專利名稱：黃精多糖的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是屬于一種提取黃精多糖的用途。
多糖具有多種生理功能，因而多糖藥物近年來發(fā)展迅速。目前，從天然產(chǎn)物或發(fā)酵產(chǎn)物中分離制備多糖，國(guó)內(nèi)外多采用物理、化學(xué)方法。一般將原藥粉碎、脫脂后，用水、稀酸或堿提取，提取液濃縮后，先用三氯乙酸或氯仿-正丁醇法去除雜蛋白，然后透析去除小分子雜質(zhì)，濃縮后凍干或用有機(jī)溶劑沉淀即獲得多糖產(chǎn)物。多糖的精制多采用離子交換和凝膠過濾方法。上述多糖制備方法存在以下足1、多糖中含有酚型化合物，因而具有較深的黃色、棕色。這些顏色用活性炭無法脫色，用氧化劑則容易使多糖降解；2、提取過程復(fù)雜時(shí)間長(zhǎng)、成本高，規(guī)?；a(chǎn)難度大；3、精制多糖時(shí)用離子交換介質(zhì)多為纖維和葡聚糖凝膠衍生物，本身就是多糖，當(dāng)受到微生物和某些化學(xué)因素作用時(shí)，糖制品容易受到介質(zhì)降解產(chǎn)物的污染。總之，以上方法，不易獲得高純度的多糖。
本發(fā)明目的是開發(fā)以黃精生藥為原料，提取工藝簡(jiǎn)單，又能得到高純度黃精多糖的用途。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)黃精多糖的提取方法是將生黃精生切成0.4～2cm3小塊，加放入相當(dāng)于生黃精重量4～16倍量水，煮沸提取1～4小時(shí)，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留，藥渣另加入相當(dāng)于生黃精重量8～12倍的水，煮沸提取1～2小時(shí)，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留，再將藥渣加入相當(dāng)于生黃精8～12倍的水，煮沸提取1～2小時(shí)，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留；將三次提取液合并，離心處理，將上清液減壓-0.03～-0.06mm汞柱、溫度為45～60℃下濃縮至相對(duì)密度1.08～1.25，放置至室溫，加入相當(dāng)于生黃精重量4～8倍的95％(體積/體積)的乙醇液，攪拌靜置12～48小時(shí)，分離取沉淀物，加相當(dāng)于生黃精重量0.5～2倍的去離子水洗滌，收集水洗液減壓至-0.03～-0.06mm汞柱、溫度為45～60℃下濃縮至相對(duì)密度1.10～1.35，加入相當(dāng)于生黃精重量0.5～2倍量的95％(體積/體積)乙醇沉淀，靜置12～48小時(shí)，分取沉淀物；以相當(dāng)于生黃精重量0.5～2倍量的95％(體積/體積)乙醇洗滌三次，棄去醇洗液，沉淀物在壓力0.5～1.5mpa、溫度為40～70℃下真空干燥，取出、粉碎。黃精多糖降脂作用，黃精多糖能降低血清CHO、LDL、LP(a)濃度，但以LDL、LP(a)濃度降低更明顯；黃精多糖降低主動(dòng)脈內(nèi)膜泡沫細(xì)胞形成。黃精多糖降糖作用，黃精多糖治療后，能降低血糖及血清糖化血紅蛋白的含量。
本發(fā)明黃精多糖的用途，提取方法簡(jiǎn)單，能降脂，能降低血糖及血清糖化血紅蛋白的含量。
黃精多糖的提取方法是將生黃精生切成1cm3小塊，加放入相當(dāng)于生黃精重量8倍量水，煮沸提取2小時(shí)，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留，藥渣另加入相當(dāng)于生黃精重量12倍的水，煮沸提取1小時(shí)，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留，再將藥渣加入相當(dāng)于生黃精12倍的水，煮沸提取1小時(shí)，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留；將三次提取液合并，離心處理，將上清液減壓-0.03mm汞柱、溫度為60℃下濃縮至相對(duì)密度1.08，放置至室溫，加入相當(dāng)于生黃精重量8倍的95％(體積/體積)的乙醇液，攪拌靜置48小時(shí)，分離取沉淀物，加相當(dāng)于生黃精重量0.5倍的去離子水洗滌，收集水洗液減壓至-0.06mm汞柱、溫度為60℃下濃縮至相對(duì)密度1.10，加入相當(dāng)于生黃精重量0.5倍量的95％(體積/體積)乙醇沉淀，靜置24小時(shí)，分取沉淀物；以相當(dāng)于生黃精重量1倍量的95％(體積/體積)乙醇洗滌三次，棄去醇洗液，沉淀物在壓力0.5mpa、溫度為50℃下真空干燥，取出、粉碎。
