專利名稱：：用于合成9α-羥基甾體化合物的工藝方法用于合成9a-羥基甾體化合物的工藝方法本發(fā)明涉及通式(I)的9oc-羥基甾體衍生物的新的選擇性合成，其中_八-八'-表示-012-(^^2-或-(:1^(:11-基團，所述合成通過通式(ii)的化合物的生物轉(zhuǎn)化實現(xiàn)，其中-A-A'-表示-CH2-CH2-或-CHK:H-基團。已知9a-羥基甾體化合物廣泛用于治療中，例如孕甾烷甾體化合物的9a-羥基衍生物具有糖皮質(zhì)激素活性，雄甾烷衍生物的9a-羥基衍生物用作抗雄激素和抗雌激素藥物的活性成分。那些在U位上不具有取代基的9a-羥基甾體化合物可以容易地通過已知的化學方法脫水，這樣獲得的9(11)-脫氫甾體化合物在具有高的生物活性的化合物的合成中是重要的中間體。這樣的化合物是例如具有抗炎活性的氫化可的松(化學名稱11卩,17，21-三羥基-孕甾-4-烯-3,20-二酮)和脫氫皮質(zhì)甾醇(化學名稱1lp,17，21-三羥基-孕甾-l,4-二烯-3，20-二酮)，或依普利酮(eplerenone)(化學名稱9a，1la-環(huán)氧-17p-羥基-3-氧-孕甾-4-烯-7，21-二羧酸Y內(nèi)酯)，后者具有廣泛的指征分布；例如它作為(3-阻斷劑降低由心臟和血管問題引起的死亡風險，并且它可用于治療高血壓和作為利尿劑。厶4_3-酮-孕甾烷家族的成員在9a-位的首次羥化，是由Hanze及同事在1958年使用上坎定安霉屬(Cunninghamella)和巻枝霉屬(Helicostylum)絲狀真菌菌株進行的(參見美國專利3,038,913)。1960年，Sih及同事描述了使用具有V-脫氫酶酶活性的微生物，在存在A1-脫氫酶抑制劑的情況下對甾體化合物進行了9a-羥化(參見美國專利3,065,146)。兩年后，Sebek通過使用Ascochytalinecola菌株，進行了甾體化合物的9a-羥化(參見美國專利3,116,220)。在上面提到的專利中，Sih及同事還列出了分枝桿菌菌株作為具有甾體9a-羥化酶的微生物(參見美國專利3,065,146)。已知，在1977年，F(xiàn)rederick及同事通過誘變處理產(chǎn)生了一株新的分枝桿菌菌株，它只部分降解所檢測的甾醇底物，因此積累了9a-羥基衍生物(參見美國專利4,029,549)。Wovcha使用了同樣的菌株一一偶發(fā)分枝桿菌(Mycobacteriumfortuitum)NRRLB-8119菌株，合成了新的9a-羥基衍生物(參見美國專利4,035,236)。Wovcha及同事研究了偶發(fā)分枝桿菌ATCC6842菌株在甾體骨架降解中的作用。他們發(fā)現(xiàn)，在降解成二氧化碳和水的過程中的關鍵步驟是隨后的A"-脫氫酶和9a-羥化酶的功能。這兩個轉(zhuǎn)化步驟可以互換，兩個反應步驟可以通過兩兩的酶(酶的組)來進行；例如，它們中的一個、V-脫氫酶轉(zhuǎn)化起始原料，另一個A'-脫氫9a-羥基衍生物。在他們的實驗中，他們提出上述的酶可以被誘導；并且通過使用不同的誘導物，形成的產(chǎn)物的量和組成變化顯著[BiochimicaetBiophysicaActa574，471-479(1979)]。1981年，Marsheck及同事，通過使用新的突變的犬股諾卡氏菌4(Nocardiacanicruria)菌株，以不需要使用A'-脫氫酶抑制劑的方式，進行了甾體化合物的9a-羥化。在上面提到的實施例中，9a-羥基-酮內(nèi)酯(化學名稱9a，17-二羥基-3-氧-17a-孕甾-4-烯-21-羧酸y內(nèi)酯)的合成，被描述為從酮內(nèi)酯(化學名稱17-羥基-3-氧-17a-孕甾-4-烯-21-羧酸Y內(nèi)酯)開始；使用0.5g/diT^濃度的酮內(nèi)酯底物，所需的羥化產(chǎn)物以30%的轉(zhuǎn)化率形成(參見美國專利4,397,947)。