本發(fā)明涉及揮發(fā)油制備領(lǐng)域。更具體地說，本發(fā)明涉及一種腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的制備方法及其對三七灰霉病的防治作用。
背景技術(shù)：
：三七具有顯著的活血化瘀、消腫定痛功效，是一種中國傳統(tǒng)名貴藥材。近年來，對三七原材料的需求日益增長，但是栽培過程中的真菌病害嚴(yán)重影響了三七生長。三七灰霉病以危害葉為主，多從下部老葉的葉尖或近地部分葉柄發(fā)病，灰褐色病斑，腐爛。在廣西三七的傳統(tǒng)產(chǎn)區(qū)，由于低海拔及高溫多濕的氣象條件，這種病害往往更嚴(yán)重，造成了三七的大量減產(chǎn)甚至絕收，給種植戶帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，在三七種植上，防治真菌病害過度依賴化學(xué)農(nóng)藥，大量化學(xué)農(nóng)藥的使用不僅影響了三七的品質(zhì)，也造成了三七藥材的大量農(nóng)藥殘留。因此，借鑒中醫(yī)藥研究成果，可望從藥用植物中篩選出抗植物病原真菌的天然活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)可直接作為天然殺菌劑，效果良好，對三七產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展是非常迫切和必要的。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說明的優(yōu)點。本發(fā)明還有一個目的是提供一種腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的制備方法，此方法簡單易行，成本低，得率高，用量少；本發(fā)明還有一個目的是提供腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的用途，對三七灰霉病的防治作用強(qiáng)，對環(huán)境影響小，且藥劑藥效期長。為了實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點，提供了一種腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的制備方法，包括以下步驟，以下原料按重量份數(shù)計：步驟一、取500～600份腫節(jié)風(fēng)的葉和莖，加入5000～6000份水，水蒸氣蒸餾得到第一混合物；步驟二、按體積比1:1～2向步驟一中的第一混合物中加入溶劑，萃取，去除溶劑后得揮發(fā)油。優(yōu)選的是，步驟一中的腫節(jié)風(fēng)的葉和莖蒸餾前處理：將500～600份腫節(jié)風(fēng)的葉和莖置于超微粉碎機(jī)中粉碎，取出加入500～600份水，置于超聲波中以60kHz的頻率處理20～30min，取出加入15～20份半胱氨酸和25～30份纖維素酶，調(diào)節(jié)pH值至5～6，于60℃下酶解24～36h，加入10～15份司班和70～80份吐溫，攪拌均勻。優(yōu)選的是，步驟一中的第一混合物萃取前處理：向步驟一中的第一混合物加入100～120份質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3％的氯化鈉溶液和1～1.5份乙酸，混合均勻后放入-18℃環(huán)境中冰凍1～1.5h，取出融化。優(yōu)選的是，步驟二中的揮發(fā)油后處理：按體積比1:0.05～0.1:0.05～0.1向步驟二中的揮發(fā)油加入吐溫和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15％的魔芋粉溶液，采用磁力攪拌器攪拌，直至混合物呈乳化狀態(tài)；然后按質(zhì)量比1:0.02～0.04向混合物中加入β-環(huán)糊精，繼續(xù)用磁力攪拌器攪拌，直至混合物呈黏稠狀，即得。本發(fā)明還提供了一種由上述的制備方法獲得的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的應(yīng)用，對三七灰霉病的防治作用。優(yōu)選的是，揮發(fā)油應(yīng)用于抑制三七灰霉病病原菌菌絲的生長。優(yōu)選的是，用于抑制三七灰霉病病原菌菌絲生長的揮發(fā)油的濃度≥0.5g/L。優(yōu)選的是，揮發(fā)油應(yīng)用于抑制三七灰霉病病原菌孢子的萌發(fā)。優(yōu)選的是，用于抑制三七灰霉病病原菌孢子萌發(fā)的揮發(fā)油的濃度為≥0.5g/L。優(yōu)選的是，揮發(fā)油用于三七灰霉病田間防治的使用方法具體為：a按質(zhì)量體積比為0.5～1g:1000ml將揮發(fā)油溶解于稀釋劑中，得第一溶解液，稀釋劑由吐溫和水按體積比為1:3組成；b按體積比為100:1～2向a中的第一溶解液中加入薄荷漿液，攪拌均勻得藥液；其中薄荷漿液的制備方法：將10～15份新鮮薄荷和10～15份乙酸乙酯置于研缽中研碎后，過濾即得。本發(fā)明至少包括以下有益效果：第一、腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油，屬于生物農(nóng)藥，與化學(xué)農(nóng)藥比對環(huán)境影響??