黃精多糖降脂作用1、材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 新西蘭純種兔30只，雌雄各半，5月齡，體重2.4±0.2kg，隨機(jī)分5組血脂康組、舒降之組、黃精1、2、3組，每組6只。
1.2每毫升含生藥10g的黃精多糖，急性毒性試驗(yàn)黃精多糖小鼠灌胃給藥的LD50為75ml·kg-1即相當(dāng)于含生約750g·kg-1。提示治療劑量無毒副作用。
1.3方法1.3.1高脂血癥動(dòng)物模型的建立用常規(guī)飼料加5％豬油和0.5％膽固醇喂養(yǎng)動(dòng)物，10天后禁食10小時(shí)測(cè)定血脂濃度，待形成高血脂癥實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃蠓謩e給于常規(guī)降脂藥物及實(shí)驗(yàn)藥物，并維持高脂飲食一個(gè)月至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
1.3.2給藥方法 血脂康組300mg·kg-1·d-1血脂康加入40ml飲水溶解，分二次于動(dòng)物進(jìn)食后喂服；舒降之組5mg·kg-1·d-1舒降之加入20ml飲用水，于動(dòng)物進(jìn)食后一次喂服，黃精1、2、3組分別將0.4ml、0.8ml、1.6ml·kg-1·d-1的黃精多糖溶于40ml飲用水，分二次于動(dòng)物進(jìn)食后喂服。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥時(shí)間均為一個(gè)月。
1.3.3血脂測(cè)定 實(shí)驗(yàn)前隨機(jī)選擇12只動(dòng)物禁食10小時(shí)測(cè)定其血脂含量，給藥一個(gè)月后禁食10小時(shí)檢查全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血脂含量。測(cè)定方法為鐘點(diǎn)法。
1.3.4主動(dòng)脈形態(tài)及光鏡觀察，實(shí)驗(yàn)后處死全部動(dòng)物，取其主動(dòng)脈進(jìn)行大體形態(tài)觀察，并取其部分主動(dòng)脈用10％甲醛固定后石臘包埋切片，HE染色和光鏡觀察。
1.4統(tǒng)計(jì)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±S表示，統(tǒng)計(jì)分析為配對(duì)t檢驗(yàn)，多個(gè)均數(shù)之間兩兩比較用q檢驗(yàn)，多個(gè)標(biāo)本比較用x2檢驗(yàn)。
2、結(jié)果2.1高膽固醇飲食的動(dòng)物血脂變化(表1)表1高脂飲食后動(dòng)物血脂變化n TG(mmol.L)CHO(mmol/L) HDL(mmol/L) LDL(mmol.L)LP(a)(mg/L)高脂飲食前12 0.63±0.201.25±0.34 0.74±0.190.35±0.17 148.9±13.1高脂飲食后30 0.45±0.1110.07±1.58*0.89±0.119.62±1.55*640.8±143.6**P＜0.01從表1可看出，經(jīng)高膽固醇飲食喂養(yǎng)后，試驗(yàn)動(dòng)物CHO、LDL、Lp(a)均顯著升高，形成了明顯的高脂血癥。
