一種甾體皂類化合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種從重樓屬(Paris)植物中分離的留體皂 類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥重樓來源于百合科(Liliaceae)重樓屬植物,主要分布于亞歐大陸的熱帶和 溫帶地區(qū),全世界共有24個(gè)種,我國種類最多,有19種,以西南各省區(qū)的種類和資源最為豐 富。本屬植物是一類極具藥用價(jià)值的植物,其根莖在我國有著悠久的藥用歷史,具有清熱解 毒、消腫止痛和涼肝定驚之功效,用于治療癰瘡、毒蛇咬傷、涼風(fēng)抽搐、咽喉腫痛和跌打傷痛 等癥?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明重樓屬植物具有抗腫瘤、心臟保護(hù)、腎臟保護(hù)及抗炎等作用。
[0003] 金線重樓(Parispolyphyllavar.latifolia)主要分布于四川、云南、江西、湖北 和陜西等地,有關(guān)該植物化學(xué)成分及藥理活性的研究尚未見報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種留體皂類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
[0006] 本發(fā)明公開了一種留體皂類化合物,其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:
[0007]
[0008] 該甾體皂類化合物的分子式為C57H92025;命名為:26-0-β-D-吡喃葡 萄糖-3β,26-二羥基-25 (R) -Δ5, 22-二烯-呋甾-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 4) -a-L-吡喃鼠李糖基(1 - 4) -a-L-吡喃鼠李糖基(1 - 4) -β-D-吡喃葡萄糖苷。
[0009] 本發(fā)明還公開了上述的留體皂類化合物在制備治療心血管疾病的藥物和/或保 健品中的應(yīng)用。
[0010] 所述的藥物和/或保健品為對(duì)缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷有保護(hù)作用的藥物 和/或保健品。
[0011] 所述的藥物和/或保健品為降低細(xì)胞血清中LDH含量的藥物和/或保健品。
[0012] 所述的藥物和/或保健品為提高缺氧/復(fù)氧損傷后心肌細(xì)胞存活率的藥物和/或 保健品。
[0013] 本發(fā)明還公開了一種留體皂類化合物的制備方法,包括以下步驟:
[0014] 1)將金線重樓藥材粉碎后,加醇回流提取后,回收溶劑,得醇提物;
[0015] 2)將醇提物分散于水中,先用石油醚萃取,再將萃取后的水相用正丁醇萃取,得到 正丁醇萃取液;
[0016] 3)將正丁醇萃取液采用硅膠柱層析,以氯仿-甲醇-水的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫, 薄層層析檢測(cè),收集含留體皂類化合物的餾分。
[0017] 步驟1)中,金線重樓藥材與加入的醇的料液比為lg: (8~10)mL;加入的醇為甲 醇或乙醇;回流提取1~3次,每次1~3h。
[0018] 步驟2)中,醇提物與水的用量比為lg:(4~8)mL;萃取時(shí),先用石油醚萃取2~4 次,再將萃取后的水相用正丁醇萃取2~4次;步驟3)是以體積比為10:1:0~6. 5:3. 5:1 的氯仿-甲醇-水混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫。
[0019] 在步驟3)收集含留體皂類化合物的餾分后,還包括采用高效液相色譜分離純化 的步驟,具體操作為:將含留體皂類化合物的餾分以體積比為70:30的甲醇-水混合溶劑為 流動(dòng)相進(jìn)行洗脫,制得留體皂類化合物純品
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果:
[0021] 本發(fā)明公開的留體皂類化合物,是從金線重樓中提取分離得到的一種新的留體皂 苷類化合物,結(jié)構(gòu)中苷元及3位糖鏈在重樓屬中較為罕見,通過核磁及ESI-MS分析,確定其 分子式為c57h92o25。
