本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，更具體地涉及式i化合物和其在抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶2方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
吲哚胺2，3-雙加氧酶1(indoleamine2,3-dioxygenase1,ido1)是哺乳動物中催化色氨酸沿著犬尿氨酸途徑(kynureninepathway)代謝的第一個限速酶。研究表明ido1在多種腫瘤組織中有高表達(dá)，可以通過降低腫瘤微環(huán)境中色氨酸濃度來抑制淋巴細(xì)胞的增殖，在腫瘤免疫逃逸中起到重要作用，因此,目前認(rèn)為ido1的高表達(dá)是導(dǎo)致機(jī)體對腫瘤產(chǎn)生免疫耐受的重要因素之一。
ball等在2007年發(fā)現(xiàn)了一種在編碼基因序列、分子結(jié)構(gòu)及生物活性上與ido1都十分相似的酶，并命名為indol1(indoleamine2,3-dioxygenase-likeprotein)，即現(xiàn)在的吲哚胺2，3-雙加氧酶2(indoleamine2,3-dioxygenase2,ido2)。ido2位于ido1基因的下游，在結(jié)構(gòu)上ido2的序列和ido1的序列高度相似，位于人和小鼠的第八號染色體上，在小鼠的腎臟，生殖系統(tǒng)，肝臟中高表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn)在胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、腎癌的癌組織中也有ido2的表達(dá)。多項研究表明盡管活性比ido1低，且不起主導(dǎo)作用，但ido2也能催化色氨酸的降解。研究表明，ido2與ido1關(guān)系密切，兩者可能共同作用參與腫瘤發(fā)生、腫瘤免疫耐受、炎癥反應(yīng)等重大疾病或生理活動，因此ido2有望成為繼ido1之后治療人類重大疾病的有效藥物靶標(biāo)。
ido1在腫瘤的免疫耐受中的重要作用已被人們所承認(rèn)，并且在基因表達(dá)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、用于具有ido1介導(dǎo)的色氨酸代謝途徑的病理學(xué)特征的疾病(包括癌癥、艾滋病、阿爾茨海默病、抑郁癥、白內(nèi)障等重大疾病)的治療等方面成為研究熱點。目前關(guān)于ido2的生物學(xué)特征、功能與免疫耐受的研究還相對較少，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)高效的、選擇性抑制ido2的抑制劑，從而為治療ido2單獨介導(dǎo)或ido1、ido2共同參與介導(dǎo)的人類重大疾病提供新的藥物靶標(biāo)和思路。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種抑制吲哚胺2，3-雙加氧酶2(ido2)活性的化合物及其應(yīng)用。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種式i化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，用于制備抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶2(ido2)活性的藥物組合物或制劑，
式中，
r1為氫或氟；
r2為-r5-nr3r4；
所述的r5為取代的或未取代的c1-c3亞烷基、或無；
所述的r3、r4各自獨立地選自下組：h、取代的或未取代的c1-c4烷基、取代的或未取代的c2-c4烯基、取代的或未取代的c2-c4炔基、取代的或未取代的c3-c6環(huán)烷基；
或r3、r4與相鄰的氮原子共同構(gòu)成取代或未取代的5-7元雜環(huán)，其中，所述的5-6元飽和環(huán)上具有1-2個氮原子，和0-2個選自下組的雜原子：o、s；
所述的取代指基團(tuán)上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：c1-c4烷基、c1-c4鹵代烷基、胺基保護(hù)基(優(yōu)選叔丁氧羰基)、鹵素。
在另一優(yōu)選例中，所述的r5為亞甲基。
在另一優(yōu)選例中，r1為f。
在另一優(yōu)選例中，當(dāng)所述的r3、r4與相鄰的氮原子共同構(gòu)成取代或未取代的5-6元飽和環(huán)時，環(huán)上的氮原子上可以任選地具有胺基保護(hù)基。
在另一優(yōu)選例中，所述的5-7元雜環(huán)不是雜芳環(huán)。
在另一優(yōu)選例中，所述的5-7元雜環(huán)為飽和雜環(huán)，優(yōu)選5-6元飽和雜環(huán)。
在另一優(yōu)選例中，所述的5-7元雜環(huán)僅含有一個或二個雜原子。
在另一優(yōu)選例中，所述的5-7元雜環(huán)中所有的雜原子為n。
在另一優(yōu)選例中，r3、r4各自獨立地選自下組：c1-c4烷基；或r3、r4與 相鄰的氮原子共同構(gòu)成取代或未取代的5-6元飽和環(huán)，其中，所述的5-6元飽和環(huán)上具有1或2個氮原子，和任選的1個選自下組的雜原子：o。
