>[0066] 將標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌、肺炎雙球菌、沙門氏菌、嗜血桿菌、金葡萄球菌、鏈球菌、支原體 和波氏桿菌接種于營養(yǎng)肉湯增菌液中，37°C過夜培養(yǎng)。將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基加熱到完全 融化，倒在培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿15ml(下層），待其凝固。此外，將融化的PDA培養(yǎng)基冷卻到50°C 左右混入試驗(yàn)菌上述幾種菌液，將混有菌的培養(yǎng)基5ml加到已凝固的培養(yǎng)基上待凝固（上 層）。以無菌操作在培養(yǎng)基表面直接垂直放上牛津杯，輕輕加壓，使其與培養(yǎng)基接觸無空隙， 在杯中加入待檢藥液100y1。置37°C培養(yǎng)36小時(shí)，觀察結(jié)果，抑菌圈大小用尺直接丈量讀 取。
[0067] 結(jié)果見表2。結(jié)果表明不同金霉素琥珀酸單酯鹽具有鹽酸金霉素所擁有的廣譜抗 菌性，針對(duì)部分革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌的抑菌能力強(qiáng)于鹽酸金霉素。
[0068] 表2不同金霉素琥珀酸單酯鹽對(duì)細(xì)菌抑菌圈大小（mm)，36小時(shí)
[0069]
[0071] 實(shí)施例14、金霉素琥珀酸單酯鹽對(duì)機(jī)體免疫的影響
[0072] 選擇30日齡健康斷奶仔豬180頭，公母各半，按照體重相近、公母比例相同的原 貝1J，隨機(jī)分配進(jìn)6個(gè)處理組，每處理5個(gè)重復(fù)，每重復(fù)6頭仔豬（3公3母）。各重復(fù)組間初 始體重之間無明顯差異，平均為6. 54±0. 21公斤。飼喂不含抗生素的飼料，時(shí)間3天，以排 除前期可能垂直產(chǎn)生的藥物對(duì)試驗(yàn)豬的影響。以后開始添加實(shí)驗(yàn)藥物喂養(yǎng)，飼料中加藥量 為75ppm，自由采食、自由飲水，試驗(yàn)期21天。于試驗(yàn)第21天上午8:00,從每處理隨機(jī)選取 5頭豬只無菌靜脈采集血樣8ml，傾斜放置至析出血清后，經(jīng)3000r/min離心lOmins，收集血 清于-20低溫冷藏至分析。血清免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA)的含量均按照試劑盒說明書， 采用酶聯(lián)免疫法測定，用酶標(biāo)儀進(jìn)行；IFN-Y和IL-12水平均按ELISA檢測試劑盒方法測 得。
[0073] 測定結(jié)果見表3。IgA、IgM、IgG都是免疫學(xué)檢測常見指標(biāo)。免疫球蛋白 GQmmunoglobulinG，IgG)為機(jī)體含量最多和最主要的Ig，占總免疫球蛋自的70 %~ 80%，屬再次免疫應(yīng)答抗體，即機(jī)體再次感染的重要抗體。它對(duì)病毒、細(xì)菌和寄生蟲等都有 抗體活性，也是唯一能夠通過胎盤的Ig，通過自然被動(dòng)免疫使新生動(dòng)物獲得免疫抗體。免疫 球蛋白AQmmunoglobulinA，IgA)分為血清型IgA與分泌型IgA(SIgA)兩Z種。前者占血清 總Ig的10%~15%，后者主要存在于分泌液中，如：唾液、淚液、母乳、鼻腔分泌液、支氣管 分泌液及胃腸道分泌液。SIgA由呼吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴樣組織合成，SIgA濃度 變化與這些部位的局部感染、炎癥或腫瘤等病變密切相關(guān)。免疫球蛋白M(immun〇gl〇bulin M，IgM)是初次免疫應(yīng)答反應(yīng)中的Ig，不論是在個(gè)體發(fā)育中還是當(dāng)機(jī)體受到抗原刺激后， IgM都是最早出現(xiàn)的抗體。IgM是分子質(zhì)量最大的Ig，約占血清總Ig的5%~10%。IgM 具有強(qiáng)的凝集抗原的能力。IFN-Y :淋巴細(xì)胞型干擾素。IFN是一種廣譜抗病毒劑，并不直 接殺傷或抑制病毒，而主要是通過細(xì)胞表面受體作用使細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，從而抑制乙 肝病毒的復(fù)制，其類型分為三類，a-(白細(xì)胞）型、(6-(成纖維細(xì)胞）型，Y-(淋巴細(xì)胞） 型；干擾素具有影響細(xì)胞生長，以及分化、調(diào)節(jié)免疫功能等多種生物活性。IL-12 :白細(xì)胞介 素-12。IL-2能提高機(jī)體中性粒細(xì)胞吞噬功能，具有增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能的作用。
[0074] 從表3可以看出，與鹽酸金霉素組相比，本發(fā)明的金霉素琥珀酸單酯鹽組（金霉素 琥珀酸單酯鈉鹽、金霉素琥珀酸單酯鉀鹽、金霉素琥珀酸單酯賴氨酸鹽、金霉素琥珀酸單酯 精氨酸鹽和金霉素琥珀酸單酯葡甲胺鹽）均能不同層次地提高生物體內(nèi)的IgA、IgM、IgG、 IFN-y和IL-12水平，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，其中又以金霉素琥珀酸單酯賴氨酸鹽、金霉素琥珀 酸單酯精氨酸鹽的效果為佳。
[0075] 表3金霉素琥珀酸單酯鹽對(duì)機(jī)體一般免疫指標(biāo)的影響
[0076]
[0077] 實(shí)施例15、金霉素琥珀酸單酯鹽對(duì)動(dòng)物仔豬機(jī)體生長指數(shù)的影響
