本發(fā)明屬于生物學(xué)領(lǐng)域,涉及一種β-D-葡聚糖,具體來是一種從產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁中提取β-D-葡聚糖的方法。
背景技術(shù):
產(chǎn)朊假絲酵母沒有致病性,與啤酒酵母、克魯維酵母一起被許多國家認(rèn)證為一種可作為食品添加劑的微生物,也是中國衛(wèi)生部門允許的可用于保健食品的微生物。酵母細(xì)胞壁一般直接被用做飼料產(chǎn)品,這樣附加值太低。
酵母β-葡聚糖是酵母細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)多糖。它們具有不同的功能特性,如醫(yī)療,制藥,食品,化妝品等行業(yè)。它們也可以作為免疫反應(yīng)的生物修飾劑。除此之外,它們也有利于抗菌抗炎反應(yīng);促進(jìn)霉毒素的吸收;減少低密度脂蛋白中的膽固醇顆粒等作用;還具有抗癌、抗誘變、抗氧化以及促進(jìn)傷口愈合的特性。
目前國內(nèi)提取β-D-葡聚糖方法主要采用酸法、堿法、酸堿結(jié)合,缺點(diǎn)是產(chǎn)品純度不高,且酸堿提取條件比較劇烈,易污染環(huán)境,尤其是在提取過程中部分β-葡聚糖會降解,造成產(chǎn)品得率與生物活性的降低。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述技術(shù)問題,本發(fā)明提供了一種從產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁中提取β-D-葡聚糖的方法,所述的這種從產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁中提取β-D-葡聚糖的方法要解決現(xiàn)有技術(shù)中提取β-D-葡聚糖的方法容易破壞β-D-葡聚糖的結(jié)構(gòu),同時(shí)β-D-葡聚糖的純度和得率不高的技術(shù)問題。
本發(fā)明提供了一種從產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁中提取β-D-葡聚糖的方法,包括以下步驟:
1)一個獲取產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞的步驟,將產(chǎn)朊假絲酵母在去蛋白土豆汁中培養(yǎng)10-14h,然后離心,再用去離子水沖洗,即得到產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞;
2)一個對產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)自溶的步驟,將步驟1)獲得的產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞加入到一個氯化鈉溶液中,所述的氯化鈉溶液的質(zhì)量百分比濃度為2%-5%,產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞在氯化鈉溶液中的質(zhì)量百分比濃度為10%-20%,在pH4.0-pH7.0, 55-60℃,100-120rpm的條件下振蕩自溶,時(shí)間為20h-24h,自溶后離心,并用去離子水沖洗;
3)一個高溫浸提的步驟,將步驟2)獲得產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞加入pH6.0-10.0的磷酸鹽緩沖液中,在磷酸鹽緩沖液中,酵母細(xì)胞的質(zhì)量百分比濃度為10%-15%,將產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞懸浮,然后加入直徑為0.5cm玻璃珠,料液比1:5-1:15,進(jìn)行高溫浸提,浸提時(shí)間2-8h、溫度為80-120℃、離心,用去離子水洗滌,獲得富集沉淀;
4)一個超聲波破壁的步驟,用去離子水使步驟3)的富集沉淀懸浮,在600-1000w功率條件下超聲波破壁30min-90min,然后在離心力為3000-5000g,溫度為4-20℃下離心得細(xì)胞壁沉淀;
5)一個高溫抽提的步驟,將步驟4)獲得產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁加入pH6.0-10.0的磷酸鹽緩沖液中,在磷酸鹽緩沖液中,酵母細(xì)胞壁的質(zhì)量百分比濃度為10%-20%,將產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁懸浮,加入直徑0.5cm玻璃珠,料液比為1:5-1:15,高溫抽提,抽提時(shí)間為2-8h、溫度80-120℃、離心,沉淀用去離子水洗滌,得到沉淀;
6)一個脫脂的步驟,將步驟5)的沉淀加入到無水乙醇溶劑中,進(jìn)行反復(fù)萃取,得到去脂肪的葡聚糖粗品;