在另一優(yōu)選例中，r3、r4不同時為h。
在另一優(yōu)選例中，所述的-nr3r4為環(huán)狀亞胺。
在另一優(yōu)選例中，所述的-nr3r4為取代或未取代的選自下組的基團(tuán)：
其中，
所述的取代指基團(tuán)上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：c1-c4烷基、鹵素。
在另一優(yōu)選例中，r1為f。
在另一優(yōu)選例中，所述的式i化合物選自下組：
在另一優(yōu)選例中，所述的式i化合物選自下組：化合物2、和化合物5。
在另一優(yōu)選例中，所述的吲哚胺2,3-雙加氧酶2為人的吲哚胺2,3-雙加氧酶2。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物或制劑還用于抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶1(ido1)的活性。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物或制劑還用于預(yù)防或治療與ido2相關(guān)的疾病。
在另一優(yōu)選例中，所述的“與ido2相關(guān)的疾病”包括由ido2單獨介導(dǎo)的疾病，或ido1、ido2共同參與介導(dǎo)的疾病。
在另一優(yōu)選例中，所述的疾病包括色氨酸代謝異常疾病。
在另一優(yōu)選例中，所述的疾病選自下組：腫瘤發(fā)生、腫瘤免疫耐受、癌癥、艾滋病、阿爾茨海默病、抑郁癥、和白內(nèi)障。
在另一優(yōu)選例中，所述的癌癥選自下組：肝癌、肺癌、宮頸癌、乳腺癌、黑色素瘤，胰腺癌，結(jié)腸癌，腎癌，前列腺癌等。
在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中含有0.001-99wt％，較佳地0.1-90wt％，更佳地1-80wt％的式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，按組合物的總重量計。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物的劑型為口服劑型、或注射劑型。
在另一優(yōu)選例中，所述口服劑型包括片劑、膠囊劑、膜劑、顆粒劑等，還包括緩釋型或非緩釋型劑型。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還可含有其他藥物活性成分。
在另一優(yōu)選例中，所述的其他藥物活性成分包括化合物、抗體、核酸分子、抗腫瘤的免疫細(xì)胞、或其組合。
在另一優(yōu)選例中，所述的化合物包括治療腫瘤的化療藥，如順鉑、紫杉醇。
在另一優(yōu)選例中，所述的抗體包括抗腫瘤的抗體，如抗her2的抗體、抗vegf2的抗體、或其組合。
在另一優(yōu)選例中，所述的抗腫瘤的免疫細(xì)胞包括car-t細(xì)胞。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種體外非治療性的抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶2活性的方法，其特征在于，包括步驟：
(a)將吲哚胺2,3-雙加氧酶2與本發(fā)明第一方面所述的式i化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽進(jìn)行接觸，從而抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶2的活性。
在另一優(yōu)選例中，所述的吲哚胺2,3-雙加氧酶2為游離狀態(tài)，或表達(dá)于細(xì)胞中。
在另一優(yōu)選例中，在步驟(a)中，將式i化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽添加到細(xì)胞培養(yǎng)體系中，從而使其與吲哚胺2,3-雙加氧酶2進(jìn)行接觸。
在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞為正常細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞。
在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞為哺乳動物細(xì)胞。
在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞為人細(xì)胞。
在本發(fā)明的第三方面，提供了一種抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶2或治療與ido2相關(guān)的疾病的方法，所述的方法包括：(i)給需要的對象施用本發(fā)明第一方面所述的式i化合物體、或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一優(yōu)選例中，所述的對象包括人和非人哺乳動物。
應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附圖說明
