一種從油牡丹粕制取多肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及多膚制取技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，設(shè)及一種從油牡丹巧制取多膚的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 油牡丹（即油用牡丹)為一種木本油料作物，與大豆、油菜、油茶、油橄攬等油料作 物相比，其具有高產(chǎn)出（五年生畝產(chǎn)可達(dá)300公斤，畝綜合效益可達(dá)萬元）、高含油率(巧含油 率22%)、高品質(zhì)(不飽和脂肪酸含量92%)、低成本(油用牡丹耐旱耐貧瘡，適合荒山綠化造 林、林下種植;一年種百年收，成本低）的特點(diǎn)。W油牡丹棒取的食用油被譽(yù)"液體黃金"。經(jīng) 科學(xué)院研究表明，牡丹巧油的不飽和脂肪酸含量90% W上，尤其難能可貴的是，多不飽和脂 肪酸-亞麻酸含量超過40%，是橄攬油的40倍。
[0003] 多膚是是氨基酸W膚鍵連接在一起而形成的化合物，它也是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn) 物。人體很多活性物質(zhì)都是W膚的形式存在的。膚設(shè)及人體的激素、神經(jīng)、細(xì)胞生長和生殖 各領(lǐng)域，其重要性在于調(diào)節(jié)體內(nèi)各個(gè)系統(tǒng)和細(xì)胞的生理功能，激活體內(nèi)有關(guān)酶系，促進(jìn)中間 代謝膜的通透性，或通過控制DNA轉(zhuǎn)錄或影響特異的蛋白合成，最終產(chǎn)生特定的生理效應(yīng)。 膚是設(shè)及人體內(nèi)多種細(xì)胞功能的重要物質(zhì)。膚可W合成細(xì)胞，并調(diào)節(jié)細(xì)胞的功能活動(dòng)。膚在 人體作為神經(jīng)遞質(zhì)，傳遞信息。膚可在人體作為運(yùn)輸工具，將人體所食的各種營養(yǎng)物質(zhì)與各 種維生素、生物素、巧及對人體有益的微量元素輸送到人體各細(xì)胞、器官和組織。膚是人體 重要的生理調(diào)節(jié)物，它可全面調(diào)節(jié)人體生理功能，增強(qiáng)和發(fā)揮人體生理活性，它具有重要的 生物學(xué)功能。膚對人的細(xì)胞活性、功能活動(dòng)、生命存在太重要了。但現(xiàn)代人因各種因素使人 體中的膚流失、損失，合成膚的能力大大減弱，因此現(xiàn)代人體缺乏膚，必須補(bǔ)充人工合成膚， 補(bǔ)膚就是補(bǔ)活性，補(bǔ)膚就是補(bǔ)活力，補(bǔ)膚就是補(bǔ)生命。
[0004] 巧（油巧)為棒油的副產(chǎn)品，其為棒油所剩下的廢渣。經(jīng)研究表明，每千克干物質(zhì)巧 中消化能均在3000千卡W上，粗蛋白質(zhì)含量在40% W上。其中畜禽所必需的賴氨酸含量達(dá) 2.5%~3%，比玉米高10倍。有鑒于此，巧被應(yīng)用添加到飼料和用作肥料。但是，運(yùn)些簡單地 應(yīng)用并不能未最大限度地開發(fā)出其營養(yǎng)價(jià)值。
[0005] 從巧中提取多膚，在近年來得出現(xiàn)了一些報(bào)道。例如中國專利CN102048026A公開 了一種功能性飼料用添加劑油茶巧蛋白多肚的制備方法，該制備方法，其包括W下步驟： (1)將油茶餅巧粉碎；（2)脫皂素；（3)加復(fù)合酶進(jìn)行水解；（4)滅酶，溫度80~90°C，時(shí)間5~ 15min; (5)離屯、分離收集上清液；（6)調(diào)上清液pH值至中性；（7)用微孔膜過濾；（8)低溫真空 干燥，溫度35~55°C，真空度低于0.098MPa，得到油茶巧蛋白多膚；由此制得的油茶巧蛋白 多肚的相對分子質(zhì)量低于1〇〇〇化。又比如中國專利CN 104131059 A公開了具有葡萄糖昔酶 抑制活性的漢麻巧巧多肚的酶解制備方法，具體包括:將漢麻巧巧干燥，粉粹成粉末，加入 水均勻攬拌，pH調(diào)至8.0~10.5，溫度調(diào)至30~80°C，勻速攬拌0.5~化，離屯、，上清液pH調(diào)至 3~6，得蛋白沉淀;將蛋白加水溶解，比例為2~7g: lOOmL，pH調(diào)至7.0~9.5，再加入堿性蛋 白酶，蛋白重量與該酶酶活之比0.1~5:1000，溫度50~75°C，時(shí)間1~4h;將酶解液通過大 孔吸附樹脂和葡聚糖凝膠柱分離純化，收集干燥。
[0006] 盡管如此，但W上現(xiàn)有技術(shù)中從油巧中制取多膚的得率都較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 有鑒于此，本發(fā)明提供一種從油牡丹巧制取多膚的方法，該方法制取的多膚具有 較高的得率。
[0008] -種從油牡丹巧制取多膚的方法，包括W下步驟：
[0009] (1)將油牡丹巧進(jìn)行脫脂；
[0010] (2)將經(jīng)步驟（1)處理的油牡丹巧采用由凝結(jié)芽抱桿菌、地衣芽抱桿菌所組成的混 合菌進(jìn)行發(fā)酵；
[0011] (3)將經(jīng)步驟(2)處理的油牡丹巧中提取出蛋白質(zhì)，并對所述蛋白質(zhì)在蛋白酶下酶 解。
