLC面積歸一化法)。

實施例3 4′,7–二乙基射干苷元的制備

稱取射干苷元100g，加NaOH 100g，95％乙醇1000mL，溴乙烷200mL，水浴回流反應(yīng)1小時，取出，用適量36％鹽酸中和至pH＝1～2，加水?dāng)嚢璺爬洌^濾，60℃減壓干燥，得淡黃色粉末，即4′,7–二乙基射干苷元，收率70％，純度72％(HPLC面積歸一化法)。

實施例4 4′,7–二乙基射干苷元的制備

稱取射干苷元100g，加NaOH 100g，95％乙醇1000mL，硫酸二乙酯200mL，水浴回流反應(yīng)30分鐘，取出，用適量36％鹽酸中和至pH＝1～2，加水?dāng)嚢璺爬洌^濾，60℃減壓干燥，得淡黃色粉末，即4′,7–二乙基射干苷元，收率85％，純度90％(HPLC面積歸一化法)。

實施例5 4′,7–二乙基射干苷元的純化

取上述實施例4制備的4′,7–二乙基射干苷元10g，加二甲基乙酰胺100mL 100℃加熱溶解，趁熱過濾，濾液加入無水乙醇50mL，搖勻，放置析晶，結(jié)晶過濾，粗晶加入二甲基乙酰胺80mL 100℃加熱溶解，趁熱過濾，濾液加入無水乙醇40mL，搖勻，放置析晶，得到淡黃色片狀結(jié)晶，過濾，60℃減壓干燥24小時，得4′,7–二乙基射干苷元5.5g，含量99.12％(HPLC外標法)。

實施例6 4′,7–二乙基射干苷元的純化

取上述實施例4制備的4′,7–二乙基射干苷元10g，加氯仿50mL 70℃加熱溶解，趁熱過濾，濾液加入無水乙醇100mL，搖勻，放置析晶，結(jié)晶過濾，粗晶加入氯仿40mL70℃加熱溶解，趁熱過濾，濾液加入無水乙醇80mL，搖勻，放置析晶，得到淡黃色針狀結(jié)晶，過濾，60℃減壓干燥24小時，得4′,7–二乙基射干苷元7.0g，含量99.56％(HPLC外標法)。.

對比實施例1 4′,7–二乙基射干苷元的純化

取上述實施例4制備的4′,7–二乙基射干苷元10g，加甲醇500mL 80℃加熱溶解，趁熱過濾，放置析晶，結(jié)晶過濾，粗晶加入甲醇400mL 80℃加熱溶解，趁熱過濾，放置析晶，結(jié)晶過濾，得到淡黃色粒狀結(jié)晶，過濾，60℃減壓干燥24小時，得4′,7–二乙基射干苷元5.0g，含量98.52％(HPLC外標法)。

對比實施例2 4′,7–二乙基射干苷元的純化

取上述實施例4制備的4′,7–二乙基射干苷元10g，加乙醇400mL 80℃加熱溶解，趁熱過濾，放置析晶，結(jié)晶過濾，粗晶加入乙醇300mL 80℃加熱溶解，趁熱過濾，放置析晶，結(jié)晶過濾，得到淡黃色針狀結(jié)晶，過濾，60℃減壓干燥24小時，得4′,7–二乙基射干苷元6.0g，含量98.75％(HPLC外標法)。