本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種pH氧化還原雙敏感的PAMAM靶向納米給藥載體及其制備方法。

背景技術(shù)：

惡性腫瘤已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類健康的多發(fā)病和常見病，中國每年有220萬人因癌癥而死亡。國際癌癥研究機(jī)構(gòu)預(yù)計(jì)，至2030年中國每年癌癥患者將達(dá)到500萬人，占到全球新增的20％以上。因此，對(duì)癌癥的預(yù)防和治療具有十分重要的意義。目前，對(duì)癌癥的治療有多種手段，包括手術(shù)治療、化學(xué)療法、放射療法、免疫療法、基因療法、中醫(yī)中藥療法等。其中化療是治療腫瘤的主要手段之一，但是由于化療藥物缺乏選擇性，在殺滅癌細(xì)胞的同時(shí)也會(huì)不可避免地?fù)p傷人體的正常組織細(xì)胞，產(chǎn)生較強(qiáng)的毒副作用。因此，提高抗腫瘤藥物的靶向性，增大藥物在腫瘤部位的富集，降低藥物本身帶來的毒副作用，對(duì)腫瘤的治療有重要的現(xiàn)實(shí)意義和臨床價(jià)值。

聚酰胺-胺樹枝狀大分子(Polyamidoamine dendrimer，PAMAM)是目前研究最廣泛、最成熟的樹狀大分子之一，因其具有獨(dú)一無二的結(jié)構(gòu)特性而受到廣泛的關(guān)注。PAMAM具有自己獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特征：首先，其內(nèi)部具有疏水性的空腔，可以包裹疏水性的藥物分子，如阿霉素、紫杉醇等；其次，其末端有許多反應(yīng)活性較強(qiáng)的氨基，通過修飾不僅可以連接多肽或抗體等生物活性物質(zhì)，而且還可以通過酸敏感或還原敏感的化學(xué)鍵連接藥物分子；此外，PAMAM還具有穩(wěn)定、無免疫原性和良好的生物相容性等優(yōu)點(diǎn)。

但是由于高代數(shù)的PAMAM會(huì)引起一定的細(xì)胞毒性和溶血毒性，所以通常在PAMAM表面對(duì)其進(jìn)行PEG化的修飾，一方面可以減少其毒副作用，另一方面可進(jìn)一步提高該載藥系統(tǒng)的親水性，從而延長藥物在血液中的循環(huán)時(shí)間，有助于藥物被動(dòng)靶向于腫瘤組織，從而提高藥物治療效果。但是，經(jīng)PEG修飾后的載體可能會(huì)在一定程度上降低藥物的釋放，且對(duì)PAMAM本身的酸敏感性及質(zhì)子海綿效應(yīng)造成一定的影響，這將降低藥物的抗腫瘤效果。

因此，根據(jù)腫瘤胞內(nèi)微環(huán)境的特點(diǎn)設(shè)計(jì)構(gòu)建了一種pH氧化還原雙敏感的靶向納米給藥載體是十分必要的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種可根據(jù)腫瘤胞內(nèi)微環(huán)境的特點(diǎn)，集主動(dòng)靶向、長循環(huán)、pH氧化還原敏感、溶酶體逃逸等功能為一體的PAMAM靶向納米給藥載體及其制備方法。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種高效pH氧化還原雙敏感的PAMAM靶向納米給藥載體，通式為T-PEG_n-SS-PAMAM-(His)_m，

其中，T為腫瘤靶向配體，PAMAM為陽離子聚酰胺-胺樹狀大分子，PEG為聚乙二醇,-SS-為橋鍵二硫鍵，His為組氨酸，n為20-1000，m為1-4096。

在一些實(shí)施方式中，所述陽離子聚酰胺-胺樹狀大分子為以乙二胺為核的第1-10代聚酰胺-胺樹狀大分子。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，攜載藥物的高效pH氧化還原雙敏感的PAMAM靶向納米給藥載體，通式為T-PEG_n-SS-PAMAM-(His)_m/X，