此外，Mutafov及同事使用紅球菌(Rhodococcussp.)菌株研究了甾體9a-羥化酶的可誘導性，發(fā)現(xiàn)作為產(chǎn)物形成的9a-羥基-4-雄甾烯-3，17-二酮是非常差的誘導物，因為使用它作為誘導物時，反應速度只有一半，形成的9a-羥基產(chǎn)物的量為使用4-雄甾烯-3,17-二酮作為誘導物時的四分之一[ProcessBiochemistry32(7)，585-589(1997)]。Brzostek及同事在基因水平上研究了甾體骨架的降解，發(fā)現(xiàn)阻斷合成9a-羥基甾體衍生物所需的A、脫氫酶酶活性是困難的，因為不僅存在著不同類型的V-脫氫酶，而且在某些情況下基因組含有5個脫氫酶基因[Microbiology151,2393-2402(2005)]。已知在依普利酮(eplerenone)的合成中，除了化學反應步驟之外，還進行了微生物步驟，其中，一種有價值的中間體坎利酮(canrenone)(化學名稱17-羥基-3-氧-17a-孕甾-4，6-二烯-21-羧酸Y內(nèi)酯)的羥化，也使用了微生物(色二孢(Diplodia)、曲霉(Aspergillus)、犁頭霉(Absidiasp.))來進行(參見美國專利申請No.2004/087562禾口2004/097475，以及PCT國際專利申請No2005/000865)。依普利酮的另一種合成可以通過坎利酮的9a-羥化來進行。9a-羥基坎利酮(化學名稱9a，17-二羥基-3-氧-17a-孕甾-4，6-二烯-21-羧酸Y內(nèi)酯)首先由Ng及同事通過微生物羥化來合成(參見PCT國際專利申請No97/21720和匈牙利專利No222,453)，并描述在上面提到的專利的實施例17中。作為產(chǎn)物的9a-羥基坎利酮是在1998年，在Ng及同事的專利的專利權利要求書中首次描述的(參見PCT國際專利申請No98/25948;或后來的美國專利7,129,345)。國際檢索審查機構在PCT專禾U申請No97/21720和98/25948中發(fā)現(xiàn)了18個獨立的發(fā)明，因此他們建議發(fā)明人提交選擇專利申請。結(jié)果，提交了超過100項專利申請，其中有幾個包含了上面提到的專利No.WO-97/21720(參見PCTNo2005/239761)的實施例17。上面提到的實施例17描述了83種潛在具有甾體9a-羥化酶活性的微生物的篩選數(shù)據(jù)，并給出了在坎利酮的生物轉(zhuǎn)化過程中形成的產(chǎn)物的TLC、HPLC/UV禾(JLC/MS數(shù)據(jù)。從其中給出的表，只能看出是否能夠通過上面提到的分析方法在可能的產(chǎn)物中檢測到9a-羥基-坎利酮。在該表中有一株分枝桿菌，偶發(fā)分枝桿菌ATCC6842菌株，但是在適當?shù)牧兄袥]有給出分析數(shù)據(jù)。該菌株的生物轉(zhuǎn)化能力是從文獻中得知的[從1936年開始的出版物，ActaMed.RiodeJaneirol，l]，因此可以推測，發(fā)生了坎利酮的分解(參見美國專利No4，029，549和4,035,236)。這種推測得到了文獻的支持，該文獻在2003年由上面提到的專利族的微生物學家發(fā)明人撰寫。該文獻含有同樣的表，但是該表中的偶發(fā)分枝桿菌菌株是上述的變異體，被開發(fā)用于甾體化合物的9a-羥化，登記號為NRRLB-8119[J.Nat.Prod.66，350-356(2003)〗。在這種情況下，根據(jù)作者，偶發(fā)分枝桿菌NRRLB-8119不產(chǎn)生羥基或脫氫的產(chǎn)物，也不存在代謝。