專(zhuān)利名稱(chēng)：蛋白質(zhì)偶聯(lián)物及其藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑技術(shù)，更具體地說(shuō)，涉及新型的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物及其 制備方法和含有該蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
在藥物研究中發(fā)現(xiàn)，有近40%的藥物是水難溶性的， 一些藥物甚至難溶 于有機(jī)溶劑，導(dǎo)致其生物利用度低。在制劑過(guò)程中，采用環(huán)糊精包合技術(shù)、 表面活性劑增溶、乳劑、微乳及固體分散技術(shù)等可解決一些難溶性藥物的低 生物利用度問(wèn)題，但仍有大量的藥物由于生物利用度問(wèn)題而被放棄使用。而 納米混懸技術(shù)給這些藥物提供了重現(xiàn)自身價(jià)值的機(jī)會(huì)。納米混懸劑系釆用少 量表面活性劑或其它載體穩(wěn)定純藥物粒子所形成的一種亞微米膠體分散體 系。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，納米混懸劑能增加藥物溶出度、提高藥物的生物利 用度、增加藥物穩(wěn)定性及提高藥效，這使得那些溶解性差的抗生素類(lèi)藥物、 抗腫瘤藥物和一些治療窗窄的藥物能發(fā)揮更好的作用。而且一些水溶性藥物
也可以制成納米混懸劑增加靶向性或可以緩釋(朱建芬,吳祥根；納米混懸劑
的制備方法及在藥劑學(xué)中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志；2006年03 期196-200 )。
2005年，F(xiàn)DA批準(zhǔn)了 American Pharmaceutical Partners公司開(kāi)發(fā)的以人血 清白蛋白(HSA)為載體的紫杉醇產(chǎn)品Abraxane， Abranane具有勝過(guò)紫杉醇 注射液(Taxol)的顯著優(yōu)點(diǎn)。該產(chǎn)品是將紫杉醇與人血清白蛋白結(jié)合的一種 納米混懸制劑。由于Abraxane的溶解度較紫杉醇大大提高，不必使用毒性溶 劑，無(wú)需前驅(qū)給藥預(yù)防過(guò)敏反應(yīng)，可采用標(biāo)準(zhǔn)靜脈輸注導(dǎo)管、以較Taxol高 50%的劑量、于30分鐘內(nèi)靜脈給藥。臨床試驗(yàn)顯示，Abraxane用于治療經(jīng)蒽環(huán) 類(lèi)藥物輔助聯(lián)合化療失敗或6個(gè)月內(nèi)又復(fù)發(fā)的轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人后，其療效 反應(yīng)率和病人存活率都顯著優(yōu)于Taxol。研究顯示Abraxane在快速生長(zhǎng)的腫瘤
中可以被動(dòng)積蓄。Abraxane中紫杉醇納晶保持長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定的原因在于 一方 面在于人血清白蛋白分子間在高壓和高剪切力作用下二硫鍵交聯(lián)在紫杉醇納 晶周?chē)纬梢粚油鈿?；?一方面在于人血清白蛋白分子荷電所形成的空間靜 電排斥力。國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)((公布號(hào)WO/1998/014174)發(fā)明名稱(chēng)PROTEIN STABILIZED PHARMACOLOGICALLY ACTIVE AGENTS, METHODS FOR THE PREPARATION THEREOF AND METHODS FOR THE USE THEREOF ) 介紹了 Abraxane的制備方法。
人血清白蛋白作為注射用紫杉醇納米混懸劑的載體已經(jīng)取得了很大的成 功，但還存在不足 一方面Abraxane為一皮動(dòng)靶向制劑，尚可進(jìn)一步研究制成 主動(dòng)靶向制劑，提高靶向于腫瘤組織的能力；另一方面在我們的研究中發(fā)現(xiàn) 對(duì)紫杉醇、環(huán)孢素A外的其他藥物的納晶穩(wěn)定性能較弱。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新型的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物。
本發(fā)明的另 一個(gè)目的是提供包含上述蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的藥物組合物。
