專利名稱:一種牛蒡子苷粗品的純化方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明屬于中藥制備技術(shù)領(lǐng)域,涉及一種藥物提取物的純化方法,具體涉及一種牛蒡子苷粗品的純化方法。
背景技術(shù):
牛蒡子為菊科植物牛蒡(Arctium lappa L.)的干燥成熟的果實,原名惡實,始載于《名醫(yī)別錄》,列為中品。牛蒡子在我國各地均有分布,收載于歷版《中國藥典》,具有疏散風(fēng)熱,宣肺透疹,解毒利咽的功效。臨床上用于治療風(fēng)熱感冒,咳嗽痰多,麻疹,風(fēng)疹,咽喉腫痛,痄腮丹毒,癰腫瘡毒。牛蒡子苷(Arctiin)在牛蒡子中含量在5%以上(中國藥典,2005版),是其發(fā)揮 藥理作用的主要生物活性前體物質(zhì)。牛蒡子苷不直接參與調(diào)控機體生理功能,而是在人或動物的腸道菌群的作用下代謝成牛蒡子苷元(Arctigenin)后,對機體發(fā)揮清熱解毒、抗病毒與抗腫瘤等作用(Nose M, et al. Planta Medica 1992,58 (6) : 520-523; Kato T, etal. Anticancer Research 1998, 18 (2A) : 1053-1057)。在化學(xué)結(jié)構(gòu)上,牛蒡子苷比牛蒡子苷元少一分子葡萄糖基。目前,制備牛蒡子苷的方法主要有醇提法、超聲輔助醇提法、微波輔助醇提法和超臨界提取法,后三種方法提取的牛蒡子苷的純度高(約40%-60%),但所需要的儀器設(shè)備價格昂貴,因此較難實現(xiàn)企業(yè)化規(guī)模生產(chǎn);而醇提法則主要用乙醇提取,試劑廉價,方法簡便,但提取的牛蒡子苷產(chǎn)品的純度低(約5%),往往含有較多的多糖、蛋白質(zhì)等化合物均需要進一步純化后才能使用。目前,涉及純化牛蒡子苷乙醇提取物粗品純化研究的較少,王衛(wèi)東等(《食品科學(xué)》,2009,20(18) :187-191)采用比吸附量大(50. 38mg/kg)、解吸率較高(88. 50%)的HPD-700型大孔吸附樹脂對微波輔助醇提法提取的純度為39. 2%的牛蒡子苷粗品進行純化,使最終純品的濃度達(dá)到63. 8%,為粗品的I. 6倍,純化效果較好。而孫瑜等(《中國實驗方劑學(xué)雜志》,2011,17(7) : 13-15)篩選出的解吸率為33. 78%的DlOl大孔吸附樹脂對純度為
5.7%的牛蒡子苷乙醇提取粗品進行純化,所得牛蒡子苷純品的濃度僅為46. 95%-60. 53%,相對較低。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足,提供一種牛蒡子苷粗品的純化方法。本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)—種牛蒡子苷粗品的純化方法,應(yīng)用D4006型大孔吸附樹脂和硅膠柱層析相結(jié)合的方法對牛蒡子醇提物粗品進行純化而得高純度的牛蒡子苷,所述的牛蒡子醇提物粗品中牛蒡子苷的含量為4. 5飛.0%。即牛蒡子醇提物粗品經(jīng)D4006型大孔吸附樹脂動態(tài)吸附-洗脫得到初級純化產(chǎn)物,再經(jīng)硅膠柱層析純化得到高純度的牛蒡子苷。其中,所述的牛蒡子醇提物粗品通過如下方法制備取牛蒡子藥材粉末,用8 12倍量石油醚脫脂后,加入7、倍量的70%乙醇,回流提取2 3次,每次f I. 5h,合并提取液。
所述的牛蒡子醇提物粗品優(yōu)選通過如下方法制備取牛蒡子藥材粉末,用10倍量石油醚脫脂后,加入8倍量的70 %乙醇,回流提取3次,每次lh,合并提取液,經(jīng)高效液相色譜法(HPLC)測定牛蒡子苷的含量為5.4% (色譜條件為Agilent ZorbaXSB_C18 (5ym,
4.6mm X 250mm)色譜柱;流動相為甲醇:水(I 1. I);測定波長280nm ;流速O. 5mL/min ;進樣星10 μ L ;柱溫為室溫)。所述的提取液經(jīng)減壓濃縮液,加20%乙醇,充分?jǐn)嚢?,超聲處?0min,使其充分溶解,O. 45 μ m濾膜過濾后用流動相(甲醇水=1 :1)定容至IOOOmL,經(jīng)HPLC測定樣品溶液中牛蒡子苷的質(zhì)量濃度為4. 90mg/mL,備用。所述的D4006型大孔吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂,外觀為乳白色不透明顆粒,粒徑范圍為O. 