專利名稱：新的二－吡啶并[4,3－b]咔唑化合物、其制備方法以及含有它們的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的二-吡啶并[4,3-b]咔唑化合物、它們的制備方法和含有它們的藥物組合物。
本發(fā)明化合物因其具有抗腫瘤活性而可以用作治療劑。
已知奧里發(fā)新(olivacine)和艾力替新(ellipticine)類型中的某些化合物具有抗癌特性；參見歐洲專利申請(qǐng)0 591 058 A1。
治療藥物的需求要求不斷開發(fā)以獲得活性更高且特異性更強(qiáng)的分子為目標(biāo)的新抗癌藥。
本發(fā)明涉及與現(xiàn)有技術(shù)中最相關(guān)的化合物相比具有新結(jié)構(gòu)(兩個(gè)相同的通過二羧基烷基鏈在9-位相連的奧里發(fā)新或艾力替新基團(tuán))和優(yōu)異的抗腫瘤活性(特別是在抗藥性實(shí)體瘤情況下)的奧里發(fā)新和艾力替新類化合物。
本發(fā)明更具體涉及式Ⅰ化合物
R1和R2，可以相同或不同，各表示氫原子或甲基；A表示直鏈或支鏈的含有1-12個(gè)碳原子并且選擇性地包括含有3-6個(gè)碳原子的烴環(huán)的飽和烴鏈；A還可以代表具有3-6個(gè)碳原子的烴環(huán)；和B代表直鏈或支鏈的含有1-8個(gè)碳原子的烴鏈；和它們的可能的旋光異構(gòu)體、N-氧化物以及與藥物可接受酸形成的加成鹽。
本發(fā)明還涉及制備式Ⅰ化合物的方法，其特征在于將式Ⅱ化合物
其中，R1、R2、A和B與上述定義相同，用式Ⅲ化合物酯化，
其中，R1、R2和B與上述定義相同，式Ⅱ化合物與式Ⅲ化合物在偶聯(lián)劑如苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基磷鎓(tripyrrolidinophosphonium)六氟磷酸鹽和叔胺如三乙胺存在下、在極性非質(zhì)子傳遞溶劑如四氫呋喃、二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷酮中于0-80℃溫度下反應(yīng)是十分有利的。
化合物Ⅱ作為起始反應(yīng)物已在法國專利申請(qǐng)公開2.757.859中描述。
化合物Ⅲ作為起始反應(yīng)物在歐洲專利申請(qǐng)0,591,058A1或法國專利申請(qǐng)公開2.757.858中有所記載。
式Ⅰ化合物與生理可接受酸可以形成鹽，該鹽同樣屬于本發(fā)明范圍內(nèi)。
一些式Ⅰ化合物含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱碳原子，并因此形成作為本發(fā)明一部分的對(duì)映體和非對(duì)映體。
本發(fā)明化合物顯示出極有價(jià)值的藥理活性，特別是其優(yōu)異的體外細(xì)胞毒性以及優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)品的體內(nèi)抗腫瘤活性，正是上述特性使它們成為抗腫瘤治療劑，尤其可以用于治療抗藥性實(shí)體瘤。
本發(fā)明還涉及含有至少一種作為活性組分的本發(fā)明化合物并且與一種或多種可藥用賦形劑或惰性無毒載體混合或結(jié)合的藥物組合物。
藥物組合物通常制成適于口服、直腸或腸胃外給藥的劑量單位形式并優(yōu)選是片劑、糖衣丸、明膠膠囊、栓劑和可注射或可飲用溶液劑型。
劑量隨患者的年齡和體重、給藥途徑、治療病癥以及相關(guān)治療的特點(diǎn)而改變，每天給藥劑量的范圍介于0.1-400mg之間并且可以分一次或多次給藥。
下列實(shí)施例用于說明本發(fā)明，熔點(diǎn)利用毛細(xì)管測(cè)定。柱色譜純化用二氧化硅為Amicon二氧化硅(0.035-0.07mm)。
所用壓力為105Pa。實(shí)施例1己二酸二-[1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?-5,6,11-三甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基]酯