圖1顯示了本發(fā)明化合物對ido2活性的抑制情況。
具體實施方式
本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入地研究，首次意外地發(fā)現(xiàn)了一類結(jié)構(gòu)如式i所示化合物可以顯著地抑制ido2的活性。實驗表明，所述的式i化合物對ido2有較好的抑制效果，其抑制效果優(yōu)于體內(nèi)外實驗通用的ido2抑制劑1-mt(1-甲基色氨酸)，并且所述式i化合物均為可逆抑制劑。本發(fā)明的式i化合物可用于治療或預(yù)防由ido2單獨介導(dǎo)的或ido1、ido2共同參與介導(dǎo)的包括癌癥在內(nèi)的人類重大疾病。在此基礎(chǔ)上，完成了本發(fā)明。
術(shù)語
如本文所用，“本發(fā)明化合物”、“本發(fā)明的色胺酮及其衍生物”、或“式i化合物”可互換使用，指式i所示的化合物、或其消旋體、對應(yīng)異構(gòu)體、或其藥學(xué)上可接受的鹽。應(yīng)理解，該術(shù)語還包括上述組分的混合物。
式中，各基團(tuán)的定義如上所述。
本發(fā)明化合物不僅對ido2具有抑制作用，對ido1也有一定的抑制作用。
在本發(fā)明中，還包括式i化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指本發(fā)明化合物與酸或堿所形成的適合用作藥物的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽包括無機(jī)鹽和有機(jī)鹽。一類優(yōu)選的鹽是本發(fā)明化合物與酸形成的鹽。適合形成鹽的酸包括但并不限于：鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機(jī)酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有機(jī)酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。
本發(fā)明的式i化合物可采用現(xiàn)有技術(shù)中本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法進(jìn)行制備，對各個步驟的反應(yīng)參數(shù)沒有特別限制。
吲哚胺2，3-雙加氧酶
吲哚胺2，3-雙加氧酶1(indoleamine2,3-dioxygenase1,ido1)是哺乳動物中催化色氨酸沿著犬尿氨酸途徑(kynureninepathway)代謝的第一個限速酶。研究表明ido1在多種腫瘤組織中有高表達(dá)，可以通過降低腫瘤微環(huán)境中色氨酸濃度 來抑制淋巴細(xì)胞的增殖，在腫瘤免疫逃逸中起到重要作用。
如本文所用，“吲哚胺2，3-雙加氧酶2”，即indoleamine2,3-dioxygenase2(ido2)，是2007年發(fā)現(xiàn)的一種在編碼基因序列、分子結(jié)構(gòu)及生物活性上與ido1相似的酶。ido2位于ido1基因的下游，在氨基酸水平上，人ido1和ido2約有43％的同一性。此外，ido2還具有不同于ido1的表達(dá)特性，ido2主要在腎小管，肝臟和精子中表達(dá)，但ido1和ido2均通過抗原呈遞樹突狀細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)。研究表明，ido1和ido2具有不同的表達(dá)模式和不同的動力學(xué)特性，因此，ido2可能具有不同于ido1的功能。有研究發(fā)現(xiàn)在胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、腎癌的癌組織中有ido2的表達(dá)。
sorensen的研究以及munn等用ido1陽性的樹突狀細(xì)胞和t淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)，用ido1、ido2特異性抑制劑d-1-甲基色氨酸(dextro-1-methyltryptophan，d-1mt)、l-1-甲基色氨酸(levo-1-methyltryptophan，l-1-mt)處理細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)t細(xì)胞都有增殖的表現(xiàn)，說明抑制了ido1或ido2的活性后對淋巴細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用。而hou等研究發(fā)現(xiàn)，在用黑色素瘤研究中，用ido2的特異性抑制劑d-1-mt和環(huán)磷酰胺連用有明顯的縮小腫瘤的效果，比ido1的特異性抑制劑l-1-mt的效果明顯。而且在d-1-mt組生存率也得到明顯的延長。研究結(jié)果表明抑制ido2比抑制ido1在延緩腫瘤生長、減小腫瘤方面更有效果，推測其在免疫耐受中也起到重要作用。
merlo等研究發(fā)現(xiàn)與野生型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠相比，ido2基因敲除的小鼠體內(nèi)致病性自免疫抗體及抗體分泌細(xì)胞減少，關(guān)節(jié)炎癥狀減輕，而ido1基因敲除的小鼠則無此現(xiàn)象，表明ido2是自體抗體產(chǎn)生及炎癥發(fā)生的重要介導(dǎo)分子。
