一種富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制工藝。它與常見的猴頭菇多糖在結(jié)構(gòu)組成上有較大的不同，目前對于猴頭菌菌絲體多糖的相關(guān)研究少有報道。利用本發(fā)明生產(chǎn)的猴頭菌菌絲體，在菌絲體的生長過程中添加硒元素，提取菌絲體多糖之后，既能夠發(fā)揮猴頭菌菌絲體多糖類物質(zhì)的生物活性作用，同時，也可以發(fā)揮硒元素的微量元素調(diào)節(jié)功能。所以，本發(fā)明制備的富硒猴頭菌菌絲體多糖能夠在食品抗菌添加劑、降糖藥品添加劑、機體免疫調(diào)節(jié)保健品等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利說明】—種富砸猴頭菌菌絲體多糖的精制工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制工藝，屬于微生物發(fā)酵工程【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]作為生命物質(zhì)構(gòu)成的主要成分之一，針對生物體內(nèi)多糖的研究已經(jīng)開展的十分深入，多糖分子的功能主要集中在兩方面，一方面，多糖分子可以作為信息分子進(jìn)行機體內(nèi)部生物信息的傳遞，因此，這類多糖分子具有種類多、含量少、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、信息量大的特點。另一方面，多糖分子可以作為細(xì)胞和細(xì)胞外間質(zhì)的主要構(gòu)成成分，這類多糖的種類較少，但是，每種多糖分子的含量較多，其結(jié)構(gòu)規(guī)則復(fù)雜，顆粒大小具有宏觀不均一性。同時，多糖也是一類天然高分子化合物，它是由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接在一起的多聚物，是一切有生命的有機體必不可少的成分，與維持生物體的機能密切相關(guān)。經(jīng)過近二十多年來的大量研究證明，多糖具有廣泛的生物學(xué)活性，如抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗感染、抗病毒、抗凝血、降血糖、抗輻射、降血脂、促進(jìn)核酸與蛋白質(zhì)的生物合成、控制細(xì)胞分裂和分化、調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長與衰老等，而且多糖作為藥物應(yīng)用過程的毒性極小，因而，多糖的活性研究已引起人們的極大興趣。
[0003]目前，活性多糖的研究對象主要包括植物類、動物類、真菌類、細(xì)菌類、地衣類、藻類、花粉類多糖等等，研究方法涉及各種化學(xué)方法以及儀器分析方法，研究范圍涉及多糖的分離純化、理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)分析、免疫學(xué)、毒理學(xué)、藥效學(xué)以及醫(yī)學(xué)臨床治療應(yīng)用等，可以說是針對多糖物質(zhì)的研究已經(jīng)達(dá)到了種類繁多、研究深入、應(yīng)用廣泛的程度。開展多糖資源的開發(fā)、多糖分子結(jié)構(gòu)的分析、多糖藥理作用等方面的研究，對于進(jìn)一步豐富多糖物質(zhì)的物種資源、探索多糖分子的生物學(xué)活性都具有十分重要的意義，因而，多糖的研究已經(jīng)成為分子生物學(xué)、藥劑學(xué)等領(lǐng)域中的熱 點研究內(nèi)容之一。猴頭菌屬于擔(dān)子菌門、猴頭菌科，是著名的藥食兩用真菌，其營養(yǎng)豐富，有“山珍猴頭、海味燕窩”的美稱。一般認(rèn)為，猴頭菌的主要活性物質(zhì)為多糖、多肽和脂肪族酰類物質(zhì)，其中猴頭多糖一直是研究的熱點。猴頭多糖屬于食藥兩用真菌多糖的一種，藥理研究證明，猴頭菌多糖能夠增強腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能、提高機體耐缺氧能力、提高肌體免疫力、提高心血輸出量、抑制腫瘤細(xì)胞生長、抗衰老、抗突變、抗氧化，對輻射損傷有保護作用，還對胃粘膜有較好的保護作用。因而，針對猴頭多糖進(jìn)行細(xì)致的研究具有十分重大的意義。
[0004]此外，關(guān)于富硒產(chǎn)品的開發(fā)，目前在食品、藥品、保健品方面也是一個熱點科研方向。硒元素是人體多種酶的活性中心，它也是人體必需的多種微量元素之一。多項研究結(jié)果表明，硒的氨基酸化合物在人體的生命活動中能夠起到抵御疾病、對抗衰老、增強人體免疫功能的作用。例如，硒元素是谷胱甘肽過氧化物酶家族和硫氧還蛋白還原酶家族的活性中心，由谷胱甘肽過氧化物酶家族和硫氧還蛋白還原酶家族與硒元素結(jié)合之后，具有較強的清除氧自由基、防止脂膜過氧化的功能，是機體抗氧化體系的重要組成部分。此外，硒元素對于機體的細(xì)胞免疫和體液免疫能力的維持具有一定的支撐作用，硒元素具有保護胸腺、維持機體淋巴細(xì)胞的活性以及刺激抗體產(chǎn)生的作用，從而實現(xiàn)了增強機體免疫能力的功能。