[0022] 本發(fā)明通過體外活性試驗(yàn)證實(shí),該化合物對(duì)缺氧/復(fù)氧模型誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷 有保護(hù)作用,能夠提高缺氧/復(fù)氧損傷后心肌細(xì)胞的存活率,降低血清中LDH含量,有望成 為新的治療心血管疾病的藥物。
[0023] 本發(fā)明還公開了上述留體皂類化合物的制備方法,是從金線重樓中提取分離,方 法操作簡單,提取出的留體皂類化合物純度高、收率好。
【附圖說明】
[0024] 圖1為化合物⑶FR的HR-ESI-MS譜。
[0025] 圖2為化合物⑶FR的1HNMR譜;
[0026] 圖3為化合物⑶FR的13C-NMR譜
[0027] 圖4為化合物⑶FR的DEPT(135。)譜
[0028] 圖5為化合物⑶FR的HSQC譜
[0029] 圖6為化合物⑶FR的1H-1HCOSY譜
[0030] 圖7為化合物⑶FR的HMBC譜
[0031] 圖8為化合物⑶FR的T0CSY譜
[0032] 圖9為化合物GDFR的N0ESY譜
[0033] 圖10為化合物⑶FR關(guān)鍵的HMBC和N0ESY相關(guān)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0034] 下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明,所述是對(duì)本發(fā)明的解釋而 不是限定,未注明具體條件的試驗(yàn)方法,通常按照常規(guī)條件,或按照制造廠商所建議的條 件。未詳細(xì)敘述的測(cè)試方法和英文縮寫屬本行業(yè)的常用方法和公知常識(shí),在網(wǎng)上或文獻(xiàn)中 可以檢索到。
[0035] 本發(fā)明公開的留體皂類化合物,如式I所示:
[0036]
[0037] 上述結(jié)構(gòu)其化學(xué)名稱為26-〇-β-D-吡喃匍萄糖_3β,26_二輕 基-25(R)-A5,22_二烯-呋甾-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基(1 - 4)-a-L_吡喃鼠李糖基 (1 - 4)_a-L-吡喃鼠李糖基(1 - 4)_β-D-吡喃葡萄糖苷。
[0038] 26-〇-β-D-glucopyranosyl-3β, 26-dihydroxy-25(R)-furosta-5, 20(22)-dien -3_〇-a-L-rhamnopyranosyl- (1 一 4) -a-L-rhamnopyranosyl- (1 一 4) -a-L-rhamnopyranos yl_(l一 4)_β-D-glucopyranoside) 〇
[0039] 該化合物是從金線重樓中分離的新的留體皂苷類化合物,以下簡稱其為GDFR。
[0040] 所述式I化合物GDFR的制備方法,具體步驟如下:該化合物的制備方法是金線重 樓藥材經(jīng)粉碎后,按重量體積比加入8~10倍原料重的甲醇或乙醇回流提取,共提取3次, 每次1~3小時(shí)。合并后回收溶劑,得醇提取物,提取物分散于按重量體積比4~8倍的水 中,依次用石油醚、水飽和正丁醇萃取3次,分別得到石油醚和正丁醇的兩個(gè)萃取部位。正 丁醇層采用硅膠柱層析,以體積比為10:1:0~6. 5:3. 5:1的氯仿-甲醇-水混合溶劑梯度 洗脫,薄層層析檢測(cè),收集含式I化合物GDFR的流份,最后經(jīng)高效液相色譜儀分離純化,體 積比為70:30的甲醇-水混合溶劑為流動(dòng)相洗脫,得到⑶FR的純品。
[0041] 所述的式I化合物GDFR的制備方法,除應(yīng)用常規(guī)的溶劑提取、溶劑萃取和各種色 譜分離技術(shù)外,在制備總皂苷時(shí),對(duì)包含有GDFR的總皂苷的確定是采用如下手段來檢查 的:以硅膠薄層層析檢測(cè),采用體積比為10:1的水飽和正丁醇-甲醇混合溶劑或體積比為 6. 5:3. 5:1的氯仿-甲醇-水混合溶劑展開,收集Rf值在0. 2~0. 35處顯示紫紅色斑點(diǎn)的 流份,即為總皂苷。
[0042] 所述的式I化合物⑶FR在濃度為25μmol/L~100μmol/L時(shí)能夠提高缺氧/復(fù) 氧損傷后心肌細(xì)胞的存活率,降低血清中LDH含量,且呈一定的劑量依賴性。
