專(zhuān)利名稱(chēng)：細(xì)胞凋亡抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及細(xì)胞凋亡抑制劑。更詳細(xì)地說(shuō)，本發(fā)明涉及含有已知的作為中樞神經(jīng)型前列腺環(huán)素受體的特異配基的異卡巴環(huán)素(isocarbacyclin)衍生物為有效成分，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞等的細(xì)胞凋亡有優(yōu)良抑制作用的新型細(xì)胞凋亡抑制劑。
細(xì)胞凋亡為遺傳性的細(xì)胞程序性死亡的一種，在形態(tài)學(xué)上發(fā)生以下的過(guò)程，即核固縮、細(xì)胞縮小、空泡化、細(xì)胞表面的平滑化、細(xì)胞間隔的擴(kuò)大、與周?chē)募?xì)胞分離、細(xì)胞的片斷化(細(xì)胞凋亡小體)、巨噬細(xì)胞引起的吞噬作用等。此外在生物化學(xué)方面，可發(fā)生因核酸內(nèi)切酶活性所致的DNA核粒單位變成180～200堿基長(zhǎng)的斷片化(今日免疫學(xué)(Immunology Today)7:115-119,1986；科學(xué)(Science)245:301-305,1989)。
目前已知，細(xì)胞凋亡過(guò)程不僅是發(fā)育、分化、正常組織和細(xì)胞轉(zhuǎn)化的生理機(jī)制，而且還和腦梗塞后等的缺血性神經(jīng)元壞死、腫瘤的退縮、放射線和抗癌藥的作用、AIDS等病毒感染引起的淋巴細(xì)胞減少、炎癥等疾病有關(guān)。期待著對(duì)調(diào)節(jié)此過(guò)程藥物(即細(xì)胞凋亡抑制劑、細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑)的開(kāi)發(fā)將產(chǎn)生對(duì)腦神經(jīng)系統(tǒng)、癌癥和老化等多種疾病有新作用機(jī)制的藥物。
作為誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的物質(zhì)、因素，已報(bào)道有糖皮質(zhì)激素、谷氨酸等神經(jīng)遞質(zhì)的毒性、放射線照射、NK細(xì)胞、殺傷細(xì)胞、腫瘤壞死因子(TNF)、及淋巴細(xì)胞毒素(LT)等細(xì)胞因子。此外，也有報(bào)道表明蛋白質(zhì)合成抑制劑放線菌酮和RNA合成抑制劑放線菌素D對(duì)人白血病細(xì)胞HL-60有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。更進(jìn)一步，最近研制出了對(duì)應(yīng)涉及免疫細(xì)胞凋亡的細(xì)胞膜分子Fas抗原的抗Fas單克隆抗體，對(duì)抗Fas抗體在醫(yī)藥方面的應(yīng)用作了種種研究。
另一方面，作為抑制細(xì)胞凋亡的因子，已報(bào)道有白細(xì)胞介素1轉(zhuǎn)化酶抑制劑、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)等。此外，還知道bcl-2相關(guān)基因的產(chǎn)物可抑制細(xì)胞凋亡，具有延長(zhǎng)細(xì)胞生命的機(jī)能。但是，這些細(xì)胞凋亡抑制因子都是來(lái)源于生物體，還沒(méi)有以化學(xué)合成等的工業(yè)手段得到的細(xì)胞凋亡抑制物質(zhì)。
本發(fā)明者們?cè)趯?duì)腦機(jī)能的生理作用進(jìn)行詳細(xì)的研究過(guò)程中，發(fā)明了作為中樞神經(jīng)型前列腺環(huán)素受體特異配基的各種異卡巴環(huán)素衍生物，申請(qǐng)了專(zhuān)利[特愿平7-51589號(hào)(JP-A-245498/96)、特愿平8-243122號(hào)(JP-A 87608/98)、特愿平8-260957號(hào)(JP-A101610/98)、特愿平9-160320號(hào)]。對(duì)這些物質(zhì)生理活性進(jìn)行進(jìn)一步研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中有幾個(gè)化合物顯示出顯著的細(xì)胞凋亡抑制作用。
