一種從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法，該方法包括：（1）將苦蕎麩皮粉碎過(guò)篩；（2）加入纖維素酶和醋酸—醋酸鈉緩沖溶液，進(jìn)行酶解；（3）將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中大部分的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；（4）在濃縮懸濁液中加入乙醇溶液，混合均勻后先進(jìn)行微波處理，再進(jìn)行提取；（5）過(guò)濾得到原花青素粗提液；（6）對(duì)粗提液進(jìn)行分離和純化，得到原花青素提取物。本發(fā)明的提取方法提高了原花青素的得率和純度，成本低廉，耗時(shí)短；工藝簡(jiǎn)便，安全性高，廢液排放量少。本發(fā)明還提供了一種使用該提取方法所得的原青花素用作抗衰老保健品和護(hù)膚品有效成分的用途。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取的【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]苦蕎麥\_Fagopyrum tataricum (L) Gaertn]屬寥科蕎麥屬，為一種重要的雜糧作物和藥食同源植物，含有多種維生素、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分和生物活性成分，而苦蕎麩皮是這些成分含量最高的部位，特別是其原花青素的含量尤為豐富，最高可達(dá)5%左右。
[0003]原花青素(Procyanidins)是一種由黃燒_3_醇單體縮合而成的聚多酹類(lèi)物質(zhì)，因在酸性介質(zhì)中加熱可產(chǎn)生相應(yīng)的花色素而得名。
[0004]原花青素具有極強(qiáng)的抗氧化活性，是一種良好的氧游離基清除劑和脂質(zhì)過(guò)氧化抑制劑，是迄今為止人類(lèi)所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)、最有效的自由基清除劑之一，尤其是其體內(nèi)活性，是其他抗氧化劑不可比擬的。同時(shí)，它還具有抗腫瘤、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、降血壓、抗炎、抗過(guò)敏等生物活性。另外，因其獨(dú)特的化學(xué)和生理活性，原花青素在護(hù)膚美容方面也中有著極其廣泛的用途，例如抗衰老、抗紫外線、抗輻射、增白、保濕等，對(duì)多種因素造成的皮膚老化都有獨(dú)特的功效。
[0005]近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者在原花青素的提取分離上進(jìn)行了大量的研究工作。原花青素現(xiàn)有的提取方法包括水提法、有機(jī)溶劑提取法、超臨界流體萃取法等方法。然而水提法和有機(jī)溶劑提取法具有提取時(shí)間長(zhǎng)、提取效率低等缺點(diǎn)，而來(lái)超臨界流體萃取法雖然提取效率較高，但其所需的設(shè)備昂貴，導(dǎo)致所得的原花青素成本較高。
[0006]為此，研制開(kāi)發(fā)一種以苦蕎麩皮為原料，提取時(shí)間較短而提取率高，并且成本較低的原花青素提取方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明第一目的在于提供一種從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法；第二目的在于提供一種使用該提取方法所得的原青花素用作抗衰老保健品和護(hù)膚品有效成分的用途。
[0008]本發(fā)明第一目的這樣實(shí)現(xiàn)的，苦蕎麩皮原花青素的提取方法包括如下步驟:
(1)將苦蕎麩皮粉碎過(guò)70~90目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；
(2)在原料中加入0.1~0.7mg/g (以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和料液比為1:10 (g/mL,苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)的醋酸一醋酸鈉緩沖溶液，并調(diào)節(jié)溶液pH至4.8~5.5，進(jìn)行酶解反應(yīng)，酶解溫度為40~50°C，酶解時(shí)間為30~90min ；
(3)將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中70%~80%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；
(4)在濃縮懸濁液中加入料液比為1:15~1:30(g/mL，苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)的50%~70% (體積分?jǐn)?shù))乙醇水溶液，混合均勻后先進(jìn)行微波處理，后進(jìn)行提取。微波處理采用2450Mhz，180~500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為30 ~90s。
[0009](5)過(guò)濾乙醇提取液，得到原花青素粗提液；
(6)對(duì)粗提液進(jìn)行分離和純化，得到原花青素提取物。
[0010]本發(fā)明第二目的這樣實(shí)現(xiàn)的，使用該提取方法所得的原青花素用作抗衰老保健品和護(hù)膚品有效成分的用途。
[0011]本發(fā)明采用酶解一微波輔助提取法提取原花青素。酶解輔助提取工藝的原理是利用纖維素酶水解纖維素的功能，對(duì)植物細(xì)胞壁進(jìn)行降解和破壞，增加細(xì)胞內(nèi)容物的溶出。而微波輔助提取工藝的原理則是利用微波的穿透式加熱，使細(xì)胞內(nèi)部溫度迅速上升，當(dāng)其細(xì)胞內(nèi)部壓力超過(guò)細(xì)胞壁膨脹承受能力時(shí)，細(xì)胞破裂，使得細(xì)胞內(nèi)的有效成分流出。本發(fā)明先使用纖維素酶作用于苦蕎麩皮細(xì)胞壁外部，對(duì)其進(jìn)行降解，在醇溶劑提取的過(guò)程中，再使用微波加熱，使細(xì)胞內(nèi)部溫度迅速上升，從內(nèi)部脹破細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)的有效成分進(jìn)一步流出。相比傳統(tǒng)的提取方法，本發(fā)明不但提高了原花青素的提取效率和純度，而且無(wú)需反復(fù)提取，縮短了提取時(shí)間。
[0012]因此，本發(fā)明的有益效果為:
(1)提高了原花青素的提取效率和純度；
(2)成本相對(duì)低廉，提取時(shí)間短；
(3)工藝簡(jiǎn)便，安全性高，廢液排放量少。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0013]圖1為本發(fā)明工藝流程圖；
圖中:實(shí)線框?yàn)楸匾襟E，虛線框?yàn)榭蛇x步驟。
【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換，均落入本發(fā)明保護(hù)范圍。
[0015]本發(fā)明所述的苦蕎麩皮原花青素的提取方法，具體步驟如下:
