陽22引按照一個(gè)實(shí)施方式，該方法包括3個(gè)（且僅3個(gè)）連續(xù)分離步驟，即（預(yù)先的）VARIC0L?分離步驟，之后是前述的色譜分離的主要步驟（其可W是例如CY化WET TM分離步 驟或HPLC分離步驟），之后是（額外的）VARIC0L?分離步驟。
[0229] 按照另一個(gè)實(shí)施方式，該方法包括3個(gè)（且僅3個(gè)）連續(xù)分離步驟，即（預(yù)先的） VARIC0L?分離步驟，之后是前述的色譜分離的主要步驟（其可W是例如CY化WET TM分離步 驟或HPLC分離步驟），之后是（額外的）CY化(UET?或HPLC分離步驟。
[0230] 當(dāng)該方法包括2個(gè)或更多個(gè)分離步驟時(shí)，可通過不同的分離單元同時(shí)進(jìn)行所述步 驟，或者它們可通過使用不同的分離單元或通過使用相同的分離單元連續(xù)進(jìn)行。另外，在2 個(gè)分離步驟是在SMB或AMB系統(tǒng)中進(jìn)行的色譜步驟的情況中，可能在相同的SMB或AMB系 統(tǒng)上同時(shí)進(jìn)行運(yùn)些步驟。運(yùn)種在相同設(shè)備上同時(shí)進(jìn)行的示例描述于文件WO2011/080503， 其通過引用納入本文。 陽231] 因此，用于實(shí)施上述分離步驟的分離單元中的一些可W相同。例如，主要的色譜單 元和一個(gè)預(yù)先的分離單元可W是同一個(gè)單元；和/或主要的色譜多納元和一個(gè)額外的色譜 單元可W是同一個(gè)單元；和/或預(yù)先的分離單元和另一個(gè)預(yù)先的分離單元可W是同一個(gè)單 元；和/或一個(gè)預(yù)先的分離單元和一個(gè)額外的分離單元可W是同一個(gè)單元；和/或一個(gè)額 外的分離單元和另一個(gè)額外的分離單元可W是同一個(gè)單元。 陽232] 替代地，所有的分離單元（包括主要色譜單元）可W不同。 陽233] 可在逆向上進(jìn)行各色譜分離步驟（包括色譜分離的主要步驟）。例如，可利用由基 于弱極性樹脂的吸收劑或基于二氧化娃的有機(jī)殘基如烷基（特別是C4、C8、C18、C24、C30)、 苯基或其它本領(lǐng)域技術(shù)人員確定的合適殘基化學(xué)改性的固定相。
[0234] 使用水有機(jī)洗脫劑來進(jìn)行色譜分離的主要步驟。水有機(jī)洗脫劑是一種有機(jī)溶劑或 幾種有機(jī)溶劑和水的混合物。
[0235] 優(yōu)選地，如果方法中存在其它的色譜分離步驟，它們也可使用相應(yīng)的水有機(jī)洗脫 劑進(jìn)行。替代地，使用基本純的有機(jī)溶劑或基本純的有機(jī)溶劑混合物來進(jìn)行其它色譜分離 步驟。 陽236] 可用于本發(fā)明的有機(jī)溶劑（特別是形成水有機(jī)洗脫劑）是例如醇類如乙醇、丙醇、 異丙醇和更優(yōu)選的甲醇；酬類如丙酬或甲基乙基酬；臘類如乙臘；醋類如乙酸甲醋或乙酸 乙醋；巧喃類如四氨巧喃；酸類如、二乙酸或甲乙酸；和上述兩種或更多種的組合。優(yōu)選的 有機(jī)溶劑是甲醇和丙酬。 陽237] 各水有機(jī)洗脫劑的特征在于水與有機(jī)物之比，其是洗脫劑的水組分相對于有機(jī)溶 劑組分的重量比。
[0238] 各水有機(jī)洗脫劑的水與有機(jī)物之比優(yōu)選在0.Ol: 99. 99至30:70中變化，更優(yōu)選在 5:95至25:75中變化。
