一種提高食藥用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及β -葡聚糖領(lǐng)域，特別是涉及一種提高食藥用真菌β -葡聚糖的提取溶出率方法。
【背景技術(shù)】
[0002]β -葡聚糖被稱為“21世紀(jì)最新生物科技成果”。近年來，多糖的多種生物活性的發(fā)現(xiàn)引發(fā)了科研工作者的普遍關(guān)注，特別是隨著生物高分子研究新技術(shù)、新方法在多糖研究上的應(yīng)用，使國內(nèi)外對生物活性多糖的研究迅速發(fā)展。國內(nèi)外學(xué)者的研究表明葡聚糖具有獨(dú)特的生理活性和藥用價(jià)值。藥用、食用菌葡聚糖作為多糖研究領(lǐng)域中的一個(gè)重要分支，正因其獨(dú)特的生物活性而引起越來越多的關(guān)注。自1958年Bmnde III報(bào)道了酵母細(xì)胞壁多糖具有抗腫瘤作用以來，人們對藥用、食用菌多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)及生物活性進(jìn)行了深入細(xì)致的研究并己取得了豐碩的成果。近20年來，已有大量關(guān)于食用菌β-葡聚糖生物活性的研究報(bào)道，主要集中在抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒及抗氧化等方面。因此，葡聚糖的研究具有重要的意義，β -葡聚糖因其特有的生理功能性，已受到廣大科研工作者的關(guān)注與研究，現(xiàn)已成功的應(yīng)用于制藥業(yè)和保健品業(yè)。
[0003]葡聚糖分為2大類:1類是β-1，3-糖苷鍵連接為主，并兼有少量β_1，4或其它糖苷鍵，香菇多糖、茯苓多糖、云芝多糖等都屬于這種連接。如香菇多糖的主鏈?zhǔn)怯搔耞1，3糖苷鍵連接的葡聚糖，主鏈上約有23%葡萄糖殘基通過C-6分支點(diǎn)連有側(cè)鏈。側(cè)鏈有3種:一是單一的非還原端葡萄糖殘基；另一種是β_1，6糖苷鍵連接的低聚葡萄糖，如杏鮑菇多糖；再一種是β_1，3糖苷鍵連接的低聚葡萄糖。另一類是β-1，6葡聚糖，如灰樹花β-組分是以β_1，6連接為主，在3位上有支鏈，支鏈的連接方式為β_1，3連接，它們長短程度不均一組分。有些葡聚糖的生物學(xué)功能需要形成蛋白復(fù)合物才能發(fā)揮提高免疫力和抗腫瘤的功效，如姬松茸子實(shí)體中含有一類抗腫瘤的堿溶性的活性多糖體，該類多糖體是一種由直鏈的β_1，6葡聚糖和蛋白組成。把這種葡聚糖-蛋白復(fù)合物用甲醛降解并分離出純多糖，發(fā)現(xiàn)抗腫瘤活性大為下降，可見有些多糖的蛋白部分對高的生物活性是必需的。
[0004]β-葡聚糖的提取、分離、純化，目前尚無公認(rèn)、有效、統(tǒng)一的方法，現(xiàn)常用工藝主要有水提法、酸提法、堿提法以及輔酶法。這些方法無論在葡聚糖提取率、能耗與物耗，還是在葡聚糖活性控制等方面存在較顯著不足，并且所得的葡聚糖的產(chǎn)品科技含量較低，具體體現(xiàn)在一下幾方面:β -葡聚糖純度低、水溶性差、組分不均一等，制約了其高附加值應(yīng)用。
[0005]現(xiàn)有方法主要有以下問題:水浸提法通常耗時(shí)長，能耗高，葡聚糖的提取率低。酸堿提取所使用的無機(jī)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿用量及處理時(shí)間均不好控制。強(qiáng)酸強(qiáng)堿極易破壞β -葡聚糖的生物活性，并且在反應(yīng)結(jié)束后含有強(qiáng)酸強(qiáng)堿廢液，在大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)容易造成嚴(yán)重的環(huán)境污染。輔酶法技術(shù)在生產(chǎn)過程中應(yīng)用到的酶制劑，一般價(jià)格昂貴且容易失活、使用壽命短等缺點(diǎn)，若將其應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)，尚需進(jìn)一步的深入研究。常用的傳統(tǒng)提取技術(shù)通常通過大劑量溶劑長時(shí)間浸漬，使食藥用真菌植物細(xì)胞壁充分膨脹，從而提高浸出速率及浸出量，因此傳統(tǒng)方式需要溶劑量較大時(shí)間較長，并且提取率不高。假如在食藥用真菌β -葡聚糖的提取過程中輔以超聲波，并且使用酸度適中的有機(jī)酸體系，就有可能通過控制工藝條件，利用超聲波的空化作用促進(jìn)β -葡聚糖的浸出提取。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種提高食藥用真菌β -葡聚糖的提取溶出率方法，能有效提升食藥用真菌β -葡聚糖的提取溶出率，同時(shí)還能實(shí)現(xiàn)工藝過程中節(jié)水、節(jié)能的目標(biāo)。
