一種硫辛酸聚合物雜質的制備及其檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種硫辛酸聚合物雜質的制備及其檢測方 法。
【背景技術】
[0002] 右旋硫辛酸，（英文名1?(+從1?11&1^?〇化4(^(1)其分子式 :(：8!114〇232，分子量206.33， 結構式如下：
[0003]硫辛酸含有雙硫五元環(huán)結構，電子密度高，具備很高的自由基反應能力，其被譽為 "萬能抗氧化劑"，能去除機體自由基，能促進機體利用葡萄糖合成維生素C，有效去除黑色 素，還具有抗炎抗衰老的功效。目前被廣泛應用于預防和治療心臟病、糖尿病、肝病和老年 癡呆癥。
[0004]臨床上，目前的硫辛酸品種主要用于治療糖尿病周圍神經病變（diabetic peripheralneuropathy，DPN)引起的感覺異常。我國在2000年批準了原研的德國史達得公 司的硫辛酸注射液(奧力寶)進口上市，國內一些有關硫辛酸液體或者固體的仿制制劑也都 獲得了國內SFDA的批準而相繼上市。
[0005]硫辛酸具有旋光性，與混旋硫辛酸，左旋硫辛酸相比，在治療II型糖尿病促進骨骼 肌攝取葡萄糖;減少血漿胰島素和游離脂肪酸水平;改善胰島素作用下的糖原合成以及葡 萄糖氧化作用；增加動物血流含氧量等方面，右旋硫辛酸更具有活性優(yōu)勢。因此，右旋硫辛 酸在預防和治療心臟病、糖尿病、肝病及老年癡呆等疾病方面具有更廣闊的前景。
[0006]但是，右旋硫辛酸具有在理化性質上的重大缺陷，即很不穩(wěn)定；并且，右旋硫辛酸 的熔點比消旋體更低，只有47°C左右，在較低溫度下即可發(fā)生聚合，在酸性催化和光照條件 下聚合加劇，影響了其臨床治療的藥效和安全性。
[0007] 硫辛酸極易聚合的特性早已被研究者們發(fā)現、探索并利用。早在1956年，Thomas等 人在JournaloftheAmericanChemicalSociety中的論文"DisulfidePolymersof DL-LipoicAcid"中首次報道了DL-硫辛酸熱聚合的反應。其是將硫辛酸在65°C加熱熔融， 保溫反應15min，降至室溫后，用苯溶劑連續(xù)萃取反應產物，直至萃取溶劑的顏色變成無色， 濃縮苯溶劑，最終得到粘稠的淡黃色聚合物。但是，在該報道中沒有描述產物的聚合程度及 分子量，并且使用劇毒的苯溶劑來萃取，使得該制備方法難以推廣。
[0008] 2010年，日本學者KISANUKI等人在JournalofPolymerScience:PartA: PolymerChemistry上發(fā)表的論文"Ring-OpeningPolymerizationofLipoicAcidand CharacterizationofthePolymer"中，將硫辛酸納入經典的聚合物反應條件下進行聚合。 其中之一是在不加入任何引發(fā)劑的情況下，進行本體熔融的封管聚合，所得聚合物的分子 量經GPC分析確定在105-106的范圍內，聚合程度非常高。
[0009] 德國歐博康公司在申請的中國專利CN200780029055.3中公開了一種低聚態(tài)的硫 辛酸衍生物，聚合度η為4-6，尤其優(yōu)選的是以堿土金屬鹽，有機胺鹽或者氨基酸鹽的形式存 在，并請求保護包含該低聚態(tài)的硫辛酸的組合物在制備穩(wěn)定類胡蘿卜素或類胡蘿卜素衍生物 的藥物中的用途。其是將堿與硫辛酸在水溶液中反應，且高溫反應l_5h，然后通過添加不良 溶劑析出低聚態(tài)硫辛酸和堿平衡離子的合成物。
[0010] 雖然硫辛酸聚合物及合成反應屢見不鮮，但是將藥品儲存過程中易產生的硫辛酸 低聚物作為雜質對照品，加上高效液相色譜法，用以測定硫辛酸原料藥和制劑中的聚合物 雜質含量，還未見報道。目前，在有關硫辛酸的原料藥和制劑品種的質量控制中，有關物質 的檢查方面，除了特定控制已知雜質A，即6,8_表三硫辛酸之外，其他雜質基本都是按照未 知雜質控制的。鑒于硫辛酸極易聚合的不穩(wěn)定的特性，其聚合物雜質很可能混在這些未知 雜質當中而未被單獨控制，或者在現有色譜條件下根本沒有檢出，因此有可能會造成聚合 物雜質引發(fā)不良反應例如過敏癥狀的安全風險。更有可能的是，普遍使用在有關物質檢查 項的C18色譜柱系統(tǒng)，也許根本無法檢出或有效分離出硫辛酸相關的聚合物雜質，給用藥的 療效和安全性帶來了隱患。