所以，本申請(qǐng)的發(fā)明進(jìn)一步發(fā)展發(fā)明者們上述的見(jiàn)解，其目的在于提供能夠以化學(xué)合成方法大量廉價(jià)地制備的新型細(xì)胞凋亡抑制劑。
本申請(qǐng)中，作為解決上述課題的第1發(fā)明，提供了以下述式(1)所示的15R-異卡巴環(huán)素衍生物為有效成分的細(xì)胞凋亡抑制劑。
(式中R1表示碳數(shù)1～6的烴鏈，R2表示氫原子或保護(hù)基團(tuán))在第1發(fā)明的細(xì)胞凋亡抑制劑中，上述15R-異卡巴環(huán)素衍生物優(yōu)選下述式(2)
所示的15R-16-m-甲苯基-17,18,19,20-四去甲異卡巴環(huán)素或其甲酯。
更進(jìn)一步，本申請(qǐng)中，作為第2發(fā)明，提供了以下述式(3)所示的15-去氧-異卡巴環(huán)素衍生物為有效成分的細(xì)胞凋亡抑制劑。
(式中R1表示碳數(shù)1～6的烴鏈，R2表示氫原子或保護(hù)基團(tuán))在此第2發(fā)明中，上述15-去氧-異卡巴環(huán)素衍生物優(yōu)選下述式(4)
所示的15-去氧-16-m-甲苯基-17,18,19,20-四去甲異卡巴環(huán)素或其甲酯。
還有，在上述式(1)和(3)中，R2表示的保護(hù)基團(tuán)意思是制劑上允許的鹽、酯等，例如表示構(gòu)成甲酯、乙酯等的烷基。
下面就其實(shí)施形式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說(shuō)明。


圖1和圖2為表示對(duì)海馬神經(jīng)元的細(xì)胞凋亡抑制作用的圖。
圖3是表示合成去氧-TIC的化學(xué)流程圖。
圖4(A)(B)為各標(biāo)記異卡巴環(huán)素衍生物的全腦和丘腦攝取量經(jīng)時(shí)作圖而成的圖。
作為本申請(qǐng)第1發(fā)明的細(xì)胞凋亡抑制劑有效成分的15R-異卡巴環(huán)素衍生物，例如15R-16-m-甲苯基-17,18,19,20-四去甲異卡巴環(huán)素(下面記為15R-TIC)或其甲酯，可按本申請(qǐng)的發(fā)明者們先前發(fā)明(特開(kāi)平8-245498號(hào)公報(bào))記載的方法制得。
此外，作為本申請(qǐng)第2發(fā)明有效成分的15-去氧-異卡巴環(huán)素衍生物，例如15-去氧-16-m-甲苯基-17,18,19,20-四去甲異卡巴環(huán)素(下面記為去氧-TIC)或其甲酯，一樣可按本申請(qǐng)的發(fā)明者們先前發(fā)明(特愿平9-160320號(hào))記載的方法制得。
本發(fā)明的細(xì)胞凋亡抑制劑，可以是以此卡巴環(huán)素衍生物的任一個(gè)作為實(shí)質(zhì)性的有效成分制劑化而成的，但優(yōu)選象下述參考例2所示的，在作用于中樞神經(jīng)時(shí)，考慮向腦內(nèi)的擴(kuò)散效率，以其甲酯作為有效成分制劑化而成的。這些甲酯等在腦內(nèi)轉(zhuǎn)化成15R-TIC或去氧-TIC等的異卡巴環(huán)素衍生物，發(fā)揮對(duì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的抑制作用。此外，以抑制體細(xì)胞的細(xì)胞凋亡為目的時(shí)，可將15R-TIC或去氧-TIC等的異卡巴環(huán)素衍生物作為有效成分進(jìn)行制劑化。此外，本發(fā)明的細(xì)胞凋亡抑制劑除了含有這些有效成分外，還可含有其它眾所周知的細(xì)胞凋亡抑制性物質(zhì)。
本發(fā)明的細(xì)胞凋亡抑制劑可以以一般的藥物制劑形式給予人或動(dòng)物，例如可以靜脈注射、皮下注射或經(jīng)口給予人或動(dòng)物。