其中，T為腫瘤靶向配體，X為抗腫瘤藥物，PAMAM為陽離子聚酰胺-胺樹狀大分子，PEG為聚乙二醇,-SS-為橋鍵二硫鍵，His為組氨酸，n為20-1000，m為1-4096。

在一些實(shí)施方式中，所述腫瘤靶向配體為轉(zhuǎn)鐵蛋白或葉酸或多肽。。

在一些實(shí)施方式中，所述抗腫瘤藥物為阿霉素。

在一些實(shí)施方式中，所述陽離子聚酰胺-胺樹狀大分子為以乙二胺為核的第1-10代聚酰胺-胺樹狀大分子。

在一些實(shí)施方式中，陽離子聚酰胺-胺樹狀大分子為以乙二胺為核的第4代聚酰胺-胺樹狀大分子。

高效pH氧化還原雙敏感的PAMAM靶向納米給藥載體的制備方法，包括如下步驟：

(1)以二甲基甲酰胺為溶劑，以1-羥基苯并三氮唑(HOBt)、苯并三氮唑-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)和N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)為催化劑，使PAMAM與N-芴甲氧羰基-N'-三苯甲基-組氨酸(Fmoc-His(trt)-OH)進(jìn)行反應(yīng)制得PAMAM-His，反應(yīng)如下：

(2)以甲醇為溶劑，使PAMAM-His、3-(2-吡啶二巰基)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(SPDP)和一端巰基化的PEG(HS-PEG-OCH₃)反應(yīng)制得PEG-SS-PAMAM-His，反應(yīng)如下：

其中，n為20-1000，

(3)將PEG-SS-PAMAM-His羧基化后與腫瘤靶向配體反應(yīng)，超濾純化，冷凍干燥得T-PEG_m-SS-PAMAM-(His)_n，反應(yīng)如下：

其中，n為20-1000，m為1-4096。其有益效果為：①由于腫瘤細(xì)胞繁殖比正常的組織細(xì)胞要快很多，腫瘤血管產(chǎn)生大量的乳酸，導(dǎo)致腫瘤部位的pH值(6.5)比正常組織的pH值(7.4)低。此外，腫瘤細(xì)胞內(nèi)各個(gè)細(xì)胞器之間的pH值也有差異，比如內(nèi)涵體的pH值在5.0～6.5之間，而溶酶體的pH值在4.5～5.0之間。通過His的修飾，提高載體的pH敏感性，發(fā)揮質(zhì)子海綿效應(yīng)。谷胱甘肽(GSH)是細(xì)胞中含量最高的巰基化合物，同時(shí)也是生物化學(xué)反應(yīng)中的一種重要還原劑，它可以對(duì)二硫鍵進(jìn)行剪切，使二硫鍵發(fā)生斷裂。細(xì)胞內(nèi)的胞漿中含有大量高濃度的GSH，通常為2～10mM，而在血液中僅存在少量低濃度的GSH(2～10μM)。此外，腫瘤組織中的GSH濃度是正常細(xì)胞和組織的4倍。本發(fā)明利用這種GSH濃度的巨大差異，提出的氧化還原敏感的載藥系統(tǒng)用于腫瘤部位的靶向藥物釋放。

②本發(fā)明的載體不僅能顯著降低高代數(shù)PAMAM所引起的細(xì)胞毒性和溶血毒性，同時(shí)還能減少網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的攝取，延長血液中的滯留時(shí)間，從而有效的將藥物輸送至腫瘤組織。表面His的修飾可以增加載體的酸敏感性，增強(qiáng)PAMAM的質(zhì)子海綿效應(yīng)，使藥物快速從酸性的溶酶體中逃逸出來。載體在腫瘤細(xì)胞內(nèi)低pH和高還原環(huán)境條件下，PAMAM內(nèi)核打開，同時(shí)載體中的二硫鍵發(fā)生斷裂，PEG脫落，使藥物能夠快速有效的釋放，從而達(dá)到提高抗腫瘤藥物的治療效果和降低毒副作用的目的。