[0007]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
一種提高食藥用真菌葡聚糖的提取溶出率方法，包括以下步驟:
1.將經(jīng)粉碎預(yù)處理后的原料，放入加有有機(jī)酸的提取容器中，充分?jǐn)嚢枋蛊渚鶆驖櫇瘢?br> 2.向潤濕的原料中加入石油醚，待5-10min后，加熱物料，加熱溫度為90_120°C，保溫10_20min ；
3.采用與有機(jī)溶劑洗滌除去少量殘余的酸液，完成原料的有機(jī)酸處理以及脫脂；
4.經(jīng)有機(jī)酸處理以及脫脂后的原料加入4-16倍體積水進(jìn)行分散、調(diào)節(jié)pH值至4.5，在一定溫度下輔助以超聲波進(jìn)行提取，反復(fù)提取兩次，收集兩次濾液，并將兩次濾液抽濾、合并；
5.取濾液靜置一小時(shí)后進(jìn)行離心處理，上清液調(diào)pH值至7.0后加入水溶液體積的3-6倍的乙醇，使溶于水但不溶于乙醇的葡聚糖沉淀出來，收集沉淀物即粗葡聚糖；
6.沉淀物即粗β -葡聚糖用95%乙醇進(jìn)行兩次脫水后進(jìn)行離心處理，再經(jīng)沉淀、干燥，得到β _匍聚糖。
[0008]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明的一種提高食藥用真菌葡聚糖的提取溶出率方法，能有效提升食藥用真菌葡聚糖的提取溶出率，工藝過程中具有節(jié)水、節(jié)能、高效的優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0009]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0010]實(shí)施例1
原料預(yù)處理:取1.5kg干燥、除雜的猴頭菇置于粉碎機(jī)中粉碎，待粉碎均勻?qū)⒃现糜谥胁菟幪崛∑髦?，加?0L乙醇，加熱回流提取30min，重復(fù)上述過程一次，過濾合并兩次濾液并加壓蒸餾回收乙醇，加入2L草酸溶液及石油醚，充分?jǐn)嚢枋蛊浠旌暇鶆?，并將物料加熱?00°C，保溫20min后進(jìn)行減壓蒸餾，直至容器中無液體，再向容器中加入6L乙醇，充分過濾、攪拌，得到酸處理猴頭菇；
提取:取上一步制得的酸處理猴頭菇，加入1L蒸餾水調(diào)節(jié)pH值至4.5后在超聲波輔助下浸提lh，以5000r/min離心30min，取上清液調(diào)節(jié)pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min離心20min，沉淀物用95%乙醇脫水，進(jìn)行兩次，隨后以4500r/min離心lOmin，得到沉淀物備用；
干燥:將提取后的沉淀物在60-70°C下進(jìn)行干燥，得到β -葡聚糖； 滅菌:將得到的β-葡聚糖進(jìn)行巴氏殺菌。
[0011]實(shí)施例2
原料預(yù)處理:取1.5kg干燥、除雜的猴頭菇置于粉碎機(jī)中粉碎，待粉碎均勻?qū)⒃现糜谥胁菟幪崛∑髦?，加?5L乙醇，加熱回流提取20min，重復(fù)上述過程一次，過濾合并兩次濾液并加壓蒸餾回收乙醇，加入2L草酸溶液及石油醚，充分?jǐn)嚢枋蛊浠旌暇鶆颍⑽锪霞訜嶂?00°C，保溫20min后進(jìn)行減壓蒸餾，直至容器中無液體，再向容器中加入5L乙醇，充分過濾、攪拌，得到酸處理猴頭菇；
提取:取上一步制得的酸處理猴頭菇，加入2L蒸餾水調(diào)節(jié)pH值至4.5后在超聲波輔助下浸提lh，以5000r/min離心30min，取上清液調(diào)節(jié)pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min離心30min，沉淀物用95%乙醇脫水，進(jìn)行兩次，隨后以4500r/min離心lOmin，得到沉淀物備用；
干燥:將提取后的沉淀物在60-70°C下進(jìn)行干燥，得到β -葡聚糖；
滅菌:將得到的葡聚糖進(jìn)行巴氏殺菌。
[0012]實(shí)施例3