；第二、利用超微粉碎手段將腫節(jié)風(fēng)的葉和莖粉碎至10～25μm以下，且在粉碎過程中不會產(chǎn)生局部過熱現(xiàn)象，速度快，瞬間即可完成，因而最大限度地保留腫節(jié)風(fēng)的生物活性成分；第三、利用超聲波的機(jī)械作用促使10～25μm以下的腫節(jié)風(fēng)的葉和莖中的活性物質(zhì)乳化，有助于其分散至水中；第四、腫節(jié)風(fēng)細(xì)胞壁主要是纖維素、半纖維素和果膠類組成，利用纖維素酶酶解其主要組成成分，可破壞其細(xì)胞壁，使腫節(jié)風(fēng)的生物活性成分更易流出；第五、植物組織中含有天然的纖維素酶抑制劑，如重金屬離子和酚類物質(zhì)等，半胱氨酸能消除它們的抑制作用，甚至進(jìn)一步激活纖維素酶，從而縮短腫節(jié)風(fēng)細(xì)胞壁酶解時間，提高酶解效率；第六、吐溫是一種乳化劑，可以使精油即腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油乳化后溶解于水液體中，促進(jìn)腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油從其組織中流出，吐溫與其他乳化劑司班合用，可增加乳化劑的穩(wěn)定性。第七、萃取時油相與水相的界面不清，呈一定強(qiáng)度的乳化區(qū)，對腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的得率影響很大，少量無機(jī)鹽會使乳化作用增強(qiáng)，但當(dāng)無機(jī)鹽含量高時，可導(dǎo)致乳化區(qū)作用力減弱，導(dǎo)致油水分離，為此加入高濃度的氯化鈉溶液和乙酸，可消除腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油乳化現(xiàn)象，達(dá)到兩相快速有效分離；第八、-18℃凍結(jié)可使水形成冰晶，腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油結(jié)晶，使油/水型乳濁液分離，故解凍后，兩相分離，有利于腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的萃??；第九、得到腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油后，加入吐溫使腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油乳化后溶解于水液體中，使體系更穩(wěn)定，再加入魔芋粉溶液，在其乳化區(qū)形成一層保護(hù)膜層，減緩腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的揮發(fā)速度，然后加入β-環(huán)糊精，并充分?jǐn)嚢柚寥榛癄顟B(tài)，即形成腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油包合物，使其更易保藏，延長其有效期；第十、將腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油用于防治三七灰霉病時，用吐溫、水和新鮮薄荷漿液稀釋，薄荷中含有豐富的黃酮類物質(zhì)，其具有較強(qiáng)的抗菌作用，與腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油一起具有協(xié)同作用，相互增強(qiáng)其對三七灰霉病的防治作用，減少施藥用量和次數(shù)，節(jié)約成本。本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本發(fā)明的研究和實踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。具體實施方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實施。<實施例1>腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的制備方法，包括以下步驟：步驟一、稱取500g腫節(jié)風(fēng)的葉和莖放入蒸餾燒瓶中，加入5000g水和8粒沸石，再將蒸餾燒瓶與加熱器、冷凝管、接液管和接液器等連接組成蒸餾裝置，冷凝管通入自來水，使蒸餾燒瓶內(nèi)液體保持微沸狀態(tài)，蒸餾5h后，接液器收集到的油水混合物，即為第一混合物；步驟二、按體積比1:1.5向步驟一中的第一混合物中加入乙醚萃取，分離乙醚層，剩下的水層再按體積比為1:1.5加入乙醚萃取，分離乙醚層，共萃取2次，將乙醚層合并揮發(fā)去除乙醚后得揮發(fā)油，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?lt;實施例2>腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的制備方法，包括以下步驟：步驟一、稱取600g腫節(jié)風(fēng)的葉和莖放入蒸餾燒瓶中，加入6000g水和12粒沸石，再將蒸餾燒瓶與加熱器、冷凝管、接液管和接液器等連接組成蒸餾裝置，冷凝管通入自來水，使蒸餾燒瓶內(nèi)液體保持微沸狀態(tài)，蒸餾6h后，接液器收集到的油水混合物，即為第一混合物；步驟二、按體積比1:2向步驟一中的第一混合物中加入丙酮萃取，分離丙酮層，剩下的水層再按體積比為1:2加入丙酮萃取，分離丙酮層，共萃取2次，將丙酮層揮發(