③通過二硫鍵將PEG連接在PAMAM的表面，一方面可以顯著降低PAMAM的溶血毒性，延長聚合物在血液中的循環(huán)時(shí)間；另一方面在復(fù)合物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)后，在高還原性的胞漿環(huán)境是二硫鍵斷裂,促進(jìn)其包載的藥物迅速釋放，從而實(shí)現(xiàn)還原和pH雙重敏感釋藥的目的。二硫鍵與His的連接有助于藥物的釋放，腫瘤靶向配體的連接增強(qiáng)了其主動(dòng)靶向性，從而發(fā)揮出明顯的抗腫瘤作用。

④為了提高聚合物的靶向效率，增加腫瘤細(xì)胞對(duì)聚合物的攝取量，以含鐵蛋白質(zhì)(Tf)為腫瘤靶向配體為例進(jìn)行說明：本發(fā)明對(duì)聚合物載藥系統(tǒng)的表面進(jìn)行了Tf修飾，TfR是與細(xì)胞增殖有關(guān)的一種跨膜糖蛋白，普遍存在于各類細(xì)胞中，由于癌細(xì)胞增殖較快，對(duì)鐵的需求量增大，導(dǎo)致癌細(xì)胞表面的TfR遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于正常細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞表面的TfR是正常細(xì)胞的2～7倍，腫瘤細(xì)胞表面TfR與Tf親和力是正常細(xì)胞的10倍～100倍。通過Tf與腫瘤細(xì)胞表面的TfR特異性的識(shí)別來促進(jìn)細(xì)胞攝取，發(fā)揮其主動(dòng)靶向作用，增加抗腫瘤效果。

附圖說明

圖1為PAMAM(A)、PAMAM-His(B)和PEG-SS-PAMAM-His(C)的¹H-NMR圖；

圖2為Tf-PEG-SS-PAMAM-His/DOX、PSSPH/DOX和PPH/DOX的體外釋放圖；

圖3為Tf-PEG-SS-PAMAM-His/DOX、PSSPH/DOX、PPH/DOX和DOX的體外抗MCF-7細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的效果圖；

圖4為Tf-PEG-SS-PAMAM-His/DOX、PSSPH/DOX、PPH/DOX和DOX的體外抗HEPG2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的效果圖；

具體實(shí)施方式

陽離子聚酰胺-胺樹狀大分子為以乙二胺為核的第4代聚酰胺-胺樹狀大分子，在下面的實(shí)施例中以第4代聚酰胺-胺樹枝狀聚合物(PAMAM，西格瑪奧德里奇上海貿(mào)易有限公司)為例，轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)，鹽酸阿霉素(DOX·HCl，純度≥98％，北京華奉聯(lián)博科技有限公司)；功能化聚乙二醇(NHS-PEG₂₀₀₀-OCH₃)(北京鍵凱科技有限公司)，在T-PEG_m-SS-PAMAM-(His)_n通式中，m代表PEG的聚合度，n代表His的數(shù)量，在此處2000表示PEG的分子量，PEG的分子量為2000的聚合度仍落在20-1000之間。3-(2-吡啶二巰基)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(SPDP，圣克魯斯生物技術(shù)上海有限公司)；還原谷胱甘肽、甲醇、三乙胺等均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。采用超導(dǎo)核磁共振譜儀(Unity Inova 600M)對(duì)聚合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證，采用Nicomp TM 380 ZLS型激光納米粒度/電位儀對(duì)聚合物粒徑、電位進(jìn)行表征。

實(shí)施例1

精密稱取Fmoc-His(trt)-OH、1-羥基-苯并-三氮唑(HOBt)、苯并三氮唑-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)和PAMAM按64:64:64:64:1反應(yīng)摩爾比溶于無水二甲基甲酰胺(DMF)中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，室溫避光反應(yīng)12h；冷乙醚沉淀反應(yīng)產(chǎn)物、洗滌、離心，然后重新溶于哌啶/DMF(v/v，30/70)溶液中，繼續(xù)反應(yīng)6h；冷乙醚再次沉淀產(chǎn)物，隨后溶于三氟乙酸/三異丙基硅烷/H₂O溶液中，反應(yīng)12h；最后冷乙醚沉淀、DMF重新溶解、去離子水透析24h后冷凍干燥，即得終產(chǎn)物PAMAM-His。