在上面提到的實施例17中，有3種類型的諾卡氏菌屬的菌株，即Nocardiaaurentis、Nocardiacancicruria禾口珊瑚色諾卡氏菌(Nocardiacoralline)菌株。根據(jù)TLC和HPLC測量，兩株菌株的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物類似于9a-羥基坎利酮，但是通過LC/MS分析公開了9a-羥基坎利酮的形成。唯一其中給出了數(shù)字數(shù)據(jù)的9a-羥基坎利酮的微生物合成，描述在上面提到的文獻中多主棒孢霉(Corynesporacassiicola)ATCC16718菌株被用于在搖瓶中進行的好氧發(fā)酵，使用了O.lg/drr^濃度的坎利酮底物，以30%的轉(zhuǎn)化率形成了所需的羥化產(chǎn)物[J.Nat.Prod.66,350-356(2003)]。正如從上面提到的文獻中可以看出的，還沒有工業(yè)上可應用的這種坎利酮或酮內(nèi)酯的9a-羥基衍生物的微生物合成。因此，本發(fā)明的發(fā)明人的發(fā)明的目的是努力設計一種工業(yè)上可應用的微生物工藝方法，用于將通式(II)的甾體作為底物在9位上進行羥化，其中-A-A'-表示-CH2-CH2-或-CH-CH-基團，同時沒有顯著的降解和副產(chǎn)物形成。在本發(fā)明的發(fā)明人最初的實驗中，分枝桿菌被證明最適合用于9a-羥基坎利酮的微生物合成。使用酮內(nèi)酯和坎利酮作為底物，對38株分枝桿菌和諾卡氏菌菌株的轉(zhuǎn)化能力進行了篩選。在這些菌株中，有野生型甾醇降級菌株例如偶發(fā)分枝桿菌ATCC6842，或部分降解骨架的偶發(fā)分枝桿菌NRRLB-8129，以及幾株專門開發(fā)用于9a-羥化的菌株偶發(fā)分枝桿菌NRRLB-8119，分枝桿菌(Mycobacteriumsp.)NCAIM1072，分枝桿菌(Mycobacteriumsp.)NCAIM324。在篩選過程中，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了3株菌株，根據(jù)TLC分析，產(chǎn)生了可檢測量的9a-羥基衍生物，它們是偶發(fā)分枝桿菌NCAIM00327、偶發(fā)分枝桿菌NCAIM00323和諾卡氏菌(Nocardiasp.)RG1369。所有三株菌株都能夠?qū)⑵渲?A-A'-表示-CH2-CH2-基團的通式(II)的化合物，轉(zhuǎn)變成9a-羥基衍生物。但是，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，只有諾卡氏菌RG1369菌株能夠?qū)⑵渲?A-A'-表示-CH:CH-基團的通式(n)的化合物，轉(zhuǎn)變成9a-羥基衍生物。為了改進這種轉(zhuǎn)化能力，本發(fā)明的發(fā)明人在搖瓶中進行了實驗，使用葡萄糖、蔗糖或甘油作為碳源，優(yōu)選為5-25g/dn^甘油、更優(yōu)選15g/di^甘油，并使用酵母提取物、植物蛋白胨或麥芽提取物作為氮源，優(yōu)選使用酵母提取物、植物蛋白胨和麥芽提取物合在一起1-10g/dm3的濃度、更優(yōu)選5-5g/diT^的濃度，在給定條件下應用以其適合的化合物形式的銨、磷酸鹽、鉀、鎂和鐵。培養(yǎng)溫度是28-35°C，優(yōu)選為32°C。當諾卡氏菌RG1369菌株按照上述進行培養(yǎng)，并以4g/dn^的濃度加入坎利酮底物時，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在幾小時內(nèi)，顯著量的甾體化合物分解了，盡管仍然可以分離到9a-羥基坎利酮產(chǎn)物，但在添加底物24小時后，觀察到了甾體骨架的總降解。