[0005]目前，研究較多的是猴頭菇多糖的生物活性，對于猴頭菌菌絲體多糖的相關(guān)研究較少。因此，在猴頭菌菌絲體的生長過程中添加硒元素，提取菌絲體多糖之后，既能夠發(fā)揮多糖類物質(zhì)的生物活性，同時也可以發(fā)揮硒的微量元素的調(diào)節(jié)功能。所以，本發(fā)明制備的富硒猴頭菌菌絲體多糖能夠在食品、藥品、保健品方面具有廣闊的應(yīng)用前景。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制工藝。
[0007]上述富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制工藝，包括如下步驟:
[0008](1)猴頭菌菌種的活化:將購買于中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號為5.0058猴頭菌菌種，利用PDA固體試管培養(yǎng)基活化，培養(yǎng)條件為25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)96小時-144小時，獲得活化后的猴頭菌菌種；
[0009](2)猴頭菌的液體初級發(fā)酵:將步驟(1)中的活化后的猴頭菌菌種，無菌條件下轉(zhuǎn)接于液體初級發(fā)酵培養(yǎng)基中，每IL猴頭菌液體初級發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖20g、蛋白胨
0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.125g,加蒸懼水至1L,分裝滅菌之后使用，轉(zhuǎn)接之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中進(jìn)行液體初級發(fā)酵培養(yǎng)15天-20天，獲得猴頭菌液體初級發(fā)酵產(chǎn)物；
[0010](3)猴頭菌的液體大規(guī)模發(fā)酵；將步驟(2)獲得的猴頭菌液體初級發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下挑取一塊菌絲片，轉(zhuǎn)接于一個裝有50mL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，IL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖25g、蛋白胨0.4g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.25g,加蒸懼水至1L,分裝滅菌之后使用，轉(zhuǎn)接之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天-20天，獲得富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物；
[0011](4)富硒猴頭菌菌絲體的收集:將步驟(3)獲得的富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下利用8層紗布進(jìn)行過濾收集菌絲體，再利用蒸餾水清洗3-5次，并且盡可能多的除掉水分，然后，將猴頭菌菌絲片置于35°C _40°C干燥培養(yǎng)箱中進(jìn)行干燥處理24小時-48小時，獲得干燥處理后的猴頭菌菌絲體；
[0012](5)富硒猴頭菌菌絲體的粉碎:將步驟(4)獲得的干燥處理后的猴頭菌菌絲體，利用潔凈的研缽進(jìn)行研磨處理，研磨到成為較細(xì)的粉末狀為止，獲得富硒猴頭菌菌絲體粉末；
[0013](6)富硒猴頭菌菌絲體粗多糖的提取:稱取步驟(5)獲得的富硒猴頭菌菌絲體粉末5g，在500mL的玻璃燒杯中加入150mL-250mL的蒸餾水，在恒溫水浴鍋中進(jìn)行50°C -70°C恒溫浸提3h-5h，之后，按照體積比為1:1的比例加入無水乙醇進(jìn)行粗多糖的沉淀，然后，1000Orpm離心收集粗多糖，最后沉淀在35°C _40°C的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行粗多糖的干燥處理，獲得富硒猴頭菌菌絲體粗多糖；