將合成的產(chǎn)物PAMAM-His與SPDP以1:32摩爾比加入甲醇溶液中和，加入三乙胺，氮?dú)獗Ｗo(hù)，在30℃避光攪拌5h，然后加入一定量的HS-PEG-OCH₃攪拌24h，旋蒸去除甲醇，透析凍干即得PEG-SS-PAMAM-His(PSSPH)。

將PEG-SS-PAMAM-His溶于MES緩沖溶液(0.1M，pH 6.0)中，加入5倍摩爾量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，活化羧基30min后，加入1M NaOH調(diào)pH至8.0，再加入三倍摩爾量的Tf，氮?dú)獗Ｗo(hù)，避光反應(yīng)12h，反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物置于超濾管(Mw 100KDa)中，6000xg轉(zhuǎn)速下，離心7-8次，冷凍干燥得淡紅色固體即Tf-PEG-SS-PAMAM-His(Tf-PSSPH)。

PEG-PAMAM-His(PPH)的制備

精密稱取實(shí)施例1制得的PAMAM-His和NHS-PEG₂₀₀₀-OCH₃，按兩者的反應(yīng)摩爾比為1:16溶于磷酸緩沖液(0.1M，pH 8.2)中，避光攪拌24h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至透析袋(MWCO＝10KDa)中，蒸餾水透析3天，去除游離PEG，收集透析袋內(nèi)液體，冷凍干燥得白色固體即為PEG-PAMAM-His(PPH)。

核磁分析

對(duì)PAMAM、實(shí)施例1中合成的產(chǎn)物的PAMAM-His和PEG-SS-PAMAM-His進(jìn)行核磁分析，結(jié)果如圖1所示，通過核磁氫譜對(duì)合成產(chǎn)物進(jìn)行核磁分析，特征質(zhì)子特征峰歸屬如下：其中PAMAM具有四個(gè)明顯的的特征質(zhì)子峰信號(hào)，分別為δ＝2.45，2.61，2.81，3.28ppm；His特征質(zhì)子峰信號(hào)分別為：δ＝7.0，7.6ppm；同時(shí)HS-PEG₂₀₀₀-OCH₃具有兩個(gè)明顯的特征質(zhì)子峰信號(hào)，分別為:δ＝3.35ppm(OCH₃)，δ＝3.67ppm(CH₂CH₂O)。從產(chǎn)物PSSPH的核磁氫譜中可以發(fā)現(xiàn)同時(shí)具有PAMAM、His和HS-PEG₂₀₀₀-OCH₃的特征質(zhì)子峰，表明His和PEG已經(jīng)成功共價(jià)結(jié)合到PAMAM表面。采用峰面積歸一化法，HS-PEG₂₀₀₀-OCH₃在δ3.67處H的個(gè)數(shù)為182個(gè)，而PAMAM在δ2.45處H的個(gè)數(shù)為248個(gè)，按照以下公式來計(jì)算PEG的連接個(gè)數(shù)：

Tf連接率測定

Tf的連接率采用BCA法測定樣品在570nm下的吸光度，通過代入BCA標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度。將測定實(shí)施例4中復(fù)合物上轉(zhuǎn)鐵蛋白摩爾數(shù)除以所取復(fù)合物的摩爾數(shù)即得每個(gè)復(fù)合物的轉(zhuǎn)鐵蛋白數(shù)。結(jié)果平均每個(gè)PSSPH上連接1.53個(gè)Tf，鏈接率為51.00％。

聚合物粒徑和Zeta電位的測定

取上述合成的聚合物PEG-PAMAM-His、PEG-SS-PAMAM-His和Tf-PEG-SS-PAMAM-His分別溶解在0.01MpH7.4PBS溶液中，終濃度為3mg/mL，0.45μm過濾器過濾，棄去初濾液，收集續(xù)濾液于測定池，用激光粒度分析儀測定粒徑大小，每種樣品平行測定3次。Zeta電位測定使用相同儀器，樣品用0.01M PBS(pH＝7.4)溶液進(jìn)行溶解稀釋至1mg/mL，每種樣品平行操作3次。

