專利名稱：一種牛蒡子苷粗品的純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制備技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種藥物提取物的純化方法，具體涉及一種牛蒡子苷粗品的純化方法。
背景技術(shù)：
牛蒡子為菊科植物牛蒡(Arctium lappa L.)的干燥成熟的果實，原名惡實，始載于《名醫(yī)別錄》，列為中品。牛蒡子在我國各地均有分布，收載于歷版《中國藥典》，具有疏散風(fēng)熱，宣肺透疹，解毒利咽的功效。臨床上用于治療風(fēng)熱感冒，咳嗽痰多，麻疹，風(fēng)疹，咽喉腫痛，痄腮丹毒，癰腫瘡毒。牛蒡子苷(Arctiin)在牛蒡子中含量在5%以上(中國藥典，2005版)，是其發(fā)揮 藥理作用的主要生物活性前體物質(zhì)。牛蒡子苷不直接參與調(diào)控機體生理功能，而是在人或動物的腸道菌群的作用下代謝成牛蒡子苷元(Arctigenin)后，對機體發(fā)揮清熱解毒、抗病毒與抗腫瘤等作用(Nose M, et al. Planta Medica 1992，58 (6) : 520-523; Kato T, etal. Anticancer Research 1998, 18 (2A) : 1053-1057)。在化學(xué)結(jié)構(gòu)上，牛蒡子苷比牛蒡子苷元少一分子葡萄糖基。目前，制備牛蒡子苷的方法主要有醇提法、超聲輔助醇提法、微波輔助醇提法和超臨界提取法，后三種方法提取的牛蒡子苷的純度高(約40%-60%)，但所需要的儀器設(shè)備價格昂貴，因此較難實現(xiàn)企業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)；而醇提法則主要用乙醇提取，試劑廉價，方法簡便，但提取的牛蒡子苷產(chǎn)品的純度低(約5%)，往往含有較多的多糖、蛋白質(zhì)等化合物均需要進一步純化后才能使用。目前，涉及純化牛蒡子苷乙醇提取物粗品純化研究的較少，王衛(wèi)東等(《食品科學(xué)》，2009，20(18) :187-191)采用比吸附量大(50. 38mg/kg)、解吸率較高(88. 50%)的HPD-700型大孔吸附樹脂對微波輔助醇提法提取的純度為39. 2%的牛蒡子苷粗品進行純化，使最終純品的濃度達(dá)到63. 8%，為粗品的I. 6倍，純化效果較好。而孫瑜等(《中國實驗方劑學(xué)雜志》，2011，17(7) : 13-15)篩選出的解吸率為33. 78%的DlOl大孔吸附樹脂對純度為
5.7%的牛蒡子苷乙醇提取粗品進行純化，所得牛蒡子苷純品的濃度僅為46. 95%-60. 53%，相對較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種牛蒡子苷粗品的純化方法。本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)—種牛蒡子苷粗品的純化方法，應(yīng)用D4006型大孔吸附樹脂和硅膠柱層析相結(jié)合的方法對牛蒡子醇提物粗品進行純化而得高純度的牛蒡子苷，所述的牛蒡子醇提物粗品中牛蒡子苷的含量為4. 5飛.0%。即牛蒡子醇提物粗品經(jīng)D4006型大孔吸附樹脂動態(tài)吸附-洗脫得到初級純化產(chǎn)物，再經(jīng)硅膠柱層析純化得到高純度的牛蒡子苷。其中，所述的牛蒡子醇提物粗品通過如下方法制備取牛蒡子藥材粉末，用8 12倍量石油醚脫脂后，加入7、倍量的70%乙醇，回流提取2 3次，每次f I. 5h，合并提取液。
所述的牛蒡子醇提物粗品優(yōu)選通過如下方法制備取牛蒡子藥材粉末，用10倍量石油醚脫脂后，加入8倍量的70 %乙醇，回流提取3次，每次lh，合并提取液，經(jīng)高效液相色譜法(HPLC)測定牛蒡子苷的含量為5.4% (色譜條件為Agilent ZorbaXSB_C18 (5ym,
