本發(fā)明涉及提取分離技術領域，尤其涉及一種含夾帶劑超臨界CO₂萃取靈芝孢子油的方法。

背景技術：

靈芝是我國傳統(tǒng)中藥材之一，在我國具有悠久的藥用歷史，被《神農(nóng)本草經(jīng)》稱為上品。據(jù)《本草綱目》記載，靈芝能“治胸中結(jié)、溢心氣”，“入心生血、助心沖脈”，“安神”，“保神”，“益肺氣”，“益脾氣”，“益精氣”，“補肝氣”等，可用于治療多種疾病。我國靈芝資源豐富，根據(jù)趙繼定所著的中國真菌志記載，中國靈芝科真菌共用4屬98種，僅靈芝屬(Ganoderma)就有76種，是世界靈芝科真菌物種多樣性最豐富的國家之一。

靈芝孢子(Ganoderma lucidium spore)是靈芝發(fā)育成熟期從菌蓋彈射出來極其細小的孢子，為靈芝的生殖細胞，是靈芝的活性較高的藥用部位。人們到20世紀才開始對靈芝孢子的研究與開發(fā)利用，靈芝孢子與子實體一樣含有大量藥理活性物質(zhì)，甚至部分活性成分含量高于子實體。

靈芝孢子油主要由油脂(即由脂肪酸與甘油生成的甘油三酯的混合物)及溶解于甘油三酯中的靈芝三萜和靈芝甾醇等脂質(zhì)活性物質(zhì)組成，國家食品工程研究中心的研究顯示，靈芝孢子油的價值高低取決于溶解于甘油三酯中靈芝三萜和靈芝甾醇等活性物質(zhì)是否呈穩(wěn)定狀態(tài)及其含量高低。

由于靈芝孢子細胞壁由幾丁質(zhì)、樹脂和纖維素等成分組成，具有抗壓、耐酸和不易酶解等特點，不利于孢子有效成分的釋放，且服用對胃有刺激性、惡心等缺點，影響了人體的吸收利用。要有效地提取吸收孢子的成份必須先破壁，目前靈芝孢子破壁的方法主要有：超聲波破壁法、高速氣流法、粉體機械破壁法、超低溫瞬間破壁、生物萌動氣流法、酶解破壁法等。李淑芳等^[1]對靈芝孢子破壁技術進行研究，選擇適合靈芝孢子油提取的前處理方法。采用萌發(fā)、超微粉碎、酶解3種方法綜合進行靈芝孢子破壁，效果較好，破壁率達到85.38％。張志軍等^[2]采用中性蛋白酶對靈芝孢子粉進行水解提取靈芝孢子油，考察了酶解時pH值、溫度、反應時間以及酶用量和終止酶解反應的pH值5個因素對油脂提取率的影響。結(jié)果表明，酶用量為2000IU/g靈芝孢子、酶解pH7.5、溫度60℃、反應時間1.0h是最佳酶解反應條件，然后以pH4.5終止酶解反應，油脂提取率達88.71％。

靈芝孢子粉破壁后，有效物質(zhì)易被氧化，功效降低，不易保存?，F(xiàn)代藥理學研究表明，靈芝孢子粉中發(fā)揮功效的活性物質(zhì)是其中的脂類成分。靈芝孢子油主要是采用超臨界CO₂流體萃取技術從破壁的靈芝孢子中萃取的脂質(zhì)活性物質(zhì)。羅登林等^[3]為了直接從未破壁的靈芝孢子中萃取油脂，在超臨界CO₂動態(tài)循環(huán)萃取之前引入靜態(tài)膨脹工藝，考察了各膨脹因素對靈芝孢子油萃取率的影響。主要考慮萃取率的影響，對活性成分三萜類和甾醇類含量未做考察。馮翠萍等^[4]采用超臨界CO₂萃取法提取靈芝孢子油，通過正交試驗確定最佳萃取條件是：萃取壓力、溫度、時間分別為25MPa、45℃、60min，CO₂流量25L/h，在此條件下出油率可達3.96％。出油率極低且也未考慮活性成分的提取率。李琴韻等^[5]對靈芝孢子油的超臨界CO₂萃取中的萃取溫度、萃取壓力和夾帶劑加入量3個因素進行正交試驗考察，以總?cè)坪?、含油量和澄明度的權重為指標，選出了60℃、20MPa、添加劑17％的最佳工藝條件。用該方法測得100g靈芝孢子粉中的平均總?cè)祁惡繛?2.30％，平均含油量為19.97mL/kg，澄明度為3。萃取的含油量較低，且只對總?cè)坪康挠绊戇M行考察。