測得實(shí)施例1合成的Tf-PEG-SS-PAMAM-His聚合物的粒徑為20.81±0.48nm，Zate電位為-3.14±0.16mV。

實(shí)施例1合成的PEG-SS-PAMAM-His聚合物的粒徑為13.80±0.65nm，Zate電位為+3.02±0.11mV。

PEG-PAMAM-His聚合物的粒徑為12.65±0.10nm，Zate電位為2.93±0.28mV。

上述合成三種的聚合物PEG-PAMAM-His、PEG-SS-PAMAM-His和Tf-PEG-SS-PAMAM-His，較PAMAM(粒徑5.07±0.17nm,Zate電位為+15.09±0.27mV),由于PEG鏈的引入粒徑增大，Zeta電位顯著降低，粒徑較小且均勻，可用于傳遞藥物并可顯著提高穩(wěn)定性，降低毒性。

制備載藥復(fù)合物

精密稱量一定量的DOX·HCl溶于甲醇溶液中，加入適量的三乙胺中和鹽酸，使DOX游離出來。隨后按照DOX和上述合成聚合物PEG-SS-PAMAM-His、PEG-PAMAM-His、Tf-PEG-SS-PAMAM-His的摩爾比30:1稱取定量的Tf-PEG-SS-PAMAM-His聚合物加入甲醇/水(1:1，v/v)的溶液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，30℃避光攪拌12h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇溶液，加入適量的蒸餾水溶解復(fù)合物，5000rpm離心10min除去未包封的DOX，取上清液冷凍干燥即得上述合成聚合物的載藥復(fù)合物Tf-PSSPH/DOX、PPH/DOX和Tf-PSSPH/DOX。載藥復(fù)合物體外釋放考察

采用透析袋法在不同釋放條件下考察各個(gè)載藥復(fù)合物的還原和pH敏感性，釋放條件分別為：(1)非氧化還原條件下，即含有10μM GSH的PBS緩沖液(0.1M,pH 7.4)，(2)還原條件下，即含有10mM GSH的PBS緩沖液(0.1M,pH 7.4)，(3)酸性條件下，即含有10μM GSH的醋酸緩沖液(0.1M,pH 5.0)和(4)氧化及酸性雙重條件下，即含有10mM GSH的醋酸緩沖液(0.1M,pH 5.0)，其中pH7.4和GSH 10μM為正常組織非酸性pH及非氧化還原生理?xiàng)l件，pH5.0為腫瘤細(xì)胞內(nèi)酸性pH條件，GSH 10mM為腫瘤細(xì)胞內(nèi)高還原性條件。精密稱取同摩爾量各復(fù)合物溶于2mL緩沖液置于透析袋中(MWCO＝3500Da)，兩端扎緊，隨即投入裝有20mL不同釋放介質(zhì)的錐形瓶中，在37℃，100rpm恒溫?fù)u床中振搖，分別于0.5、1、2、4、6、8、12和24h取樣4mL，同時(shí)補(bǔ)充同體積同溫度相應(yīng)的新鮮釋放介質(zhì)。采用紫外分光光度計(jì)測定各介質(zhì)中DOX的濃度，并按以下公式計(jì)算累計(jì)釋放百分?jǐn)?shù)Er(％)＝(Mt/M_加)×100％。其中Er為累計(jì)釋放百分?jǐn)?shù)，Mt累計(jì)釋放的DOX的量，M_加為加入透析袋中DOX的總量。

從圖2中可以看出DOX從PSSPH/DOX、PPH/DOX和Tf-PSSPH/DOX三種載藥復(fù)合物中的釋放均具有明顯pH敏感性，在pH 5.0的條件下，DOX的釋放速度及累計(jì)釋放率明顯高于在pH 7.4條件下的釋放。這種pH釋藥行為主要是由于PAMAM本身具有pH敏感性，在低pH的條件下，其構(gòu)象會(huì)從高pH值時(shí)的“致密中心”向“致密外殼”轉(zhuǎn)變，外部的支鏈縮緊，內(nèi)部的空腔打開，DOX迅速從復(fù)合物中釋放出來。

