專利名稱：新的抗原結(jié)合蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及與人MAGE-A3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白如抗體、編碼這種抗原結(jié)合蛋白的多核苷酸、所述抗原結(jié)合蛋白的診斷應(yīng)用和制備方法。背景
“癌癥-睪丸”抗原在幾 種類型的腫瘤中表達(dá)，但它們?cè)谡＝M織中的表達(dá)限于睪丸，睪丸不可以將抗原遞呈給T細(xì)胞，因?yàn)樗鼈內(nèi)狈HC(主要組織相容性復(fù)合體)I類分子的表達(dá)。因此，癌癥-睪丸抗原被認(rèn)為是腫瘤特異性抗原，并且是腫瘤免疫治療的潛在目標(biāo)。已知人MAGE-A3經(jīng)常在各種人腫瘤中表達(dá)，包括黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、膀胱癌、頭頸癌、鱗狀食道癌和肝癌。MAGE-A3屬于MAGE-A亞家族，其包括11個(gè)已知成員(MAGEA 1_6和8_12)。盡管已經(jīng)報(bào)道了其他“MAGE A”(黑色素瘤抗原家族A)基因(如MAGE A7、A13_15)，這些基因的表達(dá)模式提示它們是假基因(參見，例如，Chomez等，Cancer Research, 61:5544 (2001))。11個(gè)MAGE-A基因具有位于最后的外顯子中的它們的整個(gè)編碼序列。與MAGE-A3基因具有最高的序列相似性的MAGE-A基因是MAGE-A6，是99 %相同的，并且這兩個(gè)基因之間的差異位于最后的外顯子內(nèi)。與MAGE-A3接下來最密切相關(guān)的兩個(gè)基因是MAGE-A2和MAGE-A12。在蛋白水平上，MAGE-A6與MAGE-A3具有95%的序列同一性，MAGE-A2與MAGE-A3具有84%的序列同一性，MAGE-A12與MAGE-A3具有85%的序列同一性。(

圖1)。MAGE-N是MAGE家族的新成員，是從由人肝細(xì)胞癌細(xì)胞系分離的mRNA鑒定的(Wu等，Chin.J.Cell Mol.1mmunol.18:270-4 (2002))。已經(jīng)報(bào)道 MAGE-N 與肝細(xì)胞癌密切相關(guān)(Dong 等，Cancer Biol.Ther.3(9): 891-8 (2004)。在預(yù)測(cè)蛋白水平，MAGE-N 與MAGE-A3和MAGE-A6具有〈85%的序列相似性。MAGE-N可能是MAGE-A3、A12和Al的組合-其中MAGE-N的N-末端區(qū)域(氨基酸1-129)與MAGE-A3的N-末端區(qū)域具有99%同一性，MAGE-N的中央?yún)^(qū)域與MAGE-A12的中央?yún)^(qū)域相比差異一個(gè)氨基酸，MAGE-N的C-末端區(qū)域與MAGE-Al的C-末端區(qū)域是相同的。發(fā)明簡(jiǎn)述
本發(fā)明提供與MAGE-A3和MAGE-A6特異性結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白。本發(fā)明提供與MAGE-A3和MAGE-A6特異性結(jié)合但不與MAGE-A2或MAGE-A12結(jié)合或特異性結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白。本發(fā)明提供與MAGE-A3特異性結(jié)合并包含選自SEQ ID NO: 52、58和64的CDRH3或其變體的抗原結(jié)合蛋白。本發(fā)明提供與MAGE-A3特異性結(jié)合并包含選自SEQ ID N0:55、61和67的⑶RL3或其變體的抗原結(jié)合蛋白。本發(fā)明還提供與MAGE-A3特異性結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，其包含:
⑴SEQ ID NO:47的重鏈可變區(qū)和/或SEQ ID N0:49的輕鏈可變區(qū)；或與SEQ IDNO: 47具有75%或更高序列同一性的變體重鏈可變區(qū)；或與SEQ ID NO: 49具有75%或更高序列同一性的輕鏈可變區(qū)；
(ii)SEQ ID NO:39的重鏈可變區(qū)和/或SEQ ID NO:41的輕鏈可變區(qū)；或與SEQ IDNO: 39具有75%或更高序列同一性的變體重鏈可變區(qū)；或與SEQ ID NO: 41具有75%或更高序列同一性的輕鏈可變區(qū)；或
(iii)SEQ ID NO: 43的重鏈可變區(qū)；和/或SEQ ID NO: 45的輕鏈可變區(qū)；或與SEQ IDNO: 43具有75%或更高序列同一性的變體重鏈可變區(qū)；或與SEQ ID NO: 45具有75%或更高序列同一性的輕鏈可變區(qū)。本發(fā)明還提供編 碼本文所定義的抗原結(jié)合蛋白的核酸分子。本發(fā)明還提供包含本文所定義的核酸分子的表達(dá)載體。本發(fā)明還提供包含本文所定義的表達(dá)載體的重組宿主細(xì)胞。本發(fā)明還提供用于生產(chǎn)本文所定義的抗原結(jié)合蛋白的方法，所述方法包括培養(yǎng)如上所定義的宿主細(xì)胞和回收抗原結(jié)合蛋白的步驟。本發(fā)明還提供通過使用MAGE-A3的分歧肽(divergent peptides)免疫而產(chǎn)生如本文所述的抗原結(jié)合蛋白的方法。本發(fā)明還提供使用如本文所述的抗原結(jié)合蛋白在人福爾馬林固定的石蠟包埋組織中檢測(cè)MAGE-A3和/或MAGE-A6的方法。本發(fā)明還提供使用如本文所述的抗原結(jié)合蛋白在人福爾馬林固定的石蠟包埋組織中檢測(cè)MAGE-N的方法。附圖簡(jiǎn)述
圖1:AMAGE-A1、A2、A3、A4、A5、A6、A8、A9、A10、A11 和 A12 的序列比較。圖2:對(duì)應(yīng)于MAGE-A3 (SEQ ID NO: 3)的氨基酸66-91的MAGE-A3片段的比較。肽MA3#3 (SEQ ID NO:37)中含有的氨基酸標(biāo)有下劃線。圖3:對(duì)應(yīng)于MAGE-A3 (SEQ ID NO: 3)的氨基酸137-180的MAGE-A3片段的比較。肽MA3#1 (SEQ ID NO: 35)和MA3#2 (SEQ ID NO: 36)中含有的氨基酸標(biāo)有下劃線。圖4A:圖示在用三種與KLH綴合的MAGE-A3肽的混合物免疫的小鼠的血清中相對(duì)抗-MAGE-A3抗體滴度(方案IMM-134)。在ELISA中對(duì)全長(zhǎng)重組MAGE-A3蛋白(血清稀釋度為 1:1000、1:5000、1:10，000、1:50，000、1:100，000、1:200，000 和 1:500, 000)檢測(cè)方案中包括的四只小鼠中每一只的免疫前血清(Pre)和血清稀釋度。以如免疫前(Pre)血清上的順序?qū)τ谛∈?、2、3和4給出每個(gè)稀釋度的結(jié)果。圖4B:圖示在用全長(zhǎng)重組MAGE-A3蛋白免疫的小鼠的血清中相對(duì)抗-MAGE-A3抗體滴度(方案IMM-135)。