7)一個酶解去蛋白的步驟,已脫脂的葡聚糖粗品用pH6.0-10.0的磷酸緩沖液配成質(zhì)量百分比濃度為10%-20%的懸浮液,然后加入中性蛋白酶,加入后的中性蛋白酶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1g/L-1g/L,在50℃-65℃的條件下進(jìn)行酶解處理1-5h,反應(yīng)結(jié)束后,得到的沉淀用水洗滌,離心,再加水使其充分混勻后于100℃加熱3-8分鐘滅酶,離心,冷凍干燥,得到淡黃色粉末即為β-D-葡聚糖產(chǎn)品。
進(jìn)一步的,所述的產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis),保藏編號CICC1769。
本發(fā)明提供了一種從產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁中提取β-D-葡聚糖的方法,利用誘導(dǎo)自溶-高溫浸提-超聲波破壁-酶解-脫脂的提取方法。所得提取物冷凍干燥即得到β-D-葡聚糖粉末。本發(fā)明以產(chǎn)朊假絲酵母為原料生產(chǎn)的葡聚糖可以用于食品、飼料、化妝品以及水產(chǎn)養(yǎng)殖中,能顯著地降血脂、降血糖以及提高免疫能力,對有糖尿病、肥胖癥、便秘及高膽固醇等疾病的患者有良好的輔助治療的作用;使用去蛋白的土豆汁作為產(chǎn)朊假絲酵母的培養(yǎng)基,可以減輕廢棄土豆汁對環(huán)境的污染,對環(huán)境保護(hù)具有重要意義。
本發(fā)明的一種產(chǎn)朊假絲酵母菌種,被許多國家認(rèn)證為一種可作為食品添加劑的微生物,也是中國衛(wèi)生部門允許的可用于保健食品的微生物。因此該產(chǎn)朊假絲酵母菌細(xì)胞壁中的β-D-葡聚糖具有食品安全可靠的特點(diǎn)。
本發(fā)明的一種從產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁中提取的β-D-葡聚糖,對肥胖癥、糖尿病人、高膽固醇、心血管等疾病患者有良好的輔助治療作用,還具有輔助降血壓降血糖、保肝護(hù)肝、保護(hù)胃黏膜,改善微循環(huán)、增強(qiáng)免疫力等保健功能。本發(fā)明的一種從產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁中提取β-D-葡聚糖的方法,相比傳統(tǒng)的提取方法,由于采用了一種條件較溫和的提取β-D-葡聚糖方法,操作過程簡單易行、快速,更重要的是避免了酸堿試劑對產(chǎn)品帶來的降解作用。
本發(fā)明和已有技術(shù)相比,其技術(shù)進(jìn)步是顯著的。本發(fā)明避免了酸堿試劑等傳統(tǒng)方法對產(chǎn)品帶來的降解作用,是一種條件較溫和的提取β-葡聚糖的方法。
具體實(shí)施方式
下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步闡述,但并不限制本發(fā)明。
本發(fā)明各實(shí)施例中所用的產(chǎn)朊假絲酵母菌種產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis),保藏編號CICC1769,于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心保藏,保藏機(jī)構(gòu)地址:北京市朝陽區(qū)酒仙橋中路24號6號樓,郵編:100015。
實(shí)施例1
一種產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁的β-D-葡聚糖,通過包括如下步驟的方法制備而成:
(1)、產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞的獲取
將產(chǎn)朊假絲酵母用去蛋白土豆汁培養(yǎng)14h后,取去蛋白土豆汁培養(yǎng)液50mL,離心(15500g/4℃/10min,冷凍離心機(jī)),然后用去離子水沖洗兩遍,即得到產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞,可將細(xì)胞沉淀部分保存于冰箱(4℃)中;
所用的產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis),保藏編號CICC1769;
(2)細(xì)胞的誘導(dǎo)自溶
將步驟(1)獲得的產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞誘導(dǎo)自溶,即溶酶體將酶釋放出來將自身細(xì)胞降解使內(nèi)容物流出。酵母自溶菌體濃度5%(w/w),pH7.0,5%NaCl和60℃,120rpm振蕩自溶。在此條件下,酵母細(xì)胞誘導(dǎo)自溶的時(shí)間為24h即可。自溶后離心,并用去離子水沖洗兩遍,;
(3)高溫浸提
用pH10.0的磷酸鹽緩沖液配成質(zhì)量濃度為15%的酵母細(xì)胞壁懸浮液于250mL三角瓶中(加入直徑0.5cm玻璃珠),抽提條件為時(shí)間3h、溫度120℃、料液比1:15進(jìn)行高溫浸提,浸提時(shí)間2h、溫度為120℃,離心,用去離子水洗滌3次,即得沉淀;