[0014](7)富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制:將步驟(6)獲得的富硒猴頭菌菌絲體粗多糖2g，利用按照體積比為25:24:1的比例配制的苯酚-氯仿-異戊醇混合液20mL，進(jìn)行室溫浸泡處理3h-5h，之后將混合液進(jìn)行1000Orpm離心，收集上層液體，利用分子截留能力為3500KDa的透析袋對蒸餾水透析24h，之后，按照體積比為1:1的比例加入無水乙醇進(jìn)行多糖的沉淀，然后，1000Orpm離心收集多糖，最后沉淀在35°C _40°C的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行多糖的干燥處理，獲得富硒猴頭菌菌絲體精制多糖。
[0015]本發(fā)明的優(yōu)點:
[0016]本發(fā)明涉及一種富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制工藝。由該方法制備的富硒猴頭菌菌絲體精制多糖既可以充分發(fā)揮猴頭菌菌絲多糖的免疫調(diào)節(jié)和抗氧化、降血糖的生物活性作用，又可以發(fā)揮硒元素的微量元素調(diào)節(jié)功能，因此，它可以成為保健品微量添加劑的主要成分。同時，獲得的富硒猴頭菌菌絲體精制多糖，在降血糖藥品的開發(fā)方面也具有良好的應(yīng)用價值。
【具體實施方式】
[0017]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述。
[0018]實施例1 一種富硒猴頭菌菌絲體多糖的低溫精制工藝。
[0019](I)猴頭菌菌種的活化:將購買于中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號為5.0058猴頭菌菌種，利用PDA固體試管培養(yǎng)基活化，培養(yǎng)條件為25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)96小時-144小時，獲得活化后的猴頭菌菌種；
[0020](2)猴頭菌的液體初級發(fā)酵:將步驟(1)中的活化后的猴頭菌菌種，無菌條件下轉(zhuǎn)接于液體初級發(fā)酵培養(yǎng)基中，每IL猴頭菌液體初級發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖20g、蛋白胨
0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.125g,加蒸懼水至1L,分裝滅菌之后使用，轉(zhuǎn)接之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中進(jìn)行液體初級發(fā)酵培養(yǎng)15天-20天，獲得猴頭菌液體初級發(fā)酵產(chǎn)物；
`[0021](3)猴頭菌的液體大規(guī)模發(fā)酵；將步驟(2)獲得的猴頭菌液體初級發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下挑取一塊菌絲片，轉(zhuǎn)接于一個裝有50mL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，IL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖25g、蛋白胨0.4g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.25g,加蒸懼水至1L,分裝滅菌之后使用，轉(zhuǎn)接之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天-20天，獲得富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物；
[0022](4)富硒猴頭菌菌絲體的收集:將步驟(3)獲得的富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下利用8層紗布進(jìn)行過濾收集菌絲體，再利用蒸餾水清洗3-5次，并且盡可能多的除掉水分，然后，將猴頭菌菌絲片置于35°C _40°C干燥培養(yǎng)箱中進(jìn)行干燥處理24小時-48小時，獲得干燥處理后的猴頭菌菌絲體；
[0023](5)富硒猴頭菌菌絲體的粉碎:將步驟(4)獲得的干燥處理后的猴頭菌菌絲體，利用潔凈的研缽進(jìn)行研磨處理，研磨到成為較細(xì)的粉末狀為止，獲得富硒猴頭菌菌絲體粉末；
[0024](6)富硒猴頭菌菌絲體粗多糖的提取:稱取步驟(5)獲得的富硒猴頭菌菌絲體粉末5g，在500mL的玻璃燒杯中加入150mL的蒸餾水，在恒溫水浴鍋中進(jìn)行50°C恒溫浸提4h，之后，按照體積比為1:1的比例加入無水乙醇進(jìn)行粗多糖的沉淀，然后，1000Orpm離心收集粗多糖，最后沉淀在35V _40°C的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行粗多糖的干燥處理，獲得富硒猴頭菌菌絲體粗多糖；