[0239] 當(dāng)方法中存在至少2個(gè)色譜分離步驟時(shí)，可使用具有相同組成或不同組成的洗脫 劑來進(jìn)行色譜分離。優(yōu)選使用具有不同組成的洗脫劑，并且特別是具有不同的水與有機(jī)物 之比的洗脫劑，因?yàn)檫\(yùn)使得其可能在各分離步驟中調(diào)節(jié)洗脫劑的洗脫力并因此實(shí)現(xiàn)在各步 驟對不同化合物的分離。也可優(yōu)選在不同步驟中使用由不同有機(jī)溶劑組成的洗脫劑，因?yàn)?運(yùn)使得可能在各分離步驟處調(diào)節(jié)某些待分離物質(zhì)之間的色譜選擇性并因此實(shí)現(xiàn)各步驟處 對不同化合物的分離。
[0240] 按照特定實(shí)施方式，控制或調(diào)節(jié)各洗脫劑中有機(jī)溶劑的重量濃度到目標(biāo)值，精度 至少2%、或1%、或0. 5%、或0. 2%、或0. 1%。運(yùn)特別應(yīng)用于第1-80項(xiàng)中所示的所有實(shí)施 方式。運(yùn)可通過使用水和/或有機(jī)溶劑組成和/或通過調(diào)節(jié)本文所述的洗脫劑濃度和再循 環(huán)的參數(shù)來實(shí)施。 陽241] 本發(fā)明的方法得到的最終產(chǎn)品含有純化的第一PUFA和殘留的雜質(zhì)。最終產(chǎn)品 中第一PUFA的量可W例如大于或等于約80%，優(yōu)選大于或等于約90%，或大于或等于約95%，或大于或等于約97%，或大于或等于約98%，或大于或等于約99% (相對于脂肪酸的 總量）。 陽242] 具體地，最終產(chǎn)品可含有大于或等于約80%，或大于或等于約95%，或大于或等 于約97%，或大于或等于約98%，或大于或等于約99%(相對于脂肪酸的總量）的量的EPA;W及小于或等于約1%，或小于或等于約0. 1%，或小于或等于約0. 05%，或小于或等 于約0. 03%，或小于或等于約0.Ol%的量的DHA。 陽243] 可向該最終產(chǎn)品中加入穩(wěn)定劑，如生育酪等。術(shù)語"穩(wěn)定劑"包括穩(wěn)定劑化合物的 混合物。
[0244] 滿脫劑的濃縮巧巧循環(huán)
[0245] 該部分中提供的說明同時(shí)應(yīng)用于本發(fā)明的第一解決方案和第二解決方案。 陽246] 在主要的色譜單元的出口，收集至少2條流，即富集第一（需要的）PUFA的第一洗 脫劑流和富集第二（不需要的）FA的第二洗脫劑流。例如，第一流可W是萃余液且第二流 可W是提取物，反之亦然。 陽247] 本發(fā)明的方法包括至少一個(gè)濃縮步驟，其在濃縮單元中對第二流進(jìn)行。運(yùn)一濃縮 步驟一方面提供了濃縮的FA流，并且另一方面提供了耗盡的第二洗脫劑流。術(shù)語"耗盡的" 是指已經(jīng)從洗脫劑中基本除去第二FA(和任何其它脂肪酸）。也應(yīng)理解表述"濃縮FA流" 是指包含比濃縮步驟前的第二洗脫劑流高的濃度的FA，尤其是第二FA的組合物。該組合物 可包含其它脂肪酸，并且尤其是其它不需要的脂肪酸W及一些水和/或溶劑。
[0248] 然后在該方法中W下文詳述的方式再循環(huán)耗盡的第二洗脫劑流。
[0249] 可通過參考圖1的通用方案來更好地理解色譜分離的主要步驟之后的濃縮和再 循環(huán)階段的一般原理（相同的原理也將應(yīng)用于在其它色譜分離步驟，如預(yù)先的或額外的色 譜分離步驟之后進(jìn)行的濃縮和再循環(huán)階段，如果存在運(yùn)類濃縮和再循環(huán)階段）。
[0250] 通過進(jìn)入的洗脫劑流1并通過進(jìn)入的進(jìn)料流2來進(jìn)料主要色譜單元3。進(jìn)料流2 可W是（初始）進(jìn)料混合物流，如果色譜分離的主要步驟是該方法的第一步驟；或者，如果 已經(jīng)進(jìn)行了一個(gè)或多個(gè)處理步驟，如分離步驟，則進(jìn)料流2可W是中間產(chǎn)物流。 陽巧1] 在主要的色譜單元3的出口處，收集富集第一PUFA的第一洗脫劑流4和富集第二 FA的第二洗脫劑流5。 