(4)超聲波破壁
用300mL去離子水將每個樣品沉淀懸浮,在1000w功率條件下破壁90min,然后在離心力為4000g,溫度為4℃下離心得細(xì)胞壁沉淀;
(5)高溫抽提
用pH10.0的磷酸鹽緩沖液將酵母細(xì)胞壁懸浮液配成質(zhì)量濃度為20%的溶液于250mL三角瓶中(加入直徑0.5cm玻璃珠),高溫抽提條件是時(shí)間3h、溫度120℃、料液比為1:15,高溫抽提時(shí)間為2h、溫度100℃,離心,沉淀用去離子水洗滌3次,得到沉淀;
(6)脫脂
利用脂肪能溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì),在索氏提取器中將樣品用無水乙醇溶劑反復(fù)萃取,提取樣品中的脂肪后,所得的物質(zhì)即為去脂肪的葡聚糖粗品;
(7)酶解去蛋白
已脫脂的粗品葡聚糖用pH10.0的磷酸緩沖液配成20%(w/w)的懸浮液,然后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1g/L的中性蛋白酶在65℃的條件下進(jìn)行酶解處理2h,反應(yīng)結(jié)束后,得到的沉淀用水洗滌3次,離心,再加水使其充分混勻后于100℃加熱5分鐘滅酶,離心,冷凍干燥,得到淡黃色粉末即為β-D-葡聚糖產(chǎn)品。
上述所得的β-D-葡聚糖,其純度是77.51%。
實(shí)施例2
一種產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁的β-D-葡聚糖,通過包括如下步驟的方法制備而成:
(1)、產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞的獲取
將產(chǎn)朊假絲酵母用去蛋白土豆汁培養(yǎng)10h,取去蛋白土豆汁培養(yǎng)液50mL,離心(15500g/4℃/10min,冷凍離心機(jī)),然后用去離子水沖洗兩遍,即得到產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞,可將細(xì)胞沉淀部分保存于冰箱(4℃)中;
所用的產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis),保藏編號CICC1769;
(2)細(xì)胞的誘導(dǎo)自溶
將步驟(1)獲得的產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞誘導(dǎo)自溶,即溶酶體將酶釋放出來將自身細(xì)胞降解使內(nèi)容物流出。酵母自溶菌體濃度10%(w/w),pH4.0,2%NaCl和55℃,100rpm振蕩自溶。在此條件下,酵母細(xì)胞誘導(dǎo)自溶的時(shí)間為20h即可。自溶后離心,并用去離子水沖洗兩遍,;
(3)高溫浸提
用pH6.0的磷酸鹽緩沖液配成質(zhì)量濃度為10%的酵母細(xì)胞壁懸浮液于250mL三角瓶中(加入直徑0.5cm玻璃珠),抽提條件為時(shí)間3h、溫度120℃、料液比1:5進(jìn)行高溫浸提,浸提時(shí)間3h、溫度為90℃,離心,用去離子水洗滌3次,即得沉淀;
(4)超聲波破壁
用300mL去離子水將每個樣品沉淀懸浮,在600w功率條件下破壁30min,然后在離心力為4500g,溫度為14℃下離心得細(xì)胞壁沉淀;
(5)高溫抽提
用pH6.0的磷酸鹽緩沖液將酵母細(xì)胞壁懸浮液配成質(zhì)量濃度為10%的溶液于250mL三角瓶中(加入直徑0.5cm玻璃珠),高溫抽提條件是時(shí)間3h、溫度120℃、料液比為1:5,高溫抽提時(shí)間為4h、溫度80℃,離心,沉淀用去離子水洗滌3次,得到沉淀;
(6)脫脂
利用脂肪能溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì),在索氏提取器中將樣品用無水乙醇溶劑反復(fù)萃取,提取樣品中的脂肪后,所得的物質(zhì)即為去脂肪的葡聚糖粗品;
(7)酶解去蛋白
已脫脂的粗品葡聚糖用pH6.0的磷酸緩沖液配成10%(w/w)的懸浮液,然后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1g/L的中性蛋白酶在50℃的條件下進(jìn)行酶解處理3h,反應(yīng)結(jié)束后,得到的沉淀用水洗滌3次,離心,再加水使其充分混勻后于100℃加熱4分鐘滅酶,離心,冷凍干燥,得到淡黃色粉末即為β-D-葡聚糖產(chǎn)品。
上述所得的β-D-葡聚糖,其純度是77.23%。
實(shí)施例3
一種產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁的β-D-葡聚糖,通過包括如下步驟的方法制備而成:
(1)、產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞的獲取
