專利名稱：一種從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，尤其是一種能夠從苦杏仁中同時提取苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，苦杏仁具有降氣止咳平喘、潤腸通便的功效，主治咳嗽氣喘、 胸滿痰多、腸燥便秘等。藥理實驗證實，苦杏仁具有鎮(zhèn)咳平喘、抗腫瘤、降血脂、潤腸通便等作用。其成分有脂肪油類、苷類、蛋白質(zhì)類、黃酮類等?？嘈尤手械闹居秃胸S富的亞油酸和油酸，對人體有重要的生理作用和藥用價值，亞油酸是人體必需脂肪酸，能降低血液膽固醇，預(yù)防動脈粥樣硬化。苦杏仁油可作為護(hù)膚化妝品的原料、精密儀器的潤滑油、食品添加劑等，并且是上好的食用油?？嘈尤手械目嘈尤受赵隗w內(nèi)分解為氫氰酸和苯甲醛，氫氰酸對呼吸中樞可產(chǎn)生一定的抑制作用，使呼吸趨于安靜而達(dá)到鎮(zhèn)咳平喘作用?？嘈尤受占捌渌馑a(chǎn)生的氫氰酸和苯甲醛體外試驗均被證明有抗癌作用，癌細(xì)胞內(nèi)硫氫化酶較正常細(xì)胞少，因此對苦杏仁苷水解釋放出的氫氰酸的解毒能力較差，苦杏仁苷加苯甲醛或苦杏仁苷加β_葡糖苷酶可明顯提高抗癌效力。臨床試驗證實，健康人及高血脂癥病人服用苦杏仁后可降低血脂水平，因此苦杏仁具有降血脂作用。
目前，對苦杏仁中苦杏仁油、苦杏 仁苷、苦杏仁總黃酮及苦杏仁蛋白的制備方法較多，但是現(xiàn)有的方法都是從苦杏仁中提取單一的成分，單一提取會造成資源的浪費，而且降低了苦杏仁的綜合利用率，提高了苦杏仁深加工的成本。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種能夠從苦杏仁中同時提取得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為一種從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取苦杏仁，粉碎，然后萃取，分別得到苦杏仁油和苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，然后減壓濃縮后靜置析晶，得晶體和濾液I，所得晶體即為苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4-lg生藥/ml濃度， 先通過大孔樹脂柱，然后加水分散成O. 1-0. 4g生藥/ml濃度，再上聚酰胺柱，收集洗脫液， 減壓回收溶劑，真空干燥，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II干燥，即得苦杏仁蛋白。
本發(fā)明所述方法使用的原料苦杏仁來源薔薇科植物山杏Prunus armeniacaL.var. ansu Maxim.、西伯利亞杏Prunus sibirica L.、東北杏Prunus mandshurica (Maxim.) Koehne或杏Prunus armeniaca L.的干燥成熟種子。作為提取苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的原料，可以是市售炮制的飲片，也可以是此植物的原藥材。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(I)中的苦杏仁水分活度為O. Γ0. 7，苦杏仁粉碎后過1(Γ120目篩。一般選取新鮮的苦杏仁，進(jìn)行干燥，使得苦杏仁的水分活度為O. Γ0. 7，然后將原料苦杏仁粉碎至1(Γ120目； 所述步驟(2)中先將苦杏仁柏干燥至水分活度為O. 1-0. 7，然后再加入8(Γ95%的乙醇。所述苦杏仁的干燥方式可選擇曬干、風(fēng)干、烘干、真空烘干、凍干和脫水劑干燥中的至少一種。 當(dāng)采用脫水劑干燥的方式時，所述脫水劑選自乙醇、甘油、葡萄糖和食鹽中的至少一種，所述脫水劑與所述苦杏仁的用量比為O. 05、. 5L :1kg。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(I)采用超臨界二氧化碳萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取釜、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取爸中，在分離爸I溫度為30-50°C、萃取爸溫度為35-55°C 條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進(jìn)行加壓，當(dāng)萃取釜壓力達(dá)到25-32MPa、二氧化碳流速為12-24L/h時，保持溫度和壓力，萃取l_2h，收集萃取物，即得苦杏仁油。超臨界流體萃取技術(shù)，是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種獨特、高效、新型分離精制的高新技術(shù)。超臨界二氧化碳萃取具有操作溫度低、溶解能力強(qiáng)、無毒、無污染、無溶劑殘留及產(chǎn)品易分離等優(yōu)勢，克服了其他提取方法分離過程的確定，特別適合于熱敏性物質(zhì)及生物活性物質(zhì)的提取分離，因此，超臨界二氧化碳流體萃取法是較為理想的工藝方法。
當(dāng)所述步驟(I)采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油時，本發(fā)明所述方法所得苦杏仁油的收率40-50% ;所得苦杏仁苷的純度大于90% ;所得苦杏仁總黃酮的純度大于50%;所述步驟(4)中濾渣II中所含苦杏仁蛋白的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]大于42g/100g ;所得苦杏仁中不飽和脂肪酸的含量為93-96. 8%、飽和脂肪酸的含量為2. 6-6. 6%。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(I)采用亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與萃取劑按照1:廣1:20的質(zhì)量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為30-50°C、萃取壓力為2-10公斤壓力的條件下，連續(xù)萃取1-2次，每次萃取5_10min，萃取流量為10-200L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為30-50°C、分離壓力為1_2公斤壓力條件下進(jìn)行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油。亞臨界流體是指某些化合物在溫度高于其沸點但低于臨界溫度，且壓力低于其臨界壓力的條件下，以流體形式存在的該物質(zhì)。在亞臨界流體狀態(tài)存在時，分子的擴(kuò)散性能增強(qiáng)，傳質(zhì)速度快，對天然產(chǎn)物中弱極性以及非極性物質(zhì)的滲透性和溶解能力顯著提高。亞臨界流體萃取技術(shù)，可以在比較低的壓力下實現(xiàn)比較好的萃取效果，提供了一種投資少、成本低、并且更安全、無毒的萃取方法。與超臨界流體萃取相比，亞臨界流體萃取的主要優(yōu)點是工作壓力低，萃取條件更加溫和，而且亞臨界萃取大大降低了設(shè)備投資，減少了二氧化碳的用量，降低了成本，提高了安全性，并且保持了與超臨界流體萃取相似的優(yōu)點，如具有較強(qiáng)的溶解能力，可溶解多種物質(zhì)等。
當(dāng)所述步驟(I)采用亞臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油時，本發(fā)明所述方法所得苦杏仁油的收率45-52% ;所得苦杏仁苷的純度大于90% ;所得苦杏仁總黃酮的純度大于50% ;所述步驟(4)中濾渣II中所含苦杏仁蛋白的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]大于42g/100g ;所得苦杏仁中不飽和脂肪酸的含量為93-96. 8%、飽和脂肪酸的含量為2. 6-6. 6%。
