專利名稱：與糖尿病腎病相關(guān)的尿及血清的生物標(biāo)記的制作方法
與糖尿病腎病相關(guān)的尿及血清的生物標(biāo)記相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求2009年1月28日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No. 61/147778的優(yōu)先權(quán)，將該申請(qǐng)的內(nèi)容通過(guò)提述以其整體并入本文。
背景技術(shù)：
糖尿病腎病(diabetic nephropathy ；DN)是伴隨長(zhǎng)期糖尿病而發(fā)展的腎臟疾病。 糖尿病腎病造成異常的液體濾過(guò)及尿中白蛋白分泌增加，最終導(dǎo)致腎衰竭。糖尿病腎病在早期并無(wú)癥狀。因此，難以偵測(cè)此疾病的開(kāi)始。事實(shí)上，糖尿病腎病目前的診斷是根據(jù)微量白蛋白尿(microalbuminuria)的發(fā)展，當(dāng)腎臟傷害已經(jīng)發(fā)生時(shí)，微量白蛋白尿才發(fā)生。缺乏早期診斷檢測(cè)，使得無(wú)法有效治療早期階段的糖尿病腎病。因此，鑒定出有效診斷早期糖尿病腎病的可信賴生物標(biāo)記是非常重要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明基于非預(yù)期的發(fā)現(xiàn)，數(shù)個(gè)尿及血清中蛋白質(zhì)及其片段，不論單獨(dú)或組合，相較于未患有糖尿病腎病者，在糖尿病腎病患者中有不同表現(xiàn)。這些蛋白質(zhì)分子因此為診斷早期糖尿病腎病的有效生物標(biāo)記。因此，本發(fā)明的一發(fā)明方面特征在于診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法。該方法包括至少兩步驟(i)確認(rèn)懷疑患有糖尿病腎病的個(gè)體中生物標(biāo)記的程度；及(ii)根據(jù)該生物標(biāo)記的程度，評(píng)估該個(gè)體是否患有糖尿病腎病。相較于未患有糖尿病腎病者，該生物標(biāo)記的程度增加表示該個(gè)體患有糖尿病腎病。該診斷方法所使用的生物標(biāo)記為下列的四種蛋白質(zhì)分子的其中之一⑴第一尿中蛋白質(zhì)分子，為尿中α-2-HS-醣蛋白前體 (precursor α-2-HS-glycoprotein)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段，例如成熟的尿中 α-2-HS-醣蛋白前體 VVSLGSPSGEVSHPRKT(SEQ ID NO :1)或 MGV VSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO 2)；(ii)第二尿中蛋白質(zhì)分子，為尿中α-1抗胰蛋白酶(a-lantitrypsin) 或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段，例如KGKWERPFEVKDTEEEDF(SEQ ID NO 3)， MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK(SEQ ID NO 4), EDPQGDAAQKTDT SHHDQDHPTFNKITPNLAE(SEQ ID NO :5)，或EDPQ⑶AAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA(SEQ ID NO 6)；(iii)第三尿中蛋白質(zhì)分子，為尿中α-l酸性醣蛋白(a-Iacid glycoprotein) 或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段，例如GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(SEQ ID NO: 7)；及(iv)血清中蛋白質(zhì)分子，為骨橋蛋白(osteopontin)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段，例如 YPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQNAVS SEETNDFKQETLPSK (SEQ ID NO 8)或 KYPDAVATW LNPDPSQKQNLLAPQTLPSK(SEQ ID NO :9)。