專利名稱：β－D－(1－4)－葡聚糖硫酸酯化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化合物領(lǐng)域，具體地，涉及抗艾滋病的藥物化合物。
眾所周知，艾滋病是一種對人類健康威脅十分嚴(yán)重的傳染病，也是當(dāng)今世界的醫(yī)學(xué)難題。目前，從植物藥中進(jìn)行篩選抗艾滋病毒和免疫功能重建藥物，也是研制抗艾滋病藥物的一個重要途徑。迄今還未有從植物青陽參的水提取物，經(jīng)吡啶-氯磺酸處理所得的硫酸酯化合物有較強(qiáng)的抗艾滋病毒作用的報道。
本發(fā)明的目的在于提供一種β-D-(1-4)-葡聚糖硫酸酯化合物。
本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)式如下
本發(fā)明的β-D-(1-4)-葡聚糖硫酸酯化合物可用下述方法制備而得取青陽參(Cynanchum otophyllum)植物的根的熱水(94℃)提取物，經(jīng)吡啶-氯磺酸處理而得。
下面用本發(fā)明的青陽參-β-D-(1-4)-葡聚糖硫酸酯化合物的藥理作用來說明本發(fā)明的有益效果青陽參-β-D-(1-4)-葡聚糖硫酸酯化合物(取代號M-33)易溶于水，抗HIV及抗其他病毒實(shí)驗(yàn)分別在美國NCI和德國拜耳公司進(jìn)行，用細(xì)胞培養(yǎng)法或體外試驗(yàn)法(In-Vitro Anti-HIV testing)，抗HIV試驗(yàn)重復(fù)多次，重現(xiàn)性好?？笻IV的活性均達(dá)到“有效級”(Active)，每次試驗(yàn)都以抗HIV有效藥物AZT作對照，抗病毒活性強(qiáng)度以治療指數(shù)(TI)=IC50／EC50的大小來分級，TI大干100者為有效。試驗(yàn)結(jié)果見表1。
德國拜耳藥物研究中心的抗病毒試驗(yàn)結(jié)果顯示β-D-(1-4)-葡聚糖硫酸酯化合物除具有抗HIV作用外，對綿羊脫髓鞘性腦白質(zhì)炎病毒(Visna)、皰疹病毒I和II型(Herpes I and II)、流感病毒A和B型(Influenza A and B)均有活性，此外還對乙型肝炎病毒有抑制作用，是一種廣譜抗病毒藥物。表1青陽參-β-D-(1-4)-葡聚糖硫酸酯化合物(表中用代號M-33)的抗艾滋病毒的治療指數(shù)
從表中可得到結(jié)論，本發(fā)明β-D-(1-4)-葡聚糖硫酸酯化合物的抗艾滋病毒的治療指數(shù)為362。
美國NCI所用的細(xì)胞培養(yǎng)法或體外試驗(yàn)法(In-Vitro testing)是目前國-際上通用的抗艾滋病毒(Human Immunodeficiency Virus)藥物篩選方法。該方法具體步驟為在培養(yǎng)皿中放置敏感易感染的宿主細(xì)胞，其中一半用病毒(HIV)予以感染，另一半為對照組，加上不同濃度的藥物被篩樣品，在恒溫室中放置七天。不加藥物的細(xì)胞大部分或全部被病毒毀壞。七天后用螢光分光光計測定上述兩部分培養(yǎng)皿中尚存活細(xì)胞數(shù)。以細(xì)胞存活百分率為縱坐標(biāo)，以實(shí)驗(yàn)藥物的濃度微克／毫升為橫坐標(biāo)，對每次試驗(yàn)的結(jié)果在坐標(biāo)上找出相應(yīng)的點(diǎn)，聯(lián)結(jié)這些點(diǎn)得到兩條曲線(一條黑色實(shí)線，另一條以虛線表示)。虛線表示未經(jīng)HIV感染的宿主細(xì)胞加藥物的結(jié)果，實(shí)線表示受HIV感染的細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)藥物作用下的表現(xiàn)圖。