本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域；具體說來，本發(fā)明確立了一種提高H5亞型禽流感疫苗毒株增殖滴度的方法，用于疫苗的生產(chǎn)，降低生產(chǎn)成本，在生產(chǎn)上有較大的使用價值。

背景技術(shù)：

禽流感是由禽流感病毒引起的一種禽類傳染病。禽流感病毒根據(jù)血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的不同，可分為16個HA亞型和9個NA亞型。高致病性禽流感是由某些H5或H7亞型禽流感病毒引起的嚴(yán)重威脅禽類的烈性傳染病。

2003年以來，H5亞型高致病性禽流感一直在包括中國在內(nèi)的多個國家和地區(qū)流行，給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前，疫苗仍然是防控該病的重要手段。2005年，我國開始實施針對禽流感的大規(guī)模強(qiáng)制性免疫政策，并取得了顯著成效。隨著病毒的不斷變異，疫苗也從Re-1更新到目前的Re-6、Re-7、Re-8。生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)，Re-7在雞胚上的增殖滴度要明顯低于Re-6和Re-8的滴度。這就使得Re-7疫苗生產(chǎn)的成本要高于Re-6和Re-8疫苗的生產(chǎn)成本。本專利提供了一種提高Re-7疫苗毒株增殖滴度的方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對上述Re-7疫苗毒株增殖滴度的不足，研究建立了一種提高Re-7疫苗毒株在雞胚上增殖滴度的方法。首先利用定點(diǎn)突變技術(shù)，將Re-7疫苗毒株的HA基因進(jìn)行突變，使其編碼的第171位氨基酸突變?yōu)楫惲涟彼幔↖）或纈氨酸（V），再利用反向遺傳操作技術(shù)重新獲得重組病毒。將重組病毒接種雞胚，能夠顯著提高Re-7疫苗毒株的增殖滴度。

具體實施方式

下面通過實施例，說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于這個實施例。

本實施例利用定點(diǎn)突變技術(shù)，對Re-7禽流感疫苗毒株HA基因進(jìn)行點(diǎn)突變，使其編碼的第171位氨基酸由原來的蘇氨酸（T）突變?yōu)楫惲涟彼幔↖）或纈氨酸（V），再利用反向遺傳操作技術(shù)重新獲得重組病毒。將突變之前的Re-7疫苗株和突變后的重組病毒接種10日齡SPF雞胚，37°C孵化72小時，其HA滴度分別達(dá)到9和11，突變后的重組病毒比突變之前的疫苗毒株提高了2個HA滴度。