參考文獻：[1]李淑芳，張志軍，詹朝雙，等.靈芝孢子油提取研究及靈子孢子破壁技術的研究[J]。中國食用菌，2008，27(2)：34-36。

[2]張志軍，劉建華，李淑芳。在靈芝孢子油提取中影響酶解反應的因素研究[J]。食品科技，2006，31(6)：41-43。

[3]羅登林，要萍，劉建學，等。超臨界CO₂靜態(tài)膨脹-動態(tài)循環(huán)萃取靈芝孢子油[J]。農(nóng)業(yè)工程學報，2008，24(11)：256-259。

[4]馮翠萍，程紅艷，唐兵，等。靈芝孢子粉中孢子油提取及生物活性的研究[J]。食用菌學報，2008，15(4)：63-66。

[5]李琴韻，梁靜，何威之，等。超臨界CO₂萃取靈芝孢子油的工藝條件研究[J]。中成藥，2008，30(3)：447-449。

技術實現(xiàn)要素：

針對上述技術背景中靈芝孢子油萃取的出油率低，活性成分的提取率低等問題，本發(fā)明提供了一種含夾帶劑超臨界CO₂萃取靈芝孢子油的方法。

本發(fā)明采用如下技術方案：一種含夾帶劑超臨界CO₂萃取靈芝孢子油的方法，所述方法的具體步驟如下：

將預先破壁制粒的靈芝孢子粉裝入臨界CO₂萃取設備的萃取釜中，對萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ分別加熱，并啟動冷機制冷，當萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ溫度都分別達到50-70℃，50-60℃和40-50℃時，將CO₂經(jīng)冷機儲罐冷凝后用高壓泵打入萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ中，調(diào)節(jié)閥門使萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ壓力分別達到達到20-35MPa，10-15MPa和4-8MPa時，關閉CO₂氣瓶，開始循環(huán)萃取，待各壓力溫度穩(wěn)定后打開夾帶劑計量泵，泵入夾帶劑進行萃取，并開始計時，萃取時間60-120min，從分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ放料并稱重。

優(yōu)選的，所述的含夾帶劑超臨界CO₂萃取靈芝孢子油的方法，所述萃取釜壓力為30MPa，溫度為60℃。

優(yōu)選的，所述的含夾帶劑超臨界CO₂萃取靈芝孢子油的方法，所述分離釜Ⅰ壓力為13MPa、溫度為55℃。

優(yōu)選的，所述的含夾帶劑超臨界CO₂萃取靈芝孢子油的方法，所述分離釜Ⅱ壓力為6MPa、溫度為45℃。

優(yōu)選的，所述的含夾帶劑超臨界CO₂萃取靈芝孢子油的方法，所述萃取時間為90min。

優(yōu)選的，所述的含夾帶劑超臨界CO₂萃取靈芝孢子油的方法，所述夾帶劑為95％乙醇。

優(yōu)選的，所述的含夾帶劑超臨界CO₂萃取靈芝孢子油的方法，每克所述靈芝孢子粉，夾帶劑的加入體積為0.5～1.5mL。

本發(fā)明的積極效果如下：本發(fā)明在靈芝孢子油超臨界CO₂萃取過程中引入夾帶劑，與超臨界純CO₂萃取工藝相比，靈芝孢子油收率提高了30.43％，總?cè)铺崛÷侍岣吡?2.56％，麥角甾醇提取率提高了50.86％，該優(yōu)化工藝提高了靈芝孢子油的收率和活性成分的提取率。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的超臨界CO₂萃取裝置示意圖。

圖中：1萃取釜、2分離釜Ⅰ、3分離釜Ⅱ、4分離柱、5換熱器、6高壓泵、7 CO₂氣瓶、8冷機儲罐、9流量計、10夾帶劑罐、11計量泵。

具體實施方式

為更好地理解本發(fā)明，下面通過以下實施例對本發(fā)明作進一步具體的闡述，但不可理解為對本發(fā)明的限定，對于本領域的技術人員根據(jù)上述發(fā)明內(nèi)容所作的一些非本質(zhì)的改進與調(diào)整，也視為落在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。