陽巧2] 向第一濃縮單元6中進(jìn)料富集第一PUFA的第一洗脫劑流4,同時(shí)向第二濃縮單元 7中進(jìn)料富集第二FA的第二洗脫劑流5。 陽巧3] 在各濃縮單元6、7中，蒸發(fā)洗脫劑然后冷凝；因此其基本與所有脂肪酸分離。因 此，在第一濃縮單元6的出口處得到濃縮的FA的流9(具體含有濃縮形式的第一PUFA)而在 第二濃縮單元7的出口處得到濃縮FA的另一條流8(具體含有濃縮形式的第二FA)。同時(shí)， 在第一濃縮單元6的出口處回收耗盡的第一洗脫劑流11(即，耗盡第一PUFA和其它FA)，并 且在第二濃縮單元7的出口處回收耗盡的第二洗脫劑流10(即，耗盡第二FA和其它FA)。 陽巧4] 任選地，耗盡的第一洗脫劑流11可部分或全部再循環(huán)到主要的色譜單元3中或方 法中使用的任意其它分離單元。不存在運(yùn)第一耗盡的洗脫劑流的污染的問題，因?yàn)?，如果?被任何殘留PUFA污染，其將主要是第一（需要的）PUFA，，運(yùn)不會對最終產(chǎn)品（純化形式的 PUFA)的純度造成負(fù)面影響。 陽巧5] 也可部分或完全再循環(huán)耗盡的第二洗脫劑流10。然而，在運(yùn)些情況中，按照本發(fā) 明，為了避免由于夾帶到耗盡的第二洗脫劑流的一些殘留第二（不需要的）FA對最終產(chǎn)品 (純化形式的第一PUFA)的純度的負(fù)面影響而采取特定步驟。將如下詳述運(yùn)些特定步驟。 陽256] 用于進(jìn)行任何濃縮步驟的濃縮單元可W是，例如，具有強(qiáng)制再循環(huán)的降膜蒸發(fā)器， 或者另一種本領(lǐng)域已知的蒸發(fā)器類型，使得能夠蒸發(fā)洗脫劑組分并在裝置的底部留下濃縮 的脂肪酸。 陽巧7]參考圖2,按照一個(gè)實(shí)施方式，濃縮單元包含具有強(qiáng)制再循環(huán)的多管蒸發(fā)器11，其 連接到相分離器13和冷凝器12。待濃縮的洗脫劑流14進(jìn)料到蒸發(fā)器11中。受熱的流離 開蒸發(fā)器11并進(jìn)入相分離器13。在相分離器的出口處，回收濃縮的FA的流15,并且收集 蒸發(fā)的洗脫劑并通向冷凝器12。洗脫劑蒸氣在冷凝器12中冷凝成液體形式。在冷凝器12 的出口處，通過回收管線16收集耗盡的洗脫劑流。 陽25引可用本領(lǐng)域已知的方式來實(shí)施蒸發(fā)技術(shù)W優(yōu)化能量消耗水平，如使用兩種或更多 種作用、蒸氣再壓縮技術(shù)、或例如使用蒸發(fā)的色譜流作為另一色譜流的加熱流體。 陽巧9] 例如，參見圖3。在此，偶聯(lián)2個(gè)濃縮單元，例如，一個(gè)用于處理第一洗脫劑流而另 一個(gè)用于處理第二洗脫劑流（其可W例如與上述定義的第一洗脫劑流和第二洗脫劑流相 同，反之亦然）。第一濃縮單元包含與第一相分離器22和第一濃縮器23連接的第一蒸發(fā)器 21。第一洗脫劑流26進(jìn)料到第一蒸發(fā)器21中。在第一相分離器22的出口處回收濃縮的 脂肪酸流27。也在第一相分離器22的出口處回收蒸發(fā)相并通向第一冷凝器23。
[0260]第二濃縮單元包含第二蒸發(fā)器23,其是與第一冷凝器23相同的裝置。第二蒸發(fā)器 23連接到第二相分離器24和第二冷凝器25。第二洗脫劑流28進(jìn)料到第二蒸發(fā)器23中。 由于來自第一濃縮單元的蒸氣相的冷凝，第二洗脫劑流28的蒸發(fā)（至少部分）受到影響。 在第二相分離器24的出口處回收濃縮的脂肪酸流29。也在第二相分離器24的出口處回收 蒸發(fā)相并通向第二冷凝器25。 陽％1 ] 分別在第一冷凝器23的出口和第二冷凝器25的出口處回收一條或兩條耗盡的洗 脫劑流30。 陽％2] 按照一個(gè)實(shí)施方式，具有強(qiáng)制循環(huán)的蒸發(fā)器可與分批或連續(xù)反萃取柱偶聯(lián)W去除 濃縮的脂肪酸流中的殘留洗脫劑。