(I)將苦蕎麩皮粉碎過(guò)70~90目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；
作為本發(fā)明技術(shù)方案的一種優(yōu)選，將苦蕎麩皮粉碎過(guò)80目篩。另外，可對(duì)經(jīng)步驟(1)得到的苦蕎麩皮粉末原料進(jìn)行脫脂處理，然后再進(jìn)行酶解處理。脫脂處理能進(jìn)一步提高原花青素的得率，但脫脂處理比較耗時(shí)，會(huì)延長(zhǎng)整個(gè)提取時(shí)間。脫脂處理一般采用堿液、石油醚或乙醚浸泡或者堿性脂肪酶酶解脫脂等常規(guī)方法。
[0016](2)在原料中加入0.3~0.7mg/g (以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和料液比為1:10 (g/mL，苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)的醋酸一醋酸鈉緩沖溶液，并調(diào)節(jié)溶液pH至
4.8，進(jìn)行酶解反應(yīng)，酶解溫度為40~50°C，酶解時(shí)間為50~90min ；
作為本發(fā)明技術(shù)方案的一種優(yōu)選，加入0.5 mg/g的纖維素酶。
[0017]作為本發(fā)明技術(shù)方案的一種優(yōu)選，酶解溫度為45°C。
[0018](3)將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中70%~80%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；
(4)在濃縮懸濁液中加入料液比為1:15~1:30(g/mL，苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)的50%~70% (體積分?jǐn)?shù))乙醇水溶液，混合均勻后先進(jìn)行微波處理，后進(jìn)行提??；
作為本發(fā)明技術(shù)方案的一種優(yōu)選，乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為60%。
[0019]作為本發(fā)明技術(shù)方案的一種優(yōu)選，料液比為1:20~1:25。
[0020]事實(shí)上，甲醇、丙酮、乙醇和乙酸乙酯均為提取葡萄籽原花青常用的有機(jī)溶劑，它們對(duì)原花青素有很好的溶解性，們的極性大小順序?yàn)榧状?> 乙醇 > 丙酮 > 乙酸乙酯。其中尤以70%的丙酮水溶液的提取效果最佳，乙醇水溶液次之。乙酸乙酯極小，有效成分的提取不完全，丙酮和甲醇具有一定的毒性和刺激性，相比之下，乙醇價(jià)格低廉，安全性高，可以回收再利用，是十分理想的提取溶劑。
[0021]微波處理方法為:選用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為30~90s。事實(shí)上，180~2000W的微波功率均可采用，但是微波功率小，處理的時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)，并且不利于有效成分的流出，微波功率大則可能會(huì)破壞原花青素的活性，因此選用500W的微波處理。
[0022]提取采用回流提取法，水浴溫度為45~60°C，回流2次，每次Ih ;提取完畢后，合并2次提取液。
[0023](5)過(guò)濾乙醇提取液，得到原花青素粗提液；
(6)對(duì)粗提液進(jìn)行分離和純化，得到原花青素提取物。
[0024]分離純化的方法可采用大孔樹(shù)脂吸附法，具體為粗提液上AB-8大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍量蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在1.5~2.0BV/h，解析流速控制在0.8~1.0 BV/h，再將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。另外，上述的分離純化方法還可用膜分離技術(shù)，或者大孔樹(shù)脂吸附一膜分離聯(lián)合技術(shù)等替代。
[0025]利用本發(fā)明技術(shù)方案所得的原青花素的用途為抗衰老保健品和護(hù)膚品的有效成分。
[0026]實(shí)施例1
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)70目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.3 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液pH至4.8，酶解溫度為40°C，酶解時(shí)間為90min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中70%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入2.5L的50%乙醇溶液(料液比1:25)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為90s。然后在45°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0027]實(shí)施例2
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)80目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.3 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液PH至4.8，酶解溫度為45°C，酶解時(shí)間為70min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中80%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入1.5L的60%乙醇溶液(料液比1:15)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為30s。然后在55°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0028]實(shí)施例3
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)90目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.3 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液pH至4.8，酶解溫度為50°C，酶解時(shí)間為50min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中80%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入3L的70%乙醇溶液(料液比1:30)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為60s。然后在60°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0029]實(shí)施例4