[0025](7)富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制:將步驟(6)獲得的富硒猴頭菌菌絲體粗多糖2g，按照體積比為25:24:1的比例配制的苯酚-氯仿-異戊醇混合液20mL，進(jìn)行室溫浸泡處理3h-5h，之后將混合液進(jìn)行1000Orpm離心，收集上層液體，利用分子截留能力為3500KDa的透析袋對蒸餾水透析24h，之后，按照體積比為1:1的比例加入無水乙醇進(jìn)行多糖的沉淀，然后，1000Orpm離心收集多糖，最后沉淀在35°C _40°C的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行多糖的干燥處理，獲得富硒猴頭菌菌絲體精制多糖。
[0026]在這種提取工藝的處理條件下，富硒猴頭菌菌絲體精制多糖的得率為8.32%。
[0027]實施例2 —種富硒猴頭菌菌絲體多糖的中溫精制工藝。
[0028](I)猴頭菌菌種的活化:將購買于中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號為
5.0058猴頭菌菌種，利用PDA固體試管培養(yǎng)基活化，培養(yǎng)條件為25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)96小時-144小時，獲得活化后的猴頭菌菌種；
[0029](2)猴頭菌的液體初級發(fā)酵:將步驟(1)中的活化后的猴頭菌菌種，無菌條件下轉(zhuǎn)接于液體初級發(fā)酵培養(yǎng)基中，每IL猴頭菌液體初級發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖20g、蛋白胨
0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.125g,加蒸懼水至1L,分裝滅菌之后使用，轉(zhuǎn)接之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中進(jìn)行液體初級發(fā)酵培養(yǎng)15天-20天，獲得猴頭菌液體初級發(fā)酵產(chǎn)物；
[0030](3)猴頭菌的液體大規(guī)模發(fā)酵；將步驟(2)獲得的猴頭菌液體初級發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下挑取一塊菌絲片，轉(zhuǎn)接于一個裝有50mL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，IL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖25g、蛋白胨0.4g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.25g,加蒸懼水至1L,分裝滅菌之后使用，轉(zhuǎn)接之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天-20天，獲得富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物；
[0031](4)富硒猴頭菌`菌絲體的收集:將步驟(3)獲得的富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下利用8層紗布進(jìn)行過濾收集菌絲體，再利用蒸餾水清洗3-5次，并且盡可能多的除掉水分，然后，將猴頭菌菌絲片置于35°C _40°C干燥培養(yǎng)箱中進(jìn)行干燥處理24小時-48小時，獲得干燥處理后的猴頭菌菌絲體；
[0032](5)富硒猴頭菌菌絲體的粉碎:將步驟(4)獲得的干燥處理后的猴頭菌菌絲體，利用潔凈的研缽進(jìn)行研磨處理，研磨到成為較細(xì)的粉末狀為止，獲得富硒猴頭菌菌絲體粉末；
[0033](6)富硒猴頭菌菌絲體粗多糖的提取:稱取步驟(5)獲得的富硒猴頭菌菌絲體粉末5g，在500mL的玻璃燒杯中加入150mL-250mL的蒸餾水，在恒溫水浴鍋中進(jìn)行60°C恒溫浸提4h，之后，按照體積比為1:1的比例加入無水乙醇進(jìn)行粗多糖的沉淀，然后，1000Orpm離心收集粗多糖，最后沉淀在35 V -40°C的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行粗多糖的干燥處理，獲得富硒猴頭菌菌絲體粗多糖；