本發(fā)明的另 一個(gè)目的是提供上述蛋白質(zhì)偶聯(lián)物及包含上述蛋白質(zhì)偶聯(lián)物 藥物組合物的制備方法。
具體地說(shuō)，本發(fā)明公開(kāi)了一種新型的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物為蛋白質(zhì) 與胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的偶聯(lián)物，其中，所述的蛋白質(zhì)是血 清白蛋白，選自人血清白蛋白、重組人血清白蛋白或牛血清白蛋白，優(yōu)選地 為人血清白蛋白；所述內(nèi)源性物質(zhì)選自膽酸或其衍生物、寡聚透明質(zhì)酸、磷 脂酰絲氨酸、葉酸中的一種或者兩種以上的組合。
所述的膽酸及其衍生物，其中膽酸的化學(xué)式為3a,7a, 12a-三羥基膽甾烷 -24隱酸，也稱(chēng)為膽烷酸、colalin 、 cholalic acid等;膽酸衍生物，選自去氧膽 酸、去氫膽酸、鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸、豬去氧膽酸、石膽酸、甘氨膽酸、 ?；悄懰帷⒏拾冰Z脫氧膽酸、牛^黃鵝脫氧膽酸、甘氨去氧膽酸、牛磺去氧膽 酸、甘氨豬去氧膽酸、牛磺豬去氧膽酸、甘氨熊去氧膽酸、牛磺熊去氧膽酸、 甘氨石膽酸、牛磺石膽酸等。
所述的寡聚透明質(zhì)酸在本發(fā)明中是指分子量為1000 ~ 10000道爾頓的透
明質(zhì)酸。
人血清白蛋白、重組人血清白蛋白、牛血清白蛋白、葉酸、磷脂酰絲氨 酸在本發(fā)明中無(wú)特殊限制。
本發(fā)明所述內(nèi)源性物質(zhì)的羧基任選地與胱氨酸或半胱氨酸的氨基進(jìn)行酰 胺反應(yīng)，生成相應(yīng)的含有二硫鍵或巰基的衍生物。白蛋白中含有較多的半胱 氨酸殘基，在受熱的情況下可以和上述含有二硫鍵或巰基的衍生物進(jìn)行交聯(lián)， 得到新型蛋白質(zhì)偶聯(lián)物。該偶聯(lián)物的結(jié)構(gòu)特征為內(nèi)源性物質(zhì)的羧基與半胱氨 酸或胱氨酸結(jié)構(gòu)的伯氨基通過(guò)酰胺鍵偶聯(lián)后再通過(guò)半胱氨酸結(jié)構(gòu)與血清白蛋 白以二硫鍵偶聯(lián)，蛋白質(zhì)之間通過(guò)二硫鍵進(jìn)一步偶聯(lián)。
在本發(fā)明的新型蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的結(jié)構(gòu)中，基本上每個(gè)血清白蛋白與1 -35 個(gè)本發(fā)明所述內(nèi)源性物質(zhì)通過(guò)上述方式偶聯(lián)；而且，基本上每個(gè)本發(fā)明所述 內(nèi)源性物質(zhì)有l(wèi)-25個(gè)羧基與l-25個(gè)半胱氨酸結(jié)構(gòu)的伯氨基通過(guò)酰胺鍵偶聯(lián)，再 通過(guò)半胱氨酸結(jié)構(gòu)與單個(gè)或多個(gè)血清白蛋白以l-25個(gè)二硫^t偶聯(lián)；新型蛋白 質(zhì)偶聯(lián)物同時(shí)可以有半胱氨酸通過(guò)二硫4建與之偶聯(lián)；本發(fā)明所述內(nèi)源性物質(zhì) 中的一種或幾種可以混合通過(guò)上述方式與血清白蛋白以二石危鍵偶聯(lián)；上述結(jié) 構(gòu)均在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
此外，本發(fā)明還提供了含有藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中的藥用 載體含有上述新型蛋白偶聯(lián)物。
任何適當(dāng)?shù)乃巹┛捎糜诒景l(fā)明的藥物組合物中，適當(dāng)?shù)乃巹┌ǖ粌H 限于解熱鎮(zhèn)痛劑、平喘藥、抗生素、抗抑郁藥、抗糖尿病藥、抗炎藥、抗腫 瘤藥、抗焦慮藥、免疫制劑、鎮(zhèn)靜催眠劑、抗心絞痛藥、抗精神病藥、抗躁 狂藥、抗關(guān)節(jié)炎藥、抗心律失常藥、抗痛風(fēng)藥、抗凝劑、血栓溶解劑、抗纖 溶劑、血液流變學(xué)藥物、抗血小板藥物、抗驚厥藥、抗巴金森藥物、抗組胺 藥、用于鈣調(diào)節(jié)的藥物、抗病毒藥物、支氣管擴(kuò)張劑、激素、降脂藥、蛋白 質(zhì)、多肽、核酸、抗?jié)兓蚩狗戳魉幬?、止吐藥、診斷藥劑、和營(yíng)養(yǎng)性藥品。 其中優(yōu)選地，藥劑是抗肺瘤藥，具體的包括但不僅限于紫杉醇及其衍生物、 多西他賽、喜樹(shù)堿及其衍生物、依托泊苷、替尼泊苷、鹽酸阿霉素、環(huán)磷酰 胺、放線菌素、博來(lái)霉素、正定霉素、阿霉素、表阿霉素、絲裂霉素、曱氨 喋呤、5-氟尿嘧啶、卡鉑、卡氮芥、洛莫司汀、順鉑、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、
