)-OBzl,其合成,活性和應用
【專利說明】咪唑并吡啶-6-甲釀-Met-Arg (N02) -OBz I，其合成，活性和 應用 發(fā)明領域
[0001] 本發(fā)明涉及3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Arg(N02)-0Bzl，涉及它的制備 方法、涉及它們對此?-7、160、1(562、1]205、5!1-5757、他0 &1'六株腫瘤細胞增殖的抑制作用， 進一步涉及它對荷S180小鼠腫瘤增長的抑制作用、抗血栓活性和抗炎活性，因而本發(fā)明涉 及它作為抗腫瘤藥物的應用。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域。
【背景技術】
[0002] 癌癥是一組可影響身體任何部位的多種疾病的通稱。使用的其它術語為惡性腫瘤 和贅生物。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，癌癥是世界上的頭號死因之一，尤其是在發(fā)展中國家。而 全世界癌癥死亡人數(shù)預計將繼續(xù)上升，到2030年將超過1310萬。因此，開發(fā)新的高效，低 毒，毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是新藥研究的重要課題之一。
[0003] 隨著對腫瘤特性和發(fā)病本質的認識，發(fā)明人曾經(jīng)公開下式代表的3H-咪唑并[4， 5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl (其中AA代表甘氨基酸或其它L-氨基酸殘基）在1 μ mol/kg 劑量下顯示良好的抗腫瘤活性。通過進一步研究發(fā)明人認識到，將Met-Arg(N02)_0Bzl代 替3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl中的AA-OBzl，不僅可以延緩它的代謝達到 提高抗腫瘤活性的目的，而且可以增加抗血栓和抗炎癥活性。血栓和炎癥是危害腫瘤患者 預后的并發(fā)癥。通過這種修飾，獲得具有抗腫瘤，抗血栓和抗炎癥三重活性的化合物，具有 良好的臨床應用前景。根據(jù)這些認識，發(fā)明人提出了本發(fā)明。


【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的第一個內容是提供3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 醜-Met-Arg (N02) -OBz 1。
[0007] 本發(fā)明的第二個內容是提供3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-Met_Arg(N02)-0Bzl的合成方法，該方法包括：
[0008] (1)L-組氨酸在稀硫酸催化下與甲酸進行Pictet-Spengler縮合生成6S-4,5,6, 7-四氫-3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-羧酸；
[0009] (2) 6S-4, 5,6, 7-四氫-3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-羧酸轉化為 6S-4, 5,6, 7-四 氫-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；
[0010] (3)63-4,5,6,7-四氫-3!1-咪唑并[4,5-(3]吡啶-6-甲酯用高錳酸鉀氧化為3!1-咪 唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；
[0011] (4)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯在NaOH溶液（2N)中皂化成3H-咪唑并 [4,5-c]吡啶-6-甲酸；
[0012] (5)Boc-Met_0H 與硝基精氨酸芐酯偶聯(lián)得到 Boc-Met-Arg(N02)-0Bzl ;
[0013] (6)Boc-Met-Arg(N02)-0Bzl在4N氯化氫的乙酸乙酯溶液中得到 H-Met-Arg(N02)-0Bzl ；
[0014] (7) 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酸與 L-Met-Arg (N02) -OBzl 偶聯(lián)得到 3H-咪唑 并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Met_Arg(N02)-0Bzl。
[0015] 本發(fā)明的第三個內容是評價3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-Met-Arg (N02) -OBzl對腫瘤細胞增殖的抑制作用。
[0016] 本發(fā)明的第四個內容是評價3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-Met-Arg (N02)-OBzl對荷S180小鼠腫瘤增長的抑制作用。
[0017] 本發(fā)明的第五個內容是評價3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-Met-Arg (N02) -OBz 1對SD大鼠的抗血栓作用。
[0018] 本發(fā)明的第六個內容是評價3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-Met-Arg (N02) -OBzl對ICR小鼠炎癥的抑制作用。
【附圖說明】
[0019] 圖1.3!1-咪唑并[4,5-(3]吡啶-6-甲酰-]\^-厶找(勵2)-(^1的合成路線.1)!1〇10， H20，H2S04,65°C;ii)Me0H，S0Cl 2,0°C;iii)DMF，HZ)g，KMn04;iv)Na0H，H20,0°C ;v):3^S 基碳二亞胺（DCC)，1-羥基苯并三唑（HOBt)，N-甲基嗎啉（NMM)，四氫呋喃（THF) ;vi)4N氯 化氫的乙酸乙酯溶液；vii)二環(huán)己基碳二亞胺（DCC)，1-羥基苯并三唑（HOBt)，N-甲基嗎 啉（NMM)，DMF〇
【具體實施方式】