[0011]

【發(fā)明內容】

[0012] 本發(fā)明為了克服上述【背景技術】的不足，提供了一種硫辛酸低聚物的雜質對照品及 其制備方法，還包括運用該硫辛酸低聚物雜質對照品，運用高效的分子排阻色譜法，來測定 硫辛酸原料藥和制劑中的聚合物雜質含量的檢測方法。
[0013]為了針對性地研究右旋硫辛酸原料藥和制劑在日常存儲過程中產生的聚合物雜 質的特點，我們將三批中試樣品的原料藥和制劑，經過6個月加速試驗，以及光照影響因素 試驗一段時間后的樣品，進行聚合物雜質的分離分析。經過適當的后處理過程后，我們把富 含聚合物雜質的母液進行濃縮，將濃縮物通過制備液相的方法進行分離并收集聚合物組分 峰，將富集的聚合物雜質濃縮，送檢進行ESI-MS的質譜分析。結果顯示，上述雜質濃縮中主 要顯示的是二聚體和三聚體的質子峰，由質子峰強度初步判斷占絕大部分的比重，質譜中 無四聚體的分子量出現。這表明在常規(guī)的生產和儲藏條件下，硫辛酸產生的聚合物雜質主 要是二聚體和三聚體，即屬于硫辛酸的低聚物，而在此條件下生成硫辛酸高聚物的幾率較 小。
[0014]因此，能制備獲得純度符合要求的右旋硫辛酸低聚物作為雜質對照品，將對硫辛 酸的原料藥和制劑中的聚合物雜質的定性、定量分析控制具有重要意義。
[0015]本發(fā)明的目的之一提供了一種高純度的硫辛酸低聚物的組合物及其制備方法。
[0016]本發(fā)明提供的一種組合物，其包含有如下所示的右旋硫辛酸低聚物，該低聚物由2 至3個右旋硫辛酸單體分子縮聚而成，其中，η= 2-3; ?'flyiT
〇
[0017] 進一步地，該組合物中右旋硫辛酸的二聚體、三聚體的HPLC純度之和大于98.5%。
[0018] 本發(fā)明還提供一種制備如權利要求1或2所述的組合物的方法，其特征在于，包含 如下步驟：
A) 將右旋硫辛酸單體溶于無水的四氫呋喃或二氧六環(huán)的溶劑中，加入催化量的偶氮二 異丁腈AIBN，在35-40°C下攪拌10_20min;其中，右旋硫辛酸在溶劑中的質量/體積百分數為 3-15%，單位g/mL; B) 快速降溫至10_15°C之間，保溫攪拌0.5-1.5h，加入適量稀酸溶液終止反應； C) 將反應液投入乙酸乙酯和水的混合液中，攪拌分層，取乙酸乙酯層，水層再用乙酸乙 酯萃取兩遍，合并有機層，濃縮至少量體積后加入異丙基醚，析出淡黃色的半固體，即得到 上述右旋硫辛酸低聚物的組合物。
[0019] 優(yōu)選地，步驟A中的溶劑選擇為四氫呋喃，右旋硫辛酸在四氫呋喃中的質量/體積 百分數為3-5%，單位g/mL;偶氮二異丁腈的質量是右旋硫辛酸質量的0.05-0.1倍。
[0020] 優(yōu)選地，步驟B中，在10-15°c之間保溫攪拌的時間為lh，稀酸溶液選自稀鹽酸、稀 磷酸中的一種，濃度為5-10 %。
[0021] 優(yōu)選地，步驟C所得的右旋硫辛酸低聚物的組合物粗品可通過如下步驟進行重結 晶精制:將粗品懸浮于甲基異戊酮中，攪拌分散，升高溫度至45-50°C之間，緩慢加入體積比 為1:1的乙醇/水的混合溶劑，直至完全溶解，趁熱過濾，緩慢降至溫度0-5°C，收集析出的淡 黃色半固體，30 ± 2°C真空干燥12h，即得精制品。
[0022]優(yōu)選地，甲基異戊酮的體積是粗品重量的6-9倍，乙醇/水混合溶劑的體積為粗品 重量的3-4倍，體積重量比的單位是mL/g。
[0023] 本發(fā)明的另一個目的是提供右旋硫辛酸原料或制劑樣品中所述右旋硫辛酸低聚 物雜質的檢測方法。
[0024] 本發(fā)明人對該分析方法的摸索進行過深入研究。我們發(fā)現運用十八烷基硅烷鍵合 硅膠為填充劑的C18柱，雖然可有效控制已知雜質A及其他未知雜質，但對于聚合物雜質這 一部分研究很不透徹透徹。我們運用按本發(fā)明制備方法獲得的右旋硫辛酸低聚物對照品， 指針性地定位樣品中的聚合物雜質，發(fā)現C18柱體系并不能有效指示出聚合物雜質峰。我們 參考有關內酰胺抗生素控制聚合物雜質的方法，采用高效的分子排阻色譜法進行本品中 聚合物雜質的分離和分析，具體色譜條件如下： 島津LC-20AT(DAD檢測器），TSK-GEL-G2000SWXL(7 · 8*300mm，5μπι)色譜柱，以0 · 005mo1 /L磷酸鹽緩沖液(pH7.0) [0.005mol/L的磷酸氫二鈉溶液-0.005mol/L的磷酸二氫鈉溶液 (60:40)]-乙腈(97:3)