專利名稱：含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮有效部位的注射液及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物藥腫節(jié)風(fēng)，具體地說是一種含有腫節(jié)風(fēng)及同科屬植物提取物的藥物組合物黃酮注射液及其用途。
背景技術(shù)：
腫節(jié)風(fēng)(Sarcandra glabra(Thunb)Nakai)為金粟蘭科草珊瑚屬植物干燥全草又名草珊瑚、九節(jié)茶、接骨木、駁骨茶、骨消風(fēng)等。為多年生常綠草本，分布于江西、安徽、浙江、湖南、湖北、四川、廣東、廣西等省，江西省為主要產(chǎn)地。腫節(jié)風(fēng)有活血祛瘀、止痛、清熱解毒等功效。用于治療常見炎癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。近代用于癌癥輔助治療，對多種惡性腫瘤如胃癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、直腸癌等有輔助治療作用。腫節(jié)風(fēng)含黃酮類、香豆素、有機酸、揮發(fā)油、皂苷、酚類、鞣質(zhì)、多糖等多成分。腫節(jié)風(fēng)注射液、口服液、片劑用于血小板減少性紫癜患者升高血小板，也用于癌癥輔助治療。目前市售腫節(jié)風(fēng)注射液、口服液、片劑是腫節(jié)風(fēng)粗提物粗制劑，其含量測定用香豆素、有機酸，而含黃酮量不明確。按國家藥監(jiān)局新藥管理辦法規(guī)定中藥“有效部位”必須達到50％以上的純度，即必須達到50％以上的純度才是中藥“有效部位”。有文獻報道腫節(jié)風(fēng)總黃酮類提取物可用于血小板紫癜及癌癥輔助治療，未明確總黃酮類提取物的純度，更未明確其是否達到50％以上(50％至99％)的純度，即其黃酮的純度達到什么程度不明確，更無黃酮有效部位及其注射液產(chǎn)品批準上市。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要提供一種含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮的有效部位的注射液及其用途，腫節(jié)風(fēng)提取的黃酮有效部位達到50％以上(50％至99％)的純度，以此制成大小不同的各種針劑。
本發(fā)明的目的可以采取以下方法來實現(xiàn)一種含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮有效部位的注射液，其特征在于所述的腫節(jié)風(fēng)中提取出的黃酮有效部位的純度為50％至99％，所述的黃酮有效部位單獨或混合、或與其它植物提取物或化合物混合制成注射液，所述的注射液即針劑，包括小針劑、大針劑。
含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮有效部位的藥物組合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟總黃酮部位及成分的提取分離黃酮類總提取物可以選擇以下的一種方法提取得到醇回流提取、醇滲漉提取或水煎煮，其中醇回流提取方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材粗粉，用35％～95％乙醇6～10倍量作溶劑，浸漬1小時后，加熱回流提取2～4次，每次1～4小時，回收乙醇，干燥，即得總提物；醇滲漉提取方法是取腫節(jié)風(fēng)粗粉，用25％～95％乙醇作溶劑，浸漬后，以1～7ml/分鐘的速度進行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，干燥，即得總提物；煎煮提取的方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材加6～10倍量水煎煮，每次1～3小時，濾過，濾液合并，濃縮，干燥即得總提取物；分離精制總黃酮及其單體有效成分可以選擇以下的一種方法提取得到大孔樹脂吸附法、超臨界萃取法或有機溶劑提取法，其中有機溶劑提取法有機溶劑乙酸乙酯法提取腫節(jié)風(fēng)干浸膏中的總黃酮用水將腫節(jié)風(fēng)干膏超聲溶解，用乙酸乙酯反復(fù)萃取，得總黃酮；超臨界萃取法腫節(jié)風(fēng)總提取物，置入超臨界萃取器中，調(diào)節(jié)流量，壓力20-50MPa、溫度100-350℃、時間60-120min得萃取物總黃酮；大孔樹脂吸附法大孔吸附樹脂提取腫節(jié)風(fēng)干浸膏中的總黃酮取腫節(jié)風(fēng)總浸膏，用水稀釋后，再用恒流泵泵入已預(yù)處理的大孔吸附樹脂吸附，用水洗柱，水洗后用50～90％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，干燥得固形物即為總黃酮；