在ELISA中對(duì)全長(zhǎng)重組MAGE-A3蛋白(血清稀釋度為1:1000、1:5000、1:10，000、1:50，000、1:100，000、1:200，000 和 1:500，000)檢測(cè)方案中包括的四只小鼠中每一只的免疫前血清(Pre)和血清稀釋度。以如免疫前(Pre)血清上的順序?qū)τ谛∈?、2、3和4給出每個(gè)稀釋度的結(jié)果。圖5:表示免疫小鼠的血清的反應(yīng)性和特異性。在ELISA中對(duì)全長(zhǎng)重組MAGE-A3、A2和A12以及對(duì)三種與KLH綴合的MAGE-A3肽測(cè)試IMM-134的小鼠#4和IMM-135小鼠#1的血清(1:1000稀釋)。對(duì)于每份測(cè)試樣品，從左到右給出下述結(jié)果:MAGE-A3、MAGE-A2、MAGE-A12、肽 MA3#1、肽 MA3#2 和肽 MA3#3。圖6:顯示與重組MAGE-A3反應(yīng)的克隆上清液的特異性分析。MAb IBl顯示在6A中，16G7和23D2顯示在圖6B中。對(duì)重組MAGE-A3, MAGE-A2和MAGE-A12蛋白和對(duì)三種與KLH綴合的MAGE-A3肽中每一種測(cè)試克隆。對(duì)于測(cè)試的每份上清液樣品，從左到右給出下述結(jié)果:MAGE-A3、MAGE-A2、MAGE-A12、肽 MA3#1、肽 MA3#2 和肽 MA3#3?！癗eg”表示孔中沒有抗原的陰性對(duì)照。垂直軸是通過ELISA測(cè)量的光密度，代表克隆的分泌能力。圖7:圖示在亞克隆和使雜交瘤適應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)后獲得的4種雜交瘤上清液的反應(yīng)性的ELISA分析的結(jié)果。對(duì)重組MAGE-A3，MAGE-A2和MAGE-A12蛋白和對(duì)三種與KLH綴合的MAGE-A3肽中每種測(cè)試每種雜交瘤上清液。使用上清液57B作為陽性對(duì)照，單獨(dú)的山羊抗小鼠HRP(二級(jí)抗體)作為陰性對(duì)照。對(duì)于測(cè)試的每份上清液樣品，從左到右給出下述結(jié)果:肽 MA3#1、肽 MA3#2、肽 MA3#3、MAGE-A3、MAGE-A2 和 MAGE-A12。圖8 =ELISA分析結(jié)果的圖表,顯示了生物素化的mAb 23D2與0.1 μδ/孔的重組MAGE-A3蛋白的反應(yīng)性。生物素化mAb的稀釋曲線表明，0.032 μ g/δθμ 的抗體稀釋物提供了在未飽和情況下的強(qiáng)信號(hào)。圖9:顯示生 物素化的mAb 23D2和漸增量的未標(biāo)記的mAbs 1B1、16G7、mAb23D2(陽性對(duì)照)和M75(陰性對(duì)照)之間進(jìn)行的競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定的結(jié)果。對(duì)于每個(gè)濃度的未標(biāo)記的mAb (水平軸)，從左到右給出下述結(jié)果:23D2、16G7、1B1和M75。圖10:顯示使用檢測(cè)MAGE-A3/A6的mAb 23D2、檢測(cè)MAGE-A4的mAb 57b和檢測(cè)MAGE-A9的mAb 14A11的腫瘤樣品的IHC分析的表格。RT-PCR分析的結(jié)果顯示為-、+、++、+++o IHC 染色的結(jié)果顯不為 _、+、++、+++、++++,分別表明 O % > 1~24% >25~49% >50-74%和75-100%的細(xì)胞被染色。IHC強(qiáng)度的結(jié)果顯示為+(弱)、++(中度)和+++(強(qiáng))；在一些組織樣品中觀察到兩種染色強(qiáng)度的組合。N.D.表明無法測(cè)定。RT-PCR和IHC結(jié)果之間的差異加框表不。圖11顯示抗-MAGE-A3單克隆抗體1B1、16G7和23D2的可變輕和重鏈的核苷酸序列。圖12顯示從抗-MAGE-A3單克隆抗體1B1、16G7和23D2的可變輕和重鏈的核苷酸序列獲得的氨基酸序列。CDR標(biāo)有下劃線；構(gòu)架區(qū)沒有標(biāo)下劃線。發(fā)明詳述
GlaxoSmithKline Biologicals S.A.正在開發(fā)用于治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤和NSCLC的MAGE-A3抗原特異性癌癥免疫治療劑(ASCI)。該免疫治療劑組合(a)融合蛋白，其包含MAGE-A3的片段，與(b)佐劑系統(tǒng)，其是選擇用于增加抗腫瘤免疫反應(yīng)的免疫刺激化合物的特定組合。(Brichard等.，Vaccine 25(增刊2):B61 (2007))。在登記進(jìn)目前的臨床試驗(yàn)中之前，篩選患者以確定他們是否具有表達(dá)MAGE-A3的腫瘤。目前，通過實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)進(jìn)行腫瘤中MAGE-A3表達(dá)的分析。使用福爾馬林固定和石蠟包埋(FFPE)腫瘤組織(存檔組織塊)通過免疫組織化學(xué)(IHC)檢測(cè)需要對(duì)MAGE-A3特異性并且能夠檢測(cè)FFPE組織中抗原的可靠的單克隆抗體(mAb)。由于MAGE-A蛋白的高序列相似性，針對(duì)MAGE-A3的抗體可能與其他MAGE-A蛋白交叉反應(yīng)。例如，Kocher等通過用重組MAGE-A3蛋白免疫小鼠產(chǎn)生了抗-MAGE-A3單克隆抗體(Kocher等Cancer Res, 55:2236, 1995.)。后來顯示產(chǎn)生的 mAb (稱為 57B)與 MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6 和-A12 交叉反應(yīng)(Rimoldi等.1nt J Cancer, 86:749, 2000)。57B mAb與福爾馬林固定和石蠟包埋組織的反應(yīng)性的進(jìn)一步分析報(bào)道，它主要檢測(cè)MAGE-A4，因?yàn)樗c表達(dá)其他MAGE-A抗原的組織無反應(yīng)性，不論他們的表達(dá)水平(Landry 等 Int J Cancer, 86:835, 2000)。