4.6mm X 250mm)色譜柱;流動相為甲醇:水(I 1. I);測定波長280nm ;流速O. 5mL/min ;進樣星10 μ L ;柱溫為室溫)。所述的提取液經(jīng)減壓濃縮液，加20%乙醇，充分?jǐn)嚢?，超聲處?0min，使其充分溶解，O. 45 μ m濾膜過濾后用流動相(甲醇水=1 :1)定容至IOOOmL,經(jīng)HPLC測定樣品溶液中牛蒡子苷的質(zhì)量濃度為4. 90mg/mL，備用。所述的D4006型大孔吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂，外觀為乳白色不透明顆粒，粒徑范圍為O. 3 I. Omm,比表面積為400 440m2/g，孔徑為6. 5 7. 5nm,孔容為O. 73 O. 77mL/g，優(yōu)選南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的D4006型大孔吸附樹脂。D4006型新樹脂預(yù)處理方法為95%乙醇浸泡24h，裝柱后用95%乙醇洗至流出液與水混合不產(chǎn)生白色混濁為止，然后用去離子水洗盡乙醇，再用5% (V/V)HC1溶液浸泡3h,水洗，再用5% (V/V)的NaOH浸泡3h，去離子水洗至中性，備用。大孔吸附樹脂洗脫方案為，樹脂柱體積均為130mL，上樣流速控制為f 2個柱體積/小時，柱徑高比控制為1:5 1:8 ;經(jīng)水洗除去糖和蛋白質(zhì)后，再換以4BV 45°/Γ55%乙醇洗脫，收集50%醇洗液，濃縮干燥即得初級純化產(chǎn)物。大孔吸附樹脂洗脫方案優(yōu)選樹脂柱體積均為130mL (相當(dāng)于干樹脂20g)，上樣流速控制為I個柱體積/小時(BV/h)，柱徑高比控制為1:5 ;經(jīng)水洗除去糖和蛋白質(zhì)后，再換以4BV50%乙醇洗脫，收集50%醇洗液，濃縮干燥即得初級純化產(chǎn)物。所得牛蒡子苷初級純化產(chǎn)物以氯仿甲醇(9:1)溶解后，干法上硅膠H柱層析，等度洗脫，用薄層層析色譜法監(jiān)測流出液，收集并合并牛蒡子苷流出液，經(jīng)高效液相色譜法測定所述的牛蒡子苷流出液中牛蒡子苷的純度達(dá)81. 3%或以上。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明通過靜態(tài)、動態(tài)吸附-洗脫試驗篩選出對牛蒡子苷的比吸附量和解吸率高的D4006大孔吸附樹脂。通過優(yōu)化洗脫方案，牛蒡子苷樣品液經(jīng)D4006型大孔吸附樹脂動態(tài)吸附-洗脫過程和硅膠柱層析純化，經(jīng)高效液相色譜分析所得純品中牛蒡子苷的回收率為95. 4%，含量可達(dá)81. 3-82. 4%，經(jīng)該法純化后的牛蒡子苷純度為原來粗品(5. 4%)的15倍以上，化效果顯著高于之前的報道。因此，本發(fā)明所述的方法可在牛蒡子苷粗品的純化處理中應(yīng)用。本發(fā)明所述方法具有生產(chǎn)成本低、簡便實用、操作性強，純化效果好等優(yōu)點，適合工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明成功地解決了牛蒡子苷粗品純化工藝較落后的問題。使用本發(fā)明所得的高純度牛蒡子苷可作為原料藥應(yīng)用于各種相關(guān)疾病的藥劑中。


圖I不同流速對D-4006型大孔吸附樹脂的動態(tài)吸附曲線。
圖2D-4006大孔樹脂對牛蒡子苷的動態(tài)解析曲線。
具體實施例方式實施例I牛蒡子苷粗品的制備
稱取牛蒡子藥材粉末100g，用10倍量石油醚(即IL石油醚)脫脂后，加入8倍量的70%乙醇(即800ml70%乙醇)，回流提取3次，每次lh，合并提取液，經(jīng)高效液相色譜法(HPLC)測定牛蒡子苷的含量為5.4% (色譜條件為=Agilent ZorbaXSB-C18 (5 μ m,
4.6mmX250mm)色譜柱；流動相為甲醇:水(I 1. I);測定波長280nm ;流速O. 5mL/min ;進樣量10 μ L ;柱溫為室溫。);醇提物經(jīng)減壓濃縮液，加20%乙醇，充分?jǐn)嚢瑁曁幚?0min，使其充分溶解，O. 45 μ m濾膜過濾后用流動相(甲醇水=1 :1)定容至IOOOmL，經(jīng)HPLC測定樣品溶液中牛蒡子苷的質(zhì)量濃度為4. 90mg/mL，備用。實施例2大孔吸附樹脂的篩選I)樹脂的預(yù)處理所選用的D4006、AB-8、NKA-9、NKA-II型大孔吸附樹脂購自南開大學(xué)化工廠；HZ807、HP100型大孔樹脂由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院鄭永華教授實驗室提供(各樹脂的物理性能見表I)。新樹脂的預(yù)處理方法為95%乙醇浸泡24h，裝柱后用95%乙醇洗至流出液與水混合不產(chǎn)生白色混濁為止，然后用去離子水洗盡乙醇，再用5% (V/V)HC1溶液浸泡3h,水洗，再用5% (V/V)的NaOH浸泡3h，去離子水洗至中性，備用。表I不同型號大孔吸附樹脂的物理性能
權(quán)利要求