fā)去除丙酮后得揮發(fā)油，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?lt;實施例3>腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的制備方法，包括以下步驟：步驟一、稱取500g腫節(jié)風(fēng)的葉和莖放入蒸餾燒瓶中，加入5000g水和8粒沸石，再將蒸餾燒瓶與加熱器、冷凝管、接液管和接液器等連接組成蒸餾裝置，冷凝管通入自來水，使蒸餾燒瓶內(nèi)液體保持微沸狀態(tài)，蒸餾5h后，接液器收集到的油水混合物，即為第一混合物；步驟二、按體積比1:1向步驟一中的第一混合物中加入乙酸乙酯萃取，分離乙酸乙酯層，剩下的水層再按體積比為1:1加入乙酸乙酯萃取，分離乙酸乙酯層，共萃取2次，將乙酸乙酯層揮發(fā)去除乙酸乙酯后得揮發(fā)油，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?lt;實施例4>腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的制備方法，包括以下步驟：步驟一、稱取500g腫節(jié)風(fēng)的葉和莖置于超微粉碎機(jī)中粉碎，取出加入550g水，置于超聲波中以60kHz的頻率處理25min，取出加入18g半胱氨酸和28g纖維素酶，調(diào)節(jié)pH值至5.5，于60℃下酶解30h，加入12g司班和75g吐溫，攪拌均勻，得第一原料；將第一原料放入蒸餾燒瓶中，加入5000g水和8粒沸石，再將蒸餾燒瓶與加熱器、冷凝管、接液管和接液器等連接組成蒸餾裝置，冷凝管通入自來水，使蒸餾燒瓶內(nèi)液體保持微沸狀態(tài)，蒸餾5h后，接液器收集到的油水混合物，即為第一混合物；步驟二、將步驟一中的第一混合物加入110g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3％的氯化鈉溶液和1.2g乙酸，混合均勻后放入-18℃環(huán)境中冰凍1.2h，取出融化，得第二混合物；按體積比1:1.5向第二混合物中加入乙醚萃取，分離乙醚層，剩下的水層再按體積比為1:1.5加入乙醚萃取，分離乙醚層，共萃取2次，將乙醚層合并揮發(fā)去除乙醚后得揮發(fā)油；<實施例5>腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的制備方法，包括以下步驟：步驟一、稱取600g腫節(jié)風(fēng)的葉和莖置于超微粉碎機(jī)中粉碎，取出加入600g水，置于超聲波中以60kHz的頻率處理30min，取出加入20g半胱氨酸和30g纖維素酶，調(diào)節(jié)pH值至6，于60℃下酶解36h，加入15g司班和80g吐溫，攪拌均勻，得第一原料；將第一原料放入蒸餾燒瓶中，加入6000g水和12粒沸石，再將蒸餾燒瓶與加熱器、冷凝管、接液管和接液器等連接組成蒸餾裝置，冷凝管通入自來水，使蒸餾燒瓶內(nèi)液體保持微沸狀態(tài)，蒸餾6h后，接液器收集到的油水混合物，即為第一混合物；步驟二、將步驟一中的第一混合物加入120g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3％的氯化鈉溶液和1.5g乙酸，混合均勻后放入-18℃環(huán)境中冰凍1.5h，取出融化，得第二混合物；按體積比1:2向第二混合物中加入丙酮萃取，分離丙酮層，剩下的水層再按體積比為1:2加入丙酮萃取，分離丙酮層，共萃取2次，將丙酮層揮發(fā)去除丙酮后得揮發(fā)油；<實施例6>腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的制備方法，包括以下步驟：步驟一、稱取500g腫節(jié)風(fēng)的葉和莖置于超微粉碎機(jī)中粉碎，取出加入500g水，置于超聲波中以60kHz的頻率處理20min，取出加入15g半胱氨酸和25g纖維素酶，調(diào)節(jié)pH值至5，于60℃下酶解24h，加入10g司班和70g吐溫，攪拌均勻，得第一原料；將第一原料放入蒸餾燒瓶中，加入5000g水和8粒沸石，再將蒸餾燒瓶與加熱器、冷凝管、接液管和接液器等連接組成蒸餾裝置，冷凝管通入自來水，使蒸餾燒瓶內(nèi)液體保持微沸狀態(tài)，蒸餾5h后，接液器收集到的油水混合物，即為第一混合物；步驟二、將步驟一中的第一混合物加入100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3％的氯化鈉溶液和1g乙酸，混合均勻后放入-18℃環(huán)境中冰凍1h，取出融化，得第二混合物；按體積比1:1向第二混合物中加入乙酸乙酯萃取，分離乙酸乙酯層，剩下的水層再按體積比為1:1加入乙酸乙酯萃取，分離乙酸乙酯層，共萃取2次，將乙酸乙酯層揮發(fā)去除乙酸乙酯后得揮發(fā)油；<實施例7>按實施例4的方法制備腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油，按體積比1:0.08:0.06向腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油加入吐溫和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15％的魔芋粉溶液，采用磁力攪拌器攪拌，直至混合物呈乳化狀態(tài)；其中，魔芋粉溶液為將魔芋粉溶于水中制得；然后按質(zhì)量比1:0.03向混合物中加