抗-MAGE-A3mAb 6D10 (Abnova, GeneTex 和 Novus Biologicals)的特異性分析顯示，該mAb與MAGE-A2和MAGE-A6交叉反應(yīng)(本申請(qǐng)人的未發(fā)表數(shù)據(jù))。此外，在福爾馬林固定和石蠟包埋組織上的IHC(免疫組織化學(xué))分析中使用該mAb是不成功的(本申請(qǐng)人的未發(fā)表數(shù)據(jù))。已知另一種針對(duì)MAGE-A3/A6的mAb為mAb M3H67 (LICR New York,USA;參見例如 Sharma 等，Clinical Cancer Research 12:5442 (2006) ; Chitale 等，Modern Pathology 18:119 (2005))。已經(jīng)將該抗體用于表征在福爾馬林固定和石臘包埋組織中MAGE-A3/A6的表達(dá)，但其特異性的分析還沒有公布(參見，例如，Chitale等.ModPathol, 18: 119，2005; Perez 等.Int J Cancer, 123: 1551，2008; Oba-Shinjo等.Cancer Immun, 8: 7, 2008; Nelson 等.Cancer Immun, 7:1, 2007 ; Luftl 等.BrJ Dermatol, 151: 1213, 2004; Lohmann,等.Melanoma Res, 13: 595, 2003;和Dhodapkar,等.Cancer Immun, 3: 9, 2003)。仍然需要mAb，其在 特異性識(shí)別高度相似的MAGE-A3和MAGE-A6蛋白的同時(shí)，不與密切相關(guān)的MAGE-A2或A12蛋白或任何其他已知的MAGE-A蛋白交叉反應(yīng)。此外，還需要能夠在FFPE組織上可靠地檢測(cè)MAGE-A3和/或A6的這種抗體。本發(fā)明提供與MAGE-A3和MAGE-A6特異性結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白?？乖Y(jié)合蛋白可為抗體，例如單克隆抗體(mAb)。除非另有解釋，本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有本發(fā)明所屬的領(lǐng)域中普通技術(shù)人員通常理解的含義。分子生物學(xué)中常用術(shù)語的定義可見Benjamin Lewin,Genes V, Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew 等.(編輯),The Encyclopedia of Molecular Biology, Blackwell Science Ltd.出版,1994 (ISBN 0-632-02182-9);和 Robert A.Meyers (編輯)，Molecular Biology andBiotechnology:a Comprehensive Desk Reference, VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN1-56081-569-8)。單數(shù)術(shù)語“一(a)”、“一(an)”和“該(the) ”包括復(fù)數(shù)對(duì)象，除非上下文清楚地另有指明。類似地，詞語“或”意在包括“和”，除非上下文清楚地另有指明。術(shù)語“多個(gè)”是指兩個(gè)或更多個(gè)。應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步理解的是，對(duì)于核酸或多肽給出的所有分子量或分子質(zhì)量值是近似的，提供用于說明。氨基酸在本文中縮寫如下:丙氨酸(Ala或A);精氨酸(Arg或R);天冬酰胺(Asn或N);天冬氨酸(Asp或D);半胱氨酸(Cys或C);谷氨酸(Glu或E );谷氨酰胺(Gln或Q);甘氨酸(Gly或G);組氨酸(His或H);異亮氨酸(lie或I);亮氨酸(Leu或L);賴氨酸(Lys或K)；甲硫氨酸(Met或M);苯丙氨酸(Phe或F);脯氨酸(Pro或P);絲氨酸(Ser或S);蘇氨酸(Thr或T);色氨酸(Trp或W);酪氨酸(Tyr或Y)和纈氨酸(Val或V)。本文所用術(shù)語"抗原結(jié)合蛋白"指能夠與MAGE-A3特異性結(jié)合的抗體、抗體片段和其他蛋白構(gòu)建體，例如結(jié)構(gòu)域或區(qū)域。本文所用術(shù)語"抗體"以其最廣泛的意義指具有免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域的分子，并包括:單克隆抗體、重組抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、雙特異性抗體和異源綴合物抗體；單可變結(jié)構(gòu)域或區(qū)域、結(jié)構(gòu)域抗體、抗原結(jié)合片段、免疫學(xué)有效片段、單鏈Fv、雙抗體、TANDABS 等(對(duì)于可替換的〃抗體〃形式的綜述,參見Holliger和Hudson, NatureBiotechnology, 2005，第 23 卷，第 9 期，1126-1136)。
本文所用修飾語“單克隆的”是指從抗體的基本上同質(zhì)群體獲得的抗體，不表明該抗體是通過任何具體方法產(chǎn)生的。例如，可以通過雜交瘤方法(Kohler和Milstein,yVaiure256:495 (1975))，或通過重組DNA方法制備，或者從噬菌體文庫(kù)分離本發(fā)明的單克隆抗體(mAbs)ο根據(jù)由其分離它們的雜交瘤命名本發(fā)明的單克隆抗體，例如，mAb IBl是從雜交瘤細(xì)胞IBl獲得的。短語〃單可 變區(qū)〃指抗原結(jié)合蛋白可變區(qū)(例如VH、VHH、')，其可特異性結(jié)合抗原或結(jié)合獨(dú)立于不同的可變區(qū)的表位?？烧J(rèn)為〃結(jié)構(gòu)域抗體〃或"dAb"與〃單可變結(jié)構(gòu)域〃相同，其能夠結(jié)合抗原。單可變結(jié)構(gòu)域可為人抗體可變結(jié)構(gòu)域，但還包括來自其他物種的單抗體可變結(jié)構(gòu)域，例如嚙齒動(dòng)物(例如如WO 00/29004中所公開的)、絞口鯊(nurse shark)和駱駝科{Camelid) VhhdAb。駱騎科Vhh為源自包括駱騎、美洲騎(llama)、羊騎(alpaca)、單峰駱騎(dromedary)和原騎(guanaco)在內(nèi)的物種的免疫球蛋白單可變結(jié)構(gòu)域多肽,所述物種產(chǎn)生天然缺乏輕鏈的重鏈抗體。這種Vhh結(jié)構(gòu)域可根據(jù)本領(lǐng)域可獲得的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)人源化，認(rèn)為這種結(jié)構(gòu)域?yàn)椤ńY(jié)構(gòu)域抗體"。本文所用Vh包括駱駝科Vhh結(jié)構(gòu)域。 本文所用術(shù)語"結(jié)構(gòu)域"指具有獨(dú)立于蛋白的其余部分的四級(jí)結(jié)構(gòu)的折疊蛋白結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)域通常負(fù)責(zé)蛋白的不相關(guān)的功能性質(zhì)，在很多情況下可將其加入、移走或轉(zhuǎn)移到其他蛋白，而不丟失蛋白和/或結(jié)構(gòu)域的剩余部分的功能。"單可變結(jié)構(gòu)域"(或“單可變區(qū)”)為包含抗體可變結(jié)構(gòu)域特征序列的折疊多肽結(jié)構(gòu)域。因此，其包括完全抗體可變結(jié)構(gòu)域和經(jīng)修飾的可變結(jié)構(gòu)域，例如，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)被以下序列取代:所述序列不是抗體可變結(jié)構(gòu)域的特征，或已經(jīng)被截短或包含N-或C-末端延伸的抗體可變結(jié)構(gòu)域，以及保留至少全長(zhǎng)結(jié)構(gòu)域的結(jié)合活性和特異性的可變結(jié)構(gòu)域的折疊片段。