本發(fā)明涉及取代的-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-2,3-二醇衍生物、其晶體結(jié)構(gòu)、其藥物組合物及其作為脫唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)靶向劑的用途。
背景
對(duì)某些分子實(shí)體和某些遞送部位而言，藥物遞送是一個(gè)嚴(yán)重問題。例如，遞送大分子，例如反義或RNAi分子是困難的，因?yàn)檫@類化合物通常不能穿透細(xì)胞膜。此外，帶大量負(fù)電荷并且是親水性的分子實(shí)體通過細(xì)胞膜時(shí)可能擴(kuò)散受到限制。此外，選擇性藥物遞送至靶向遞送部位通常是一個(gè)挑戰(zhàn)，因?yàn)榧?xì)胞可透過的分子通常無選擇性。細(xì)胞擴(kuò)散和靶向遞送的一個(gè)解決方案是藥物與靶向劑綴合。
靶向劑通常增強(qiáng)藥物屬性，包括藥物動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)。靶向劑能夠使得連接至靶向劑的藥物有效負(fù)荷有效地分布至特定細(xì)胞并且被其攝取。某些糖例如半乳糖、N-乙?；肴樘前泛推渌肴樘茄苌?包括M.G.Finn和V.Mascitti等人在Journal of the American Chemical Society，134，1978(2012)中所述的那些)已經(jīng)用作肝細(xì)胞的靶向劑，這歸因于與存在于肝細(xì)胞表面上的脫唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)結(jié)合。然而，這類靶向劑有時(shí)存在一些藥物動(dòng)力學(xué)問題或可能呈現(xiàn)不是最理想的藥物動(dòng)力學(xué)特性。
在臨床試驗(yàn)期間，在動(dòng)物模型(通常是大鼠、小鼠、狗或非人類靈長類動(dòng)物)中或在人體中進(jìn)行靜脈內(nèi)/口服(IV/PO)藥物動(dòng)力學(xué)(PK)研究，得到有關(guān)藥物如何在體內(nèi)吸收、分布、代謝和消除的信息。通常，在施用前，用甲基纖維素或聚乙二醇(PEG)、糖和水配制藥物。通常通過隱靜脈在不同時(shí)間點(diǎn)取血樣直到24小時(shí)。收集來自給藥分組群體的血樣，離心，并且采集血漿。稀釋血漿，使得濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)(1-5000ng/mL)。然后對(duì)血漿樣品進(jìn)行目標(biāo)分析物的分析。
因此，對(duì)于有助于改善藥物動(dòng)力學(xué)特性的藥物遞送物質(zhì)仍然存在需求。
概述
本發(fā)明的一個(gè)方面包括式(A)的化合物
其中
R1是-CN、-CH2-CN、-C≡CH、-CH2-N3、-CH2-NH2、-CH2-N(R4)-S(O)2-R5、-CH2-CO2H、-CO2H、-CH2-OH、-CH2-SH、-CH＝CH-R5、-CH2-R5、-CH2-S-R5、-CH2-N(R4)-R5、-CH2-N(R4)-C(O)-R5、-CH2-N(R4)-C(O)-O-R5、-CH2-N(R4)-C(O)-N(R4)-R5、-CH2-O-R5、-CH2-O-C(O)-R5、-CH2-O-C(O)-N(R4)-R5、-CH2-O-C(O)-O-R5、-CH2-S(O)-R5、-CH2-S(O)2-R5、-CH2-S(O)2-N(R4)-R5、-C(O)-NH2、-C(O)-O-R5、-C(O)-N(R4)-R5或芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基任選地被R5取代；
或R1是-Z-X-Y，其中X是連接基或遞藥系統(tǒng)，Y不存在或是選自由小分子、氨基酸序列、核酸序列、抗體、寡聚體、聚合物、基因衍生的物質(zhì)、脂質(zhì)體、納米顆粒、染料、熒光探針或其組合組成的組的配體，且Z不存在或是-C≡C-、-CH＝CH-、-CH2-、-CH2-O-、-C(O)-N(R4)-、-CH2-S-、-CH2-S(O)-、-CH2-S(O)2-、-CH2-S(O)2-N(R4)-、-C(O)-O-、-CH2-N(R4)-、-CH2-N(R4)-C(O)-、-CH2-N(R4)-S(O)2-、-CH2-N(R4)-C(O)-O-、-CH2-N(R4)-C(O)-N(R4)-、-CH2-O-C(O)-、-CH2-O-C(O)-N(R4)-、-CH2-O-C(O)-O-或芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基任選地被R5取代；
R2是-OH、-N3、-N(R3)2、-N(R3)-C(O)-R3、-N(R3)-C(O)-N(R3)2、-N(R3)-C(O)-OR3、四唑或三唑，其中所述四唑和三唑任選地被R3取代，且其中當(dāng)R1是-CH2-OH時(shí)，R2是-N3、-N(R3)2、-N(R3)-C(O)-R3、-N(R3)-C(O)-N(R3)2、-N(R3)-C(O)-OR3、四唑或三唑，其中所述四唑和三唑任選地被R3取代；
R3各自獨(dú)立地是-H、-(C1-C5)烷基、鹵素取代的(C1-C5)烷基或(C3-C6)環(huán)烷基，其中所述烷基或環(huán)烷基的-CH2-基團(tuán)可以被選自-O-、-S-和-N(R4)-的雜原子基團(tuán)替代，且所述烷基的-CH3可以被選自-N(R4)2、-OR4和-S(R4)的雜原子基團(tuán)替代，其中所述雜原子基團(tuán)被至少2個(gè)碳原子隔開；
R4各自獨(dú)立地是-H、-(C1-C20)烷基或(C3-C6)環(huán)烷基，其中被至少兩個(gè)碳原子隔開的烷基或環(huán)烷基的1至6個(gè)-CH2-基團(tuán)可以被-O-、-S-或-N(R4)-替代，且所述烷基的-CH3可以被選自-N(R4)2、-OR4和-S(R4)的雜原子基團(tuán)替代，其中所述雜原子基團(tuán)被至少2個(gè)碳原子隔開；且其中所述烷基和環(huán)烷基可以被1至6個(gè)鹵原子取代；且
R5各自獨(dú)立地是-H、(C3-C20)環(huán)烷基或(C1-C20)烷基，其中被至少兩個(gè)碳原子隔開的烷基或環(huán)烷基的1至6個(gè)-CH2-基團(tuán)可以被-O-、-S-或-N(R4)-替代，且所述烷基的-CH3可以被選自-N(R4)2、-OR4和-S(R4)的雜原子基團(tuán)替代，其中所述雜原子基團(tuán)被至少2個(gè)碳原子隔開；且其中所述烷基和環(huán)烷基可以被1至6個(gè)鹵原子取代；
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明的另一個(gè)方面包括式(A)的化合物
其中
R1是-CN、-CH2-CN、-C≡CH、-CH2-N3、-CH2-NH2、-CH2-N(R4)-S(O)2-R5、-CH2-CO2H、-CO2H、-CH2-OH、-CH2-SH、-CH＝CH-R5、-CH2-R5、-CH2-S-R5、-CH2-N(R4)-R5、-CH2-N(R4)-C(O)-R5、-CH2-N(R4)-C(O)-O-R5、-CH2-N(R4)-C(O)-N(R4)-R5、-CH2-O-R5、-CH2-O-C(O)-R5、-CH2-O-C(O)-N(R4)-R5、-CH2-O-C(O)-O-R5、-CH2-S(O)-R5、-CH2-S(O)2-R5、-CH2-S(O)2-N(R4)-R5、-C(O)-NH2、-C(O)-O-R5、-C(O)-N(R4)-R5、-S(O)3H、-S(O)2Cl、S(O)2F或芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基任選地被R5取代；
或R1是-Z-X-Y、-Z-Y、-X-Y、-X、-Y或-Z-X，其中X是連接基或遞藥系統(tǒng)，Y是R6或是選自由小分子、氨基酸序列、核酸序列、抗體、寡聚體、聚合物、基因衍生的物質(zhì)、脂質(zhì)體、納米顆粒、染料、熒光探針或其組合組成的組的配體，且Z是-C≡C-、-CH＝CH-、-CH2-、-CH2-O-、-C(O)-N(R4)-、-CH2-S-、-CH2-S(O)-、-CH2-S(O)2-、-CH2-S(O)2-N(R4)-、-C(O)-O-、-CH2-N(R4)-、-CH2-N(R4)-C(O)-、-CH2-N(R4)-S(O)2-、-CH2-N(R4)-C(O)-O-、-CH2-N(R4)-C(O)-N(R4)-、-CH2-O-C(O)-、-CH2-O-C(O)-N(R4)-、-CH2-O-C(O)-O-或芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基任選地被R5取代；
R2是-OH、-N3、-N(R3)2、-N(R3)-C(O)-R3、-N(R3)-C(O)-N(R3)2、-N(R3)-C(O)-OR3、-N(R3)-S(O)2-R3、四唑或三唑，其中所述四唑和三唑任選地被R3取代，且其中當(dāng)R1是-CH2-OH時(shí)，R2是-N3、-N(R3)2、-N(R3)-C(O)-R3、-N(R3)-C(O)-N(R3)2、-N(R3)-C(O)-OR3、N(R3)-S(O)2-R3、四唑或三唑，其中所述四唑和三唑任選地被R3取代；
R3各自獨(dú)立地是-H、-(C1-C5)烷基、鹵素取代的(C1-C5)烷基或(C3-C6)環(huán)烷基，其中所述烷基或環(huán)烷基的一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)可以各自被獨(dú)立地選自-O-、-S-和-N(R4)-的雜原子基團(tuán)替代，且所述烷基的-CH3可以被選自-N(R4)2、-OR4和-S(R4)的雜原子基團(tuán)替代，其中所述雜原子基團(tuán)被至少2個(gè)碳原子隔開；
R4各自獨(dú)立地是-H、-(C1-C20)烷基或(C3-C6)環(huán)烷基，其中被至少兩個(gè)碳原子隔開的烷基或環(huán)烷基的1至6個(gè)-CH2-基團(tuán)可以各自被獨(dú)立地選自-O-、-S-或-N(R4)-的雜原子替代，且所述烷基的-CH3可以被選自-N(R4)2、-OR4和-S(R4)的雜原子基團(tuán)替代，其中所述雜原子基團(tuán)被至少2個(gè)碳原子隔開；且其中所述烷基和環(huán)烷基可以被鹵原子取代；
R5各自獨(dú)立地是-H、(C3-C20)環(huán)烷基或(C1-C60)烷基，其中所述環(huán)烷基的1至6個(gè)-CH2-基團(tuán)或所述烷基的1至20個(gè)-CH2-基團(tuán)可以各自被獨(dú)立地選自-O-、-S-和-N(R4)-的雜原子替代，其中所述雜原子被至少兩個(gè)碳原子隔開，且所述烷基的-CH3可以被選自-N(R4)2、-OR4和-S(R4)的雜原子基團(tuán)替代，其中所述雜原子基團(tuán)被至少2個(gè)碳原子隔開；且其中所述烷基和環(huán)烷基可以被鹵原子取代；且
R6各自獨(dú)立地是H、-C≡CH、-C＝CH2、-CH3、-N3、-N(R4)2、-OH、-S(O)-(R4)、-S(O)2-(R4)、-C(O)-OH、-S-S-芳基、-S-S-雜芳基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基，其中芳基或雜芳基各自任選地被R5取代；
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明的另一個(gè)方面包括藥物組合物，其包含(i)式(A)的化合物；以及(ii)藥學(xué)上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體。
本發(fā)明的另一個(gè)方面包括用于治療肝臟疾病或肝臟病癥或肝臟調(diào)節(jié)的疾病或病癥的方法，所述肝疾病或病癥包括遺傳性血管水腫、I型家族性酪氨酸血癥、Alagille綜合征、α-1-抗胰蛋白酶缺乏癥、膽汁酸合成和代謝缺陷、膽道閉鎖、囊性纖維化肝病、特發(fā)性新生兒肝炎、線粒體肝病、進(jìn)行性家族性肝內(nèi)膽汁郁積、原發(fā)性硬化性膽管炎、轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白淀粉樣變性病、血友病、純合性家族性高膽固醇血癥、高血脂癥、脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、高血糖癥如II型糖尿病和牽涉與II型糖尿病類似的異常增高的肝葡萄糖生成的疾病，該方法包括施用有效量的根據(jù)任意式(A)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明的另一個(gè)方面包括式(B)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
本發(fā)明的另一個(gè)方面包括式(C)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
本發(fā)明的另一個(gè)方面包括式(D)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
本發(fā)明的另一個(gè)方面包括式(E)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
本發(fā)明的另一個(gè)方面包括式(F)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
本發(fā)明的另一個(gè)方面包括式(G)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
式(H)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
應(yīng)當(dāng)理解，上文一般性描述和下文詳細(xì)描述僅是示例性的并且不限制所要求保護(hù)的本發(fā)明。
附圖簡(jiǎn)述
圖1表示實(shí)施例23化合物的精制晶體結(jié)構(gòu)，它是使用具有類橢圓體的SHELXTL繪圖包以50％置信水平繪制而作圖的。
詳細(xì)描述
參照如下本發(fā)明示例性實(shí)施方案的詳細(xì)描述和本申請(qǐng)中包括的實(shí)施例甚至可以更容易理解本發(fā)明。
在公開和描述本發(fā)明化合物、組合物和方法之前，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明不限于特定的合成制備方法，它們當(dāng)然可以改變。還應(yīng)當(dāng)理解，本申請(qǐng)中所用的術(shù)語學(xué)的目的僅在于描述具體的實(shí)施方案，而不想起限制作用。復(fù)數(shù)和單數(shù)應(yīng)當(dāng)被視為可互換，而不是表述數(shù)目：
本申請(qǐng)中所用的術(shù)語“烷基”是指通式CnH2n+1的烴基。烷基可以是直鏈或支鏈的。例如，術(shù)語“(C1-C6)烷基”是指包含1至6個(gè)碳原子的一價(jià)直鏈或支鏈脂族基團(tuán)(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、3,3-二甲基丙基、己基、2-甲基戊基等)。類似地，烷氧基、酰基(例如烷?；?、烷基氨基、二烷基氨基、烷基磺?；屯榱蚧鶊F(tuán)的烷基部分(即，烷基部分)具有與上述相同的定義。當(dāng)表示為“任選被取代的”時(shí)，烷基或烷基部分可以是未取代的或被一個(gè)或多個(gè)取代基取代(通常是1至3個(gè)取代基，除了鹵素取代基的情況以外，例如全氯或全氟烷基)，所述取代基獨(dú)立地選自如下為“被取代的”的定義而列出的取代基的組?！胞u素取代的烷基”是指烷基基團(tuán)被一個(gè)或多個(gè)鹵原子取代(例如氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、全氟乙基、1,1-二氟乙基等)。
類似地，“亞烷基”是指通式CnH2n的二價(jià)烴基，其可以是直鏈的或支鏈的。
術(shù)語“烯基”是指具有一個(gè)或多個(gè)碳-碳雙鍵的一價(jià)不飽和烴基。烯基部分可以是直鏈的或支鏈的。示例性的烯基基團(tuán)包括乙烯基。本申請(qǐng)中所用的“亞烯基”是指具有一個(gè)或多個(gè)碳-碳雙鍵且可以是直鏈或支鏈的二價(jià)不飽和烴基。
術(shù)語“炔基”是指具有一個(gè)或多個(gè)碳-碳三鍵的一價(jià)不飽和烴基。炔基部分可以是直鏈的或支鏈的。本申請(qǐng)中所用的“亞炔基”是指具有一個(gè)或多個(gè)碳-碳三鍵且可以是直鏈或支鏈的二價(jià)不飽和烴基。
術(shù)語“芳基”是指包含1、2或3個(gè)環(huán)的碳環(huán)芳族系統(tǒng)，其中所述環(huán)可以是稠合的。如果所述環(huán)是稠合的，則環(huán)之一必須是完全不飽和的且稠合環(huán)可以是完全飽和的、部分不飽和的或完全不飽和的。術(shù)語“稠合的”是指通過與第一個(gè)環(huán)共有(即共享)2個(gè)相鄰原子而存在第二個(gè)環(huán)(即連接或形成)。術(shù)語“稠合的(fused)”與術(shù)語“稠合的(condensed)”等效。術(shù)語“芳基”涵蓋芳族基團(tuán)，例如芐基、苯基、萘基、四氫萘基、茚滿基、聯(lián)苯基、苯并[b][1,4]嗪-3(4H)-酮基、2,3-二氫-1H茚基和1,2,3,4-四氫萘基。
術(shù)語“環(huán)烷基”是指非芳族環(huán)，其為完全氫化的并且可以作為單環(huán)、雙環(huán)或螺環(huán)存在。除非另有具體說明，否則碳環(huán)通常是3元至20元環(huán)。例如，環(huán)烷基包括例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、降冰片基(雙環(huán)[2.2.1]庚基)、雙環(huán)[2.2.2]辛基等基團(tuán)。
術(shù)語“雜芳基”是指包含1、2、3或4個(gè)獨(dú)立地選自氧、氮和硫的雜原子并且具有1、2或3個(gè)環(huán)的芳族碳環(huán)系統(tǒng)，其中所述環(huán)可以是稠合的，其中稠合的具有上述定義。術(shù)語“雜芳基”包括，但不限于呋喃基、噻吩基、唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、異唑基、異噻唑基、二唑基、噻二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶-2(1H)-酮基、噠嗪-2(1H)-酮基、嘧啶-2(1H)-酮基、吡嗪-2(1H)-酮基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、5,6,7,8-四氫異喹啉基、5,6,7,8-四氫喹啉基、6,7-二氫-5H-環(huán)戊并[b]吡啶基、6,7-二氫-5H-環(huán)戊并[c]吡啶基、1,4,5,6-四氫環(huán)戊并[c]吡唑基、2,4,5,6-四氫環(huán)戊并[c]吡唑基、5,6-二氫-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑基、6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑基、5,6,7,8-四氫-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基、4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡啶基、4,5,6,7-四氫-1H-吲唑基和4,5,6,7-四氫-2H-吲唑基。
術(shù)語“遞藥系統(tǒng)”是指遞送治療有效量的配體的工具，且包括，但不限于聚合物，例如PEG(聚(乙二醇)甲基醚)、PEG-PLA(聚(乙二醇)甲基醚-聚(D,L丙交酯))、PEG-PLGA(聚(乙二醇)甲基醚-聚(丙交酯-共-乙交酯))和PEG-PCL(聚(乙二醇)-聚(ε-己內(nèi)酯)甲基醚)、Quantum Dots(Q dots)、脂質(zhì)體、免疫-脂質(zhì)體、膠束、納米顆粒和納米凝膠。示例性的遞藥系統(tǒng)描述在Tiwari，G.，“Drug Delivery Systems：an Updated Review”，Int J Pharm Investig 2(1)p.2-11(2012年1月)中，通過參考將該文獻(xiàn)的內(nèi)容并入本申請(qǐng)用于所有目的。
術(shù)語“小分子”是指具有100至2,000道爾頓之間的分子量的有機(jī)化合物，包括，但不限于合成化合物和天然產(chǎn)物。
“抗體”是能夠通過至少一個(gè)抗原識(shí)別位點(diǎn)特異性結(jié)合至靶標(biāo)(例如碳水化合物、多核苷酸、脂質(zhì)、多肽等)的免疫球蛋白分子，所述抗原結(jié)合位點(diǎn)位于免疫球蛋白分子的可變區(qū)中。如本申請(qǐng)中所用，該術(shù)語不僅包括完整的多克隆或單克隆抗體，而且包括其片段(例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv)、單鏈(ScFv)和結(jié)構(gòu)域抗體)和包含抗體部分的融合蛋白和包含抗原識(shí)別位點(diǎn)的免疫球蛋白分子的任意其它被修飾的結(jié)構(gòu)?？贵w包括任意類型的抗體，例如IgG、IgA或IgM(或它們的亞類)和不需具有任意特定類型的抗體。根據(jù)其重鏈恒定結(jié)構(gòu)域的抗體氨基酸序列的不同，可以將免疫球蛋白指定為不同的類型。存在5種主要類型的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，且它們中的幾種可以進(jìn)一步被分成亞類(同種型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。對(duì)應(yīng)于不同類型免疫球蛋白的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域分別稱作α、δ、ε、γ和μ。不同類型免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是眾所周知的。
本申請(qǐng)中所用的“單克隆抗體”是指得自基本上均質(zhì)性抗體群體的抗體，即除了可能以微量存在的可能的天然存在的突變以外，構(gòu)成所述群體的個(gè)體抗體相同。單克隆立體是高度特異性的，其定向于單一抗原位點(diǎn)。此外，與多克隆抗體制備物(其典型地包括定向于不同決定簇(表位)的不同抗體)形成鮮明對(duì)比，每種單克隆抗體定向于抗原上的單一決定簇。修飾語“單克隆”表示得自基本上均質(zhì)性抗體群體的抗體的屬性且不應(yīng)被解釋為需要通過任意特定方法生產(chǎn)的抗體。例如，本發(fā)明使用的單克隆抗體可以通過首先由Kohler和Milstein，1975，Nature 256：495所述的雜交瘤方法制備，或可以通過例如描述在美國專利US 4,816,567中的重組DNA方法制備。單克隆抗體還可以從使用例如McCafferty等人，1990，Nature 348：552-554中所述技術(shù)生成的噬菌體文庫中分離出來。
抗體的“可變區(qū)”是指單獨(dú)或以組合的抗體輕鏈的可變區(qū)或抗體重鏈的可變區(qū)。正如本領(lǐng)域中所知曉的，重鏈和輕鏈的可變區(qū)各自由通過3個(gè)包含高變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)(CDRs)連接的4個(gè)框架區(qū)(FR)組成。每條鏈中的CDRs通過FRs緊密結(jié)合在一起，并且與來自另一條鏈的CDRs一起促進(jìn)形成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。存在至少兩種用于測(cè)定CDRs的技術(shù)：(1)基于交叉物種序列變異性的方法(即，Kabat等人的Sequences of Proteins of Immunological Interest，(第5版，1991，National Institutes of Health，Bethesda MD))；以及(2)基于抗原-抗體復(fù)合物的結(jié)晶學(xué)研究的方法(Al-lazikani等人，1997，J.Molec.Biol.273：927-948)。如本申請(qǐng)中所用，CDR可以指由任一方法或通過兩種方法的組合界定的CDRs。
正如本領(lǐng)域中所知曉的，抗體的“恒定區(qū)”是指單獨(dú)或組合的抗體輕鏈的恒定區(qū)或抗體重鏈的恒定區(qū)。
短語“治療有效量”是指(i)治療所述特定疾病、病癥或障礙、(ii)減弱、改善或消除所述特定疾病、病癥或障礙的一種或多種癥狀或(iii)預(yù)防或延遲本申請(qǐng)中所述特定疾病、病癥或障礙的一種或多種癥狀發(fā)作的本發(fā)明化合物的量。
術(shù)語“動(dòng)物”是指人(男性或女性)、伴侶動(dòng)物(例如狗、貓和馬)、食物來源動(dòng)物、動(dòng)物園動(dòng)物、海洋動(dòng)物、禽類和其它類似動(dòng)物物種。“可食用動(dòng)物”是指食物來源動(dòng)物，例如牛、豬、綿羊和家禽。
術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”表示必須在化學(xué)上和/或毒理學(xué)上與制劑包含的其它成分和/或所治療的哺乳動(dòng)物相容的物質(zhì)或組合物。
術(shù)語“治療”涵蓋預(yù)防，即預(yù)防性治療和治標(biāo)性治療。
本申請(qǐng)中所用的“藥學(xué)上可接受的載體”或“藥學(xué)上可接受的賦形劑”包括與活性成分組合時(shí)能夠使該成分保持生物活性并且與受試者的免疫系統(tǒng)無反應(yīng)的任意物質(zhì)。實(shí)例包括，但不限于任意標(biāo)準(zhǔn)藥用載體，例如磷酸鹽緩沖鹽水溶液、水、乳劑例如油/水乳劑和不同類型的濕潤劑。優(yōu)選的用于氣霧劑或胃腸外施用的稀釋劑是磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)或生理(0.9％)鹽水。通過眾所周知的常規(guī)方法配制包含這類載體的組合物(參見，例如Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，A.Gennaro，ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1990；以及Remington，The Science和Practice of Pharmacy，第20版，Mack Publishing，2000)。
術(shù)語“本發(fā)明的化合物”(除非另有特別地鑒定)是指式(A)的化合物和所有的對(duì)映體、互變異構(gòu)體和同位素標(biāo)記的化合物。本發(fā)明化合物的水合物和溶劑合物被視為本發(fā)明的組合物，其中所述化合物分別與水或溶劑結(jié)合。所述化合物還可以以一種或多種結(jié)晶狀態(tài)存在，即作為共晶、多晶型物存在，或它們可以作為無定形固體存在。本申請(qǐng)的權(quán)利要求涵蓋所有這類形式。
術(shù)語“連接基”是化學(xué)基團(tuán)，它通過至少一個(gè)共價(jià)鍵連接一個(gè)或多個(gè)其它化學(xué)基團(tuán)。所述連接基可以包括一個(gè)或多個(gè)間隔基團(tuán)，包括，但不限于亞烷基、亞烯基、亞炔基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、雜芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基等。所述連接基可以是電荷中性的、帶正電荷或帶負(fù)電荷。此外，所述連接基可以是可裂解的，使得連接基內(nèi)將連接基與另一個(gè)化學(xué)基團(tuán)連接的連接基的共價(jià)鍵或連接配體的鍵可在某些條件下被斷裂或裂解(參見，例如H.Bruyere，等人，“Tuning the pH Sensitivities of Orthoester based compounds for Drug Delivery Applications by Simple Chemical Modification”，Bioorganic和Medicinal Chemistry Letters，20，2200(2010)和A.A.Kislukhin等人，“Degradable Conjugates from Oxanorbornadiene Reagents”，Journal of the American Chemical Society，134，6491(2012)。這些條件包括pH、溫度、鹽濃度、催化劑或酶(G.M.Dubowchik等人，“Cathepsin B-Labile Dipeptide Linkers for Lysosomal Release of Doxorubicin from Internalizing Immunoconjugates：Model Studies of Enzymatic Drug Release and Antigen-Specific In Vitro Anticancer Activity”，Bioconjugate Chemistry，13，855(2002)，G.Leriche等人，“Cleavable Linkers in Chemical Biology”，Bioorganic and Medicinal Chemistry，20，571(2012)，C.P.R.Hackenberger等人，“Chemoselective Ligation and Modification Strategies for Peptides and Proteins”，Angewandte Chemie International Edition，47，10030(2008)；D.M.Patterson等人，“Finding the Right(Bioorthogonal)Chemistry”，ACS Chemical Biology，9，592(2014)；C.A.Blencowe等人，“Self-immolative Linkers in Polymeric Delivery Systems”，Polymer Chemistry，2，773(2011)。通過參考將上述出版物公開的內(nèi)容以其完整的形式并入本申請(qǐng)用于所有目的。
在一些實(shí)施方案中，所述連接基在胞內(nèi)條件下是可裂解的，使得連接基的裂解在胞內(nèi)環(huán)境中從式A的化合物中釋放配體單元。在一些實(shí)施方案中，所述連接基可被存在于胞內(nèi)環(huán)境中的裂解劑裂解(例如溶酶體或內(nèi)涵體或caveolus內(nèi))?？闪呀獾倪B接基的一個(gè)實(shí)例是酶裂解的連接基，即可被胞內(nèi)肽酶或蛋白酶(包括，但不限于溶酶體或內(nèi)涵體蛋白酶)裂解的肽基連接基。在一些實(shí)施方案中，所述肽基連接基是至少兩個(gè)氨基酸長或至少三個(gè)氨基酸長。酶裂解劑包括組織蛋白酶B和組織蛋白酶D和纖溶酶，已知它們均水解二肽藥物衍生物，導(dǎo)致活性藥物在靶細(xì)胞內(nèi)釋放(參見Dubowchik，Gene M.等人，Cathepsin B-Labile Dipeptide Linkers for Lysosomal Release of Doxorubicin，Bioconjugate Chem.2002，13，855-869)。這類連接基包括肽類和二肽類，包括上述出版物中所述的那些，為所有目的將這些文獻(xiàn)以其完整的形式并入本申請(qǐng)作為參考。
其它可裂解的連接基可以被親核試劑/堿性試劑、還原劑、光照射和親電試劑/酸性試劑裂解(參見Leriche，Geoffray，等人，Cleavable Linkers in Chemical Biology，Bioorganic&Medicinal Chemistry 20(2012)571–582)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述連接基單元不是可裂解的，且所述藥物通過降解被式A的化合物釋放。該過程通常被稱作自我犧牲性消除，其通過被熵和熱力學(xué)驅(qū)動(dòng)的環(huán)化或電子級(jí)聯(lián)反應(yīng)起作用。不可裂解的連接基的一個(gè)實(shí)例是多取代的富含電子的芳族種類，其帶有氨基或羥基基團(tuán)或其它給電子基團(tuán)，該基團(tuán)與芐型位置上的離去基綴合(參見Blencowe，Christopher A.等人，Self-immolative Linkers in Polymeric Delivery Systems，Polymer Chemistry，2011，2，773–790)。自我犧牲性消除連接基包括，但不限于基于苯胺的連接基、基于N-羥基苯胺的連接基、基于苯酚的連接基、基于1,8消除的連接基、基于環(huán)化的連接基(即，基于羥基的連接基、基于氨基的連接基和基于巰基的連接基)、聚合物-樹枝狀大分子綴合物和聚合物綴合物(即，N-(2-羥基丙基)-甲基丙烯酰胺(HPMA)聚合物綴合物、聚-乙二醇(PEG)聚合物綴合物)(參見I.Tranoy-Opalinski，等人，Design of Self-Immolative Linkers for Tumour-Activated Prodrug Therapy，Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry，2008，8，618-637；Blencowe，Christopher A.等人，Self-immolative Linkers in Polymeric Delivery Systems，Polymer Chemistry，2011，2，773–790)。
典型地，所述連接基在胞外環(huán)境中基本上不裂解。本申請(qǐng)中所用的“在胞外環(huán)境中基本上不裂解”在連接基的上下文中意指當(dāng)化合物存在于胞外環(huán)境(例如血漿)中時(shí)，在包括X-Y基團(tuán)的式A化合物的樣品中不超過20％、典型地不超過約15％、更典型地不超過約10％、甚至更典型地不超過約5％、不超過約3％或不超過約1％的連接基被裂解。例如，可以通過將化合物與血漿一起溫育至多24小時(shí)的預(yù)定時(shí)間段(例如2、4、8、16或24小時(shí))然后對(duì)存在于血漿中的游離配體的量進(jìn)行量化，確定連接基是否在胞外環(huán)境中基本上不裂解。
所述連接基可以是一價(jià)、二價(jià)或三價(jià)有支鏈的連接基。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述連接基是二硫鍵。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述連接基是結(jié)構(gòu)L1-L10中的任一種，該結(jié)構(gòu)顯示與Y和Z(其中Y和Z表示概述中所呈現(xiàn)的基團(tuán))的連接：
其中T各自獨(dú)立地不存在或是亞烷基、亞烯基或亞炔基，其中所述亞烷基、亞烯基或亞炔基的一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)可以各自獨(dú)立地被獨(dú)立地選自-O-、-S-和-N(R4)-的雜原子基團(tuán)替代，其中所述雜原子基團(tuán)被至少2個(gè)碳原子隔開；
Q各自獨(dú)立地不存在或是C(O)、C(O)-NR4、NR4-C(O)、O-C(O)-NR4、NR4-C(O)-O、-CH2-、雜芳基或選自O(shè)、S、S-S、S(O)、S(O)2和NR4的雜原子基團(tuán)，其中至少2個(gè)碳原子將雜原子基團(tuán)O、S、S-S、S(O)、S(O)2和NR4與任意其它的雜原子基團(tuán)隔開。
R4各自獨(dú)立地是-H、-(C1-C20)烷基或(C3-C6)環(huán)烷基，其中被至少2個(gè)碳原子隔開的烷基或環(huán)烷基的1至6個(gè)-CH2-基團(tuán)可以被-O-、-S-或-N(R4)-替代，且所述烷基的-CH3可以被選自-N(R4)2、-OR4和-S(R4)的雜原子基團(tuán)替代，其中所述雜原子基團(tuán)被至少2個(gè)碳原子隔開；且其中所述烷基和環(huán)烷基可以被鹵原子取代；且
n各自獨(dú)立地是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40，其中如果n大于1，則每個(gè)(T-Q-T-Q)的每個(gè)T和每個(gè)Q是獨(dú)立地選擇的。
在一個(gè)實(shí)施方案中，Q是選自1H-1,2,3-三唑基、吡啶基和1,2,3,4-四唑基的雜芳基。
連接基長度可以根據(jù)n的值進(jìn)行調(diào)整以便優(yōu)化至目標(biāo)分子的可達(dá)性。在一些情況中，可以通過分析充分裂解式(A)的化合物所需的藥物-靶標(biāo)相互作用位點(diǎn)或空間來設(shè)計(jì)連接基的最佳長度。
所謂“基因衍生的物質(zhì)”意指包括蛋白質(zhì)(包括Cas9蛋白)、質(zhì)粒(包括編碼Cas9蛋白或cas9蛋白和指導(dǎo)序列的質(zhì)粒)、RNA序列例如mRNA、siRNA序列和Cas9核糖核蛋白。Cas9核糖核蛋白可以包含兩種連接的或結(jié)合的元件：(a)第一種元件，其包含識(shí)別元件，該識(shí)別元件可以包括tracr配偶序列和至少一個(gè)用于插入tracr配偶序列上游的指導(dǎo)序列或單一指導(dǎo)序列(sgRNA)，其中當(dāng)進(jìn)行表達(dá)時(shí)，所述指導(dǎo)序列指導(dǎo)真核細(xì)胞中的Cas9核糖核蛋白序列特異性結(jié)合至靶序列；以及(b)第二種元件，其包含Cas9蛋白序列并任選包含一種或多種核定位序列(NLSs)，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個(gè)或更多個(gè)NLSs或多于約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個(gè)或更多個(gè)NLSs。在一些實(shí)施方案中，所述第二種元件在氨基末端、羧基末端或它們的組合或接近氨基末端、羧基末端或它們的組合包含約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個(gè)或更多個(gè)NLSs(例如在氨基末端上的一個(gè)或多個(gè)NLS和在羧基末端上的一個(gè)或多個(gè)NLS)。當(dāng)存在多于一個(gè)NLS時(shí)，它們各自可以彼此獨(dú)立地選擇，使得單一NLS可以以多于一個(gè)的拷貝存在和/或以與一個(gè)或多個(gè)以一個(gè)或多個(gè)拷貝存在的其它NLSs組合存在?！爸笇?dǎo)序列”是具有與靶多核苷酸序列足夠的互補(bǔ)性以便與靶序列雜交并且指導(dǎo)Cas9核糖核蛋白與靶序列的序列特異性結(jié)合的任意多核苷酸序列。示例性的Cas9蛋白、質(zhì)粒和核糖核蛋白描述在如下文獻(xiàn)中：2014年3月6日公布的US20140068797；01/29/2015公布的US2015031134；以及3/19/2015公布的US2015079681，為所有目的將所有這些文獻(xiàn)以其完整的內(nèi)容并入本申請(qǐng)。
在一些實(shí)施方案中，所述指導(dǎo)序列包含至少8個(gè)核苷酸，其中在使用適合的序列對(duì)比算法優(yōu)化序列對(duì)比時(shí)，所述指導(dǎo)序列與其相應(yīng)的靶序列之間的互補(bǔ)性程度為約50％、60％、75％、80％、85％、90％、95％、97.5％、99％或更大，或大于約50％、60％、75％、80％、85％、90％、95％、97.5％、99％或更大。最佳序列對(duì)比可以使用用于序列對(duì)比的任意適合的算法確定，其非限制性實(shí)例包括Smith-Waterman算法、Needleman-Wunsch算法、基于Burrows-Wheeler轉(zhuǎn)化的算法(例如Burrows Wheeler Aligner)，ClustalW，Clustal X，BLAT，Novoalign(Novocraft Technologies，ELAND(Illumina，San Diego，Calif.)，SOAP(在soap.genomics.org.cn得到)和Maq(在maq.sourceforge.net得到)。
來自不同物種(包括肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)、化膿性鏈球菌(S.pyogenes)和嗜熱鏈球菌(S.thermophilus))的Cas9蛋白序列顯示出保守的結(jié)構(gòu)，其具有HNH回歸內(nèi)切核酸酶結(jié)構(gòu)域和分離的RuvC/RnaseH內(nèi)切核酸酶結(jié)構(gòu)域，由此Cas9蛋白各自共有4個(gè)主要模體：模體1、2和4，它們?yōu)镽uvC樣模體；以及模體3，其為HNH模體。對(duì)于化膿性鏈球菌(Steptococcus pyogenes)(SEQ ID No：8)，模體1是SEQ ID NO：260，模體2是SEQ ID NO：261，模體3是SEQ ID NO：262，且模體4是SEQ ID NO：263。因此，“Cas9蛋白序列”意指包含序列內(nèi)具有至少4個(gè)模體的氨基酸序列的多肽，所述模體與SEQ ID NOs：260-263任一序列的Cas9氨基酸序列的模體1、2、3和4或與SEQ ID NOs：1-829中所示的任意氨基酸序列中的相應(yīng)部分具有至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約99％或100％的氨基酸序列同一性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述Cas9氨基酸序列與SEQ ID NO：8的7－166位或731－1003位的氨基酸或SEQ ID NOs：1-7、9-829中所示的序列相應(yīng)的氨基酸具有至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約99％或100％氨基酸序列同一性。
所述Cas9蛋白序列可以被修飾，例如為了在真核細(xì)胞中表達(dá)進(jìn)行密碼子優(yōu)化或包括對(duì)序列的修飾以便影響其功能。在一些實(shí)施方案中，所述Cas9蛋白序列指導(dǎo)靶序列的位置上的DNA的一條鏈或兩條鏈裂解，例如使用用于與指導(dǎo)序列組合的Cas9切口酶(即，Cas9-D10A)，例如兩種指導(dǎo)序列，其分別靶向DNA靶標(biāo)的有義鏈和反義鏈，由此使得兩條鏈帶切口，并且導(dǎo)致非同源的末端連接。具有單一指導(dǎo)序列的Cas9-D10A可以生成插入/缺失。然而，在其它實(shí)施方案中，Cas9蛋白序列缺乏DNA鏈裂解活性，例如具有選擇性使用催化滅活的Cas(dCas)結(jié)構(gòu)域。在其它實(shí)施方案中，Cas9蛋白序列被修飾，以便與Cas9蛋白或Cas9核糖核蛋白共價(jià)鍵合，包括賴氨酸和半胱氨酸殘基修飾。在另外的實(shí)施方案中，Cas9核糖核蛋白能夠指導(dǎo)RNA鏈裂解，如O/'Connell，Mitchell R.，等人，Programmable RNA recognition and cleavage by CRISPR/Cas9，Nature，2014，516，p263-266中所述。