上述之診斷方法可還包括，在前述評(píng)估步驟之后，使該生物標(biāo)記程度與糖尿病腎病狀態(tài)(是否為早期或晚期)形成關(guān)聯(lián)的步驟。當(dāng)該生物標(biāo)記為(i)或(iv)蛋白質(zhì)分子時(shí)，相對(duì)于未患有糖尿病腎病個(gè)體，該生物標(biāo)記的程度增加表示為糖尿病腎病的晚期。對(duì)于該生物標(biāo)記為(ii)或(iii)蛋白質(zhì)分子，當(dāng)與表示糖尿病腎病早期及晚期的生物標(biāo)記預(yù)測(cè)參考程度相比，該生物標(biāo)記的程度可顯示糖尿病腎病的狀態(tài)。另一發(fā)明方面，本發(fā)明特征在于一種評(píng)估個(gè)體(例如人患者或?qū)嶒?yàn)室動(dòng)物)糖尿病腎病的治療有效性的方法。該方法包括確認(rèn)個(gè)體中治療前及治療后的(i)、(ii)、(iii) 或(iv)蛋白質(zhì)分子程度，基于治療后該生物標(biāo)記的程度變化，評(píng)估該治療的有效性。假設(shè)相較于治療前的生物標(biāo)記程度，該生物標(biāo)記在治療后的程度維持相同或下降，則表示該治療為有效。另一發(fā)明方面，本發(fā)明特征在于一種確認(rèn)糖尿病腎病階段的方法，包括至少 4個(gè)步驟(i)取得來(lái)自懷疑患有糖尿病腎病的個(gè)體的尿液樣本及任選地取得其血清樣本；(ii)確認(rèn)前述生物標(biāo)記之一的程度；(iii)基于該生物標(biāo)記的程度，計(jì)算疾病級(jí)數(shù)(score)；及(iv)基于該疾病級(jí)數(shù)與預(yù)定為不同糖尿病腎病階段的截取值(cutoff value)之比較，評(píng)估該個(gè)體的糖尿病腎病階段。該方法中，上述計(jì)算步驟可藉由嶺回歸 ^1/ (ridge regression angilysis)、@ : (factor analysis) > ^SO 0 ^ 析法(discriminant function analysis)、及邏輯回歸分析法(logistic regression analysis) 。前述確認(rèn)糖尿病腎病階段的方法中使用的生物標(biāo)記，由下列5種蛋白質(zhì)分子中的至少兩種所構(gòu)成前述的(i) (iv)蛋白質(zhì)分子，及蛋白質(zhì)分子(v)，為前述的尿中骨橋蛋白或其片段。在一實(shí)施例中，該生物標(biāo)記由前述5種蛋白質(zhì)分子所組成。在另一實(shí)施例中， 該生物標(biāo)記由前述(i) (iii)及(ν)蛋白質(zhì)分子中的至少2種所組成?；蛘?，該生物標(biāo)記由上述5種蛋白質(zhì)分子中的至少兩種以及一種或多種的臨床因子所組成，臨床因子例如年齡、性別、HbAlc、白蛋白/肌酸酐比例(ACR)、及腎小球過(guò)濾率 (GFR)。另一發(fā)明方面，本發(fā)明提供一種監(jiān)測(cè)糖尿病腎病發(fā)展的方法，基于上述任一種生物標(biāo)記的程度。該方法包括在2星期至12個(gè)月的期間(例如2- 個(gè)星期或3-12個(gè)月)， 從懷疑患有糖尿病腎病的個(gè)體中取得前后2次尿液樣本及任選地取得前后2次血清樣本， 確認(rèn)樣本中該生物標(biāo)記之一的程度，根據(jù)該生物標(biāo)記程度計(jì)算疾病級(jí)數(shù)(disease score), 及基于該疾病級(jí)數(shù)，評(píng)估該個(gè)體中糖尿病腎病的發(fā)展。當(dāng)較晚獲得的樣本之疾病級(jí)數(shù)高于較早獲得的樣本之疾病級(jí)數(shù)時(shí)，表示糖尿病腎病惡化。上述之生物標(biāo)記也可用于評(píng)估糖尿病腎病的治療有效性。如果該生物標(biāo)記之一的治療后程度，相較于相同生物標(biāo)記在治療前的程度，維持不變或降低時(shí)，則該治療為有效。本發(fā)明更進(jìn)一步提供試劑盒，于前述之方法使用。本發(fā)明的試劑盒包括2、3或4種具有不同抗原特異性的抗體。此述抗體可與⑴α -2 -HS-醣蛋白 (α -2-HS-glycoprotein)、(ii) α -1 抗胰蛋白酶(α -!antitrypsin)、(iii) α -1 酸性醣蛋白(α-lacid glycoprotein)及(iv)骨橋蛋白(osteopontin)的任一種結(jié)合。在一實(shí)施例中，該試劑盒僅包含與欲偵測(cè)的抗原(例如與糖尿病腎病相關(guān)的生物標(biāo)記)特異性結(jié)合的抗體，以實(shí)施前述之任一種方法。因此，該試劑盒基本上由上述抗體所組成。本發(fā)明之范圍也包括與下列肽其中之一特異性結(jié)合的分離的抗體MGVVSLGSPSGEVSHPRKT(SEQ ID NO :2)、