入β-環(huán)糊精，繼續(xù)用磁力攪拌器攪拌，直至混合物呈黏稠狀，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?lt;實施例8>按實施例5的方法制備腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油，按體積比1:0.1:0.1向腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油加入吐溫和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15％的魔芋粉溶液，采用磁力攪拌器攪拌，直至混合物呈乳化狀態(tài)；其中，魔芋粉溶液為將魔芋粉溶于水中制得；然后按質(zhì)量比1:0.04向混合物中加入β-環(huán)糊精，繼續(xù)用磁力攪拌器攪拌，直至混合物呈黏稠狀，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?lt;實施例9>按實施例6的方法制備腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油，按體積比1:0.05:0.05向腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油加入吐溫和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15％的魔芋粉溶液，采用磁力攪拌器攪拌，直至混合物呈乳化狀態(tài)；其中，魔芋粉溶液為將魔芋粉溶于水中制得；然后按質(zhì)量比1:0.02向混合物中加入β-環(huán)糊精，繼續(xù)用磁力攪拌器攪拌，直至混合物呈黏稠狀，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?lt;實施例10>按實施例7的方法制備，a按質(zhì)量體積比為0.8g:1000ml將揮發(fā)油溶解于稀釋劑中，得第一溶解液，稀釋劑由吐溫和水按體積比為1:3組成；b按體積比為100:1.5向a中的第一溶解液中加入薄荷漿液，攪拌均勻得藥液；其中薄荷漿液的制備方法：將12g新鮮薄荷和12g乙酸乙酯置于研缽中研碎后，過濾即得。<實施例11>按實施例8的方法制備，a按質(zhì)量體積比為1g:1000ml將揮發(fā)油溶解于稀釋劑中，得第一溶解液，稀釋劑由吐溫和水按體積比為1:3組成；b按體積比為100:2向a中的第一溶解液中加入薄荷漿液，攪拌均勻得藥液；其中薄荷漿液的制備方法：將15g新鮮薄荷和15g乙酸乙酯置于研缽中研碎后，過濾即得。<實施例12>按實施例9的方法制備，a按質(zhì)量體積比為0.5g:1000ml將揮發(fā)油溶解于稀釋劑中，得第一溶解液，稀釋劑由吐溫和水按體積比為1:3組成；b按體積比為100:1向a中的第一溶解液中加入薄荷漿液，攪拌均勻得藥液；其中薄荷漿液的制備方法：將10g新鮮薄荷和10g乙酸乙酯置于研缽中研碎后，過濾即得。<得率試驗>按實施例1～3和實施例4～6的方法制備腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油，用下述公式計算揮發(fā)油得率。得率＝腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油質(zhì)量/腫節(jié)風(fēng)的葉和莖的質(zhì)量×100％表1腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的得率數(shù)據(jù)顯示，實施例4～6的得率明顯高于實施例1～3的利率，可見利用超微粉碎手段可最大限度地保留腫節(jié)風(fēng)的生物活性成分，超聲波的機(jī)械作用促使腫節(jié)風(fēng)的葉和莖中的活性物質(zhì)乳化，分散至水中，再與纖維素酶酶解細(xì)胞壁作用和吐溫、司班乳化作用結(jié)合，使腫節(jié)風(fēng)的生物活性成分更多的從其組織中流出，萃取時油相與水相的界面不清，呈一定強(qiáng)度的乳化區(qū)，對腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的得率影響很大，少量無機(jī)鹽會使乳化作用增強(qiáng)，但當(dāng)無機(jī)鹽含量高時，可導(dǎo)致乳化區(qū)作用力減弱，導(dǎo)致油水分離，為此加入高濃度的氯化鈉溶液和乙酸，可消除腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油乳化現(xiàn)象，達(dá)到兩相快速有效分離，-18℃凍結(jié)可使水形成冰晶，腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油結(jié)晶，使油/水型乳濁液分離，故解凍后，兩相分離，有利于腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的萃取，綜合作用下，可使腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油得率提高。