Cas9蛋白序列的修飾可以包括D1OA(SEQ ID NO：8的10位上的氨基酸由天冬氨酸變成丙氨酸)突變(或如SEQ ID NOs：1-829中所示的任意蛋白質(zhì)的相應(yīng)突變)，其可以裂解靶DNA的互補(bǔ)鏈，但裂解靶DNA的非互補(bǔ)鏈的能力下降(由此產(chǎn)生單一鏈斷裂而不是雙鏈斷裂)。另一種修飾是H840A(SEQ ID NO：8的840位上的氨基酸由組氨酸變成丙氨酸)突變(或如SEQ ID NOs：1-829中所示的任意蛋白質(zhì)的相應(yīng)突變)，其可以裂解靶DNA的非互補(bǔ)鏈，但裂解靶DNA的互補(bǔ)鏈的能力下降(由此產(chǎn)生單一鏈斷裂而不是雙鏈斷裂)。Cas9的D1OA或H840A變體(或如SEQ ID NOs：1-829中所示的任意蛋白質(zhì)的相應(yīng)突變)的應(yīng)用可以改變預(yù)期的生物結(jié)果，因?yàn)榕c單鏈斷裂相反當(dāng)雙鏈斷裂存在時(shí)非同源性末端連接更有可能發(fā)生。
其它殘基可以突變以便也使來自具有模體1、2、3或4的特定核酸酶失活。作為非限制性實(shí)例，殘基D10、G12、G17、E762、H840、N854、N863、H982、H983、A984、D986和/或A987(或如SEQ ID NOs：1-829中所示的任意蛋白質(zhì)的相應(yīng)突變)可以被修飾。突變可以包括取代、添加和缺失或其任意的組合。在一些情況中，突變將突變的氨基酸轉(zhuǎn)化成另一種氨基酸，例如丙氨酸。其它修飾包括堿基修飾、骨架修飾和或核苷間連接修飾。
“核定位序列”(NLS)意指有助于Cas9核糖核蛋白進(jìn)入真核細(xì)胞的細(xì)胞核的氨基酸序列。因此，NLS典型地包含暴露于蛋白質(zhì)表面上的帶正電荷的賴氨酸或精氨酸的一種或多種短序列。示例性的NLSs包括，但不限于衍生自如下的NLS序列：SV40病毒大T抗原的NLS，其具有氨基酸序列PKKKRKV(SEQ ID NO：830)；來自核質(zhì)蛋白的NLS(例如具有序列KRPAATKKAGQAKKKK(SEQ ID NO：831)的核質(zhì)蛋白二分NLS；具有氨基酸序列PAAKRVKLD(SEQ ID NO：832)或RQRRNELKRSP(SEQ ID NO：833)的c-myc NLS；具有序列NQSSNFGPMKGGNFGGRSSGPYGGGGQYFAKPRNQGGY(SEQ ID NO：834)的hRNPA1M9NLS；來自核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白α的IBB結(jié)構(gòu)域的序列RMRIZFKNKGKDTAELRRRRVEVSVELRKAKKDEQILKRR NV(SEQ ID NO：835)；肌瘤T蛋白的序列VSRKRPRP(SEQ ID NO：836)和PPKKARED(SEQ ID NO：837)；人p53的序列PQPKKKPL(SEQ ID NO：838)；小鼠c-abl IV的序列SALIKKKKKMAP(SEQ ID NO：839)；流感病毒NS1的序列DRLRR(SEQ ID NO：840)和PKQKKRK(SEQ ID NO：841)；肝炎病毒δ抗原的序列RKLKKKIKKL(SEQ ID NO：842)；小鼠Mx1蛋白的序列REKKKFLKRR(SEQ ID NO：843)；人聚(ADP-核糖)聚合酶的序列KRKGDEVDGVDEVAKKKSKK(SEQ ID NO：844)；類固醇激素受體(人)糖皮質(zhì)激素的序列RKCLQAGMNLEARKTKK(SEQ ID NO：845)；序列MAPKKKRKVGIHRGVP(SEQ ID NO：846)；以及序列PKKKRKVEDPKKKRKVD(SEQ ID NO：847)。
在式(A)的化合物的一個(gè)實(shí)施方案中，R1是Z-X-Y，且R2是-NH-C(O)-CH3。
在式(A)的化合物的另一個(gè)實(shí)施方案中，Y是RNA序列。
在式(A)的化合物的另一個(gè)實(shí)施方案中，Y是siRNA序列。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(A)的化合物能夠結(jié)合肝細(xì)胞上存在的受體。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，存在于肝細(xì)胞上的受體是脫唾液酸糖蛋白受體。
在藥物組合物的一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物或所述其治療上可接受的鹽以治療有效的量存在。
可以通過包括與化學(xué)領(lǐng)域中那些眾所周知的類似的方法、特別是根據(jù)本申請(qǐng)中包含的描述的合成路徑合成本發(fā)明的化合物。原料通常購自商業(yè)來源，例如Aldrich Chemicals(Milwaukee，WI)或易于使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法制備(例如通過一般性描述在如下文獻(xiàn)中的方法：Louis F.Fieser和Mary Fieser，Reagents for OrganicSynthesis，v.1-19，Wiley，New York(1967-1999ed.)或BeilsteinsHandbuch der organischen Chemie，4，Aufl.ed.Springer-Verlag，Berlin，包括增刊(也可以通過Beilstein在線數(shù)據(jù)庫得到))。
為了示例性目的，如下所述的反應(yīng)方案提供了用于合成本發(fā)明化合物以及關(guān)鍵合成中間體的可能路徑。關(guān)于個(gè)體反應(yīng)步驟的更詳細(xì)描述，見下文的實(shí)施例部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，其它合成路徑可以用于合成本發(fā)明的化合物。盡管方案中描述并且在下文中討論了具體的原料和試劑，但是可容易地代之以其它的原料和試劑以提供各種衍生物和/或反應(yīng)條件。此外，通過下述方法制備的許多化合物可以根據(jù)本申請(qǐng)公開的內(nèi)容，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的常規(guī)化學(xué)方法進(jìn)一步修飾。
在制備本發(fā)明化合物的過程中，需要保護(hù)中間體的遠(yuǎn)端官能團(tuán)(例如伯胺或仲胺)。對(duì)這類保護(hù)的需求將根據(jù)遠(yuǎn)端官能團(tuán)的性質(zhì)和制備方法的條件而改變。適合的氨基-保護(hù)基(NH-Pg或NPg)包括乙?；?、三氟乙?；⑹宥⊙豸驶?BOC)、芐氧羰基(CBz)、9-芴基亞甲氧基羰基(Fmoc)和鄰苯二甲酰亞胺(Pht)?！傲u基-保護(hù)基”是指阻滯或保護(hù)羥基官能團(tuán)的羥基取代基。適合的羥基-保護(hù)基(O-Pg)包括，例如烯丙基、乙?；?Ac)、甲硅烷基(如三甲基甲硅烷基(TMS)或叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS))、芐基(Bn)、對(duì)甲氧基芐基(PMB)、三苯甲基(Tr)、對(duì)溴苯甲?；?、對(duì)硝基苯甲?；?亞芐基、環(huán)縮酮類、原酸酯類、用于保護(hù)1,2-或1,3-二醇類的原酰胺類)。對(duì)于這類保護(hù)的需求易于本領(lǐng)域技術(shù)人員決定。有關(guān)保護(hù)基及其應(yīng)用的一般描述，參見T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley&Sons，New York，1991。
方案1概括了可用于提供本發(fā)明化合物的通用方法。在方案1的步驟1中，可以在典型條件下[使用三甲基甲硅烷基氯和吡啶在室溫(約23℃)下]使通過H.Paulsen和M.Paal在Carbohydrate Research，135，53(1984)中所述方法制備的合成中間體(I-a)全甲硅烷基化，然后選擇性裂解保護(hù)伯醇的三甲基甲硅烷基基團(tuán)(通過在堿性條件下例如在醇溶劑如甲醇中的碳酸鉀在約-10攝氏度至室溫的溫度下處理)，以顯露伯醇中間體(I-b)。在方案1的步驟2中，可以通過J.R.Parikh和William v.E.Doering在Journal of the American Chemical Society，89，5505–5507(1967)中所述的Parikh-Doering氧化，將中間體(I-c)中發(fā)現(xiàn)的另外的羥基亞甲基基團(tuán)引至糖苷上，然后用甲醛源(例如甲醛水溶液、固體低聚甲醛)在堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉、醇鈉)的存在下在水或醇溶劑中，在約室溫至約60攝氏度的溫度下處理。該步驟被稱作羥醛-康尼扎羅(Cannizzaro)反應(yīng)。也可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的該方法的變型。例如，還可以使用其它氧化劑，如Ozanne，A.等人在Organic Letters，5，2903(2003)中所述的穩(wěn)定化2-碘?；郊姿帷anji Omura和Daniel Swern在Tetrahedron，34，1651(1978)中所述的Swern氧化以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它氧化劑。Robert Schaffer在Journal of The American Chemical Society，81，5452(1959)中和Amigues，E.J.，等人在Tetrahedron，63，10042(2007)中描述了羥醛康尼扎羅反應(yīng)順序。方案1步驟2的實(shí)驗(yàn)條件也促進(jìn)了保護(hù)仲醇類的三甲基甲硅烷基基團(tuán)的裂解。在方案1的步驟3中，用有機(jī)酸或無機(jī)酸(例如硫酸)或酸性樹脂在溶劑如水中在約室溫至約100攝氏度的溫度下處理中間體(I-c)，得到本發(fā)明的化合物(1)。在方案1的步驟4中，可以用已知將疊氮基基團(tuán)還原成相應(yīng)胺的還原劑處理化合物(1)(例如過渡金屬介導(dǎo)的催化氫化，使用三苯膦的水溶液，在本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的典型實(shí)驗(yàn)條件下)。隨后在?；瘎┑拇嬖谙?例如乙酐或乙酰氯，在吡啶或三乙胺的存在下，在溶劑例如二氯甲烷或四氫呋喃中，在0至80攝氏度的溫度下)處理，得到本發(fā)明的化合物(2)。在方案1的步驟5中，在醇鹽(例如甲醇鈉)的存在下，在溶劑或溶劑混合物中，例如醇溶劑或四氫呋喃，在約0至室溫的溫度下處理化合物(2)，得到本發(fā)明的化合物(3)。此外，然后可容易地使用眾所周知的保護(hù)基和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的官能團(tuán)操作順序?qū)⒂纱说玫降幕衔锕倌芑杀景l(fā)明的其它要求保護(hù)的化合物。因此，在方案1的步驟6和7中，可以進(jìn)一步用適合的保護(hù)基分別保護(hù)化合物(1)和(3)上的仲羥基基團(tuán)(例如在用2,2-二甲氧基丙烷在酸性條件下、在溶劑例如N,N-二甲基甲酰胺中在室溫至約90攝氏度的溫度下處理時(shí)，為環(huán)縮酮)，得到中間體，例如(I-d)和(I-e)。依次，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的合成轉(zhuǎn)化和官能團(tuán)和保護(hù)基操作，預(yù)先處理(I-d)和(I-e)以便進(jìn)一步官能化和衍生伯羥基基團(tuán)，以便連接所期望的連接基X和目標(biāo)配體Y，從而產(chǎn)生本發(fā)明中要求保護(hù)的包含XY的化合物。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的試劑和條件除去保護(hù)基(例如Pg)(例如在其中兩個(gè)Pg形成環(huán)縮酮例如丙酮化合物(acetonide)的情況中，可以使用酸例如乙酸在溶劑或溶劑混合物例如乙酸、醇溶劑、水、四氫呋喃中在室溫至約80攝氏度的溫度下除去它)，暴露仲羥基基產(chǎn)生本發(fā)明中要求保護(hù)的包含XY的化合物。例如，在保護(hù)基操作和除去后，(I-e)上伯羥基基團(tuán)的烷基化可以產(chǎn)生本發(fā)明中要求保護(hù)的相應(yīng)包含醚連接的XY的化合物。還可以便利地由(3)或中間體(I-e)，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的適合的反應(yīng)劑和試劑得到本發(fā)明中要求保護(hù)的包含酯連接的、碳酸酯連接的和氨基甲酸酯-連接的XY的化合物。在保護(hù)基操作和除去后，將(I-e)上的伯羥基基團(tuán)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的三氟甲磺酸酯(III-e-1)，然后用適合的親核體進(jìn)行親核置換可以得到本發(fā)明中要求保護(hù)的包含相應(yīng)的醚連接的和硫醚連接的XY化合物。氧化硫醚中間體還可以產(chǎn)生本發(fā)明中要求保護(hù)的包含相應(yīng)的亞砜和砜連接的XY的化合物。此外，用硫代乙酸鉀置換(III-e-1)上的伯三氟甲磺酸酯，然后進(jìn)行硫酯水解，可以得到相應(yīng)的硫醇(III-e-2)，在保護(hù)基操作和除去后，其得到本發(fā)明的化合物(IV-e-1)；硫醇(III-e-2)的進(jìn)一步烷基化以及保護(hù)基操作和除去還可以得到本發(fā)明中要求保護(hù)的包含硫醚連接的XY的化合物。還可以將(III-e-2)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的磺酰氯并且用適合的胺處理，以便在保護(hù)基操作和除去后得到本發(fā)明包含磺酰胺連接的XY的化合物。用疊氮化鈉置換伯三氟甲磺酸酯(III-e-1)還可以產(chǎn)生包含相應(yīng)的疊氮化物的化合物(III-e-3)，在保護(hù)基操作和除去后，其得到化合物(IV-e-2)。還原化合物(III-e-3)可以得到相應(yīng)的伯胺(III-e-4)，將其預(yù)先處理用于進(jìn)一步官能化(例如酰胺鍵形成、還原氨基化、磺酰胺形成、脲形成、氨基甲酸酯形成等)，以便連接所述XY取代基并且在保護(hù)基操作和除去后產(chǎn)生本發(fā)明中要求保護(hù)的化合物。在保護(hù)基操作和除去后，(III-e-4)還可以產(chǎn)生本發(fā)明的化合物(IV-e-3)。用包含炔或腈的試劑或合成中間體處理上述疊氮化物中間體(III-e-3)，然后在本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的條件下進(jìn)行保護(hù)基操作和除去，還可以分別產(chǎn)生本發(fā)明中要求保護(hù)的包含三唑連接的或四唑連接的XY的化合物。將(I-e)上的伯羥基基團(tuán)氧化成相應(yīng)的醛(III-e-5)，然后在本領(lǐng)域和技術(shù)人員公知的典型條件下用適合的胺進(jìn)行還原氨基化，或烯化(例如Wittig-、Horner-Wadsworth-Emmons-、Petterson、Julia類型及其變型)，然后還原所形成的烯烴(例如，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的金屬為介體的催化氫化或二酰亞胺為介體的還原)，在官能團(tuán)操作和保護(hù)基操作和除去后，可以分別得到本發(fā)明中要求保護(hù)的包含所期望的氮連接的或碳連接的X-Y的化合物。將醛(III-e-5)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的炔(III-e-6)(使用Corey-Fuchs類型反應(yīng)或使用Seyferth-Gilbert類型試劑)，然后進(jìn)行保護(hù)基操作和除去，可以得到本發(fā)明中要求保護(hù)的化合物(IV-e-4)。依次，用包含疊氮化物的試劑或合成中間體處理炔(III-e-6)或(IV-e-4)，然后在本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的條件下進(jìn)行保護(hù)基操作和除去，還可以得到本發(fā)明中要求保護(hù)的包含三唑連接的XY的化合物。當(dāng)用適合的試劑在本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的金屬為介體的交叉偶合(例如Sonogashira類型反應(yīng))下處理時(shí)，炔(III-e-6)也可以用作得到本發(fā)明中要求保護(hù)的其它化合物的有用合成中間體。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的合成轉(zhuǎn)化，將(I-e)上的伯羥基基團(tuán)氧化成相應(yīng)的酸(III-e-7)，在保護(hù)基除去后，得到本發(fā)明中要求保護(hù)的包含酯連接的和酰胺連接的XY的化合物。(III-e-7)上的保護(hù)基操作和除去還易于得到本發(fā)明的化合物(IV-e-5)。在本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的條件下將(IV-e-5)或(III-e-7)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的伯酰胺直接得到本發(fā)明中要求保護(hù)的化合物(IV-e-6)或化合物(III-e-8)，化合物(III-e-8)在保護(hù)基操作和除去后得到(IV-e-6)。此外，(III-e-8)上的酰胺官能團(tuán)脫水可以得到相應(yīng)的腈(III-e-9)，在官能團(tuán)操作和除去后，其得到本發(fā)明的化合物(IV-e-7)。用氰化物陰離子置換伯三氟甲磺酸酯(III-e-1)，還可以產(chǎn)生相應(yīng)的包含腈的化合物(III-e-10)，在保護(hù)基操作和除去后，得到本發(fā)明的化合物(IV-e-8)。依次，水解(IV-e-8)或(III-e-10)上的腈直接得到酸(IV-e-9)或(III-e-11)，(III-e-11)在保護(hù)基操作和除去后，得到(IV-e-9)。還可以進(jìn)一步使包含炔的化合物例如(III-e-6)/(IV-e-4)、包含伯酰胺的化合物例如(III-e-8)/(IV-e-6)、包含腈的化合物例如(III-e-9)/(IV-e-7)/(III-e-10)/(IV-e-8)、包含酸的化合物例如(III-e-7)/(IV-e-5)/(III-e-11)/(IV-e-9)、包含醛的化合物例如(III-e-5)進(jìn)一步官能化，并且與適合的試劑和合成中間體在本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的條件下反應(yīng)(并且概述在如下文獻(xiàn)中：J.A.Joule和K.Mills，Heterocyclic Chemistry，第5版，Wiley Ed.，(2010)；J.J.Li，NameReactions in heterocyclic chemistry，Wiley，(2005)；M.R.Grimmett Advances in Heterocyclic Chemistry，27，241，(1981)；I.G.Turchi等人，Chemical Reviews，75，389，(1975)；K.T.Potts，ChemicalReviews，61，87，(1961)；R.H.Wiley，Organic Reactions，6，367，(1951)；L.B.Clapp，Advances in Heterocyclic Chemistry，20，65，(1976)；A.Hetzheim等人，Advances in Heterocyclic Chemistry，7，183，(1967)；j.Sandstrom，Advances in Heterocyclic Chemistry，9，165，(1968)；S.J.Wittenberger，Organic Preparations和ProceduresInternational，26，499，(1994)；M.G.Finn等人，Angewandte Chemie International Edition，48，9879，(2009))，得到另外的本發(fā)明中要求保護(hù)的包含5和6元環(huán)(例如異唑、異噻唑、吡唑、唑、噻唑、咪唑、1,2,4-二唑、1,2,4-噻二唑、1,2,4-三唑，1,3,4-二唑、1,3,4-噻二唑、四唑、1,2,3-三唑)連接的XY的化合物。還可以由炔類例如(III-e-6)和(IV-e-4)或這些炔的雜取代的類似物(即，通過用OR4、N(R4)2、SR4置換(III-e-6)/(IV-e-4)上的炔氫；這些化合物可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的條件和試劑得到)、通過從本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉的苯并成環(huán)反應(yīng)(例如Danheiser類型或Dotz類型苯并成環(huán))得到本發(fā)明中要求保護(hù)的包含芳基環(huán)連接的XY的化合物。
上文對(duì)(3)和(I-e)所述的類似化學(xué)方法也可以適用于(1)和中間體(I-d)，得到本發(fā)明中要求保護(hù)的另外的化合物。關(guān)于進(jìn)一步詳細(xì)描述，見實(shí)施例部分。
方案1
方案1的步驟4中使用三氟乙酐也可以得到N-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基)-2,2,2-三氟乙酰胺；本發(fā)明的化合物(24)。
或者，可以通過方案2中所述的順序制備本發(fā)明的化合物，例如(3)。因此，甲基2-乙酰氨基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖苷(II-a)可以進(jìn)行與A.W.Mazur在EP0341062(1989)中所述的類似的氧化/Aldo-Cannizzaro方案，得到中間體(II-b)。在如上所述和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下，在方案1的步驟3(橋連縮酮形成)、4(乙?；?和5(酯水解)中處理(II-b)得到化合物(3)?；衔?1)還可以由(I-a)(或其異頭位置上的差向異構(gòu)體)，使用與方案2中所述相同的方法制備。
方案2
特別地，當(dāng)R1包含脂族衍生的、PEG衍生的鏈、PEG衍生的寡聚體或聚合物時(shí)，本發(fā)明的化合物可以在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下進(jìn)一步被官能化、反應(yīng)和配制，得到本發(fā)明中要求保護(hù)的另外的化合物，其可以用于和并入肝選擇性遞藥系統(tǒng)的制劑中，例如生物可降解的PLGA-b-PEG聚合物納米顆粒(參見，Erica Locatelli等人，Journal of Nanoparticle Research，14，1316，(2012))和基于脂質(zhì)的平臺(tái)例如脂質(zhì)體、脂質(zhì)納米顆粒、穩(wěn)定的核酸脂質(zhì)納米顆粒(參見，Sara Falsini等人，Journal of Medicinal Chemistry，57，1138(2014))。
可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法，例如通過色譜法和/或分級(jí)結(jié)晶、蒸餾、升華將非對(duì)映異構(gòu)體混合物基于其物理化學(xué)差異分離成其單個(gè)的非對(duì)映異構(gòu)體。可以通過與適合的旋光化合物(例如手性助劑，例如手性醇或Mosher酰氯)反應(yīng)，將對(duì)映體混合物轉(zhuǎn)化成非對(duì)映異構(gòu)體混合物、分離非對(duì)映異構(gòu)體并且將各非對(duì)映異構(gòu)體轉(zhuǎn)化(例如水解)成相應(yīng)的純對(duì)映體分離對(duì)映體。此外，本發(fā)明的一些化合物可以是阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體(例如取代的聯(lián)芳基化合物)，并且被視為本發(fā)明的組成部分。對(duì)映體還可以通過使用手性HPLC(高壓液相色譜法)柱分離。
另外可能的情況是，本發(fā)明的中間體和化合物可以以不同的互變異構(gòu)形式存在，且所有這類形式均被本發(fā)明的范圍涵蓋。術(shù)語“互變異構(gòu)體”或“互變異構(gòu)體形式”是指可通過低能屏障互變的不同能量的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。例如，質(zhì)子互變異構(gòu)體(也稱作質(zhì)子移變互變異構(gòu)體)包括通過質(zhì)子遷移的互變，例如酮-烯醇和亞胺-烯胺異構(gòu)化。質(zhì)子互變異構(gòu)體的具體實(shí)例是咪唑部分，其中質(zhì)子在兩個(gè)環(huán)氮之間遷移?；蟽r(jià)互變異構(gòu)體包括通過一些成鍵電子的重組的互變。一些中間體(和/或中間體混合物)的封閉與開放形式之間的平衡表明牽涉本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的醛糖的變旋過程。
本發(fā)明還涵蓋同位素標(biāo)記的本發(fā)明的化合物，它們與本申請(qǐng)中所述的那些化合物相同，只是一個(gè)或多個(gè)原子被原子量或原子數(shù)不同于通常實(shí)際發(fā)現(xiàn)的原子量或原子數(shù)的原子替代。可以結(jié)合到本發(fā)明化合物中的同位素的實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，例如分別為2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、123I、125I和36Cl。
本發(fā)明的一些同位素標(biāo)記的化合物(例如被3H和14C標(biāo)記的那些)可用于化合物和/或底物組織分布測(cè)定。氚化(即3H)和碳-14(即14C)同位素因其易于制備和可檢測(cè)性而成為特別優(yōu)選的。此外，用重同位素例如氘(即2H)取代可以因較大的代謝穩(wěn)定性而提供一些治療優(yōu)勢(shì)(例如體內(nèi)半衰期增加或劑量需求降低)，因此在一些情況中是優(yōu)選的。電子發(fā)射同位素例如15O、13N、11C和18F可用于正電子發(fā)射斷層攝影術(shù)(PET)研究，以便檢查底物占有率。本發(fā)明同位素標(biāo)記的化合物通?？梢酝ㄟ^下列與如下方案和/或?qū)嵤├兴_的那些類似的方法，通過用同位素標(biāo)記的試劑取代非同位素標(biāo)記的試劑來制備。
本發(fā)明的化合物可用于治療疾病、病癥和/或障礙；因此，本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是藥物組合物，其包含治療有效量的本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體。本發(fā)明的化合物(包括本申請(qǐng)中使用的組合物和方法)還可以用于制備用于本申請(qǐng)中所述的治療應(yīng)用的藥劑。
本發(fā)明的組合物可以是液體溶液(例如可注射和可輸注溶液)。優(yōu)選形式的取決于預(yù)期的施用模式和治療應(yīng)用。典型的組合物是可注射或可輸注溶液的形式，例如與用于人被動(dòng)免疫的那些類型的組合物。一種施用模式是胃腸外(例如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、真皮內(nèi)和胸骨內(nèi))或通過輸注技術(shù)，為無菌可注射液體或油混懸液的形式。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的，施用途徑和/或模式取決于期望的結(jié)果。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過靜脈內(nèi)輸注或注射施用抗體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過肌內(nèi)或皮下注射施用抗體。
典型地治療組合物在制備和儲(chǔ)存條件下為無菌的和穩(wěn)定的。
可以將組合物配制為溶液、微乳、分散液或脂質(zhì)體。可以通過將本發(fā)明的化合物以所需量與上述成分的一種或其組合(如果需要)一起摻入適合的稀釋劑，然后滅菌(例如過濾滅菌)。通常，通過將活性化合物摻入無菌媒介物制備分散液，所述無菌媒介物包含基礎(chǔ)分散介質(zhì)和來自如上所述的所需其它成分?？梢愿鶕?jù)已知技術(shù)，使用濕潤劑和助懸劑或其它可接受的試劑的那些適當(dāng)分散來配制這類混懸液。無菌可注射制劑還可以是在無毒性胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或混懸液，例如為在1,3-丁二醇中的溶液。在可以使用的可接受的媒介物和溶劑中有水、林格液和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌的固定油通常用作溶劑或助懸介質(zhì)。為了該目的，可以使用任意溫和的固定油，包括合成的甘油單酯或甘油二酯。此外，n-3多不飽和脂肪酸可以應(yīng)用于制備可注射制劑。
在用于制備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況中，優(yōu)選的制備方法是從上述其無菌過濾的溶液中真空干燥和冷凍干燥，得到活性成分+任意另外的期望的成分的粉末。例如，可以通過使用包衣層例如卵磷脂、通過維持分散液中所需的粒徑和通過使用表面活性劑維持溶液的適當(dāng)流動(dòng)性。
可注射的組合物的延長吸收可以通過在組合物中包括延遲吸收的物質(zhì)例如單硬脂酸鹽和明膠或通過將組合物配制成延長吸收形式進(jìn)行，例如儲(chǔ)庫藥劑、脂質(zhì)體、聚合物微球、聚合物凝膠和植入物。
本申請(qǐng)中所述的本發(fā)明化合物的其它施用方法包括皮膚貼劑，其將藥物直接釋放入受試者皮膚。這類貼劑可以包含在任選緩沖的液體溶液中的溶于和/或分散于粘合劑或分散于聚合物中的本發(fā)明的化合物。
可以將所述化合物施用1次，但也可以施用多次。例如，可以將所述化合物每日施用1次至每6個(gè)月或更長時(shí)間施用1次。施用可以基于如下方案，例如每日3次，每日2次，每日1次，每2天1次，每3天1次，每周1次，每2周1次，每個(gè)月1次，每2個(gè)月1次，每3個(gè)月1次，和每6個(gè)月1次。
還可以將所述化合物通過微型泵連續(xù)施用?？梢詫⑺龌衔锸┯迷诨疾〉纳眢w部位或距離患病的身體部位較遠(yuǎn)的部位?？梢詫⑺龌衔锸┯?次、至少2次或至少一定時(shí)間期限，直到所述疾病得到治療、緩解或治愈。通常只要疾病存在，就施用所述化合物。將所述化合物典型地作為如上文所述的藥物組合物的組成部分施用。
本發(fā)明的組合物可以包括治療有效量或預(yù)防有效量的本發(fā)明的化合物。在制備該組合物的過程中，例如，可以通過考慮所期望的劑量體積和施用模式、待治療的病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重性以及受試者的大小確定存在于組合物中的化合物的治療有效量。
用于將本發(fā)明藥物組合物施用于受試者的示例性的非限制性劑量范圍約為0.01mg/kg至約200mg/kg(以每千克(kg)受試者體重施用的以毫克(mg)計(jì)的式(A)的化合物表示)、約0.1mg/kg至約100mg/kg、約1.0mg/kg至約50mg/kg、約5.0mg/kg至約20mg/kg或約15mg/kg。就本發(fā)明的目的而言，人體受試者的平均體重約為70kg。還預(yù)期本申請(qǐng)中所述的中間至任意劑量的范圍例如約0.02mg/kg-199mg/kg為本發(fā)明的組成部分。例如，預(yù)期包括使用作為上限和/或下限的任意所述值的組合的數(shù)值范圍。
還可以調(diào)整劑量方案以便通過給受試者隨時(shí)間施用幾個(gè)分開的劑量以提供最佳的期望的響應(yīng)(例如治療或預(yù)防響應(yīng))，或可以如治療情況的緊急程度所示將劑量按比例降低或增加。尤其有利的是配制易于施用和劑量均勻的劑型單位形式的胃腸外組合物。
本申請(qǐng)中所用的劑量單位形式是指適合作為單元?jiǎng)┝坑糜诖委煹牟溉閯?dòng)物受試者的物理分散單元；每個(gè)單元包含經(jīng)計(jì)算預(yù)定量的活性化合物以便與所需的藥用載體一起結(jié)合產(chǎn)生期望的治療作用。本發(fā)明劑量單位形式的規(guī)格根據(jù)如下條件指定并且直接依賴于它們：(a)所述化合物或部分的獨(dú)特特征和所實(shí)現(xiàn)的特定治療或預(yù)防作用；以及(b)混合用于治療個(gè)體敏感性的這樣的抗體的領(lǐng)域中內(nèi)在的限制。
可以將本發(fā)明的液體組合物制備成單位劑型。例如，每支小瓶中的單位劑量可以包含1-1000毫升(mls)的不同濃度的式(A)的化合物。在其它實(shí)施方案中，每支小瓶中的單位劑量可以包含約1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，7ml，8ml，9ml，10ml，15ml，20ml，30ml，40ml，50ml或100ml的不同濃度的式(A)的化合物。如果必要，可以通過向每支小瓶中添加無菌稀釋劑將這些制劑調(diào)整至期望的濃度。還可以將本發(fā)明的液體組合物制備成無菌袋或容器形式的單位劑型，其適合于連接靜脈內(nèi)施用管線或?qū)Ч堋?/p>
通過將本發(fā)明的化合物與載體、稀釋劑或賦形劑混合制備另一種典型的制劑。適合的載體、稀釋劑和賦形劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的且包括這樣的物質(zhì)，例如碳水化合物、蠟、水溶性和/或水可溶脹的聚合物、親水性或疏水性物質(zhì)、明膠、油、溶劑、水等。所用的具體載體、稀釋劑或賦形劑取決于施用本發(fā)明化合物的方式和目的。溶劑通常基于本領(lǐng)域技術(shù)人員視為安全(GRAS)施用于哺乳動(dòng)物的溶劑進(jìn)行選擇。通常，安全的溶劑是無毒性的水性溶劑，例如水和其它溶于水或與水易溶混的無毒性溶劑。適合的水性溶劑包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG400、PEG300)等及其混合物。制劑還可以包括一種或多種緩沖劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、濕潤劑、潤滑劑、乳化劑、助懸劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、助流劑、加工助劑、著色劑、甜味劑、芳香劑、矯味劑和其它已知的提供藥物(即本發(fā)明的化合物或其藥物組合物)的優(yōu)美外觀或有助于制備藥物產(chǎn)品(即藥劑)的添加劑。
可以使用常規(guī)的溶解和混合方法制備制劑。例如，將散裝藥物物質(zhì)(即本發(fā)明的化合物或該化合物的穩(wěn)定形勢(shì)(例如與環(huán)糊精衍生物或其它已知配合劑的配合物))在上述賦形劑的一種或多種的存在下溶于適合的溶劑。將本發(fā)明的化合物典型地配制成藥物劑型，以便提供易于受控的藥物并且給患者提供美觀和易于操作的產(chǎn)品。
所述藥物組合物還包括式(I)的化合物的溶劑合物和水合物。術(shù)語“溶劑合物”是指由式(I)表示的化合物(包括其藥學(xué)上可接受的鹽)與一種或多種溶劑分子的分子配合物。這類溶劑分子是常用于制藥領(lǐng)域的那些，其對(duì)于接受者而言是無害的，例如水、乙醇、乙二醇等，術(shù)語“水合物”是指其中溶劑分子是水的配合物。溶劑合物和/水合物優(yōu)選以結(jié)晶形式存在。其它的溶劑可以用作制備更期望的溶劑合物的中間溶劑合物，例如甲醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、(S)-丙二醇、(R)-丙二醇、1,4-丁炔-二醇等。所述晶型還可以作為與其它無害小分子的配合物存在，例如L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-焦谷氨酸等，為共晶或共晶物質(zhì)的溶劑合物或水合物。溶劑合物、水合物和共晶化合物可以使用PCT公開號(hào)WO 08/002824(通過參考將該文獻(xiàn)并入本申請(qǐng))中所述的方法或本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的其它方法制備。
可以以各種形式包裝應(yīng)用的所述藥物組合物(或制劑)，這取決于施用所述藥物的方法。通常，用于分配的制品包括其中存放適合形式的藥物制劑的容器。這類容器是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的且包括例如瓶子(塑料和玻璃)這樣的材料、小藥囊、安瓿、塑料袋、金屬量筒等。所述容器還可以包括防干擾裝置以便防止不慎接觸包裝內(nèi)容物。此外，所述容器上貼有描述容器內(nèi)含物的標(biāo)簽。該標(biāo)簽還可以包括適當(dāng)?shù)木嬗谜Z。
通過下列實(shí)施例舉例說明本發(fā)明的實(shí)施方案。然而，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的實(shí)施方案不限于這些實(shí)施例的具體詳細(xì)描述，因?yàn)閷?duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言其變化形式是已知的或根據(jù)本申請(qǐng)公開的內(nèi)容是顯而易見的。
實(shí)施例
除非另有具體說明，否則原料購自商業(yè)來源，例如Aldrich Chemicals Co.(Milwaukee，WI)、Lancaster Synthesis，Inc.(Windham，NH)、Acros Organics(Fairlawn，NJ)、Maybridge Chemical Company，Ltd.(Cornwall，England)、Tyger Scientific(Princeton，NJ)、AstraZeneca Pharmaceuticals(London，England)和Accela ChemBio(San Diego，CA)。
通用實(shí)驗(yàn)方法
質(zhì)子的NMR光譜使用Varian UnityTM400(購自Varian Inc.，Palo Alto，CA)在室溫用400MHz下記錄。以相對(duì)于作為內(nèi)標(biāo)的殘留溶劑的百萬分之份數(shù)(δ)表示化學(xué)位移。如下表示峰形：s，單峰；d，雙峰；dd，雙聯(lián)雙峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；bs或br.s.，寬單峰；2s，兩個(gè)單峰；br.d.，寬雙峰。在一些情況中，僅給出有代表性的1H NMR峰。使用BakerTM硅膠(40微米；J.T.Baker，Phillipsburg，NJ)或硅膠50(EM SciencesTM，Gibbstown，NJ)在玻璃柱或Flash 40BiotageTM柱(ISC，Inc.，Shelton，CT)上進(jìn)行柱色譜法。使用BiotageTMSP純化系統(tǒng)或來自TeledyneTMIscoTM的進(jìn)行MPLC(中壓液相色譜法)；使用在低氮?dú)鈮毫ο碌腂iotageTMSNAP cartridge KPsil或Redisep Rf silica(來自TeledyneTMIscoTM)。除外另有注釋，否則全部反應(yīng)均在氮?dú)舛栊詺怏w氣氛中使用無水溶劑進(jìn)行。此外，除外另有注釋，否則全部反應(yīng)均在室溫(～23℃)下進(jìn)行。當(dāng)進(jìn)行TLC(薄層色譜法)時(shí)，將Rf定義為化合物運(yùn)行的距離與洗脫劑運(yùn)行的距離之比。Rt(保留時(shí)間)。恒流氫化反應(yīng)器：一種臺(tái)式獨(dú)立式氫化反應(yīng)器，其組合了連續(xù)流動(dòng)微量化學(xué)與內(nèi)生請(qǐng)求型氫產(chǎn)生和一次性的催化劑柱系統(tǒng)。
LC/MS TOF(ESI)：全部數(shù)據(jù)使用Agilent 1100 LC采集，其帶有MSD TOF(Agilent型號(hào)G1969A)質(zhì)譜檢測(cè)器，使用電噴霧電離源運(yùn)行。LC儀器包括具有上限壓力為400巴的二元泵(Agilent型號(hào)G1312A)，其連接至使用樣品遞送的外部要求的自動(dòng)采樣器(Agilent型號(hào)G1313A)。柱隔室(Agilent型號(hào)G1316A)連接至二極管陣列(Agilent型號(hào)G1315A)。使用Agilent MassHunter TOF/Q-TOF B.02(B11285)Patches 1.2.3進(jìn)行儀器獲取和數(shù)據(jù)處理。洗脫條件：柱：不使用柱。流量注射：注射體積：1.0微升；流速：0.5毫升/分鐘。運(yùn)行時(shí)間：1.0min；溶劑：甲醇(0.1％甲酸和0.05％甲酸銨)。TOF條件：電離源：正模式的電噴霧電離源；氣體溫度：325C；干燥氣體：6L/min；霧化器：50psg；VCap：3500V；質(zhì)量范圍110-100m/z；獲取速率：0.99光譜/s：獲取時(shí)間；1012.8ms/光譜。全部溶劑具有HPLC Chromasolv等級(jí)，來自Sigma Aldrich(St.Louis，Missouri)。大部分化學(xué)品和緩沖液購自Sigma Aldrich，純度全部為97％或更高。
方法C 1.5分鐘運(yùn)行LRMS(低分辨率質(zhì)譜法)：Waters Acqity HSS T3，2.1mmx50mm，C18，1.7μm；流動(dòng)相：A：0.1％甲酸的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.1％甲酸的乙腈溶液(v/v)；流速-1.25ml/分鐘；起始條件：A-95％：B-5％；保持在起始0.0-0.1分鐘；線性坡度電壓至A-5％：B-95％，歷時(shí)0.1-1.0分鐘；保持在A-5％：B-95％1.0-1.1分鐘；返回至起始條件1.1-1.5分鐘。
方法C 3.0分鐘運(yùn)行LRMS(低分辨率質(zhì)譜法)：Waters Acqity HSS T3，2.1mmx50mm，C18，1.7μm；流動(dòng)相：A：0.1％甲酸的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.1％甲酸的乙腈溶液(v/v)；流速-1.25ml/分鐘；起始條件：A-95％：B-5％；保持在起始0.0-0.1分鐘；線性坡度電壓至A-5％：B-95％，歷時(shí)0.1-2.6分鐘；保持在A-5％：B-95％2.6-2.95分鐘；返回至起始條件2.95-3.0分鐘。
