亚洲狠狠干,亚洲国产福利精品一区二区,国产八区,激情文学亚洲色图

一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素a和粘桿菌素b的方法

文檔序號(hào):3496609閱讀:303來源:國知局
一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素a和粘桿菌素b的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素A和粘桿菌素B的方法,該方法首先將粘桿菌素發(fā)酵液的粘度降至400~500Pa.s,后降溫至0~10℃,調(diào)節(jié)pH至2~3,然后加入其重量的0.5%~0.8%的絮凝劑,充分?jǐn)嚢韬筮^濾,所得濾液降膜濃縮至其體積的30%~50%,之后進(jìn)行二級(jí)逆流萃取,所得萃取液通過層析分離方式分離得到粘桿菌素A溶液和粘桿菌素B溶液,分別將粘桿菌素A溶液和粘桿菌素B溶液采用二級(jí)逆流反萃取、噴霧干燥后得到硫酸粘桿菌素A和硫酸粘桿菌素B的鹽粉末。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了粘桿菌素A和B的有效分離,提高了其質(zhì)量,使其含量分別在97%以上,總提取收率達(dá)到88~92%,降低生產(chǎn)成本;避免了重金屬和廢水的污染問題,降低了環(huán)保壓力。
【專利說明】一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的 方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于抗生素提取、合成【技術(shù)領(lǐng)域】,特別是涉及一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分 離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 粘桿菌素是由多粘芽肥桿菌變種粘菌素 (Bacillus polymyxa var. colistinus) 產(chǎn)生的堿性多肽類抗生素,其含有30多種不同成分的混和物,主要為粘桿菌素 A(多粘菌素 E1)和粘桿菌素 B (多粘菌素 E2)的混合物。對(duì)多數(shù)革蘭氏陰性菌有效。被視為"最后一線 藥物"。
[0003] 目前,國內(nèi)采用離子交換法、膜過濾方法或沉淀法提取粘桿菌素,存在的主要問題 是: 1采用膜過濾法提取粘桿菌素,首先提取過程中產(chǎn)生的廢水較多,其次膜過濾設(shè)備需 定期進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng),導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高。
[0004] 2沉淀法和離子交換法提取粘桿菌素,其生產(chǎn)周期較長,工藝復(fù)雜,導(dǎo)致提取收率 較低,一般不超過80%。
[0005] 3采用以上工藝提取粘桿菌素,粘桿菌素 A和B組份總量不超過90%,雜質(zhì)含量偏 商。
[0006] 4以上方法不能有效地提取、分離粘桿菌素 A和B組份。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷,提供一種有效提高提取收率,降 低成本,縮短生產(chǎn)周期,減少環(huán)境污染,實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定、有效分離的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘 桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為: 一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法,其特征在于粘桿菌素 發(fā)酵液經(jīng)預(yù)處理、降膜濃縮、萃取、層析、反萃取、噴霧干燥后得到多粘素 E1和E2的鹽粉末。 [0009] 所述預(yù)處理是指將發(fā)酵液加入飲用水,發(fā)酵液的粘度將至400?500Pa. s ;溫度降 溫至0?l〇°C,加入10?15%的草酸溶液,調(diào)節(jié)pH至2?3 ;加入0. 5?0. 8%的絮凝劑, 攪拌20?30min并過濾,其中所述絮凝劑為氨甲基聚苯乙烯或陽離子聚丙烯酰胺。
[0010] 所述降膜濃縮是指利用逆流降膜濃縮蒸發(fā)設(shè)備,將粘桿菌素濾液體積濃縮30? 50%。
[0011] 所述萃取是指用高速離心分離機(jī)進(jìn)行二級(jí)逆流萃取處理,將粘桿菌素從水相轉(zhuǎn)移 到復(fù)合有機(jī)溶媒項(xiàng)中,其萃取的工藝控制參數(shù)分別是: a萃取溫度:0?10°C ; b V枯桿麵濾液.V擁溶媒=1 . 5?10(L/L),

【權(quán)利要求】
1. 一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法,其特征在于其工藝 步驟為:首先將粘桿菌素發(fā)酵液的粘度降至400?500Pa. s,后降溫至O?KTC,調(diào)節(jié)pH至 2?3,然后加入其重量的0. 5%?0. 8%的絮凝劑,充分?jǐn)嚢韬筮^濾,所得濾液降膜濃縮至其 體積的30%?50%,之后啟動(dòng)高速離心分離機(jī)進(jìn)行二級(jí)逆流萃取,所得萃取液通過層析分 離方式分離得到粘桿菌素 A溶液和粘桿菌素 B溶液,分別將粘桿菌素 A溶液和粘桿菌素 B 溶液采用二級(jí)逆流反萃取、噴霧干燥后得到硫酸粘桿菌素 A和硫酸粘桿菌素 B的鹽粉末。
2. 按照權(quán)利要求1所述的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法, 其特征在于所述絮凝劑為氨甲基聚苯乙烯或陽離子聚丙烯酰胺。
3. 按照權(quán)利要求1所述的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法, 其特征在于所述高速離心分離機(jī)進(jìn)行二級(jí)逆流萃取的工藝條件為: a萃取溫度:0?KTC, b V粘桿菌素濾液.V有機(jī)溶媒=1 . 5?10,
所述有機(jī)溶媒為醋酸丁酯和丁醇的混合物,其中丁醇的含量為5%?10%, c pH :一級(jí)萃取pH控制在8?9,二級(jí)萃取pH控制在9?10, d萃余液效價(jià)低于1000u/ml。
4. 按照權(quán)利要求1所述的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法, 其特征在于所述層析是以DEAE高流速瓊脂糖微球?yàn)樘畛鋭?、醋酸丁酯為洗脫劑進(jìn)行的,其 中填充劑用量為萃取液體積的3?5%,填充劑的徑高比控制在5 : 1,洗脫劑用量為萃取液 體積的40?50%,層析過程中,控制萃取液溫度0?KTC,每次萃取液上樣量為填充劑用量 20 ?30%。
5. 按照權(quán)利要求1所述的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法, 其特征在于所述二級(jí)逆流反萃取的控制參數(shù)為: a溫度控制在0?5°C; b pH :-級(jí)控制pH值3. 5?4. 5 ;二級(jí)控制pH值2. 0?3. 0 ; c效價(jià):廢醋酸丁酯效價(jià)低于500 μ /ml ; d濃度:硫酸溶液濃度為3. 6?3.8% (W/V); e攪拌時(shí)間:加酸后攪拌時(shí)間:一級(jí)反萃取20?35min ;二級(jí)反萃取15?25min ; f澄明度:反萃取液澄清透明,無可見溶媒; g水相用量: 一級(jí)反卒取:V硫酸濾液.V擁溶媒=1 . 3?5 (L/L) 一級(jí)反卒?。篤硫酸濾液.V有機(jī)溶媒=1 . 5?8(L/L)。
6. 按照權(quán)利要求1所述的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法, 其特征在于所述噴霧干燥過程中,控制進(jìn)料壓力:6?12MPa ;進(jìn)料轉(zhuǎn)速:250?450r/min ; 進(jìn)風(fēng)溫度:140?160°C ;出風(fēng)溫度:30?60°C ;塔內(nèi)溫度60?80°C。
【文檔編號(hào)】C07K1/36GK104231056SQ201410432706
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月29日
【發(fā)明者】任勇, 奇乃, 李小萍, 董媛 申請(qǐng)人:寧夏泰瑞制藥股份有限公司
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1