本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域,具體涉及一種4′,7–二乙基射干苷元的純化方法及制備方法。
背景技術(shù):
柯薩奇病毒(Coxsachie virus)是一種腸道病毒,分為A型和B型兩種,病毒進入人體于咽部和腸粘膜細胞內(nèi)繁殖后,可侵入血液形成病毒血癥,再散布至中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸道、心臟、肌肉、皮膚等處,可引起無菌性腦膜炎、出疹性發(fā)熱病、急性心肌炎和心包炎、流行性肌痛、上感、疤疹性咽喉炎及嬰兒腹瀉等。
目前,臨床尚無能有效治療柯薩奇病毒的藥物,常用病毒唑等抗病毒藥物以及干擾素、營養(yǎng)性制劑、中藥黃芪參麥注射液等對癥保守治療。
專利CN101723926A公開了4′,7–二乙基射干苷元的制備方法及抗柯薩奇病毒作用,其效果優(yōu)于利巴韋林。但是,其制備方法中,樣品未有溶解、過濾、析晶這一過程,只是用95%乙醇反復(fù)洗脫除去雜質(zhì),且采用測定方法為面積歸一法,其含量不是真實的含量,其產(chǎn)品真實收率和純度并不高,HPLC外標法含量測定為97.23%,熾灼殘渣1.2%。
因此,為了改善產(chǎn)品收率,并且得到更高純度的產(chǎn)品作為對照品進而控制其質(zhì)量,目前亟需一種4′,7–二乙基射干苷元的純化方法及制備方法。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
為解決上述問題,本發(fā)明提供了一種4′,7–二乙基射干苷元的純化方法,它包括以下步驟:
(1)將4′,7–二乙基射干苷元加熱溶解在溶劑中,過濾,取濾液;所述溶劑選自二甲基乙酰胺或氯仿;
(2)向濾液中加入抗溶劑無水乙醇,冷卻析晶,過濾;
(3)取過濾后的固體,采用步驟(1)中相同的溶劑重結(jié)晶;
(4)分離出晶體,干燥即得。
進一步地,所述溶劑與4′,7–二乙基射干苷元的體積重量比為5~10mL:1g。
進一步地,所述溶劑選自二甲基乙酰胺,二甲基乙酰胺與4′,7–二乙基射干苷元的體積重量比為10mL:1g,無水乙醇與4′,7–二乙基射干苷元的體積重量比為5mL:1g。
進一步地,所述溶劑選自氯仿,氯仿與4′,7–二乙基射干苷元的體積重量比為5mL:1g,無水乙醇與4′,7–二乙基射干苷元的體積重量比為10mL:1g。
本發(fā)明的純化方法,通過工藝的篩選,尤其是加入抗溶劑無水乙醇這種析晶方式的特定選擇,可以簡便有效地制備得到高純度的4′,7–二乙基射干苷元,可以作為對照品,為有效控制藥品的質(zhì)量提供了可靠的保障。
本發(fā)明還提供了一種制備4′,7–二乙基射干苷元的方法,它包括以下步驟:
(A)以射干苷元為原料,加入NaOH和乙基化試劑反應(yīng)后得反應(yīng)液;
(B)加酸,調(diào)整反應(yīng)液的pH值至pH=1~2,加水,過濾,純化得4′,7–二乙基射干苷元。
進一步地,所述純化是按照前述的純化方法進行的。
進一步地,所述射干苷元與氫氧化鈉的重量比為1:1。
進一步地,所述乙基化試劑選自碳酸二乙酯、碘乙烷、溴乙烷或硫酸二乙酯;優(yōu)選硫酸二乙酯。
進一步地,步驟(A)中,所述反應(yīng)的溫度為100℃。
進一步地,所述酸為鹽酸。
射干苷元為5,7,4′三羥基異黃酮化合物,有三個游離的酚羥基存在,烷基化(乙基化)反應(yīng)理論反應(yīng)產(chǎn)物有7個,另外射干苷元C環(huán)的氧鍵在強堿存在下易發(fā)生裂解成為查爾酮,從而使反應(yīng)產(chǎn)物多達10余種。發(fā)明人在制備方法的摸索中,對反應(yīng)過程用薄層層析跟蹤,通過多次實驗,證明射干苷元與氫氧化鈉配料比為1:1時所得反應(yīng)產(chǎn)物副產(chǎn)物少,目標產(chǎn)物4′,7–二乙基射干苷元得率高(薄層條件:固定相為硅膠GF254,展開劑為氯仿:甲醇(10:0.5))。薄層層析圖譜見圖1,HPLC圖譜見圖2~5。
從圖1中可以看出,射干苷元:氫氧化鈉(1:1)時的反應(yīng)產(chǎn)物的雜質(zhì)最少。
從圖2中可以看出,射干苷元:氫氧化鈉(1:0.2)時產(chǎn)物有4個副產(chǎn)物,目標產(chǎn)物占總產(chǎn)物83.7%(面積歸一化法)。
從圖3中可以看出,射干苷元:氫氧化鈉(1:0.5)時產(chǎn)物有3個副產(chǎn)物,目標產(chǎn)物占總產(chǎn)物87.9%(面積歸一化法)。
從圖4中可以看出,射干苷元:氫氧化鈉(1:1)時產(chǎn)物有1個副產(chǎn)物,目標產(chǎn)物占總產(chǎn)物90.2%(面積歸一化法)。