表1腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的得率<病原菌抑制試驗>一、腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病病原菌菌絲的抑制采用生長速率法測定腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病病原菌菌絲的抑制作用：用未冷卻的PDA培養(yǎng)基將揮發(fā)油稀釋不同濃度：0.0625g/L、0.125g/L、0.5g/L和1g/L，按質(zhì)量體積比50μg:1ml向不同濃度的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油中加入吐溫80助溶混合，然后分別倒入直徑為9cm培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿10ml，制成含藥平板，每個處理3次重復(fù)，以溶劑為對照。接種直徑為9mm的三七灰霉病病原菌菌餅到含藥培養(yǎng)基平板中央，置于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)120h后用十字交叉法測量各處理的菌落直徑，減去接種菌餅直徑，求出3次重復(fù)的平均值，得出各處理的平均菌落擴(kuò)展直徑，用下述公式計算抑制率。抑制率＝(對照菌落擴(kuò)展直徑-處理菌落擴(kuò)展直徑)/對照菌落擴(kuò)展直徑×100％表2不同濃度揮發(fā)油對三七灰霉病菌菌絲的抑制率數(shù)據(jù)顯示，實施例1～3的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油濃度為0.5g/L及以上時對三七灰霉病病原菌菌絲的抑制率達(dá)100％；實施例4～9的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油濃度為0.125g/L及以上時對三七灰霉病病原菌菌絲的抑制率達(dá)100％；腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油濃度同為0.0625g/L時，實施例1～3的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病病原菌菌絲的抑制率為30％左右，而實施例4～9的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病病原菌菌絲的抑制率為76％左右。可見，采用實施例4～9的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病病原菌菌絲的抑制作用比實施例1～3的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油更強(qiáng)。表2不同濃度揮發(fā)油對三七灰霉病病原菌菌絲的抑制率二、腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病病原菌孢子萌發(fā)的抑制采用懸滴法測定腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對孢子萌發(fā)的抑制作用：將三七灰霉病病原菌培養(yǎng)一定時間后使其產(chǎn)孢，加無菌水配置成10倍物鏡下每視野50個孢子的孢子懸浮液，以孢子懸浮液為溶劑，分別配置50ml不同濃度的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油，0.0625g/L、0.125g/L、0.5g/L和1g/L，每個處理3次重復(fù)，以孢子懸浮液為對照，3次重復(fù)，于28℃下保濕培養(yǎng)，24h后檢查孢子萌發(fā)情況，計算孢子萌發(fā)抑制率；萌發(fā)抑制率＝(對照萌發(fā)率-處理萌發(fā)率)/對照萌發(fā)率×100％表3不同濃度揮發(fā)油對三七灰霉病菌孢子萌發(fā)的抑制率數(shù)據(jù)顯示，實施例1～3的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油濃度為0.5g/L及以上時對三七灰霉病病原菌菌絲的抑制率達(dá)95％以上；實施例4～9的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油濃度為0.125g/L及以上時對三七灰霉病病原菌孢子萌發(fā)的抑制率達(dá)97％以上；腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油濃度同為0.0625g/L時，實施例1～3的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病病原菌孢子萌發(fā)的抑制率為44％左右，而實施例4～9的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病病原菌孢子萌發(fā)的抑制率為74％左右?？梢姡捎脤嵤├?～9的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病病原菌孢子萌發(fā)的抑制作用比實施例1～3的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油更強(qiáng)。