三苯氧胺、哌酰硫烷、苯芥膽甾醇。更優(yōu)選地，藥劑是紫杉醇或其衍生物[具 體的紫杉醇衍生物，參見(jiàn)"李燕，王永華，房華，等.紫杉醇類(lèi)衍生物的定
量結(jié)構(gòu)-抗癌活性關(guān)系研究進(jìn)展，《中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)》，2008, 24 ( 3 ): 288 ~
喜樹(shù)堿或其衍生物[具體的喜樹(shù)堿衍生物，參見(jiàn)"游亮，張萬(wàn)年，張麗君，繆 震元.喜樹(shù)堿及其衍生物最新研究進(jìn)展，《中國(guó)藥物化學(xué)雜志》，2007， 17 (5 ) : 327-332"，該文獻(xiàn)的內(nèi)容及其參考文獻(xiàn)全部地引入這里作為參考]。 最優(yōu)選地，藥劑是紫杉醇。
本發(fā)明還提供了上述新型蛋白質(zhì)偶聯(lián)物及其藥物組合物的制備方法。
本發(fā)明提供了制備本發(fā)明的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的方法，其包括如下步驟
1 )所述的蛋白質(zhì)、和一種以上的胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)溶 于適當(dāng)?shù)娜軇┲校?br> 2) 步驟l)所得到的混合物受熱，溫度為20-80度，優(yōu)選25-70度，最優(yōu) 選30-60度；
3) 分離去除未交聯(lián)的胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)；
4) 千燥；
這里，所述蛋白質(zhì)、內(nèi)源性物質(zhì)的定義同上，所述適當(dāng)?shù)娜軇┛蛇x自水、 曱醇、無(wú)水乙醇、含一定量水的乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、 叔丁醇、二甲基亞砜、N,N - 二曱基曱酰胺、N,N - 二曱基乙酰胺、乙酸 甲酯、乙酸乙酯、醋酸異丙酯、丙酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、甲苯、 四氫呋喃、1,4 一二氧六環(huán)、二甲氧基乙烷、二氯甲烷、二氯乙烷、三氯曱 烷、四氯曱烷或乙醚中的一種，或者兩種以上的組合，優(yōu)選地，溶劑是水、 乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、或四氯甲烷中的一種，或者兩種以上的組 合；
所述分離未交聯(lián)的胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)可以采用超濾、 高速離心、透析等方法，優(yōu)選超濾、高速離心法；
所述溶液的干燥方法包括冷凍干燥、噴霧干燥、減壓干燥、常壓干燥等， 優(yōu)選冷凍千燥、噴霧干燥和減壓千燥；
更具體地說(shuō)，上述的制備方法包括
將血清白蛋白與胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)溶于水中，溶液受 熱，分離未交聯(lián)的胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)，千燥，即得到本發(fā) 明蛋白質(zhì)偶聯(lián)物。
或者將胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)溶于適當(dāng)?shù)钠渌撬軇┲?后與血清白蛋白水溶液混合形成乳液，再經(jīng)過(guò)受熱、分離、千燥，得到本發(fā)
明蛋白質(zhì)偶聯(lián)物。
其中，血清白蛋白與胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的摩爾比為
0.001:1-1000:1，優(yōu)選為O.Ol :1-100，更優(yōu)選為35: 1-1: 35;
血清白蛋白的水溶液濃度為O.OOl %-50% ( w/v),優(yōu)選為0.01%-10% (w/v) j
胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的水溶液濃度為0.00001 % -50% (w/v),優(yōu)選為0.0001 %-10% (w/v).