干燥方法分離精制后的黃酮類提取物可以采用烘干法、真空干燥法或噴霧干燥法。
含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮有效部位的注射液應(yīng)用于抗腫瘤作用，增效減毒作用，抗腫瘤放、化療的毒性反應(yīng)包括減輕白細胞下降及血小板減少。
含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮有效部位的注射液應(yīng)用于治療血熱妄行、皮膚紫斑、原發(fā)性血小板減少性紫癜及繼發(fā)性血小板減少性紫癜，升高血小板。
含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮有效部位的注射液應(yīng)用于抗菌抗炎，治療咽喉炎、氣管支氣管炎、肺炎、角膜炎、蜂窩組織炎、闌尾炎。
具體實施例方式
下面詳細描述本發(fā)明的實施方案。
一、黃酮有效部位的提取分離及含量測定本發(fā)明的中藥腫節(jié)風(fēng)黃酮類總提取物可以通過將腫節(jié)風(fēng)進行醇回流提取、醇滲漉提取或水煎煮提取得到，其中A、醇回流提取方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材粗粉，用35％-95％乙醇6-10倍量作溶劑，浸漬1小時后，加熱回流提取2-4次，每次1-4小時，回收乙醇，干燥，即得總提物；B、醇滲漉提取方法是取腫節(jié)風(fēng)粗粉，用25％-95％乙醇作溶劑，浸漬后，以1-7ml/分鐘的速度進行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，干燥，即得總提物；C、煎煮提取的方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材加6-10倍量水煎煮，每次1-3小時，濾過，濾液合并，濃縮，干燥即得總提取物。
分離精制上述A、B、C腫節(jié)風(fēng)提取物，任何1種再經(jīng)有機溶劑提取法、或大孔吸附樹脂吸附法、或超臨界萃取法分離精制獲得總黃酮。
機溶劑提取法有機溶劑乙酸乙酯法提取腫節(jié)風(fēng)干浸膏中的總黃酮用一定量的水將腫節(jié)風(fēng)干膏超聲溶解，用一定量的乙酸乙酯反復(fù)萃取，乙酸乙酯采用3因素，3水平正交試驗確定工藝路萃取，得總黃酮的含量大于50％，總黃酮的回收率在80％以上。
超臨界萃取法腫節(jié)風(fēng)提取物，置入超臨界萃取器中，調(diào)節(jié)流量、壓力20-50MPa、溫度100-350C、時間60-120min得萃取物。測定萃取物中的總黃酮含量，總黃酮的回收率?？傸S酮的回收率總黃酮量大于50％，總黃酮的回收率在80％以上。
大孔樹脂吸附法大孔吸附樹脂提取腫節(jié)風(fēng)干浸膏中的總黃酮取腫節(jié)風(fēng)總浸膏，用水稀釋后，再用恒流泵泵入已預(yù)處理的大孔吸附樹脂吸附。用水洗柱，水洗后用50-90％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，干燥得固形物即為總黃酮，黃酮的含量大于50％，總黃酮的回收率在80％以上。
總黃酮含量測定對照品溶液制備精密稱取105℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品100mg，置100ml容量瓶中，加60％乙醇70ml，置水浴上微熱溶解，放冷，加60％乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10ml，置50ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
標準曲線制備精密吸取對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，與6.0ml分別置25ml量瓶中，各加水5ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，用6ml水同法作空白，照分光光度法在500nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
供試品溶液制備精密稱取總提物20mg，置25ml容量瓶中，加70％乙醇10ml，溶解，加水稀釋定容至刻度，搖勻，即得。精密吸取1ml，置25ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“各加水5ml”起依法操作，以供試品溶液1ml，加水稀釋至25ml作空白，過濾，取濾液依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的重量，計算，即得。
經(jīng)測定總黃酮類以蘆丁計算含達到50％以上至99％的純度。