結(jié)構(gòu)域可結(jié)合抗原或結(jié)合獨(dú)立于不同的可變區(qū)或結(jié)構(gòu)域的表位。本文所用“ MAGE-A ”是指從人MAGE-A獲得的或與人MAGE-A具有相同的序列的MAGE-A，除非另有說明。因此，本文所用MAGE-A3是指具有人MAGE-A3序列的多肽，除非另有說明。本發(fā)明人使用下列方案來產(chǎn)生單克隆抗體(在表I中顯示)。用分歧MAGE-A3肽的組合或用全長(zhǎng)重組MAGE-A3免疫小鼠。使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)測(cè)試來自免疫小鼠的血清針對(duì)全長(zhǎng)重組MAGE-A3的反應(yīng)性，以選擇用于在雜交瘤產(chǎn)生的動(dòng)物。針對(duì)MAGE-A3篩選由獲得的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，然后測(cè)試選擇的mAb針對(duì)MAGE-A3、MAGE-A12和MAGE-A2 ;和針對(duì)表達(dá)MAGE-A3的組織的反應(yīng)性?？梢允褂迷摲桨敢援a(chǎn)生與MAGE-A3和MAGE-A6特異性結(jié)合但不與MAGE-A2和/或MAGE-A12交叉反應(yīng)的額外的mAb。可以任選地測(cè)試產(chǎn)生的mAb針對(duì)免疫中使用的肽的反應(yīng)性。表I
權(quán)利要求
1.抗原結(jié)合蛋白，其與MAGE-A3和MAGE-A6特異性結(jié)合，但其不與MAGE-A2或MAGE-A12特異性結(jié)合。
2.抗原結(jié)合蛋白，其與MAGE-A3和MAGE-A6特異性結(jié)合，但其不與MAGE-A亞家族的任何其他成員特異性結(jié)合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗原結(jié)合蛋白，其包含具有選自SEQID NO:52, SEQ IDNO: 58、SEQ ID NO:64的氨基酸序列的⑶RH3。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗原結(jié)合蛋白，其進(jìn)一步包含選自如下的一個(gè)或多個(gè)或所有CDR:CDRH1 (SEQ ID NO:50)、CDRHl (SEQ ID NO:56)、CDRHl (SEQ ID NO:62)、CDRH2 (SEQID NO:51)、CDRH2 (SEQ ID NO:57),CDRHl (SEQ ID NO:63),CDRLl (SEQ ID NO:53),CDRLl(SEQ ID NO:59)、CDRLl (SEQ ID NO:65)、CDRL2 (SEQ ID NO:54)、CDRL2 (SEQ ID NO:60)、CDRL2 (SEQ ID NO:66)、CDRL3 (SEQ ID NO:55)、CDRL3 (SEQ ID NO:61)、CDRL3 (SEQ IDNO:67)。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合蛋白，其中CDRHl是SEQID NO:50,CDRH2 是 SEQ ID NO: 51，并且 CDRH3 是 SEQ ID NO: 52。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合蛋白，其中CDRHl是SEQID NO:56,CDRH2 是 SEQ ID NO: 57，并且 CDRH3 是 SEQ ID NO: 58。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合蛋白，其中CDRHl是SEQID NO:62,CDRH2 是 SEQ ID NO:63，并且 CDRH3 是 SEQ ID NO:64。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合蛋白，其中CDRLl是SEQID NO:53,CDRL2 是 SEQ ID NO: 54，并且 CDRL3 是 SEQ ID NO: 55。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一`項(xiàng)所述的抗原結(jié)合蛋白，其中CDRLl是SEQID NO:59,CDRL2 是 SEQ ID NO:60，并且 CDRL3 是 SEQ ID NO:61。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合蛋白，其中⑶RLl是SEQID NO:65,CDRL2 是 SEQ ID NO:66，并且 CDRL3 是 SEQ ID NO:67。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合蛋白，其進(jìn)一步包含下列中的至少一個(gè): (a)與SEQID NO:39的構(gòu)架區(qū)具有75%或更高的序列同一性的重鏈可變區(qū)受體抗體構(gòu)架； (b)與SEQID NO:43的構(gòu)架區(qū)具有75%或更高的序列同一性的重鏈可變區(qū)受體抗體構(gòu)架； (c)與SEQID NO:47的構(gòu)架區(qū)具有75%或更高的序列同一性的重鏈可變區(qū)受體抗體構(gòu)架； (d)與如SEQID N0:41中所示的構(gòu)架區(qū)具有75%或更高的序列同一性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域受體抗體構(gòu)架； (e)與如SEQID NO:45中所示的構(gòu)架區(qū)具有75%或更高的序列同一性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域受體抗體構(gòu)架；或 (e)與如SEQ ID N0:49中所示的構(gòu)架區(qū)具有75%或更高的序列同一性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域受體抗體構(gòu)架。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗原結(jié)合蛋白，其包含:(i)SEQ ID NO: 47的重鏈可變區(qū)或與SEQ ID NO: 47具有75%或更高的序列同一性的變體重鏈可變區(qū)，和SEQ ID NO: 49的輕 鏈可變區(qū)或與SEQ ID NO:49具有75%或更高的序列同一性的輕鏈可變區(qū)； (ii)SEQ ID NO: 39的重鏈可變區(qū)或與SEQ ID NO: 39具有75%或更高的序列同一性的變體重鏈可變區(qū)，和SEQ ID NO: 41的輕鏈可變區(qū)或與SEQ ID NO:41具有75%或更高的序列同一性的輕鏈可變區(qū)；或 (iii)SEQ ID NO: 43的重鏈可變區(qū)或與SEQ ID NO: 43具有75%或更高的序列同一性的變體重鏈可變區(qū)；和SEQ ID NO: 45的輕鏈可變區(qū)或與SEQ ID NO:45具有75%或更高的序列同一性的輕鏈可變區(qū)。