在實踐中，步驟(I)首選使用亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，因為與壓榨法、有機(jī)溶劑浸出法相比，亞臨界流體萃取法大大提高了萃取率，縮短了萃取時間，同時所述亞臨界流體萃取法選用二氧化碳、烷烴類等無毒無害溶劑，從而無有害溶劑殘留現(xiàn)象；與超臨界流體萃取法相比，亞臨界流體萃取的工作壓力低，萃取條件更加溫和如二氧化碳超臨界萃取必須在25MPa以上的超高壓狀態(tài)下能夠進(jìn)行萃取加工，而二氧化碳亞臨界萃取的工作壓力為6 7MPa，工作溫度為2(T30°C。更重要地，亞臨界流體萃取大大降低了設(shè)備投資，減少了二氧化碳的用量，降低了成本，提高了安全性，并且保持了超臨界二氧化碳相似的優(yōu)點，具有較強(qiáng)的溶解能力，可溶解多種物質(zhì)等。同時，利用亞臨界流體萃取技術(shù)可以一次性處理，實現(xiàn)萃取精制，無需后續(xù)的脫臭、脫色等處理，整個萃取過程是在密閉絕氧、低溫低壓的條件下進(jìn)行，沒有高溫過程，因此特別適合于類似苦杏仁油等富含不飽和脂肪酸油脂的工業(yè)化連續(xù)性生產(chǎn)，操作方便、安全，環(huán)保。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，當(dāng)步驟(I)使用亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油時，所述萃取劑為丙烷、丁烷、 異丁烷、四氟丁烷、二甲醚、二氧化碳、液化石油氣、六氟化硫、1，1，1，2-四氟乙烷中的任意一種或其組合。二氧化碳(CO2)無色、無味、無毒，且通常條件下為氣體。CO2的臨界溫度 (Tc=304. 21K)和臨界壓力(pe=7. 38MPa)溫和，萃取過程中不產(chǎn)生任何副產(chǎn)品，可直接排入空氣，無環(huán)境污染；萃取后無溶劑殘留問題，可獲取純天然中藥原料；操作上易于實現(xiàn)；可通過控制溫度和壓力改變其溶解度和狀態(tài)，實現(xiàn)選擇性提取分離。六氟化硫常態(tài)下是一種無色、無味、無嗅、無毒的非燃燒氣體，分子量146. 06，密度6. 139克/升，約為空氣的5倍， 微溶于水、 乙醇、乙醚，是已知化學(xué)安定性最好的氣態(tài)物質(zhì)之一，具有極好的熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性。二甲醚(DME)是一種無色、具有輕微醚香味的氣體，具有惰性、無腐蝕性、無致癌性。還具有優(yōu)良的混溶性，能同大多數(shù)極性和非極性有機(jī)溶劑混溶。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(2)中減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C;所述步驟(4) 中采用真空干燥濾渣II，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為 20 80。。。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(3)中將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4-lg生藥/ml濃度，先通過大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為1:1 3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 1-0. 4g生藥 /ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為2:1飛1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，真空干燥得苦杏仁總黃酮。所述大孔樹脂一般采用AB-8大孔樹脂，上述純化方法采用聚酰胺-大孔樹脂聯(lián)用對苦杏仁總黃酮純化，使得純化后苦杏仁總黃酮的產(chǎn)品純度大于50%。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(3)中減壓濃縮的條件均為壓力20-100kpa，時間20_120min，溫度2(T80°C ;所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(2)中6(Γ95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1 ;所述步驟(3)中5(Γ80%的乙醇與濾渣I的重量比為6 10:1。
本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，通過對苦杏仁萃取、乙醇提取等過程，能夠同時從苦杏仁中提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮及苦杏仁蛋白，所得苦杏仁油的收率大于40%，所得苦杏仁苷的純度大于90%，所得苦杏仁總黃酮產(chǎn)品純度大于50%，所得濾渣II中苦杏仁蛋白的含量大于42g/100g。本發(fā)明所述方法從苦杏仁中同時提取分離得到多種有效成分，避免了現(xiàn)有技術(shù)中單一提取所帶來的資源浪費， 提高了苦杏仁的綜合利用率，降低了苦杏仁深加工的成本。


圖1為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的工藝流程圖。
具體實施方式
為更好的說明本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點，下面將結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實施例1
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為30°c、萃取釜溫度為35°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進(jìn)行加壓，當(dāng)萃取釜壓力達(dá)到30MPa、二氧化碳流速為12L/h時，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，將所述O. 4g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為1:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O.1g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為2:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進(jìn)行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為40%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為94%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為53%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟 (4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量為42. 9g/100g。
實施例2