將2.6g己二酸單[1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?-5,6,11-三甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基]酯、2g 9-羥基-5,6,11-三甲基-6H-吡啶并[4,3-b]咔唑-1-羧酸(2-二甲基氨基乙基)酰胺、1.23g三乙胺和3.19g苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸鹽溶解在N-甲基吡咯烷酮中。將溶液在室溫下攪拌24小時(shí)。濃縮至干。殘余物用二氯甲烷、碳酸鈉水溶液和溶解不溶物所要求的最低量的甲醇的混合物吸收。分離后，有機(jī)相以硫酸鈉干燥并濃縮至干。殘余物通過280g二氧化硅色譜純化并以二氯甲烷、甲醇和三乙胺(95/5/0.5)的混合液作為洗脫液。將含產(chǎn)物的級(jí)分濃縮至干；殘余物用乙醇洗滌并在40℃下真空干燥。得到1.6g所需產(chǎn)物。M.p.:220-225℃。實(shí)施例2-10通過實(shí)施例1中的方法可以制備下列實(shí)施例的化合物2)己二酸二-[1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?-5,6-二甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基]酯。M.p.:250-254℃3)辛二酸二-[1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?-5,6-二甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基]酯(粘稠膠狀)。4)己二酸二-[1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?-5,6,10-三甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基]酯。M.p.:260-265℃5)3,3-二甲基戊二酸二-[1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?-5,6-二甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基]酯。M.p.(分解)＞130℃6){1-[1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?-5,6-二甲基-6H-吡啶并[4,3-b]咔唑-9-基氧基-羰基甲基]環(huán)己基}乙酸1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?-5,6-二甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基酯。M.p.:145-150℃7)2,2,5,5-四甲基己二酸二-[1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?-5,6-二甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基]酯。M.p.:112-120℃8)環(huán)己烷-1,4-二羧酸二-[1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?-5,6-二甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基]酯。M.p.(分解)＞200℃9)3-甲基戊二酸二-[1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲酰基)-5,6-二甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基]酯。M.p.:115-120℃10)戊二酸二-[1-(3-二甲基氨基乙基氨基甲酰基)-5,6-二甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基]酯及其三鹽酸鹽，該產(chǎn)物為無定形產(chǎn)物。實(shí)施例11藥理學(xué)研究A/細(xì)胞毒性研究試驗(yàn)采用三種細(xì)胞系-鼠白血病L1210-鼠黑素瘤B16-人體肺癌A549在含有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、50單位/ml的青霉素、50μg/ml鏈霉素和10mM Hepes的pH=7.4的RPMI 1640完全培養(yǎng)基中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