方法
((2R,3S,4R,5R,6R)-5-疊氮基-6-甲氧基-3,4-雙((三甲基甲硅烷基)氧基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇(I-b)
將(2R,3R,4R,5R,6R)-5-疊氮基-2-(羥基甲基)-6-甲氧基四氫-2H-吡喃-3,4-二醇(I-a)(5g，23mmol)溶于無水吡啶(100mL)，加入三甲基甲硅烷基氯(17.5ml，139mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)，然后蒸發(fā)吡啶。將殘余物溶于乙酸乙酯/水。用乙酸乙酯將水相萃取1次，用水、飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到9.9g(98％收率)相應(yīng)的完全甲硅烷基化的化合物，為黃色油狀物。不經(jīng)任何進(jìn)一步純化將該物質(zhì)用于下一步。向冷卻至0攝氏度的上述完全甲硅烷基化的化合物(9.71g，22.3mmol)在無水甲醇(45mL)中的溶液中加入9.06mL碳酸鉀的甲醇溶液(0.032M)。將該反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時(shí)，然后通過添加17微升乙酸中和。蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶于乙酸乙酯。加入水，用乙酸乙酯萃取水相2次。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)(30％乙酸乙酯/己烷)，得到6.77g(84％)(I-b)，為油狀物。[α]D7(c 1，氯仿)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.14(s，9H)，0.20(s，9H)，1.80(br.s.，1H)，3.36-3.42(m，1H)，3.45(dd，J＝7.3，4.6Hz，1H)，3.54(dd，J＝10.0，8.0Hz，1H)，3.59(s，3H)，3.65(dd，J＝11.3，4.7Hz，1H)，3.77(d，J＝2.7Hz，1H)，3.87(dd，J＝11.2，7.3Hz，1H)，4.14(d，J＝8.0Hz，1H)；13C NMR(100MHz，氯仿-d)δppm 0.27(3C)，0.6(3C)，57.3，62.6，64.0，71.1，73.7，75.2，103.4；HRMS(ESI)計(jì)算值C13H29N3O5Si2(m/z)[M+Na]+386.1538，測(cè)定值386.1539.
(3R,4R,5R,6R)-5-疊氮基-2,2-雙(羥基甲基)-6-甲氧基四氫-2H-吡喃-3,4-二醇(I-c)
將(I-b)(7.73g，21.3mmol)溶于二氯甲烷(70mL)。加入二甲亞砜(10.6ml，150mmol)和三乙胺(9ml，60mmol)，將該反應(yīng)混合物冷卻至0攝氏度。加入三氧化硫吡啶復(fù)合物(10.2g，64mmol)，將該混合物在0攝氏度攪拌1小時(shí)，然后溫?zé)嶂潦覝?，歷時(shí)30分鐘。用飽和氯化鈉溶液使反應(yīng)停止，用二氯甲烷稀釋。用二氯甲烷將水相萃取3次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到相應(yīng)的醛。將該醛溶于無水乙醇(106mL)和低聚甲醛粉(40.3g，425mmol)，然后加入乙醇鈉的21％wt乙醇溶液(16ml，42.5mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)，然后蒸發(fā)乙醇。向粗混合物中加入甲醇，過濾固體，用甲醇充分沖洗。向包含期望的產(chǎn)物的濾液中加入硅膠，蒸發(fā)甲醇。高度真空干燥得到的干負(fù)載物，上柱。通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)(10％甲醇/二氯甲烷)，得到3.03g(I-c)，為無色油狀物(57％，歷時(shí)2步)。[α]D-20(c 1.25，甲醇)；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 3.46(dd，J＝10.2，8.1Hz，1H)，3.51(s，3H)，3.64-3.80(m，5H)，3.80-3.83(m，1H)，4.54(d，J＝8.0Hz，1H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 57.2，61.2，63.6，65.9，69.9，71.2，80.9，101.2；HRMS(ESI)計(jì)算值C8H15N3O6(m/z)[M+Na]+272.0853，測(cè)定值272.0856。
N-((3aR,4S,7S,8R,8aR)-4-(羥基甲基)-2,2-二甲基六氫-4,7-環(huán)氧[1,3]間二氧雜環(huán)戊烯[4,5-d]氧雜環(huán)庚三烯-8-基)乙酰胺(I-e-1)
向化合物(3)(230mg，0.986mmol)在6.6mL二甲基甲酰胺中的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(0.8ml，6mmol)，然后加入(+/-)-樟腦-10-磺酸(101mg，0.435mmol)。將該反應(yīng)混合物在70攝氏度攪拌24小時(shí)，冷卻至室溫，然后加入甲醇(1.2mL)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘，然后用三乙胺(56微升)中和。蒸發(fā)溶劑，將殘余物與甲苯一起共蒸發(fā)3次。通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)(15/1乙酸乙酯/甲醇)，得到化合物(I-e-1)，為白色固體(246mg，91％收率)。m.p.：164.7-166.0℃；[α]D147(c 1，甲醇)；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 1.34(s，3H)，1.48(s，3H)，1.98(s，3H)，3.77(d，J＝7.8Hz，1H)，3.83(d，J＝7.8Hz，1H)，3.86(d，J＝11.6Hz，1H)，3.90(d，J＝11.3Hz，1H)，3.91-3.94(m，1H)，4.14-4.19(m，1H)，4.29(d，J＝6.0Hz，1H)，5.23(d，J＝2.0Hz，1H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 22.7，26.9，28.5，56.8，61.9，70.2，76.1，76.6，83.0，102.6，112.5，173.6；HRMS(ESI)計(jì)算值C12H19NO6(m/z)[M+H]+274.1285，測(cè)定值274.1274。
(1S,2R,3R,4R,5S)-4-疊氮基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-2,3-二醇(1)
將四-醇(I-c)(3g，12mmol)溶于水(40mL)，加入濃硫酸(6.7mL)。將該反應(yīng)混合物在100攝氏度攪拌40小時(shí)，冷卻至室溫，然后通過添加濃氫氧化銨中和。蒸發(fā)水，向得到的混合物中加入甲醇。過濾固體，用甲醇充分沖洗。向包含期望的產(chǎn)物的濾液中加入硅膠，蒸發(fā)甲醇。高度真空干燥得到的干負(fù)載物，上柱。通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)(10％甲醇/二氯甲烷)，得到2.2g(84％)(1)，為無色油狀物。[α]D160(c 1.1，甲醇)；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 3.35(dd，J＝9.2，1.6Hz，1H)，3.70(d，J＝8.2Hz，1H)，3.76(d，J＝8.0Hz，1H)，3.80(d，J＝11.3Hz，1H)，3.83-3.89(m，2H)，3.90(d，J＝11.5Hz，1H)，5.32(d，J＝1.4Hz，1H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 61.9，66.1，69.5，69.6，71.0，85.3，102.7；HRMS(ESI)計(jì)算值C7H11N3O5(m/z)[M+Na]+240.0591，測(cè)定值240.0596。
(1R,2R,3R,4R,5S)-4-乙酰氨基-1-(乙酰氧基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-2,3-二基二乙酸酯(2)
在圓底燒瓶中，將化合物(1)(1.93g，8.9mmol)溶于乙醇(45mL)，用氮?dú)獯祾咴擉w系。加入Lindlar催化劑(1.89g，0.9mmol)，用氮?dú)馊缓笥脷錃獯祾咴擉w系。將該反應(yīng)混合物在室溫在氫氣氣氛中(使用氣囊)攪拌24小時(shí)。使用尼龍膜過濾鈀，用甲醇、然后用水充分沖洗。蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶于水，凍干。然后將得到的粗物質(zhì)溶于吡啶(40mL)，加入乙酐(9ml，100mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?8小時(shí)，蒸發(fā)吡啶。將殘余物溶于乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。用乙酸乙酯將水相萃取2次，然后用飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)(3％甲醇/二氯甲烷)，得到(2)(3.19g，定量)。[α]D75(c 1，氯仿)；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 1.95(s，3H)，1.95(s，3H)，2.04(s，3H)，2.15(s，3H)，3.75(d，J＝8.6Hz，1H)，4.06(d，J＝8.6Hz，1H)，4.13(d，J＝11.6Hz，1H)，4.20(d，J＝10.6Hz，1H)，4.46(d，J＝11.3Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.4，4.4Hz，1H)，5.35(d，J＝1.0Hz，1H)，5.38(d，J＝4.3Hz，1H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 20.6，20.7(2C)，22.6，53.3，63.0，68.9，69.1，70.3，82.6，103.0，171.8，171.9，172.1，173.8；HRMS(ESI)計(jì)算值C15H21NO9(m/z)[M+H]+360.1289，測(cè)定值360.1290。
N-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基)乙酰胺(3)
將化合物(2)(3.19g，8.88mmol)溶于四氫呋喃(50mL)，加入甲醇鈉的0.5M甲醇溶液(100ml，50mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)，然后通過添加H+AmberlyteTM IR-120樹脂中和。過濾出樹脂，蒸發(fā)溶劑，得到1.71g(3)，為白色固體(83％)。m.p.：175.7-176.1℃；[α]D164(c 1，甲醇)；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 1.99(s，3H)，3.68(d，J＝8.1Hz，1H)，3.70-3.73(m，1H)，3.75(d，J＝7.8Hz，1H)，3.81(d，J＝11.3Hz，1H)，3.87(d，J＝4.3Hz，1H)，3.92(d，J＝11.3Hz，1H)，3.95(dd，J＝9.9，1.1Hz，1H)，5.22(d，J＝1.3Hz，1H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 22.7，56.4，62.1，69.2，69.3，70.6，85.1，102.8，174.1；HRMS(ESI)計(jì)算值C9H15NO6(m/z)[M+H]+234.0972，測(cè)定值234.0974。
(4-((2-((1-(1-((1S,2R,3R,4R,5S)-4-乙酰氨基-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基)-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁基)氨基甲酸芐酯(4)、(4-((1,3-雙((1-(1-((1S,2R,3R,4R,5S)-4-乙酰氨基-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基)-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)丙-2-基)氨基)-4-氧代丁基)氨基甲酸芐酯(5)、(4-((1,3-雙((1-(1-((1S,2R,3R,4R,5S)-4-乙酰氨基-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基)-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-2-(((1-(1-((1S,2R,3R,4R,5S)-4-乙酰氨基-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基)-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)丙-2-基)氨基)-4-氧代丁基)氨基甲酸芐酯(6)
在微波小瓶中，將化合物(I-e-1)(50mg，0.18mmol)溶于1mL二氯甲烷。加入12.5M氫氧化鈉水溶液(0.5mL)，然后加入15-冠-5-醚(5微升，0.02mmol)和1-疊氮基-2-(2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷(J.Am.Chem.Soc.132，1523(2010)中所述)(301mg，0.915mmol)。將該反應(yīng)混合物在55℃劇烈攪拌24小時(shí)。取出有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)(5％甲醇/乙酸乙酯)，得到化合物(I-e-2)，為油狀物(52mg，60％收率)。[α]D74(c 1，氯仿)；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 1.34(s，3H)，1.49(s，3H)，1.98(s，3H)，3.37(t，J＝4.9Hz，2H)，3.62-3.71(m，14H)，3.75-3.80(m，2H)，3.86(d，J＝8.1Hz，1H)3.90-3.97(m，2H)，4.12-4.19(m，1H)，4.31(d，J＝5.8Hz，1H)，5.23(d，J＝2.0Hz，1H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 22.7，26.9，28.5，51.9，56.7，70.9，71.1，71.3，71.6，71.7，71.8，71.81，71.82，72.7，76.1，76.5，82.1，102.4，112.4，173.6；HRMS(ESI)計(jì)算值C20H34N4O9(m/z)[M+H]+475.2399，測(cè)定值475.2386。
中間體(I-f-1)是已知的且描述在WO06120545中
可以如下合成中間體(I-f-2)：在室溫向Boc-絲氨醇(1000mg，5.1mmol)在四氫呋喃(21mL)中的溶液中加入碘化四丁基銨(287mg，0.76mmol)、碘化鈉(153mg，1.02mmol)和炔丙基溴(1.8ml，16mmol，80％的甲苯溶液)。逐步加入氫氧化鉀(569mg，10.1mmol)，歷時(shí)30分鐘，然后將該混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。用乙酸乙酯和水稀釋該反應(yīng)混合物。用乙酸乙酯將水相萃取1次。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，過濾，濃縮。通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)(30％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物(I-f-2)，為油狀物(530mg，39％收率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d/TMS)δppm 1.44(s，9H)，2.44(t，J＝2.4Hz，2H)，3.53-3.67(m，4H)，3.92(br.s.，1H)，4.16(d，J＝2.5Hz，4H)，4.90(br.s.，1H)；13C NMR(100MHz，氯仿-d/TMS)δppm 28.4(3C)，49.5，58.5(2C)，68.6(2C)，74.6(2C)，77.2，79.5(2C)，155.4；HRMS(ESI)計(jì)算值C14H21NO4(m/z)[M+H]+268.1543，測(cè)定值268.1536。
中間體(I-f-3)是已知的且描述在R.Roy等人J.Org.Chem.73，5602(2008)中。
將化合物(I-f-1)、(I-f-2)或(I-f-3)(1當(dāng)量)溶于二氯甲烷(0.2M)，加入氯化氫4M的二烷溶液(5-10當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?-3小時(shí)，然后蒸發(fā)溶劑。將殘余物高度真空干燥1小時(shí)。將得到的中間體不經(jīng)任何進(jìn)一步純化用于下一步。將上述得到的中間體(1當(dāng)量)和4-(((芐氧基)羰基)氨基)丁酸(1當(dāng)量)溶于二烷和二甲基甲酰胺(0.09M，3：1)的混合物。加入(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷磷鎓六氟磷酸鹽(1.2當(dāng)量)，然后加入N,N-二異丙基乙胺(5當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。加入二氯甲烷和水，用二氯甲烷萃取水相2次。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，過濾，濃縮。將粗物質(zhì)溶于少量甲苯，上柱，通過硅膠急驟色譜法純化。
中間體(I-g-1)：純化條件：100％乙酸乙酯，定量，油狀物。1H NMR(400MHz，氯仿-d/TMS)δppm 1.80-1.91(m，2H)，2.24(t，J＝7.1Hz，2H)，2.46(t，J＝2.3Hz，1H)，3.22-3.31(m，2H)，3.43-3.51(m，2H)，3.56-3.64(m，2H)，4.16(d，J＝2.3Hz，2H)，5.07(br.s.，1H)，5.10(s，2H)，6.09(br.s.，1H)，7.28-7.42(m，5H)；13C NMR(100MHz，氯仿-d/TMS)δppm 25.9，33.7，39.1，40.5，58.3，66.7，68.7，74.8，79.4，128.1，128.5(4C)，136.6，156.7，172.5；HRMS(ESI)計(jì)算值C17H22N2O4(m/z)[M+H]+319.1652，測(cè)定值319.1646。
中間體(I-g-2)：純化條件：70％乙酸乙酯/己烷，65mg，油狀物(76％收率)，油狀物。1H NMR(400MHz，氯仿-d/TMS)δppm 1.79-1.91(m，2H)，2.24(t，J＝7.1Hz，2H)，2.44(t，J＝2.4Hz，2H)，3.20-3.29(m，2H)，3.54-3.69(m，4H)，4.16(d，J＝1.5Hz，4H)，4.22-4.33(m，1H)，5.10(br.s，3H)，6.04(d，J＝7.8Hz，1H)，7.28-7.42(m，5H)；13C NMR(100MHz，氯仿-d/TMS)δppm 25.8，33.7，40.4，48.2，58.4(2C)，66.6，68.3(2C)，74.7(2C)，79.4(2C)，128.1，128.5(4C)，136.6，156.6，172.2；HRMS(ESI)計(jì)算值C21H26N2O5(m/z)[M+H]+387.1914，測(cè)定值387.1904。
中間體(I-g-3)：純化條件：70％乙酸乙酯/己烷，42mg，油狀物(60％收率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.76-1.88(m，2H)，2.21(t，J＝7.1Hz，2H)，2.44(t，J＝2.3Hz，3H)，3.18-3.30(m，2H)，3.84(s，6H)，4.14(d，J＝2.3Hz，6H)，5.10(s，2H)，5.12(br.s.，1H)，5.89(br.s.，1H)，7.28-7.40(m，5H)；13C NMR(100MHz，氯仿-d/TMS)δppm25.7，34.3，40.3，58.6(3C)，59.2，66.6，68.5(3C)，74.6(3C)，79.5(3C)，128.1，128.5(4C)，136.6，156.6，172.6；HRMS(ESI)計(jì)算值C25H30N2O6(m/z)[M+H]+455.2177，測(cè)定值455.2167。
中間體(I-h-1)：
將三(3-羥基丙基三唑基甲基)胺(THPTA；參見M.G.Finn等人Angewandte Chemie International Edition 48，9879(2009))(2mg，0.005mmol)和硫酸銅(1mg，0.004mmol)溶于水(50微升)，然后加到(I-e-2)(42mg，0.089mmol)和炔(I-g-1)(40mg，0.125mmol)在甲醇(0.9mL)中的溶液中。然后加入溶于水(30微升)的抗壞血酸鈉(1.8mg，0.009mmol)，將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)(5％-10％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到所期望的化合物(I-h-1)，為油狀物(54mg，76％收率)；[α]D48.2(c 0.54，甲醇)；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 1.33(s，3H)，1.48(s，3H)，1.70-1.83(m，2H)，1.98(s，3H)，2.21(t，J＝7.4Hz，2H)，3.13(t，J＝6.9Hz，2H)，3.37(t，J＝5.4Hz，2H)，3.51-3.70(m，14H)，3.71-3.95(m，7H)，4.15(t，J＝6.5Hz，1H)，4.29(d，J＝5.8Hz，1H)，4.56(t，J＝5.0Hz，2H)，4.60(s，2H)，5.06(s，2H)，5.22(d，J＝1.8Hz，1H)，7.25-7.38(m，5H)，8.01(s，1H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 22.7，27.0，27.4，28.5，34.4，40.5，41.4，51.6，56.7，62.4，64.9，67.5，70.0，70.5，70.8，71.1，71.5，71.6，71.65，71.7，71.73，72.6，73.8，76.2，76.5，82.1，102.4，112.4，126.1，129.0，129.1，129.6，138.6，146.1，159.0，173.6，175.7；HRMS(ESI)計(jì)算值C37H56N6O13(m/z)[M+H]+793.3978，測(cè)定值793.3959。
中間體(I-h-2)
將THPTA(22mg，0.051mmol)和硫酸銅(2.5mg，0.01mmol)溶于水(70微升)，然后加到(I-e-2)(48mg，0.1mmol)和炔(I-g-2)(20mg，0.051mmol)在甲醇(1mL)中的溶液中。然后加入溶于水(30微升)的抗壞血酸鈉(4mg，0.02mmol)，將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶于二氯甲烷和飽和氯化銨水溶液。用二氯甲烷將水相萃取3次。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，過濾，濃縮。將粗物質(zhì)不經(jīng)任何進(jìn)一步純化用于下一步。
中間體(I-h-3)
將THPTA(34mg，0.079mmol)和硫酸銅(4mg，0.016mmol)溶于水(200微升)，然后加到(I-e-2)(50mg，0.1mmol)和炔(I-g-3)(24mg，0.053mmol)在甲醇(1mL)中的溶液中。然后加入溶于水(30微升)的抗壞血酸鈉(6.5mg，0.032mmol)，將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶于二氯甲烷和飽和氯化銨水溶液。用二氯甲烷將水相萃取3次。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，過濾，濃縮。將粗物質(zhì)不經(jīng)任何進(jìn)一步純化用于下一步。
用于丙酮化合物除去的通用方法：
將化合物(I-h-1)、(I-h-2)或(I-h-3)(0.030-0.068mmol)溶于乙酸、甲醇和水的混合物(分別為1.6-1.8ml，0.5ml，0.5mL)，在70℃攪拌24小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將殘余物與甲苯一起共蒸發(fā)2次。通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)。
實(shí)施例(4)：
純化條件：二氯甲烷中的10％甲醇，43.3mg，油狀物(85％收率)。[α]D45(c 1，甲醇)；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 1.72-1.83(m，2H)，1.99(s，3H)，2.22(t，J＝7.4Hz，2H)，3.13(t，J＝6.8Hz，2H)，3.37(t，J＝5.4Hz，2H)，3.52-3.79(m，20H)，3.85-4.00(m，3H)，4.57(t，J＝5.0Hz，2H)，4.61(s，2H)，5.07(s，2H)，5.21(s，1H)，7.24-7.41(m，5H)，8.02(s，1H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm22.8，27.4，34.4，40.4，41.4，51.6，56.4，64.9，67.5，69.0，70.0，70.1，70.4，70.5，71.4，71.5(2C)，71.6，71.65，71.7，72.5，84.3，102.6，126.0，129.0(2C)，129.1，129.6(2C)，138.6，145.8，159.0，174.0，175.8；HRMS(ESI)計(jì)算值C34H52N6O13(m/z)[M+H]+753.3665，測(cè)定值753.3679。
實(shí)施例(5)：
純化條件：二氯甲烷中的20％甲醇，25mg，油狀物(20％收率，歷時(shí)2步)。[α]D56(c 1.25，甲醇)；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm1.72-1.81(m，2H)，1.99(s，6H)，2.23(t，J＝7.5Hz，2H)，3.13(t，J＝6.9Hz，2H)，3.50-3.80(m，36H)，3.85-3.91(m，6H)，3.92-4.00(m，4H)，4.13-4.25(m，1H)，4.52-4.63(m，8H)，5.07(s，2H)，5.21(d，J＝1.3Hz，2H)，7.23-7.40(m，5H)，8.01(s，2H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 22.6(2C)，27.2，34.2，41.2，50.2，51.4(2C)，56.2(2C)，65.0(2C)，67.3，68.8(2C)，69.9(2C)，70.0(2C)，70.2(2C)，70.3(2C)，71.2(2C)，71.3(4C)，71.4(2C)，71.5(2C)，71.52(2C)，72.3(2C)，84.1(2C)，102.4(2C)，125.8(2C)，128.8(2C)，128.9，129.4(2C)，138.4，145.6(2C)，158.8，173.8(2C)，175.3；HRMS(ESI)計(jì)算值C55H86N10O23(m/z)[M+H]+1255.5940，測(cè)定值1255.5925。
實(shí)施例(6)：
純化條件：二氯甲烷中的20％甲醇，31mg，油狀物(18％收率，歷時(shí)2步)。[α]D53(c 1，甲醇)；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 1.65-1.78(m，2H)，1.98(s，9H)，2.19(t，J＝7.3Hz，2H)，3.11(t，J＝6.8Hz，2H)，3.51-3.80(m，54H)，3.86-3.91(m，9H)，3.91-3.99(m，6H)，4.51-4.63(m，12H)，5.06(s，2H)，5.21(d，J＝1.3Hz，3H)，7.24-7.40(m，5H)，7.98(s，3H)；HRMS(ESI)計(jì)算值C76H120N14O33(m/z)[M+2H]+/2 879.4144，測(cè)定值879.4148。
N-(2-((1-(1-((1S,2R,3R,4R,5S)-4-乙酰氨基-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基)-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)乙基)-4-氨基丁酰胺(7)，4-氨基-N-{1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]丙-2-基}丁酰胺(8)，4-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)丁酰胺(9)
在圓底燒瓶中，將化合物(4)、(5)或(6)(1當(dāng)量)溶于甲醇(0.01M)，用氮?dú)獯祾咴摕?。加入披鈀碳(10％、0.7當(dāng)量)，用氮?dú)馊缓笥脷錃獯祾咴摕?。將該反?yīng)混合物在氫氣氣氛中(使用充滿氫氣的氣囊)室溫?cái)嚢?2-24小時(shí)。使用0.45微米PTFE Acrodisc Cr過濾出鈀，用甲醇沖洗1次。蒸發(fā)溶劑。
實(shí)施例(7)：
25.5mg，油狀物，76％收率；[α]D57.6(c 1.25，甲醇)；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 1.70-1.81(m，2H)，1.99(s，3H)，2.24(t，J＝7.4Hz，2H)，2.67(t，J＝6.8Hz，2H)，3.36-3.41(m，2H)，3.51-3.80(m，19H)，3.84-4.01(m，4H)，4.59(t，J＝5.2Hz，2H)，4.61(s，2H)，5.21(s，1H)，8.03(s，1H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 22.8，29.6，34.5，40.4，42.0，51.6，56.4，64.9，69.0，70.0，70.1，70.5，70.6，71.4，71.5(2C)，71.6，71.66，71.7，72.5，84.3，102.6，126.0，145.8，174.1，175.9；HRMS(ESI)計(jì)算值C26H46N6O11(m/z)[M+H]+619.3297，測(cè)定值619.3278。
實(shí)施例(8)：
將粗物質(zhì)溶于0.5mL甲醇/水(50：50)，注射在HPLC柱上。使用Waters XBridge BEH C18 OBD Prep柱，5微米，19mm X 100mm(Waters，部件編號(hào)186002978)進(jìn)行制備型高效液相色譜法(HPLC)，用17毫升/分鐘流速的線性坡度洗脫，溶劑梯度：乙腈/水/三氟乙酸(2：98：0.1)～(22：78：0.1)，40分鐘。通過分析型LCMS分析采集的級(jí)分，收集鑒定為具有足夠純度的25.7-27.3分鐘時(shí)的級(jí)分，且蒸發(fā)，得到10.7mg(8)，為油狀物，49％收率；[α]D56(c 1，甲醇)；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δppm 1.86-1.95(m，2H)，1.99(s，6H)，2.37(t，J＝7.0Hz，2H)，2.96(t，J＝7.4Hz，2H)，3.50-3.80(m，36H)，3.84-4.00(m，10H)，4.17-4.26(m，1H)，4.57-4.62(m，8H)，5.21(s，2H)，8.03(s，2H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 22.8(2C)，29.2，34.5，41.8，50.4，51.6(2C)，56.4(2C)，65.1(2C)，69.0(2C)，70.1(2C)，70.3(2C)，70.5(2C)，70.6(2C)，71.4(2C)，71.5(4C)，71.6(2C)，7.67，(2C)，71.7(2C)，72.5(2C)，84.3(2C)，102.6(2C)，126.1(2C)，145.8(2C)，174.1(2C)，175.6；HRMS(ESI)計(jì)算值C47H80N10O21(m/z)[M+H]+1121.5572，測(cè)定值1121.5558。
實(shí)施例(9)：
將粗物質(zhì)溶于0.5mL甲醇/水(50：50)，注射在HPLC柱上。使用Waters XBridge BEH C18 OBD Prep柱，5微米，19mm X 100mm(Waters，部件編號(hào)186002978)進(jìn)行制備型高效液相色譜法(HPLC)，用17毫升/分鐘流速的線性坡度洗脫，溶劑梯度：乙腈/水/三氟乙酸(2：98：0.1)～(22：78：0.1)，40分鐘。通過分析型LCMS分析采集的級(jí)分，收集鑒定為具有足夠純度的30.3-32.0分鐘時(shí)的級(jí)分，且蒸發(fā)，得到15mg(9)，為油狀物，63％收率；[α]D59.1(c 1.1，甲醇)；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δppm 1.84-1.92(m，2H)，2.00(s，9H)，2.31-2.38(m，2H)，2.97(t，J＝7.3Hz，2H)，3.54-3.80(m，54H)，3.86-3.93(m，9H)，3.93-4.00(m，6H)，4.57(s，6H)，4.60(t，J＝4.9Hz，6H)，5.22(s，3H)，8.02(s，3H)；HRMS(ESI)計(jì)算值C68H114N14O31(m/z)[M+H]+1623.7847，測(cè)定值1623.7803。
實(shí)施例(10)、(11)和(12)；Alexa647綴合物
Alexa647羧酸琥珀酰亞胺基酯來自Invitrogen(目錄號(hào)A-20106)。Invitrogen報(bào)道分子量為～1250?；趤碜訪CMS的Alexa Fluor 647羧酸琥珀酰亞胺基酯的955.07的[M+H]+測(cè)定值估計(jì)Alexa647標(biāo)記的化合物分子量。λmax 650的消光系數(shù)是～270000±20000，其因批次的不同而改變。
用于HPLC純化的通用方法：
使用Waters XBridge BEH C18 OBD Prep柱，5微米，19mm X 100mm(Waters，部件編號(hào)186002978)進(jìn)行制備型高效液相色譜法(HPLC)，用17毫升/分鐘流速的線性坡度洗脫，溶劑梯度：乙腈/水/三氟乙酸(2：98：0.1)～(22：78：0.1)，40分鐘。通過分析型LCMS分析采集的級(jí)分，收集鑒定為具有足夠純度的級(jí)分，且將其蒸發(fā)。
實(shí)施例(10)：
向化合物(7)(3.0mg，4.8微摩爾)在二甲亞砜(200微升)中的溶液中加入Alexa647羧酸琥珀酰亞胺基酯(5.0mg，4微摩爾)和N,N-二異丙基乙胺(10微升，10當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物在室溫振搖1小時(shí)，然后直接通過制備型HPLC純化。通過分析型LCMS分析采集的級(jí)分，收集鑒定為具有足夠純度的級(jí)分(Rt＝22.7-24分鐘)。得到3.2mg(10)(55％收率)。等分該溶液，用真空離心機(jī)蒸發(fā)，將產(chǎn)物儲(chǔ)存在4℃。MS(ESI)計(jì)算值(m/z)[M+H]+～1456，測(cè)定值1456.82。
實(shí)施例(11)：
向化合物(8)(6.0mg，5微摩爾)在二甲亞砜(200微升)中的溶液中加入Alexa647羧酸琥珀酰亞胺基酯(5.0mg，4微摩爾)和N,N-二異丙基乙胺(10微升，10當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物在室溫振搖1小時(shí)，然后直接通過制備型HPLC純化。通過分析型LCMS分析采集的級(jí)分，收集鑒定為具有足夠純度的級(jí)分(Rt＝25.3-26.7分鐘)。得到4.8mg(11)(62％收率)。等分該溶液，用真空離心機(jī)蒸發(fā)，將產(chǎn)物儲(chǔ)存在4℃。MS(ESI)計(jì)算值(m/z)[M+H]+～1958，測(cè)定值1958.74
實(shí)施例(12)：
向化合物(9)(9.8mg，6微摩爾)在二甲亞砜(200微升)中的溶液中加入Alexa647羧酸琥珀酰亞胺基酯(5.0mg，4.8微摩爾)和N,N-二異丙基乙胺(10微升，10當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物在室溫振搖1小時(shí)，然后直接通過制備型HPLC純化。通過分析型LCMS分析采集的級(jí)分，收集鑒定為具有足夠純度的級(jí)分(Rt＝27.7分鐘)。得到5.2mg(12)(52％收率)。等分該溶液，用真空離心機(jī)蒸發(fā)，將產(chǎn)物儲(chǔ)存在4℃。MS(ESI)計(jì)算值(m/z)[M+H]+～2460，測(cè)定值2461.18。
4-氨基-N-[1,31-雙(1-{[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]甲基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2,6,10,14,18,22,26,30-八氧雜三十一烷-16-基]丁酰胺(13)和4-氨基-N-{1,31-雙(1-{[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]甲基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)-16-[15-(1-{[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]甲基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2,6,10,14-四氧雜十五烷-1-基]-2,6,10,14,18,22,26,30-八氧雜三十一烷-16-基}丁酰胺(14)
將化合物(I-e-1)(247mg，0.904mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中并添加吡啶(1.46ml，18.1mmol)。在-20℃冷卻該反應(yīng)混合物，滴加在二氯甲烷(0.6mL)中的三氟甲磺酸酐(0.23ml，1.4mmol)，攪拌該混合物，同時(shí)溫?zé)嶂?攝氏度，歷時(shí)50分鐘。用二氯甲烷稀釋該反應(yīng)混合物，用1M氯化氫水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌。用硫酸鎂干燥有機(jī)相，過濾，濃縮。將粗物質(zhì)不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步。將疊氮化鈉(270mg，4.1mmol)加到上述三氟甲磺酸酯在二甲基甲酰胺(4.1mL)中的溶液中，將該反應(yīng)混合物在60℃攪拌16小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)(15/1乙酸乙酯/甲醇)，得到所期望的化合物(I-e-3)，為黃色油狀物(227mg，92％收率)。[α]D127(c1，甲醇)；1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 1.34(s，3H)，1.53(s，3H)，2.00(s，3H)，3.67(d，J＝12.7Hz，1H)，3.72(d，J＝7.8Hz，1H)，3.74(d，J＝7.8Hz，1H)，3.75(d，J＝12.7Hz，1H)，4.02-4.10(m，2H)，4.11(d，J＝5.9Hz，1H)，5.35(d，J＝2.4Hz，1H)，5.95(d，J＝8.8Hz，1H)；13C NMR(125MHz，氯仿-d)δppm 23.2，26.2，27.7，51.0，54.2，69.3，74.8，76.1，80.6，101.2，111.6，170.1；HRMS(ESI)計(jì)算值C12H18N4O5(m/z)[M+H]+299.1350，測(cè)定值299.1344。
化合物(I-j-2)和(I-j-3)可以分別以炔丙基溴、(I-i-2)(可商購自Dalton Pharma；DC-001760)和(I-i-3)(B.Ernst等人在Bioorganic &Medicinal Chemistry，16，5216(2008)中所述)作為原料，按照用于形成化合物(I-f-2)所述的相同的方法制備。
化合物(I-j-2)：純化條件：20％乙酸乙酯/己烷，85mg，油狀物(8％收率)；1H NMR(400MHz，氯仿-d/TMS)δppm 1.77-1.90(m，14H)，2.23(t，J＝7.1Hz，2H)，2.43(t，J＝2.3Hz，2H)，3.20-3.29(m，2H)，3.39-3.55(m，24H)，3.60(t，J＝6.3Hz，4H)，4.13(d，J＝2.5Hz，4H)，4.15-4.24(m，1H)，5.09(s，2H)，5.16(br.s.，1H)，6.05(d，J＝8.1Hz，1H)，7.28-7.41(m，5H)；13C NMR(100MHz，氯仿-d/TMS)δppm25.8，29.8(2C)，29.9(2C)，30.0(2C)，33.7，40.4，48.5，58.1(2C)，66.6，67.2(2C)，67.6(2C)，67.7(2C)，67.8(2C)，67.9(2C)，68.3(2C)，69.0(2C)，74.2(2C)，79.9(2C)，128.1，128.5(4C)，136.6，156.6，172.1；HRMS(ESI)計(jì)算值C39H62N2O11(m/z)[M+H]+735.4426，測(cè)定值735.4424.