例如，參考圖4,濃縮單元可包含一方面與冷凝器32偶聯(lián) 并且另一方面與反萃取柱33偶聯(lián)的蒸發(fā)器31。洗脫劑流38進(jìn)料到蒸發(fā)器31中。在蒸發(fā) 器31中生成的蒸發(fā)相通向冷凝器32,并且在冷凝器32的出口處回收耗盡的洗脫劑流37。 蒸發(fā)器31中生成的液相通向反萃取柱33。氣流34 (如氮?dú)饬鳎┮策M(jìn)料到反萃取柱33。在 反萃取柱33的各出口處收集含殘留洗脫劑蒸氣的氣流35和凝縮脂肪酸流36。 陽％3] 濃縮步驟也可包含蒸饋步驟，其中濃縮單元包含至少一根蒸饋柱。例如，參考圖5， 濃縮單元可包含與冷凝器42偶聯(lián)的蒸饋柱41。洗脫劑流43進(jìn)料到蒸饋柱中。在柱頂部回 收蒸氣相并通向冷凝器42。在冷凝器42的出口處收集耗盡的洗脫劑流44。在蒸饋柱41 的底部收集濃縮的脂肪酸流45。
[0264]濃縮步驟也可包括膜過濾步驟，如納米過濾步驟。例如，參考圖6,濃縮單元可包括 納米過濾系統(tǒng)51。洗脫劑流52進(jìn)料到納米過濾系統(tǒng)51中?；厥蘸谋M的洗脫劑流54作為 滲透流。部分的滯留物流再循環(huán)到納米過濾系統(tǒng)51中并且其部分W濃縮的脂肪酸流53回 收。
[02化]也可能使用串聯(lián)的2個(gè)膜過濾步驟。例如，參考圖7,濃縮單元可包含第一納米過 濾系統(tǒng)61和第二納米過濾系統(tǒng)62。洗脫劑流63進(jìn)料到第一納米過濾系統(tǒng)61中。部分的 來自第一納米過濾系統(tǒng)61的滯留物流再循環(huán)到第一納米過濾系統(tǒng)61中并且其部分W濃縮 的脂肪酸流64回收。來自第一納米過濾系統(tǒng)61的滲透流與來自第二納米過濾系統(tǒng)62的 滯留物流混合。部分的運(yùn)種混合流進(jìn)料到第二納米過濾系統(tǒng)62中并且其部分與來自第一 納米過濾系統(tǒng)61的滯留物流混合。最后，回收作為來自第二納米過濾系統(tǒng)62的滯留物流 的耗盡的洗脫劑流65。 陽％6] 也可能在濃縮單元中提供液-液萃取器。例如，參考圖8,濃縮單元可包含與冷凝 器72和液-液萃取器偶聯(lián)的蒸發(fā)器71。洗脫劑流74進(jìn)料到蒸發(fā)器71中。來自蒸發(fā)器71 的蒸發(fā)相通向冷凝器72。在冷凝器72的出口處收集耗盡的洗脫劑流75。來自蒸發(fā)器71 的液相部分再循環(huán)到蒸發(fā)器71中并部分通向液-液萃取器73。在液-液萃取器73的一個(gè) 出口處回收濃縮的脂肪酸流76,并且在液-液萃取器73的另一個(gè)出口處回收殘留水流77。 在一個(gè)替代實(shí)施方式中，可用蒸饋柱代替蒸發(fā)器71。 陽％7] 也可能將膜過濾，如納米過濾的步驟與蒸發(fā)步驟偶聯(lián)。例如，參考圖9,濃縮單元 可包含與冷凝器82和納米過濾系統(tǒng)83偶聯(lián)的蒸發(fā)器81。洗脫劑流84進(jìn)料到納米過濾系 統(tǒng)83中。濃縮的脂肪酸流85作為來自納米過濾系統(tǒng)83的滯留物的一部分進(jìn)行回收。其 它部分的來自納米過濾系統(tǒng)83的滯留物再循環(huán)到納米過濾系統(tǒng)83中。來自納米過濾系統(tǒng) 83的滯留物通向蒸發(fā)器81。來自蒸發(fā)器81的蒸發(fā)相通向冷凝器82。在冷凝器82的出口 處收集耗盡的洗脫劑流86。部分的來自蒸發(fā)器81的液相再循環(huán)到蒸發(fā)器81中，并且部分 的來自蒸發(fā)器81的液相與來自納米過濾系統(tǒng)83的滯留物流混合。