[0078] 選擇30日齡健康斷奶仔豬120頭，公母各半，按照體重相近、公母比例相同的原 貝1J，隨機(jī)分配進(jìn)6個(gè)處理組。各重復(fù)組間初始體重之間無明顯差異，平均為6. 38±0. 17公 斤。開始添加實(shí)驗(yàn)藥物喂養(yǎng)，飼料中加藥量為75ppm，自由采食、自由飲水，試驗(yàn)期27天。 試驗(yàn)測定初始重量、日增重、日采食量、總耗料量、最終重量，計(jì)算料肉比。測得結(jié)果見表 4。從料肉比數(shù)據(jù)顯示：金霉素琥珀酸單酯鹽的料肉比均低于鹽酸金霉素組，說明新合成的 金霉素琥珀酸單酯鹽均具有提高飼料利用率的功能；其中相對(duì)而言金霉素琥珀酸單酯賴氨 酸鹽、金霉素琥珀酸單酯精氨酸鹽和金霉素琥珀酸單酯葡甲胺鹽的飼料利用率提高更為顯 著。
[0079] 表4金霉素琥珀酸單酯鹽對(duì)動(dòng)物仔豬機(jī)體生長指數(shù)的影響
[0080]
[0081] 最后說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過參 照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可 以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明 的精神和范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 金霉素班巧酸單醋鹽，具有如式I所示的結(jié)構(gòu)：其中，M為化、K、葡甲胺、精氨酸或賴氨酸。2. 金霉素班巧酸單醋鹽的制備方法，其特征在于：包括W下步驟： a. 將鹽酸金霉素溶于有機(jī)溶液中，添加碳酸鋼攬拌，30~80°C條件下攬拌溶液成均 相；所述的有機(jī)溶液為有機(jī)溶劑I和水的混合溶液，有機(jī)溶劑I所占的質(zhì)量比為混合溶液 40 ~90% ; b. 將班巧酸酢和催化劑混合，然后加入到步驟a得到的均相中，回流攬拌0. 5~5小 時(shí)，鹽酸酸化至抑=6,冷卻得到金霉素班巧酸單醋固體； C.有機(jī)溶劑II中回流溶解金霉素班巧酸單醋，添加相應(yīng)堿攬拌，冷卻，即生成目標(biāo)產(chǎn) 物；所述相應(yīng)堿為藥學(xué)上可W接受的成鹽堿，包括氨氧化鋼、氨氧化鐘、碳酸鋼、碳酸鐘、精 氨酸、賴氨酸或葡甲胺。3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：步驟a中所述有機(jī)溶劑I是指乙醇、丙酬、 乙二醇、乙臘、丙二醇、丙S醇、四氨巧喃或1，4-二氧六環(huán)中的任一種。4. 如權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于：步驟a中所述鹽酸金霉素與碳酸鋼摩 爾比為1 : 1~1. 5。5. 如權(quán)利要求2~4任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：步驟b中所述班巧酸酢與催化 劑摩爾比為1 : 0. 1~1. 5。6. 如權(quán)利要求2~5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：步驟b中所述催化劑為二環(huán)己 基碳二亞胺DCC、4-二甲胺基化晚DMAP、S乙胺、化晚中的任一種或多種混合物；催化劑兩 兩之間的摩爾比為0~1.0 : 1.0~0,但催化劑的總量不為0。7. 如權(quán)利要求2~6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：步驟b中班巧酸酢的摩爾量為 鹽酸金霉素摩爾量的1. 2~5. 0倍。8. 如權(quán)利要求2~7任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：步驟C中所述有機(jī)溶劑II為乙 醇、異丙醇、乙臘、N，N-二甲基甲酯胺、N，N-二甲基乙酷胺、1,4-二氧六環(huán)、四氨巧喃、丙酬 中的任一種或兩種的混合物；溶劑之間的體積比為0~1.0 : 1.0~0,但溶劑的總體積不 為0。9. 如權(quán)利要求2~8任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：步驟C中所述金霉素班巧酸單 醋與相應(yīng)堿摩爾比1 : 1.0~2.0。10. 權(quán)利要求1所述的金霉素班巧酸單醋鹽或權(quán)利要求2~9任一項(xiàng)所述的方法在制 備動(dòng)物飼料中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明屬于化學(xué)合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及水溶性金霉素琥珀酸單酯鹽及其制備方法。本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是對(duì)金霉素進(jìn)行修飾和改造。本發(fā)明提供了金霉素琥珀酸單酯鹽，具有如式Ⅰ所示的結(jié)構(gòu)：其中，M為Na、K、葡甲胺、精氨酸或賴氨酸。本發(fā)明還提供了金霉素琥珀酸單酯鹽的制備方法。本發(fā)明通過將金霉素與琥珀酸酐接枝修飾，合成了一種水溶性優(yōu)于金霉素的金霉素琥珀酸單酯鹽，其在動(dòng)物體內(nèi)具有鹽酸金霉素所擁有的廣譜抗菌性。
【IPC分類】C07C227/18, C07C215/10, C07C231/12, C07C279/14, A61P31/04, C07C213/00, C07C237/26, A23K1/16, C07C277/08, C07C229/26
【公開號(hào)】CN105001112
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510385933
【發(fā)明人】王建華, 馬德壽, 馮獻(xiàn), 張雪崢
【申請(qǐng)人】浦城正大生化有限公司
【公開日】2015年10月28日
【申請(qǐng)日】2015年6月30日