將細(xì)胞分布在微量培養(yǎng)板上并暴露在細(xì)胞毒性化合物下。隨后將該細(xì)胞培養(yǎng)2天(L1210)或4天(A549,B16)。通過比色分析，即四氮唑鹽酶還原法(the Microculture Tetrazolium Assay)(Carmichael J.,DeGraff W.G.,Gazdar.A.F.,Minna J.D.和Mitchell J.R.，基于四氮唑鹽的半自動(dòng)化比色分析的評(píng)估化學(xué)敏感性試驗(yàn)評(píng)定，癌癥研究，47,936-942,1987)定量分析存活細(xì)胞的數(shù)量。
試驗(yàn)結(jié)果用IC50(50％抑制處理的細(xì)胞的增殖的細(xì)胞毒性試劑濃度)表示。對(duì)各細(xì)胞系，所得結(jié)果列于下表中。
通過舉例，下表列出了本發(fā)明最具代表性的實(shí)施例1的化合物以及兩種參照物的試驗(yàn)結(jié)果參照物A是歐洲專利申請(qǐng)0 591 058 A1實(shí)施例1中的化合物，即1-(N,N-二甲基氨基乙基氨基氨基甲?；?-5,6-二甲基-9-羥基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑，參照物B是阿霉素(ADR)。
細(xì)胞毒性
本發(fā)明實(shí)施例1的產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞系B16和A549產(chǎn)生的細(xì)胞毒性比對(duì)細(xì)胞系L1210的更強(qiáng)，這表明該產(chǎn)物對(duì)實(shí)體瘤具有更好的體外活性。對(duì)于細(xì)胞系B16和A549，本發(fā)明實(shí)施例1的產(chǎn)物比參照物A和B具有更高的細(xì)胞毒性。B/體內(nèi)活性抗腫瘤活性細(xì)胞系P388(鼠白血病)由國家癌癥研究院(Frederick，美國)提供。將腫瘤細(xì)胞(106個(gè)細(xì)胞)在第0天接種在體重18-20g的雌性BDF1小鼠(Iffa-Credo，法國)腹膜腔內(nèi)(各組6或7只動(dòng)物)。
將受試產(chǎn)物在第1天或第1、5、9天按照指定劑量靜脈內(nèi)給藥。
抗腫瘤活性表示為％T/C
確定第60天仍存活的動(dòng)物(長(zhǎng)期存活者)。
細(xì)胞系B16(鼠黑素瘤)由國家癌癥研究院(Frederick，美國)提供。該腫瘤通過連續(xù)皮下腫瘤碎片移植來保持。在第0天，將腫瘤破碎并在0.9％NaCl(1g腫瘤/10ml)中勻化，將0.5ml的該勻漿注射到各BDF1小鼠的腹膜腔內(nèi)。待測(cè)產(chǎn)物按照指定劑量、每天腹腔內(nèi)給藥一次并持續(xù)給藥9天(D1-9)。
抗腫瘤活性用如上所述的％T/C表示。確定第90天仍存活的動(dòng)物(長(zhǎng)期存活者)。結(jié)果在白血病P388模型中，本發(fā)明實(shí)施例1的產(chǎn)物比參照物A更有效且活性一樣。
在黑素瘤B16模型中，本申請(qǐng)實(shí)施例1的產(chǎn)物具有很高的活性；在最佳劑量時(shí)，它能夠有3個(gè)長(zhǎng)期存活者而參照物A無一長(zhǎng)期存活者。因此，本申請(qǐng)實(shí)施例1的產(chǎn)物對(duì)于抗藥性實(shí)體瘤極有價(jià)值。
體內(nèi)抗腫瘤活性
權(quán)利要求
1．式Ⅰ化合物
其中，R1和R2，可以相同或不同，各表示氫原子或甲基；A表示直鏈或支鏈的含有1-12個(gè)碳原子并且選擇性地包括含有3-6個(gè)碳原子的烴環(huán)的飽和烴鏈；A還可以代表具有3-6個(gè)碳原子的烴環(huán)；和B代表直鏈或支鏈的含有1-8個(gè)碳原子的烴鏈；和它們的可能的旋光異構(gòu)體、N-氧化物以及與藥物可接受酸形成的加成鹽。
2．權(quán)利要求1中的化合物，為己二酸二-[1-(2-二甲基氨基乙基氨基甲酰基)-5,6,11-三甲基-6H-吡啶并[4,3-b]-咔唑-9-基]酯。
3．制備權(quán)利要求1的化合物的方法，其特征在于將式Ⅱ化合物
R1、R2、A和B與權(quán)利要求1的定義相同，用式Ⅲ化合物酯化，
其中，R1、R2和B與權(quán)利要求1的定義相同。
4．用作抗腫瘤劑的藥物組合物，該組合物包含至少一種作為活性組分的、與一種或多種可藥用賦形劑或惰性無毒載體混合或結(jié)合的權(quán)利要求1或2的化合物。
全文摘要
式Ⅰ化合物:其中,R
文檔編號(hào)C07D519/00GK1207393SQ9811800
公開日1999年2月10日 申請(qǐng)日期1998年8月5日 優(yōu)先權(quán)日1997年8月6日
發(fā)明者C·紐倫尼奧, Y·查頓, G·阿塔希, A·皮埃爾, N·吉爾保德 申請(qǐng)人:阿迪爾公司