一種診治子宮肌瘤的分子標志物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及生物技術領域，具體地設及SYBU基因在子宮肌瘤的診斷、治療中的用 途。
【背景技術】
[0002] 子宮肌瘤（別名：子宮良性腫瘤英文:myoma Of uterus),是女性生殖器最常見的 一種良性腫瘤。多無癥狀，少數(shù)表現(xiàn)為陰道出血，腹部觸及腫物W及壓迫癥狀等。W多發(fā)性 子宮肌瘤常見，本病確切病因不明，現(xiàn)代西醫(yī)學采取性激素或手術治療，尚無其他理想療 法，好發(fā)于卵巢功能較旺盛的30~45歲的婦女，待到患者50歲W后，由于卵巢功能明顯衰 退，肌瘤大多自行縮小。
[0003] 子宮肌瘤診斷可W通過一些子宮肌瘤的癥狀而進行初步的判斷，然后在做進一步 的檢查，但是不能僅靠婦科檢查進行確診。首先，患有子宮肌瘤會感覺到腹痛，其次女性的 月經也會發(fā)生改變，甚至會引發(fā)不孕或多次流產。目前國內B超檢查較為普遍，也是常見的 子宮肌瘤的診斷方法，可W較明確顯示肌瘤大小及部位。腹腔鏡、宮腔鏡、診斷性刮宮有助 于子宮肌瘤的診斷。但是上述物理方法存在靈敏性差或者使患者感覺不適的缺陷，因此期 待新的診斷方法的出現(xiàn)。

【發(fā)明內容】

[0004] 為了克服現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種可用于子宮肌瘤早期診斷 的分子標志物。使用基因標志物來診斷子宮肌瘤具有及時性、特異性和靈敏性，從而使患者 在疾病早期就能知曉疾病風險，針對風險高低，采取相應的預防和治療措施。
[0005] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：
[0006] 本發(fā)明提供了檢測SYBU基因表達的產品在制備診斷子宮肌瘤的工具中的應用。
[0007] 進一步，所述檢測SY腳基因表達的產品包括檢巧U SYBU基因 mRNA水平的產品、和/或 檢測SYBU蛋白水平的產品。
[000引進一步，所述檢測SYBU基因表達的產品包括:通過RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢 、原位雜交或忍片檢測SYBU基因及其表達產物的表達水平W診斷子宮肌瘤的產品。
[0009] 進一步，所述用RT-PCR診斷子宮肌瘤的產品至少包括一對特異擴增SY腳基因的引 物;所述用實時定量PCR診斷子宮肌瘤的產品至少包括一對特異擴增SYBU基因的引物;所述 用免疫檢測診斷子宮肌瘤的產品包括:與SYBU蛋白特異性結合的抗體;所述用原位雜交診 斷子宮肌瘤的產品包括:與SYBU基因的核酸序列雜交的探針;所述用忍片診斷子宮肌瘤的 產品包括：蛋白忍片和基因忍片；其中，蛋白忍片包括與SYBU蛋白特異性結合的抗體，基因 忍片包括與SYBU基因的核酸序列雜交的探針。
[0010] 所述用實時定量PCR診斷子宮肌瘤的產品至少包括的一對特異擴增SYBU基因的引 物如沈Q ID NO.3和沈Q ID NO.4所示。
[0011] 所述檢測SYBU基因表達的產品可W是檢測SY腳基因表達的試劑、也可W是包含所 述試劑的試劑盒、忍片、試紙等，也可W是使用所述試劑的高通量測序平臺。
[0012] 所述診斷子宮肌瘤的工具包括但不限于忍片、試劑盒、試紙、或高通量測序平臺； 高通量測序平臺是一種特殊的診斷子宮肌瘤的工具，隨著高通量測序技術的發(fā)展，對一個 人的基因表達譜的構建將成為十分便捷的工作。通過對比疾病患者和正常人群的基因表達 譜，容易分析出哪個基因的異常與疾病相關。因此，在高通量測序中獲知SYBU基因的異常與 子宮肌瘤相關也屬于SYBU基因的用途，同樣在本發(fā)明的保護范圍之內。