化合物(I-j-3)：純化條件：85％乙酸乙酯/己烷，32.6mg，油狀物，(71％收率)；1H NMR(400MHz，氯仿-d/TMS)δppm 1.75-1.90(m，20H)，2.18(t，J＝6.9Hz，2H)，2.43(t，J＝2.4Hz，3H)，3.23(q，J＝6.3Hz，2H)，3.40-3.53(m，30H)，3.59(t，J＝6.3Hz，6H)，3.67(s，6H)，4.13(d，J＝2.3Hz，6H)，5.08(s，2H)，5.27(br.s.，1H)，5.85(s，1H)，7.27-7.40(m，5H)；13C NMR(100MHz，氯仿-d/TMS)δppm 25.7，29.7(3C)，29.9(3C)，30.0(3C)，34.4，40.4，58.1(3C)，59.8，66.5，67.1(3C)，67.6(3C)，67.7(3C)，67.8(3C)，67.82(3C)，68.4(3C)，69.1(3C)，74.2(3C)，79.9(3C)，128.0，128.4(4C)，136.6，156.6，172.3；HRMS(ESI)計(jì)算值C52H84N2O15(m/z)[M+H]+977.5944，測(cè)定值977.5943。
化合物(I-k-2)：
將THPTA(22.6mg，0.052mmol)和硫酸銅(2.5mg，0.01mmol)溶于水(200微升)，然后加到(I-e-3)(45mg，0.152mmol)和(I-j-2)(51mg，0.069mmol)在甲醇(1.1mL)中的溶液中。然后加入溶于水(100微升)的抗壞血酸鈉(4.2mg，0.021mmol)，將該反應(yīng)混合物在50攝氏度攪拌24小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)(5％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到所期望的化合物(I-k-2)，為油狀物(72mg，78％收率)。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 1.34(s，6H)，1.52(s，6H)，1.73-1.86(m，12H)，1.97(s，6H)，2.24(t，J＝7.4Hz，2H)，3.15(t，J＝6.8Hz，2H)，3.43-3.54(m，22H)，3.58(t，J＝6.3Hz，4H)，3.86(d，J＝8.1Hz，2H)，3.97(dd，J＝6.2，1.9Hz，2H)，4.11-4.23(m，5H)，4.58(s，4H)，4.78(s，6H)，4.91(d，J＝14.1Hz，2H)，4.98(d，J＝14.4Hz，2H)，5.07(s，2H)，5.24(d，J＝1.8Hz，2H)，7.25-7.40(m，5H)，7.99(s，2H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 22.7(2C)，26.8(2C)，27.5，28.4(2C)，31.1(4C)，31.2(2C)，34.5，41.4，50.6，51.0(2C)，56.3(2C)，64.8(2C)，67.5(2C)，68.7(2C)，68.8(2C)，68.9(3C)，69.0(2C)，69.4(2C)，69.7(2C)，70.9(2C)，76.3(2C)，76.6(2C)，81.5(2C)，102.5(2C)，112.8(2C)，127.2(2C)，129.0(2C)，129.1，129.6(2C)，138.6，146.3(2C)，159.0，173.5(2C)，175.5；HRMS(ESI)計(jì)算值C63H98N10O21(m/z)[M+H]+1331.6981，測(cè)定值1331.6971.
化合物(I-k-3)：
將THPTA(16mg，0.037mmol)和硫酸銅(1.7mg，0.007mmol)溶于水(100微升)，然后加到(I-e-3)(32.5mg，0.109mmol)和(I-j-3)(32mg，0.033mmol)在甲醇(1.1mL)中的溶液中。然后加入溶于水(100微升)的抗壞血酸鈉(3mg，0.015mmol)，將該反應(yīng)混合物在50攝氏度攪拌24小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)(10％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到所期望的化合物(I-k-3)，為油狀物(43.5mg，70％收率)。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 1.33(s，9H)，1.52(s，9H)，1.71-1.87(m，18H)，1.97(s，9H)，2.20(t，J＝7.3Hz，2H)，3.15(t，J＝6.8Hz，2H)，3.43-3.52(m，28H)，3.58(t，J＝6.3Hz，6H)，3.67(s，6H)，3.86(d，J＝8.3Hz，3H)，3.97(dd，J＝6.0，1.8Hz，3H)，4.14-4.22(m，5H)，4.58(s，6H)，4.78(s，8H)，4.91(d，J＝14.6Hz，3H)，4.97(d，J＝14.6Hz，3H)，5.07(s，2H)，5.24(d，J＝2.0Hz，3H)，7.26-7.38(m，5H)，7.98(s，3H)；13C NMR(100MHz，甲醇-d4)δppm 22.7(3C)，26.9(3C)，27.7，28.4(3C)，31.1(3C)，31.2(3C)，31.3(3C)，35.2，41.3，51.0(3C)，56.3(3C)，61.8，64.9(3C)，67.5(3C)，68.7(3C)，68.8(3C)，68.9(3C)，69.0(4C)，69.6(3C)，69.7(3C)，70.0(3C)，76.3(3C)，76.6(3C)，81.5(3C)，102.5(3C)，112.8(3C)，127.2(3C)，129.0(2C)，129.1，129.7(2C)，138.6，146.4(3C)，159.0，173.5(3C)，175.6；HRMS(ESI)計(jì)算值C88H138N14O30(m/z)[M+H]+1871.9776，測(cè)定值1871.9713。
將化合物(I-k-2)或(I-k-3)(0.068mmol)溶于乙酸、甲醇和水(分別為2.5-3ml，0.6-0.9ml，0.6-0.9mL)的混合物，在70攝氏度攪拌24小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將殘余物與甲苯一起共蒸發(fā)2次。將得到的粗物質(zhì)不經(jīng)任何純化用于下一步。
在圓底燒瓶中，將化合物(I-l-2)或(I-l-3)(1當(dāng)量)溶于甲醇(0.01M)，用氮?dú)獯祾邿?。加入披鈀碳(10％、0.7當(dāng)量)，用氮?dú)馊缓笥脷錃獯祾邿俊⒃摲磻?yīng)混合物在室溫在氫氣氣氛中(使用充滿氫氣的氣囊)攪拌24小時(shí)。使用0.45微米PTFE Acrodisc Cr過濾出鈀，用甲醇沖洗1次。蒸發(fā)溶劑。
實(shí)施例(13)：
將粗物質(zhì)溶于0.5mL甲醇/水(50：50)，注射在HPLC柱上。使用Waters XBridge BEH C18 OBD Prep柱，5微米，19mm X 100mm(Waters，部件號(hào)186002978)進(jìn)行制備型高效液相色譜法(HPLC)，用17毫升/分鐘流速線性坡度洗脫。溶劑梯度：乙腈/水/三氟乙酸(2：98：0.1)-(22：58：0.1)，40分鐘。通過分析型LCMS分析采集的級(jí)分，并且收集鑒定為具有足夠純度的34.7-35.6分鐘時(shí)的級(jí)分，且蒸發(fā)，得到12.8mg(13)，為油狀物(17％收率，歷時(shí)2步)；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δppm 1.73-1.87(m，12H)，1.88-1.96(m，2H)，1.98(s，6H)，2.39(t，J＝7.0Hz，2H)，2.98(t，J＝7.4Hz，2H)，3.42(d，J＝8.5Hz，2H)，3.45-3.55(m，24H)，3.59(t，J＝6.3Hz，4H)，3.71-3.75(m，4H)，3.77(d，J＝8.3Hz，2H)，3.96-4.02(m，2H)，4.13-4.20(m，1H)，4.58(s，4H)，4.91-4.95(m，4H)，5.20(d，J＝1.5Hz，2H)，7.98(s，2H)；HRMS(ESI)計(jì)算值C49H84N10O19(m/z)[M+H]+1117.5987，測(cè)定值1117.5977。
實(shí)施例(14)：
將粗物質(zhì)溶于0.5mL甲醇/水(50：50)，注射在HPLC柱上。使用Waters XBridge BEH C18 OBD Prep柱，5微米，19mm X 100mm(Waters，部件號(hào)186002978)進(jìn)行制備型高效液相色譜法(HPLC)，用17毫升/分鐘流速線性坡度洗脫。溶劑梯度：乙腈/水/三氟乙酸(2：98：0.1)-(42：58：0.1)，40分鐘。通過分析型LCMS分析采集的級(jí)分，并且收集鑒定為具有足夠純度的24.7-25.6分鐘時(shí)的級(jí)分，且蒸發(fā)，得到5.5mg(14)，為油狀物(10％收率，歷時(shí)2步)；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δppm 1.75-1.86(m，18H)，1.87-1.94(m，2H)，1.98(s，9H)，2.37(t，J＝6.8Hz，2H)，2.98(t，J＝7.4Hz，2H)，3.43(d，J＝8.5Hz，3H)，3.46-3.53(m，31H)，3.59(t，J＝6.3Hz，6H)，3.68(s，6H)，3.72-3.76(m，5H)，3.77(d，J＝8.3Hz，3H)，3.97-4.02(m，3H)，4.59(s，6H)，4.90-4.96(m，6H)，5.20(d，J＝1.2Hz，3H)7.98(s，3H)；HRMS(ESI)計(jì)算值C71H120N14O28(m/z)[M+H]+1617.8469，測(cè)定值1617.8415。
實(shí)施例(15)和(16)；Alexa647(AF647)綴合物
Alexa647羧酸琥珀酰亞胺基酯來自Invitrogen(目錄號(hào)A-20106)。Invitrogen報(bào)道分子量為～1250?；趤碜訪CMS的Alexa Fluor 647羧酸琥珀酰亞胺基酯的955.07的[M+H]+測(cè)定值估計(jì)Alexa647標(biāo)記的化合物分子量。λmax 650的消光系數(shù)是～270000±20000，其因批次的不同而改變。
用于HPLC純化的通用方法：
使用Waters XBridge BEH C18 OBD Prep柱，5微米，19mm X 100mm(Waters，部件編號(hào)186002978)進(jìn)行制備型高效液相色譜法(HPLC)，用17毫升/分鐘流速的線性坡度洗脫。溶劑梯度：乙腈/水/三氟乙酸(2：98：0.1)～(22：78：0.1)，40分鐘。通過分析型LCMS分析采集的級(jí)分并且收集鑒定為具有足夠純度的級(jí)分且將其蒸發(fā)。
實(shí)施例(15)：
向化合物(13)(4.5mg，4微摩爾)在二甲亞砜(200微升)中的溶液中加入Alexa647羧酸琥珀酰亞胺基酯(5.0mg，4微摩爾)和N,N-二異丙基乙胺(10微升，10當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物在室溫振搖1小時(shí)，然后通過制備型HPLC直接純化。通過分析型LCMS分析采集的級(jí)分并且收集鑒定為具有足夠純度的級(jí)分(Rt＝37.3-39分鐘)。得到4.0mg(15)(50％收率)。等分該溶液，用真空離心機(jī)蒸發(fā)，將產(chǎn)物儲(chǔ)存在4攝氏度下。MS(ESI)計(jì)算值(m/z)[M+H]+～1955，測(cè)定值1955.32。
實(shí)施例(16)：
向化合物(14)(5.2mg，3.2微摩爾)在二甲亞砜(200微升)中的溶液中加入Alexa647羧酸琥珀酰亞胺基酯(5.0mg，4微摩爾)和N,N-二異丙基乙胺(10微升，10當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物在室溫振搖1小時(shí)，然后通過制備型HPLC直接純化。通過分析型LCMS分析采集的級(jí)分并且收集鑒定為具有足夠純度的級(jí)分(Rt＝24.3-25.3分鐘)。得到4.0mg(16)(51％收率)。等分該溶液，用真空離心機(jī)蒸發(fā)，將產(chǎn)物儲(chǔ)存在4攝氏度下。MS(ESI)計(jì)算值(m/z)[M+H]+～2455，測(cè)定值2456.90。
用于獲得實(shí)施例(17)-(21)的通用烷基化/脫保護(hù)條件：
向(I-e-1)在二氯甲烷中的溶液中加入期望的碘代烷、酸式硫酸四丁銨和12.5M氫氧化鈉水溶液。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^夜，用水和二氯甲烷稀釋，再用二氯甲烷將水相萃取2次。用1M鹽酸水溶液、水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使得到的物質(zhì)以粗品用于下一步反應(yīng)或使用硅膠急驟色譜法純化。將得到的物質(zhì)溶于乙酸/甲醇/水(3：1：1v/v)的混合物，將該溶液加熱至60–70攝氏度過夜。減壓濃縮該反應(yīng)化合物，與甲苯共蒸發(fā)2次，通過硅膠急驟色譜法或反相色譜法純化粗物質(zhì)。
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(乙氧基甲基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(17)
如上述通用方法中所述，使用碘乙烷(20當(dāng)量)合成(17)。將粗產(chǎn)物溶于甲醇，向其中加入活性炭。將該混合物攪拌15分鐘，過濾，減壓濃縮。通過硅膠急驟色譜法純化期望的粗物質(zhì)，用乙酸乙酯/甲醇(15：1)洗脫。采集包含期望的產(chǎn)物的級(jí)分，減壓濃縮。向粗物質(zhì)中加入乙酸乙酯/甲醇(15：1)，得到沉淀，過濾，得到9.1mg(32％收率)期望的產(chǎn)物，為固體。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 5.23(d，J＝1.5Hz，1H)，3.97(dd，J＝9.7，1.4Hz，1H)，3.94(d，J＝9.3Hz，1H)，3.88(d，J＝4.3Hz，1H)，3.79(d，J＝8.1Hz，1H)，3.73(dd，J＝9.8，4.3Hz，1H)，3.66(d，J＝8.1Hz，1H)，3.60(d，J＝9.6Hz，1H)，3.59(dq，J＝9.6，7.1Hz，1H)，3.55(dq，J＝9.6，7.1Hz，1H)，2.00(s，3H)，1.19(t，J＝6.9Hz，3H)。LCMS(APCI)m/z：262.1[M+H](100％)。
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(丙氧基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(18)
如上述通用方法中所述，使用碘丙烷(20當(dāng)量)合成(18)。使用硅膠急驟色譜法純化期望的粗產(chǎn)物，用乙酸乙酯/甲醇(15：2)洗脫，得到13.9mg(80％收率)期望的產(chǎn)物，為油狀物。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 5.23(d，J＝1.5Hz，1H)，3.97(dd，J＝9.7，1.4Hz，1H)，3.95(d，J＝9.6Hz，1H)，3.89(d，J＝4.3Hz，1H)，3.79(d，J＝7.8Hz，1H)，3.73(dd，J＝9.8，4.3Hz，1H)，3.66(d，J＝8.1Hz，1H)，3.59(d，J＝9.3Hz，1H)，3.49(dt，J＝9.3，6.5Hz，1H)，3.46(dt，J＝9.3，6.5Hz，1H)，2.01(s，3H)，1.60(qt，J＝7.4，6.5Hz，2H)，0.94(t，J＝7.4Hz，3H)。LCMS(APCI)m/z：276.2[M+H](100％)。
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(丁氧基甲基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(19)
如上述通用方法中所述，使用碘丁烷(20當(dāng)量)合成(19)。使用硅膠急驟色譜法純化期望的粗產(chǎn)物，用乙酸乙酯/甲醇(15：1)洗脫，得到18mg(100％收率)期望的產(chǎn)物，為油狀物。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 5.23(d，J＝1.3Hz，1H)，3.97(dd，J＝9.6，1.3Hz，1H)，3.94(d，J＝9.6Hz，1H)，3.88(d，J＝4.3Hz，1H)，3.79(d，J＝7.8Hz，1H)，3.73(dd，J＝9.8，4.3Hz，1H)，3.66(d，J＝7.8Hz，1H)，3.59(d，J＝9.3Hz，1H)，3.54(dt，J＝9.3，6.5Hz，1H)，3.50(dt，J＝9.3，6.5Hz，1H)，2.00(s，3H)，1.52-1.61(m，2H)，1.34-1.45(m，2H)，0.95(t，J＝7.3Hz，3H)。LCMS(APCI)m/z：290.2[M+H](100％)。
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-[(戊氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}乙酰胺(20)
如上述通用方法中所述，使用碘戊烷(20當(dāng)量)合成(20)。使用硅膠急驟色譜法純化粗產(chǎn)物，用乙酸乙酯/甲醇(15：1)洗脫，得到17mg(68％收率)期望的產(chǎn)物，為油狀物。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)delta ppm 5.23(d，J＝1.5Hz，1H)，3.97(dd，J＝9.8，1.3Hz，1H)，3.94(d，J＝9.6Hz，1H)，3.88(d，J＝4.3Hz，1H)，3.79(d，J＝8.1Hz，1H)，3.73(dd，J＝9.8，4.3Hz，1H)，3.66(d，J＝8.1Hz，1H)，3.59(d，J＝9.6Hz，1H)，3.53(dt，J＝9.3，6.5Hz，1H)，3.49(dt，J＝9.3，6.5Hz，1H)，2.01(s，3H)，1.53-1.63(m，2H)，1.29-1.41(m，4H)，0.89-0.97(m，3H)。LCMS(APCI)m/z：304.1[M+H](100％)。
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-1-[(己氧基)甲基]-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}乙酰胺(21)
如上述通用方法中所述，使用碘己烷(20當(dāng)量)合成(21)。使用硅膠急驟色譜法純化粗產(chǎn)物，用乙酸乙酯/甲醇(15：1)洗脫，得到56mg產(chǎn)物，為油狀物。使用反相色譜法再純化該物質(zhì)，得到7.1mg(15％收率)期望的產(chǎn)物，為固體。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 5.23(d，J＝1.5Hz，1H)，3.96(dd，J＝10.1，1.3Hz，1H)，3.94(d，J＝9.6Hz，1H)，3.88(d，J＝4.3Hz，1H)，3.79(d，J＝7.8Hz，1H)，3.73(dd，J＝9.8，4.3Hz，1H)，3.66(d，J＝8.1Hz，1H)，3.59(d，J＝9.6Hz，1H)，3.53(dt，J＝9.3，6.5Hz，1H)，3.49(dt，J＝9.3，6.5Hz，1H)，2.00(s，3H)，1.53-1.62(m，2H)，1.27-1.50(m，6H)，0.89-0.97(m，3H)。LCMS(APCI)m/z：318.1[M+H](100％)。
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(2,5,8,11,14-五氧雜十五烷-1-基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(22)
向(I-e-1)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入吡啶(0.3ml，4mmol)，將該混合物冷卻至-20攝氏度，加入在二氯甲烷(0.6mL)中的三氟甲磺酸酐(0.047ml，0.28mmol)。將該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?10攝氏度，歷時(shí)1小時(shí)，用二氯甲烷稀釋，依次用1M鹽酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮，得到所期望的粗物質(zhì)，不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步。向冷卻至0攝氏度的2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-醇(207mg，0.994mmol)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液中加入氫化鈉(39.9mg，1.0mmol)，將該反應(yīng)混合物攪拌10分鐘。滴加上述粗三氟甲磺酸((3aR,4R,7S,8R,8aR)-8-乙酰氨基-2,2-二甲基四氫-4,7-環(huán)氧[1,3]間二氧雜環(huán)戊烯[4,5-d]氧雜環(huán)庚三烯-4(5H)-基)甲酯在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液，將該反應(yīng)混合物在0攝氏度攪拌25分鐘。用甲醇使反應(yīng)停止，將該反應(yīng)混合物攪拌5分鐘。然后減壓濃縮得到的混合物，將得到的殘余物溶于二氯甲烷，用水洗滌。再用二氯甲烷萃取水層2次。用水洗滌合并的有機(jī)層，減壓濃縮。通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)，用乙酸乙酯/甲醇(15：2)洗脫，得到85mg(100％)期望的產(chǎn)物。將N-((3aR,4S,7S,8R,8aR)-2,2-二甲基-4-(2,5,8,11,14-五氧雜十五基)六氫-4,7-環(huán)氧[1,3]間二氧雜環(huán)戊烯[4,5-d]氧雜環(huán)庚三烯-8-基)乙酰胺(85mg，0.18mmol)在乙酸/甲醇/水(3.9：1.3：1.3v/v)混合物中的溶液加熱至70攝氏度過夜。減壓濃縮該反應(yīng)混合物，將得到的粗物質(zhì)與甲苯共蒸發(fā)2次，通過硅膠急驟色譜法純化，用10％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到15mg期望的產(chǎn)物(22)，為油狀物。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 5.22(d，J＝1.3Hz，1H)，3.96(d，J＝9.6Hz，1H)，3.95(dd，J＝9.9，1.3Hz，1H)，3.89(d，J＝4.3Hz，1H)，3.78(d，J＝8.1Hz，1H)，3.59-3.74(m，17H)，3.53-3.56(m，2H)，3.36(s，3H)，1.99(s，3H)。LCMS(APCI)m/z：424.2[M+H](13％)，441.3[M+NH4](100％)。
雙(4-溴苯甲酸)(1R,2R,3R,4R,5S)-4-乙酰氨基-1-(((4-溴苯甲?；?氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-2,3-二基酯(23)
向在室溫冷卻的(3)(9mg)在無水N,N-二甲基甲酰胺(500微升)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(34微升)和4-(二甲基氨基)吡啶(4.3mg)，然后加入對(duì)溴苯甲酰氯(44mg)，將得到的混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。加入水，用乙酸乙酯將得到的混合物萃取3次，連續(xù)用0.5M鹽酸水溶液和鹽水洗滌合并的有機(jī)相。用硫酸鎂干燥有機(jī)相，過濾，濃縮，通過硅膠急驟色譜法純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯的庚烷溶液梯度洗脫，得到23mg產(chǎn)物(23)(80％收率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)7.89-7.95(m，2H)，7.78-7.84(m，2H)，7.54-7.66(m，6H)，7.41-7.46(m，2H)，5.87(d，J＝8.8Hz，1H)，5.80(d，J＝4.3Hz，1H)，5.60(d，J＝1.1Hz，1H)，5.44(dd，J＝10.2，4.5Hz，1H)，4.54-4.64(m，3H)，4.15(d，J＝8.6Hz，1H)，3.93(d，J＝8.6Hz，1H)，1.95(s，3H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δppm 170.6，165.6，165.0，164.9，132.1，131.9，131.8，131.4，131.2，131.2，129.3，129.0，128.9，127.7，127.5，127.4，101.8，81.6，69.5，68.8，68.4，62.5，52.7，23.2。通過蒸氣擴(kuò)散技術(shù)，使用甲醇和庚烷作為溶劑得到單晶。單晶X射線分析：在室溫使用Bruker APEX衍射計(jì)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。數(shù)據(jù)采集由3次ω掃描以及低角和高角3次組成；各自具有0.5個(gè)步長。此外，采集2phi掃描以便改善吸收校正的質(zhì)量。結(jié)構(gòu)是非缺面雙晶；通過忽略第二個(gè)晶疇精修。通過直接方法，使用SHELX軟件套件(參見SHELXTL，5.1版，Bruker AXS，1997)在空間群P2(1)中解析結(jié)構(gòu)。隨后通過全矩陣最小二乘法精修結(jié)構(gòu)。發(fā)現(xiàn)了全部非氫原子并且使用各向異性置換參數(shù)精修。使位于氮上的氫原子置于該位置上并且以合理的位置束縛。將其余的氫原子置于計(jì)算的位置上并且使其位于其載體原子上。最終的精修包括用于全部氫原子的等向置換參數(shù)。使用PLATON(A.L.Spek，J.Appl.Cryst.，36，7-13(2003))，應(yīng)用似然方法(R.W.W.Hooft等人J.Appl.Cryst.，41，96-103(2008))分析絕對(duì)結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明絕對(duì)結(jié)構(gòu)被正確地指定。該方法計(jì)算出結(jié)果是正確的概率為100.0。將Hooft參數(shù)報(bào)道為0.036，esd為0.013。另外，F(xiàn)lack參數(shù)為0.03，esd為0.04。最終R指數(shù)為5.6％。最終的差示Fourier揭示無丟失或錯(cuò)位電子密度。將相關(guān)的晶體、數(shù)據(jù)采集和精修概括在表1和圖1中。
表1.(23)的晶體數(shù)據(jù)和結(jié)構(gòu)精修。
(1S,2R,3R,4R,5S)-4-疊氮基-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷(l-m-1)
在室溫向(1S,2R,3R,4R,5S)-4-疊氮基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-2,3-二醇(1)(445mg，2.05mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入氫化鈉(礦物油中的60％分散體，410mg，10.2mmol)。該反應(yīng)體系變成極為濃稠，不能充分?jǐn)嚢?。再加?mL N,N-二甲基甲酰胺，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?0分鐘，然后滴加芐基溴(1.23ml，10.2mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢柽^夜。第二天早晨用水使反應(yīng)停止，用乙酸乙酯萃取3次。用水、鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 40g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-30％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(890.0mg，89.1％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝510]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.07-7.52(m，15H)，5.31(s，1H)，4.81(d，J＝5.1Hz，1H)，4.78(d，J＝5.5Hz，1H)，4.68-4.74(m，1H)，4.47-4.51(m，1H)，4.46(d，J＝6.6Hz，1H)，4.35-4.42(m，1H)，4.12(d，J＝3.9Hz，1H)，3.87-3.91(m，2H)，3.86(d，J＝8.2Hz，1H)，3.62(d，J＝8.2Hz，1H)，3.58(d，J＝9.4Hz，1H)，3.46(d，J＝8.6Hz，1H)
(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-胺(1-n-1)
將(1S,2R,3R,4R,5S)-4-疊氮基-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷(l-m-1)(310mg，0.64mmol)、三苯膦(334mg，1.27mmol)、水(92mg，5.1mmol)和四氫呋喃(10mL)的混合物在65℃攪拌16小時(shí)。減壓濃縮該反應(yīng)混合物，使殘余物上硅膠柱。進(jìn)行色譜法，用20％-80％乙酸乙酯的庚烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題產(chǎn)物，為無色膠狀物(210mg，72％)。1H NMR(氯仿-d)δ：7.20-7.37(m，15H)，5.29(d，J＝1.2Hz，1H)，4.90(d，11.5Hz，1H)，4.79(d，J＝11.5Hz，1H)，4.57(d，J＝11.7Hz，1H)，4.56(d，J＝12.1Hz，1H)，4.43(d，J＝12.1Hz，1H)，4.39(d，J＝11.7Hz，1H)，3.97(d，J＝3.9Hz，1H)，3.90(d，J＝9.0Hz，1H)，3.69(d，J＝8.2Hz，1H)，3.59(d，J＝8.2Hz，1H)，3.42(d，J＝8.6Hz，1H)，3.37(dd，J＝9.4，3.5Hz，1H)，3.07(dd，J＝9.4，1.2Hz，1H)；13C NMR(氯仿-d)δ：131.8，131.6，131.5，128.2，128.2，128.1，128.1，128.0，127.7，127.6，127.6，127.4，103.5，82.6，80.3，74.5，73.3，73.1，72.2，69.9，69.3，55.1；LCMS(ES+)：1.18分鐘，484.2(M+Na)+。
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}乙酰胺(l-n-2)
在室溫向攪拌的(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-胺(1-n-1)(25mg，0.054mmol)、吡啶(43mg，0.54mmol)和2-甲基-四氫呋喃(1mL)的混合物中一次加入乙酐(46mg，0.43mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，使其分配在乙酸乙酯和水之間。用鹽水洗滌有機(jī)萃取物，用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮。用硅膠柱純化殘余物，用20％-60％乙酸乙酯的庚烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體(20mg，73％)。1H NMR(氯仿-d)δ：7.24-7.43(m，15H)，5.35(d，J＝1.2Hz，1H)，5.06(d，J＝8.6Hz，1H)，4.96(d，J＝11.3Hz，1H)，4.74(d，J＝12.5Hz，1H)，4.58(d，J＝11.3Hz，1H)，4.42(d，J＝12.5Hz，1H)，4.40(s，2H)，4.30-4.36(m，1H)，4.04(d，J＝3.9Hz，1H)，3.96(d，J＝8.6Hz，1H)，3.67-3.70(m，1H)，3.58-3.61(m，1H)，3.41-3.47(m，2H)，1.87(s，3H)；13C NMR(氯仿-d)δ：170.0，138.2，137.8，137.4，128.7，128.5，128.4，128.3，128.3，128.2，128.1，128.0，127.8，101.6，82.8，75.7，75.0，73.8，73.2，71.5，70.1，69.5，53.5，23.3；LCMS(ES+)：1.87分鐘，526.3(M+Na)+。
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}-2,2,2-三氟乙酰胺(1-n-3)
在室溫向攪拌的(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-胺(1-n-1)(75mg，0.16mmol)、吡啶(129mg，1.62mmol)和2-甲基-四氫呋喃(1mL)的混合物中一次加入三氟乙酐(102mg，0.49mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，使其分配在乙酸乙酯和水之間。用鹽水洗滌有機(jī)萃取物，用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮。用硅膠柱純化殘余物，用10％-40％乙酸乙酯的庚烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體(60mg，66％)。1H NMR(氯仿-d)δ：7.25-7.42(m，15H)，5.91(d，J＝8.6Hz，1H)，5.35(d，J＝1.2Hz，1H)，4.95(d，J＝11.3Hz，1H)，4.72(d，J＝12.5Hz，1H)，4.58(d，J＝11.3Hz，1H)，4.41(s，2H)，4.40(d，J＝12.5Hz，1H)，4.36(t，J＝9.8Hz，1H)，4.08(d，J＝3.9Hz，1H)，3.96(d，J＝9.0Hz，1H)，3.68-3.72(m，1H)，3.60-3.63(m，1H)，3.50(dd，J＝10.0，3.7Hz，1H)，3.45(d，J＝8.6Hz，1H)；13C NMR(氯仿-d)δ：137.9，137.1，136.1，128.9，128.5，128.5，128.4，128.4，128.1，128.1，128.1，127.9，100.6，83.0，75.0，74.9，73.8，72.7，71.4，70.3，69.2，54.1；19F NMR(氯仿-d)δ：-75.7(s)；LCMS(ES-)：2.11分鐘，556.2(M-H)-。
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}甲磺酰胺(1-n-4)
在0℃向攪拌的(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-胺(1-n-1)(50mg，0.11mmol)、三乙胺(0.100ml，0.72mmol)和2-甲基-四氫呋喃(1mL)的混合物中滴加甲磺酰氯(0.025ml，0.33mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，使其分配在乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉之間。用水、鹽水洗滌有機(jī)萃取物，用無水硫酸鎂干燥，濃縮。用硅膠柱純化殘余物，用10％-50％乙酸乙酯的庚烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體(58mg，65％)。1H NMR(氯仿-d)δ：7.22-7.41(m，15H)，5.43(d，J＝1.2Hz，1H)，4.93(d，J＝11.3Hz，1H)，4.79(d，J＝11.7Hz，1H)，4.62(br.s.，1H)，4.56(d，J＝11.7Hz，1H)，4.54(d，J＝11.3Hz，1H)，4.41(d，J＝12.1Hz，1H)，4.37(d，J＝12.1Hz，1H)，4.05(d，J＝3.9Hz，1H)，3.92(d，J＝8.6Hz，1H)，3.74(d，J＝8.6Hz，1H)，3.68-3.72(m，1H)，3.62(d，J＝8.6Hz，1H)，3.54(dd，J＝10.0，3.7Hz，1H)，3.44(d，J＝9.0Hz，1H)，2.90(s，3H)；13C NMR(氯仿-d)δ：138.0，137.3，137.2，128.7(2)，128.5(2)，128.4(2)，128.3，128.1(2)，128.1，127.9(2)，127.8(2)，102.7，82.9，77.2，77.1，75.0，73.7，73.5，72.8，70.2，69.3，57.7，41.2；；LCMS(ES-)：1.97分鐘，538.3(M-H)-。
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}丙酰胺(1-n-5)
在室溫向攪拌的丙酸(23mg，0.31mmol)在四氫呋喃(1mL)中的混合物中一次加入1,1’-羰基二咪唑(33mg，0.20mmol)，將澄清溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。在室溫一次加入三乙胺(0.028ml，0.20mmol)和(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-胺(1-n-1)(47mg，0.10mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，使其分配在乙酸乙酯(3mL)、鹽水(2mL)和水(2mL)之間。用鹽水洗滌有機(jī)萃取物，用無水硫酸鎂干燥，濃縮。將殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜法，用10％-50％乙酸乙酯的庚烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體(43mg，82％)。1H NMR(氯仿-d)δ：7.03-7.58(m，15H)，5.35(s，1H)，5.09(d，J＝8.2Hz，1H)，4.95(d，J＝11.3Hz，1H)，4.72(d，J＝12.1Hz，1H)，4.57(d，J＝11.3Hz，1H)，4.43(d，J＝12.1Hz，1H)，4.39(s，2H)，4.31-4.38(m，1H)，4.04(d，J＝3.9Hz，1H)，3.95(d，J＝9.0Hz，1H)，3.68(d，J＝8.2Hz，1H)，3.59(d，J＝8.2Hz，1H)，3.44-3.49(m，1H)，3.44(d，J＝8.6Hz，1H)，2.08(q，J＝7.4Hz，2H)，1.11(t，J＝7.6Hz，3H)；13C NMR(氯仿-d)δ：173.5，138.1，137.8，137.4，128.6，128.5，128.3，128.3，128.2，128.1，128.0，128.0，127.7，101.6，82.7，75.7，74.9，73.7，73.2，71.5，70.1，69.4，53.3，29.6，9.5；LCMS(ES-)：1.94分鐘，516.4(M-H)-；LCMS(AP+)：1.94分鐘，518.5(M+H)+。
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}-3,3,3-三氟丙酰胺(1-n-6)
在室溫向攪拌的3,3,3-三氟丙酸(39mg，0.31mmol)在四氫呋喃(1mL)中的混合物中一次加入1,1’-羰基二咪唑(33mg，0.20mmol)，將澄清溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。在室溫一次加入三乙胺(0.028ml，0.20mmol)和(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-胺(1-n-1)(47mg，0.10mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，使其分配在乙酸乙酯(3mL)、鹽水(2mL)和水(2mL)之間。用鹽水洗滌有機(jī)萃取物，用無水硫酸鎂干燥，濃縮。將殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜法，用10％-50％乙酸乙酯的庚烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體(40mg，69％)。1H NMR(氯仿-d)δ：7.24-7.42(m，15H)，5.37(d，J＝8.6Hz，1H)，5.35(d，J＝1.6Hz，1H)，4.95(d，J＝11.3Hz，1H)，4.71(d，J＝12.1Hz，1H)，4.56(d，J＝11.3Hz，1H)，4.45(d，J＝12.1Hz，1H)，4.40(s，2H)，4.35-4.40(m，1H)，4.05(d，J＝3.5Hz，1H)，3.95(d，J＝8.6Hz，1H)，3.71(d，J＝8.2Hz，1H)，3.61(d，J＝8.2Hz，1H)，3.50(dd，J＝10.0，3.7Hz，1H)，3.45(d，J＝8.6Hz，1H)，2.92(q，J＝10.5Hz，2H)；13C NMR(氯仿-d)δ：162.3，138.0，137.6，137.3，128.7，128.5，128.4，128.3，128.3，128.2，128.0，128.0，127.8，101.1，82.8，75.8，75.0，73.7，73.2，71.9，70.2，69.3，54.0，41.7；19F NMR(氯仿-d)δ：-62.8(s)；LCMS(ES-)：2.05分鐘，570.3(M-H)-。
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}-2,2-二氟乙酰胺(1-n-7)
在室溫向攪拌的二氟乙酸(29mg，0.31mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的混合物中一次加入1,1’-羰基二咪唑(33mg，0.20mmol)，將澄清溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。在室溫一次加入三乙胺(0.028ml，0.20mmol)和(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-胺(1-n-1)(47mg，0.10mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6h，使其分配在乙酸乙酯(3mL)、鹽水(2mL)和水(2mL)之間。用鹽水洗滌有機(jī)萃取物，用無水硫酸鎂干燥，濃縮。將殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜法，用10％-50％乙酸乙酯的庚烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體(32mg，58％)。1H NMR(氯仿-d)δ：7.14-7.47(m，15H)，6.02(d，J＝8.6Hz，1H)，5.83(t，J＝54.2Hz，1H)，5.35(s，1H)，4.96(d，J＝11.3Hz，1H)，4.73(d，J＝12.5Hz，1H)，4.58(d，J＝11.3Hz，1H)，4.45(d，J＝12.1Hz，1H)，4.41(s，2H)，4.34-4.40(m，1H)，4.08(d，J＝3.9Hz，1H)，3.96(d，J＝9.0Hz，1H)，3.67-3.75(m，1H)，3.59-3.65(m，1H)，3.53(dd，J＝9.8，3.9Hz，1H)，3.46(d，J＝8.6Hz，1H)；13C NMR(氯仿-d)δ：162.6，138.0，137.3，128.8，128.5，128.4，128.3，128.1，128.0，127.8，108.3(t，J＝253.1Hz)，100.9，82.9，75.3，75.0，73.8，72.9，71.6，70.2，69.3，53.5；19F NMR(氯仿-d)δ：-126.1(d，J＝53.1Hz)；LCMS(ES-)：2.05分鐘，538.2(M-H)-。
{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}氨基甲酸叔丁酯(l-n-8)
在室溫向攪拌的(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-胺(1-n-1)(120mg，0.26mmol)和N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(6.4mg，0.052mmol)和四氫呋喃(2mL)中的混合物中一次加入二碳酸二-叔丁酯(113mg，0.52mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，減壓濃縮。用硅膠柱純化殘余物，用10％-40％乙酸乙酯的庚烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體(104mg，71％)。1H NMR(氯仿-d)δ：7.17-7.45(m，15H)，5.35(s，1H)，4.97(d，J＝11.3Hz，1H)，4.74(d，J＝12.1Hz，1H)，4.57(d，J＝11.3Hz，2H)，4.47(d，J＝7.0Hz，1H)，4.39(s，2H)，4.09(br.s.，1H)，4.01(d，J＝3.9Hz，1H)，3.93(d，J＝9.0Hz，1H)，3.63-3.71(m，1H)，3.54-3.62(m，1H)，3.38-3.48(m，2H)，1.47(s，9H)；13C NMR(氯仿-d)δ：155.2，138.2，137.8，137.4，128.5，128.4，128.3，128.3，128.0，127.9，127.8，127.7，102.2，82.8，79.4，74.8，73.7，73.4，72.0，70.0，69.4，54.6，31.9，28.4；LCMS(AP+)：2.25分鐘，462.2(M-Boc+H)+。
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]丙酰胺(25)
將N-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基)丙酰胺(1-n-5)(42mg，0.081mmol)、1-甲基-1,4-環(huán)己二烯(0.093ml，0.81mmol)、10％披Pd活性炭(20mg)和2-丙醇(2.5mL)的混合物在80℃攪拌3小時(shí)。加入水(0.2ml)，使全部混合物負(fù)載在硅膠上，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器干燥。用硅膠柱純化該物質(zhì)，用4％-15％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色膠狀物(12mg，60％)。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.21(d，J＝1.6Hz，1H)，3.95(dd，J＝10.1，1.2Hz，1H)，3.92(d，J＝11.3Hz，1H)，3.87(d，J＝3.9Hz，1H)，3.81(d，J＝11.3Hz，1H)，3.75(d，J＝8.2Hz，1H)，3.71-3.76(m，2H)，3.68(d，J＝8.2Hz，1H),，3.35(s，1H)，2.26(q，J＝7.4Hz，2H)，1.13(t，J＝7.4Hz，3H)；13C NMR(甲醇-d4)δ：177.7，102.6，84.9，70.4，69.1，69.0，61.9，56.0，30.0，10.3；LCMS(AP+)：0.25分鐘，248.2(M+H)+。
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]-2,2,2-三氟乙酰胺(24)
將N-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基)-2,2,2-三氟乙酰胺(1-n-3)(20mg，0.036mmol)、1-甲基-1,4-環(huán)己二烯(0.093ml，0.81mmol)、10％披Pd活性炭(20mg)和2-丙醇(2.5mL)的混合物在80℃攪拌3小時(shí)。加入水(0.2ml)，使全部混合物負(fù)載在硅膠上，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器干燥。用硅膠柱純化該物質(zhì)，用4％-15％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色膠狀物(7.2mg，69％)。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.25(d，J＝1.2Hz，1H)，4.02(d，J＝8.6Hz，1H)，3.90(d，J＝7.0Hz，1H)，3.88-3.95(m，2H)，3.82(d，J＝11.7Hz，1H)，3.78(d，J＝7.8Hz，1H)，3.71(d，J＝7.8Hz，1H)，3.35(s，1H)；13C NMR(甲醇-d4)δ：159.8，102.3，85.5，70.8，69.7，68.4，62.2，57.4；19F NMR(氯仿-d)δ：-77.0(s)；LCMS(AP+)：0.42分鐘，288.2(M+H)+。
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]甲磺酰胺(26)