本發(fā)明的細(xì)胞凋亡抑制劑含有5μmol/kg以上濃度的異卡巴環(huán)素衍生物作為有效成分，可以和其它成分一起進(jìn)行制劑化。作為其它成分，例如有藥物制備通常所使用的填充劑、增量劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、表面活性劑、潤(rùn)滑劑、稀釋劑、賦形劑等。此外，作為藥物的劑型，根據(jù)治療目的可能選擇各種形式，作為其代表例如有片劑、丸劑、散劑、液體劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、膠囊劑、栓劑、注射劑(液體劑、混懸劑等)等。
例如在調(diào)制注射劑時(shí)，優(yōu)選將液體劑、乳劑和混懸劑滅菌且使之和血液等張；作為稀釋劑，例如可以用水、乙醇、丙二醇、乙氧化異硬脂醇、聚氧化異硬脂醇、聚氧乙烯縮水山梨糖醇脂肪酸酯類(lèi)等。還有此時(shí)為了調(diào)制等張性的溶液，可能含有足夠量的食鹽、葡萄糖、甘油等，此外也可配合助溶劑、緩沖劑、無(wú)痛化劑等。
上述各種形式的藥物制劑，還可根據(jù)需要加入常用的著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑等，此外還可含有其它的藥物有效成分。
下面就實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)和具體的說(shuō)明，但本發(fā)明并不僅限于此。實(shí)施例實(shí)施例115R-TIC對(duì)高氧培養(yǎng)所誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的抑制效果。(1)實(shí)驗(yàn)藥品異卡巴環(huán)素使用帝人株式會(huì)社提供的純品。15S-TIC用根據(jù)特開(kāi)平8-245498號(hào)公報(bào)的實(shí)施例2制成的15S-16-m-甲苯基-17,18,19,20-四去甲卡巴環(huán)素甲酯，按同一公報(bào)實(shí)施例3的方法制得。15R-TIC按特開(kāi)平8-245498號(hào)公報(bào)的實(shí)施例3相同方法制得。(2)方法從妊娠20天的云斯特系(Wistar)大鼠無(wú)菌地摘出胎兒，從其腦切取海馬部分，將此海馬部分用含DL-半胱氨酸(0.2mg/ml)、牛血清白蛋白(0.2mg/ml)、葡萄糖(5mg/ml)、DNAseI(0.01％)和木瓜蛋白酶(9單位/ml)的PBS(無(wú)鈣、鎂)振蕩孵育30分鐘，分散海馬神經(jīng)元。接著，將神經(jīng)元細(xì)胞按5×105細(xì)胞/平方厘米的比率接種入裝有DME/F-12培養(yǎng)基(含5％馬血清和5％牛胎兒血清)的24孔平板(被覆有聚乙烯亞胺)，于5％二氧化碳的培養(yǎng)箱(9％氧氣)中培養(yǎng)兩天。在這之后，將培養(yǎng)液換成除去血清的DME/F-12培養(yǎng)基(含5μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白、5μg/ml胰島素和5nM黃體酮)，以5μM的濃度往培養(yǎng)基中加入各待測(cè)藥品，30分鐘后移入50％氧氣中。在50％氧氣中培養(yǎng)48小時(shí)后，測(cè)定細(xì)胞的存活率。在9％氧氣中的神經(jīng)元也被加入各待測(cè)藥品，并測(cè)定細(xì)胞的存活率。
此外，細(xì)胞存活率是在用4％多聚甲醛固定細(xì)胞后，用抗MAP2抗體染色，以DAB發(fā)色，從其200倍照片通過(guò)計(jì)測(cè)MAP2陽(yáng)性細(xì)胞而算出。(3)結(jié)果圖1給出了在9％或50％氧氣中培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的存活率(加入了50nm的待測(cè)藥品和5μm的其他樣品)。在9％氧氣中的存活神經(jīng)元數(shù)目被作為對(duì)照值。添加了異卡巴環(huán)素和15S-TIC時(shí)，和對(duì)照組一樣，海馬神經(jīng)元因高濃度氧所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡而導(dǎo)致存活率大幅度降低。與此相反，添加了本發(fā)明的15R-TIC和脫氧-TIC時(shí)，可觀察到和眾所周知的細(xì)胞凋亡抑制物質(zhì)bFGF一樣或更高比率的細(xì)胞存活率增加。