或者胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的非水溶劑濃度為0.001% ~ 50% (、v/v)，優(yōu)選為0.01% ~30% (w/v);
胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)中羧基偶聯(lián)程度為2% ~99%,優(yōu)選 為2% ~ 50%。
本發(fā)明提供了制備含有本發(fā)明蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的藥物組合物的方法，可選 用下列兩種方法中的一種
A.制備所述的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物；將偶聯(lián)物與藥劑混合；
1 )將所述的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物和藥物溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲校?br> 2) 步驟l )所得到的混合物受熱，溫度為20-80度，優(yōu)選25-70度，最優(yōu) 選30-60度；
3) 干燥；
這里，所述的蛋白質(zhì)、內(nèi)源性物質(zhì)、適當(dāng)?shù)娜軇⒏稍锓椒ㄍ稀?更具體地說(shuō)，該制備方法為
將蛋白質(zhì)偶聯(lián)物溶于水中，藥物溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲校旌蟽煞N溶液形成
乳液，受熱，千燥，即得到本發(fā)明蛋白質(zhì)偶聯(lián)物包裹的藥物納米混懸劑； 其中，
蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的水溶液濃度為0.001%-50% (w/v)，優(yōu)選為0.01%-10% (w/v);
藥物溶液的濃度為O.OOl % ~50% (w/v)，優(yōu)選為0.01% ~30% (w/v);
蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的水溶液與藥物溶液的體積比為0.0001 : 1 ~ 10000: 1,優(yōu) 選為5:1 ~ 100:1;B.
1 )將所述的蛋白質(zhì)、 一種以上的胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)和 藥物溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲校?br> 2)步驟l)所得到的混合物受熱，溫度為20-80度，優(yōu)選25-70度，最優(yōu) 選30-60度；
這里，所述的蛋白質(zhì)、內(nèi)源性物質(zhì)、適當(dāng)?shù)娜軇?、干燥方法同上?更具體地說(shuō)，該制備方法為
將血清白蛋白與胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)溶于水中，藥物溶 于適當(dāng)?shù)娜軇┲?，混合兩種溶液形成乳液，受熱，任選地分離未交聯(lián)的胱氨 酸或半胱氨酸修飾的寡聚透明質(zhì)酸，干燥，即得到本發(fā)明蛋白質(zhì)偶聯(lián)物包裹 的藥物納米混懸劑；
或者將胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)和藥物溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲校?與血清白蛋白水溶液混合形成乳液，受熱，千燥，即得到本發(fā)明蛋白質(zhì)偶聯(lián) 物包裹的藥物納米混懸劑。在本方法中蛋白質(zhì)偶聯(lián)物和藥物納米混懸劑同時(shí)制備。
其中，
血清白蛋白與胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的摩爾比為 0.001:1-1000:1，優(yōu)選為0.01:1掘:1 ，更優(yōu)選為35:1-1:35。;
血清白蛋白的水溶液濃度為0.001 % -50% ( w/v ),優(yōu)選為0.01 % -10%
(w/v);
胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的水溶液濃度為0.00001 % -50% (w/v),優(yōu)選為0.0001 % -10% (w/v);
胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的非水溶劑濃度為0.001 % ~50% (w/v)，優(yōu)選為0.01% ~30% (w/v);
藥物溶液的濃度為0.001% ~50% (w/v)，優(yōu)選為0.01% ~30% (w/v);
