一種vegfr2阻斷劑多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明設(shè)及藥物領(lǐng)域，具體設(shè)及用于阻斷VEGFR2的結(jié)合，治療卵巢癌的VEGFR2阻 斷劑多膚。
【背景技術(shù)】：
[0002] 卵巢惡性腫瘤是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子 宮體癌而列居第=位。但卵巢上皮癌死亡率卻占各類婦科腫瘤的首位，對婦女生命造成嚴(yán) 重威脅。由于卵巢的胚胎發(fā)育、組織解剖及內(nèi)分泌功能較復(fù)雜，早期癥狀不典型，術(shù)前鑒別 卵巢腫瘤的組織類型及良惡性相當(dāng)困難。卵巢惡性腫瘤中W上皮癌最多見，其次是惡性生 殖細(xì)胞腫瘤。卵巢上皮癌患者手術(shù)中發(fā)現(xiàn)腫瘤局限于卵巢的僅占30%，大多數(shù)已擴(kuò)散到子 宮，雙側(cè)附件，大網(wǎng)膜及盆腔各器官。目前治療方法有：.手術(shù)治療、化學(xué)治療、放射治療等。 由于卵巢惡性腫瘤尤其是上皮癌很早擴(kuò)散，手術(shù)時多數(shù)病例已不能清除病灶，而且放療的 效果及應(yīng)用也很有限，因此全身性化療是一項(xiàng)重要的輔助治療方法。尤其是惡性生殖細(xì)胞 腫瘤，規(guī)范化療可明顯提高患者生存率。一些晚期病人，經(jīng)化療后腫塊可W縮小，為手術(shù)時 滿意減瘤創(chuàng)造有利條件。但抗腫瘤藥物存在使得患者免疫低下，掉發(fā)、嘔吐、體重下降等副 作用，限制其應(yīng)用。如何尋找高效，副作用低的抗卵巢癌藥物成為亟待解決的難題。
[0003] 腫瘤的生長離不開血管的新生及各種生長因子的刺激與釋放，抑制腫瘤新生血管 可能成為治療腫瘤的一種有效方法。血管內(nèi)皮生長因子（Vascularendothelialgrowth factor,VEG巧的高表達(dá)與實(shí)體腫瘤的形成及其轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，VEGF通過與血管內(nèi)皮細(xì)胞 膜上的特異性受體（Vascularendothelialgrowthfactorrec巧tor,VEGFR)結(jié)合來激活 信號傳導(dǎo)的胞中有高表達(dá)，而在健康的成人身體內(nèi)表達(dá)水平很低甚至不表達(dá)。VEGFR2可促 進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移及增加毛細(xì)血管通透性。腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂與腫瘤 微血管的滲透性主要是通過VEGF與VEGFR2的相互作用而發(fā)生的。因此，VEGFR2阻斷劑， 可W有效抑制VEGF與VEGFR2結(jié)合，進(jìn)而有效抑制腫瘤增殖，遷移，達(dá)到抑制腫瘤生長的目 的。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0004] 本發(fā)明提供全新的序列，該序列阻斷VEGFR2結(jié)合VEGF，對卵巢癌具有很好的療 效。 陽00引技術(shù)方案
[0006] VEGFR2阻斷劑多膚，其特征在于其序列為AD肥FFIMTSYPPWRGD。
[0007] 一種藥物組合物，其特征在于其包含如權(quán)利要求1所述多膚與一種W上藥學(xué)上可 接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、或穩(wěn)定劑。
[0008] 所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物為注射劑。
[0009] 所述的VEGFR2阻斷劑多膚，其特征在于有效劑量為lOmg/kg。
[0010] 所述的VEGFR2阻斷劑多膚，在治療卵巢癌藥物中的應(yīng)用。
[0011] 有値結(jié)果：
[0012] 本發(fā)明中的VEGFR2阻斷劑多膚1序列AD肥FFIMTSYPPWRGD，可W阻斷VEGF結(jié)合 VEGFR2,進(jìn)而影響VEGF下游信號傳導(dǎo)，實(shí)現(xiàn)抗腫瘤目的。本發(fā)明采用卵巢癌體內(nèi)外模型驗(yàn) 證了其可W有效抑制腫瘤增殖，生長，可W作為有效的抗腫瘤候選藥物，為開發(fā)新一代抗腫 瘤藥物提供新的選擇。
【具體實(shí)施方式】 陽〇1引本發(fā)明設(shè)及多膚（AD肥FFIMTSYPPWRGD)由吉爾生化（上海）合成。人卵巢癌SK-0V-3購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物研究所細(xì)胞庫。
[0014] 實(shí)施例1