[0020] 為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應當理解為對本發(fā)明的限制。
[0021] 實施例1化合物6S-4,5,6,7-四氫-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸（1)的制 備
[0022] 10. 00g(64. Smmol) L-組氨酸，30mL水混合于100mL爺瓶中，冰浴下，用恒壓漏斗 逐滴加入2mL濃硫酸，隨濃硫酸的加入，原料逐漸洛解，待其完全洛解后，向反應液中加入 40 %的甲醛溶液10mL，在微波加速反應儀65°C下反應5小時。反應完畢后，冰浴下緩慢滴 加濃氨水調溶液PH6-7,有大量白色沉淀析出，減壓過濾，得到無色固體10. 76g(99. 2% )。 ESI-MS(m/z) :168[M+H]+。
[0023] 實施例2化合物6S-4, 5,6, 7-四氫-3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酸甲酯（2) 的制備
[0024] 冰浴下在100mL茄瓶里加15. 6mL甲醇，冰浴下，用恒壓漏斗緩慢滴加1. 56mL二 氯亞砜，30min后加入1.00g(6mmol)6S-4,5,6,7-四氫-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸 (2)，室溫反應3天后，TLC監(jiān)測反應完全，反應混合物減壓濃縮，殘留物加甲醇溶解并減壓 濃縮。該操作重復3次得白色泡狀固體，再加乙醚抽干重復3次得無色粉末，最后用甲醇/ 乙醚重結晶得〇. 58g(53%)標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z)181[M+H] +。
[0025] 實施例3化合物3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酸甲酯（3)的制備
[0026] 冰浴下在 100mL 茄瓶里加 1. lg(6. lmmol)6S-4,5,6,7-四氫-3H-咪唑并[4,5-c] 吡啶-6-甲酸甲酯（3)，加 DMF使溶解。向該溶液中滴加 lmL三乙胺調pH到8,分三次加入 1.2g(7. 6_〇1)高錳酸鉀。反應6小時后，TLC監(jiān)測反應完畢。反應物吹干，得到的黑色固體 用1NHC1溶液溶解，冰浴下滴加2NNaOH溶液調pH到7，析出大量無色固體。該固體以二氯甲 烷/甲醇為洗脫劑用硅膠柱純化，得〇.68g(63.2% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/ z) 177[M+H]+。
[0027] 實施例4化合物3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-羧酸（4)的制備
[0028] 冰浴下在100mL茄瓶里力卩40mLNa0H溶液（2N)，lOmin后力卩入 5. 30g(29. 9mmol)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯（4)，反應1小時后TLC顯示反應 完畢，冰浴下向反應液中滴加2NHC1溶液調pH到7,析出大量無色固體。該固體以二氯甲 烷/甲醇為洗脫劑用硅膠柱純化，得1. 50g(30% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/ z)162[M-H]。
[0029] 實施例 5 化合物 Boc-Met_Arg(N02)-0Bzl 的制備
[0030] 稱取1. 280g (5mmol) Boc-Met于100mL爺形瓶中，加入40mL無水THF溶解。冰浴攪 拌下依次加入 〇· 675g(5mmol)H0Bt 及 1. 236g(6mmol)DCC，活化 30min。稱取 2. 887g(6mmol) Tos *Arg (N02) -OBzl于50mL燒杯中，用無水THF溶解后，用NMM調pH至8,然后將該溶液滴 加至反應液中，最后用NMM調反應液pH值至8。室溫反應48小時，TLC顯示反應完畢后，反 應液減壓蒸干，剩余油狀物用乙酸乙酯溶解，過濾除去二環(huán)己基脲（DCU)，濾液層依次用飽 和 NaHC03 溶液（20mL X 3)、飽和 NaCl 溶液（20mL X 3)、飽和 KHS04 溶液（20mL X 3)、飽和 NaCl 溶液（20mLX3)、飽和NaHC03溶液（20mLX3)、飽和NaCl溶液（20mLX3)各洗三遍，有機層 用無水Na2S04干燥，過濾、濾液減壓濃縮至干，得到的黃色油狀物經(jīng)硅膠柱層析純化（二氯 甲烷/甲醇為洗脫劑），得到1. 904g (87. 5% )標題化合物，為白色固體。
[0031] 實施例 6 化合物 HC1 · H-Met-Arg (N02) -OBzl 的制備
[0032] 稱取 1. 080g(2mmol)Boc-Met-Arg(N02)-0Bzl 于 100ml 茄瓶中，加入 20ml4N 氯化 氫的乙酸乙酯溶液，冰浴攪拌反應，6小時后TLC顯示反應完畢后，減壓抽干溶劑，加入乙酸 乙酯分散瓶中固體后減壓抽，重復兩次，再用無水乙醚分散瓶中固體，減壓抽干溶劑，重復 三次，得到0. 797(86. 4% )標題化合物，為淡黃色固體。
[0033] 實施例7化合物3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Arg (N02) -OBzl (5)的制 備
[0034] 稱取40mg(0. 23mmol) 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-羧酸于100mL茄形瓶中，加入 30mLDMF。冰浴攪拌下依次加入 31mg (0· 23mmol) HOBt 及 62mg (0· 3mmol) DCC，活化 30min。稱 取 123mg (0· 26mmol) HC1 · Η-Met-Arg (N02) -OBzl 于 50mL 燒杯中，用 DMF 溶解后，用 NMM 調 pH至8,然后將該溶液滴加至反應液中，最后用NMM調反應液pH值至8。室溫反應24小時， TLC顯示反應完畢后，反應液轉移至表面皿中晾干，皿中固體用乙酸乙酯：二氯甲烷1 : 5 混合溶液溶解，過濾除去二環(huán)己基脲（D⑶)，濾液層依次用飽和NaHC03溶液（20mLX 3)、飽 和 NaCl 溶液（2〇mL X 3)、飽和 KHS