1.一種牛蒡子苷粗品的純化方法，其特征在于應(yīng)用D4006型大孔吸附樹脂和硅膠H柱層析相結(jié)合的方法對牛蒡子醇提物粗品進行純化而得高純度的牛蒡子苷，所述的牛蒡子醇提物粗品中牛蒡子苷的含量為4. 5^6. 0%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法，其特征在于，所述的牛蒡子醇提物粗品通過如下方法制備取牛蒡子藥材粉末，用8 12倍量石油醚脫脂后，加入7、倍量的70%乙醇，回流提取2 3次，每次f I. 5h，合并提取液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的純化方法，其特征在于，所述的牛蒡子醇提物粗品通過如下方法制備取牛蒡子藥材粉末，用10倍量石油醚脫脂后，加入8倍量的70%乙醇，回流提取3次，每次lh，合并提取液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的純化方法，其特征在于，所述的提取液經(jīng)減壓濃縮液，加20%乙醇，充分?jǐn)嚢?，超聲處?0min，使其充分溶解，用于上大孔吸附樹脂純化。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法，其特征在于，所述的D4006型大孔吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂，粒徑范圍為O. 3 I. Omm,比表面積為400 440m2/g，孔徑為6. 5 7. 5nm,孔容為O. 73 O. 77mL/g ;所述的D4006型大孔吸附樹脂優(yōu)選南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的D4006型大孔吸附樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法，其特征在于，大孔吸附樹脂洗脫方案為，樹脂柱體積均為130mL，上樣流速控制為f 2個柱體積/小時，柱徑高比控制為1:5 1:8 ;經(jīng)水洗除去糖和蛋白質(zhì)后，再換以4BV 459Γ55%乙醇洗脫，收集50%醇洗液，濃縮干燥即得初級純化產(chǎn)物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的純化方法，其特征在于，大孔吸附樹脂洗脫方案為，樹脂柱體積均為130mL，上樣流速控制為I個柱體積/小時，柱徑高比控制為1:5 ;經(jīng)水洗除去糖和蛋白質(zhì)后，再換以4BV 50%乙醇洗脫，收集50%醇洗液，濃縮干燥即得初級純化產(chǎn)物。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法，其特征在于，權(quán)利要求4或5所得牛蒡子苷初級純化產(chǎn)物以氯仿甲醇=9:1溶解后，干法上硅膠H柱層析，等度洗脫，用薄層層析色譜法監(jiān)測流出液，收集并合并牛蒡子苷流出液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的純化方法，其特征在于，經(jīng)高效液相色譜法測定所述的牛蒡子苷流出液中牛蒡子苷的純度達(dá)81. 3%或以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種牛蒡子苷粗品的純化方法。具體步驟為牛蒡子醇提物粗品經(jīng)D4006型大孔吸附樹脂動態(tài)吸附-洗脫得到初級純化產(chǎn)物，再經(jīng)硅膠柱層析純化得到高純度的牛蒡子苷。本發(fā)明通過靜態(tài)、動態(tài)吸附-洗脫試驗篩選出對牛蒡子苷的比吸附量和解吸率高的D4006大孔吸附樹脂。通過優(yōu)化洗脫方案，牛蒡子苷樣品液經(jīng)D4006型大孔吸附樹脂動態(tài)吸附-洗脫過程和硅膠柱層析純化，經(jīng)高效液相色譜分析所得純品中牛蒡子苷的回收率為95.4%，含量可達(dá)81.3-82.4%，純化效果顯著高于之前的報道。本發(fā)明所述方法具有生產(chǎn)成本低、簡便實用、操作性強、純化效果好等優(yōu)點，更適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07H1/08GK102863485SQ201210392320
公開日2013年1月9日 申請日期2012年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月16日
發(fā)明者高峰, 劉澤, 張 林, 江蕓, 周光宏 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)