抑制類型
本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，不同化合物對于ido2和/或ido1的抑制類型是不同。在本發(fā)明中，抑制類型主要包括：競爭性、反競爭、非競爭、和混合型競爭。
組合物和施用方法
本發(fā)明提供了一種用于抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶2的組合物。所述的組合物包括(但并不限于)：藥物組合物、食品組合物、膳食補(bǔ)充劑、飲料組合物等。
在本發(fā)明中，所述的藥物組合物可直接用于疾病治療，例如，用于抗腫瘤 方面的治療。在使用本發(fā)明藥物制劑時，還可同時使用其他治療劑，如抗腫瘤的藥物等。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明化合物以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括(但并不限于)：鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、粉劑、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。
以藥物組合物為例，本發(fā)明的組合物可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過常規(guī)方法進(jìn)行制備。諸如片劑和膠囊之類的藥物組合物，可通過常規(guī)方法進(jìn)行制備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無菌條件下制造。本發(fā)明的藥物組合也可以被制成粉劑用于霧化吸入?；钚猿煞值慕o藥量是治療有效量，例如每天約1微克/千克體重-約5毫克/千克體重。此外，本發(fā)明的吲哚胺2,3-雙加氧酶2抑制劑還可與其他治療劑一起使用。
對于本發(fā)明的藥物組合物，可通過常規(guī)的方式施用于所需的對象(如人和非人哺乳動物)。代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、注射、霧化吸入等。
使用藥物組合物時，是將安全有效量的藥物施用于哺乳動物，其中該安全有效量通常至少約10微克/千克體重，而且在大多數(shù)情況下不超過約8毫克/千克體重，較佳地該劑量是約10微克/千克體重-約1毫克/千克體重。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。
本發(fā)明的主要優(yōu)點包括：
(a)本發(fā)明的式i化合物對ido2具有較好的抑制效果。
(b)本發(fā)明的式i化合物對對ido1也能起到抑制作用。
(c)本發(fā)明的式i化合物對于ido1或ido2介導(dǎo)的腫瘤免疫逃逸具有更好的治療潛能。
下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計算。
通用材料
ido1和ido2的核苷酸序列均已公開，實施例中的活性ido1和ido2為來源于人的ido1和ido2，可通過常規(guī)分子克隆手段進(jìn)行制備。
實施例中，待測抑制劑包括目前體內(nèi)外實驗通用的ido抑制劑l-1-mt和d-1-mt(l-1-甲基色氨酸，d-1-甲基色氨酸，均為市售)，以及選自下組的本發(fā)明化合物：
實施例1
酶水平ido2抑制劑的初步篩選
500μl的標(biāo)準(zhǔn)檢測體系中，將50mmol/l磷酸鉀緩沖液(ph7.5)、200μg/ml過氧化氫酶、40mmol/l抗壞血酸、20μmol/l亞甲基藍(lán)、適宜濃度的底物l-色氨酸以及終濃度均為10μm的待測ido2抑制劑(包括本發(fā)明化合物、l-1-mt和d-1-mt)混合，混合液于37℃水浴5min后向上述混合液中加入ido2,37℃反應(yīng)30min，酶促反應(yīng)結(jié)束后加入200μl30％(w/v)三氯乙酸終止反應(yīng)，然后在65℃水浴鍋中加熱15min，使反應(yīng)產(chǎn)物完成從n-甲酰犬尿氨酸到犬尿氨酸的轉(zhuǎn)化。138000×g離心10min，吸取上清100μl與等體積的2‰(w/v)對二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液充分混勻，犬尿氨酸可與該溶液反應(yīng)并使混合液變?yōu)辄S色，使用酶標(biāo)儀在492nm處檢測其吸光度。
初篩結(jié)果如圖1，在ph為7.5的條件下，本發(fā)明化合物對ido2的抑制率均顯著高于l-1-mt和d-1-mt。本實施例化合物初篩結(jié)果為后續(xù)ic50值、ki值測定以及抑制類型判定提供了數(shù)據(jù)驗證的基礎(chǔ)。
實施例2
本發(fā)明化合物抑制類型及ki值測定