顯然,根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容,按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段,在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下,還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式,對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
附圖說明
圖1為不同配料比下反應(yīng)產(chǎn)物的薄層圖譜。從左至右依次為點1:射干苷元:氫氧化鈉(1:0.2)時的反應(yīng)產(chǎn)物(4個雜質(zhì)斑點);點2:射干苷元:氫氧化鈉(1:0.5)時的反應(yīng)產(chǎn)物(3個雜質(zhì)斑點)點3:射干苷元:氫氧化鈉(1:1)時的反應(yīng)產(chǎn)物(1個雜質(zhì)斑點);點4:4′,7–二乙基射干苷元對照品。
圖2為射干苷元:氫氧化鈉(1:0.2)時反應(yīng)產(chǎn)物的HPLC圖譜。
圖3為射干苷元:氫氧化鈉(1:0.5)時反應(yīng)產(chǎn)物的HPLC圖譜。
圖4為射干苷元:氫氧化鈉(1:1)時反應(yīng)產(chǎn)物的HPLC圖譜。
圖5為4′,7–二乙基射干苷元對照品的HPLC圖譜。
具體實施方式
試劑來源為成都市科龍化工試劑廠,均為分析純。
射干苷元為自制,含量>98%(面積歸一化法),具體見專利ZL 200910308146.1。
實施例1 4′,7–二乙基射干苷元的制備
稱取射干苷元100g,加NaOH 100g,95%乙醇1000mL,碳酸二乙酯200mL,水浴回流反應(yīng)2小時,取出,用適量36%鹽酸中和至pH=1~2,加水?dāng)嚢璺爬洌^濾,60℃減壓干燥,得淡黃色粉末,即4′,7–二乙基射干苷元,收率50%,純度60%(HPLC面積歸一化法)。
實施例2 4′,7–二乙基射干苷元的制備
稱取射干苷元100g,加NaOH 100g,95%乙醇1000mL,碘乙烷200mL,水浴回流反應(yīng)30分鐘,取出,用適量36%鹽酸中和至pH=1~2,加水?dāng)嚢璺爬?,過濾,60℃減壓干燥,得淡黃色粉末,即4′,7–二乙基射干苷元,收率75%,純度78%(HPLC面積歸一化法)。
實施例3 4′,7–二乙基射干苷元的制備
稱取射干苷元100g,加NaOH 100g,95%乙醇1000mL,溴乙烷200mL,水浴回流反應(yīng)1小時,取出,用適量36%鹽酸中和至pH=1~2,加水?dāng)嚢璺爬洌^濾,60℃減壓干燥,得淡黃色粉末,即4′,7–二乙基射干苷元,收率70%,純度72%(HPLC面積歸一化法)。
實施例4 4′,7–二乙基射干苷元的制備
稱取射干苷元100g,加NaOH 100g,95%乙醇1000mL,硫酸二乙酯200mL,水浴回流反應(yīng)30分鐘,取出,用適量36%鹽酸中和至pH=1~2,加水?dāng)嚢璺爬洌^濾,60℃減壓干燥,得淡黃色粉末,即4′,7–二乙基射干苷元,收率85%,純度90%(HPLC面積歸一化法)。
實施例5 4′,7–二乙基射干苷元的純化
取上述實施例4制備的4′,7–二乙基射干苷元10g,加二甲基乙酰胺100mL 100℃加熱溶解,趁熱過濾,濾液加入無水乙醇50mL,搖勻,放置析晶,結(jié)晶過濾,粗晶加入二甲基乙酰胺80mL 100℃加熱溶解,趁熱過濾,濾液加入無水乙醇40mL,搖勻,放置析晶,得到淡黃色片狀結(jié)晶,過濾,60℃減壓干燥24小時,得4′,7–二乙基射干苷元5.5g,含量99.12%(HPLC外標法)。
實施例6 4′,7–二乙基射干苷元的純化
取上述實施例4制備的4′,7–二乙基射干苷元10g,加氯仿50mL 70℃加熱溶解,趁熱過濾,濾液加入無水乙醇100mL,搖勻,放置析晶,結(jié)晶過濾,粗晶加入氯仿40mL70℃加熱溶解,趁熱過濾,濾液加入無水乙醇80mL,搖勻,放置析晶,得到淡黃色針狀結(jié)晶,過濾,60℃減壓干燥24小時,得4′,7–二乙基射干苷元7.0g,含量99.56%(HPLC外標法)。.
對比實施例1 4′,7–二乙基射干苷元的純化
取上述實施例4制備的4′,7–二乙基射干苷元10g,加甲醇500mL 80℃加熱溶解,趁熱過濾,放置析晶,結(jié)晶過濾,粗晶加入甲醇400mL 80℃加熱溶解,趁熱過濾,放置析晶,結(jié)晶過濾,得到淡黃色粒狀結(jié)晶,過濾,60℃減壓干燥24小時,得4′,7–二乙基射干苷元5.0g,含量98.52%(HPLC外標法)。
對比實施例2 4′,7–二乙基射干苷元的純化
取上述實施例4制備的4′,7–二乙基射干苷元10g,加乙醇400mL 80℃加熱溶解,趁熱過濾,放置析晶,結(jié)晶過濾,粗晶加入乙醇300mL 80℃加熱溶解,趁熱過濾,放置析晶,結(jié)晶過濾,得到淡黃色針狀結(jié)晶,過濾,60℃減壓干燥24小時,得4′,7–二乙基射干苷元6.0g,含量98.75%(HPLC外標法)。