2.2各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥前后的血脂變化(表2)表2各實(shí)驗(yàn)組治療前后血脂變化TG CHO HDL LDL LP(a)n 治療前 治療后 治療前 治療后治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后血脂康組6 0.34±0.81 0.29±0.09 11.08±1.95 8.20±5.31 0.92±0.17 1.02±0.29 10.04±2.04 7.05±5.06 712.9±100.6 32.4±12.3*舒降之組6 0.44±0.17 0.34±0.12 10.96±1.79 6.06±3.92△0.88±0.09 0.92±0.24 9.754±1.54 4.98±3.87△700.1±180.6 43.3±14.3*黃精1組6 0.45±0.06 0.50±0.14 9.91±0.99 12.13±6.31 0.83±0.09 0.76±0.18 8.84±1.07 11.14±6.22 573.8±151.1 50.8±9.9*黃精2組6 0.49±0.03 0.44±0.25 0.38±1.16 6.76±3.81 0.91±0.11 1.13±0.36 9.30±1.10 5.52±3.76△600.8±150.1 52.9±15.1*黃精3組6 0.52±0.06 0.66±0.33 11.21±191 5.85±1.99*0.92±0.10 1.22±0.51 11.07±1.89 3.35±1.64*640.5±107.8 45.3±14.0*與治療前比較，*P＜0.01，△P＜0.05。
從表2可看出，黃精多糖3組、舒降之組治療后血清CHO、LDL、LP(a)濃度顯著降低，但前者更為顯著；黃精2組治療后血清LDL、LP(a)濃度明顯降低；黃精1組除LP(a)下降外，其余各指標(biāo)均無明顯變化。
1.3實(shí)驗(yàn)后各組動(dòng)物血脂變化比較(表3)表3 實(shí)驗(yàn)后各組動(dòng)物血脂變化比較nTG CHO HDLLDL LP(a)血脂康組6 0.29±0.09 8.20±5.31 1.02±0.29 7.05±5.06 32.4±12.3舒降之 6 0.34±0.12 6.06±3.92 0.92±0.24 4.98±3.87 43.3±14.3黃精1組 6 0.50±0.14 12.13±6.31 0.76±0.18 11.14±6.22 50.8±9.9黃精2組 6 0.44±0.25 6.76±3.81 1.13±0.36 5.52±3.76 52.9±15.1黃精3組 6 0.66±0.33 5.85±1.99 1.22±0.51 4.35±1.64 45.3±14.0P均＞0.05表3表示實(shí)驗(yàn)?zāi)└髦委熃M之間血脂濃度的變化無顯著差異。
2.4主動(dòng)脈粥樣硬化情況2.4.1大體形態(tài)觀察，血脂康組有1例樣本主動(dòng)脈內(nèi)膜可見少量脂質(zhì)條紋形成，其余實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均未見明顯的脂質(zhì)條紋或粥樣斑塊形成。
2.4.2光鏡觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物主動(dòng)脈內(nèi)膜見不同程的泡沫細(xì)胞形成。
其結(jié)果見表4表4主動(dòng)脈內(nèi)膜泡沫細(xì)胞形成情況檢驗(yàn)樣本數(shù)分組合計(jì) 發(fā)生率有泡沫細(xì)胞形成 無泡沫細(xì)胞形成血脂康組 60 6 100％舒降之組 33 6 50％黃精1組 24 6 33.3％黃精2組 24 6 33.3％黃精3組 15 6 16.7％**與其它各組比較，P＜0.05從表4可看出，黃精多糖3組主動(dòng)脈內(nèi)膜泡沫細(xì)胞形成顯著少于血康組和舒降之組(P＜0.05)。
黃精多糖降糖作用。
1、材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 用BALB/C小鼠24只，雌雄各半，2月齡，體重23±2g，隨機(jī)分4組美吡達(dá)組、糖脈康組、黃精多糖1、2組，每組6只。
1.2藥物來源每毫升含生藥10g的黃精多糖，急性毒性試驗(yàn)黃精多糖小鼠灌胃給藥的LD50為75ml·kg-1即相當(dāng)于含生藥750g·kg-1提示治療劑量無毒副作用。
1.3方法1.3.1糖尿病動(dòng)物模型的建立小鼠腹腔注射鏈脲佐菌素40mg·kg-1·d-1連續(xù)5天。10天后禁食6小時(shí)剪尾測(cè)定其血糖含量，待形成糖尿病模型后給予對(duì)照及實(shí)驗(yàn)藥物。