[0268]在另一個(gè)示例中，參考圖10,濃縮單元可包含與冷凝器93和納米過濾系統(tǒng)92偶聯(lián) 的蒸發(fā)器91。洗脫劑流94進(jìn)料到納米過濾系統(tǒng)92中?；厥兆鳛閬碜约{米過濾系統(tǒng)92的 滯留物流的耗盡的洗脫劑流95。部分的來自納米過濾系統(tǒng)92的滯留物流再循環(huán)到納米過 濾系統(tǒng)92中并且其部分通過通向蒸發(fā)器91被進(jìn)一步濃縮。來自蒸發(fā)器91的蒸發(fā)相通向 冷凝器93。在冷凝器93的出口處收集另一條耗盡的洗脫劑流97。部分的來自蒸發(fā)器91 的液相再循環(huán)到蒸發(fā)器91，并且收集其部分W形成濃縮的脂肪酸流96。 陽％9]滿脫劑巧循環(huán)的巧體
[0270]按照本發(fā)明，在色譜分離的主要步驟處得到富集第一（需要的）PUFA的第一洗脫 劑流和富集第二（不需要的）FA的第二洗脫劑流。按照本發(fā)明，至少第二洗脫劑流經(jīng)濃縮 和再循環(huán)。 陽271]也可濃縮并再循環(huán)第一洗脫劑流（也示于圖1)。使用上述的任意濃縮技術(shù)，或 本領(lǐng)域已知的任意其它濃縮技術(shù)可再循環(huán)至少90%，優(yōu)選至少99%并且甚至優(yōu)選至少 99. 9%的運(yùn)種第一洗脫劑流（特別是到主要的色譜單元中）（從脂肪酸如PUFA的高沸點(diǎn)來 看）。 陽272]現(xiàn)在轉(zhuǎn)向第二洗脫劑流的濃縮和再循環(huán)，本發(fā)明的第一解決方案是進(jìn)行濃縮步驟 使得耗盡的第二洗脫劑流的水與有機(jī)物之比（即濃縮后）低于第二洗脫劑流的水與有機(jī)物 之比（即濃縮前）。 陽273]運(yùn)可通過調(diào)節(jié)濃縮階段的參數(shù)來實(shí)現(xiàn)，由于水的沸點(diǎn)與洗脫劑中存在的有機(jī)溶劑 的沸點(diǎn)不同。一般而言，僅部分卻不完全進(jìn)行蒸發(fā)或蒸饋或其它濃縮方法，W產(chǎn)生富集有機(jī) 溶劑并耗盡水（和脂肪酸）的蒸氣相并且然后收集該蒸氣相W形成耗盡的第二洗脫劑流。
[0274] 按照一個(gè)實(shí)施方式，耗盡的第二洗脫劑流的水與有機(jī)物之比相對于第二流出物流 的水與有機(jī)物之比降低約1%至約10%。
[0275] 按照一個(gè)實(shí)施方式，耗盡的第二洗脫劑流的水與有機(jī)物之比相對于第二流出物流 的水與有機(jī)物之比降低約10 %至約20%。
[0276] 按照一個(gè)實(shí)施方式，耗盡的第二洗脫劑流的水與有機(jī)物之比相對于第二流出物流 的水與有機(jī)物之比降低約20%至約30%。
[0277] 按照一個(gè)實(shí)施方式，耗盡的第二洗脫劑流的水與有機(jī)物之比相對于第二流出物流 的水與有機(jī)物之比降低約30%至約40%。
[027引按照一個(gè)實(shí)施方式，耗盡的第二洗脫劑流的水與有機(jī)物之比相對于第二流出物流 的水與有機(jī)物之比降低約40%至約50%。 陽279]按照一個(gè)實(shí)施方式，耗盡的第二洗脫劑流的水與有機(jī)物之比相對于第二流出物流 的水與有機(jī)物之比降低約50%至約60%。 陽280] 按照一個(gè)實(shí)施方式，耗盡的第二洗脫劑流的水與有機(jī)物之比相對于第二流出物流 的水與有機(jī)物之比降低約60 %至約70%。 陽281] 按照一個(gè)實(shí)施方式，耗盡的第二洗脫劑流的水與有機(jī)物之比相對于第二流出物流 的水與有機(jī)物之比降低約70 %至約80%。 陽282] 按照一個(gè)實(shí)施方式，耗盡的第二洗脫劑流的水與有機(jī)物之比相對于第二流出物流 的水與有機(jī)物之比降低約80 %至約90%。 陽283] 按照一個(gè)實(shí)施方式，耗盡的第二洗脫劑流的水與有機(jī)物之比相對于第二流出物流 的水與有機(jī)物之比降低約90 %至約95%。 陽284] 按照