KGKffERPFEVKDTEEEDF(SEQ ID NO :3)、MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK(SEQ ID NO :4)、EDPQ⑶AAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA(SEQ ID NO :6)、GQEHFAHLLILRDTKTYMLADVNDEKNWGLS(SEQ ID NO :7)、YPDAVATffLNPDPSQKQ NLLAPQNAVSSEETNDFKQETLPSK (SEQ ID NO :8)、及KYPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK(SEQ ID NO :9)。此述“分離的抗體”大體上為不含有天然相關(guān)分子的抗體。更特定地說(shuō)，在該抗體的制備中，天然相關(guān)分子最多占干重的20%，則該抗體被認(rèn)為是“分離的抗體”。純度可以任何適當(dāng)方法測(cè)量，例如柱層析法、聚丙烯酰胺膠電泳法及高效液相層析法(HPLC)。
此述的任何抗體皆可用于制造用于實(shí)施本發(fā)明之方法的試劑盒。本發(fā)明之一或多個(gè)實(shí)施方案的詳細(xì)說(shuō)明如下所述。本發(fā)明之其它特征或優(yōu)點(diǎn)將由后附的圖式及數(shù)個(gè)實(shí)施方案的詳細(xì)說(shuō)明以及后附的權(quán)利要求書(shū)而清楚了解。附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示不同糖尿病腎病患者群的尿中α -2-HS-醣蛋白(uDN2 ；圖1A)、尿中α -1 抗胰蛋白酶(uDN5 ；圖1Β)、尿中α -1酸性醣蛋白(uGR3 ；圖1C)及血清中骨橋蛋白(sDNO ； 圖1D)的箱線圖(boxplots)。圖中的箱型(boxes)的上限及下限及該箱型中的橫線分別標(biāo)示為25%數(shù)值、75%數(shù)值及50%數(shù)值(中位數(shù))。上方虛線標(biāo)示上圍籬值(upper fence) 以下的最大值，其為75%數(shù)值加1. 5四分位距(interquartile range)，而下方虛線標(biāo)示下圍籬值(lower fence)以上的最小值，其為25%數(shù)值減1. 5四分位距。發(fā)明詳述糖尿病腎病(DN)為糖尿病相關(guān)的腎疾病，具有5個(gè)發(fā)展期第1階段特征為具正常的腎小球過(guò)濾率(GFR)及正常的白蛋白尿(albuminuria) (ACR < 30mg/g)的糖尿??；第2階段特征為腎小球高過(guò)濾率(glomerular hyperfiltration)(超過(guò) 120mL/min/l. 73m2)或是腎肥大(renal enlargement)伴隨正常GFR及正常的白蛋白尿 (albuminuria)(ACR < 30mg/g)；第3階段特征為微量白蛋白尿(microalbuminuria)；第4階段特征為嚴(yán)重的白蛋白尿(albuminuria)及GFR累進(jìn)地降低；第5 階段特征為 GFR 低于 15mL/min/l. 73m2。一般認(rèn)為第1 3階段是早期階段，第4 5階段為晚期。本發(fā)明人鑒定出多個(gè)與糖尿病腎病相關(guān)的生物標(biāo)記，特別是不同階段的糖尿病腎病。該生物標(biāo)記由下列的4種蛋白質(zhì)及其片段中的一種或多種所組成，不論是在尿液或血清中(a) α -2-HS-醣蛋白(GenBank 登錄號(hào) NP_001613 ；2010 年 1 月 10 日)；(b) α -1 抗胰蛋白酶(GenBank登錄號(hào)ΑΑΒ59495 ；2010年1月10日)；(c) α -1酸醣蛋白(GenBank登錄號(hào) EAW87416 ；2010 年 1 月 10 日)；及(d)骨橋蛋白，包括兩個(gè)同型異構(gòu)物(isoform)，已知為分泌型磷酸化蛋白 la (GenBank登錄號(hào)ΝΡ_001035147 ；2010年1月17日)及分泌型磷酸化蛋白lb (GenBank登錄號(hào) NP_000573 ；2010 年 1 月 10 日)。