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁1kg，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為45°c、萃取釜溫度為45°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進(jìn)行加壓，當(dāng)萃取釜 壓力達(dá)到32MPa、二氧化碳流速為12L/h時，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，將所述O. 4g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O.1g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為2:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進(jìn)行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為41. 2%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為91%， 步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為52%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量為42g/100g。
實施例3
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為50°c、萃取釜溫度為50°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進(jìn)行加壓，當(dāng)萃取釜壓力達(dá)到25MPa、二氧化碳流速為24L/h時，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入80 95%的乙醇浸泡2 3h， 所述8(Γ95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，將所述O. 4g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為1: 1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O.1g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂， 上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為2:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進(jìn)行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為45. 3%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為91%， 步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為51%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量為42. 3g/100g。
實施例4
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為45°c、萃取釜溫度為40°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進(jìn)行加壓，當(dāng)萃取釜壓力達(dá)到28MPa、二氧化碳流速為12L/h時，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 5g生藥/ml濃度，將所述O. 5g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為2:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 2g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為4:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進(jìn)行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為49%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為96%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為58%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟 (4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量為42. 6g/100g。
實施例5
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為45°c、萃取釜溫度為55°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進(jìn)行加壓，當(dāng)萃取釜壓力達(dá)到26MPa、二氧化碳流速為12L/h時，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成Ig生藥/ml濃度，將所述Ig生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集50 80% 乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為6:1，依次用1(T15BV蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為 5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進(jìn)行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為50%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為95%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為56%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟 (4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量為43. 2g/100g。
實施例6
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為50°c、萃取釜溫度為45°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進(jìn)行加壓，當(dāng)萃取釜壓力達(dá)到32MPa、二氧化碳流速為24L/h時 ，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f2h，提取I飛次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成Ig生藥/ml濃度，將所述Ig生藥/ml濃度水分散液先通過大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集50 80% 乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為6:1，依次用1(T15BV蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為 5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進(jìn)行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為43. 8%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為93%， 步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為54%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量為44. 7g/100g。