[0012] 進(jìn)一步地，步驟(2)中所述凝結(jié)芽抱桿菌、地衣芽抱桿菌W菌液的形式加入，凝結(jié) 芽抱桿菌菌液和地衣芽抱桿菌體積之比為1:1~5,所述凝結(jié)芽抱桿菌菌液的活菌數(shù)為4X l〇iD~6 X l〇iDcfu/ml，地衣芽抱桿菌的活菌數(shù)為2 X l〇iD~4 X l〇iDcfu/ml。
[0013] 進(jìn)一步地，步驟(2)中所述發(fā)酵的溫度為42~58°C，發(fā)酵的時(shí)間為36~72h。
[0014] 進(jìn)一步地，步驟(2)中所述發(fā)酵的抑為4.5~5.5。
[0015] 進(jìn)一步地，步驟(2)中所述發(fā)酵在有氧條件下進(jìn)行，氧氣通入量為0.3~0.6vvm。
[0016] 進(jìn)一步地，步驟（2)之前、步驟（1)之后還包括將待處理的油牡丹巧進(jìn)行稀酸或稀 堿處理。
[0017] 進(jìn)一步地，步驟(1)所述脫脂采用憐脂酶和脂肪酶進(jìn)行酶解。
[0018] 進(jìn)一步地，所述憐脂酶的用量為占待脫脂的油牡丹巧質(zhì)量的0.3~3%。，所述脂肪 酶占待脫脂的油牡丹巧質(zhì)量的0.2~2%〇。
[0019] 進(jìn)一步地，所述酶解的溫度為30~40°C，酶解的時(shí)間為0.5~化。
[0020] 進(jìn)一步地，步驟（1)之前還包括對油牡丹巧進(jìn)行粉碎;所述粉粹至20~30目粒度， 所述粉碎采用超微粉粉碎或超聲波粉碎。
[0021] 本發(fā)明從油牡丹巧制取多膚的方法中，于蛋白酶酶解之前采用凝結(jié)芽抱桿菌、地 衣芽抱桿菌的混合菌進(jìn)行發(fā)酵，可將油牡丹巧中的木質(zhì)纖維等降解為多糖等小分子，從而 避免了纖維素對蛋白質(zhì)的束縛，增大蛋白質(zhì)與蛋白酶的充分接觸，提高蛋白質(zhì)的酶解效果， 保證了得率。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 為了便于理解本發(fā)明，下面合實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0023] 作為本發(fā)明的發(fā)酵，其采用由凝結(jié)芽抱桿菌、地衣芽抱桿菌所組成的混合菌。對混 合菌的加入形式不加限定，例如可W使用經(jīng)培養(yǎng)后所得菌液添加，也可W將菌株在添加氮 源等營養(yǎng)成分的條件下直接接種到該待發(fā)酵的原料中。上述菌液可采用常規(guī)的種子培養(yǎng)基 及培養(yǎng)條件方法來獲得?？闪信e出一種種子培養(yǎng)基的成分，即每升含木糖30~50克，酵母粉 5~10克，玉米漿干粉5~15克，憐酸二氨鐘4克，乙酸鋼2~6克，氯化鐘1~2克，硫酸儀0.2 克，余量為水，抑為6~7,于115°C滅菌20分鐘。應(yīng)當(dāng)知道的是，菌液加到待發(fā)酵的原料后，可 加入發(fā)酵基，發(fā)酵基的成分可類似于上述培養(yǎng)基，發(fā)酵基所含氮源為酵母粉5~20克、蛋白 陳5~20克、玉米漿干粉5~20克、大豆膚5~20克、大豆蛋白陳5~20克五種氮源中的至少一 種，還可輔助地含有初糖量不少于500克/升，憐酸二氨鐘4克，乙酸鋼1~6克，氯化鐘2克，硫 酸儀0.2克，其余為水，抑為6~70，于115°C滅菌20分鐘。類推地，對于上述將菌株在添加氮 源等營養(yǎng)成分的條件下直接接種到該待發(fā)酵的原料，運(yùn)里的氮源、營養(yǎng)成分可采用上述相 同的，在此不再寶述。
[0024]前述菌液中，較好地，凝結(jié)芽抱桿菌菌液和地衣芽抱桿菌體積之比為1:1~5,例如 1:1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3、1:4、1:4.5、1:4.8、1:4.9或 1:5等，優(yōu)選為 1:3。運(yùn)里，凝結(jié)芽抱 桿菌菌液的活菌數(shù) W4 X l〇iD~6 X l〇iDcfu/ml為宜，例如4 X 1〇id、4.2 X 1〇id、4.5 X 1〇id、5 X l〇w、5.5 X l〇w、5.8 X 10"或6 X 10"等;地衣芽抱桿菌的活菌數(shù)2 X 10"~4 X l〇Wcfu/ml，例 如2X10W、2.2X10l°、2.5X10W、3X10W、3.4X10W、3.6X10l°、3.8X10W或4X10W等。當(dāng) 然上述兩種菌液的活菌數(shù)若過大或過小也可實(shí)施本方案，在影響到發(fā)酵產(chǎn)物及發(fā)酵時(shí)間 等。應(yīng)當(dāng)知曉的是，C化為菌落形成單位(Colony-Forming化its)指單位體積中的細(xì)菌群落 總數(shù)，在活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)時(shí)，由單個(gè)菌體或聚集成團(tuán)的多個(gè)菌體在固體培養(yǎng)基上生長繁殖所 形成的集落，稱為菌落形成單位，W其表達(dá)活菌的數(shù)量。
[00巧]作為本發(fā)明的發(fā)酵中，其溫度較好地為42~58°C，例如42°C、43°C、45°C、5(TC、55 °0、56°0、57°0、57.5°0、58°0