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗原結(jié)合蛋白，包含: (a)SEQ ID NO: 52 (GGNNGFAY)的CDRH3或具有在SEQ ID NO: 52的氨基酸殘基2處的Trp取代Gly的變體； (b)SEQ ID NO:50 (SDYVffN)的CDRHl或具有在SEQ ID NO:50的氨基酸殘基4處的Ala取代Val的變體；(c)SEQ ID NO: 51 (YIGHSGRTSY NPSLKS)的 CDRH2，或包含在 SEQ ID NO: 51 的第 2 個(gè)氨基酸殘基處的Met或Val取代He、在SEQ ID NO: 51的第4個(gè)氨基酸殘基處的Tyr取代His或在SEQ ID NO: 51的第10個(gè)氨基酸殘基處的Leu取代Tyr的變體；(d)SEQ ID NO: 53 (KSSQSLLNSG NQKNYLT)的 CDRLl，或包含在 SEQ ID NO: 53 的第 5個(gè)氨基酸殘基處的Asn、Asp、Thr或Glu取代Ser、在SEQ ID NO: 53的第7個(gè)氨基酸殘基處StJ Asp>Tyr>Val> IIe>Ser>Asn Phe、His、Gly 或 Thr 取代 Leu、在 SEQ ID NO:53 的第 14 個(gè)氨基酸殘基處的Ser、Thr、Lys或Gly取代Asn ;在SEQ ID NO: 53的第15個(gè)氨基酸殘基處的Phe、Asn、Ala、His、Ser或Arg取代Tyr ;或在SEQ ID NO: 53的第16個(gè)氨基酸殘基處的Met、Val、Ile或Phe取代Leu的變體；(e)SEQ ID NO:54 (WTSTRDS)的 CDRL2 ;和(f)SEQ ID NO: 55 (QNDYSYPPT)的 CDRL3，或包含在 SEQ ID NO: 55 的氨基酸殘基 I 處的Ser、Gly、Phe或Leu取代Gin、在SEQ ID NO: 55的氨基酸殘基2處的Gln或His取代Asn ;在 SEQ ID NO: 55 的氛基酸殘基 3 處的 Asn、Phe、Gly、Ser、Arg、His、Thr、Tyr 或 Val 取代 Asp、在 SEQ ID NO: 55 的氛基酸殘基 4 處的 Asn、Trp Thr、Ser、Arg、Gln、His、Ala 或 Asp取代Tyr;或在SEQ ID NO: 55的氨基酸殘基5處的Glu、Asn、Gly、His、Thr、Arg、Ala取代Ser、在 SEQ ID NO: 55 的氛基酸殘基 6 處的 Asp、Thr> Val、Leu、His、Asn、lie、Trp> Pro 或Ser取代Tyr ;或在SEQ ID NO: 55的氨基酸殘 基8處的Leu、Tyr、Arg、Ile、Trp或Phe取代Pro的變體； 所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合MAGE A3。
14.權(quán)利要求13的抗原結(jié)合蛋白，其包含:(a)SEQ ID NO:52 的 CDRH3 ；(b)SEQ ID NO:50 的 CDRHl ；(c)SEQ ID NO:51 的 CDRH2 ；(d)SEQ ID NO:53 的 CDRLl ；(e)SEQ ID NO:54 的 CDRL2 ；(f)SEQ ID NO:55 的 CDRL3 ； (g)重鏈構(gòu)架，如SEQID NO:39中所述，包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第20個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第22個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第24個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第26個(gè)氨基酸殘基處的Gly ;第29個(gè)氨基酸殘基處的Ile ;第36個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第47個(gè)氨基酸殘基處的Trp或Tyr ;第48個(gè)氨基酸殘基處的Met ;第69個(gè)氨基酸殘基處的Ile或Met ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Arg、Lys或Val ;第76個(gè)氨基酸殘基處的Asn ;第78個(gè)氨基酸殘基處的Phe ;第80個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;或第92個(gè)氨基酸殘基處的Cys，其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào)；和 (h)輕鏈構(gòu)架，如SEQID NO:41中所述，包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Ile、Leu或Val ；第3個(gè)氨基酸殘基處的Val、Gin、Leu或Glu ;第4個(gè)氨基酸殘基處的Met或Leu ;第23個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第35個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Tyr或Phe ;第88個(gè)氨基酸殘基處的Cys，或第98個(gè)氨基酸殘基處的Phe，其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào); 并且其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合MAGE A3。
15.權(quán)利要求14的抗原結(jié)合蛋白，其中 (a)所述重鏈構(gòu)架包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Val;第20個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第22個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第24個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第26個(gè)氨基酸殘基處的Gly ;第29個(gè)氨基酸殘基處的Ile ;第36個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第47個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第48個(gè)氨基酸殘基處的Met ;第69個(gè)氨基酸殘基處的Ile ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Arg ’第76個(gè)氨基酸殘基處的Asn ;第78個(gè)氨基酸殘基處的Phe ;第80個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;和第92個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào)；和 (b)所述輕鏈構(gòu)架包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Ile;第3個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第4個(gè)氨基酸殘基處的Met ;第23個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第35個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Phe ;第88個(gè)氨基酸殘基處的Cys，和第98個(gè)氨基酸殘基處的Phe，其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào)。