中間兩條橫線分別為0％和50％參考線。因?yàn)樗幬飳Σ《居幸种谱饔玫耐瑫r可能對正常細(xì)胞也有抑制作用。上面一條虛線與50％參考線的交點(diǎn)之濃度稱為IC50，表示藥物使正常細(xì)胞生長產(chǎn)生50％抑制時的藥物濃度，下面一條實(shí)線與50％參考線交點(diǎn)稱為EC50，表示藥物使病毒的細(xì)胞病害減少50％的藥物濃度。IC50與EC50的比率得治療指數(shù)TI=IC50／EC50。AZT的治療指數(shù)為583。為了有助于受試藥物的抗病毒作用的正確性，用已知有抗HIV活性的AZT實(shí)驗(yàn)結(jié)果作參照。
β-D-(1-4)-葡聚糖硫酸酯化合物的毒性試驗(yàn)結(jié)果給小鼠靜脈(IV)或口服(P．O)劑量為500mg／kg時，未出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，說明該化合物的LD50＞500mg／kg。
下面結(jié)合附圖用實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
圖2為對照物AZT的抗HIV藥理實(shí)驗(yàn)曲線圖；

圖1的β-D-(1-4)-葡聚糖硫酸酯化合物的抗HIV藥理實(shí)驗(yàn)曲線圖。
實(shí)施例一取青陽參(Cynanchum otophyllum)植物的根500克，粉碎成粉末后用熱水(94℃)浸提2-3次，合并浸提液，冷卻靜置4小時，離心沉淀(4000次／分)，傾瀉出上層液，沉淀物除去棄之。上層液用其2-3倍體積的甲醇加入，搖動攪拌即有白色絮狀的多糖沉淀，放置過液，上層液澄清，下層沉淀緊密。用吸液管吸去上層液，下層沉淀離心分離，棄去上層液，下層沉淀物轉(zhuǎn)移至抽濾漏斗抽氧過濾，濾出的沉淀先用丙酮洗滌，后用乙醚洗滌及壓濾，沉淀物在真空干燥器內(nèi)(器內(nèi)有五氧化二磷吸溫劑)抽氣真空干燥6小時，就得白色多糖10克。
多糖及其硫酸酯的確認(rèn)由上述所得的白色固體少量在熱水中溶解，取出1ml加2倍95％的乙醇有沉淀產(chǎn)生。又取2ml溶液，加入2ml10％HCl溶液，在沸水中加熱20分鐘使之水解，冷卻后調(diào)節(jié)PH至中性，水解液對Fehling試劑(堿性酒石酸銅試劑)產(chǎn)生還原反應(yīng)，即紅色氧化亞銅沉淀。水解液中的糖經(jīng)硅膠薄層層析與已知葡萄糖對照，Rf值及斑點(diǎn)顏色與葡萄一致，且只有葡萄一個斑點(diǎn)，故青陽參的多糖是一個葡聚糖，其紅外光譜中有885em-1，過碘酸鉀氧化產(chǎn)生D-赤癬酚(鄰二元醇)，顯示葡萄糖之間為1→4連接。其IR中1100-1200em-1鋒顯示有C-O=S-OH，因IR中無羥基峰的出現(xiàn)顯示酯化完全，活性較強(qiáng)。
本發(fā)明的β-D-(1-4)-葡聚糖硫酸酯化合物的結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.如(I)式所示的β-D-(1-4)-葡聚糖硫酸酯化合物
全文摘要
本發(fā)明涉及抗艾滋病的藥物化合物,提供一種β－D－(1—4)－葡聚糖硫酸酯化合物。該化合物可用下述方法制備而得:取青陽參(Cynanchum otophy11um)植物的根的熱水(94℃)提取物,經(jīng)吡啶－氯磺酸處理而得。
文檔編號C08B37/02GK1206717SQ9811810
公開日1999年2月3日 申請日期1998年7月28日 優(yōu)先權(quán)日1998年7月28日
發(fā)明者木全章, 沈月毛, 周茜蘭 申請人:中國科學(xué)院昆明植物研究所