血清白蛋白和胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的水溶液與藥物溶液 的體積比為0.0001 : 1 ~ 10000: 1，優(yōu)選為5 : 1 ~ 100: 1;
血清白蛋白水溶液與胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)和藥物的溶液 的體積比為0.0001 : 1 ~ 10000: 1，優(yōu)選為5 : I ~ 100: 1。
在本發(fā)明蛋白質(zhì)偶聯(lián)物及其藥物組合物的制備方法中， 含有二硫鍵或巰基的化合物在受熱的情況下即可進(jìn)行交聯(lián)，因此凡是可 以產(chǎn)生熱量的設(shè)備或方法均可能使血清白蛋白與胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi) 源性物質(zhì)進(jìn)行偶聯(lián)，所以這些設(shè)備或方法例如超聲、微波、紅外、噴霧干燥 等、高壓均質(zhì)、高速剪切、高速攪拌、真空干燥等均在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)， 優(yōu)選高壓均質(zhì)機(jī)對(duì)血清白蛋白與胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的水溶 液或乳液進(jìn)行均質(zhì)，由于高壓和剪切力產(chǎn)生的熱量，血清白蛋白與胱氨酸或 半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)會(huì)偶聯(lián)。
本發(fā)明的有益技術(shù)效果為 一般的修飾白蛋白方法需要毒性有機(jī)溶劑和 催化劑，產(chǎn)物難于分離精制， 一般不能用于靜脈注射。本發(fā)明以氨基酸殘基 中二硫鍵的交聯(lián)為反應(yīng)基礎(chǔ)，采用制劑設(shè)備和方法對(duì)人血清白蛋白進(jìn)行化學(xué) 修飾，設(shè)計(jì)思路獨(dú)特，不需要毒性有機(jī)溶劑和催化劑，反應(yīng)簡(jiǎn)單易行，產(chǎn)物 易于分離精制和進(jìn)行質(zhì)量控制。
此外，本發(fā)明通過(guò)人體內(nèi)源性物質(zhì)寡聚透明質(zhì)酸和葉酸修飾血清白蛋白 可以制備具有主動(dòng)靶向腫瘤特點(diǎn)的新型納米混懸劑栽體，提高抗腫瘤藥物的 靶向性。血清白蛋白作為納米混懸劑的載體，對(duì)紫杉醇外的其他抗腫瘤藥物 的納晶穩(wěn)定性能較弱，體系中也不能加入其它表面活性劑，否則穩(wěn)定性更差。 本發(fā)明通過(guò)人體內(nèi)源性物質(zhì)磷脂酰絲氨酸和去氧膽酸修飾血清白蛋白，增加 了血清白蛋白作為注射用納米混懸劑載體的適用抗腫瘤藥物范圍，例如多西
他賽。采用所述納米混懸劑載體，可使荷瘤棵鼠瘤體的相對(duì)攝取率(re)提高 25-60 % ，把向效率(te)提高20-80 % ，峰濃度比(Ce)提高15-80 % 。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例l
超聲波處理制備葉酸-牛血清白蛋白偶聯(lián)物
將30.0ml牛血清白蛋白(1 % ， w/v)和胱氨酸修飾的葉酸(O.T/。 ， w/v)溶液 在60kHz的超聲處理器內(nèi)處理2分鐘，加水稀釋?zhuān)肿恿繛閘萬(wàn)的超濾膜超濾， 濃縮液冷凍干燥，即得到葉酸偶聯(lián)的牛血清白蛋白。
實(shí)施例2
用高壓勻質(zhì)法制備寡聚透明質(zhì)酸-人血清白蛋白偶聯(lián)物
將200.0ml人血清白蛋白(1 % , w/v)和胱氨酸修飾的寡聚透明質(zhì)酸(0.1 % , w/v，寡聚透明質(zhì)酸分子量為3500，胱氨酸偶聯(lián)度為10%)溶液轉(zhuǎn)移到高壓勻 質(zhì)器內(nèi)，高壓勻質(zhì)循環(huán)5次，勻質(zhì)液加水稀釋?zhuān)肿恿繛?萬(wàn)的超濾膜超濾， 濃縮液冷凍干燥，即得到寡聚透明質(zhì)酸偶聯(lián)的人血清白蛋白。
實(shí)施例3
用高壓勻質(zhì)法制備含有葉酸-人血清白蛋白偶聯(lián)物的紫杉醇納米混懸劑
將200mg紫杉醇(Paclitaxel)溶于2.7ml的氯仿和0.3ml的無(wú)水乙醇中，加入 97.0ml人血清白蛋白(3。/。 ， w/v)和胱氨酸修飾的葉酸(0.3。/。 ， w/v)水溶液，混 合物在低轉(zhuǎn)速下勻漿5分鐘，以形成粗制乳化液，然后將其轉(zhuǎn)移到高壓勻質(zhì)器 內(nèi)，高壓勻質(zhì)循環(huán)8次，勻質(zhì)液在40。C減壓下蒸發(fā)20分鐘迅速除去二氯甲烷， 得到的分散液為半透明，紫杉醇顆粒的直徑一般為130 ~ 160nm，加水稀釋?zhuān)?分子量為l萬(wàn)的超濾膜超濾，將濃縮液冷凍千燥48小時(shí)，不加任何凍千支撐劑。 所得餅塊加入無(wú)菌水或生理鹽水后很易再構(gòu)成原來(lái)的分散液，再構(gòu)成后顆粒 大小與冷凍干燥前相同。