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗原結(jié)合蛋白，包含: (a)SEQ ID NO:58 (QDYFDY)的CDRH3或具有在SEQ ID NO:58的氨基酸殘基6處的His、Val、lie、Ser> Asp 或 Gly 取代 Tyr 的變體； (b)SEQ ID NO: 56 (TNAMS)的CDRHl，或具有在SEQ ID NO: 56的氨基酸殘基2處的lie、His、Tyr、Phe、Thr、Cys、Glue 或 Asp 取代 Asn ;在 SEQ ID NO: 56 的氨基酸殘基 3 處的Tyr、Trp、Gly、Thr、Leu 或 Val 取代 Ala ;在 SEQ ID NO: 56 的氨基酸殘基 4 處的 Ile、Val 或Trp取代Met ;或在SEQ ID NO: 56的氨基酸殘基5處的Hi S、Glu、Asn、Gin、Tyr或Thr取代Ser的變體；(c)SEQ ID NO: 57 (TITSGGGSTY YPVSVKG)的 CDRH2，或包含在 SEQ ID NO: 57 的第 I個(gè)氨基酸殘基處的Gly、Tyr、Phe、Ile、Glu或Val取代Thr;在SEQ ID NO: 57的第2個(gè)氨基酸殘基處的Leu、Val、Thr、Ser或Asn取代lie ^SEQ ID NO:57的第3個(gè)氨基酸殘基處的Ser、Phe、Trp或His取代Thr ;在SEQ ID NO: 57的第4個(gè)氨基酸殘基處的Asp、Ser或Asn取代Gly ;在SEQ ID NO: 57的第5個(gè)氨基酸殘基處的Ser取代Gly ;在SEQ ID NO: 57的第8個(gè)氨基酸殘基處的Tyr、Thr、Asn、Asp或Arg取代Ser ;或在SEQ ID NO: 57的第10個(gè)氨基酸殘基處的Gly、His、Phe、Asp或Asn取代Tyr的變體；(d)SEQ ID NO: 59 (RSSTGAVTST NYAN)的 CDRLl，或包含在 SEQ ID NO: 59 的第 6 個(gè)氨基酸殘基處Thr取代Ala;或在SEQ ID NO: 59的第12個(gè)氨基酸殘基處His取代Tyr的變體；(e)SEQ ID NO:60 (GTNNRAP)的 CDRL2 ;和(f)SEQ ID NO: 61 (ALffYSNHWV)的 CDRL3，或包含在 SEQ ID NO: 61 的氨基酸殘基 5 處Asn取代Ser ;或在SEQ ID NO:61的氨基酸殘基7處Leu取代His的變體； 所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合MAGE A3。
17.權(quán)利要求16的抗原結(jié)合蛋白，其包含:(a)SEQ ID NO:58 的 CDRH3 ；(b)SEQ ID NO:56 的 CDRHl ；(c)SEQ ID NO:57 的 CDRH2 ；(d)SEQ ID NO:59 的 CDRLl ；(e)SEQ ID NO:60 的 CDRL2 ；(f)SEQ ID NO:61 的 CDRL3 ； (g)重鏈構(gòu)架，如SEQID NO:43中所述，包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Val、Ile或Gly ;第4個(gè)氨基酸殘基處的Leu或Val ;第20個(gè)氨基酸殘基處的Leu、Ile、Met或Val ;第22個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第24個(gè)氨基酸殘基處的Thr、Ala、Val、Gly或Ser ;第26個(gè)氨基酸殘基處的Gly ;第29個(gè)氨基酸殘基處的lie、Phe、Leu或Ser ;第36個(gè)氨基酸殘基處的Trp ；第47個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第48個(gè)氨基酸殘基處的He、Met、Val或Leu ;第69個(gè)氨基酸殘基處的Ile、Leu、Phe、Met或Val ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Arg ;第78個(gè)氨基酸殘基處的Ala、Leu Val、Tyr或Phe ;第80個(gè)氨基酸殘基處的Leu或Met ;第90個(gè)氨基酸殘基處的Tyr或Phe ;第92個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;和第94個(gè)氨基酸殘基處的Arg、Lys> Gly、Ser、His或Asn，其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào)；和 (h)輕鏈構(gòu)架，如SEQID NO:45中所述，包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Ala或Gln ;第3個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第4個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第23個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第35個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第48個(gè)氨基酸殘基處的Ile ;第66個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Ala ;第88個(gè)氨基酸殘基處的Cys，和第98個(gè)氨基酸殘基處的Phe，其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào)； 并且其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合MAGE A3。