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)70目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.5 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL 醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液pH至4.8，酶解溫度為40°C，酶解時(shí)間為50min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中80%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入2L的50%乙醇溶液(料液比1:20)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為90s。然后在45°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0030]實(shí)施例5
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)70目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.5 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液pH至4.8，酶解溫度為40°C，酶解時(shí)間為70min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中70%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入2.5L的60%乙醇溶液(料液比1:25)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為60s。然后在50°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0031]實(shí)施例6
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)80目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.5 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液pH至4.8，酶解溫度為40°C，酶解時(shí)間為90min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中70%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入1.5L的70%乙醇溶液(料液比1:15)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為30s。然后在50°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0032]實(shí)施例7
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)90目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.5 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液pH至4.8，酶解溫度為50°C，酶解時(shí)間為50min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中80%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入3L的50%乙醇溶液(料液比1:30)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為60s。然后在55°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0033] 實(shí)施例8
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)70目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.5 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液PH至4.8，酶解溫度為45°C，酶解時(shí)間為70min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中70%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入2L的60%乙醇溶液(料液比1:20)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為60s。然后在60°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0034]實(shí)施例9
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)80目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.5 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液PH至4.8，酶解溫度為45°C，酶解時(shí)間為90min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中80%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入2.5L的60%乙醇溶液(料液比1:25)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為60s。然后在55°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0035]實(shí)施例10
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)90目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.7 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液pH至4.8，酶解溫度為40°C，酶解時(shí)間為50min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中70%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入2.5L的70%乙醇溶液(料液比1:25)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為60s。然后在50°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在
2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0036]實(shí)施例11
