專利名稱：一種吖啶香豆素堿f的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然植物提取領(lǐng)域，具體涉及一種吖啶香豆素堿F的提取方法。
背景技術(shù)：
吖啶香豆素堿F(Acrimarine F)，分子式C31H29NO8,分子量543.57。吖啶香豆素堿F是從蕓香科(Rutaceae)葡萄柚雜交桔Citrus paradisi X Citrus tangerine.的根中分離得到的一種吖啶類生物堿。實(shí)驗(yàn)研究表明，吖啶香豆素堿F具有抑制病毒活化作用。對(duì)Epstein 一 Barr 病毒(EBV)在 500mol ratio/TPA 濃度時(shí)，具有 100% 的抑制作用，在 IOmolratio/TPA時(shí)，有66.8%的抑制活性?，F(xiàn)有提取吖啶香豆素堿F的報(bào)道并不多見，市場(chǎng)上也尚未有吖啶香豆素堿F對(duì)照品的出售，因此提供一種吖啶香豆素堿F的提取方法則很有必要，可以為其后續(xù)研究提供支持。目前，國內(nèi)尚未見吖啶香豆素堿F的提取純化方法方面的專利報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種吖啶香豆素堿F的提取方法，該方法操作簡單、得率高、安全環(huán)保，可快速大量分離高純度吖啶香豆素堿F。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一種吖啶香豆素堿F的提取方法，其特征在于它包括以下步驟:
(1)提取:取葡萄柚雜交桔的根粉碎成粗粉，加入乙醇溶液，25-55°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取，得到乙醇提取液；
(2)氧化鋁柱層析:上述提取液濃縮至浸膏，加氧化鋁拌勻、干燥后裝柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集吖啶香豆素堿F流分，濃縮干燥得到吖啶香豆素堿F粗品；
(3)制備型液相色譜分離:上述粗品采用制備型液相色譜分離，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集吖啶香豆素堿F組分，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得吖啶香豆素堿F粗晶；
(4)重結(jié)晶:將吖啶香豆素堿F粗晶用氯仿-甲醇重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度吖啶香豆素堿F淡黃色晶體。步驟(I)所述乙醇溶液濃度為85-95%，用量為藥材的5_10倍(V/W)。步驟(I)所述超聲頻率為50-80KHZ。步驟(I)所述提取時(shí)間為30_100min。步驟(2)所述氧化鋁為80-120目，氯仿-丙酮體積比為1:1，用量為柱體積的4-8倍。步驟(3)所述制備型液相色譜的流動(dòng)相為乙腈-0.2%乙二胺水溶液，體積比為33:67。步驟(I)所述紫外檢測(cè)波長為332nm。步驟(4)所 述氯仿-甲醇的體積比為2.5:1。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:1)操作簡單、耗時(shí)短，易于產(chǎn)業(yè)化放大；2)提取、柱層析、制備液相分離等步驟中的溶劑用量少，并可回收再利用；3)具有較高的經(jīng)濟(jì)效益和學(xué)術(shù)價(jià)值，本發(fā)明所得產(chǎn)品純度高，可為吖啶香豆素堿F的進(jìn)一步開發(fā)提供藥理原料和實(shí)踐支持。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明:
實(shí)施例1:
取葡萄柚雜交桔的根1kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入10倍95%乙醇溶液，55°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取30min，超聲頻率為80KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，向浸膏中加氧化鋁(120目)拌勻、干燥后裝柱，用7倍柱體積的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集吖啶香豆素堿F流分，濃縮干燥得到吖啶香豆素堿F粗品。以乙腈-0.2%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為33:67，色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為IOym,柱長為15cm、直徑為4cm,將粗品加入流動(dòng)相至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)0.45 μ m微濾膜過濾，得到樣品溶液，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為25ml,控制流速為50ml/min,紫外在線檢測(cè),檢測(cè)波長為332nm,收集目標(biāo)成分，減壓回收試劑得吖啶香豆素堿F粗晶，用氯仿-甲醇(2.5:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度吖啶香豆素堿F淡黃色晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度97.9%。實(shí)施例2:
取葡萄柚雜交桔的根1kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入10倍85%乙醇溶液，45°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取lOOmin，超聲頻率為60KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(80目)拌勻、干燥后裝柱，用4倍柱體積的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集吖啶香豆素堿F流分，濃縮干燥得到吖啶香豆素堿F粗品。以乙腈-0.2%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為33:67，色·譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為ΙΟμπι，柱長為10cm、直徑為1cm，將粗品加入流動(dòng)相至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)0.45 μ m微濾膜過濾，得到樣品溶液，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為5ml,控制流速為10ml/min,紫外在線檢測(cè),檢測(cè)波長為332nm,收集目標(biāo)成分，減壓回收試劑得吖啶香豆素堿F粗晶，用氯仿-甲醇(2.5:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度吖啶香豆素堿F淡黃色晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度97.0%。實(shí)施例3:
取葡萄柚雜交桔的根10kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入6倍90%乙醇溶液，35°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取50min，超聲頻率為50KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(100目)拌勻、干燥后裝柱，用6倍柱體積的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集吖啶香豆素堿F流分，濃縮干燥得到吖啶香豆素堿F粗品。以乙腈-0.2%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為33:67，色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長為25cm、直徑為4cm，將粗品加入流動(dòng)相至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)0.45 μ m微濾膜過濾，得到樣品溶液，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20ml,控制流速為20ml/min,紫外在線檢測(cè),檢測(cè)波長為332nm,收集目標(biāo)成分，減壓回收試劑得吖啶香豆素堿F粗晶，用氯仿-甲醇(2.5:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度吖啶香豆素堿F淡黃色晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度97.8%。
實(shí)施例4:
取葡萄柚雜交桔的根10kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入5倍85%乙醇溶液，25°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取80min，超聲頻率為60KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(100目)拌勻、干燥后裝柱，用8倍柱體積的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集吖啶香豆素堿F流分，濃縮干燥得到吖啶香豆素堿F粗品。以乙腈-0.2%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為33:67，色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長為50cm、直徑為5cm，將粗品加入流動(dòng)相至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)0.45 μ m微濾膜過濾，得到樣品溶液，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為50ml,控制流速為120ml/min,紫外在線檢測(cè),檢測(cè)波長為332nm,收集目標(biāo)成分，減壓回收試劑得吖啶香豆素堿F粗晶，用氯仿-甲醇(2.5:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度吖啶·香豆素堿F淡黃色晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度98.5%。
權(quán)利要求
1.一種吖啶香豆素堿F的提取方法，其特征在于它包括以下步驟 (1)提取取葡萄柚雜交桔的根粉碎成粗粉，加入乙醇溶液，25-55°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取，得到乙醇提取液； (2)氧化鋁柱層析上述提取液濃縮至浸膏，加氧化鋁拌勻、干燥后裝柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集吖啶香豆素堿F流分，濃縮干燥得到吖啶香豆素堿F粗品； (3)制備型液相色譜分離上述粗品采用制備型液相色譜分離，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集吖啶香豆素堿F組分，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得吖啶香豆素堿F粗晶； (4)重結(jié)晶將吖啶香豆素堿F粗晶用氯仿-甲醇重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度吖啶香豆素堿F淡黃色晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的吖啶香豆素堿F的提取方法，其特征在于步驟(I)所述乙醇溶液濃度為85-95%，用量為藥材的5-10倍(V/W)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的吖啶香豆素堿F的提取方法，其特征在于步驟(I)所述超聲頻率為50-80KHz。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的吖啶香豆素堿F的提取方法，其特征在于步驟(I)所述提取時(shí)間為 30-100min。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的吖啶香豆素堿F的提取方法，其特征在于步驟(2)所述氧化招為80-120目，氯仿-丙酮體積比為I: I，用量為柱體積的4-8倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的吖啶香豆素堿F的提取方法，其特征在于步驟(3)所述制備型液相色譜的流動(dòng)相為乙腈-O. 2%乙二胺水溶液，體積比為33:67。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的吖啶香豆素堿F的提取方法，其特征在于步驟(I)所述紫外檢測(cè)波長為332nm。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的吖啶香豆素堿F的提取方法，其特征在于步驟(4)所述氯仿-甲醇的體積比為2. 5: I。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種吖啶香豆素堿F的提取方法，其提取方法是(1)取葡萄柚雜交桔的根粗粉，85-95%的乙醇溶液連續(xù)逆流超聲提取，得到提取液；(2)將提取液濃縮，再經(jīng)氧化鋁柱層析；(3)制備型液相色譜分離；(4)氯仿-甲醇重結(jié)晶，得到高純度的吖啶香豆素堿F結(jié)晶產(chǎn)品。本發(fā)明方法簡單、得率高，可得到高純度產(chǎn)品，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和學(xué)術(shù)價(jià)值。
文檔編號(hào)C07D405/06GK103254181SQ201310197330
公開日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2013年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月24日
發(fā)明者蘇劉花, 萬冬梅 申請(qǐng)人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司