在實施例1所述的500μl檢測體系中，分別加入不同濃度(20、30、40mm或20、25、35mm)的底物l-色氨酸，并在每一個底物濃度下，加入不同濃度梯度的待測抑制劑(包括本發(fā)明化合物、l-1-mt和d-1-mt)，對照組不加抑制劑，混合液于37℃水浴5min后加入10μlido2(約1μm),37℃反應(yīng)30min，酶促反應(yīng)結(jié)束后加入200μl30％(w/v)三氯乙酸終止反應(yīng)，然后在65℃水浴鍋中加熱15min，使反應(yīng)產(chǎn)物完成從n-甲酰犬尿氨酸到犬尿氨酸的轉(zhuǎn)化。138000×g離心10min，吸取上清100μl與等體積的2‰(w/v)對二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液充分混勻，犬尿氨酸可與該溶液反應(yīng)并使混合液變?yōu)辄S色，使用酶標(biāo)儀在492nm處 檢測其吸光度。以dixon作圖法(1/v～[i])判定抑制劑類型；以[s]/v～[i]作圖，可以得到抑制劑的ki值。
類似方法測定待測抑制劑對ido1的抑制類型及ki值。
結(jié)果如下表所示：本發(fā)明的化合物均為ido2的可逆抑制劑，其中，化合物2為非競爭性抑制劑，抑制ido2的ki值為1.96μm，僅為l-1-mt的0.46％，此外，化合物2對ido1也有較強(qiáng)的抑制作用，ki值為4.12，略高于抑制ido2的ki值。本發(fā)明的化合物對ido1或ido2都能起到抑制作用，因而對于ido1或ido2介導(dǎo)的腫瘤免疫逃逸具有更好的治療潛能。
注：ni：沒有抑制；nd：沒有測出；—：沒有測過。
實施例3
本發(fā)明化合物半數(shù)有效抑制濃度ic50值的測定
分別測定體外水平和細(xì)胞水平下本發(fā)明化合物抑制ido1和ido2的ic50值。
體外水平(酶水平)：在實施例1所述的500μl檢測體系中，加入30mm的底物l-色氨酸及不同濃度梯度的抑制劑(包括本發(fā)明化合物、l-1-mt和d-1-mt)， 對照組不加抑制劑，其他處理與實施例1相同，反應(yīng)結(jié)束后使用酶標(biāo)儀在492nm處檢測吸光度。以抑制率對抑制劑濃度作圖，利用改良寇氏法計算ic50值。
細(xì)胞水平：u87mg細(xì)胞株(atccno.:htb-14)，采用含有10％胎牛血清的dmem高糖培養(yǎng)基于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將細(xì)胞吹打均勻傳代于6孔板里，待細(xì)胞生長至80％～90％融合時進(jìn)行轉(zhuǎn)染。按照lipofectamine2000的說明書進(jìn)行操作，并稍作改良：吸棄含血清培養(yǎng)基并用pbs洗滌細(xì)胞2次，每孔加入1500μl無血清培養(yǎng)基。質(zhì)粒和脂質(zhì)體以1:2(每孔2.5ng質(zhì)粒和5μl脂質(zhì)體)的比例分別加入到預(yù)裝有125μlopti-mem培養(yǎng)基的ep管中并輕輕混勻，5min后將兩者混合，室溫孵育20min后分別逐滴均勻的加到待轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)液中，37℃、5％co2培養(yǎng)箱培育6小時細(xì)胞貼壁后換成含10％血清的dmem培養(yǎng)基，培養(yǎng)18h后將細(xì)胞以2.5×104細(xì)胞/孔的密度接種于96孔板中，37℃、濕度95％、5％co2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h待細(xì)胞貼壁，加入不同濃度梯度的待測化合物(包括本發(fā)明化合物、l-1-mt和d-1-mt)，并用含l-色氨酸(終濃度200μm，過濾除菌)的細(xì)胞培養(yǎng)基補(bǔ)齊至每孔總體積200μl，孵育24h后，取140μl上清到另一96孔板中，加入10μl30％(w/v)三氯乙酸，65℃加熱15min，13800×g離心5min。取100μl上清與等體積2‰(w/v)對-二氨基苯甲醛的冰乙酸溶液混合，充分混勻后采用酶標(biāo)儀在492nm檢測吸光值。實驗分組為pcdna3.1(+)-ido2轉(zhuǎn)染組(實驗組)、pcdna3.1(+)轉(zhuǎn)染組(空質(zhì)粒對照組)和未轉(zhuǎn)染組(空白對照組)，每組有三個復(fù)孔。以抑制率對抑制劑濃度作圖，利用改良寇氏法計算ic50值
結(jié)果如下表所示，本發(fā)明的化合物均為ido2的有效抑制劑，同時對ido1也有較好的抑制效果。其中，化合物2對于ido1和ido2均有極好的抑制效果，化合物2的酶水平和細(xì)胞水平的ic50值均顯著低于通用抑制劑l-1-mt和d-1-mt，其ido2抑制率分別為l-1-mt和d-1-mt抑制率的23.1倍和41.6倍(以細(xì)胞水平ic50值為例)。綜上，本發(fā)明化合物在酶水平和細(xì)胞水平均有極好的ido2抑制效果。
注：ni：沒有抑制；—：沒有測過。
本發(fā)明中所有數(shù)據(jù)均為3次獨立實驗(每次實驗同一化合物設(shè)定3個重復(fù))的均值。每組實驗數(shù)據(jù)經(jīng)公式計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差rsd(相對偏差/平均值)均小于1.5％，表明我們的數(shù)據(jù)重復(fù)性、再現(xiàn)性較好。
在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。