DOX從Tf-PSSPH/DOX和PSSPH/DOX復(fù)合物中的釋放均具有明顯的還原敏感性。在pH 7.4，GSH＝10μM的條件下，DOX從PSSPH/DOX復(fù)合物中的釋放比較緩慢，在24h內(nèi)的累計(jì)釋放率僅為38.42％；而在pH 7.4,GSH＝10mM的條件下，DOX從PSSPH/DOX復(fù)合物中的釋放比較迅速，在24h內(nèi)的累計(jì)釋放率約達(dá)到48.77％。在從酸性的溶酶體中逃逸到高GSH的細(xì)胞質(zhì)中，由于還原條件下二硫鍵斷裂，所以促使-s-s-PEG-Tf鏈斷裂，與PAMAM分離，解除了PEG層的位阻，讓DOX更快的釋放到載體外面。即在高濃度GSH的刺激下，連接在PAMAM與PEG之間的二硫鍵發(fā)生斷裂，導(dǎo)致PEG從PAMAM的表面脫落，消除了DOX從PAMAM的內(nèi)核向外面的介質(zhì)中釋放時(shí)的空間位阻。體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)

為了考察載藥復(fù)合物Tf-PSSPH/DOX、PPH/DOX和Tf-PSSPH/DOX的體外抗腫瘤作用，取處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞MCF-7和HepG2，用0.25％胰酶消化后使其形成單個(gè)細(xì)胞懸液，以1×10⁴cells/mL的細(xì)胞濃度接種于96孔板中，每孔100μL，設(shè)置陰性組和空白對(duì)照組。將96孔板置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，棄去舊的培養(yǎng)液，用PBS洗滌兩次后，分別加入100μL含有系列濃度Tf-PSSPH/DOX、PPH/DOX和Tf-PSSPH/DOX的載藥復(fù)合物溶液及游離DOX溶液，每組設(shè)四個(gè)復(fù)孔，放置CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。棄去板中的培養(yǎng)液，用PBS清洗兩次，每空加入100μL MTT溶液(0.5mg/mL)。置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后，棄去MTT溶液，每孔加入100μL DMSO，渦旋1～5min直至結(jié)晶溶解。比色：用酶標(biāo)儀測量每孔在492nm處吸光度值(OD)，并計(jì)算細(xì)胞存活率(cell viability)。

實(shí)施例1、2、3、游離DOX對(duì)MCF-7和HEPG2細(xì)胞的IC₅₀值如下表

由上表、圖3和圖4可以看出，各復(fù)合物對(duì)MCF-7和HEPG2細(xì)胞均具有一定的抗腫瘤作用。隨著DOX濃度的增加，不同復(fù)合物對(duì)兩種細(xì)胞的細(xì)胞毒性均呈依賴性上升。在相同的給藥劑量下，Tf-PSSPH/DOX載藥復(fù)合物顯現(xiàn)出最強(qiáng)的細(xì)胞毒性，說明Tf連接后能顯著增強(qiáng)復(fù)合物的細(xì)胞毒作用。對(duì)于MCF-7細(xì)胞，Tf-PSSPH/DOX載藥復(fù)合物的IC50為0.297μg/mL，其細(xì)胞毒作用分別是PPH/DOX載藥復(fù)合物(1.873μg/mL)、PSSPH/DOX載藥復(fù)合物(1.114μg/mL)的6.31和3.75倍；對(duì)于HepG2細(xì)胞，Tf-PSSPH/DOX載藥復(fù)合物的IC50為0.243μg/mL，其細(xì)胞毒作用分別是PSSPH/DOX載藥復(fù)合物(0.743μg/mL)和PSSPH/DOX載藥復(fù)合物(0.449μg/mL)的3.06和1.85倍。結(jié)果表明二硫鍵與His的連接有助于藥物的釋放，Tf的連接增強(qiáng)了其主動(dòng)靶向性，從而發(fā)揮出明顯的抗腫瘤作用。

以上所述的僅是本發(fā)明的一些實(shí)施方式。對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，子不脫離本發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變化，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。