將N-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基)甲磺酰胺(1-n-4)(19mg，0.035mmol)、1-甲基-1,4-環(huán)己二烯(0.093ml，0.81mmol)、10％披Pd活性炭(20mg)和2-丙醇(2.5mL)的混合物在80℃攪拌3小時(shí)。加入水(0.2ml)，使全部混合物負(fù)載在硅膠上，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器干燥。用硅膠柱純化該物質(zhì)，用4％-15％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色膠狀物(6.4mg，68％)。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.26(d，J＝1.6Hz，1H)，3.91(d，J＝11.3Hz，1H)，3.87(d，J＝4.3Hz，1H)，3.80(d，J＝11.3Hz，1H)，3.73(d，J＝7.8Hz，1H)，3.68(d，J＝7.8Hz，1H)，3.66-3.71(m，1H)，3.37(dd，J＝9.8，1.6Hz，1H)，3.35(s，1H)，3.04(s，3H)；13C NMR(甲醇-d4)δ：104.6，85.1，70.9，69.8，69.3，62.0，60.2，41.7；LCMS(ES-)：0.15分鐘，268.0(M-H)-。
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]-2,2-二氟乙酰胺(27)
向5mL微波小瓶中的N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}-2,2-二氟乙酰胺(1-n-7)(32.0mg，0.059mmol)在2-丙醇(1.0mL)和四氫呋喃(0.5mL)中的溶液中加入1-甲基-1,4-環(huán)己二烯(0.2ml，2mmol)，然后添加10％披鈀碳(50％濕的wt/wt，20.0mg，0mmol)。密封小瓶，加熱至80℃4小時(shí)。4小時(shí)后，TLC(10％甲醇/二氯甲烷)顯示反應(yīng)未完成，但形成了所期望的產(chǎn)物。再加入1-甲基-1,4-環(huán)己二烯(0.2mL mg，2mmol)，再密封該反應(yīng)體系，加熱至80℃過夜(18小時(shí))。總計(jì)22小時(shí)后，用甲醇稀釋該反應(yīng)體系，通過Life Sciences Acrodisc 25mm注射器式濾器過濾。減壓濃縮濾液。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為固體(5.0mg，SOLID，31％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝292]。1H NMR(甲醇-d4)δ：6.06(t，J＝54.2Hz，1H)，5.25(s，1H)，4.02(d，J＝9.4Hz，1H)，3.92(d，J＝11.7Hz，1H)，3.84-3.90(m，2H)，3.81(d，J＝11.7Hz，1H)，3.78(d，J＝8.2Hz，1H)，3.70(d，J＝8.2Hz，1H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]-3,3,3-三氟丙酰胺(28)
向5mL微波小瓶中的N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}-3,3,3-三氟丙酰胺(1-n-6)(40.0mg，0.070mmol)在2-丙醇(1.0mL)和四氫呋喃(0.5mL)中的溶液中加入1-甲基-1,4-環(huán)己二烯(0.2ml，1.75mmol)，然后添加10％披鈀碳(50％濕的wt/wt，20.0mg，0mmol)。密封小瓶，加熱至80℃4小時(shí)。4小時(shí)后，用甲醇稀釋該反應(yīng)體系，通過Life Sciences Acrodisc 25mm注射器式濾器過濾。減壓濃縮濾液。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為固體(15.3mg，73％)。LRMS[M+1＝302]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.23(s，1H)，3.99(d，J＝9.8Hz，1H)，3.92(d，J＝11.3Hz，1H)，3.87(d，J＝4.3Hz，1H)，3.81(d，J＝11.3Hz，1H)，3.76(d，J＝8.2Hz，1H)，3.71-3.74(m，1H)，3.69(d，J＝8.2Hz，1H)，3.22(qd，J＝10.7，2.5Hz，2H)
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}-N-甲基乙酰胺(l-o-1)
在室溫向攪拌的N-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基)乙酰胺(l-n-2)(19mg，0.038mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)的混合物中一次加入氫化鈉(在礦物油中的60％分散體)，將該混合物攪拌30分鐘。在室溫一次加入碘甲烷(16mg，0.11mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，使其分配在乙酸乙酯(3mL)、鹽水(2mL)和水(2mL)之間。用鹽水洗滌有機(jī)萃取物，用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮。用硅膠柱純化殘余物，用10％-50％乙酸乙酯的庚烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題產(chǎn)物，為無色膠狀物(19mg，97％)。旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物(3：1)。旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體1：1H NMR(氯仿-d)d：7.21-7.43(m，15H)，5.37(s，1H)，4.93(d，J＝10.9Hz，1H)，4.65(d，J＝11.7Hz，1H)，4.54(d，J＝11.3Hz，1H)，4.50(d，J＝11.7Hz，1H)，4.37-4.45(m，2H)，4.15(d，J＝9.8Hz，1H)，4.09(d，J＝3.5Hz，1H)，3.93(d，J＝8.6Hz，1H)，3.85(dd，J＝10.1，3.5Hz，1H)，3.78(d，J＝8.2Hz，1H)，3.64(d，J＝8.2Hz，1H)，3.45(d，J＝8.6Hz，1H)，2.80(s，3H)，2.19(s，3H)；旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體2：1H NMR(氯仿-d)d：7.21-7.43(m，15H)，5.27(s，1H)，5.12(d，J＝10.9Hz，1H)，4.94-4.98(m，1H)，4.74(d，J＝12.1Hz，1H)，4.56(d，J＝11.7Hz，1H)，4.46(d，J＝11.3Hz，1H)，4.37-4.46(m，2H)，4.14-4.17(m，1H)，3.97(d，J＝8.6Hz，1H)，3.82-3.89(m，2H)，3.79(d，J＝8.2Hz，1H)，3.60-3.63(m，1H)，2.71(s，3H)，2.08(s，3H)；13C NMR(氯仿-d)d：172.2，138.0，137.3，137.2，128.6，128.5，128.5，128.4，128.1，128.0，127.9，127.9，127.9，127.8，103.2，83.2，75.2，74.1，73.8，73.7，73.0，72.4，70.1，69.2，61.2，28.0，22.2；LCMS(AP+)：1.99分鐘，518.0(M+H)+。
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}-N-甲基甲磺酰胺(l-o-2)
在室溫向攪拌的N-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基)甲磺酰胺(1-n-4)(19mg，0.035mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)的混合物中一次加入氫化鈉(礦物油中的60％分散體)，將該混合物攪拌30分鐘。在室溫一次加入碘甲烷(16mg，0.11mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，使其分配在乙酸乙酯(3mL)、鹽水(2mL)和水(2mL)之間。用鹽水洗滌有機(jī)萃取物，用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮。用硅膠柱純化殘余物，用10％-50％乙酸乙酯的庚烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題產(chǎn)物，為無色膠狀物(11mg，56％)。1H NMR(氯仿-d)δ：7.25-7.39(m，15H)，5.39(d，J＝0.8Hz，1H)，4.93(d，J＝11.7Hz，1H)，4.80(d，J＝11.3Hz，1H)，4.58(d，J＝11.3Hz，1H)，4.45(d，J＝11.7Hz，1H)，4.43(d，J＝11.7Hz，1H)，4.41(d，J＝11.7Hz，1H)，4.21(d，J＝3.5Hz，1H)，4.18(d，J＝10.5Hz，1H)，3.98(d，J＝8.6Hz，1H)，3.87(dd，J＝10.5，3.9Hz，1H)，3.82(d，J＝8.6Hz，1H)，3.62(d，J＝8.2Hz，1H)，3.45(d，J＝9.0Hz，1H)，2.83(s，3H)，2.68(s，3H)；13C NMR(氯仿-d)δ：138.1，137.3，136.8，128.7，128.5，128.4，128.4，128.1，128.1，128.0，127.8，104.6，82.9，74.9，73.8，73.5，73.3，71.6，70.3，69.4，59.7，37.5，29.5；LCMS(AP+)：2.08分鐘，575.8(M+Na)+。
{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}甲基氨基甲酸叔丁酯(l-o-3)
在室溫向攪拌的{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}氨基甲酸叔丁酯(l-n-8)(100mg，0.178mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的溶液中加入氫化鈉(礦物油中的60％分散體，8.55mg，0.214mmol)。將該反應(yīng)體系攪拌1小時(shí)，然后添加碘甲烷(0.055ml，0.89mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢柽^夜。24小時(shí)后，用水使反應(yīng)停止，用乙酸乙酯萃取3次。用水、鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(78mg，76％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝598]。1H NMR(化合物為兩種旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的～1：1混合物)
旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體1：1H NMR(甲醇-d4)δ：7.08-7.48(m，15H)，5.26(s，1H)，4.83-4.90(m，1H)，4.73(d，J＝11.7Hz，1H)，4.47-4.58(m，3H)，4.36-4.47(m，2H)，4.21(d，J＝3.5Hz，1H)，3.98(dd，J＝10.7，3.3Hz，1H)，3.92(d，J＝8.2Hz，2H)，3.61(d，J＝7.8Hz，1H)，3.47(dd，J＝8.6，3.9Hz，1H)，2.75(s，3H)，1.42(s，9H)
旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體2：1H NMR(甲醇-d4)δ：7.08-7.48(m，15H)，5.21(s，1H)，4.83-4.90(m，1H)，4.73(d，J＝11.7Hz，1H)，4.47-4.58(m，3H)，4.36-4.47(m，2H)，4.21(d，J＝3.5Hz，1H)，3.98(dd，J＝10.7，3.3Hz，1H)，3.92(d，J＝8.2Hz，2H)，3.61(d，J＝7.8Hz，1H)，3.47(dd，J＝8.6，3.9Hz，1H)，2.70(s，3H)，1.44-1.52(m，9H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]-N-甲基乙酰胺(29)
將N-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基)-N-甲基乙酰胺(l-o-1)(19mg，0.037mmol)、1-甲基-1,4-環(huán)己二烯(0.093ml，0.81mmol)、10％披Pd活性炭(20mg)和2-丙醇(2.5mL)的混合物在80℃攪拌3小時(shí)。加入水(0.2ml)，將全部混合物負(fù)載在硅膠上，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器干燥。用硅膠柱純化該物質(zhì)，用4％-15％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色膠狀物(4.3mg，47％)。1H NMR(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的～1：1混合物)
旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體1：1H NMR(甲醇-d4)δ：5.20(s，1H)，4.65(d，J＝10.5Hz，1H)，4.02-4.09(m，1H)，3.89-3.98(m，2H)，3.84(s，1H)，3.78-3.82(m，1H)，3.68(s，1H)，3.11(s，3H)，2.15(s，3H)
旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體2：1H NMR(甲醇-d4)δ：5.37(s，1H)，4.02-4.09(m，1H)，3.89-3.98(m，3H)，3.84-3.87(m，1H)，3.79-3.83(m，1H)，3.71(d，J＝8.2Hz，1H)，2.98(s，3H)，2.15(s，3H)
13C NMR(甲醇-d4)δ：175.4，104.6，85.8，71.3，69.7，66.2，62.3，59.1，28.8，22.7；LCMS(ES-)：0.41分鐘，246.2(M-H)-。
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]-N-甲基甲磺酰胺(30)
將N-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-((芐氧基)甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基)-N-甲基甲磺酰胺(l-o-2)(11mg，0.020mmol)、1-甲基-1,4-環(huán)己二烯(0.093ml，0.81mmol)、10％披Pd活性炭(20mg)和2-丙醇(2.5mL)的混合物在80℃攪拌3小時(shí)。加入水(0.2ml)，將全部混合物負(fù)載在硅膠上，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器干燥。進(jìn)行硅膠柱色譜法，用4％-15％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色膠狀物(2.9mg，51％)。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.26(d，J＝1.2Hz，1H)，4.00-4.05(m，1H)，3.92-3.96(m，1H)，3.89-3.91(m，1H)，3.84(d，J＝1.2Hz，1H)，3.77-3.83(m，2H)，3.68(d，J＝7.8Hz，1H)，3.35(s，3H)，2.93(s，3H)；13C NMR(甲醇-d4)δ：106.1，85.5，71.5，69.7，65.9，62.6，62.2，37.8，30.4；LCMS(ES-)：0.42分鐘，282.0(M-H)-。
[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]甲基氨基甲酸叔丁酯(31)
向5mL微波小瓶中的{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-雙(芐氧基)-1-[(芐氧基)甲基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}甲基氨基甲酸叔丁酯(l-o-3)(75mg，0.13mmol)在2-丙醇(1.0mL)和四氫呋喃(0.5mL)中的溶液中加入1-甲基-1,4-環(huán)己二烯(0.18ml，1.56mmol)，然后添加10％披鈀碳(50％濕的wt/wt，20.0mg)。密封小瓶，加熱至80℃4小時(shí)。4小時(shí)后，TLC(10％甲醇/二氯甲烷)顯示反應(yīng)未完成，但形成了所期望的產(chǎn)物。再加入1-甲基-1,4-環(huán)己二烯(0.18ml，1.6mmol)，再密封該反應(yīng)體系，加熱至80℃過夜(18小時(shí))?？傆?jì)22小時(shí)后，用甲醇稀釋該反應(yīng)體系，通過Life Sciences Acrodisc 25mm注射器式濾器過濾。減壓濃縮濾液。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(29.0mg，73％)，為固體。方法C：3分鐘運(yùn)行
LRMS[M+Na＝328]?；衔餅閮煞N旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的～1：1混合物：
旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體1：1H NMR(甲醇-d4)δ：5.22(br.s.，1H)，4.19(d，J＝10.6Hz，1H)，4.00(d，J＝10.6Hz，1H)，3.90-3.95(m，2H)，3.77-3.82(m，2H)，3.67(d，J＝7.6Hz，1H)，2.94(s，3H)，1.47(s，9H)
旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體2：1H NMR(甲醇-d4)δ：5.21(br.s.，1H)，4.05-4.10(m，1H)，4.00(d，J＝10.6Hz，1H)，3.90-3.95(m，2H)，3.77-3.82(m，2H)，3.67(d，J＝7.6Hz，1H)，2.94(s，3H)，1.47(s，9H)
(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(羥基甲基)-4-(甲基氨基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-2,3-二醇鹽酸鹽(32)
向[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]甲基氨基甲酸叔丁酯(31)(25.3mg，0.0829mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的溶液中加入4.0M氯化氫的二烷溶液(0.518ml，2.07mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。48小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。用乙酸乙酯(5mL)洗滌粗物質(zhì)，產(chǎn)生固體，用庚烷(10mL)稀釋，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為固體(30.0mg，130％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝206]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.63(s，1H)，3.90-3.97(m，3H)，3.84(s，2H)，3.78(d，J＝8.2Hz，1H)，3.10-3.20(m，1H)，2.84(s，3H)
N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-二甲基-1-(15-苯基-2,5,8,11,14-五氧雜十五烷-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-3)
向N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(羥基甲基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(I-e-1)(1200mg，4.39mmol)和13-碘-1-苯基-2,5,8,11-四氧雜十三烷(參見Synthetic Metals，162(23)，2163-2170；2012；7000mg，17.76mmol)在二氯甲烷(30.0mL)中的溶液中加入酸式硫酸四丁銨(2290mg，6.60mmol)，然后添加12.5M氫氧化鈉水溶液(30.0ml，380mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。64小時(shí)后，用水稀釋該反應(yīng)體系和二氯甲烷。分離各層，再用二氯甲烷萃取水層2次。用1N鹽酸洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。將得到的粗物質(zhì)加入乙酸乙酯(50mL)，攪拌30分鐘。過濾得到的沉淀。減壓濃縮濾液。使用CombiFlash Rf(ISCO RediSep Gold 80g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，即刻用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，然后用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(1267mg，53.5％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝562]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.13-7.45(m，5H)，5.22(d，J＝1.6Hz，1H)，4.55(s，2H)，4.30(d，J＝5.9Hz，1H)，4.15(t，J＝6.4Hz，1H)，3.89-3.97(m，2H)，3.85(d，J＝7.8Hz，1H)，3.73-3.79(m，2H)，3.58-3.71(m，16H)，1.98(s，3H)，1.48(s，3H)，1.33(s，3H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(15-苯基-2,5,8,11,14-五氧雜十五烷-1-基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(33)
將N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-二甲基-1-(15-苯基-2,5,8,11,14-五氧雜十五烷-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-3)(60.0mg，0.11mmol)在乙酸(4.0mL)、甲醇(1.0mL)和水(1.0mL)中的溶液加熱至70℃過夜。18小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(42.5mg，77％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝500]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.14-7.45(m，5H)，5.21(s，1H)，4.55(s，2H)，3.92-4.01(m，2H)，3.88(d，J＝4.3Hz，1H)，3.77(d，J＝7.8Hz，1H)，3.70(dd，J＝9.8，3.9Hz，1H)，3.58-3.68(m，18H)，1.98(s，3H)
N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-疊氮基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-2)
在5℃(冰/水)向攪拌的N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(羥基甲基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(I-e-1)(10.0g，36.59mmol，1.0eq)在N,N-二甲基甲酰胺(200ml)中的溶液中加入氫氧化鉀(8.21g，146.37mmol，4eq)。添加后，將該反應(yīng)混合物在5℃攪拌30分鐘。然后在5℃(冰/水)將1-疊氮基-2-{2-[2-(2-碘乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙烷(36.13g，109.78mmol，3.0eq)加到該反應(yīng)混合物中。將該反應(yīng)混合物在5℃(冰/水)攪拌30分鐘，將該反應(yīng)混合物加熱至27℃，在27℃攪拌18小時(shí)。18小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物傾入冰/水，用二氯甲烷(400ml)萃取3次。用水(400ml)、鹽水(500ml)將合并的有機(jī)層洗滌3次，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化粗產(chǎn)物，用二氯甲烷：甲醇＝100：1-40：1洗脫，得到標(biāo)題化合物(10.0g，57.6％)，為無色油狀物。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+45(甲酸)＝519]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.23(d，J＝2.0Hz，1H)，4.31(d，J＝5.9Hz，1H)，4.16(t，J＝6.6Hz，1H)，3.93-3.97(m，1H)，3.90-3.93(m，J＝2.0Hz，1H)，3.86(d，J＝7.8Hz，1H)，3.78(d，J＝3.9Hz，1H)，3.75(d，J＝1.6Hz，1H)，3.61-3.71(m，14H)，3.37(t，J＝4.9Hz，2H)，1.98(s，3H)，1.49(s，3H)，1.34(s，3H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-疊氮基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(34)
將N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-疊氮基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-2)(82.0mg，0.17mmol)在乙酸(6.0mL)、甲醇(1.45mL)和水(1.45mL)中的溶液加熱至70℃過夜。18小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為油狀物(43.3mg，58％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M-1＝433]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.21(d，J＝0.8Hz，1H)，3.98(d，J＝9.8Hz，1H)，3.94(d，J＝9.8Hz，1H)，3.89(d，J＝4.3Hz，1H)，3.78(d，J＝7.8Hz，1H)，3.72(dd，J＝10.1，4.3Hz，1H)，3.61-3.69(m，16H)，3.38(t，J＝4.9Hz，2H)，1.99(s，3H)
N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-二甲基-1-(2,5,8,11-四氧雜十四-13-烯-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-4)
向N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(羥基甲基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(I-e-1)(50.0mg，0.18mmol)和3-{2-[2-(2-碘乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙-1-烯(參見Organic Letters，5(11)，1887-1890；2003，139.0mg，0.463mmol)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液中加入酸式硫酸四丁銨(95.3mg，0.275mmol)，然后添加12.5M氫氧化鈉水溶液(0.75ml，9.4mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢柽^夜。18小時(shí)后，用水稀釋該反應(yīng)體系和二氯甲烷。分離各層，用二氯甲烷將水層萃取2次。用1N鹽酸、水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。用乙酸乙酯(5mL)稀釋得到的粗物質(zhì)，將得到的沉淀在室溫?cái)嚢?0分鐘。過濾沉淀，用乙酸乙酯(2x5mL)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液。使用CombiFlash Rf(ISCO RediSep Gold 4g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫。然后用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫柱，得到標(biāo)題化合物(13.6mg，17％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝468]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.92(ddt，J＝16.8，10.9，5.7Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.4，1.4Hz，1H)，5.23(d，J＝1.6Hz，1H)，5.16(dd，J＝10.3，1.0Hz，1H)，4.31(d，J＝5.9Hz，1H)，4.15(t，J＝6.4Hz，1H)，4.02(d，J＝5.5Hz，2H)，3.89-3.97(m，2H)，3.86(d，J＝7.8Hz，1H)，3.73-3.80(m，2H)，3.56-3.72(m，12H)，1.98(s，3H)，1.49(s，3H)，1.34(s，3H)。
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(2,5,8,11-四氧雜十四-13-烯-1-基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(35)
將N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-二甲基-1-(2,5,8,11-四氧雜十四-13-烯-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-4)(13.0mg，0.029mmol)在乙酸(1.0mL)、甲醇(0.25mL)和水(0.25mL)中的溶液加熱至70℃過夜。18小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(6.5mg，55％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝406]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.80-6.09(m，1H)，5.28(dd，J＝17.2，1.6Hz，1H)，5.21(d，J＝0.8Hz，1H)，5.16(dd，J＝10.5，1.2Hz，1H)，4.02(d，J＝5.5Hz，2H)，3.98(d，J＝9.8Hz，1H)，3.95(d，J＝10.1Hz，1H)，3.89(d，J＝3.9Hz，1H)，3.78(d，J＝8.2Hz，1H)，3.71(dd，J＝10.0，4.5Hz，1H)，3.57-3.68(m，14H)，1.99(s，3H)。
N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-二甲基-1-(2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-炔-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-5)
向N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-二甲基-1-(15-苯基-2,5,8,11,14-五氧雜十五烷-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(I-e-1)(100.0mg，0.366mmol)和3-{2-[2-(2-碘乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙-1-炔(參見Synthesis，(10)，1639-1644；2010，425.0mg，1.43mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入酸式硫酸四丁銨(191mg，0.550mmol)，然后添加12.5M氫氧化鈉水溶液(1.5ml，19mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢柽^夜。18小時(shí)后，用水稀釋該反應(yīng)體系和二氯甲烷。分離各層，用二氯甲烷將水層萃取2次。用1N鹽酸、水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。用乙酸乙酯(20mL)稀釋得到的粗物質(zhì)，將得到的沉淀在室溫?cái)嚢?0分鐘。過濾沉淀，用乙酸乙酯(2x15mL)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液。使用CombiFlash Rf(ISCO RediSep Gold 12g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫。然后用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫柱，得到標(biāo)題化合物(70.0mg，43％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝466]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.23(d，J＝1.6Hz，1H)，4.31(d，J＝5.9Hz，1H)，4.19(d，J＝2.3Hz，2H)，4.16(t，J＝6.4Hz，1H)，3.90-3.97(m，2H)，3.86(d，J＝7.8Hz，1H)，3.74-3.79(m，2H)，3.60-3.72(m，12H)，2.85(t，J＝2.3Hz，1H)，1.98(s，3H)，1.49(s，3H)，1.34(s，3H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-炔-1-基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(36)
將N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-二甲基-1-(2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-炔-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-5)(70.0mg，0.16mmol)在乙酸(4.0mL)、甲醇(1.0mL)和水(1.0mL)中的溶液加熱至70℃過夜。18小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(57.6mg，90％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝404]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.22(s，1H)，4.19(d，J＝1.8Hz，2H)，3.98(d，J＝10.0Hz，1H)，3.94(d，J＝10.0Hz，1H)，3.89(d，J＝4.1Hz，1H)，3.78(d，J＝8.2Hz，1H)，3.71(dd，J＝10.0，4.1Hz，1H)，3.60-3.69(m，14H)，2.86(s，1H)，1.99(s，3H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-氨基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(37)
使N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-疊氮基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(34)(40.0mg，0.092mmol)在乙醇(2mL)中的溶液通過H-立方體(條件：催化劑(10％披鈀碳(30x4mm)，流速：1毫升/分鐘，溫度：室溫，壓力＝全H2)。在通過H-立方體后，采集該溶液，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(17.2mg，46％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝409]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.21(s，1H)，3.92-4.00(m，2H)，3.89(d，J＝3.9Hz，1H)，3.78(d，J＝8.2Hz，1H)，3.69-3.74(m，1H)，3.61-3.69(m，14H)，3.56(t，J＝5.1Hz，2H)，2.85(t，J＝5.1Hz，2H)，1.99(s，3H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(13-羥基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(38)
使溶于甲醇(2mL)的N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-(15-苯基-2,5,8,11,14-五氧雜十五烷-1-基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺(33)(43mg，0.086mmol)通過H-立方體(條件：催化劑(20％氫氧化鈀碳(30x4mm)，流速：1毫升/分鐘，溫度：60℃，壓力＝全H2)。在通過H-立方體后，采集該溶液，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(32.2mg，91％)。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.21(s，1H)，3.98(d，J＝9.4Hz，1H)，3.95(d，J＝10.1Hz，1H)，3.89(d，J＝4.3Hz，1H)，3.78(d，J＝8.2Hz，1H)，3.71(dd，J＝9.8，4.3Hz，1H)，3.61-3.69(m，16H)，3.54-3.59(m，2H)，1.99(s，3H)。13C NMR(甲醇-d4)δ：174.1，102.6，84.3，73.8，72.5，71.7，71.7(2)，71.6，71.5，71.4，70.5，70.2，69.0，62.4，56.4，22.7
N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-羥基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-6)
使溶于甲醇(150mL)的N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-二甲基-1-(15-苯基-2,5,8,11,14-五氧雜十五烷-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-3)(2.897g，5.37mmol)通過H-立方體(條件：催化劑(10％披鈀碳(30x4mm)，流速：1毫升/分鐘，溫度：60℃，壓力＝全H2)。在通過H-立方體后，采集該溶液，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(2.5g，100％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝450]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.23(d，J＝1.6Hz，1H)，4.31(d，J＝5.9Hz，1H)，4.16(t，J＝6.4Hz，1H)，3.89-3.97(m，2H)，3.86(d，J＝7.8Hz，1H)，3.74-3.80(m，2H)，3.60-3.71(m，14H)，3.53-3.59(m，2H)，1.98(s，3H)，1.49(s，3H)，1.34(s，3H)
N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-二甲基-1-(13-氧代-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-6a)
向N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-羥基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-6)(175mg，0.389mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的溶液中加入戴斯-馬丁(Dess-Martin)試劑(354mg，0.584mmol)，產(chǎn)生混合物?！?0分鐘后，該反應(yīng)體系幾乎變均勻。3小時(shí)后，用二氯甲烷稀釋該反應(yīng)體系，通過C鹽墊過濾，用二氯甲烷洗滌。減壓濃縮濾液。使用CombiFlash Rf(RediSep 24g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫。減壓濃縮包含期望的產(chǎn)物的試管。用二氯甲烷(4mL)稀釋得到的物質(zhì)，用乙醚(10mL)稀釋，得到白色沉淀。潷析該溶液，用二氯甲烷(2mL)和乙醚(8mL)稀釋固體，第二次潷析。使?jié)龅娜芤和ㄟ^帶有0.45um尼龍膜的Life Science Acrodisc 25mm注射器式濾器。減壓濃縮采集的溶液，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(65.0mg，37％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝448]。1H NMR(氯仿-d)δ：9.74(s，1H)，5.63(d，J＝9.0Hz，1H)，5.34(d，J＝1.6Hz，1H)，4.23(d，J＝5.9Hz，1H)，4.17(s，2H)，4.09-4.15(m，1H)，4.01(t，J＝6.2Hz，1H)，3.97(d，J＝10.1Hz，1H)，3.77-3.85(m，3H)，3.68-3.76(m，5H)，3.61-3.68(m，7H)，2.03(s，3H)，1.56(s，3H)，1.36(s，3H)。
1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-酸(38A)
用2-甲基-2-丁烯(1.0mL)處理N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-二甲基-1-(13-氧代-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-6a)(60.0mg，0.13mmol)在四氫呋喃/叔丁醇(1.5mL/1.5mL)中的溶液，然后通過玻璃移液管加入亞氯酸鈉(169.4mg，2.01mmol)和磷酸鈉(250.0mg，2.58mmol)(一鈉和一水合物，250mg，2.58mmol)在水(1.5mL)中的溶液。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。24小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物傾入水，用乙酸乙酯萃取(3次)。棄去有機(jī)層。減壓濃縮水層，將得到的粗產(chǎn)物溶于甲醇(10mL)和二氯甲烷(100mL)，過濾得到的混合物。減壓濃縮濾液。將得到的物質(zhì)溶于甲醇(5mL)和二氯甲烷(50mL)，過濾得到的混合物。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g硅膠柱)純化濾液，用0-100％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物，為鈉鹽(40mg，無，67％)。LRMS[M+1＝424]；1H NMR(甲醇-d4)δ：5.24(s，1H)，4.14(s，2H)，3.97(d，J＝10.1Hz，2H)，3.90(d，J＝3.9Hz，1H)，3.81(d，J＝7.8Hz，1H)，3.63-3.77(m，15H)，2.01(s，3H)
甲磺酸1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基酯(l-e-7)
向甲磺酸1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基酯(l-e-6)(1117mg，2.49mmol)在二氯甲烷(12.4mL)中的溶液中加入三乙胺(1.05ml，7.45mmol)，使用冰浴冷卻至0℃，然后添加甲磺酰氯(0.232ml，2.98mmol)。將該反應(yīng)體系緩慢地溫?zé)嶂潦覝?，在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。1.5小時(shí)后，用水使反應(yīng)停止，萃取。分離各層，再用二氯甲烷萃取水層。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮粗產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物(1300.0mg，99.2％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝550]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.23(d，J＝2.0Hz，1H)，4.34-4.40(m，2H)，4.31(d，J＝5.9Hz，1H)，4.15(t，J＝6.4Hz，1H)，3.89-3.97(m，2H)，3.86(d，J＝7.8Hz，1H)，3.72-3.81(m，4H)，3.59-3.71(m，12H)，3.11(s，3H)，1.98(s，3H)，1.48(s，3H)，1.34(s，3H)
硫代乙酸S-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}酯(l-e-8)
向甲磺酸1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基酯(l-e-7)(125.0mg，0.237mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入硫代乙酸鉀(135mg，1.18mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。64小時(shí)后，用水稀釋該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯萃取3次。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(95.2mg，79.2％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝530]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.23(d，J＝1.6Hz，1H)，4.31(d，J＝5.9Hz，1H)，4.16(t，J＝6.4Hz，1H)，3.90-3.97(m，2H)，3.86(d，J＝7.8Hz，1H)，3.74-3.79(m，2H)，3.55-3.72(m，14H)，3.08(t，J＝6.6Hz，2H)，2.32(s，3H)，1.98(s，3H)，1.49(s，3H)，1.34(s，3H)
硫代乙酸S-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}酯(39)
將硫代乙酸S-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}酯(l-e-8)(81.0mg，0.16mmol)在乙酸(6.0mL)、甲醇(1.45mL)和水(1.45mL)中的溶液加熱至70℃過夜。18小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(53.7mg，72％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝468]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.23(s，1H)，4.00(d，J＝9.8Hz，1H)，3.97(d，J＝9.8Hz，1H)，3.91(d，J＝4.3Hz，1H)，3.80(d，J＝7.8Hz，1H)，3.73(dd，J＝10.1，4.3Hz，1H)，3.63-3.70(m，14H)，3.60(t，J＝6.6Hz，2H)，3.10(t，J＝6.4Hz，2H)，2.34(s，3H)，2.01(s，3H)