干燥方法本發(fā)明分離精制后的黃酮類提取物可以采用烘干法、真空干燥法、噴霧干燥法。烘干法、真空干燥法干燥時間長，真空干燥前須在水浴上預(yù)干燥，將水分控制在20％以內(nèi)，真空干燥時易拉干成蜂窩狀，干燥可在2～3天內(nèi)完成，反之，含水量高，真空干燥時會溢出，而烘干法所需時間更長。噴霧干燥時間短，可在數(shù)小時內(nèi)完成。三種方法如何選擇，可視實際條件。
二、黃酮有效部位注射液的制備腫節(jié)風(fēng)總黃酮配制取一定量總黃酮置燒杯中，攪拌溶解，配成注射液。
脫色由于本品時，色澤較深，澄明度難以符合要求，故需要進行脫色處理，為防止脫色過程中黃酮損失過多，本實驗選用L9(34)正交表考察，所得結(jié)果表明考察指標所得的結(jié)果為配制注射液時，加入活性炭的比例為0.05％，在100℃脫色10min。重復(fù)3次為最佳脫色工藝。
滅菌方法選擇采用常用的滅菌方法，按如下方法考察腫節(jié)風(fēng)總黃酮注射液4批。每批分別采用普通安瓿和棕色安瓿兩種分別灌封。置于室溫(氣溫-2～35℃，相對濕度50～85％)進行穩(wěn)定性考察6個月，其結(jié)果得出棕色安瓿較為合適，因而選用棕色安瓿。
腫節(jié)風(fēng)總黃酮注射液質(zhì)量檢查性狀澄清液體。按《中國藥典》2005年版一部附錄第13頁注射劑項下檢查，并參考《中藥新藥研究的技術(shù)要求》中對中藥注射劑的有關(guān)規(guī)定，檢查的項目有色澤、pH值、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、重金屬、砷鹽、草酸鹽、鉀離子、樹脂、熾灼殘渣、溶血試驗、刺激性試驗、過敏試驗、濕熱滅菌法將制備的溶液經(jīng)G5垂熔玻璃漏斗濾過后灌封于安瓿，并于115℃濕熱滅菌15min。
膜過濾滅菌法將制備的溶液經(jīng)G5垂熔玻璃漏斗濾過后再用0.22μm的微孔濾膜過濾，然后在無菌室灌封于安瓿中。
煮沸滅菌法將制備的溶液經(jīng)G5垂熔玻璃漏斗濾過后灌封于安瓿并于100℃滅菌30min。
將同一批號的自制腫節(jié)風(fēng)總黃酮注射液經(jīng)過不同條件的滅菌考察，并室溫放置30天后，結(jié)果表明上述滅菌方法中膜過濾法可以使制劑澄明，其余皆產(chǎn)生渾濁。故滅菌方法選擇為膜過濾滅菌法。
包裝材料的選擇選擇腫節(jié)總固體量測定、裝量差異。pH值取本品，依法測定，應(yīng)為5.9～7.2。色澤取本品0.5ml，稀釋至10ml，相當(dāng)于黃色6號液。重金屬取本品，依《中國藥典》2005年版一部附錄IXE二法檢查，含重金屬不得超過百萬分之十。砷鹽取本品，依《中國藥典》2005年版一部附錄IXF項下第一法檢查，不得超過百萬分之二。溶血與凝聚依法檢查，無溶血、無凝聚現(xiàn)象。其他符合《中國藥典》2005年版一部附錄注射劑項下及注射劑有關(guān)物質(zhì)檢查項下的有關(guān)規(guī)定。
三、黃酮有效部位注射液的抗腫瘤及抗腫瘤的增效減毒應(yīng)用及升白升血小板作用黃酮有效部位及其配制成注射液整體實驗及體外實驗均證明有明顯的直接抗腫瘤的作用及增效減毒作用，抗腫瘤，放、化療的毒性反應(yīng)包括減輕白細胞下降及血小板減少，也可應(yīng)用于原發(fā)性血小板紫癜及繼發(fā)性血小板紫癜，升高血小板及抗菌抗炎。
(一)整體實驗通過對多種腫瘤試驗證明，我們提出的黃酮有效部位及其配制成注射液有明顯的直接抗腫瘤的作用。
1、直接抗腫瘤實驗在直接抗小鼠S180實體瘤試驗及直接抗小鼠S180腹水型腫瘤試驗，通過腹腔注射、肌肉注射、尾靜脈注射方式給藥環(huán)磷酰胺、目前市售的腫節(jié)風(fēng)注射液、腫節(jié)風(fēng)黃酮50％以上(50％至99％)純度的有效部位注射液，實驗結(jié)果表明腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位注射液抑瘤率在30％和50％之間，使S180腹水型腫瘤小鼠的生命延長率60～156％，黃酮有效部位注射液有明顯的直接抗腫瘤的作用。
表1 腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位注射液抗腫瘤S180結(jié)果(x±s，n＝10)

2、增效實驗環(huán)磷酰胺治療小鼠S180實體瘤增效試驗中，通過腹腔注射、肌肉注射、尾靜脈注射方式給藥環(huán)磷酰胺減少劑量20mg/kg及環(huán)磷酰胺劑量為20mg/kg分別加用腫節(jié)風(fēng)黃酮50％以上(50％至99％)純度的有效部位注射液。實驗結(jié)果表明單用環(huán)磷酰胺20mg/kg的抑瘤率在5％和20％之間，與腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位合用時抑瘤率在30％和70％之間，說明腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位注射液與環(huán)磷酰胺合用時可明顯增強化療藥環(huán)磷酰胺抗腫瘤作用。
表2 腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位注射液抗腫瘤S180增效實驗結(jié)果(x±s，n＝10)