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)80目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.7 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液pH至4.8，酶解溫度為50°C，酶解時(shí)間為70min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中70%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入3L的50%乙醇溶液(料液比1:30)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為60s。然后在55°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在
2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0037]實(shí)施例12
將苦蕎麩皮粉碎過(guò)70目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料；取該原料100g，加入0.7 mg/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和IL醋酸一醋酸鈉緩沖溶液(料液比1:10)，并調(diào)節(jié)溶液pH至4.8，酶解溫度為50°C，酶解時(shí)間為90min ;將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中70%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合， 得到濃縮懸濁液；在濃縮懸濁液中加入1.5L的60%乙醇溶液(料液比1:15)，混合均勻后，先用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin,處理時(shí)間的總和為30s。然后在60°C下，提取2h ;過(guò)濾，得到原花青素粗提液；粗提液IAB-S大孔吸附樹(shù)脂，采用10倍體積的蒸餾水和50%的乙醇分步洗脫，吸附流速控制在
2.0BV/h，解析流速控制在1.0 BV/h，將洗脫液濃縮干燥，得到原花青素提取物。
[0038]實(shí)施例13——增加脫脂處理步驟
其他工藝流程與實(shí)施例12相同，只在苦蕎麩皮原料粉碎過(guò)篩后，增加一步脫脂處理過(guò)程。脫脂處理的具體步驟為:將過(guò)篩的苦蕎麩皮浸入水中，在36°C下，加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至9.0，加堿性脂肪酶20 U/g(以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)，作用Ih后用清水沖洗至中性,濾紙過(guò)濾,烘干。
[0039]實(shí)施例14—鐵鹽催化比色法測(cè)定原花青素含量
以葡萄籽原花青素為標(biāo)準(zhǔn)品，分別配制質(zhì)量濃度為0，10，25，50，100, 150，200 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)甲醇溶液，將樣品配成1.0mg/mL的甲醇溶液，采用鐵鹽催化比色法在550 nm處比色，測(cè)定苦蕎麩皮樣品中原花青素含量。做標(biāo)準(zhǔn)曲線并得回歸方程為=0.00385x + 0.005473，r2 = 0.99992。并按下列公式計(jì)算出得率和純度。
[0040]得率(%)=(樣品中原花青素質(zhì)量/苦蕎麩皮質(zhì)量)X 100%
純度(%)=(樣品中原花青素質(zhì)量/樣品質(zhì)量)X 100%
實(shí)施例1~13的得率和純度如下表所示:
賣(mài)篇_ !12 3 45?78P 10U12 13
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【權(quán)利要求】
1.一種從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法，其特征在于包括如下步驟: (1)將苦蕎麩皮粉碎過(guò)70~90目篩，得到苦蕎麩皮粉末原料； (2)在原料中加入0.3~0.7mg/g (以苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)纖維素酶和料液比為I: 10 (g/mL,苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)的醋酸一醋酸鈉緩沖溶液，并調(diào)節(jié)溶液pH至4.8,進(jìn)行酶解反應(yīng)，酶解溫度為40~50°C，酶解時(shí)間為50~90min ； (3)將酶解后的懸濁液過(guò)濾，并將濾液中70%~80%的水分蒸發(fā)，再與濾渣混合，得到濃縮懸濁液； (4)在濃縮懸濁液中加入料液比為1:15~1:30(g/mL，苦蕎麩皮原料的質(zhì)量計(jì)算)的50%~70% (體積分?jǐn)?shù))乙醇水溶液，混合均勻后先進(jìn)行微波處理，后進(jìn)行提取； (5)過(guò)濾乙醇提取液，得到原花青素粗提液； (6)對(duì)粗提液進(jìn)行分離和純化，得到原花青素提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法，其特征在于步驟(1)苦蕎麩皮粉碎后過(guò)80目篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法，其特征在于對(duì)步驟(1)所述的苦蕎麩皮粉末原料進(jìn)行脫脂處理。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法，其特征在于步驟(4)加入60%的乙醇水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法，其特征在于步驟(4)所述的料液比為1:20~1:25。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法，其特征在于步驟(4)所述的微波處理方法為:采用2450Mhz，500W的微波短時(shí)間歇處理，每處理30s，停止lmin，處理時(shí)間的總和為30~90s。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法，其特征在于步驟(4)所述提取方法為回流提取法，水浴溫度為45~60°C，回流2次，每次Ih ;提取完畢后，合并2次提取液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法，其特征在于步驟(7)分離純化的方法為大孔樹(shù)脂吸附法。
9.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的從苦蕎麩皮中提取原花青素的方法所得的原青花素用作抗衰老保健品和護(hù)膚品有效成分的用途。
【文檔編號(hào)】C07D311/62GK103992300SQ201410237126
【公開(kāi)日】2014年8月20日 申請(qǐng)日期:2014年5月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月30日
【發(fā)明者】曹娜 申請(qǐng)人:云南朱提苦蕎生物科技開(kāi)發(fā)有限公司