圖2給出了待測(cè)藥品對(duì)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的劑量依賴性的效果。在圖2中使用9％氧氣中的神經(jīng)元存活率作為對(duì)照值，加入了各待測(cè)藥品的神經(jīng)元存活率用平均值±S.D.(n=4)表示。從圖2可以看出，異卡巴環(huán)素和15S-TIC沒(méi)有任何神經(jīng)保護(hù)效果(在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi))，而15R-TIC和脫氧-TIC顯示出劑量依賴性的神經(jīng)細(xì)胞凋亡抑制效果，濃度為3000nM時(shí)的存活率與對(duì)照組相當(dāng)。脫氧-TIC和15R-TIC的IC50值分別為Ca.30nM和300nM。
從以上結(jié)果可以看出，作為本發(fā)明的細(xì)胞凋亡抑制劑有效成分的15R-TIC和脫氧-TIC對(duì)機(jī)體細(xì)胞尤其是神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞凋亡有優(yōu)良的抑制作用。實(shí)施例2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)15R-TIC對(duì)蒙古沙土鼠缺血損傷誘導(dǎo)的海馬CA1錐體神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的作用。
為了檢驗(yàn)15R-TIC是否能在體內(nèi)防止神經(jīng)元死亡，應(yīng)用滲透微泵，將15R-TIC連續(xù)7天(開(kāi)始于短暫性缺血前2天，結(jié)束于其后5天)灌注入已經(jīng)過(guò)短暫前腦缺血3分鐘的沙土鼠的左側(cè)室。通過(guò)計(jì)數(shù)尼氏染色部分細(xì)胞體大于10μm的神經(jīng)元來(lái)評(píng)價(jià)CA1錐體神經(jīng)元的存活數(shù)。
通過(guò)給藥15R-TIC阻斷了前腦缺血誘導(dǎo)的CAI錐體神經(jīng)元死亡。15R-TIC灌注的沙土鼠的神經(jīng)元數(shù)目(20μm厚的部分為984±299,n=4)和非缺血組沙土鼠相當(dāng)(1061±220,n=4)。而且，溶劑灌注的沙土鼠的CA1錐體神經(jīng)元數(shù)目(142±28,n=4)顯著小于對(duì)照組(沒(méi)有缺血處理)的或15R-TIC灌注的沙土鼠。溶劑灌注沙土鼠的錐體神經(jīng)元發(fā)生進(jìn)行性的變性，伴隨著核退縮和細(xì)胞排列的破壞。
這些結(jié)果表明15R-TIC在體內(nèi)起著一個(gè)有效的神經(jīng)元存活促進(jìn)因子的作用，正如實(shí)施例1和2中在體外起的作用。參考例1根據(jù)特愿平9-160320號(hào)的實(shí)施例1的記載，按下述的化學(xué)反應(yīng)式，制備脫氧-TIC。制備過(guò)程如附圖3所示。(1)醛化合物(6)的合成往10ml的skulenk管中裝入(三苯基正膦亞基)乙醛(21.8mg,71.6μmol)的苯(1.5ml)溶液，接著加入上述醛化合物(5)(23.0mg,65.3μmol)的苯(1.5ml)溶液，回流20小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻后除去溶劑，其殘?jiān)眉和楹鸵宜嵋阴サ?∶1及1∶1的混合物進(jìn)行硅膠層析精制，得到醛化合物(6)(14.8mg,61％)。TLC上的Rf為0.55(己烷/乙酸乙酯=1∶1)。(2)碳酸酯化合物(7)的合成往10ml的圓底燒瓶中裝入上述醛化合物(6)(7.6mg,20.2μmol)的甲醇(1.0ml)溶液，接著加入CeCl7H2O(10mg,27μmol)和NaBH4(2mg,53μmol)，攪拌5分鐘。