[0034](7)富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制:將步驟(6)獲得的富硒猴頭菌菌絲體粗多糖2g，利用按照體積比為25:24:1的比例配制的苯酚-氯仿-異戊醇混合液20mL，進(jìn)行室溫浸泡處理3h-5h，之后將混合液進(jìn)行1000Orpm離心，收集上層液體，利用分子截留能力為3500KDa的透析袋對蒸餾水透析24h，之后，按照體積比為1:1的比例加入無水乙醇進(jìn)行多糖的沉淀，然后，1000Orpm離心收集多糖，最后沉淀在35°C _40°C的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行多糖的干燥處理，獲得富硒猴頭菌菌絲體精制多糖。
[0035]在這種提取工藝的處理條件下，富硒猴頭菌菌絲體精制多糖的得率為9.36%。
[0036]實施例3 —種富硒猴頭菌菌絲體多糖的高溫精制工藝。。[0037](I)猴頭菌菌種的活化:將購買于中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號為
5.0058猴頭菌菌種，利用PDA固體試管培養(yǎng)基活化，培養(yǎng)條件為25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)96小時-144小時，獲得活化后的猴頭菌菌種；
[0038](2)猴頭菌的液體初級發(fā)酵:將步驟(1)中的活化后的猴頭菌菌種，無菌條件下轉(zhuǎn)接于液體初級發(fā)酵培養(yǎng)基中，每IL猴頭菌液體初級發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖20g、蛋白胨
0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.125g,加蒸懼水至1L,分裝滅菌之后使用，轉(zhuǎn)接之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中進(jìn)行液體初級發(fā)酵培養(yǎng)15天-20天，獲得猴頭菌液體初級發(fā)酵產(chǎn)物；
[0039](3)猴頭菌的液體大規(guī)模發(fā)酵；將步驟(2)獲得的猴頭菌液體初級發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下挑取一塊菌絲片，轉(zhuǎn)接于一個裝有50mL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，IL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖25g、蛋白胨0.4g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.25g,加蒸懼水至1L,分裝滅菌之后使用，轉(zhuǎn)接之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天-20天，獲得富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物；
[0040](4)富硒猴頭菌菌絲體的收集:將步驟(3)獲得的富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下利用8層紗布進(jìn)行過濾收集菌絲體，再利用蒸餾水清洗3-5次，并且盡可能多的除掉水分，然后，將猴頭菌菌絲片置于35°C _40°C干燥培養(yǎng)箱中進(jìn)行干燥處理24小時-48小時，獲得干燥處理后的猴頭菌菌絲體；
[0041](5)富硒猴頭菌菌絲體的粉碎:將步驟(4)獲得的干燥處理后的猴頭菌菌絲體，利用潔凈的研缽進(jìn)行研磨處理，研磨到成為較細(xì)的粉末狀為止，獲得富硒猴頭菌菌絲體粉末；
[0042](6)富硒猴頭菌菌絲體粗多糖的提取:稱取步驟(5)獲得的富硒猴頭菌菌絲體粉末5g，在500mL的玻璃燒杯中加入150mL-250mL的蒸餾水，在恒溫水浴鍋中進(jìn)行70°C恒溫浸提3h-5h，之后，按照體積比為1`:1的比例加入無水乙醇進(jìn)行粗多糖的沉淀，然后，1000Orpm離心收集粗多糖，最后沉淀在35°C _40°C的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行粗多糖的干燥處理，獲得富硒猴頭菌菌絲體粗多糖；
[0043](7)富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制:將步驟(6)獲得的富硒猴頭菌菌絲體粗多糖2g，利用按照體積比為25:24:1的比例配制的苯酚-氯仿-異戊醇混合液20mL，進(jìn)行室溫浸泡處理3h-5h，之后將混合液進(jìn)行1000Orpm離心，收集上層液體，利用分子截留能力為3500KDa的透析袋對蒸餾水透析24h，之后，按照體積比為1:1的比例加入無水乙醇進(jìn)行多糖的沉淀，然后，1000Orpm離心收集多糖，最后沉淀在35°C _40°C的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行多糖的干燥處理，獲得富硒猴頭菌菌絲體精制多糖。