本實(shí)施例中人血清白蛋白的葉酸偶聯(lián)物和紫杉醇納米混懸劑同時(shí)制備， 人血清白蛋白的葉酸偶聯(lián)物包圍在紫杉醇純藥物納米顆粒外作為穩(wěn)定劑。
實(shí)施例4
用高壓勻質(zhì)法制備含有磷脂酰絲氨酸-人血清白蛋白偶聯(lián)物的多西他賽 納米混懸劑
將30mg多西他賽、30mg胱氨酸修飾的磷脂酰絲氨酸溶于3.Oml二氯曱烷， 加入30.0ml人血清白蛋白(1 % ， w/v)，混合物在低轉(zhuǎn)速下勻漿5分鐘，以形成 粗制乳化液，然后將其轉(zhuǎn)移到高壓勻質(zhì)器內(nèi)，高壓勻質(zhì)循環(huán)8次，勻質(zhì)液在 4(TC減壓下蒸發(fā)30分鐘除去二氯甲烷，得到的分散液為半透明，多西他賽顆 粒的直徑一般為180 230i皿，冷凍干燥48小時(shí)，不加任何凍千支撐劑。所得 餅塊加入無(wú)菌水或生理鹽水后很易再構(gòu)成原來(lái)的分散液，再構(gòu)成后顆粒大小 與冷凍干燥前相同。
本實(shí)施例中人血清白蛋白的磷脂酰絲氨酸偶聯(lián)物和多西他賽納米混懸劑 同時(shí)制備，人血清白蛋白的磷脂酰絲氨酸偶聯(lián)物包圍在多西他賽純藥物納來(lái) 顆粒外作為穩(wěn)定劑。
實(shí)施例5
葉酸-人血清白蛋白偶聯(lián)物的紫杉醇納米混懸劑用高壓勻質(zhì)法制備含有 膽酸-牛血清白蛋白偶聯(lián)物的尼莫地平納米混懸劑
將30mg尼莫地平、30mg胱氨酸修飾的膽酸溶于3.0ml乙醇中，加入30.0ml 人血清白蛋白(2 % )中，然后迅速轉(zhuǎn)移到高壓勻質(zhì)器內(nèi)，高壓勻質(zhì)循環(huán)6次，勻 質(zhì)液在40。C減壓下蒸發(fā)除去大部分乙醇，得到的分散液為半透明，尼莫地平 顆粒的直徑一般為320 460nm，真空干燥8小時(shí)，再加入生理鹽水后很易再 構(gòu)成原來(lái)的分散液，再構(gòu)成后顆粒大小與真空干燥前相同。
本實(shí)施例中牛血清白蛋白的膽酸偶聯(lián)物和尼莫地平的膽酸偶聯(lián)物納米混 懸劑同時(shí)制備，牛血清白蛋白的膽酸偶聯(lián)物包圍在尼莫地平純藥物納米顆粒 外作為穩(wěn)定劑。
實(shí)施例6
用人乳腺癌細(xì)胞抹MCF-7接種棵鼠右前肢皮下，待瘤體直徑長(zhǎng)至約IO mm時(shí)開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分組，分別尾靜脈注射相同劑量的Abraxane、葉酸-人 血清白蛋白偶聯(lián)物的紫杉醇納米混懸劑(按實(shí)施例3制備)，測(cè)定不同時(shí)間體
內(nèi)血濃和不同組織內(nèi)的藥物分布，用3P97軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果與 Abraxane相比，人乳腺癌棵鼠瘤體的相對(duì)攝取率(re)提高55 % ，靶向效率
(te)提高48%，峰濃度比(Ce)提高42%。
權(quán)利要求
1.一種蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，其特征在于該偶聯(lián)物為白蛋白與胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)偶聯(lián)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，其中所述的白蛋白選自人血清 白蛋白.重《且,&血5青白蛋白或牛血清白蛋白。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，其中所述的內(nèi)源性物質(zhì)選自膽 酸或其衍生物、磷脂酰絲氨酸、寡聚透明質(zhì)酸或葉酸中的一種或者兩種以上 的組合。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的蛋白偶聯(lián)物，其中白蛋白與胱氨酸或半胱氨酸 修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的摩爾比為0.01:1 -10 0:1 。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的蛋白偶聯(lián)物，其中白蛋白與胱氨酸或半胱氨酸 修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的摩爾比為3 5:1 -1:35 。