在此之后往反應(yīng)混合物中加入乙酸乙酯和水。用乙酸乙酯作為溶劑進(jìn)行3次抽提。將有機(jī)相合并用MgSO4干燥，過(guò)濾，然后在減壓下濃縮。
所得的粗生成物裝入10ml的圓底燒瓶中，用CH2Cl2(2.0ml)溶解。往此溶液中加入DMAP(37.0mg,0.303mmol)和氯甲酸甲酯(0.015ml,0.194mmol)，攪拌4小時(shí)。然后加入NaHCO3的水溶液，用乙酸乙酯進(jìn)行抽提。合并有機(jī)相用Na2SO4干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。用己烷和乙酸乙酯4∶1的混合物進(jìn)行硅膠層析精制，得到上述的碳酸酯化合物(7)(8.0mg,91％)。TLC上的Rf為0.42(己烷/乙酸乙酯=2∶1)(3)加成體化合物(9)的合成往20ml的skulenk管中加入三(二苯亞甲基丙酮)-二鈀(O)-氯仿加成物(2.1mg,2.0μmol)和1,2-二(二苯基膦基)乙烷(1.6mg,4.0μmol)的THF(1.0ml)溶液。往此溶液中加入上述碳酸酯化合物(7)(8.0mg,18.3μmol)和二砜(7.6mg,19.7μmol)的THF(1.0ml)溶液，攪拌15小時(shí)。
將反應(yīng)混合物注入NH4Cl水溶液中，用乙酸乙酯進(jìn)行抽提。合并有機(jī)相用MgSO4干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。用己烷和乙酸乙酯的2∶1、1∶1的混合物進(jìn)行硅膠層析精制，得到目的加成體化合物(9)(9.6mg,70％)。TLC上的Rf為0.27(己烷/乙酸乙酯=1∶1的混合物)。(4)化合物(10):15-去氧-16-m-甲苯基-17,18,19,20-四去甲異卡巴環(huán)素甲酯的合成往10ml的圓底燒瓶中加入鎂(10mg,0.4mmol)，接著加入上述加成體化合物(9)(7.5mg,10.0μmol)的甲醇(1.5ml)溶液，攪拌3小時(shí)。
往反應(yīng)混合物中加入HCl(1N)水溶液，用乙酸乙酯進(jìn)行抽提。有機(jī)相合并用MgSO4干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。
將所得的粗生成物裝入10ml的圓底燒瓶中，用醋酸和水的9∶1混合物(2.0ml)溶解。攪拌40小時(shí)后，加入乙酸乙酯，用NaHCO3水溶液洗凈。有機(jī)相用Na2SO4干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。接著用3∶1的己烷和乙酸乙酯混合物進(jìn)行硅膠層析精制，得到目的化合物(10)15-去氧-16-m-甲苯基-17,1 8,19,20-四去甲異卡巴環(huán)素甲酯(2.2mg,58％)。TLC上的Rf為0.6(己烷/乙酸乙酯=1∶1的混合物)。(5)化合物(4)15-去氧-16-m-甲苯基-17,18,19,20-四去甲異卡巴環(huán)素的合成往10ml的試管中裝入上述化合物(10)(1.0mg,2.6μmol)的甲醇(0.5ml)溶液，加入NaOH水溶液(3N,0.2ml)，在室溫下攪拌12小時(shí)。添加NaHCO3后加入乙酸乙酯和水。使之pH成3。