實施例7
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁1kg，粉碎至1(Γ120目，亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與丙烷按照1:1的質(zhì)量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為30°C、萃取壓力為2公斤壓力的條件下，萃取I次，萃取lOmin，萃取流量為10L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為 30°C、分離壓力為I公斤壓力條件下進(jìn)行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油，剩余的物料即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，將所述O. 4g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為1:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O.1g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為2:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進(jìn)行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為45%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為92%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為51%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟 (4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量為43. 5g/100g。
實施例8
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁1kg，粉碎至1(Γ120目，亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與異丁烷按照1:3的質(zhì)量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為35°C、萃取壓力為4公斤壓力的條件下，連續(xù)萃取2次，每次萃取5min，萃取流量為20L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為35°C、分離壓力為1. 5公斤壓力條件下進(jìn)行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油， 剩余的物料即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 6g生藥/ml濃度，將所述O. 6g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為2:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 2g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為3:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進(jìn)行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為49. 5%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為94%， 步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮 的純度為53%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量為43. 5g/100g。
實施例9
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁1kg，粉碎至1(Γ120目，亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與二氧化碳按照1:5的質(zhì)量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為40°C、萃取壓力為6公斤壓力的條件下，萃取I次，萃取時間5min，萃取流量為40L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為35°C、分離壓力為1. 8公斤壓力條件下進(jìn)行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油，剩余的物料即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成Ig生藥/ml濃度，將所述Ig生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集50 80% 乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為6:1，依次用1(T15BV蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為 5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進(jìn)行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為46%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為96%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為55%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010 第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟 (4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量為46. 7g/100g。
實施例10