[0044]在這種提取工藝的處理條件下，富硒猴頭菌菌絲體精制多糖的得率為11.84%。
【權(quán)利要求】
1.一種富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制工藝，其特征在于，包括以下步驟: (1)猴頭菌菌種的活化:將購買于中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號為5.0058猴頭菌菌種，利用PDA固體試管培養(yǎng)基活化，培養(yǎng)條件為25V _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)96小時-144小時,獲得活化后的猴頭菌菌種； (2)猴頭菌的液體初級發(fā)酵:將步驟(1)中的活化后的猴頭菌菌種，無菌條件下轉(zhuǎn)接于液體初級發(fā)酵培養(yǎng)基中，IL猴頭菌液體初級發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.125g,加蒸懼水至1L,分裝滅菌之后使用，轉(zhuǎn)接之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中進(jìn)行液體初級發(fā)酵培養(yǎng)15天-20天，獲得猴頭菌液體初級發(fā)酵產(chǎn)物； (3)猴頭菌的液體大規(guī)模發(fā)酵；將步驟(2)獲得的猴頭菌液體初級發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下挑取一塊菌絲片，轉(zhuǎn)接于一個裝有50mL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，IL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖25g、蛋白胨0.4g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.25g,加蒸懼水至1L,分裝滅菌之后使用，轉(zhuǎn)接之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天-20天，獲得富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物； (4)富硒猴頭菌菌絲體的收集:將步驟(3)獲得的富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下利用紗布進(jìn)行過濾收集菌絲體，再利用蒸餾水清洗3-5次，并且盡可能多的除掉水分，然后，將猴頭菌菌絲片置于35°C _40°C干燥培養(yǎng)箱中進(jìn)行干燥處理24小時-48小時，獲得干燥處理后的猴頭菌菌絲體； (5)富硒猴頭菌菌絲體的粉碎:將步驟(4)獲得的干燥處理后的猴頭菌菌絲體，利用潔凈的研缽進(jìn)行研磨處理，研磨到成為較細(xì)的粉末狀為止，獲得富硒猴頭菌菌絲體粉末； (6)富硒猴頭菌菌絲體粗多糖的提取:稱取步驟(5)獲得的富硒猴頭菌菌絲體粉末5g，在500mL的玻璃燒杯中加入150mL-250mL的蒸餾水，在恒溫水浴鍋中進(jìn)行50°C -70°C恒溫浸提3h-5h，之后，按照體積比為1:1的比例加入無水乙醇進(jìn)行粗多糖的沉淀，然后，1000Orpm離心收集粗多糖，最后沉淀在35V _40°C的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行粗多糖的干燥處理，獲得富硒猴頭菌菌絲體粗多糖； (7)富硒猴頭菌菌絲體多糖的精制:將步驟(6)獲得的富硒猴頭菌菌絲體粗多糖2g，按照體積比為25:24:1的比例配制的苯酚-氯仿-異戊醇混合液20mL，進(jìn)行室溫浸泡處理3h-5h，之后將混合液進(jìn)行1000Orpm離心，收集上層液體，利用分子截留能力為3500KDa的透析袋對蒸餾水透析24h，之后，按照體積比為1:1的比例加入無水乙醇進(jìn)行多糖的沉淀，然后，1000Orpm離心收集多糖，最后沉淀在35 V _40°C的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行多糖的干燥處理，獲得富硒猴頭菌菌絲體精制多糖。
【文檔編號】C08B37/00GK103725730SQ201310733275
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】杜志強, 任大明 申請人:內(nèi)蒙古科技大學(xué)