表3不同濃度腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病病原菌孢子的抑制作用由表2和表3數(shù)據(jù)說明利用超微粉碎手段可最大限度地保留腫節(jié)風(fēng)的生物活性成分，超聲波的機(jī)械作用促使腫節(jié)風(fēng)的葉和莖中的活性物質(zhì)乳化，分散至水中，再與纖維素酶酶解細(xì)胞壁作用和吐溫、司班乳化作用結(jié)合，使腫節(jié)風(fēng)的生物活性成分更多的從其組織中流出，綜合作用下使得到的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油活性更強(qiáng)，對三七灰霉病病原菌及孢子的抑制作用更強(qiáng)。<對比試驗>按實施例1、實施例4和實施例7的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油，以多菌靈為對比例1、腐霉利為對比例2、嘧霉胺為對比例3，腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油配制成0.5g/L的濃度，參照三種供試化學(xué)殺菌劑的使用說明，用無菌水將化學(xué)殺菌劑稀釋至相應(yīng)濃度，并按照生長速率測定法測定腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油和化學(xué)殺菌劑對灰霉病病原菌菌絲的生長和孢子萌發(fā)的抑制作用，以無菌水為對照。如表4數(shù)據(jù)可以看出按實施例1、實施例4和實施例7的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對菌絲的抑制率明顯比多菌靈和腐霉利強(qiáng)，達(dá)到100％，與嘧霉胺效果一致，而對孢子萌發(fā)的抑制，按實施例1、實施例4和實施例7的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油達(dá)95％以上明顯高于其余三種化學(xué)殺菌劑。表4化學(xué)藥劑對三七灰霉病病原菌及孢子的抑制藥劑對菌絲的抑制率％對孢子萌發(fā)的抑制率％實施例110095.23實施例410099.83實施例710099.88多菌靈91.0186.50腐霉利95.0290.60嘧霉胺10090.72無菌水00<三七灰霉病防治田間試驗>按實施例1、實施例4和實施例7的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油先用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％的乙醇與腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油按照1:1混合均勻，再用清水稀釋至濃度為0.5g/L，按實施例10的方法制備，再用清水稀釋至腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油濃度為0.5g/L，分三個用藥頻率查看三七灰霉病發(fā)病情況和防治效果：(一)在病害發(fā)生初期每隔7d噴一次，連續(xù)施藥3次，以不施用任何藥劑為空白對照，每小區(qū)面積為20m2，重復(fù)3次。分別于用藥前1天和用藥后7d調(diào)查田間發(fā)病情況，調(diào)查時每小區(qū)取5點，每點10株，調(diào)查葉片發(fā)病情況，統(tǒng)計病情指數(shù)和防治效果。(二)在病害發(fā)生初期每隔10d噴一次，連續(xù)施藥3次，以不施用任何藥劑為空白對照，每小區(qū)面積為20m2，重復(fù)3次。分別于用藥前1天和用藥后10d調(diào)查田間發(fā)病情況，調(diào)查時每小區(qū)取5點，每點10株，調(diào)查葉片發(fā)病情況，統(tǒng)計病情指數(shù)和防治效果。(三)在病害發(fā)生初期每隔15d噴一次，連續(xù)施藥3次，以不施用任何藥劑為空白對照，每小區(qū)面積為20m2，重復(fù)3次。分別于用藥前1天和用藥后15d調(diào)查田間發(fā)病情況，調(diào)查時每小區(qū)取5點，每點10株，調(diào)查葉片發(fā)病情況，統(tǒng)計病情指數(shù)和防治效果。病情嚴(yán)重度按0～4級標(biāo)準(zhǔn)分。0級：葉片無病斑；1級：發(fā)病面積占整個葉面積的10％以下；2級：發(fā)病面積占整個葉面積的10％～29％；3級：發(fā)病面積占整個葉面積的30％～50％；4級：發(fā)病面積占整個葉面積的50％以上。根據(jù)調(diào)查結(jié)果，按照下面公式計算病情指數(shù)及防治效果，統(tǒng)計分析防治效果差異。病情指數(shù)＝∑(病級葉片數(shù)×代表數(shù)值)/(調(diào)查葉片總數(shù)×發(fā)病最重級別的代表數(shù)值)×100％防治效果＝(1-CK0×PT1/CK1×PT0)×100％CK0——空白對照區(qū)施藥前病情指數(shù)；CK1——空白對照區(qū)施藥后病情指數(shù)；PT0——腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油處理區(qū)施藥前病情指數(shù)；PT1——腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油處理區(qū)施藥后病情指數(shù)。