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁1kg，粉碎至1(Γ120目，亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與二甲醚按照1:20的質(zhì)量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為50°C、萃取壓力為10公斤壓力的條件下，連續(xù)萃取2次，每次萃取5min，萃取流量為200L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為50°C、分離壓力為2公斤壓力條件下進(jìn)行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油，剩余的物料即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. Sg生藥/ml濃度，將所述O. Sg生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為2:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 3g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為5:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進(jìn)行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為52%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為96%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為58%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量為49. 5g/100g。
實施例11
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與1，I, I, 2-四氟乙烷按照 1:15的質(zhì)量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為40°C、萃取壓力為8 公斤壓力的條件下，連續(xù)萃取2次，每次萃取lOmin，萃取流量為150L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為45°C、分離壓力為1. 6公斤壓力條件下進(jìn)行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油，剩余的物料即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h·， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. Sg生藥/ml濃度，將所述O. Sg生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為2. 5:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 25g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為4:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進(jìn)行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為48%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為91%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為56%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質(zhì)=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質(zhì)的含量為44. 8g/100g。
實施例12
1.苦杏仁總黃酮的含量測定
精密稱取蘆丁對照品適量(約5mg)，置于IOmL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻，作為對照品溶液。精密吸取蘆丁對照品溶液O. 5，1. O, 2. O, 3. 0,4. O, 5. OmL,置于25mL 容量瓶中，加 5%NaN02lmL，放置 6min，加入 10%Al(N03)3lmL,放置 6min，再加 10%Na0H10mL, 加70%乙醇定容至刻度，靜置15min，于510nm處測吸光度。以蘆丁對照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
精密稱取苦實施例1-11所得苦杏仁總黃酮提取物樣品各3份，每份50mg，置于 25mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述樣品溶液精密吸取樣品溶液5mL置于25mL容量瓶中，加5%NaN021mL，放置6min，加入10%A1 (NO3) 3lmL，放置 6min,再加10%Na0H10mL，加甲醇定容至刻度，靜置15min，于510nm處測吸光度，外標(biāo)兩點法計算含量。計算得知，實施例1-11所得苦杏仁總黃酮以蘆丁含量計為O. 5%。
2.苦杏仁苷含量的測定
色譜條件色譜柱AKZ0N0BELKromasil C18 柱(250_X 4. 6mm, 5 μ m),流動相: 甲醇-水(25:75)，流速lmL/min，柱溫30°C，檢測波長為225nm，進(jìn)樣量10 μ L，理論塔板數(shù)按苦杏仁苷計大于5000。在此色譜條件下苦杏仁苷的分離度大于10。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密量取對照品溶液O. 5、l、2、3、4、5mL至5mL容量瓶中，依次進(jìn)樣，測定各色譜峰峰面積，以峰面積值縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
含量測定分別精密稱取實施例1-11中所得苦杏仁柏樣品各3份，每份O. 5g，置于錐形瓶中，加甲醇25mL，稱定重量，超聲提取30min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，取上清液過O. 45 μ m微孔濾膜，取續(xù)濾液注入色譜液相儀，測定各色譜峰峰面積，計算含量。計算得知，實施例1-11所得苦杏仁苷的含量為5. 8%。
3.蘆丁、槲皮素、異鼠李素的含量測定
色譜條件色譜柱KromasailC18 (4. 6X 250mm, 5 μ m)色譜柱,流動相甲醇_0.4% 磷酸(46 :54)，流速為1. OmL.min-Ι，柱溫:30°C，檢測波長:370nm，進(jìn)樣量為IOyL0供試品溶液色譜中與各對照品對應(yīng)的吸收峰的理論塔板數(shù)均不低于6000，對應(yīng)的色譜峰的分離度均大于1. 5，拖尾因子在O. 95 1. 05。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:精密量取對照品溶液O. 5、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5mL置5mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得系列混合對照品溶液。測定各色譜峰峰面積，以峰面積值縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(ug)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