將產(chǎn)朊假絲酵母用去蛋白土豆汁培養(yǎng)12h,取去蛋白土豆汁培養(yǎng)液50mL,離心(15500g/4℃/10min,冷凍離心機(jī)),然后用去離子水沖洗兩遍,即得到產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞,可將細(xì)胞沉淀部分保存于冰箱(4℃)中;
所用的產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis),保藏編號CICC1769;
(2)細(xì)胞的誘導(dǎo)自溶
將步驟(1)獲得的產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞誘導(dǎo)自溶,即溶酶體將酶釋放出來將自身細(xì)胞降解使內(nèi)容物流出。酵母自溶菌體濃度15%(w/w),pH5.0,3%NaCl和56℃,110rpm振蕩自溶。在此條件下,酵母細(xì)胞誘導(dǎo)自溶的時(shí)間為21h即可。自溶后離心,并用去離子水沖洗兩遍,;
(3)高溫浸提
用pH8.0的磷酸鹽緩沖液配成質(zhì)量濃度為14%的酵母細(xì)胞壁懸浮液于250mL三角瓶中(加入直徑0.5cm玻璃珠),抽提條件為時(shí)間3h、溫度120℃、料液比1:10進(jìn)行高溫浸提,浸提時(shí)間4h、溫度為100℃,離心,用去離子水洗滌3次,即得沉淀;
(4)超聲波破壁
用300mL去離子水將每個樣品沉淀懸浮,在800w功率條件下破壁40min,然后在離心力為5000g,溫度為12℃下離心得細(xì)胞壁沉淀;
(5)高溫抽提
用pH8.0的磷酸鹽緩沖液將酵母細(xì)胞壁懸浮液配成質(zhì)量濃度為15%的溶液于250mL三角瓶中(加入直徑0.5cm玻璃珠),高溫抽提條件是時(shí)間3h、溫度120℃、料液比為1:10,高溫抽提時(shí)間為5h、溫度120℃,離心,沉淀用去離子水洗滌3次,得到沉淀;
(6)脫脂
利用脂肪能溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì),在索氏提取器中將樣品用無水乙醇溶劑反復(fù)萃取,提取樣品中的脂肪后,所得的物質(zhì)即為去脂肪的葡聚糖粗品;
(7)酶解去蛋白
已脫脂的粗品葡聚糖用pH8.0的磷酸緩沖液配成15%(w/w)的懸浮液,然后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5g/L的中性蛋白酶在60℃的條件下進(jìn)行酶解處理5h,反應(yīng)結(jié)束后,得到的沉淀用水洗滌3次,離心,再加水使其充分混勻后于100℃加熱3分鐘滅酶,離心,冷凍干燥,得到淡黃色粉末即為β-D-葡聚糖產(chǎn)品。
上述所得的β-D-葡聚糖,其純度是79.92%。
實(shí)施例4
一種產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁的β-D-葡聚糖,通過包括如下步驟的方法制備而成:
(1)、產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞的獲取
將產(chǎn)朊假絲酵母用去蛋白土豆汁培養(yǎng)13h,取去蛋白土豆汁培養(yǎng)液50mL,離心(15500g/4℃/10min,冷凍離心機(jī)),然后用去離子水沖洗兩遍,即得到產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞,可將細(xì)胞沉淀部分保存于冰箱(4℃)中;
所用的產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis),保藏編號CICC1769;
(2)細(xì)胞的誘導(dǎo)自溶
將步驟(1)獲得的產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞誘導(dǎo)自溶,即溶酶體將酶釋放出來將自身細(xì)胞降解使內(nèi)容物流出。酵母自溶菌體濃度18%(w/w),pH5.0,5%NaCl和57℃,115rpm振蕩自溶。在此條件下,酵母細(xì)胞誘導(dǎo)自溶的時(shí)間為22h即可。自溶后離心,并用去離子水沖洗兩遍,;
(3)高溫浸提
用pH9.0的磷酸鹽緩沖液配成質(zhì)量濃度為13%的酵母細(xì)胞壁懸浮液于250mL三角瓶中(加入直徑0.5cm玻璃珠),抽提條件為時(shí)間3h、溫度120℃、料液比1:6進(jìn)行高溫浸提,浸提時(shí)間6h、溫度為110℃,離心,用去離子水洗滌3次,即得沉淀;
(4)超聲波破壁
用300mL去離子水將每個樣品沉淀懸浮,在900w功率條件下破壁80min,然后在離心力為3000g,溫度為20℃下離心得細(xì)胞壁沉淀;
(5)高溫抽提
用pH9.0的磷酸鹽緩沖液將酵母細(xì)胞壁懸浮液配成質(zhì)量濃度為14%的溶液于250mL三角瓶中(加入直徑0.5cm玻璃珠),高溫抽提條件是時(shí)間3h、溫度120℃、料液比為1:6,高溫抽提時(shí)間為6h、溫度90℃,離心,沉淀用去離子水洗滌3次,得到沉淀;
(6)脫脂