3 I. Omm,比表面積為400 440m2/g,孔徑為6. 5 7. 5nm,孔容為O. 73 O. 77mL/g,優(yōu)選南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的D4006型大孔吸附樹脂。D4006型新樹脂預(yù)處理方法為95%乙醇浸泡24h,裝柱后用95%乙醇洗至流出液與水混合不產(chǎn)生白色混濁為止,然后用去離子水洗盡乙醇,再用5% (V/V)HC1溶液浸泡3h,水洗,再用5% (V/V)的NaOH浸泡3h,去離子水洗至中性,備用。大孔吸附樹脂洗脫方案為,樹脂柱體積均為130mL,上樣流速控制為f 2個柱體積/小時,柱徑高比控制為1:5 1:8 ;經(jīng)水洗除去糖和蛋白質(zhì)后,再換以4BV 45°/Γ55%乙醇洗脫,收集50%醇洗液,濃縮干燥即得初級純化產(chǎn)物。大孔吸附樹脂洗脫方案優(yōu)選樹脂柱體積均為130mL (相當(dāng)于干樹脂20g),上樣流速控制為I個柱體積/小時(BV/h),柱徑高比控制為1:5 ;經(jīng)水洗除去糖和蛋白質(zhì)后,再換以4BV50%乙醇洗脫,收集50%醇洗液,濃縮干燥即得初級純化產(chǎn)物。所得牛蒡子苷初級純化產(chǎn)物以氯仿甲醇(9:1)溶解后,干法上硅膠H柱層析,等度洗脫,用薄層層析色譜法監(jiān)測流出液,收集并合并牛蒡子苷流出液,經(jīng)高效液相色譜法測定所述的牛蒡子苷流出液中牛蒡子苷的純度達(dá)81. 3%或以上。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明通過靜態(tài)、動態(tài)吸附-洗脫試驗篩選出對牛蒡子苷的比吸附量和解吸率高的D4006大孔吸附樹脂。通過優(yōu)化洗脫方案,牛蒡子苷樣品液經(jīng)D4006型大孔吸附樹脂動態(tài)吸附-洗脫過程和硅膠柱層析純化,經(jīng)高效液相色譜分析所得純品中牛蒡子苷的回收率為95. 4%,含量可達(dá)81. 3-82. 4%,經(jīng)該法純化后的牛蒡子苷純度為原來粗品(5. 4%)的15倍以上,化效果顯著高于之前的報道。因此,本發(fā)明所述的方法可在牛蒡子苷粗品的純化處理中應(yīng)用。本發(fā)明所述方法具有生產(chǎn)成本低、簡便實用、操作性強,純化效果好等優(yōu)點,適合工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明成功地解決了牛蒡子苷粗品純化工藝較落后的問題。使用本發(fā)明所得的高純度牛蒡子苷可作為原料藥應(yīng)用于各種相關(guān)疾病的藥劑中。
圖I不同流速對D-4006型大孔吸附樹脂的動態(tài)吸附曲線。
圖2D-4006大孔樹脂對牛蒡子苷的動態(tài)解析曲線。
具體實施例方式實施例I牛蒡子苷粗品的制備
稱取牛蒡子藥材粉末100g,用10倍量石油醚(即IL石油醚)脫脂后,加入8倍量的70%乙醇(即800ml70%乙醇),回流提取3次,每次lh,合并提取液,經(jīng)高效液相色譜法(HPLC)測定牛蒡子苷的含量為5.4% (色譜條件為=Agilent ZorbaXSB-C18 (5 μ m,
4.6mmX250mm)色譜柱;流動相為甲醇:水(I 1. I);測定波長280nm ;流速O. 5mL/min ;進樣量10 μ L ;柱溫為室溫。);醇提物經(jīng)減壓濃縮液,加20%乙醇,充分?jǐn)嚢瑁曁幚?0min,使其充分溶解,O. 45 μ m濾膜過濾后用流動相(甲醇水=1 :1)定容至IOOOmL,經(jīng)HPLC測定樣品溶液中牛蒡子苷的質(zhì)量濃度為4. 90mg/mL,備用。實施例2大孔吸附樹脂的篩選I)樹脂的預(yù)處理所選用的D4006、AB-8、NKA-9、NKA-II型大孔吸附樹脂購自南開大學(xué)化工廠;HZ807、HP100型大孔樹脂由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院鄭永華教授實驗室提供(各樹脂的物理性能見表I)。新樹脂的預(yù)處理方法為95%乙醇浸泡24h,裝柱后用95%乙醇洗至流出液與水混合不產(chǎn)生白色混濁為止,然后用去離子水洗盡乙醇,再用5% (V/V)HC1溶液浸泡3h,水洗,再用5% (V/V)的NaOH浸泡3h,去離子水洗至中性,備用。表I不同型號大孔吸附樹脂的物理性能
權(quán)利要求