6. —種包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述的藥用載體包含權(quán) 利要求1至5中任一權(quán)利要求所述的蛋白偶聯(lián)物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中所述的藥劑選自解熱鎮(zhèn)痛 劑、平喘藥、抗生素、抗抑郁藥、抗糖尿病藥、抗炎藥、抗腫瘤藥、抗焦慮 藥、免疫制劑、鎮(zhèn)靜催眠劑、抗心絞痛藥、抗精神病藥、抗躁狂藥、抗關(guān)節(jié) 炎藥、抗心律失常藥、抗痛風(fēng)藥、抗凝劑、血栓溶解劑、抗纖溶劑、血液流 變學(xué)藥物、抗血小板藥物、抗驚厥藥、抗巴金森藥物、抗組胺藥、用于鈣調(diào) 節(jié)的藥物、抗病毒藥物、支氣管擴(kuò)張劑、激素、降脂藥、蛋白質(zhì)、多肽、核 酸、抗?jié)兓蚩狗戳魉幬?、止吐藥、診斷藥劑、和營(yíng)養(yǎng)性藥品。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中所述的藥劑為抗腫瘤藥
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其中所述的藥劑選自紫杉醇或其 衍生物、多西他賽、或者喜樹(shù)堿或其衍生物。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其中所述的藥劑為紫杉醇。
11. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中白蛋白與胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的摩爾比為0.01:1 -100:]，蛋白質(zhì)偶聯(lián)物與藥劑的體積 比為0.0001:1隱10000:1。
12. 根據(jù)權(quán)利要求ll所述的藥物組合物，其中白蛋白與胱氨酸或半胱氨 酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的摩爾比為35:1-1:35，蛋白質(zhì)偶聯(lián)物與藥劑的體積比為 5:1-100:1。
13. 根據(jù)權(quán)利要求ll所述的藥物組合物，其中的藥劑為紫杉醇。
14. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物組合物，其中的藥劑為紫杉醇。
15. 權(quán)利要求1至5中任一權(quán)利要求所述蛋白偶聯(lián)物的制備方法，包括如 下步驟1 )所述的蛋白質(zhì)、和一種以上的胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物 質(zhì)溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲校?) 將步驟l )所得到的混合物受熱，溫度為20-80度，優(yōu)選25-70度， 最優(yōu)選30-60度；3) 干燥。
16. 權(quán)利要求6至14中任一權(quán)利要求所述藥物組合物的制備方法，包含下 列A、 B兩種方法中的一種A. 制備所述的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物；將偶聯(lián)物與藥劑混合；B. 將所述的蛋白質(zhì)、 一種以上的胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)和 藥物溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲小?br> 全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種新型的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物為蛋白質(zhì)與胱氨酸或半胱氨酸修飾的內(nèi)源性物質(zhì)的偶聯(lián)物。此外，本發(fā)明還公開(kāi)了包含上述蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的藥物組合物，以及上述蛋白質(zhì)偶聯(lián)物及包含上述蛋白質(zhì)偶聯(lián)物藥物組合物的制備方法。本發(fā)明不涉及毒性有機(jī)溶劑和催化劑，反應(yīng)簡(jiǎn)單易行，產(chǎn)物易于分離精制和進(jìn)行質(zhì)量控制，而且得到的藥物組合物主動(dòng)靶向性提高。
文檔編號(hào)C07K1/10GK101357939SQ20081021201
公開(kāi)日2009年2月4日 申請(qǐng)日期2008年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月11日
發(fā)明者呂慧俠, 張建軍, 緣 高 申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)