表5數(shù)據(jù)顯示，腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病有較好的防治效果，實施例1、實施例4、實施例7和實施例10的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油用藥周期為7d時，三七灰霉病病情指數(shù)均在5.0以下，防治效果均在87％以上；用藥周期改為10d時，實施例1和實施例4的三七灰霉病病情指數(shù)明顯上升，防治效果明顯降低，而實施例7和實施例10的三七灰霉病病情指數(shù)和防治效果無明顯變化；用藥周期為15d時，實施例1和實施例4的三七灰霉病病情指數(shù)分別為8.6和7.7，防治效果分別為67.97％和76.07％，而實施例7和實施例10的三七灰霉病病情指數(shù)均在5.0以下，防治效果均在86％以上，可以保證殺菌效果；可見實施例7和實施例10中，得到腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油后，加入吐溫使腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油乳化后溶解于水液體中，使體系更穩(wěn)定，再加入魔芋粉溶液，在其乳化區(qū)形成一層保護(hù)膜層，減緩腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油的揮發(fā)速度，然后加入β-環(huán)糊精，并充分?jǐn)嚢柚寥榛癄顟B(tài)，即形成腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油包合物，使其更易保藏，延長其有效期；實施例10將腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油用于防治三七灰霉病時，用吐溫、水和新鮮薄荷漿液稀釋，薄荷中含有豐富的黃酮類物質(zhì)，其具有較強(qiáng)的抗菌作用，與腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油一起具有協(xié)同作用，相互增強(qiáng)其對三七灰霉病的防治作用。表5腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病的田間防治效果<對比試驗>實施例1、實施例4、實施例7和實施例10的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油，以多菌靈為對比例1、腐霉利為對比例2，嘧霉胺為對比例3，進(jìn)行田間小區(qū)防治試驗。三種化學(xué)殺菌劑按照其商品包裝使用說明，用清水稀釋相應(yīng)倍數(shù)，噴霧使用；按實施例1，實施例4和實施例7的方法制備的腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油先用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％的乙醇與腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油按照1:1混合均勻，再用清水稀釋至濃度為0.5g/L，實施例10的方法制備，再用清水稀釋腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油至濃度為0.5g/L。在病害發(fā)生初期每隔7d噴一次，連續(xù)施藥3次，以不施用任何藥劑為空白對照，每小區(qū)面積為20m2，重復(fù)3次。分別于用藥前1天和用藥后7d調(diào)查田間發(fā)病情況，調(diào)查時每小區(qū)取5點，每點10株，調(diào)查葉片發(fā)病情況，統(tǒng)計病情指數(shù)和防治效果。病情嚴(yán)重度按0～4級標(biāo)準(zhǔn)分。0級：葉片無病斑；1級：發(fā)病面積占整個葉面積的10％以下；2級：發(fā)病面積占整個葉面積的10％～29％；3級：發(fā)病面積占整個葉面積的30％～50％；4級：發(fā)病面積占整個葉面積的50％以上。根據(jù)調(diào)查結(jié)果，按照下面公式計算病情指數(shù)及防治效果，統(tǒng)計分析防治效果差異。病情指數(shù)＝∑(病級葉片數(shù)×代表數(shù)值)/(調(diào)查葉片總數(shù)×發(fā)病最重級別的代表數(shù)值)×100％防治效果＝(1-CK0×PT1/CK1×PT0)×100％CK0——空白對照區(qū)施藥前病情指數(shù)；CK1——空白對照區(qū)施藥后病情指數(shù)；PT0——腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油處理區(qū)施藥前病情指數(shù)；PT1——腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油處理區(qū)施藥后病情指數(shù)。表6數(shù)據(jù)顯示，實施例1、實施例4、實施例7和實施例10對三七灰霉病的病情指數(shù)比多菌靈、腐霉利和嘧霉胺低，防治效果好。說明腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對三七灰霉病的防治作用強(qiáng)。表6腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油與化學(xué)殺菌劑對三七灰霉病的田間防治效果盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的實施例。當(dāng)前第1頁1 2 3