[0013] 本發(fā)明還提供了一種診斷子宮肌瘤的工具，所述工具包括檢測SYBU基因表達的試 劑;所述試劑包括檢測SYBU基因 mRNA的引物和/或探針、檢測SYBU蛋白的抗體。
[0014] 所述工具包括但不限于忍片、試劑盒、試紙、或高通量測序平臺。
[0015] 其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白質忍片;所述基因忍片包括固相載體W及固 定在固相載體的寡核巧酸探針，所述寡核巧酸探針包括用于檢測SYBU基因轉錄水平的針對 SYBU基因的寡核巧酸探針;所述蛋白質忍片包括固相載體W及固定在固相載體的SY腳蛋白 的特異性抗體;所述基因忍片可用于檢測包括SYBU基因在內的多個基因（例如，與子宮肌瘤 相關的多個基因）的表達水平。所述蛋白質忍片可用于檢測包括SYBU蛋白在內的多個蛋白 質(例如與子宮肌瘤相關的多個蛋白質）的表達水平。通過將多個與子宮肌瘤的標志物同時 檢測，可大大提高子宮肌瘤診斷的準確率。
[0016] 其中，所述試劑盒包括基因檢測試劑盒和蛋白免疫檢測試劑盒;所述基因檢測試 劑盒包括用于檢測SYBU基因轉錄水平的試劑;所述蛋白免疫檢測試劑盒包括SYBU蛋白的特 異性抗體。進一步，所述試劑包括使用RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或忍片方 法檢測SYBU基因表達水平過程中所需的試劑。優(yōu)選度，所述試劑包括針對SYBU基因的引物 和/或探針。根據(jù)SYBU基因的核巧酸序列信息容易設計出可W用于檢測SYBU基因表達水平 的引物和探針。
[0017] 所述試紙包括檢測SYBU基因表達的試劑。
[001引所述高通量測序平臺包括檢測SY腳基因表達的試劑。
[0019 ] 與SY腳基因的核酸序列雜交的探針可W是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它衍 生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核巧酸序列特異性結合，任 何長度都可W。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個堿基長度。同樣，所述探針的長 度可長至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探針長度對雜交 效率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最長一般不超過 30個堿基對，與目的核巧酸序列互補的長度W15-25個堿基對最佳。所述探針自身互補序列 最好少于4個堿基對，W免影響雜交效率。
[0020] 進一步，所述SYBU蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述SYBU蛋白 的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾(例如，嵌合抗體、SCFv Jab、F (ab'）2、Fv等。只要所述片段能夠保留與SYBU蛋白的結合能力即可。用于蛋白質水平的抗體 的制備時本領域技術人員公知的，并且本發(fā)明可W使用任何方法來制備所述抗體。
[0021] 在本發(fā)明的具體實施方案中，所述檢測SYBU基因 mRNA的引物包括SEQ ID NO.3和 SEQ ID NO.4所示的引物對。
[0022] 本發(fā)明還提供了 SYBU基因和/或其表達產物的促進劑在制備治療子宮肌瘤的藥物 中的應用。