利用脂肪能溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì),在索氏提取器中將樣品用無水乙醇溶劑反復(fù)萃取,提取樣品中的脂肪后,所得的物質(zhì)即為去脂肪的葡聚糖粗品;
(7)酶解去蛋白
已脫脂的粗品葡聚糖用pH9.0的磷酸緩沖液配成16%(w/w)的懸浮液,然后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.8g/L的中性蛋白酶在58℃的條件下進(jìn)行酶解處理4h,反應(yīng)結(jié)束后,得到的沉淀用水洗滌3次,離心,再加水使其充分混勻后于100℃加熱7分鐘滅酶,離心,冷凍干燥,得到淡黃色粉末即為β-D-葡聚糖產(chǎn)品。
上述所得的β-D-葡聚糖,其純度是77.96%。
實(shí)施例5
一種產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁的β-D-葡聚糖,通過包括如下步驟的方法制備而成:
(1)、產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞的獲取
將產(chǎn)朊假絲酵母用去蛋白土豆汁培養(yǎng)11h,取去蛋白土豆汁培養(yǎng)液50mL,離心(15500g/4℃/10min,冷凍離心機(jī)),然后用去離子水沖洗兩遍,即得到產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞,可將細(xì)胞沉淀部分保存于冰箱(4℃)中;
所用的產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis),保藏編號CICC1769;
(2)細(xì)胞的誘導(dǎo)自溶
將步驟(1)獲得的產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞誘導(dǎo)自溶,即溶酶體將酶釋放出來將自身細(xì)胞降解使內(nèi)容物流出。酵母自溶菌體濃度12%(w/w),pH6.0,4%NaCl和58℃,105rpm振蕩自溶。在此條件下,酵母細(xì)胞誘導(dǎo)自溶的時(shí)間為23h即可。自溶后離心,并用去離子水沖洗兩遍,;
(3)高溫浸提
用pH7.0的磷酸鹽緩沖液配成質(zhì)量濃度為12%的酵母細(xì)胞壁懸浮液于250mL三角瓶中(加入直徑0.5cm玻璃珠),抽提條件為時(shí)間3h、溫度120℃、料液比1:8進(jìn)行高溫浸提,浸提時(shí)間8h、溫度為80℃,離心,用去離子水洗滌3次,即得沉淀;
(4)超聲波破壁
用300mL去離子水將每個樣品沉淀懸浮,在700w功率條件下破壁60min,然后在離心力為3500g,溫度為10℃下離心得細(xì)胞壁沉淀;
(5)高溫抽提
用pH7.0的磷酸鹽緩沖液將酵母細(xì)胞壁懸浮液配成質(zhì)量濃度為18%的溶液于250mL三角瓶中(加入直徑0.5cm玻璃珠),高溫抽提條件是時(shí)間3h、溫度120℃、料液比為1:8,高溫抽提時(shí)間為8h、溫度110℃,離心,沉淀用去離子水洗滌3次,得到沉淀;
(6)脫脂
利用脂肪能溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì),在索氏提取器中將樣品用無水乙醇溶劑反復(fù)萃取,提取樣品中的脂肪后,所得的物質(zhì)即為去脂肪的葡聚糖粗品;
(7)酶解去蛋白
已脫脂的粗品葡聚糖用pH7.0的磷酸緩沖液配成14%(w/w)的懸浮液,然后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2g/L的中性蛋白酶在55℃的條件下進(jìn)行酶解處理1h,反應(yīng)結(jié)束后,得到的沉淀用水洗滌3次,離心,再加水使其充分混勻后于100℃加熱8分鐘滅酶,離心,冷凍干燥,得到淡黃色粉末即為β-D-葡聚糖產(chǎn)品。
上述所得的β-D-葡聚糖,其純度是76.23%。
綜上所述,本發(fā)明的一種從產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞壁中提取β-D-葡聚糖的方法,利用誘導(dǎo)自溶-高溫浸提-超聲波破壁-高溫抽提-脫脂-酶解的提取方法。結(jié)果由此表明,其提取率較高,相比傳統(tǒng)的提取方法,采用了一種條件較溫和的提取β-D-葡聚糖方法,操作過程簡單易行、快速,更重要的是避免了酸堿試劑對產(chǎn)品帶來的降解作用。具有輔助降血壓降血糖、保肝護(hù)肝、保護(hù)胃黏膜,防治腦供血不足以及心血管疾病、改善微循環(huán)、增強(qiáng)免疫力等保健功能。
以上實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的內(nèi)容,除此之外,本發(fā)明還有其他實(shí)施方式,但凡本領(lǐng)域技術(shù)人員因本發(fā)明所涉及之技術(shù)啟示,而采用等同替換或等效變形方式形成的技術(shù)方案均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。