[0015] VEGFR2阻斷劑多膚對人卵巢癌細(xì)胞SK-0V-3增殖的作用
[0016] 采用MTT比色法：
[0017] 1、細(xì)胞培養(yǎng)：人卵巢癌細(xì)胞系SK-0V-3用含10%胎牛血清的McCoy's5A培養(yǎng)基， 在37°C、5%C02、飽和濕度條件下培養(yǎng)，為上皮細(xì)胞型，貼壁生長。每2~3天用0. 25%膜 酶和0. 02%邸TA常規(guī)消化、1:3~1:6傳代培養(yǎng)。
[0018] 2、將對數(shù)生長的SK-0V-3細(xì)胞，W1.0X105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)2地，實(shí)驗(yàn) 孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物VEGFR2阻斷劑多膚和陽性對照藥物長 春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個復(fù)孔，培養(yǎng)48h，每孔加入MTT，作用地后， 加入DMS0,解育30min，在酶標(biāo)儀620nm處測定吸光度A值，按公式腫瘤細(xì)胞生長抑制率= (1-實(shí)驗(yàn)組吸光值/對照組吸光值）X100%。計算出實(shí)驗(yàn)藥物的IC50為0. 41yM。而陽 性對照藥物長春新堿0. 39yM，兩者沒有顯著性差異，說明本發(fā)明多膚具有抑制人卵巢癌作 用。
[0019] 實(shí)施例2VEGFR2阻斷劑多膚對人卵巢癌細(xì)胞SK-0V-3裸鼠異種移植腫瘤生長的抑 制試驗(yàn)
[0020] 取對數(shù)生長期的人卵巢癌細(xì)胞SK-0V-3細(xì)胞株，在無菌條件下制備成5X lOVml 細(xì)胞懸液，W〇. 1ml接種于裸鼠右側(cè)蔽窩皮下。用游標(biāo)卡尺測量裸鼠移植瘤直徑，待腫瘤生 長至70-100mm3后將動物隨機(jī)分組。使用測量瘤徑的方法，動態(tài)觀察被試多膚的抗腫瘤效 果。腫瘤直徑的測量次數(shù)為每2天測1次。給藥方式均采用尾靜脈注射。陰性對照組注射 等量生理鹽水，每天1次；紫杉醇組lOmg/kg，每周給藥1次；多膚高中低組分別W20mg/kg、 10mg/kg、5mg/kg，每天給藥1次。給藥21d。試驗(yàn)結(jié)束后，小鼠處死，手術(shù)剝?nèi)×鰤K稱重。
[0021] 表1多膚對人卵巢癌細(xì)胞SK-0V-3裸鼠異種移植腫瘤生長的抑制作用
[0022]
[0023] 多膚對人卵巢癌細(xì)胞SK-OV-3裸鼠移植瘤生長抑制試驗(yàn)結(jié)果表明，與陰性對照組 相比，多膚20mg/kg、lOmg/kg和5mg/kg組對人卵巢癌細(xì)胞SK-0V-3移植瘤的生長均具有極 顯著性的抑制作用。20mg/kg、lOmg/kg和5mg/kg與陽性對照組紫杉醇相比，多膚對實(shí)驗(yàn)動 物的體重沒有明顯影響，未見明顯的毒副反應(yīng)，存活率提高。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. VEGFR2阻斷劑多肽，其特征在于其序列為ADHEFF頂TSYPPWR⑶。2. -種藥物組合物，其特征在于其包含如權(quán)利要求1所述多肽與一種以上藥學(xué)上可接 受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、或穩(wěn)定劑。3. 如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物為注射劑。4. 如權(quán)利要求1所述的VEGFR2阻斷劑多肽，其特征在于有效劑量為10mg/kg。5. 如權(quán)利要求1所述的VEGFR2阻斷劑多肽，在治療卵巢癌藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制白介素-33，能治療卵巢癌的多肽。其序列為ADHEFFIMTSYPPWRGD是全新的序列，本發(fā)明中可以阻斷VEGF結(jié)合VEGFR2，進(jìn)而影響VEGF下游信號傳導(dǎo)，實(shí)現(xiàn)抗腫瘤目的。本發(fā)明采用卵巢癌體內(nèi)外模型驗(yàn)證了其可以有效抑制腫瘤增殖，生長，可以作為有效的抗腫瘤候選藥物，為開發(fā)新一代抗腫瘤藥物提供新的選擇。
【IPC分類】A61P35/00, A61K38/10, C07K7/08
【公開號】CN105198965
【申請?zhí)枴緾N201510710960
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請人】蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年10月28日