[0023] 所述促進劑包括促進SYBU基因表達的試劑和促進SY腳基因表達產物的試劑;所述 促進SYBU基因表達的試劑包括促進基因轉錄的試劑、促進基因翻譯的試劑、促進SYBU蛋白 含量的試劑；所述促進SYBU基因表達產物的試劑包括促進SYBU基因表達產物穩(wěn)定性的試 劑、促進SYBU基因表達產物活性的試劑、促進SYBU基因表達產物功能的試劑。
[0024] 具體地，所述促進SYBU基因表達的試劑包括:含有SYBU基因的試劑、攜帶SYBU基因 的載體或宿主細胞所形成的試劑、含有SYBU蛋白質的試劑。
[0025] 本發(fā)明的促進劑一方面可W用于補充內源性的SYBU蛋白的缺失或不足，通過提高 SYBU蛋白的表達，從而治療因 SYBU蛋白缺乏導致的子宮肌瘤。另一方面可W用于促進SYBU 蛋白的活性或者功能，從而治療子宮肌瘤。
[0026] 本發(fā)明所述攜帶基因的載體是本領域已知的各種載體，如市售的載體、包括質粒、 粘粒、隧菌體、病毒等。
[0027] 在本發(fā)明中，術語"宿主細胞"包括原核細胞和真核細胞。常用的原核宿主細胞的 例子包括大腸桿菌、枯草桿菌等。常用的真核宿主細胞包括酵母細胞、昆蟲細胞和哺乳動物 細胞。較佳地，該宿主細胞是真核細胞，如C冊細胞、COS細胞等。
[0028] 本發(fā)明還提供了一種用于治療子宮肌瘤的藥物組合物，所述藥物組合物包括上面 所述的SYBU基因和/或其表達產物的促進劑。
[0029] 進一步，本發(fā)明的藥物還包括藥學上可接受的載體，載體，運類載體包括(但并不 限于）：稀釋劑、賦形劑如水等、填充劑如淀粉、薦糖等;粘合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明 膠和聚乙締化咯燒酬;濕潤劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸巧和碳酸氨鋼;吸收促進劑季錠 化合物;表面活性劑如十六燒醇;吸附載體如高嶺±和皂粘±;潤滑劑如滑石粉、硬脂酸巧 和儀、聚乙二醇等。
[0030] 本發(fā)明的藥物導入組織或者細胞的方式可W分為體外或者體內的方式。體外方 式包括將含有SYBU基因的藥物或者含有SYBU蛋白質的藥物導入細胞中，再將細胞移植或回 輸?shù)襟w內。體內方式包括直接將含有SY腳基因的藥物或者含有SYBU蛋白質的藥物注入體內 組織中。
[0031] 本發(fā)明的藥物還可與其他治療子宮肌瘤的藥物聯(lián)用，多種藥物聯(lián)合使用可W大大 提到治療的成功率。
[0032] 在本發(fā)明的上下文中/'SY腳基因"包括SY腳基因 W及SY腳基因的任何功能等同物 的多核巧酸。SYBU基因包括與目前國際公共核酸序列數(shù)據(jù)庫Gene Bank中SYBU基因（NC_ 000008.11 )DNA序列具有70% W上同源性，且編碼相同功能蛋白質的DNA序列；
[0033] 優(yōu)選地，SYBU基因的編碼序列包括W下任一一種DNA分子：
[0034] (1)序列表中沈Q ID NO. 1所示的DNA序列；
[0035] (2)在嚴格條件下與1)限定的DNA序列雜交且編碼相同功能蛋白質的DNA序列；
[0036] (3)與（1)或(2)限定的DNA序列具有70 %、優(yōu)選地，90 % W上同源性，且編碼相同功 能蛋白質的DNA分子。
[0037] 在本發(fā)明的具體實施方案中，所述SY腳基因的編碼序列是SEQ ID NO. 1所示的DNA 序列。
[0038] 在本發(fā)明的上下文中，SYBU基因表達產物包括SYBU蛋白W及SYBU蛋白的部分膚。 所述SYBU蛋白的部分膚含有與子宮肌瘤相關的功能域。
[0039] "SYBU蛋白"包括SYBU蛋白W及SYBU蛋白的任何功能等同物。所述功能等同物包括 SYBU蛋白保守性變異蛋白質、或其活性片段，或其活性衍生物，等位變異體、天然突變體、誘 導突變體、在高或低的嚴緊條件下能與SYBU的D