實施例1

將預先破壁制粒的靈芝孢子粉裝入臨界CO₂萃取設備的萃取釜中，對萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ分別加熱，并啟動冷機制冷，當萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ溫度都分別達到50℃，50℃和40℃時，將CO₂經(jīng)冷機儲罐冷凝后用高壓泵打入萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ中，調(diào)節(jié)閥門使萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ壓力分別達到達到20MPa，10MPa和4MPa時，關閉CO₂氣瓶，開始循環(huán)萃取，待各壓力溫度穩(wěn)定后打開夾帶劑計量泵，泵入夾帶劑進行萃取，并開始計時，萃取60min，從分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ放料并稱重。

所述夾帶劑為95％乙醇。

每克所述靈芝孢子粉，夾帶劑的加入體積為0.5mL。

實施例2

將預先破壁制粒的靈芝孢子粉裝入臨界CO₂萃取設備的萃取釜中，對萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ分別加熱，并啟動冷機制冷，當萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ溫度都分別達到70℃，60℃和50℃時，將CO₂經(jīng)冷機儲罐冷凝后用高壓泵打入萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ中，調(diào)節(jié)閥門使萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ壓力分別達到達到35MPa，15MPa和8MPa時，關閉CO₂氣瓶，開始循環(huán)萃取，待各壓力溫度穩(wěn)定后打開夾帶劑計量泵，泵入夾帶劑進行萃取，并開始計時，萃取120min，從分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ放料并稱重。

所述夾帶劑為95％乙醇。

每克所述靈芝孢子粉，夾帶劑的加入體積為1mL。

實施例3

將預先破壁制粒的靈芝孢子粉裝入臨界CO₂萃取設備的萃取釜中，對萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ分別加熱，并啟動冷機制冷，當萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ溫度都分別達到60℃，55℃和45℃時，將CO₂經(jīng)冷機儲罐冷凝后用高壓泵打入萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ中，調(diào)節(jié)閥門使萃取釜、分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ壓力分別達到達到30MPa，13MPa和6MPa時，關閉CO₂氣瓶，開始循環(huán)萃取，待各壓力溫度穩(wěn)定后打開夾帶劑計量泵，泵入夾帶劑進行萃取，并開始計時，萃取90min，從分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ放料并稱重。

所述夾帶劑為95％乙醇。

每克所述靈芝孢子粉，夾帶劑的加入體積為1.5mL。

實施例4

靈芝孢子油中總?cè)频暮繙y定

采用香草醛-高氯酸顯色法，以熊果酸為對照品，于525nm處測定各樣品吸光度，以標準曲線法計算總?cè)频暮俊?/p>

靈芝孢子油中麥角甾醇的含量測定

采用HPLC法，色譜柱為Kromasil 100-5C₁₈，以100％甲醇為流動相等度洗脫，于282nm檢測波長下測定，以外標法計算麥角甾醇的含量。

靈芝孢子油中乙醇的含量測定

采用氣相色譜法，以正丙醇為內(nèi)標，程序升溫，以FID為檢測器測定乙醇含量。

(1)靈芝孢子油收率計算公式：

(2)總?cè)铺崛÷实挠嬎愎綖椋菏街校篟_三萜——總?cè)频奶崛÷?，％；A——所測樣品的總?cè)瓢俜趾?，％；W_油——所萃取的孢子油總重；W——靈芝孢子粉投料重量。

(3)麥角甾醇的提取率計算公式：式中：R_麥——麥角甾醇的提取率，mg/g；A——所測樣品的麥角甾醇百分含量，％；W_油——所萃取的孢子油總重，g；W——靈芝孢子粉重，g。

實施例1～3的實驗結(jié)果如表1所示：

表1：

對比例(純臨界CO₂萃取)：基于實施例3的基礎上，夾帶劑的加入量為0，作為對比試驗。與實施例3相比，對比例的收率、總?cè)铺崛÷?、麥角甾醇提取率如?所示：

由表2可以看出，與超臨界純CO₂萃取工藝相比，當加入夾帶劑后，實施例3中靈芝孢子油的收率提高了30.43％，總?cè)铺崛÷侍岣吡?2.56％，麥角甾醇提取率提高了50.86％，從而有效說明了加入夾帶劑工藝提高了靈芝孢子油的收率和活性成分的提取率。

表2：

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。