原料預(yù)處理:取1.5kg干燥、除雜的猴頭菇置于粉碎機(jī)中粉碎，待粉碎均勻?qū)⒃现糜谥胁菟幪崛∑髦?，加?0L乙醇，加熱回流提取30min，重復(fù)上述過程一次，過濾合并兩次濾液并加壓蒸餾回收乙醇，加入1.5L草酸溶液及石油醚，充分?jǐn)嚢枋蛊浠旌暇鶆?，并將物料加熱?00°C，保溫20min后進(jìn)行減壓蒸餾，直至容器中無液體，再向容器中加入5L乙醇，充分過濾、攪拌，得到酸處理猴頭菇；
提取:取上一步制得的酸處理猴頭菇，加入2L蒸餾水調(diào)節(jié)pH值至4.5后在超聲波輔助下浸提lh，以5000r/min離心30min，取上清液調(diào)節(jié)pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min離心20min，沉淀物用95%乙醇脫水，進(jìn)行兩次，隨后以4500r/min離心lOmin，得到沉淀物備用；
干燥:將提取后的沉淀物在60-70°C下進(jìn)行干燥，得到β -葡聚糖；
滅菌:將得到的葡聚糖進(jìn)行巴氏殺菌。
[0013]實(shí)施例4
原料預(yù)處理:取1.5kg干燥、除雜的猴頭菇置于粉碎機(jī)中粉碎，待粉碎均勻?qū)⒃现糜谥胁菟幪崛∑髦?，加?5L乙醇，加熱回流提取20min，重復(fù)上述過程一次，過濾合并兩次濾液并加壓蒸餾回收乙醇，加入1.5L草酸溶液及石油醚，充分?jǐn)嚢枋蛊浠旌暇鶆?，并將物料加熱?00°C，保溫20min后進(jìn)行減壓蒸餾，直至容器中無液體，再向容器中加入5L乙醇，充分過濾、攪拌，得到酸處理猴頭菇；
提取:取上一步制得的酸處理猴頭菇，加入1.5L蒸餾水調(diào)節(jié)pH值至4.5后在超聲波輔助下浸提lh，以5000r/min離心30min，取上清液調(diào)節(jié)pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min離心20min，沉淀物用95%乙醇脫水，進(jìn)行兩次，隨后以4500r/min離心lOmin，得到沉淀物備用；
干燥:將提取后的沉淀物在60-70°C下進(jìn)行干燥，得到β -葡聚糖；
滅菌:將得到的葡聚糖進(jìn)行巴氏殺菌。
[0014]本發(fā)明實(shí)施例得到的β -葡聚糖純度高、水溶性好，并且通過此方法β -葡聚糖得率可達(dá)91.83%。
[0015]上述實(shí)施例僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，只對本發(fā)明作示例性說明，而非限定本發(fā)明。本專業(yè)技術(shù)人員凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種提高食藥用真菌β -葡聚糖的提取溶出率方法，其特征在于:包括以下步驟: 將經(jīng)粉碎預(yù)處理后的原料，放入加有有機(jī)酸的提取容器中，充分?jǐn)嚢枋蛊渚鶆驖櫇瘢? 向潤濕的原料中加入石油醚，待5-10min后，加熱物料，加熱溫度為90-120°C，保溫10_20min ； 采用與有機(jī)溶劑洗滌除去少量殘余的酸液，完成原料的有機(jī)酸處理以及脫脂； 經(jīng)有機(jī)酸處理以及脫脂后的原料加入4-16倍體積水進(jìn)行分散、調(diào)節(jié)pH值至4.5，在一定溫度下輔助以超聲波進(jìn)行提取，反復(fù)提取兩次，收集兩次濾液，并將兩次濾液抽濾、合并； 取濾液靜置一小時(shí)后進(jìn)行離心處理，上清液調(diào)pH值至7.0后加入水溶液體積的3-6倍的乙醇，使溶于水但不溶于乙醇的葡聚糖沉淀出來，收集沉淀物即粗葡聚糖； 沉淀物即粗β -葡聚糖用95%乙醇進(jìn)行兩次脫水后進(jìn)行離心處理，再經(jīng)沉淀、干燥，得到葡聚糖。
【專利摘要】<b>一種提高食藥用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法，采用有機(jī)酸體系對食藥用真菌類植物進(jìn)行處理，然后采用水提醇沉工藝，浸提過程輔助以超聲波，最后獲得β-葡聚糖。本發(fā)明的一種提高食藥用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法，能有效提升食藥用真菌β-葡聚糖的提取溶出率，工藝過程中具有節(jié)水、節(jié)能、高效的優(yōu)點(diǎn)。</b>
【IPC分類】C08B37/00
【公開號】CN105384836
【申請?zhí)枴緾N201510939482
【發(fā)明人】陳喜軍
【申請人】黑龍江眾生生物工程有限公司
【公開日】2016年3月9日
【申請日】2015年12月16日