在本發(fā)明的發(fā)明人進-一步的實驗中，本發(fā)明的發(fā)明人試圖通過使用選擇性誘導物將反應移向9a-羥基坎利酮的形成。在已知的誘導物中，AD(化學名稱:4-雄甾烯-3，17-二酮)和lO,U-二羥基-levodione(化學名稱13-乙基-10，lla-二羥基-4-gonene-3，17-二酮)是有活性的。當10，11-二羥基-levodione被用作誘導物時，分解比AD的情況下晚發(fā)生6-10小時。將10,11-二羥基-levodione誘導物在甲醇-水混合物、優(yōu)選為3:l的混合物中，在升高的溫度下、優(yōu)選在5(TC下進行溶解，并過濾，得到了無菌溶液。將它在延遲期結(jié)束時，在10-24小時時、優(yōu)選在18小時時，以0.01-0.5g/dm3的濃度、優(yōu)選以0.05g/dm3的濃度添加到培養(yǎng)物中。根據(jù)本發(fā)明的發(fā)明人的實驗，可以通過添加A'-脫氫酶抑制劑，例如抗生素氯霉素、土霉素和鏈霉素，以及醌，例如對苯二酚、萘醌和茚三酮，來延遲降解。當使用鏈霉素時，本發(fā)明的發(fā)明人獲得了最好的結(jié)果；分解時間長了3-7小時。在本發(fā)明的發(fā)明人的實驗中，抗生素在誘導后2-8小時、優(yōu)選6小時后添加，終濃度為2-10mg/dm3，優(yōu)選8為6mg/dm3。在分析了本發(fā)明的發(fā)明人的實驗結(jié)果后，本發(fā)明的發(fā)明人認識到，本發(fā)明的發(fā)明人必須嘗試從諾卡氏菌RG1369菌株開始，通過誘變處理和選擇來產(chǎn)生菌株，它可用在工業(yè)化工藝方法中，合成通式(I)的化合物，其中-A-A'-表示-CH2-CH2-或-CH-CH-基團。從可能的誘變處理中，本發(fā)明的發(fā)明人選擇了用波長為254nm的紫外線進行輻照。在誘變處理過程中，將懸浮在生理鹽水中并保持在無菌條件下的諾卡氏菌RG1369培養(yǎng)物，通過已知方法，使用MineralightUVGL-58型燈，從15cm處處理23分鐘，輻照時間是在以前測量的致死曲線的基礎上選擇的。對通過已知方法獲得的純凈的培養(yǎng)物進行篩選，令人吃驚地發(fā)現(xiàn)，存在一個分離株，它能夠?qū)⑵渲蠥-A'-表示-CH2-CH2-或-CI^CH-基團的通式(II)的化合物，轉(zhuǎn)化成其中A-A'-表示-CH2-CH2-或-CH-CH-基團的通式(I)的化合物，而沒有明顯的降解。這樣獲得的諾卡氏菌Fla(RG4451)突變株能夠完成高于80。/。的轉(zhuǎn)化。在對rRNA進行測序后，該細菌被鑒定為鼻疽諾卡氏菌(Nocardiafarcinica)NCAIM(P)-B001342，并在布達佩斯公約的要求下出于專利程序的目的進行了保藏。根據(jù)上面提出的事實，本發(fā)明涉及通式(I)化合物的選擇性合成方法，其中-A-A'-表示-CH2-CH2-或-CH^CH-基團，所述合成通過通式(n)的化合物的生物轉(zhuǎn)化實現(xiàn)，其中-A-A'-表示-CH2-CH2-或-CH《H-基團，該方法包括了使用保藏號為NCAIM(P)-B001342的鼻疽諾卡氏菌細菌菌株，作為生物轉(zhuǎn)化中的羥化微生物。新的突變株鼻疽諾卡氏菌NCAIM(P)-B001342菌株的形態(tài)學特征，顯示出與出發(fā)(starting)菌株諾卡氏菌RG1369菌株有一些小的差異。