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羥基-1-[13-(吡啶-2-基二硫烷基)-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基]-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基}乙酰胺(40)
向硫代乙酸S-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}酯(39)(50mg，0.11mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加0.5M甲醇鈉的甲醇溶液(1.28ml，0.642mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?5分鐘。45分鐘后，加入乙酸(42mg，0.70mmol，0.040mL)，攪拌10分鐘。然后將甲醇溶液滴加到2,2'-二硫烷二基二吡啶(35.3mg，0.160mmol)在甲醇(2mL)和乙酸(1mL)的混合物中的攪拌溶液中。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?小時(shí)。2小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用CombiFlash Rf(RediSep Gold 4g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(31.4mg，55％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝557]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.39(d，J＝4.3Hz，1H)，7.94(d，J＝8.2Hz，1H)，7.83(td，J＝7.8，1.6Hz，1H)，7.22(dd，J＝6.8，5.3Hz，1H)，5.21(s，1H)，3.92-4.00(m，2H)，3.88(d，J＝4.3Hz，1H)，3.77(d，J＝7.8Hz，1H)，3.71(t，J＝6.0Hz，3H)，3.59-3.67(m，12H)，3.52-3.58(m，2H)，3.02(t，J＝6.0Hz，2H)，1.99(s，3H)
{1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-基}氨基甲酸叔丁酯(l-f-3)
有關(guān)(I-f-3)的合成，見Journal of Organic Chemistry，73(14)，5602-5605；2008。
1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-胺鹽酸(l-p-1)
向{1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-基}氨基甲酸叔丁酯(l-f-3)(3000mg，8.945mmol)在二氯甲烷(45mL)中的溶液中加入4.0M氯化氫的二烷溶液(20ml，89.4mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。18小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系，得到油狀物。向粗混合物中加入乙酸乙酯(20mL)，攪拌得到的混合物。加入庚烷(20mL)，將該混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。過濾該物質(zhì)，用乙酸乙酯洗滌濾餅，通過抽真空干燥2小時(shí)，得到標(biāo)題化合物(2140mg，88％)。1H NMR(甲醇-d4)δ：4.25(s，6H)，3.72(s，6H)，2.97(s，3H)。
[6-({1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-基}氨基)-6-氧代己基]氨基甲酸芐酯(l-q-1)
向6-{[(芐氧基)羰基]氨基}己酸(2910mg，11.0mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)和四氫呋喃(20.0mL)中的溶液中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(l-p-1)(2150mg，11.0mmol)和1-羥基苯并三唑(1480mg，11.0mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?小時(shí)，在此過程中，反應(yīng)體系變均勻。向攪拌的反應(yīng)混合物中一次加入純凈的1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-胺鹽酸(2130mg，7.84mmol)，然后添加N,N-二異丙基乙胺(5.46ml，31.4mmol)，將該反應(yīng)體系加熱至60℃24小時(shí)。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，攪拌24小時(shí).用水使反應(yīng)停止(150mL)，用乙酸乙酯萃取。再用乙酸乙酯將水層洗滌1次。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep80g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為油狀物，靜置時(shí)固化(3250mg，86％)。方法C：MassLynx\Acid_3.0Min.olp–LRMS[M+1＝483]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.10-7.46(m，5H)，5.06(s，2H)，4.14(d，J＝2.0Hz，6H)，3.79(s，6H)，3.03-3.20(m，2H)，2.83(t，J＝2.1Hz，3H)，2.18(t，J＝7.2Hz，2H)，1.59(五重峰，J＝7.3Hz，2H)，1.44-1.54(m，2H)，1.28-1.40(m，2H)
6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酸(l-r-1)
在氮?dú)鈿夥障聰嚢?,2'-二硫烷二基二吡啶(1490mg，6.75mmol)在乙醇(12.0mL)和乙酸(0.291mL)的混合物中的溶液，然后滴加在乙酸乙酯(6.0mL)中的6-硫烷基己酸(1000.0mg，6.75mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?小時(shí)。2小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用CombiFlash Rf(RediSep Gold 40g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯(2％乙酸調(diào)節(jié)劑)/庚烷梯度洗脫，得到粗制標(biāo)題化合物(1170mg)。使用CombiFlash Rf(RediSep Gold 40g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯(2％乙酸調(diào)節(jié)劑)/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為油狀物(544mg，31％)。
1-{[6-(吡啶-2-基二硫烷基)己?；鵠氧基}吡咯烷-2,5-二酮(l-s-1)
向6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酸(l-r-1)(705mg，2.2mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(306mg，2.66mmol)，然后加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(520mg，2.66mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢柽^夜。第二天早晨，用水使反應(yīng)停止，用二氯甲烷萃取3次。用飽和碳酸氫鈉、鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 40g Gold柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(364mg，47％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝355]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.39(d，J＝4.7Hz，1H)，7.85-7.90(m，1H)，7.77-7.84(m，1H)，7.21(dd，J＝6.6，5.5Hz，1H)，2.77-2.90(m，6H)，2.61(t，J＝7.2Hz，2H)，1.63-1.83(m，4H)，1.46-1.59(m，2H)
N-{1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-基}-6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酰胺(l-t-1)
向1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-胺鹽酸(l-p-1)(100.0mg，0.324mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.339ml，1.95mmol)，攪拌10分鐘，然后一次添加1-{[6-(吡啶-2-基二硫烷基)己?；鵠氧基}吡咯烷-2,5-二酮(l-s-1)(138mg，0.389mmol)，然后將該反應(yīng)體系加熱至60℃16小時(shí)。16小時(shí)后，用水稀釋該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯萃取3次。用水、鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(66.7mg，43％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝497]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.39(d，J＝4.7Hz，1H)，7.85-7.90(m，1H)，7.78-7.84(m，1H)，7.19-7.25(m，1H)，4.06-4.23(m，6H)，3.72-3.84(m，6H)，2.78-2.87(m，5H)，2.12-2.20(m，2H)，1.71(五重峰，J＝7.3Hz，2H)，1.57(五重峰，J＝7.3Hz，2H)，1.36-1.50(m，2H)
1-{[4-(芐氧基)丁?；鵠氧基}吡咯烷-2,5-二酮(l-u-1)
向4-(芐氧基)丁酸(1000mg，3.77mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(7.54mL)中的溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(521mg，4.52mmol)，然后加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(885mg，4.52mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢柽^夜。第二天早晨，用水使反應(yīng)停止，用二氯甲烷萃取3次。用飽和碳酸氫鈉、鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 40g Gold柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(1098mg，100％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝314]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.11-7.50(m，5H)，4.51(s，2H)，3.56(t，J＝6.0Hz，2H)，2.81(s，4H)，2.73(t，J＝7.2Hz，2H)，1.99(五重峰，J＝6.6Hz，2H)
4-(芐氧基)-N-{1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)-甲基]丙-2-基}丁酰胺(l-v-1)
向1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-胺三氟乙酸(l-p-1)(750.0mg，1.62mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(1.69ml，9.71mmol)，攪拌10分鐘，然后添加在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的1-{[4-(芐氧基)丁?；鵠氧基}吡咯烷-2,5-二酮(l-u-1)(566mg，1.94mmol)，然后將該反應(yīng)體系加熱至60℃72小時(shí)。72小時(shí)后，用水稀釋該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯萃取3次。用水、鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 24g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(495mg，無，74％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝412]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.21-7.41(m，5H)，4.51(s，2H)，4.12(d，J＝2.3Hz，6H)，3.78(s，6H)，3.51(t，J＝6.2Hz，2H)，2.82(t，J＝2.3Hz，3H)，2.28(t，J＝7.2Hz，2H)，1.79-1.94(m，2H)
(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(l-w-1)
在配備攪拌棒的50mL圓底燒瓶中加入{1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-基}氨基甲酸叔丁酯(l-f-3)(305.0mg，0.909mmol)，向其中加入在叔丁醇(12mL)中的N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-疊氮基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-2)(1433.0mg，3.020mmol)，接著加入水(5mL)，然后添加純凈的抗壞血酸鈉(1840mg，9.09mmol)，用氮?dú)鈱⒃摲磻?yīng)混合物吹掃10分鐘，然后在1mL水(去離子水)中添加硫酸銅(II)(147mg，0.909mmol)，在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。24小時(shí)后，通過將該反應(yīng)混合物加到飽和氯化銨(30mL)和濃氫氧化銨(3mL)中使反應(yīng)停止，用二氯甲烷(20mL)萃取3次。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 80g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為白色泡沫體(789.0mg，無，49.3％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+45-1＝1804]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.00(s，3H)，5.23(d，J＝1.6Hz，3H)，4.51-4.63(m，12H)，4.29(d，J＝5.9Hz，3H)，4.16(t，J＝6.4Hz，3H)，3.87-3.96(m，12H)，3.84(d，J＝7.8Hz，3H)，3.73-3.80(m，6H)，3.64-3.72(m，12H)，3.54-3.63(m，30H)，1.98(s，9H)，1.48(s，9H)，1.40(s，9H)，1.33(s，9H)
N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)-6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酰胺(l-x-1)
向N-{1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-基}-6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酰胺(l-t-1)(66.0mg，0.14mmol)和N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-疊氮基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-2)(219mg，0.459mmol)在叔丁醇(2mL)中的溶液中加入水(0.5ml，去離子水)。將抗壞血酸鈉(84.3mg，0.417mmol)作為固體加入，用氮?dú)鈱⒃摲磻?yīng)混合物吹掃5分鐘，然后添加硫酸銅(II)(6.73mg，0.0417mmol)的水(0.5ml，去離子水)溶液，在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。通過將該反應(yīng)混合物加到飽和氯化銨(20mL)和濃氫氧化銨(2mL)中使反應(yīng)停止，用二氯甲烷(15mL)萃取3次。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到不純的標(biāo)題化合物(105.0mg，無，40％)。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)(105.0mg)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(94.5mg，36％)。方法C：MassLynx\Acid_3.0Min.olp–LRMS[M+Na＝1921]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.38(d，J＝4.7Hz，1H)，7.97(s，3H)，7.82-7.88(m，1H)，7.78-7.81(m，1H)，7.20(t，J＝5.9Hz，1H)，5.23(s，3H)，4.52-4.62(m，12H)，4.29(d，J＝5.9Hz，3H)，4.15(t，J＝6.4Hz，3H)，3.86-3.96(m，12H)，3.81-3.85(m，3H)，3.72-3.80(m，12H)，3.54-3.71(m，36H)，2.79(t，J＝7.2Hz，2H)，2.16(t，J＝7.2Hz，2H)，1.98(s，9H)，1.64-1.73(m，2H)，1.50-1.57(m，2H)，1.48(s，9H)，1.42(d，J＝6.6Hz，2H)，1.32(s，9H)
{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸芐酯(l-y-1)
向配備攪拌棒的250mL圓底燒瓶中加入[6-({1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-基}氨基)-6-氧代己基]氨基甲酸芐酯(l-q-1)(880.0mg，1.82mmol)，向其中加入在叔丁醇(26mL)中的N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-疊氮基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]乙酰胺(l-e-2)(3075.0mg，6.8mmol)，接著添加水(12mL)，然后添加純凈的抗壞血酸鈉(3690mg，18.2mmol)，用氮?dú)鈱⒃摲磻?yīng)體系吹掃10分鐘。加入在1mL水中的硫酸銅(II)(294mg，1.82mmol)，在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。24小時(shí)后，通過將該反應(yīng)混合物加到飽和氯化銨(50mL)和濃氫氧化銨(5mL)中使反應(yīng)停止，用二氯甲烷(45mL)萃取3次。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 80g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用梯度洗脫0-20％甲醇/二氯甲烷，得到標(biāo)題化合物，為固體(1890.0mg，54.4％)和不純的標(biāo)題化合物。使用CombiFlash Rf(RediSep 80g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)(1270.0mg，36.5％)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，(607.0mg，17.5％)。標(biāo)題化合物的總收率為2.497g(72％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝1907]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.99(s，3H)，7.21-7.47(m，5H)，5.25(d，J＝1.6Hz，3H)，5.07(s，2H)，4.53-4.62(m，12H)，4.31(d，J＝5.9Hz，3H)，4.18(t，J＝6.4Hz，3H)，3.88-3.98(m，12H)，3.85(d，J＝7.8Hz，3H)，3.74-3.81(m，12H)，3.53-3.71(m，36H)，3.10(q，J＝6.2Hz，2H)，2.18(t，J＝7.2Hz，2H)，2.00(s，9H)，1.53-1.65(m，2H)，1.50(s，11H)，1.34(s，11H)
N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)-6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酰胺(41)
將N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)-6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酰胺(I-x-1)(94.5mg，0.0498mmol)在乙酸(4mL)、甲醇(1mL)和水(1.0mL)中的溶液加熱至70℃64小時(shí)。64小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮，得到不純的標(biāo)題化合物，為膠狀物(85.3mg)。使用反相色譜法，應(yīng)用如下條件純化粗物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(47.6mg，53.8％)。
純化條件：
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC純化。柱：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：80.0％H2O/20.0％乙腈線性至65％H2O/35％乙腈，8.5分鐘至0％H2O/100％MeCN，至9.0分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，9.0-10.0分鐘。流速：25毫升/分鐘，得到47.6mg標(biāo)題化合物，為膠狀物(保留時(shí)間2.87，觀測(cè)到的質(zhì)量＝890.4376)。
QC條件：
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；95.0％H2O/5.0％乙腈線性至50％H2O/50％乙腈，3.75分鐘，至5％H2O/95％乙腈，至4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘－5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘。保留時(shí)間＝2.87；觀察到的質(zhì)量＝890.4376。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M＝889]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.41(d，J＝4.7Hz，1H)，7.99(s，3H)，7.84-7.91(m，2H)，7.26(t，J＝5.9Hz，1H)，5.21(s，3H)，4.58(t，J＝5.0Hz，6H)，4.56(s，6H)，3.95(t，J＝8.8Hz，6H)，3.89(t，J＝5.0Hz，6H)，3.86-3.88(m，3H)，3.74-3.78(m，9H)，3.71(dd，J＝9.4，4.1Hz，3H)，3.54-3.67(m，42H)，2.80(t，J＝7.0Hz，2H)，2.16(t，J＝7.3Hz，2H)，1.99(s，9H)，1.68(五重峰，J＝7.3Hz，2H)，1.50-1.57(m，2H)，1.35-1.44(m，2H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-2-氨基丙氧基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺–鹽酸鹽(42)
將(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(l-w-1)(210mg，0.119mmol)在乙酸(8.0mL)、甲醇(2.0mL)和水(2.0mL)中的溶液加熱至70℃過夜。18小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)和甲醇，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用二氯甲烷(10mL)和甲醇(4mL)稀釋粗物質(zhì)，向其中加入4.0M氯化氫的二烷溶液(2.0ml，8mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。18小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。用乙酸乙酯(1mL)稀釋粗物質(zhì)，向其中加入庚烷(10mL)，減壓濃縮。然后將該物質(zhì)放入高度真空中18小時(shí)，得到標(biāo)題化合物，為固體(198.8mg，106％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝1561]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.13-8.21(m，3H)，5.22(s，3H)，4.71(s，9H)，4.65(d，J＝4.7Hz，6H)，3.92-4.00(m，12H)，3.90(d，J＝4.3Hz，3H)，3.58-3.80(m，51H)，2.02(s，9H)
6-疊氮基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(43)
向N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-2-氨基丙氧基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺–鹽酸鹽(42)(25mg，0.016mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0111ml，0.0635mmol)，攪拌10分鐘，然后加到純1-[(6-疊氮基己酰基)氧基]吡咯烷-2,5-二酮(參見PCT Int.Appl.，2011034951，24Mar 2011，6.05mg，0.0238mmol)中，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。然后將該反應(yīng)體系加熱至60℃32小時(shí)。32小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。用二甲亞砜(1mL)稀釋粗物質(zhì)，通過注射器式濾器過濾，使用反相色譜法，應(yīng)用如下看到的條件純化粗物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(6.2mg，23％)。
純化條件
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC純化(柱：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；90.0％H2O/10.0％乙腈線性至70％H2O/30％乙腈，10.5分鐘，70％H2O/30％乙腈線性至0％H2O/100％MeCN，0.5分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，11.0分鐘至12.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.77分鐘；觀察到的質(zhì)量＝839.7097。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝1678]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.00(s，3H)，5.21(s，3H)，4.58(t，J＝4.7Hz，6H)，4.57(s，6H)，3.95(t，J＝10.0Hz，6H)，3.85-3.92(m，9H)，3.74-3.80(m，9H)，3.71(dd，J＝10.0，4.1Hz，3H)，3.55-3.68(m，42H)，3.25(t，J＝6.5Hz，2H)，2.19(t，J＝7.3Hz，2H)，1.99(s，9H)，1.52-1.62(m，4H)，1.33-1.41(m，2H)
N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)庚-6-烯酰胺(44)
向N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-2-氨基丙氧基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺–鹽酸鹽(42)(25mg，0.016mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0111ml，0.0635mmol)，攪拌10分鐘，然后加到純1-(庚-6-烯?；趸?吡咯烷-2,5-二酮(參見Angewandte Chemie，國際版，51(25)，6144-6148，S6144/1-S6144/53；2012，5.36mg，0.0238mmol)中，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。然后將該反應(yīng)體系加熱至60℃32小時(shí)。32小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。用二甲亞砜(1mL)稀釋粗物質(zhì)，通過注射器式濾器過濾，使用反相色譜法，應(yīng)用如下看到的條件純化粗物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(4.9mg，19％)。
純化條件：
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC純化(柱：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；95.0％H2O/5.0％乙腈線性至55％H2O/45％乙腈，10.5分鐘，55％H2O/45％乙腈線性至0％H2O/100％MeCN，0.5分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，11.0分鐘至12.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件：
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.81；觀察到的質(zhì)量＝825.2381)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M-1＝1647]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.99(s，3H)，5.69-5.88(m，1H)，5.21(s，3H)，4.95(m，2H)，4.51-4.63(m，12H)，3.95(t，J＝9.7Hz，6H)，3.85-3.91(m，9H)，3.74-3.81(m，9H)，3.71(dd，J＝9.4，4.1Hz，3H)，3.54-3.68(m，42H)，2.17(t，J＝7.3Hz，2H)，2.01-2.09(m，2H)，1.99(s，9H)，1.52-1.61(m，2H)，1.39(五重峰，J＝7.5Hz，2H)
N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)庚-6-炔酰胺(45)
向N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-2-氨基丙氧基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺–鹽酸鹽(42)(25mg，0.016mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0111ml，0.0635mmol)，攪拌10分鐘，然后加到純1-(庚-6-炔酰基氧基)吡咯烷-2,5-二酮(參見PCT Int.Appl.，2007056389，2007年5月18日，5.31mg，0.0238mmol)中，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。然后將該反應(yīng)體系加熱至60℃32小時(shí)。32小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。用二甲亞砜(1mL)稀釋粗物質(zhì)，通過注射器式濾器過濾，使用反相色譜法，應(yīng)用如下看到的條件純化粗物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(5mg，19％)。
純化條件：
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC純化(柱：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；95.0％H2O/5.0％乙腈線性至55％H2O/45％乙腈，10.5分鐘，55％H2O/45％乙腈線性至0％H2O/100％MeCN，0.5分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，11.0分鐘至12.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件：
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.68；觀察到的質(zhì)量＝824.2237。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M＝823]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.99(s，3H)，5.21(s，3H)，4.59(t，J＝5.0Hz，6H)，4.56(s，6H)，3.95(t，J＝10.0Hz，6H)，3.85-3.92(m，9H)，3.74-3.79(m，9H)，3.71(dd，J＝10.0，4.1Hz，3H)，3.54-3.67(m，41H)，2.13-2.24(m，6H)，1.99(s，9H)，1.66(五重峰，J＝7.5Hz，2H)，1.50(五重峰，J＝7.3Hz，2H)
7-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-7-氧代庚酸乙酯(l-z-1)
向7-乙氧基-7-氧代庚酸(448mg，2.38mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6.0mL)中的溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(329mg，2.86mmol)，然后加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(559mg，2.86mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?2小時(shí)。72小時(shí)后，用水使反應(yīng)停止，用二氯甲烷萃取3次。用飽和碳酸氫鈉、鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 40g gold柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(426mg，63％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝308]。1H NMR(甲醇-d4)δ：4.12(q，J＝7.0Hz，2H)，2.83(s，4H)，2.64(t，J＝7.2Hz，2H)，2.33(t，J＝7.2Hz，2H)，1.74(五重峰，J＝7.4Hz，2H)，1.58-1.68(m，2H)，1.40-1.53(m，2H)，1.24(t，J＝7.0Hz，3H)。
7-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-7-氧代庚酸(鈉鹽)(46)
向N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-2-氨基丙氧基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基]乙酰胺–鹽酸鹽(42)(30.0mg，0.019mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0133ml，0.0762mmol)，攪拌10分鐘，然后加到純7-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-7-氧代庚酸乙酯(I-z-1)(7.4mg，0.026mmol)中，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。然后將該反應(yīng)體系加熱至60℃32小時(shí)。32小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用乙醇(1mL)和水(0.03mL)洗滌粗物質(zhì)，然后添加12.5M氫氧化鈉水溶液(0.015ml，0.190mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?小時(shí)。3小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。用二甲亞砜(1mL)稀釋粗物質(zhì)，通過注射器式濾器過濾。使用反相色譜法，應(yīng)用如下條件純化該溶液，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(3.7mg，11％)。
純化條件
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC純化(柱：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；90.0％H2O/10.0％乙腈線性至70％H2O/30％乙腈，10.5分鐘，70％H2O/30％乙腈線性至0％H20/100％MeCN，0.5分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，11.0分鐘至12.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.58分鐘；觀察到的質(zhì)量＝839.7097)。方法C：MassLynx\Acid_3.0Min.olp–LRMS[M+1＝1681]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.99(s，3H)，5.21(s，3H)，4.58(t，J＝4.7Hz，6H)，4.56(s，6H)，3.95(t，J＝9.7Hz，6H)，3.89(dt，J＝9.8，4.8Hz，9H)，3.74-3.79(m，9H)，3.71(dd，J＝10.0，4.1Hz，3H)，3.53-3.67(m，42H)，2.25(t，J＝7.3Hz，2H)，2.17(t，J＝7.3Hz，2H)，1.99(s，9H)，1.58(d五重峰，J＝14.3，7.3Hz，4H)，1.31-1.39(m，2H)
{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸芐酯(47)
將{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸芐酯(l-y-1)(308mg，0.162mmol)在乙酸(6mL)、甲醇(1.5mL)和水(1.5mL)中的溶液加熱至70℃64小時(shí)。64小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(286mg，無，99％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝1787]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.98(s，3H)，7.19-7.43(m，5H)，5.21(s，3H)，5.06(s，2H)，4.50-4.66(m，12H)，3.95(dd，J＝9.6，5.7Hz，6H)，3.86-3.91(m，9H)，3.74-3.78(m，9H)，3.71(dd，J＝10.0，4.1Hz，3H)，3.54-3.67(m，42H)，3.03-3.12(m，2H)，2.11-2.24(m，2H)，1.98(s，9H)，1.51-1.63(m，2H)，1.43-1.51(m，2H)，1.33(d，J＝6.6Hz，2H)。
6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺乙酸鹽(48)
將{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸芐酯(47)(640mg，0.358mmol)溶于甲醇(20.0mL)和乙酸(0.041ml，0.717mmol)。然后使用10％披鈀碳(小柱體)，使用下列參數(shù)(溫度＝50℃，流速＝1.0毫升/分鐘，壓力＝全H2(1巴))使該溶液通過H-立方體。采集該溶液，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為白色泡沫體(572mg，93％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝1652]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.00(s，3H)，5.21(s，3H)，4.59(t，J＝4.9Hz，6H)，4.56(s，6H)，3.95(d，J＝9.8Hz，6H)，3.85-3.92(m，9H)，3.74-3.79(m，9H)，3.69-3.74(m，3H)，3.55-3.69(m，42H)，2.91(t，J＝7.6Hz，2H)，2.20(t，J＝7.2Hz，2H)，1.99(s，9H)，1.90(s，3H)，1.52-1.68(m，4H)，1.34-1.43(m，2H)
N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}-6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酰胺
在室溫向6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(48)(60mg，0.036mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氫呋喃(0.5mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0253ml，0.145mmol)和1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮(12.3mg，0.040mmol)16小時(shí)。16小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用反相色譜法，應(yīng)用如下條件純化粗物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(15.4mg，23％)。
純化條件
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC柱純化：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：80.0％H2O/20.0％乙腈線性至75％H2O/25％乙腈，10.5分鐘至0％H2O/100％MeCN，至11.0分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，11.0至12.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.69分鐘；觀察到的質(zhì)量＝923.4907。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M-1＝1843]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.00(s，3H)，6.80(s，2H)，5.21(s，3H)，4.59(t，J＝5.0Hz，6H)，4.56(s，6H)，3.95(t，J＝9.7Hz，6H)，3.90(t，J＝5.0Hz，6H)，3.88(d，J＝4.1Hz，3H)，3.74-3.79(m，9H)，3.71(dd，J＝10.0，4.1Hz，3H)，3.55-3.68(m，42H)，3.48(t，J＝7.0Hz，2H)，3.12(t，J＝7.0Hz，2H)，2.11-2.23(m，4H)，1.99(s，9H)，1.53-1.66(m，6H)，1.48(五重峰，J＝7.2Hz，2H)，1.24-1.36(m，4H)
N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}-6-[(溴乙?；?氨基]己酰胺(50)
在室溫向6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(48)(60mg，0.036mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氫呋喃(0.5mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0253ml，0.145mmol)和6-[(溴乙酰基)氨基]己酸五氟苯酯(參見Chemistry–歐洲期刊，14(16)，4939-4947；2008，16.7mg，0.0400mmol)16小時(shí)。16小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用反相色譜法，應(yīng)用如下條件純化粗物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(4.4mg，6.4％)。觀察到的質(zhì)量：944.1543
純化條件
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC柱純化：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：80.0％H2O/20.0％乙腈線性至75％H2O/25％乙腈，10.5分鐘至0％H2O/100％MeCN，至11.0分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，11.0-12.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.64分鐘；觀察到的質(zhì)量＝944.1543。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝1886]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.99(s，3H)，5.21(s，3H)，4.57-4.62(m，6H)，4.56(s，6H)，3.92-3.98(m，6H)，3.83-3.91(m，10H)，3.80(s，2H)，3.69-3.79(m，12H)，3.54-3.68(m，43H)，3.13(t，J＝6.7Hz，2H)，2.18(d，J＝6.5Hz，4H)，1.98(s，9H)，1.59-1.67(m，2H)，1.51-1.59(m，4H)，1.48(br.s.，2H)，1.27-1.41(m，4H)
{(1S)-1-環(huán)戊基-2-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙基}氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(l-aa-1)