[0043] 本發(fā)明的特點(diǎn)是:式I化合物⑶FR苷元及3位糖鏈在重樓屬中較為罕見。該化 合物對(duì)缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷有明顯的保護(hù)作用,表明其可以進(jìn)一步研發(fā)為新的 治療心血管疾病的藥物。
[0044] 本發(fā)明從金線重樓中通過提取、分離純化得到式I化合物GDFR,該化合物可為研 制新的心血管藥物提供了先導(dǎo)化合物。
[0045] 1、化合物的提取和分離
[0046] 采自陜西省寶雞市太白縣金線重樓根莖為原料,經(jīng)粉碎成粗粉后,取10公斤,加 入80升濃度為70%的乙醇進(jìn)行回流提取,共提取3次,每次2小時(shí)。合并提取液,減壓回收 溶劑,得乙醇提取物780克。
[0047] 將乙醇提取物分散于8升水中,用石油醚萃取3次,每次8升。萃取后的水相再用 正丁醇萃取3次,每次8升,合并正丁醇萃取液,回收溶劑得到總皂苷提取物140克。
[0048] 采用硅膠柱層析,以體積比為10:1:0. 1~6. 5:3. 5:1 (均取下層作為洗脫液)的 氯仿-甲醇-水混合溶劑梯度洗脫,按150mL為一個(gè)流份接收,并用硅膠薄層層析檢測(cè)(薄 層展開溶劑采用體積比為10:1的水飽和正丁醇-甲醇混合溶劑,顯色劑為體積比為1:4的 硫酸-甲醇溶液,噴顯色劑后于l〇5°C加熱顯色),收集Rf值在0. 2~0. 35處顯示紫紅色 斑點(diǎn)的流份,即為含化合物⑶FR的總皂苷混合物,減壓蒸干溶劑后得2. 1克樣品。
[0049] 最后經(jīng)高效液相色譜儀(戴安公司)分離純化(HPLC條件為:YMC-PackR&D0DS-A 色譜柱20X250mm,70%甲醇為流動(dòng)相,流速7mL/min,25°C,206nm紫外檢測(cè)),得到⑶FR的 純品40. 1毫克。
[0050] 2、化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
[0051] 白色無定形粉末(MeOH),Liebermann-Burchard和Molish反應(yīng)均呈陽性,提示該 化合物可能為皂苷類化合物。具體結(jié)構(gòu)鑒定參見圖1~圖10 :
[0052] 參見圖 1,ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z1199[M+Na]+和m/z1175[M-H], 451-]\^給出準(zhǔn)分子離子峰111/2 1199.5834[]\1+似]+ (。&1(3^(^(:57!192025似 1199.5825),結(jié) 合 13C-NMR(125MHz,pyridine-d5)數(shù)據(jù)(Table1),確定其分子式為C57H92025。
[0053] 參見圖2,i-NMR圖譜的高場(chǎng)區(qū)存在7個(gè)單峰,推測(cè)這些峰為甲基的特征信號(hào)峰, 分別是δ〇· 74 (3H,s,CH3-18),0· 97 (3H,s,CH3-27),1. 07 (3H,s,CH3-19),1. 26 (3H,d,J =6. 1Hz,CH3-6""),L27(3H,d,J= 6. 1Hz,CH3-6"),L31(3H,d,J= 6. 2Hz,CH3-6"'), 1.62(3H,s,CH3-21),低場(chǎng)區(qū)可觀察到1個(gè)寬單峰,推測(cè)其為烯烴的特征信號(hào)峰,是 δ5. 42(1H,brs,H-6)。
[0054] 通過對(duì)13C-NMR圖譜(125MHz)和HSQC圖譜的觀察分析,見圖3和圖5,可以得到 7 個(gè)甲基碳信號(hào)δ14. 27 (C-18),17. 46 (C-27),20. 02 (C-19),18. 00 (C-6""),18. 15 (C-6"), 18. 70 (C-6"'),δ12.08(021),一個(gè)雙鍵碳信號(hào)δ122.77(06)和 142.00(05)。同時(shí),在 低場(chǎng)區(qū)還存在一組雙鍵信號(hào)δ105. 27 (C-20),δ153. 02 (C-22),與1H-NMR譜中兩個(gè)寬單峰 的信號(hào)相結(jié)合,可以推測(cè)出化合物苷元有兩個(gè)雙鍵。其中一組雙鍵信號(hào)δ122. 77 (C-6)和 δ142.