18.權(quán)利要求17的抗原結(jié)合蛋白，其中 (a)所述重鏈構(gòu)架包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Val;第4個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第20個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第22個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第24個(gè)氨基酸殘基處的Ala ;第26個(gè)氨基酸殘基處的Gly ;第29個(gè)氨基酸殘基處的Phe ;第36個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第47個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第48個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第69個(gè)氨基酸殘基處的Ile ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Arg ;第78個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第80個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第90個(gè)氨基酸殘基處的Tyr ;第92個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;和第94個(gè)氨基酸殘基處的Arg ;其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào)；和 (b)所述輕鏈構(gòu)架包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Ala ;第3個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第4個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第23個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第35個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第48個(gè)氨基酸殘基處的Ile ;第66個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Ala ;第88個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;和第98個(gè)氨基酸殘基處的Phe，其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào)。
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗原結(jié)合蛋白，包含:(a)SEQ ID NO: 64 (GGGVLLRLPL FAY)的 CDRH3 或具有在 SEQ ID NO: 64 的氨基酸殘基13 處的 His、Val、lie、Ser、Asp 或 Gly 取代 Tyr 的變體； (b)SEQ ID NO: 62 (SYTMS)的CDRHl，或具有在SEQ ID NO: 62的氨基酸殘基2處的lie、His、Phe、Thr、Asn、Cys、Glu 或 Asp 取代 Tyr ;在 SEQ ID NO:62 的氨基酸殘基 3 處的Tyr、Ala、Trp、Gly、L eu 或 Val 取代 Thr ;在 SEQ ID NO:62 的氨基酸殘基 4 處的 He,Val 或Trp取代Met ;或在SEQ ID NO: 62的氨基酸殘基5處的Hi S、Glu、Asn、Gin、Tyr或Thr取代Ser的變體；(c)SEQ ID NO: 63 (TITSGGGSSY YPDSVKG)的 CDRH2，或包含在 SEQ ID NO: 63 的第 I個(gè)氨基酸殘基處的Gly、Tyr、Phe、Ile、Glu或Val取代Thr;在SEQ ID NO:63的第2個(gè)氨基酸殘基處的Leu、Val、Thr、Ser或Asn取代Ile ;在SEQ ID NO:63的第3個(gè)氨基酸殘基處的Ser、Phe、Trp或His取代Thr ;在SEQ ID NO: 63的第5個(gè)氨基酸殘基處的Asp、Ser或Asn取代Gly ;在SEQ ID NO:63的第6個(gè)氨基酸殘基處的Ser取代Gly ;在SEQ ID NO:63的第8個(gè)氨基酸殘基處的Tyr、Thr、Asn、Asp或Arg取代Ser ;或在SEQ ID NO:63的第10個(gè)氨基酸殘基處的Gly、His、Phe、Asp或Asn取代Tyr的變體；(d)SEQ ID NO: 65 (RSSTGAVTAS NYAN)的 CDRLl，或包含在 SEQ ID NO: 65 的第 6 個(gè)氨基酸殘基處Thr取代Ala;或在SEQ ID NO:65的第12個(gè)氨基酸殘基處His取代Tyr的變體； (e)SEQ ID NO:66 (GINNRAP)的CDRL2或在SEQ ID NO:66的第2個(gè)氨基酸殘基處具有Thr取代Ile的變體；(f)SEQ ID NO: 67 (ALffYNNHWV)的 CDRL3，或包含在 SEQ ID NO: 67 的氨基酸殘基 5 處Ser取代Asn ;或在SEQ ID NO:67的氨基酸殘基7處Leu取代His的變體； 所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合MAGE A3。
20.權(quán)利要求19的抗原結(jié)合蛋白，其包含:(a)SEQ ID NO:64 的 CDRH3 ；(b)SEQ ID NO:62 的 CDRHl ；(c)SEQ ID NO:63 的 CDRH2 ；(d)SEQ ID NO:65 的 CDRLl ；(e)SEQ ID NO:66 的 CDRL2 ；(f)SEQ ID NO:67 的 CDRL3 ； (g)重鏈構(gòu)架，如SEQID NO:47中所述，包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Val、Ile或Gly ;第4個(gè)氨基酸殘基處的Leu或Val ;第20個(gè)氨基酸殘基處的Leu、Ile、Met或Val ;第22個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第24個(gè)氨基酸殘基處的Thr、Ala、Val、Gly或Ser ;第26個(gè)氨基酸殘基處的Gly ;第29個(gè)氨基酸殘基處的lie、Phe、Leu或Ser ;第36個(gè)氨基酸殘基處的Trp ；第47個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第48個(gè)氨基酸殘基處的He、Met、Val或Leu ;第69個(gè)氨基酸殘基處的Ile、Leu、Phe、Met或Val ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Arg ;第78個(gè)氨基酸殘基處的Ala、Leu Val、Tyr或Phe ;第80個(gè)氨基酸殘基處的Leu或Met ;第90個(gè)氨基酸殘基處的Tyr或Phe ;第92個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;或第94個(gè)氨基酸殘基處的Arg、Lys> Gly、Ser、His或Asn，其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào)；和 (h)輕鏈構(gòu)架，如SEQID NO:49中所述，包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Ala或Gln ;第3個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第4個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第23個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第35個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第48個(gè)氨基酸殘基處的Ile ;第66個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Ala ;第88個(gè)氨基酸殘基處的Cys，或第98個(gè)氨基酸殘基處的Phe，其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào)； 并且其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合MAGE A3。
21.權(quán)利要求20的抗原結(jié)合蛋白，其中 (a)所述重鏈構(gòu)架包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Val;第4個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第20個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第22個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第24個(gè)氨基酸殘基處的Ala ;第26個(gè)氨基酸殘基處的Gly ;第29個(gè)氨基酸殘基處的Phe ;第36個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第47個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第48個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第69個(gè)氨基酸殘基處的Ile ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Arg ;第78個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第80個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第90個(gè)氨基酸殘基處的Tyr ;第92個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;和第94個(gè)氨基酸殘基處的Ser ;其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào)；和 (b)所述輕鏈構(gòu)架包含第2個(gè)氨基酸殘基處的Ala;第3個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第4個(gè)氨基酸殘基處的Val ;第23個(gè)氨基酸殘基處的Cys ;第35個(gè)氨基酸殘基處的Trp ;第48個(gè)氨基酸殘基處的Ile ;第66個(gè)氨基酸殘基處的Leu ;第71個(gè)氨基酸殘基處的Ala ;第88個(gè)氨基酸殘基處的Cys，和第98個(gè)氨基酸殘基處的Phe，其中氨基酸殘基使用Kabat方案編號(hào)。
22.核酸分子，其編碼權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)定義的抗原結(jié)合蛋白。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的核酸分子，其包含: (i)SEQ ID NO: 38的重鏈DNA序列或具有75%或更高同一性的變體重鏈； (ii)SEQ ID NO:42的重鏈DNA序列或具有75%或更高同一性的變體重鏈； (iii)SEQ ID NO:46的重鏈DNA序列或具有75%或更高同一性的變體重鏈； (iv)SEQ ID NO:40的輕鏈DNA序列或具有75%或更高同一性的變體輕鏈； (iv) SEQ ID NO:44的輕鏈DNA序列或具有75%或更高同一性的變體輕鏈；或 (iv)SEQ ID NO:48的輕鏈DNA序列或具有75%或更高同一性的變體輕鏈。
24.表達(dá)載體,包含如權(quán)利要求22-23中任一項(xiàng)定義的核酸分子。
25.重組宿主細(xì)胞，包含如權(quán)利要求24定義的表達(dá)載體。
26.用于生產(chǎn)抗原結(jié)合蛋白的方法，包括培養(yǎng)如權(quán)利要求25定義的宿主細(xì)胞和回收所述抗原結(jié)合蛋白的步驟。
27.在人福爾馬林固定石蠟包埋組織中檢測(cè)MAGE-A3和/或MAGE-A6的方法，包括使用如權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)定義的單克隆抗體在所述組織上進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述組織是腫瘤組織。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述腫瘤組織是黑素瘤或非小細(xì)胞肺癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及與MAGE-A3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白如抗體、編碼這種抗原結(jié)合蛋白的多核苷酸、所述抗原結(jié)合蛋白的診斷應(yīng)用和制備方法。
文檔編號(hào)C07K16/30GK103108887SQ201180045742
公開日2013年5月15日 申請(qǐng)日期2011年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月22日
發(fā)明者A.貝爾格倫, N.布萊斯, Y.弗拉代, R.M.帕爾曼捷, A.皮羅爾熱 申請(qǐng)人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司