在5-10℃將N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺(247mg，1.2mmol)分次加到(2S)-環(huán)戊基{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}乙醇酸(380mg，1.04mmol)和N-羥基琥珀酰亞胺(137.6mg，1.2mmol)在無水四氫呋喃(40mL)中的溶液中。添加后，將該混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。將該混合物冷卻至-20℃，然后過濾以除去副產(chǎn)物。用冷四氫呋喃洗滌濾餅，濃縮濾液至干，用閃蒸塔純化(用石油醚：乙酸乙酯100：10－100：50洗脫)，得到標(biāo)題化合物(380mg，79％)。
N～5～-氨基甲?；?N～2～-[(2S)-2-環(huán)戊基-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}乙?；鵠-L-鳥氨酸(l-ab-1)
在0℃向(2S)-2-氨基-5-(氨基甲酰基氨基)戊酸(151mg，0.86mmol)和碳酸氫鈉(72.5mg，0.86mmol)在水(15mL)中的溶液中加入四氫呋喃(10mL)。在氮?dú)鈿夥障孪虻玫降幕旌衔镏械渭觷(1S)-1-環(huán)戊基-2-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙基}氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(l-aa-1)(380mg，0.82mmol)在1,2-二甲氧基-乙烷(15mL)中的溶液。添加后，將該混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。用甲基叔丁基醚(50mL)將該反應(yīng)混合物洗滌4次。棄去有機(jī)相，用鹽酸水溶液(1M)將水相酸化至pH＝3-4。使用氯仿/異丙醇(4：1)(50mL)萃取該溶液6次。用硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，濃縮至干，得到標(biāo)題化合物(403mg，93.7％)，為白色固體。
[(1S)-2-{[(2S)-5-(氨基甲?；被?-1-{[4-(羥基甲基)苯基]氨基}-1-氧代戊-2-基]氨基}-1-環(huán)戊基-2-氧代乙基]氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(l-ac-1)
向N～5～-氨基甲?；?N～2～-[(2S)-2-環(huán)戊基-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}乙?；鵠-L-鳥氨酸(l-ab-1)(500mg，0.95mmol)和4-氨基芐醇(470mg，3.82mmol)在二氯甲烷/甲醇(30mL/15mL)中的溶液中加入N-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二氫喹啉(708mg，2.86mmol)。然后將該反應(yīng)混合物在室溫在黑暗中攪拌過夜。第二天早晨，減壓濃縮該反應(yīng)體系，用甲基叔丁基醚(100mL×3)洗滌殘余物。然后通過制備型-HPLC純化濾餅(參見如下條件)，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(31mg，5.1％)。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.95(s，1H)，8.09(d，1H)，7.90-7.88(d，2H)，7.73-7.71(t，2H)，7.55-7.53(t，2H)，7.41(t，2H)，7.34-7.30(t，2H)，7.24-7.22(d，2H)，5.96(t，1H)，5.39(s，2H)，5.11-5.08(t，1H)，4.44-4.42(d，3H)，4.32-4.23(m，3H)，3.96-3.92(t，1H)，3.01-3.00(m，3H)，2.15-2.13(m，1H)，1.66-1.24(m，12H)，C35H41N5O6的m/z：628.4(M+H)+，保留時(shí)間：4.213分鐘
純化條件：
柱：DIKMA Diamonsil(2)C18 200*20mm*5um；流動(dòng)相：30％乙腈的水溶液(0.1％TFA)至50％乙腈的水溶液(0.1％TFA)；波長＝220nm；后處理：濃縮和凍干。
QC條件：
柱：Ultimate XB-C18,3*50mm，3um；保留時(shí)間：4.33分鐘；流動(dòng)相：A，水(2.7mL TFA的4L水溶液)B，乙腈(2.5mL TFA的4L乙腈溶液)洗脫梯度1％-100％；波長：220nm；ee值：100％。柱：Chiralcel OD-3 50*4.6mm I.D.，3um；保留時(shí)間：1.923分鐘；流動(dòng)相：在CO2中的乙醇(0.05％DEA)5％-40％；流速：2.5mL/分鐘；波長：254nm；ee值＝100％。柱：AD-3 50*4.6mm I.D.，3um；保留時(shí)間：1.981分鐘；流動(dòng)相：在CO2中的乙醇(0.05％DEA)5％-40％；流速：2.5毫升/分鐘；波長：220nm
N～2～-[(2S)-2-氨基-2-環(huán)戊基乙?；鵠-N～5～-氨基甲?；?N-[4-(羥基甲基)苯基]-L-鳥氨酰胺(l-ad-1)
在5℃在氮?dú)鈿夥障孪驍嚢璧腫(1S)-2-{[(2S)-5-(氨基甲?；被?-1-{[4-(羥基甲基)苯基]氨基}-1-氧代戊-2-基]氨基}-1-環(huán)戊基-2-氧代乙基]氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(l-ac-1)(500mg，0.797mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中滴加哌啶(4mL)。將該混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。將該反應(yīng)體系濃縮至干。用二氯甲烷(20mL)洗滌粗產(chǎn)物，過濾，真空干燥濾餅，得到標(biāo)題化合物(300mg，93.1％)，為固體，不經(jīng)純化用于下一步。
N-[(1S)-2-{[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-1-{[4-(羥基甲基)苯基]氨基}-1-氧代戊-2-基]氨基}-1-環(huán)戊基-2-氧代乙基]-6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酰胺(l-ae-1)
在3℃在氮?dú)鈿夥障孪驍嚢璧腘～2～-[(2S)-2-氨基-2-環(huán)戊基乙?；鵠-N～5～-氨基甲?；?N-[4-(羥基甲基)苯基]-L-鳥氨酰胺(l-ad-1)(300mg，0.74mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中的溶液中加入1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮(272mg，0.889mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將該反應(yīng)體系滴入甲基叔丁基醚(250mL)，在室溫?cái)嚢?0分鐘，過濾，濃縮濾餅至干，得到標(biāo)題化合物(300mg，67.8％)，為固體，不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步。
N～5～-氨基甲?；?N～2～-[(2S)-2-環(huán)戊基-2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己?；鵠氨基}乙?；鵠-N-[4-({[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}甲基)苯基]-L-鳥氨酰胺(l-af-1)
在3℃在氮?dú)鈿夥障孪驍嚢璧腘-[(1S)-2-{[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-1-{[4-(羥基甲基)苯基]氨基}-1-氧代戊-2-基]氨基}-1-環(huán)戊基-2-氧代乙基]-6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酰胺(l-ae-1)(300mg，0.740mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中的溶液中加入碳酸雙(4-硝基苯基)酯(900mg，2.96mmol)和N,N-二異丙基乙胺(390mg，2.96mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢柽^夜。將該反應(yīng)體系滴入甲基叔丁基醚(60mL)，在室溫?cái)嚢?0分鐘，過濾，用甲基叔丁基醚(100mL)洗滌濾餅。真空干燥粗產(chǎn)物至干。通過閃蒸塔色譜法純化粗產(chǎn)物，用二氯甲烷：甲醇100：1-94：6洗脫，得到標(biāo)題化合物(50mg，17.7％)，為固體。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ10.09(br，1H)，8.33(d，2H)，8.13(d，1H)，7.93(d，1H)，7.67-7.41(m，6H)，7.01(s，2H)，5.98(br，1H)，5.43(s，2H)，5.25(s，2H)，4.39(m，1H)，4.23-4.19(m，1H)，3.37(m，1H)，3.03-2.96(m，2H)，2.14-2.11(m，3H)，1.70-1.19(m，19H)。LC-MS：m/z C37H45N7O11：764.3(M+H)+；保留時(shí)間：0.823分鐘。
{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸4-{[(2R)-5-(氨基甲?；被?-2-{[(2R)-2-環(huán)戊基-2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己?；鵠氨基}乙?；鵠氨基}戊?；鵠氨基}芐酯(51)
在室溫向6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(48)(45mg，0.027mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氫呋喃(0.3mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.019ml，0.109mmol)和N～5～-氨基甲?；?N～2～-[(2S)-2-環(huán)戊基-2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己?；鵠氨基}乙?；鵠-N-[4-({[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}甲基)苯基]-L-鳥氨酰胺(I-af-1)(20.8mg，0.0272mmol)18小時(shí)。18小時(shí)后，取出樣品，UPLC顯示形成了所期望的產(chǎn)物。減壓濃縮粗反應(yīng)混合物。通過反相色譜法，應(yīng)用如下條件純化得到的粗物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(21.7mg，35％)。
純化條件：
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反向HPLC柱純化：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：75.0％H2O/25.0％乙腈線性至65％H2O/35％乙腈，10.5分鐘至0％H2O/100％MeCN，至11.0分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，11.0-12.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件：
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.99分鐘；保留時(shí)間＝1.99分鐘；觀察到的質(zhì)量＝1139.1254。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M＝1138]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.99(s，3H)，7.57(d，J＝8.2Hz，2H)，7.30(d，J＝8.2Hz，2H)，6.79(s，2H)，5.21(s，3H)，5.01(s，2H)，4.55-4.64(m，12H)，4.51(dd，J＝9.0，5.1Hz，1H)，4.43(q，J＝7.2Hz，1H)，4.16(d，J＝9.4Hz，1H)，3.95(d，J＝9.8Hz，6H)，3.85-3.91(m，9H)，3.74-3.79(m，9H)，3.71(dd，J＝9.8，4.3Hz，3H)，3.54-3.67(m，41H)，3.47(t，J＝7.0Hz，2H)，3.16-3.26(m，1H)，3.10-3.16(m，1H)，3.07(t，J＝6.8Hz，2H)，2.24(q，J＝7.7Hz，3H)，2.16(t，J＝7.4Hz，2H)，1.99(s，9H)，1.85-1.95(m，1H)，1.42-1.84(m，16H)，1.37(t，J＝7.0Hz，2H)，1.23-1.34(m，5H)
N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)-3,19-二氧代-1-(吡啶-2-基二硫烷基)-7,10,13,16-四氧雜-4,20-二氮雜二十六-26-酰胺(52)
向6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺乙酸鹽(48)(70.0mg，0.041mmol)和N-{15-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-15-氧代-3,6,9,12-四氧雜十五烷-1-基}-3-(吡啶-2-基二硫烷基)丙酰胺(27.5mg，0.0491mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)和四氫呋喃(0.6mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0285ml，0.164mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。18小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用反相色譜法，應(yīng)用如下條件純化粗物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(47.7mg，56％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[1/3M+1＝699]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.47(d，J＝4.7Hz，1H)，8.01(s，3H)，7.93(d，J＝3.5Hz，2H)，7.30-7.38(m，1H)，5.21(s，3H)，4.57-4.62(m，6H)，4.57(s，6H)，3.92-3.99(m，6H)，3.89(dd，J＝10.7，4.9Hz，9H)，3.74-3.80(m，9H)，3.72(dd，J＝9.8，4.7Hz，6H)，3.51-3.68(m，55H)，3.35-3.41(m，2H)，3.14(t，J＝7.0Hz，2H)，3.10(t，J＝6.8Hz，2H)，2.64(t，J＝7.0Hz，2H)，2.43(t，J＝6.0Hz，2H)，2.17(t，J＝7.4Hz，2H)，1.99(s，9H)，1.52-1.61(m，2H)，1.43-1.51(m，2H)，1.27-1.38(m，2H)
純化條件
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC柱純化：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：80.0％H2O/20.0％乙腈線性至70％H2O/30％乙腈，8.5分鐘至0％H2O/100％MeCN，至9.0分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，9.0-10.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.78分鐘；觀察到的質(zhì)量＝699.6404
N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)-3,31-二氧代-1-(吡啶-2-基二硫烷基)-7,10,13,16,19,22,25,28-八氧雜-4,32-二氮雜三十八-38-酰胺(53)
向6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺乙酸鹽(48)(70.0mg，0.041mmol)和N-{27-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-27-氧代-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷(heptacos)-1-基}-3-(吡啶-2-基二硫烷基)丙酰胺(30.1mg，0.041mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)和四氫呋喃(0.6mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0285ml，0.164mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。18小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用反相色譜法，應(yīng)用如下條件純化粗物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(59.2mg，64％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[1/3M＝757]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.47(d，J＝5.1Hz，1H)，8.01(s，3H)，7.92(d，J＝3.5Hz，2H)，7.30-7.39(m，1H)，5.21(s，3H)，4.57-4.62(m，6H)，4.57(s，6H)，3.92-3.99(m，6H)，3.86-3.92(m，9H)，3.77(s，9H)，3.69-3.74(m，6H)，3.50-3.68(m，73H)，3.14(t，J＝7.0Hz，2H)，3.10(t，J＝7.0Hz，2H)，2.64(t，J＝6.8Hz，2H)，2.43(t，J＝6.0Hz，2H)，2.17(t，J＝7.4Hz，2H)，1.99(s，9H)，1.53-1.63(m，2H)，1.42-1.52(m，2H)，1.32(dt，J＝15.1，7.5Hz，2H)
純化條件
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC柱純化：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：80.0％H2O/20.0％乙腈線性至70％H2O/30％乙腈，8.5分鐘至0％H2O/100％MeCN，至9.0分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，9.0-10.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.85分鐘；觀察到的質(zhì)量＝758.405
6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(l-ag-1)
將{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸芐酯(l-y-1)(1200mg，0.63mmol)溶于甲醇(30mL)。然后使用10％披鈀碳(小柱體)，使用下列參數(shù)(溫度＝50℃，流速＝1.0毫升/分鐘，壓力＝全H2(1巴))使該溶液通過H-立方體。采集該溶液。取出樣品，UPLC顯示原料剩余。使用上述參數(shù)使該反應(yīng)體系第二次通過H-立方體。減壓濃縮采集的溶液，得到標(biāo)題化合物，為白色泡沫體(1039mg，93％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M＝886]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.99(s，3H)，5.23(d，J＝1.6Hz，3H)，4.45-4.62(m，12H)，4.29(d，J＝5.9Hz，3H)，4.16(t，J＝6.4Hz，3H)，3.87-3.98(m，12H)，3.73-3.85(m，15H)，3.54-3.70(m，36H)，2.87(t，J＝7.6Hz，2H)，2.20(t，J＝7.2Hz，2H)，1.98(s，9H)，1.53-1.69(m，4H)，1.48(s，9H)，1.34-1.41(m，2H)，1.33(s，9H)
N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}-6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酰胺(l-ag-2)
向6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(l-ag-1)(105.0mg，0.0593mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氫呋喃(0.5mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.031ml，0.178mmol)，攪拌10分鐘，然后加到1-{[6-(吡啶-2-基二硫烷基)己?；鵠氧基}吡咯烷-2,5-二酮(l-s-1)(25.2mg，0.0711mmol)中，然后將該反應(yīng)體系加熱至室溫16小時(shí)。16小時(shí)后，用水(15mL)和鹽水(5mL)稀釋該反應(yīng)體系，用二氯甲烷(20mL)萃取3次。用水(20mL)、鹽水(20mL)洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(59.6mg，50％)。方法C：MassLynx\Acid_3.0Min.olp–LRMS[1/2M+1＝1006]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.39(d，J＝4.7Hz，1H)，7.98(s，3H)，7.83-7.87(m，1H)，7.77-7.83(m，1H)，7.21(t，J＝5.9Hz，1H)，5.23(d，J＝1.6Hz，3H)，4.50-4.64(m，12H)，4.29(d，J＝5.9Hz，3H)，4.16(t，J＝6.4Hz，3H)，3.87-3.96(m，12H)，3.84(d，J＝7.8Hz，3H)，3.71-3.79(m，15H)，3.54-3.70(m，31H)，3.18-3.28(m，2H)，3.13(q，J＝6.5Hz，2H)，2.82(t，J＝7.2Hz，2H)，2.12-2.23(m，4H)，1.98(s，9H)，1.71(五重峰，J＝7.3Hz，2H)，1.51-1.64(m，6H)，1.44-1.51(m，11H)，1.28-1.34(m，11H)
N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}-6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酰胺(54)
將N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}-6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酰胺(l-ag-2)(59mg，0.029mmol)在乙酸(4mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)中的溶液加熱至70℃24小時(shí)。24小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮，得到粗標(biāo)題化合物(50.5mg，91％)。使用反相色譜法，應(yīng)用如下條件純化粗物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(25.2mg，45％)。
純化條件：
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC柱純化：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：80.0％H2O/20.0％乙腈線性至70％H2O/30％乙腈，10.5分鐘至0％H2O/100％MeCN，至11.0分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，11.0-12.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件：
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.96分鐘；觀察到的質(zhì)量＝946.5137。方法C：MassLynx\Acid_3.0Min.olp–LRMS[1/2M+1＝946]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.45(d，J＝5.1Hz，1H)，8.01(s，3H)，7.94(d，J＝3.1Hz，2H)，7.29-7.36(m，1H)，5.21(s，3H)，4.57-4.62(m，6H)，4.57(s，6H)，3.92-4.00(m，6H)，3.89(dd，J＝10.7，4.9Hz，9H)，3.74-3.80(m，9H)，3.71(dd，J＝10.1，4.3Hz，3H)，3.53-3.68(m，42H)，3.13(t，J＝6.8Hz，2H)，2.85(t，J＝7.2Hz，2H)，2.17(t，J＝7.2Hz，4H)，1.99(s，9H)，1.71(五重峰，J＝7.4Hz，2H)，1.52-1.64(m，4H)，1.45(td，J＝15.0，7.8Hz，4H)，1.26-1.37(m，2H)
{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙酯(l-ag-3)
在室溫向6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(l-ag-1)(61.4mg，0.0347mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)和四氫呋喃(0.3mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0241ml，0.139mmol)和2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙基碳酸4-硝基苯酯(參見European Journal of Medicinal Chemistry，82，355-362；2014，18.0mg，0.051mmol)16小時(shí)。16小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)混合物。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(57.4mg，無，83％)。方法C：MassLynx\Acid_3.0Min.olp–LRMS[1/2M+1＝993]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.40(d，J＝4.3Hz，1H)，7.98(s，3H)，7.83-7.89(m，1H)，7.75-7.83(m，1H)，7.15-7.25(m，1H)，5.22(d，J＝1.2Hz，3H)，4.51-4.64(m，12H)，4.29(d，J＝5.9Hz，3H)，4.23(t，J＝6.2Hz，2H)，4.15(t，J＝6.4Hz，3H)，3.86-3.97(m，12H)，3.83(d，J＝7.8Hz，3H)，3.72-3.79(m，12H)，3.53-3.69(m，36H)，3.05(t，J＝5.7Hz，4H)，2.17(t，J＝7.0Hz，2H)，1.98(s，9H)，1.51-1.61(m，2H)，1.48(s，11H)，1.33(s，11H)
{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙酯(55)
將{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙酯(l-ag-3)(57.4mg，0.0289mmol)在乙酸(4.0mL)、甲醇(1.0mL)和水(1.0mL)中的溶液加熱至70℃24小時(shí)。24小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。使用反相色譜法，應(yīng)用如下條件純化粗物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(29.8mg，55％)。
純化條件：
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC柱純化：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：80.0％H2O/20.0％乙腈線性至70％H2O/30％乙腈，10.5分鐘至0％H2O/100％MeCN，至11.0分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，11.0-12.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件：
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.91分鐘；觀察到的質(zhì)量＝933.4313。方法C：MassLynx\Acid_3.0Min.olp–LRMS[1/2M+1＝933]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.46(d，J＝4.7Hz，1H)，8.01(s，3H)，7.86-7.97(m，2H)，7.32(t，J＝5.3Hz，1H)，5.21(s，3H)，4.55-4.62(m，12H)，4.24(t，J＝6.0Hz，2H)，3.92-3.99(m，6H)，3.85-3.92(m，9H)，3.74-3.79(m，9H)，3.71(dd，J＝9.8，4.3Hz，3H)，3.52-3.68(m，42H)，2.99-3.15(m，4H)，2.17(t，J＝7.2Hz，2H)，1.99(s，9H)，1.56(五重峰，J＝7.4Hz，2H)，1.42-1.50(m，2H)，1.24-1.38(m，2H)
1-{[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)己?；鵠氧基}吡咯烷-2,5-二酮(l-ah-1)
用氮?dú)鈱⒙热?三苯膦)銠(I)，威爾金斯催化劑(39.7mg，0.0429mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的溶液吹掃10分鐘，然后滴加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷(299mg，2.34mmol，0.340mL)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?0分鐘。將己烯-5-酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(參見Journal of the American Chemical Society，132(35)，12197-12199；2010，412mg，1.95mmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)，并滴加。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。第二天早晨，用二氯甲烷稀釋該反應(yīng)體系，用水洗滌。用硫酸鎂干燥有機(jī)層，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 24g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到粗制標(biāo)題化合物(366mg)。使用CombiFlash Rf(RediSep 24g Gold硅膠柱)純化粗標(biāo)題化合物，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為油狀物(271.0mg，無，41.0％)。1H NMR(甲醇-d4)δ：2.83(s，4H)，2.61(t，J＝7.4Hz，2H)，1.71(五重峰，J＝7.1Hz，2H)，1.38-1.50(m，4H)，1.24(s，12H)，0.75(t，J＝6.8Hz，2H)。
N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)己酰胺(l-ag-4)
向6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(l-ag-1)(200mg，0.113mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)和四氫呋喃(0.6mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0786ml，0.451mmol)，然后添加1-{[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)己?；鵠氧基}吡咯烷-2,5-二酮(l-ah-1)(57.4mg，0.169mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。24小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(209.0mg，無，93％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M＝998]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.98(s，3H)，5.23(d，J＝1.6Hz，3H)，4.52-4.62(m，12H)，4.29(d，J＝5.9Hz，3H)，4.16(t，J＝6.4Hz，3H)，3.87-3.97(m，12H)，3.84(d，J＝8.2Hz，3H)，3.72-3.79(m，12H)，3.54-3.69(m，36H)，3.13(q，J＝6.6Hz，2H)，2.16(q，J＝7.3Hz，4H)，1.98(s，9H)，1.52-1.66(m，4H)，1.44-1.51(m，11H)，1.35-1.43(m，2H)，1.27-1.35(m，13H)，1.18-1.25(m，12H)，0.73(t，J＝7.6Hz，2H)
N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)己酰胺(56)
將N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)己酰胺(l-ag-4)(104.0mg，0.0521mmol)在乙酸(4mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)中的溶液加熱至70℃24小時(shí)。24小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮，得到粗制標(biāo)題化合物(112.0mg，115％)。使用反相色譜法純化部分粗標(biāo)題化合物(52.7mg)，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(18.2mg，19％)。
純化條件
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC柱純化：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：80.0％H2O/20.0％乙腈線性至65％H2O/35％乙腈，8.5分鐘至0％H2O/100％MeCN，至9.0分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，9.0-10.0分鐘。流速：25毫升/分鐘。
QC條件
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝2分鐘；觀察到的質(zhì)量＝938.9628)。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.01(s，3H)，5.21(s，3H)，4.51-4.66(m，12H)，3.95(dd，J＝9.4，5.9Hz，6H)，3.89(dd，J＝11.7，4.7Hz，9H)，3.74-3.81(m，9H)，3.71(dd，J＝9.8，4.3Hz，3H)，3.52-3.68(m，42H)，3.13(t，J＝6.8Hz，2H)，2.17(q，J＝7.0Hz，4H)，1.99(s，9H)，1.53-1.66(m，4H)，1.45-1.52(m，2H)，1.36-1.44(m，2H)，1.27-1.35(m，4H)，1.23(s，12H)，0.73(t，J＝7.6Hz，2H)
7-[(1,3-二羥基丙-2-基)氨基]-7-氧代庚酸乙酯(l-ai-1)
向7-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-7-氧代庚酸乙酯(l-z-1)(228.0mg，0.799mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.557ml，3.20mmol)，攪拌10分鐘，然后添加2-氨基丙-1,3-二醇(72.8mg，0.799mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?2小時(shí)。72小時(shí)后，用水稀釋該反應(yīng)體系，再用二氯甲烷萃取3次。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮，得到粗制標(biāo)題化合物(89.0mg，無，43％)。減壓濃縮水層。用甲醇(5mL)和二氯甲烷(10mL)稀釋粗濃縮的水層。潷析該混合物，與來自第一次萃取的粗混合物合并。減壓濃縮該溶液。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g硅膠柱)純化合并的粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(183.0mg，88％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝262]。1H NMR(甲醇-d4)δ：4.11(q，J＝7.2Hz，2H)，3.83-3.99(m，1H)，3.60(d，J＝5.5Hz，4H)，2.31(t，J＝7.2Hz，2H)，2.23(t，J＝7.4Hz，2H)，1.63(五重峰，J＝7.5Hz，4H)，1.30-1.45(m，2H)，1.24(t，J＝7.0Hz，3H)
7-[(2,2-二甲基-1,3-二烷-5-基)氨基]-7-氧代庚酸乙酯(l-aj-1)
向7-[(1,3-二羥基丙-2-基)氨基]-7-氧代庚酸乙酯(l-ai-1)(180.0mg，0.689mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(0.53ml，4.13mmol)，然后加入(1S)-(+)-10-樟腦磺酸(64.0mg，0.276mmol)。將該反應(yīng)體系加熱至70℃72小時(shí)。72小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，使其分配在水(20mL)與乙酸乙酯(10mL)之間。萃取各層，分離各層。再用乙酸乙酯(10mL)將水層萃取2次。用水、鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥。過濾，減壓濃縮，得到粗標(biāo)題化合物(94.0mg，無，45％)。
7-[(2,2-二甲基-1,3-二烷-5-基)氨基]-7-氧代庚酸(l-ak-1)
向7-[(2,2-二甲基-1,3-二烷-5-基)氨基]-7-氧代庚酸乙酯(l-aj-1)(94.0mg，0.31mmol)在乙醇(5mL)中的溶液中加入1.0M氫氧化鈉水溶液(1.5ml，1.5mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢柽^夜。第二天早晨，減壓濃縮該反應(yīng)體系。用1N鹽酸(3.0mL)和乙酸乙酯稀釋得到的粗物質(zhì)。分離各層，再用乙酸乙酯將有機(jī)層萃取2次。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，得到粗標(biāo)題化合物(29.4mg，無，34％)。
N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}-N'-(1,3-二羥基丙-2-基)庚烷二酰胺(57)
向7-[(2,2-二甲基-1,3-二烷-5-基)氨基]-7-氧代庚酸(l-ak-1)(18.8mg，0.0688mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)和四氫呋喃(0.3mL)中的溶液中加入1-羥基苯并三唑(10.3mg，0.0762mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(14.9mg，0.0762mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將該反應(yīng)混合物加到6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(l-ag-1)(75.0mg，0.042mmol)中，然后添加N,N-二異丙基乙胺(0.0295ml，0.169mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。16小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。將粗物質(zhì)溶于乙酸(4.0mL)、甲醇(1mL)和水(1.0mL)，加熱至70℃24小時(shí)。24小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮，得到粗標(biāo)題化合物(175.0mg，220％)。將該粗標(biāo)題化合物通過反相色譜法，使用如下條件純化，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(10.9mg，14％)。
純化條件：
將殘余物溶于二甲亞砜(1mL)，通過反相HPLC柱純化：Waters Sunfire C18 19x100，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；梯度：85.0％H2O/15.0％乙腈線性至75％H2O/25％乙腈，8.5分鐘至0％H2O/100％MeCN，至9.0分鐘，保持在0％H2O/100％乙腈，9.0-10.0分鐘。流速：25毫升/分鐘
QC條件：
柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50，5u；流動(dòng)相A：0.05％TFA的水溶液(v/v)；流動(dòng)相B：0.05％TFA的乙腈溶液(v/v)；95.0％H2O/5.0％乙腈線性至5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘，保持在5％H2O/95％乙腈，4.0分鐘至5.0分鐘。流速：2毫升/分鐘；保留時(shí)間＝1.53分鐘；觀察到的質(zhì)量＝934.548。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝1889]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.00(s，3H)，5.21(s，3H)，4.52-4.62(m，12H)，3.95(t，J＝9.4Hz，6H)，3.85-3.91(m，9H)，3.74-3.79(m，9H)，3.71(dd，J＝10.0，4.1Hz，3H)，3.55-3.67(m，47H)，3.12(t，J＝6.7Hz，2H)，2.22(t，J＝7.3Hz，2H)，2.17(t，J＝7.3Hz，4H)，1.98(s，9H)，1.58-1.69(m，4H)，1.51-1.57(m，2H)，1.48(五重峰，J＝7.2Hz，2H)，1.26-1.40(m，4H)
6-疊氮基-N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}己酰胺(l-ag-5)
向6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(l-ag-1)(300mg，0.169mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)和四氫呋喃(0.6mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.118ml，0.677mmol)和1-[(6-疊氮基己酰基)氧基]吡咯烷-2,5-二酮(56.0mg，0.220mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。24小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用CombiFlash Rf(RediSep 24g Gold硅膠柱)純化粗反應(yīng)混合物，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(269mg，83％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M+1＝956]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.98(s，3H)，5.22(s，3H)，4.50-4.65(m，12H)，4.29(d，J＝5.9Hz，3H)，4.16(t，J＝6.5Hz，3H)，3.87-3.95(m，12H)，3.83(d，J＝7.6Hz，3H)，3.73-3.79(m，12H)，3.55-3.71(m，36H)，3.26-3.30(m，2H)，3.14(q，J＝6.5Hz，2H)，2.18(q，J＝7.6Hz，4H)，1.98(s，9H)，1.53-1.68(m，6H)，1.45-1.51(m，11H)，1.36-1.43(m，2H)，1.29-1.36(m，11H)
6-疊氮基-N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}己酰胺(58)
將6-疊氮基-N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}己酰胺(l-ag-5)(25.0mg，0.013mmol)在乙酸(3mL)、甲醇(0.75mL)和水(0.75mL)中的溶液加熱至70℃24小時(shí)。24小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(22.7mg，97％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝1791]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.99(s，3H)，5.21(s，3H)，4.51-4.66(m，12H)，3.92-4.01(m，6H)，3.89(dd，J＝10.1，4.7Hz，9H)，3.74-3.81(m，9H)，3.71(dd，J＝10.0，4.1Hz，3H)，3.52-3.68(m，42H)，3.25-3.30(m，2H)，3.08-3.19(m，2H)，2.13-2.23(m，4H)，1.99(s，9H)，1.54-1.69(m，6H)，1.49(dt，J＝14.4，7.2Hz，2H)，1.36-1.44(m，2H)，1.32(dd，J＝14.8，6.2Hz，2H)
1-{[6-(芐氧基)己?；鵠氧基}吡咯烷-2,5-二酮(l-al-1)
向6-(芐氧基)己酸(參見Synlett，(4)，693-697；2004，1400.0mg，6.298mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(870mg，7.56mmol)，然后加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1480mg，7.56mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢柽^夜。第二天早晨，用水使反應(yīng)停止，用二氯甲烷萃取3次。用飽和碳酸氫鈉、鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 40g Gold柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(715mg，36％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝342]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.22-7.42(m，5H)，4.51(s，2H)，3.53(t，J＝6.4Hz，2H)，2.85(s，4H)，2.65(t，J＝7.4Hz，2H)，1.76(五重峰，J＝7.5Hz，2H)，1.61-1.71(m，2H)，1.47-1.59(m，2H)
6-(芐氧基)-N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}己酰胺(l-ag-6)
