一種從栝樓莖葉中分離純化對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及從栝樓莖葉中分離純化對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛的方法，是以栝樓莖葉為原料，經(jīng)過下述步驟：（1）栝樓莖葉粗提物的制備；（2）萃?。唬?）反相C18柱分離純化；（4）半制備型高效液相色譜分離純化：用半制備型高效液相色譜進行分離純化，流動相為甲醇-水，得到2種高純度的成分，經(jīng)鑒定分別是對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛。本工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴重危害，綜合成本低。
【專利說明】一種從栝樓莖葉中分離純化對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛的方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域，具體是涉及一種從栝樓莖葉中分離純化對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]葫蘆科括樓屬植物括樓(Th/cAasaoiAiaskirilowii Marm )和雙邊括樓(Th/cAasaoiAasrosthorinii Harms)是中國藥典規(guī)定的瓜萎藥材的原植物,其果實、果皮、種子和塊根分別作瓜萎、瓜萎皮、瓜萎子和天花粉入藥。栝樓莖葉味酸、性寒、無毒，歸肝、脾經(jīng)，具有清熱解暑的功效，可治療中熱傷暑、外感頭熱、頭痛發(fā)熱等癥，藥理實驗表明其提取液能殺死體內(nèi)腹水型癌細胞，具有抗癌作用。
[0003]有關(guān)栝樓的化學成分研究的報道很多，但是涉及栝樓莖葉的研究報道非常少。目前栝樓莖葉并沒有得到充分的利用，大部分作為廢棄物被丟棄，造成資源的極大浪費。為了深入研究栝樓莖葉的化學成分，開發(fā)新的藥用資源，本發(fā)明提供了一種簡單快速的從栝樓莖葉中分離純化對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種簡單快速的從栝樓莖葉中分離純化對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛的方法。
[0005]本發(fā)明的方案如下:
從栝樓莖葉中分離純化對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛的方法，其步驟為:
(1)栝樓莖葉粗提物的制備:取粉碎好的栝樓莖葉，用乙醇-水溶液加熱回流提取，提取液經(jīng)減壓回收至無醇后得到粗提物；
(2)萃取:將栝樓莖葉粗提物分散于水中，先后用等體積的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，石油醚、乙酸乙酯及正丁醇層分別減壓濃縮，得石油醚部位、乙酸乙酯部位及正丁醇部位；
(3)反相C18柱分離純化:將正丁醇部位用反相C18柱分離純化，流動相為甲醇-水梯度洗脫，收集30%甲醇洗脫部分，濃縮后得樣品I ;收集35%甲醇洗脫部分，濃縮后得樣品2 ；
(4)半制備型高效液相色譜分離純化:將樣品I和樣品2用半制備型高效液相色譜進行分離純化，色譜柱為C18 SMB 100柱，流動相為甲醇-水(50:50, V/V)，檢測波長為254 nm,收集目標組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，即得到所要分離的單體化合物。
[0006]前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(I)加熱回流提取時提取時間為1-3小時，提取次數(shù)為2-6次。更加優(yōu)選的是，提取時間為1.5-2.5小時(優(yōu)選2小時)，提取次數(shù)為3-5次(優(yōu)選4次)。
[0007]前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(I)加熱回流提取時所用乙醇的質(zhì)量濃度為50%-95% (優(yōu)選 60%-80%，更優(yōu)選 70%)。[0008]前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(4)用甲醇-水洗脫液進行洗脫時，所用甲醇的質(zhì)量濃度為45%-55% (優(yōu)選50%)。
[0009]前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(4)分離純化用甲醇-水溶液進行洗脫，洗脫流速為 20-30 mL/min (優(yōu)選 25 mL/min)。
[0010]本發(fā)明涉及從栝樓莖葉中分離純化對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛的方法，步驟為:(I)栝樓莖葉粗提物的制備:取粉碎好的栝樓莖葉，用乙醇-水溶液加熱回流提取，提取液經(jīng)減壓回收至無醇后得到粗提物。(2)萃取:將栝樓莖葉粗提物分散于水中，先后用等體積的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，石油醚、乙酸乙酯及正丁醇層分別減壓濃縮，得石油醚部位、乙酸乙酯部位及正丁醇部位。(3)反相C18柱分離純化:將正丁醇部位用反相C18柱分離純化，流動相為甲醇-水梯度洗脫，收集30%甲醇洗脫部分，濃縮后得樣品I ;收集35%甲醇洗脫部分，濃縮后得樣品2。(4)半制備型高效液相色譜分離純化:將樣品I和樣品2分別用半制備型高效液相色譜進行分離純化，色譜柱為C18 SMB 100柱(400 mmX25.4 mm
1.D., 10 μ m，成都格萊普科技有限公司)，流動相為甲醇-水，檢測波長為254 nm。該工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴重危害，綜合成本低 。
[0011]本發(fā)明從栝樓莖葉中分離純化對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛的方法，首先采用萃取的方法除去非極性及弱極性雜質(zhì)，再用反相C18柱對樣品進行粗分離，最后用半制備型高效液相色譜法進行精制，所得目標化合物的純度高，雜質(zhì)含量極低，這一點可從圖6和圖7中看出。除此之外，還具有如下優(yōu)勢:
(I)粗提物經(jīng)過石油醚萃取后可以除去非極性雜質(zhì)，再經(jīng)乙酸乙酯萃取可以除去弱極性雜質(zhì)，通過簡單的萃取的方法就可以把粗提物中的非極性和弱極性雜質(zhì)除去，使混合物的組成得到簡化，可以為后續(xù)的分離工作降低難度，并且可以保護反相C18柱及半制備型高效液相色譜柱不被污染，有效地延長了色譜柱的使用壽命。
[0012](2)用反相C18柱對組成復雜的樣品進行粗分段，采用甲醇-水梯度洗脫可以除去大部分的雜質(zhì)，為后續(xù)的純化工作降低了難度。
[0013](3)用半制備型高效液相色譜法對化合物進行精制，可以得到2種高純度單體化合物，該方法操作簡單，效率高，工藝周期短，節(jié)省試劑，降低了生產(chǎn)成本。
[0014](4)純化過程中不使用對環(huán)境和人體危害大的氯仿等有機溶劑，洗脫液經(jīng)減壓蒸餾回收后可以重復使用多次，綠色環(huán)保。
[0015](5)優(yōu)化了層析方法的條件(洗脫液的組成和流速)，使化合物的純度和效率都大為提聞。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1是栝樓莖葉正丁醇部位的高效液相色譜圖。
[0017]圖2是樣品I的高效液相色譜圖。
[0018]圖3是樣品2的高效液相色譜圖。
[0019]圖4是樣品I的半制備型高效液相色譜圖。
[0020]圖5是樣品2的半制備型高效液相色譜圖 圖6是對羥基苯甲酸甲酯的高效液相色譜圖。
[0021]圖7是3-吲哚甲醛的高效液相色譜圖。[0022]在圖1-7中，1:對羥基苯甲酸甲酯；II:3-吲哚甲醛。
【具體實施方式】
[0023]下面結(jié)合實施例和附圖詳細說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護范圍不被此限制。實施例中所用設備或原料皆可從市場獲得。所用試劑均購自濟南試劑總廠，所用水為去離子水。
[0024]實施例:從栝樓莖葉中分離純化對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛的方法，其步驟為:
(I)栝樓莖葉粗提物的制備:栝樓莖葉經(jīng)粉碎后，以70%乙醇為溶劑加熱回流提取4次，合并提取液，減壓濃縮得粗提物。
[0025](2)萃取:將栝樓莖葉粗提物分散于水中，依次用等體積的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，石油醚、乙酸乙酯和正丁醇層分別減壓濃縮，得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0026](3)反相C18柱分離純化:將正丁醇部位用反相C18柱分離純化，流動相為甲醇-水梯度洗脫，收集30%甲醇洗脫部分，濃縮后得樣品I ;收集35%甲醇洗脫部分，濃縮后得樣品2。
[0027](4)半制備型高效液相色譜分離純化:將樣品I和樣品2分別用半制備型高效液相色譜進行分離純化，色譜柱為C18 SMB 100柱(400 mmX25.4 mm 1.D., 10 μπι，成都格萊普科技有限公司)，流動相為甲醇-水(50:50，V/V)，檢測波長為254 nm，根據(jù)色譜圖手動收集目標組分，將得到的組分減壓蒸餾除去溶劑，即得到所要分離的單體化合物。
[0028]發(fā)明人通過使用 不同濃度的甲醇作流動相，采用不同的洗脫方式，控制甲醇-水洗脫液的流速為20-30 mL/min (優(yōu)選25 mL/min),優(yōu)選出了實現(xiàn)本發(fā)明目的的純化條件，有關(guān)實驗結(jié)果如下:
【權(quán)利要求】
1.從栝樓莖葉中分離純化對羥基苯甲酸甲酯及3-吲哚甲醛的方法，其特征是，步驟為: (1)栝樓莖葉粗提物的制備:取粉碎好的栝樓莖葉，用乙醇-水溶液加熱回流提取，提取液經(jīng)減壓回收至無醇后得到粗提物； (2)萃取:將栝樓莖葉粗提物分散于水中，先后用等體積的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，石油醚、乙酸乙酯及正丁醇層分別減壓濃縮，得石油醚部位、乙酸乙酯部位及正丁醇部位； (3)反相C18柱分離純化:將正丁醇部位用反相C18柱分離純化，流動相為甲醇-水梯度洗脫，收集30%甲醇洗脫部分，濃縮后得樣品I ;收集35%甲醇洗脫部分，濃縮后得樣品2 ； (4)半制備型高效液相色譜分離純化:將樣品I和樣品2分別用半制備型高效液相色譜進行分離純化，色譜柱為C18 SMB 100柱，流動相為甲醇-水(50:50, V/V)，檢測波長為254nm,收集目標組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，即得到所要分離的單體化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(I)加熱回流提取時間為1-3小時。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(I)加熱回流提取時提取時間為1.5-2.5 小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(I)加熱回流提取時提取時間為2小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(I)提取次數(shù)為2-6次。.
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(I)提取次數(shù)為3-5次(優(yōu)選4次)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(I)加熱回流提取時所用乙醇的質(zhì)量濃度為50%-95% (優(yōu)選60%-80%，更優(yōu)選70%)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(4)分離純化用甲醇-水洗脫液進行洗脫，洗脫方式有甲醇-水梯度洗脫/45%甲醇-水等度洗脫/50%甲醇-水等度洗脫/55%甲醇_水等度洗脫。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，控制甲醇-水洗脫液流速為20-30mL/min(優(yōu)選 25 mL/min)ο
【文檔編號】C07C67/56GK103467297SQ201310477494
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月14日
【發(fā)明者】李愛峰, 張永清, 柳仁民, 孫愛玲 申請人:聊城大學