1.3.2給藥方法美吡達(dá)組8mg·kg-1·d-1美吡達(dá)加入生理鹽水0.5ml溶解，每日一次灌胃給予；糖脈康組12.5g·kg-1·d-1糖脈康加入1ml生理鹽水溶解，分二次灌胃給予；黃精多糖1、2組，分別將1ml、4ml·kg-1·d-1(相當(dāng)于生藥10g、40g·kg-1·d-1)的黃精多糖溶入生理鹽水1ml，分二次灌胃給予。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥時(shí)間為6周。
1.3.3檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)前每組隨機(jī)選擇3只動(dòng)物禁食6小時(shí)后剪尾測(cè)定其血糖含量，注射鏈脲佐菌素后同上法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血糖含量，實(shí)驗(yàn)?zāi)?給藥6周后)禁食6小時(shí)取眶動(dòng)脈血測(cè)定血糖及糖化血紅蛋白(HbA1C)含量。檢測(cè)方法分別為葡萄糖氧化酶法和柱層析法。
1.4統(tǒng)計(jì)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±S表示，統(tǒng)計(jì)分析為配對(duì)t檢驗(yàn)和多個(gè)均數(shù)之間兩兩比較q檢驗(yàn)。
2、結(jié)果2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射鏈脲佐菌素后血糖變化(表1)表1實(shí)驗(yàn)性糖尿病動(dòng)物血糖變化n FBS(mmol/L) P值注射前125.55±0.610.000注射后248.85±0.99從表1可看出，實(shí)驗(yàn)小鼠注射鏈脲佐菌素后空腹血糖(FBS)顯著升高，形成了典型的實(shí)驗(yàn)糖尿病模型。
2.2各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物治療前后血糖變化(表2)表2各實(shí)驗(yàn)組用藥后血糖變化FBS(mmol/L) P值n治療前治療后美吡達(dá)組68.93±0.696.33±1.040.001糖脈康組68.25±0.457.73±2.340.607黃精1組 69.75±0.726.43±1.220.000黃精2組 68.95±0.657.50±0.590.002從表2可看出，經(jīng)黃精多糖及美吡達(dá)治療后，F(xiàn)BS降低具有非常顯著性差異(P＜0.01)，糖脈康治療后FBS下降無顯著差異(P＞0.05)。
3.3實(shí)驗(yàn)后各組動(dòng)物FBS及HbA1C含量的變化(表3)表3實(shí)驗(yàn)后各組FBS、HbA1c含量變化nFBS(mmol/L)HbA1c(％)美吡達(dá)組66.33±1.04*3.12±0.42糖脈康組67.73±2.34*3.35±0.2黃精1組 66.43±1.22*2.45±0.36△黃精2組 67.50±0.59*2.06±0.22△*各組間比較，P＞0.05；△與美吡達(dá)組及糖脈康組比較，P＜0.01從表3可看出，各治療組的降糖效果比較無顯著性差異(P＞0.05)；但黃精多糖1、2組降低HbA1C作用與美吡達(dá)組及糖脈康組比較有非常顯著性差異(P＜0.01)。
權(quán)利要求
1.黃精多糖的用途，其特征在于黃精多糖是制備治療主動(dòng)脈內(nèi)膜泡沫細(xì)胞形成的藥物以及制備治療血清糖化血紅蛋白(HbA1C)的藥物。
全文摘要
本發(fā)明黃精多糖的用途，其特征在于黃精多糖的用途，其特征在于黃精多糖是制備治療主動(dòng)脈內(nèi)膜泡沫細(xì)胞形成的藥物以及制備治療血清糖化血紅蛋白(HbA
文檔編號(hào)C08B37/00GK1494913SQ03143330
公開日2004年5月12日 申請(qǐng)日期2002年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2002年1月6日
發(fā)明者吳燊榮, 李友元, 肖灑, 吳 榮 申請(qǐng)人:吳燊榮, 李友元, 肖灑, 吳 榮