1.一種牛蒡子苷粗品的純化方法,其特征在于應(yīng)用D4006型大孔吸附樹脂和硅膠H柱層析相結(jié)合的方法對牛蒡子醇提物粗品進行純化而得高純度的牛蒡子苷,所述的牛蒡子醇提物粗品中牛蒡子苷的含量為4. 5^6. 0%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,所述的牛蒡子醇提物粗品通過如下方法制備取牛蒡子藥材粉末,用8 12倍量石油醚脫脂后,加入7、倍量的70%乙醇,回流提取2 3次,每次f I. 5h,合并提取液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的純化方法,其特征在于,所述的牛蒡子醇提物粗品通過如下方法制備取牛蒡子藥材粉末,用10倍量石油醚脫脂后,加入8倍量的70%乙醇,回流提取3次,每次lh,合并提取液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的純化方法,其特征在于,所述的提取液經(jīng)減壓濃縮液,加20%乙醇,充分?jǐn)嚢?,超聲處?0min,使其充分溶解,用于上大孔吸附樹脂純化。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,所述的D4006型大孔吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂,粒徑范圍為O. 3 I. Omm,比表面積為400 440m2/g,孔徑為6. 5 7. 5nm,孔容為O. 73 O. 77mL/g ;所述的D4006型大孔吸附樹脂優(yōu)選南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的D4006型大孔吸附樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,大孔吸附樹脂洗脫方案為,樹脂柱體積均為130mL,上樣流速控制為f 2個柱體積/小時,柱徑高比控制為1:5 1:8 ;經(jīng)水洗除去糖和蛋白質(zhì)后,再換以4BV 459Γ55%乙醇洗脫,收集50%醇洗液,濃縮干燥即得初級純化產(chǎn)物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的純化方法,其特征在于,大孔吸附樹脂洗脫方案為,樹脂柱體積均為130mL,上樣流速控制為I個柱體積/小時,柱徑高比控制為1:5 ;經(jīng)水洗除去糖和蛋白質(zhì)后,再換以4BV 50%乙醇洗脫,收集50%醇洗液,濃縮干燥即得初級純化產(chǎn)物。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,權(quán)利要求4或5所得牛蒡子苷初級純化產(chǎn)物以氯仿甲醇=9:1溶解后,干法上硅膠H柱層析,等度洗脫,用薄層層析色譜法監(jiān)測流出液,收集并合并牛蒡子苷流出液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的純化方法,其特征在于,經(jīng)高效液相色譜法測定所述的牛蒡子苷流出液中牛蒡子苷的純度達(dá)81. 3%或以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種牛蒡子苷粗品的純化方法。具體步驟為牛蒡子醇提物粗品經(jīng)D4006型大孔吸附樹脂動態(tài)吸附-洗脫得到初級純化產(chǎn)物,再經(jīng)硅膠柱層析純化得到高純度的牛蒡子苷。本發(fā)明通過靜態(tài)、動態(tài)吸附-洗脫試驗篩選出對牛蒡子苷的比吸附量和解吸率高的D4006大孔吸附樹脂。通過優(yōu)化洗脫方案,牛蒡子苷樣品液經(jīng)D4006型大孔吸附樹脂動態(tài)吸附-洗脫過程和硅膠柱層析純化,經(jīng)高效液相色譜分析所得純品中牛蒡子苷的回收率為95.4%,含量可達(dá)81.3-82.4%,純化效果顯著高于之前的報道。本發(fā)明所述方法具有生產(chǎn)成本低、簡便實用、操作性強、純化效果好等優(yōu)點,更適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07H1/08GK102863485SQ201210392320
公開日2013年1月9日 申請日期2012年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月16日
發(fā)明者高峰, 劉澤, 張 林, 江蕓, 周光宏 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)