這種差異大部分可以在YTA瓊脂(其組成成分為10g/dm3tripcasein;lg/dm3酵母提取物；5g/dm3氯化鈉；0.25g/dm3七水硫酸鎂；0.07g/dm3二水氯化鈣；20g/di^瓊脂)的表面上看見起始的諾卡氏菌RG1369菌株產(chǎn)生黃色-橙色的色素，它的表面是平的、有光澤的，大部分形成的培養(yǎng)物可以在瓊脂的表面下而不是其上發(fā)現(xiàn)。與此相反，新的突變株鼻疽諾卡氏菌NCAIM(P)-B001342菌株培養(yǎng)物的表面不平，而是皺的，它們只有少部分可以在瓊脂表面下方發(fā)現(xiàn)。細菌菌株的鑒定通過16SrRNA基因的部分序列分析來進行。10>RG1(諾卡氏菌Fla(RG4451))fullseqed2:CTTGT獲得的序列(1396bp)覆蓋了全基因(1527bp)的91%。所研究菌株的種的鑒定可以在NCBIBLAST命中的基礎上通過應用基因分類學方法來確定RG4451菌株的正確的種命名為鼻疽諾卡氏菌(Nocardiafarcinica)。它在活生物體系統(tǒng)分類學中的位置是鼻疽諾卡氏菌(Nocardiafarcinica)Trevisan1889[3]細胞生物體；細菌界；放線菌門(Actinobacteria);放線菌綱(Actinobacteria);放線菌亞綱(Actinobacteridae);放線菌目(Actinomycetales);棒桿菌亞目(Corynebacterineae);諾卡氏菌禾斗(Nocardiaceae)-，諾卡氏菌屬(Nocardia);鼻疽諾卡氏菌(Nocardiafarcinica)禾中應用的NCBIBLAST[2]鑒定的準確數(shù)據(jù)可訪問性http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/，版本BLASTN2.2.16(Mar-25-2007)數(shù)據(jù)庫所有GenBank+EMBL+DDBJ+PDB序歹ij，但是不含EST、STS、GSS、環(huán)境樣品或O、1或2期HTGS序歹ij;5，284，371個序列；總字符20，692，750，832，算法megablast屬于鼻疽諾卡氏菌種的菌株的16SrRNS基因序列彼此一致或非常相似。在亞屬中相似性也相當高，但是棒狀桿菌亞目(Corynebacterineae)的科的屬(參見諾卡氏菌禾斗(Nocardiaceae)，分枝桿菌科(Mycobacteriaceae))有很大不同。在兩個菌株之間重要并且可以清楚觀察到的差異是在合成其中A-A'-表示-CH2-CTV或-CHK:H-基團的通式(I)的化合物中的轉(zhuǎn)化能力，新的突變株鼻疽諾卡氏菌NCAIM(P)-B001342菌株保留了9a-羥化能力，但是甾體骨架的降解被抑制了。因此，在前面定義的實驗條件下，由于降解受到抑制，9a-羥基產(chǎn)物的量較高，它可以被分離；它可以用在工業(yè)化規(guī)模的合成中。圖1的圖顯示了諾卡氏菌RG1369母株在前面給出的發(fā)酵條件下，使用坎利酮底物的特征性甾體轉(zhuǎn)化樣式。圖2的圖顯示了鼻皰諾卡氏菌NCAIM(P)-B001342菌株在同樣條件下的轉(zhuǎn)化能力。下面的非限制性的實施例對本發(fā)明進行了說明實施例1鼻疸諾卡氏菌NCAIM(P)-B001342的培養(yǎng)物被保持在下面的瓊脂斜面上成分g/dm3土豆葡萄糖瓊脂39瓊脂-瓊脂5滅菌12TC20分鐘將接種的培養(yǎng)物在32'C溫育4天，然后將它在+4-l(TC繼續(xù)放置1230天，以便啟動繁殖。