3、減毒實驗在50％以上(50％至99％)純度的黃酮有效部位注射液對環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷治療小鼠S180實體瘤減毒試驗中，通過腹腔注射、肌肉注射、尾靜脈注射這四種方式給藥環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷和分別加腫節(jié)風(fēng)黃酮50％以上(50％至99％)純度的有效部位的注射劑。實驗結(jié)果表明小鼠在給藥環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷后都出現(xiàn)血小板和白細胞顯著下降，分別加腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位后，白細胞和血小板明顯的上升，說明腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位和化療藥合用時有明顯的減毒作用。
表3 腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位注射液抗腫瘤S180減毒實驗結(jié)果(x±s，n＝10)

(二)體外實驗1、對體外培養(yǎng)腫瘤細胞生長抑制作用實驗在對體外培養(yǎng)的小鼠S180、卵巢癌SKOV細胞、胰腺癌SW1990細胞的生長抑制作用的實驗中，腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位注射劑對上述腫瘤細胞生長的抑制率在20％至95％之間，說明黃酮50％以上(50％至99％)純度的有效部位注射劑具有抗腫瘤作用。
2、體外抑菌實驗在體外抑菌試驗中，采用綠膿桿菌、肺炎桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、白色念球菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌、甲鏈球菌、卡他球菌、流感桿菌、肺炎雙球菌、鏈球菌及脆弱類桿菌等15種117株菌，經(jīng)MIC和MSC試驗表明50％以上(50％至99％)純度的有效部位注射劑有不同程度的抗菌作用。
權(quán)利要求
1.一種含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮有效部位的注射液，其特征在于所述的腫節(jié)風(fēng)中提取出的黃酮有效部位的純度為50％至99％，所述的黃酮有效部位單獨或混合、或與其它植物提取物或化合物混合制成注射液，所述的注射液即針劑，包括小針劑、大針劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮有效部位的注射液的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于抗腫瘤作用，增效減毒作用，抗腫瘤放、化療的毒性反應(yīng)包括減輕白細胞下降及血小板減少。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮有效部位的注射液的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于治療血熱妄行、皮膚紫斑、原發(fā)性血小板減少性紫癜及繼發(fā)性血小板減少性紫癜，升高血小板。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮有效部位的注射液的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于抗菌抗炎，治療咽喉炎、氣管支氣管炎、肺炎、角膜炎、蜂窩組織炎、闌尾炎。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含有腫節(jié)風(fēng)提取物黃酮有效部位的注射液，其特征在于所述的腫節(jié)風(fēng)中提取出的黃酮有效部位的純度為50％至99％，所述的黃酮有效部位單獨或混合、或與其它植物提取物或化合物混合制成注射液，所述的注射液即針劑，包括小針劑、大針劑。本發(fā)明可用于抗腫瘤及增效減毒，抗腫瘤放、化療的毒性反應(yīng)，包括升白細胞及升血小板，也能治療血熱妄行、皮膚紫斑、升高原發(fā)性及繼發(fā)性血小板減少性紫癜患者的血小板，或應(yīng)用于抗菌抗炎，治療咽喉炎、氣管支氣管炎、肺炎、角膜炎、蜂窩組織炎、闌尾炎。
文檔編號A61P7/00GK1839904SQ200610049220
公開日2006年10月4日 申請日期2006年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月18日
發(fā)明者連曉媛, 張治針, 湯祖麟 申請人:江西博士聯(lián)科技研究開發(fā)有限責(zé)任公司