分離有機(jī)相，水相用乙酸乙酯抽提。合并有機(jī)相用MgSO4干燥，過(guò)濾，在減壓下濃縮。用CH2Cl2和甲醇的10∶1混合物進(jìn)行SiO2(0.5g)層析精制，得到目的化合物(4)15-去氧-16-m-甲苯基-17,18,19,20-四去甲異卡巴環(huán)素(0.9mg,94％)。TLC上的Rf為0.39(CH2Cl2/甲醇=9∶1的混合物)。參考例2用正電子放射圖譜法(PET)測(cè)定異卡巴環(huán)素衍生物向腦內(nèi)的攝取量。(1)實(shí)驗(yàn)藥品11C標(biāo)記的15R-TIC-甲酯(RTA)按下述參考例方法制得的15R-TIC-甲酯的16-m-甲苯基的甲基碳用11C標(biāo)記的標(biāo)記化合物。11C標(biāo)記的15R-TIC-甲酯(RTC)按下述參考例方法制得的15R-TIC-甲酯的16-m-甲苯基的甲酯部分的甲基碳用11C標(biāo)記的標(biāo)記化合物。(2)方法對(duì)成年彌猴(體重約8kg)將示蹤量(不超過(guò)0.2μg/kg)的上述實(shí)驗(yàn)藥品進(jìn)行靜脈注射，對(duì)從靜注后到60分鐘后腦內(nèi)被測(cè)藥品的分布情況用PET裝置圖像化。從此圖像計(jì)測(cè)ROI(region of interest有關(guān)區(qū)域)值，根據(jù)下式算出攝取量。
(3)結(jié)果圖4(A)表示各標(biāo)記化合物在全腦的攝取量，圖4(B)表示丘腦的攝取量。RTA和RTC顯示出相同的血腦屏障通過(guò)率(圖4A和B)，但是RTA在腦內(nèi)的保留時(shí)間比RTC長(zhǎng)，表明去酯化的11C標(biāo)記15R-TIC在腦內(nèi)的保留。換言之，RTA可以作為15R-TIC的前藥。從此結(jié)果可以確定，全身給予的15R-TIC-甲酯高效地轉(zhuǎn)移到腦內(nèi)。而且，此標(biāo)記化合物在給藥60分鐘后還滯留于腦內(nèi)，說(shuō)明15R-TIC-甲酯(15R-TIC的前體)在腦內(nèi)轉(zhuǎn)化成15R-TIC和前列腺環(huán)素受體結(jié)合，在腦內(nèi)發(fā)揮其細(xì)胞凋亡抑制作用。
從以上詳細(xì)說(shuō)明可看出，本發(fā)明提供了以可以用化學(xué)合成方法簡(jiǎn)便且便宜地制備的化合物為有效成分的新型細(xì)胞凋亡抑制劑。PET等研究表明，作為此藥劑有效成分的異卡巴環(huán)素衍生物能通過(guò)血腦屏障作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，因此對(duì)于神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞凋亡引起的各種疾病的治療有效。
權(quán)利要求
1．以下述式(1)所示的15R-異卡巴環(huán)素衍生物為有效成分的細(xì)胞凋亡抑制劑，
式中R1表示碳數(shù)1～6的烴鏈，R2表示氫原子或保護(hù)基團(tuán)。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的細(xì)胞凋亡抑制劑，其中15R-異卡巴環(huán)素衍生物為下述式(2)
所示的15R-16-m-甲苯基-17,18,19,20-四去甲異卡巴環(huán)素或其甲酯。
3．以下述式(3)所示的15-去氧-異卡巴環(huán)素衍生物為有效成分的細(xì)胞凋亡抑制劑，
式中R1表示碳數(shù)1～6的烴鏈，R2表示氫原子或保護(hù)基團(tuán)。
4．根據(jù)權(quán)利要求3的細(xì)胞凋亡抑制劑，其中15-去氧-異卡巴環(huán)素衍生物為下述式(4)
所示的15-去氧-16-m-甲苯基-17,18,19,20-四去甲異卡巴環(huán)素或其甲酯。
全文摘要
提供以可以用化學(xué)合成方法簡(jiǎn)便且便宜地制備的15R－異卡巴環(huán)素衍生物或15－去氧－異卡巴環(huán)素衍生物為有效成分的細(xì)胞凋亡抑制劑。
文檔編號(hào)C07C69/732GK1219389SQ9812098
公開(kāi)日1999年6月16日 申請(qǐng)日期1998年10月20日 優(yōu)先權(quán)日1997年10月21日
發(fā)明者渡邊恭良, 鈴木正昭, 渡邊由美子, 羽里篤夫, 佐藤拓巳 申請(qǐng)人:科學(xué)技術(shù)振興事業(yè)團(tuán), 羽里篤夫