營養(yǎng)體培養(yǎng)通過將表面培養(yǎng)物的懸浮液轉(zhuǎn)移到500ci^搖瓶中的100cr^滅菌過的培養(yǎng)基中來進行，培養(yǎng)基組成如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>將培養(yǎng)物在32r以200rpm搖動48小時，然后將它的10%用于接種在500"113搖瓶中的100ci^滅菌過的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基組成如下<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>將培養(yǎng)物在32"C以200rpm搖動72小時，然后將它的10%用于接種在500cr^搖瓶中的100cn^滅菌過的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基組成如下<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>將培養(yǎng)物在32'C以200rpm搖動72小時，然后在18小時時通過加入5mg溶解在甲醇-水的3:l混合物中的lO，U-二羥基-levodione，來誘導9a-羥化酶的形成。在誘導6小時后，在培養(yǎng)物中加入0.4g溶解在二甲基甲酰胺中的酮內(nèi)酯底物(化學名稱17-羥基-3-氧-17a-孕甾_4-烯-21-羧酸y內(nèi)酯)。在另外16小時后，將培養(yǎng)物用氯仿抽提，將有機層濃縮，將殘留物用乙酸乙酯重結(jié)晶，過濾并干燥。這樣獲得的晶體物質(zhì)為456mg。根據(jù)HPLC測量，它含有74.3%的產(chǎn)物，即339mg(意味著產(chǎn)率為84.7%)的9oc-羥基-酮內(nèi)酯(化學名稱9a,17-二羥基—3-氧-na-孕甾-4—烯-21-羧酸Y內(nèi)酯)。將這樣獲得的產(chǎn)物通過NMR測量進行定性。典型的化學位移如下'/Z層尺卩，A/他，DMS<9-d,0.87(3H，s,18-Me);1.20&1.67(2H,m&m，H-12);1.25(3H,s,19-Me);1.32&1.54(2H，m&m,H-15);1.43&1.48(2H,m&m，H-7);1.47&1.67(2H,m&m，H-l1);1.58&2.33(2H,m&m，H-l);1.65(lH，m,H-9);1.86&2.05(2H，m&m,H-16);1.90(lH，m,H-8);1.92&2.37(2H,m&m，H-20);2.17&2.38(2H，m&m，H-2);2.20&2.43(2H，m&m,H-6);2.40&2.54(2H，m&m,H-21);4.18(lH,s，OH);5.65(lH，m，H-4)/JC層/〃25M他，Z)MSC^(TM從他戸從13.6(C-18);19.4(C-19);22.3(C-15);24.3(C-7);25.8(C-ll);26.5(C-12);27.9(C-l);28.8(C-21);30.5(C-20);31.3(C-6);33.8(C-2);34.8(C-16):37.4(C-8);42.0(C-14);44.0(C-10);44.9(C-13);75.1(C-9);95.3(C-17);124.9(C-4);170.6(C-5);176.3(C-22);197.9(C-3)。實施例2實驗按照實施例1中的描述進行，但是主要階段的培養(yǎng)物是在實驗室發(fā)酵罐中產(chǎn)生的。將接種物培養(yǎng)物在32°C以200卬m搖動72小時，然后將5個搖瓶的內(nèi)含物用于接種9dn^發(fā)酵罐中的5dn^滅菌過的主要階段培養(yǎng)基，培養(yǎng)基組成如下<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>使用3001/min的速度和200dm3/h的曝氣速度在32。C攪拌培養(yǎng)物。