向6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(l-ag-1)(200mg，0.113mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)和四氫呋喃(0.6mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0786ml，0.451mmol)和1-{[6-(芐氧基)己?；鵠氧基}吡咯烷-2,5-二酮(l-al-1)(46.9mg，0.147mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。24小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(203mg，91％)。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.98(s，3H)，7.19-7.38(m，5H)，5.23(d，J＝1.2Hz，3H)，4.52-4.64(m，12H)，4.48(s，2H)，4.29(d，J＝5.9Hz，3H)，4.15(t，J＝6.4Hz，3H)，3.86-3.96(m，12H)，3.83(d，J＝7.8Hz，3H)，3.72-3.80(m，12H)，3.54-3.70(m，36H)，3.49(t，J＝6.4Hz，2H)，3.08-3.15(m，2H)，2.12-2.26(m，4H)，1.98(s，9H)，1.51-1.68(m，6H)，1.48(s，11H)，1.37-1.44(m，2H)，1.33(s，11H)
6-(芐氧基)-N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}己酰胺(59)
將6-(芐氧基)-N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}己酰胺(l-ag-6)(180.0mg，0.0911mmol)在乙酸(6.0mL)、甲醇(1.5mL)和水(1.5mL)中的溶液加熱至70℃24小時(shí)。24小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(164.0mg，97.0％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M＝928]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.99(s，3H)，7.25-7.39(m，5H)，5.21(s，3H)，4.52-4.66(m，12H)，4.48(s，2H)，3.92-3.99(m，6H)，3.84-3.91(m，9H)，3.74-3.81(m，9H)，3.71(dd，J＝9.8，4.3Hz，3H)，3.54-3.67(m，42H)，3.49(t，J＝6.4Hz，2H)，3.08-3.17(m，2H)，2.13-2.22(m，4H)，1.99(s，9H)，1.51-1.68(m，6H)，1.48(t，J＝7.4Hz，2H)，1.39(dt，J＝15.3，7.8Hz，2H)，1.26-1.35(m，2H)
乙酸(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2-(乙酰氧基)-1-{13-[4-(4,4-雙{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-6,13-二氧代-20-苯基-2,19-二氧雜-5,12-二氮雜二十碳烷(diazaicos)-1-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基}-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基酯(l-am-1)
在室溫將6-(芐氧基)-N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}己酰胺(59)(130mg，0.07mmol)溶于(3ml，40mmol)，向其中加入乙酐(0.198ml，2.10mmol)。然后將該反應(yīng)體系加熱至50℃過夜。第二天早晨，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(130.0mg，88％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M＝1054]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.98(s，3H)，7.16-7.39(m，5H)，5.44(d，J＝4.3Hz，3H)，5.32(s，3H)，5.10(dd，J＝10.5，4.3Hz，3H)，4.52-4.60(m，12H)，4.48(s，2H)，4.18(d，J＝10.5Hz，3H)，3.99(d，J＝8.2Hz，3H)，3.89(t，J＝5.1Hz，6H)，3.70-3.81(m，12H)，3.52-3.67(m，39H)，3.49(t，J＝6.2Hz，2H)，3.13(q，J＝6.6Hz，2H)，2.13-2.21(m，13H)，1.94(d，J＝1.6Hz，18H)，1.51-1.68(m，6H)，1.45-1.50(m，2H)，1.37-1.43(m，2H)，1.28-1.35(m，2H)
N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}-6-羥基己酰胺(l-an-1)
將乙酸(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2-(乙酰氧基)-1-{13-[4-(4,4-雙{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-6,13-二氧代-20-苯基-2,19-二氧雜-5,12-二氮雜二十碳烷-1-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基}-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基酯(l-am-1)(110mg，0.0522mmol)溶于甲醇(10.0mL)，然后使用10％披鈀碳(小柱體)，使用下列參數(shù)(溫度-60℃，流速-1.0毫升/分鐘，壓力-全H2(1巴))使該溶液通過H-立方體。采集該溶液，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(91.6mg，87％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M＝1009]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.98(s，3H)，5.44(d，J＝4.3Hz，3H)，5.32(s，3H)，5.10(dd，J＝10.5，4.3Hz，3H)，4.50-4.64(m，12H)，4.18(d，J＝10.5Hz，3H)，3.99(d，J＝8.2Hz，3H)，3.90(t，J＝4.9Hz，6H)，3.71-3.82(m，9H)，3.44-3.66(m，44H)，3.08-3.19(m，2H)，2.16-2.22(m，4H)，2.15(s，9H)，1.94(d，J＝1.2Hz，18H)，1.44-1.68(m，8H)，1.27-1.42(m，4H)
乙酸(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-1-{13-[4-({3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-2-({6[(6羥基己酰基)氨基]己?；鶀氨基)丙氧基}甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基}-3-(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-2-基酯(60)
將6-(芐氧基)-N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}己酰胺(l-an-1)(31.0mg，0.017mmol)溶于甲醇(5mL)，使用10％披鈀碳(小柱體)，使用下列參數(shù)(溫度-60℃，流速-1.0毫升/分鐘，壓力-全H2(1巴))使該溶液通過H-立方體。采集該溶液，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(7.9mg，27％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+1＝1766]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.99(s，3H)，5.21(s，3H)，4.49-4.63(m，12H)，3.92-4.00(m，6H)，3.89(dd，J＝10.3，4.5Hz，9H)，3.74-3.79(m，9H)，3.71(dd，J＝9.8，4.3Hz，3H)，3.53-3.67(m，44H)，3.02-3.16(m，2H)，2.18(td，J＝7.3，3.3Hz，4H)，1.99(s，9H)，1.44-1.72(m，8H)，1.25-1.42(m，4H)
[6-({6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基)-6-氧代己基]氨基甲酸芐酯(l-ag-7)
向6-氨基-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)己酰胺(l-ag-1)(222mg，0.125mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)和四氫呋喃(1.0mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.0873ml，0.501mmol)和{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}氨基甲酸芐酯(參見Journal of Heterocyclic Chemistry，23(3)，901-3；1986，68.1mg，0.188mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。24小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g Gold硅膠柱)純化粗反應(yīng)混合物，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(250mg，99％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M+1＝1010]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.98(s，3H)，7.22-7.40(m，5H)，5.22(d，J＝1.2Hz，3H)，5.06(s，2H)，4.51-4.61(m，12H)，4.29(d，J＝5.9Hz，3H)，4.16(t，J＝6.4Hz，3H)，3.86-3.96(m，12H)，3.83(d，J＝7.8Hz，3H)，3.73-3.79(m，12H)，3.53-3.70(m，36H)，3.04-3.19(m，4H)，2.17(t，J＝7.4Hz，4H)，1.98(s，9H)，1.58(td，J＝14.5，7.6Hz，4H)，1.48(s，13H)，1.33(s，13H)
[6-({6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基)-6-氧代己基]氨基甲酸芐酯(61)
將[6-({6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(乙酰氨基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基)-6-氧代己基]氨基甲酸芐酯(l-ag-7)(250.0mg，0.124mmol)在乙酸(8mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)中的溶液加熱至70℃36小時(shí)。36小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用甲苯稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮。用甲苯第二次稀釋粗物質(zhì)，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(225mg，96％)。方法C：3分鐘運(yùn)行
LRMS[1/2M+1＝950]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.98(s，3H)，7.22-7.41(m，5H)，5.21(s，3H)，5.05(s，2H)，4.57(t，J＝5.0Hz，6H)，4.55(s，6H)，3.92-4.00(m，6H)，3.83-3.91(m，9H)，3.73-3.78(m，9H)，3.68-3.72(m，J＝10.0，4.1Hz，3H)，3.52-3.68(m，42H)，3.05-3.17(m，4H)，2.16(t，J＝7.3Hz，4H)，1.98(s，9H)，1.57-1.65(m，2H)，1.53-1.57(m，2H)，1.43-1.52(m，4H)，1.24-1.39(m，4H)
6-氨基-N-{6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}己酰胺乙酸鹽(62)
將[6-({6-[(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)氨基]-6-氧代己基}氨基)-6-氧代己基]氨基甲酸芐酯(61)(200mg，0.105mmol)溶于甲醇(20mL)和乙酸(0.024ml，0.421mmol)，然后使用10％披鈀碳(小柱體)，應(yīng)用下列參數(shù)(溫度-50℃，流速-1.0毫升/分鐘，壓力–全H2(1巴))使該溶液通過H-立方體。采集該溶液，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(148mg，77％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+45(甲酸)＝1809]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.02(s，3H)，5.23(s，3H)，4.59-4.63(m，6H)，4.58(s，6H)，3.97(dd，J＝9.6，5.3Hz，6H)，3.91(dd，J＝11.3，4.7Hz，9H)，3.76-3.82(m，9H)，3.73(dd，J＝10.1，4.3Hz，3H)，3.56-3.70(m，42H)，3.16(t，J＝6.8Hz，2H)，2.93(t，J＝7.6Hz，2H)，2.16-2.29(m，4H)，2.01(s，9H)，1.92(s，3H)，1.62-1.74(m，4H)，1.54-1.61(m，2H)，1.46-1.53(m，2H)，1.39-1.45(m，2H)，1.29-1.38(m，2H)
[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-疊氮基-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]甲醇(l-d-1)
向(1S,2R,3R,4R,5S)-4-疊氮基-1-(羥基甲基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-2,3-二醇(1)(2.52g，11.61mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(21mL)中的溶液中加入2 2-二甲氧基丙烷(9.0ml，69.6mmol)，然后加入(1S)-(+)-10-樟腦磺酸(1.08g，4.65mmol)。將該反應(yīng)體系加熱至70℃，歷時(shí)24小時(shí)。24小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，然后添加甲醇(5mL)，然后添加三乙胺(0.22ml，1.55mmol)，將該溶液攪拌10分鐘，然后減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 80g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到不純的標(biāo)題化合物。使用CombiFlash Rf(RediSep 40g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(2419mg，81％)。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.42(d，J＝1.6Hz，1H)，4.34-4.43(m，2H)，3.88-3.98(m，3H)，3.81-3.87(m，1H)，3.37(dd，J＝6.2，1.6Hz，1H)，1.54(s，3H)，1.42(s，3H)
(1S,2R,6R,7R,8S)-7-疊氮基-4,4-二甲基-1-(15-苯基-2,5,8,11,14-五氧雜十五烷-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一烷(l-d-2)
在室溫向[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-疊氮基-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基]甲醇(l-d-1)(490mg，1.90mmol)在四氫呋喃(5mL)中的溶液中加入氫化鈉礦物油中的60％分散體(127mg，3.2mmol)。將該反應(yīng)體系在氮?dú)鈿夥障聰嚢?0分鐘，然后添加在四氫呋喃(2mL)中的13-碘-1-苯基-2,5,8,11-四氧雜十三烷(1130mg，2.86mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢柽^夜。第二天早晨(18小時(shí))，用水使反應(yīng)停止，用乙酸乙酯萃取。用乙酸乙酯將水層再洗滌2次。用水、鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(ISCO RediSep Gold 40g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(336.0mg，34％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝546]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.17-7.47(m，5H)，5.35(d，J＝1.6Hz，1H)，4.55(s，2H)，4.32-4.37(m，1H)，4.25-4.32(m，1H)，3.92(d，J＝10.1Hz，1H)，3.88(d，J＝8.2Hz，1H)，3.73-3.80(m，2H)，3.55-3.71(m，17H)，1.49(s，3H)，1.36(s，3H)
[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-羥基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]氨基甲酸叔丁酯(l-ao-1)
在50毫升反應(yīng)器中將原料(1S,2R,6R,7R,8S)-7-疊氮基-4,4-二甲基-1-(15-苯基-2,5,8,11,14-五氧雜十五烷-1-基)-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一烷(l-d-2)(310.0mg，0.592mmol)溶于甲醇(6mL)，然后添加二-叔丁基-二碳酸酯(162mg，0.74mmol)和10％披鈀碳(50％濕的wt/wt，100.0mg，0.940mmol)。密封反應(yīng)器，用氮?dú)?50psi)將該反應(yīng)體系吹掃3次，然后用氫氣(50psi)吹掃2次，用氫氣充至50psi，攪拌過夜。第二天早晨(24小時(shí))，通過C鹽墊過濾該反應(yīng)體系，用甲醇洗滌。減壓濃縮濾液。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲梯度洗脫烷，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(304mg，100％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝530]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.22(s，1H)，4.28(d，J＝5.9Hz，1H)，4.11(t，J＝6.4Hz，1H)，3.93(d，J＝10.1Hz，1H)，3.80-3.85(m，1H)，3.76(d，J＝6.2Hz，1H)，3.74(d，J＝3.9Hz，1H)，3.60-3.71(m，15H)，3.53-3.59(m，2H)，1.50(s，3H)，1.45(s，9H)，1.34(s，3H)
甲磺酸1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(叔丁氧羰基)氨基]-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基酯(l-ap-1)
向[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-羥基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]氨基甲酸叔丁酯(l-ao-1)(300.0mg，0.591mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入三乙胺(0.332ml，2.36mmol)，使用冰浴冷卻至0℃，然后添加甲磺酰氯(0.055ml，0.71mmol)。將該反應(yīng)體系緩慢地溫?zé)嶂潦覝兀谑覝財(cái)嚢?0小時(shí)。20小時(shí)后，用水使反應(yīng)停止，萃取。分離各層，再用二氯甲烷將水層萃取1次。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為油狀物(339mg，98％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝608]。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.22(s，1H)，4.33-4.43(m，2H)，4.28(d，J＝5.9Hz，1H)，4.11(t，J＝6.4Hz，1H)，3.93(d，J＝10.1Hz，1H)，3.80-3.86(m，1H)，3.72-3.79(m，4H)，3.61-3.70(m，12H)，3.58(d，J＝5.9Hz，1H)，3.11(s，3H)，1.50(s，3H)，1.45(s，9H)，1.34(s，3H)
[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-疊氮基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]氨基甲酸叔丁酯(l-aq-1)
向甲磺酸1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(叔丁氧羰基)氨基]-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基酯(l-ap-1)(339mg，0.579mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的溶液中加入疊氮化鈉(67.7mg，1.04mmol)，將該反應(yīng)體系在密封的5mL微波小瓶中加熱至100℃過夜。18小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，用水稀釋該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯萃取3次。用水、鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，得到粗物質(zhì)，使用CombiFlash Rf(RediSep 12g Gold硅膠柱)純化，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(246mg，80％)。1H NMR(甲醇-d4)δ：5.24(s，1H)，4.30(d，J＝5.9Hz，1H)，4.13(t，J＝6.4Hz，1H)，3.95(d，J＝9.8Hz，1H)，3.82-3.88(m，1H)，3.75-3.80(m，2H)，3.53-3.74(m，15H)，3.39(t，J＝4.9Hz，2H)，1.52(s，3H)，1.47(s，9H)，1.36(s，3H)
{(1S,2R,6R,7R,8S)-1-[13-(4-{[2-{[4-(芐氧基)丁?；鵠氨基}-3-{[1-(1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(叔丁氧羰基)氨基]-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基]甲氧基}-2-({[1-(1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(叔丁氧羰基)氨基]-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基]甲氧基}甲基)丙氧基]甲基}-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基]-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基}氨基甲酸叔丁酯(l-ar-1)
在配備攪拌棒的20mL小瓶中加入4-(芐氧基)-N-{1,3-雙(丙-2-炔-1-基氧基)-2-[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]丙-2-基}丁酰胺(l-v-1)(45.0mg，0.11mmol)，向其中加入在叔丁醇(3mL)和水(1.5ml，去離子水)中的[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-疊氮基-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基]氨基甲酸叔丁酯(l-aq-1)(192mg，0.361mmol)。用氮?dú)鈱⒃摲磻?yīng)體系吹掃5分鐘，然后添加抗壞血酸鈉(66.3mg，0.328mmol)，滴加硫酸銅(II)(5.24mg，0.0328mmol)的水(500uL，去離子水)溶液。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?0小時(shí)。20小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，通過將該反應(yīng)混合物添加到飽和氯化銨(30mL)和濃氫氧化銨(2mL)中使反應(yīng)停止，用二氯甲烷(15mL)萃取3次。用硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(165mg，無，75％)。方法C：3分鐘運(yùn)行
LRMS[1/2M+1＝1005]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.97(s，3H)，7.17-7.43(m，5H)，5.21(s，3H)，4.52-4.60(m，12H)，4.45(s，2H)，4.25(d，J＝5.9Hz，3H)，4.10(t，J＝6.2Hz，3H)，3.85-3.93(m，9H)，3.71-3.82(m，15H)，3.63-3.69(m，6H)，3.53-3.62(m，33H)，3.48(t，J＝6.2Hz，2H)，2.27(t，J＝7.2Hz，2H)，1.74-1.96(m，2H)，1.49(s，9H)，1.45(s，27H)，1.32(s，9H)
4-(芐氧基)-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-氨基-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-氨基-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)丁酰胺(63)
將{(1S,2R,6R,7R,8S)-1-[13-(4-{[2-{[4-(芐氧基)丁?；鵠氨基}-3-{[1-(1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(叔丁氧羰基)氨基]-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基]甲氧基}-2-({[1-(1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(叔丁氧羰基)氨基]-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基]甲氧基}甲基)丙氧基]甲基}-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基]-4,4-二甲基-3,5,9,11-四氧雜三環(huán)[6.2.1.0～2,6～]十一-7-基}氨基甲酸叔丁酯(l-ar-1)(150.0mg，0.0747mmol)在乙酸(5mL)、甲醇(1.5mL)和水(1.5mL)中的溶液加熱至70℃18小時(shí)。18小時(shí)后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮。用二氯甲烷(10mL)和甲醇(4mL)稀釋粗物質(zhì)，向其中加入4.0M氯化氫的二烷溶液(2.0ml，8mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。18小時(shí)后，減壓濃縮該反應(yīng)體系。用乙酸乙酯(1mL)稀釋粗物質(zhì)，向其中加入庚烷(10mL)，減壓濃縮。然后將該物質(zhì)置于高度真空中18小時(shí)，得到標(biāo)題化合物(139.0mg，103％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M+1＝795]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.09(s，3H)，7.27-7.39(m，5H)，5.48(s，3H)，4.57-4.66(m，12H)，4.47(s，2H)，3.98(d，J＝9.8Hz，3H)，3.90-3.95(m，9H)，3.82-3.89(m，6H)，3.79(s，6H)，3.76(d，J＝8.2Hz，3H)，3.71(d，J＝9.8Hz，3H)，3.57-3.69(m，36H)，3.50(t，J＝6.2Hz，2H)，3.21(d，J＝9.4Hz，3H)，2.29(t，J＝7.2Hz，2H)，1.85(五重峰，J＝6.8Hz，2H)
乙酸(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-2-{[4-(芐氧基)丁?；鵠氨基}丙氧基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-3-(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-2-基酯(l-as-1)
將4-(芐氧基)-N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-氨基-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-氨基-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)丁酰胺(63)(80mg，0.044mmol)溶于吡啶(無水)(1.5ml，19mmol)，在室溫下向其中加入乙酐(0.125ml，1.33mmol)。然后將該反應(yīng)體系加熱至50℃過夜。第二天早晨，減壓濃縮該反應(yīng)體系。使用CombiFlash Rf(RediSep 12g Gold硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷洗梯度脫，得到粗制標(biāo)題化合物。使用CombiFlash Rf(RediSep 4g Gold硅膠柱)純化粗標(biāo)題化合物，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(54.0mg，62％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[1/2M+1＝984]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.97(s，3H)，7.19-7.42(m，5H)，5.44(d，J＝4.3Hz，3H)，5.31(s，3H)，5.10(dd，J＝10.3，4.1Hz，3H)，4.51-4.64(m，12H)，4.45(s，2H)，4.18(d，J＝10.1Hz，3H)，3.99(d，J＝8.6Hz，3H)，3.88(t，J＝4.9Hz，6H)，3.68-3.82(m，12H)，3.52-3.64(m，39H)，3.48(t，J＝6.2Hz，2H)，2.26(t，J＝7.4Hz，2H)，2.15(s，9H)，1.94(d，J＝1.2Hz，18H)，1.84(t，J＝6.8Hz，2H)。
乙酸(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-1-{13-[4-({3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-2-[(4-羥基丁?；?氨基]丙氧基}甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基}-3-(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-2-基酯(l-at-1)
將乙酸(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-2-{[4-(芐氧基)丁?；鵠氨基}丙氧基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-1-基}-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基)-3-(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-2-基酯(l-as-1)(54.0mg，0.027mmol)溶于甲醇(10.0mL)，然后使用10％披鈀碳(小柱體)，應(yīng)用如下參數(shù)(溫度-60℃，流速-1.0毫升/分鐘，壓力–全H2(1atm))使該溶液通過H-立方體。采集該溶液，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(51.0mg，99％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+Na＝1899]。1H NMR(甲醇-d4)δ：7.98(s，3H)，5.44(d，J＝4.3Hz，3H)，5.32(s，3H)，5.10(dd，J＝10.5，3.9Hz，3H)，4.41-4.66(m，12H)，4.18(d，J＝10.5Hz，3H)，3.99(d，J＝8.6Hz，3H)，3.90(t，J＝5.1Hz，6H)，3.68-3.83(m，12H)，3.51-3.67(m，41H)，2.24(t，J＝7.6Hz，2H)，2.15(s，9H)，1.94(s，18H)，1.69-1.83(m，2H)
N-(1,3-雙[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-二羥基-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}丙-2-基)-4-羥基丁酰胺(64)
向乙酸(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-1-{13-[4-({3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(乙酰氨基)-2,3-雙(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-13-基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基]甲基}-2-[(4-羥基丁酰基)氨基]丙氧基}甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]-2,5,8,11-四氧雜十三烷-1-基}-3-(乙酰氧基)-6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-2-基酯(l-at-1)(8.5mg，0.0045mmol)在甲醇(1mL)中的溶液中加入0.5M甲醇鈉的甲醇溶液(0.154mL mg，0.0770mmol)，將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?小時(shí)。3小時(shí)后，通過添加甲醇沖洗的Amberlyst 15離子交換樹脂(CAS#＝39389-20-3，RS-106008)中和該反應(yīng)體系至pH＝5。過濾該反應(yīng)混合物，用甲醇將樹脂沖洗2次。減壓濃縮濾液，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物(1.5mg，20％)。方法C：3分鐘運(yùn)行LRMS[M+45(甲酸)＝1668]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.00(s，3H)，5.21(s，3H)，4.53-4.65(m，12H)，3.92-4.00(m，6H)，3.89(dd，J＝11.1，4.9Hz，9H)，3.74-3.79(m，9H)，3.71(dd，J＝9.8，4.3Hz，3H)，3.52-3.69(m，44H)，2.24(t，J＝7.4Hz，2H)，1.99(s，9H)，1.76(五重峰，J＝6.9Hz，2H)
在方案4中化合物(66)所例示的和在方案3中一般描述的原酸酯連接基可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用(I-aw-1)(參見H.Bruyère等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，20，2200-2203，(2010))和適合的醇例如(I-an-1)、適合的酸例如對(duì)甲苯磺酸吡啶鎓在適合的溶劑例如甲苯中在回流條件下合成，得到(I-ax-1)?？梢栽诒绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的堿性條件下(例如在甲醇中的催化性碳酸鉀)使(I-ax-1)脫保護(hù)，得到本發(fā)明的化合物(65)。可以進(jìn)一步使(65)官能化，得到本發(fā)明要求保護(hù)的另外的化合物。因此，適合的酸和偶合劑(本領(lǐng)域技術(shù)人員已知)或活化酯(例如羥基琥珀酰胺)例如(I-s-1)在適合的溶劑例如N,N-二甲基甲酰胺中使用適合的堿例如N,N-二異丙基乙胺處理(65)，可以得到化合物(66)。
方案3。
方案4。
按照類似于方案5中所示的類似方式，還可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用(I-av-1)和適合的醇例如(I-an-1)，應(yīng)用上述對(duì)方案4所述的反應(yīng)條件合成化合物(66)。
方案5。
N-(1,3-二羥基丙-2-基)-6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酰胺(l-au-1)
向1-{[6-(吡啶-2-基二硫烷基)己?；鵠氧基}吡咯烷-2,5-二酮(l-s-1)(518mg，2.01mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中的溶液中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(463mg，2.42mmol)和1-羥基苯并三唑(326mg，2.42mmol)，在室溫?cái)嚢?小時(shí)。1小時(shí)后，加入2-氨基丙-1,3-二醇(183mg，2.01mmol)，然后加入N,N-二異丙基乙胺(1.05ml，6.04mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢柽^夜。18小時(shí)后，用水稀釋該反應(yīng)體系，用二氯甲烷萃取3次。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用CombiFlash Rf(RediSep 24g硅膠柱)純化粗物質(zhì)，用0-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，(368mg，55％)。方法C：1.5分鐘運(yùn)行LRMS[M+45(甲酸)＝375]。1H NMR(甲醇-d4)δ：8.38(d，J＝4.3Hz，1H)，7.84-7.89(m，1H)，7.77-7.83(m，1H)，7.21(t，J＝5.7Hz，1H)，3.92(五重峰，J＝5.5Hz，1H)，3.51-3.70(m，4H)，2.82(t，J＝7.2Hz，2H)，2.21(t，J＝7.4Hz，2H)，1.71(五重峰，J＝7.3Hz，2H)，1.60(五重峰，J＝7.5Hz，2H)，1.37-1.51(m，2H)
N-(2-甲氧基-1,3-二烷-5-基)-6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酰胺(l-av-1)
向N-(1,3-二羥基丙-2-基)-6-(吡啶-2-基二硫烷基)己酰胺(l-au-1)(280mg，0.847mmol)在二氯甲烷(0.605mL)和原甲酸三甲酯(0.5ml，5mmol)中的混合物中加入對(duì)甲苯磺酸一水合物(1.78mg，0.00847mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫?cái)嚢?小時(shí)。3小時(shí)后，TLC顯示原料幾乎完全耗盡。用二氯甲烷稀釋該反應(yīng)體系，用飽和碳酸氫鈉水溶液(3x1mL)、鹽水(1mL)洗滌，用無水碳酸鉀干燥，過濾，減壓濃縮，得到粗制標(biāo)題化合物(263.0mg，83.3％)。方法C：3分鐘運(yùn)行(基本模式：柱：基質(zhì)：Waters Acquity UPLC BEH，2.1mmx50mm，C18，1.8μm；流動(dòng)相：A：0.1％氨水(v/v)；B：0.1％氨的乙腈溶液(v/v))LRMS[M+45＝417]。1：1順式/反式異構(gòu)體混合物：
異構(gòu)體1：1H NMR(甲醇-d4)δ：8.41(d，J＝4.7Hz，1H)，7.86-7.92(m，1H)，7.80-7.86(m，1H)，7.20-7.27(m，1H)，5.31(s，1H)，4.29(d，J＝2.7Hz，1H)，3.92-3.96(m，1H)，3.83(br.s.，1H)，3.63(d，J＝5.1Hz，1H)，3.59(dd，J＝11.5，3.7Hz，1H)，3.42(s，3H)，2.85(t，J＝7.2Hz，2H)，2.21-2.30(m，2H)，1.68-1.80(m，2H)，1.56-1.67(m，2H)，1.39-1.53(m，2H)
異構(gòu)體2：1H NMR(甲醇-d4)δ：8.41(d，J＝4.7Hz，1H)，7.86-7.92(m，1H)，7.80-7.86(m，1H)，7.20-7.27(m，1H)，5.27(s，1H)，4.26(d，J＝2.7Hz，1H)，3.92-3.96(m，2H)，3.86-3.91(m，1H)，3.59(dd，J＝11.5，3.7Hz，1H)，3.38(s，3H)，2.85(t，J＝7.2Hz，2H)，2.21-2.30(m，2H)，1.68-1.80(m，2H)，1.56-1.67(m，2H)，1.39-1.53(m，2H)
藥理學(xué)數(shù)據(jù)
下文所述的功能試驗(yàn)的一種或多種中的活性可以證明使用本發(fā)明化合物治療通過靶向脫唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)調(diào)節(jié)的疾病的本發(fā)明的實(shí)施。圓括號(hào)內(nèi)提供供應(yīng)源。
表面等離振子共振測(cè)量
生物素化ASGPR的制備：
在大腸桿菌(E.coli)中將ASGPr H1野生型表達(dá)為不溶性包涵體(IB)。將細(xì)胞沉淀重新混懸于TBS緩沖液pH 8.0，其含有0.1mg/mL溶菌酶+25微克/毫升DNase+10微克/毫升RNase+10mM MgCl2，并且在冰上攪拌至充分混合。使該混合物通過微觀流體機(jī)(microfluidizer)2次，并且以30,000xg離心30分鐘。用TBS緩沖液pH 8.0+3M脲洗滌得到的IB沉淀并且將該過程用水再重復(fù)3次。將IB沉淀溶于10mM Tris+8M脲+100mMβ---巰基乙醇(pH 8.5)，攪拌約20分鐘，然后離心以棄去任何沉淀。對(duì)于接下來的操作，“緩沖液T”是指20mM Tris+0.5M NaCl+25mM CaCl2。用緩沖液T+2mMβ---巰基乙醇+8M脲(pH 8.0)將上清液稀釋至約0.5mg/mL，然后在4℃對(duì)8---10x過量體積的緩沖液T+2mMβ---巰基乙醇+2M脲(pH 8.0)透析過夜。在4℃用緩沖液T+1mMβ---巰基乙醇+1M脲(pH 8.0)重復(fù)透析約24h，其中有幾次體積改變，且最終對(duì)緩沖液T+5mM GSH+1mM GSSG(pH 7.5)透析，其中有3個(gè)體積的改變。離心得到的樣品并且使上清液上N---乙酰基---D---半乳糖胺瓊脂糖填充的Pharmacia XK 26柱，該柱用緩沖液T+2mM TCEP(pH 8.0)平衡。用這種緩沖液洗滌該柱，直到基線再次建立。用20mM Tris+0.5M NaCl+2mM TCEP+2mM EDTA(pH 8.0)洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。最終來自5L(70wgm.)大腸桿菌細(xì)胞沉淀的收率約為50mg。
盡管BSA具有一個(gè)未參與二硫鍵的半胱氨酸(Cys34)時(shí)，但巰基基團(tuán)通常用小硫醇類例如半胱氨酸阻滯為混合的二硫化物或通過有氧氧化阻滯為次磺酸。在我們測(cè)試的方法中，發(fā)現(xiàn)二硫化物還原和標(biāo)記為用于衍生ASGPR結(jié)合結(jié)構(gòu)域的最清潔的方法。選擇弱二硫化物還原條件以便不破壞隱藏的鏈內(nèi)(溶劑無法接近的)交聯(lián)鍵。因此，在生物素化之前即刻首先將ASGPR樣品與1mM TCEP一起溫育，以確保樣品包含單一游離巰基。在4℃使蛋白質(zhì)與19倍摩爾過量的Pierce馬來酰亞胺---PEG2---生物素試劑在PBS中反應(yīng)過夜。
使用PD---10柱(GE Healthcare)或Zeba Spin Desalting柱(Thermo/Pierce)，應(yīng)用制造商的方案，從樣品中除去過量的生物素。產(chǎn)物的LC---MS分析驗(yàn)證了存在單一物質(zhì)，添加了525amu，與馬來酰亞胺加合物的分子量一致。由于TCEP存在于馬來酰亞反應(yīng)整個(gè)過程中，所以如果蛋白質(zhì)被完全還原(使得能夠利用另外的半胱氨酸巰基)，則結(jié)果可以為包含多種加合物的不均勻產(chǎn)物，并且在除去關(guān)鍵結(jié)構(gòu)二硫鍵時(shí)可能發(fā)生錯(cuò)誤折疊或沉淀。未觀察到這類結(jié)果。此外，標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合特異性(GalNAc與甲基半乳糖苷與乳糖)的觀察強(qiáng)烈地啟示SPR芯片上足夠的蛋白質(zhì)被適當(dāng)折疊并且展示。
SPR結(jié)合試驗(yàn)：
使用化合物的全部SPR測(cè)定應(yīng)用Biacore 3000(GE Healthcare)在25℃下進(jìn)行。生物素化ASGPR典型地以2000-3000個(gè)共振單元(Ru)被固定，該過程使用SA傳感器芯片(GE Healthcare)或常規(guī)傳感器芯片與標(biāo)準(zhǔn)胺固定的Neutravidin(Pierce Biochemical)，所述標(biāo)準(zhǔn)胺與CM5傳感器芯片(GE Healthcare)偶合。電泳緩沖液為HBS(10mM HEPES，150mM NaCl)、20mM CaCl2、0.01％p20、3％DMSO或50mM tris、150mM NaCl、50mM CaCl2、0.01％p20、3％DMSO pH 7.5。將化合物以900uM的濃度稀釋入電泳緩沖液，并且順序稀釋3倍至3.7uM。將化合物溶液以50ul/min注射1分鐘，然后進(jìn)行1min解離，每種濃度一式兩份。對(duì)于多聚化綴合物(二聚體、三聚體)，用電泳緩沖液將所述綴合物稀釋至100nM或10nM濃度并且順序稀釋。將綴合物注射2分鐘，并且離線檢測(cè)300或600秒。在離線數(shù)據(jù)完成后，使用注射電泳受體表面至游離狀態(tài)的900uM GalNAc替代所述化合物。使用Scrubber2(Biologic Software，Inc.)處理全部數(shù)據(jù)至零點(diǎn)、校準(zhǔn)、參比和校正，以便排除體積效應(yīng)。通過Scrubber2中擬合所述化合物和單一綴合分子的穩(wěn)態(tài)結(jié)合響應(yīng)確定KDs。用Scrubber2處理顯示動(dòng)力學(xué)響應(yīng)的多聚化綴合物的KD，并且用BiaEval(GE Healthcare)擬合，以便提取在線和離線參數(shù)，從而計(jì)算KD。數(shù)值反映了來自多次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差。
得到了下列SPR結(jié)合試驗(yàn)的結(jié)果，其中分別報(bào)告每次測(cè)試或注釋測(cè)試次數(shù)(n)和標(biāo)準(zhǔn)偏差：
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