含量測定分別精密稱取實施例1-11所得苦杏仁總黃酮提取物樣品各3份，每份O.lg，置于IOmL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻。精密吸取溶液10 μ L，注入色譜液相儀，測定各色譜峰峰面積，計算含量。計算得知，實施例1-11的苦杏仁中蘆丁、槲皮素、異鼠李素的含量分別為 5. 65%、1. 5%、0· 86%O
4.苦杏仁油的檢測
采用以下表格中的方法對實施例1-11所得苦杏仁油成分進(jìn)行檢測，檢測方法及結(jié)果如下表I所示
表I苦杏仁油中各各組分檢測方法及結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)提取苦杏仁油選取苦杏仁，粉碎，然后萃取，分別得到苦杏仁油和苦杏仁柏；(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h，微沸狀態(tài)下保溫f2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，然后減壓濃縮后靜置析晶，得晶體和濾液I，所得晶體即為苦杏仁苷；(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫 r2h,提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2) 中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4-lg生藥/ml濃度，先通過大孔樹脂柱，然后加水分散成O. 1-0. 4g生藥/ml濃度，再上聚酰胺柱，收集洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥，得苦杏仁總黃酮；(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II干燥，即得苦杏仁蛋白。
2.如權(quán)利要求1所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(I)中的苦杏仁水分活度為O. Γ0. 7，苦杏仁粉碎后過1(Γ120目篩；所述步驟(2)中先將苦杏仁柏干燥至水分活度為O. 1-0. 7，然后再加入8(Γ95%的乙醇。
3.如權(quán)利要求1或2所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于， 所述步驟(I)采用超臨界二氧化碳萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取釜、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取爸中，在分離爸I溫度為30-50°C、萃取爸溫度為 35-55°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進(jìn)行加壓，當(dāng)萃取釜壓力達(dá)到25-32MPa、二氧化碳流速為12-24L/h時，保持溫度和壓力，萃取l_2h，收集萃取物，即得苦杏仁油。
4.如權(quán)利要求1或2所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(I)采用亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與萃取劑按照1:廣1:20的質(zhì)量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為30-50°C、萃取壓力為2-10公斤壓力的條件下，連續(xù)萃取1-2次，每次萃取5_10min，萃取流量為10_200L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為30-50°C、分離壓力為1_2 公斤壓力條件下進(jìn)行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油。
5.如權(quán)利要求4所述的從苦杏仁油中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于， 所述萃取劑為丙烷、丁烷、異丁烷、四氟丁烷、二甲醚、二氧化碳、液化石油氣、六氟化硫、 1，I, I, 2-四氟乙烷中的任意一種或其組合。
6.如權(quán)利要求1所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(2)中減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C;所述步驟(4) 中采用真空干燥濾渣II，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為 20 80。。。
7.如權(quán)利要求1所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(3)中將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4-lg生藥/ml濃度，先通過大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質(zhì)量比為I Γ3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 1-0. 4g生藥 /ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質(zhì)量比為2:1飛1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，真空干燥得苦杏仁總黃酮。
8.如權(quán)利要求7所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(3)中減壓濃縮的條件均為壓力20-100kpa，時間20_120min，溫度2(T80°C ;所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C。
9.如權(quán)利要求1所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(2)中80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1 ;所述步驟(3)中50 80%的乙醇與濾渣I的重量比為6 10:1。
10.如權(quán)利要求1所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述方法所得苦杏仁油的收率40-52%，所得苦杏仁苷的純度大于90%，所得苦杏仁總黃酮的純度大于50%，所得苦杏仁中不飽和脂肪酸的含量為93-96. 8%、飽和脂肪酸的含量為2.6-6. 6% ;所述濾渣II中苦杏仁蛋白的含量大于42g/100g。
全文摘要
本發(fā)明公開一種從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，所述方法包括以下步驟(1)提取苦杏仁油將苦杏仁粉碎后萃取，得苦杏仁油和苦杏仁粕；(2)提取苦杏仁苷將苦杏仁粕加乙醇浸泡，微沸狀態(tài)保溫，提取過濾得苦杏仁苷提取液和濾渣Ⅰ，將提取液減壓濃縮后靜置析晶，得苦杏仁苷和濾液Ⅰ；(3)提取苦杏仁總黃酮將濾渣Ⅰ加入乙醇在微沸狀態(tài)下保溫，提取過濾得總黃酮提取液和濾渣Ⅱ，將總黃酮提取液濃縮得總黃酮粗品，純化后得苦杏仁總黃酮；(4)提取苦杏仁蛋白將濾渣Ⅱ干燥，得苦杏仁蛋白。本發(fā)明所述方法能夠同時提取多種成分，避免單一提取所帶來的資源浪費，提高苦杏仁的綜合利用率。
文檔編號C07H15/18GK102994222SQ20121054414
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月14日
發(fā)明者高英, 玉榮 申請人:高英