在18小時時通過加入250mg溶解在甲醇-水的3:1混合物中的10,11-二羥基-levodione，來誘導培養(yǎng)物中9cc-羥化酶的形成。在誘導6小時后，在培養(yǎng)物中加入5g溶解在乙醇中的坎利酮底物(化學名稱17-羥基-3-氧-17ct-孕甾-4,6-二烯-21-羧酸Y內(nèi)酯)。在同樣的發(fā)酵罐中，在3(TC，以3001/min的攪拌速度和200dm3/h的曝氣速度進行生物轉(zhuǎn)化。在另外16小時后，將培養(yǎng)物用氯仿抽提，將有機層濃縮，將殘留物用乙酸乙酯重結(jié)晶，過濾并干燥。這樣獲得的晶體物質(zhì)為5.66g。根據(jù)HPLC測量，它含有72.4%的產(chǎn)物，即4.1g(意味著產(chǎn)率為82%)的9a-羥基坎利酮(化學名稱9a，17-二羥基-3-氧-17a-孕甾-4，6-二烯-21-羧酸Y內(nèi)酯)。將這樣獲得的產(chǎn)物通過NMR測量進行定性。典型的化學位移如下'柳雄f，層z,DM90-^(TMS^砂戸」力0.92(3H,s，18-Me);1.15(3H，s，19-Me);1.22&1.75(2H,m&m，H-12);1.48&1.67(2H,m&m，H誦ll);1.48&1.77(2H，m&m，H-15);1.64&2.25(2H，m&m，H-l);1.92&2.10(2H，m&m,H-16);1.94&2.36(2H,m&m，H-20);1.97(lH,m，H-8);2.26&2.54(2H,m&m,H-2);2.42&2.57(2H，m&m,H-21);2.50(lH，m，H-9);4.13(lH,s，OH);5.65(lH，br，H隱4);5.89(lH，dd，H-7);6.18(lH，dd，H-6)"C層W^"M他，Z)MS"(9-"6(TMS^砂戸」力13.3(C-18);18.8(C-19);21.5(C-I5);25.2(C-ll);26.2(C-12);26.7(C-l);28.6(C-21);30.4(C-20);33.3(C-2);34.7(C-16);39.2(C-8);40.6(C-14);42.0(C-10);45.5(C-13);74.1(C-9);94.9(C-17);124.6(C-4);127.9(C-6);136.2(C-7);162.5(C-5);176.2(C-22);198.1(C-3)權利要求1.用于選擇性合成通式(I)化合物的方法，其中-A-A′-表示-CH2-CH2-或-CH＝CH-基團，所述合成通過通式(II)的化合物的生物轉(zhuǎn)化實現(xiàn)，其中-A-A′-表示-CH2-CH2-或-CH＝CH-基團，其特征在于通過使用保藏號為NCAIM(P)-B001342的鼻疽諾卡氏菌細菌菌株作為生物轉(zhuǎn)化中的羥化微生物。2.權利要求1的工藝方法，其特征在于獲得80%以上的生物轉(zhuǎn)化率。全文摘要本發(fā)明涉及了通過使用保藏號為NCAIM(P)-B001342的鼻疽諾卡氏菌(Nocardiafarcinica)細菌菌株作為生物轉(zhuǎn)化中的羥化微生物，通式(I)的9α-羥基甾體衍生物的新的選擇性合成，如式Ⅰ，其中-A-A′-表示-CH₂-CH₂-或-CH＝CH-基團，所述合成通過通式(II)的化合物的生物轉(zhuǎn)化實現(xiàn)，如式Ⅱ，其中-A-A′-表示-CH₂-CH₂-或-CH＝CH-基團。文檔編號C07J21/00GK101687903SQ200880023394公開日2010年3月31日申請日期2008年6月30日優(yōu)先權日2007年7月4日發(fā)明者加博爾·洪托什,加博爾·鮑洛格,卡塔林·歐洛斯,卡爾曼·科恩策爾,桑多·埃爾代伊,維拉利·甘喬什,阿尼克·泰格代什申請人:里克特格登有限公司