此述4種蛋白質(zhì)的片段具有10個(gè)氨基酸的最小長(zhǎng)度，優(yōu)選為190 410個(gè)氨基酸的最大長(zhǎng)度。例如蛋白質(zhì)(a)、(b)、(c)及(d)的片段可分別為357、408、191及290個(gè)氨基酸。本發(fā)明人也發(fā)現(xiàn)由上述蛋白質(zhì)及其片段之一種或多種所構(gòu)成的生物標(biāo)記，及一種或多種的臨床因子(例如年齡、性別、HbAlc、ACR及GFR)也與不同階段的糖尿病腎病有關(guān)。因此，本發(fā)明之一方面是關(guān)于使用任一個(gè)前述之生物標(biāo)記于糖尿病腎病的診斷方法。為實(shí)施此方法，從懷疑患有糖尿病腎病的個(gè)體采集尿液樣本，及視需要采集血清樣本， 以常見(jiàn)的方法，例如質(zhì)譜及免疫分析，測(cè)定上述之4種蛋白質(zhì)中一種或多種或其片段的尿液及血清程度。如果需要，則以常見(jiàn)的方法測(cè)定臨床因子程度。當(dāng)生物標(biāo)記包含單一蛋白質(zhì)分子時(shí)，在個(gè)體中的程度可與參考值比較，確認(rèn)該個(gè)體是否患有糖尿病腎病。參考值表示在未患有糖尿病腎病個(gè)體中相同生物標(biāo)記的程度，參考值可根據(jù)糖尿病腎病患者群及非糖尿病腎病患者群中該生物標(biāo)記的程度而訂定。例如 參考值可以是上述兩患者群的平均程度之間的中間值。該生物標(biāo)記的程度高于參考值則表示為糖尿病腎病。當(dāng)生物標(biāo)記包含至少兩種蛋白質(zhì)分子，及任選地包含至少一個(gè)臨床因子時(shí)，該蛋白質(zhì)分子的程度及臨床因子的值可經(jīng)適當(dāng)分析，產(chǎn)生以該生物標(biāo)記程度為特征的疾病級(jí)數(shù)(disease score)(例如以數(shù)字表示)。此述的分析包括例如鑒別函數(shù)分析法 (discriminant function analysis)、邏輯回歸分析法(logistic regression analysis) > 嶺回歸分析法(ridge regression analysis)、主成分分析法(principal component analysis)、@ : # t/j1 (factor analysis) >^ 1 ζ (generalized linear model)，但不限于此。疾病級(jí)數(shù)可與代表未患有糖尿病腎病個(gè)體中相同生物標(biāo)記程度之參考值比較。參考值可以常見(jiàn)的方法訂定。例如疾病級(jí)數(shù)參考值可獲自分析未患有糖尿病腎病個(gè)體中該蛋白質(zhì)分子及視需要分析的臨床因子之平均值。疾病級(jí)數(shù)高于參考值則表示患有糖尿病腎病。本發(fā)明另一方面涉及一種根據(jù)上述任一生物標(biāo)記，確認(rèn)糖尿病腎病階段的方法。 為了實(shí)施此方法，將糖尿病腎病患者的生物標(biāo)記程度(最好以疾病級(jí)數(shù)表示)，與一組預(yù)定的可區(qū)分不同糖尿病腎病階段的截取值(cutoff value)比較，以確定患者的糖尿病腎病階段。該截取值可利用相同方法分析不同階段的糖尿病腎病患者中相同生物標(biāo)記的值而訂定。下列描述為根據(jù)不同階段的糖尿病腎病相關(guān)的生物標(biāo)記，訂定前述截取值的例示過(guò)程(1)根據(jù)患者的疾病狀態(tài)(例如糖尿病腎病階段及危險(xiǎn)因子)，將該患者分成不同群；(2)確定每一患者群中構(gòu)成該生物標(biāo)記的蛋白質(zhì)分子及臨床因子的程度或值；(3)將該蛋白質(zhì)程度及臨床因子值進(jìn)行適當(dāng)分析，建立計(jì)算疾病級(jí)數(shù)的模式(例如公式)；及(4)根據(jù)代表各患者群的疾病級(jí)數(shù)(例如平均值)及其它相關(guān)因子，例如敏 ^it (sensitivity)(specificity)、P曰I^J^llJil； (positive predictive value ； PPV)及陰性預(yù)測(cè)值(negative predictive value ；NPV)，以決定每一疾病階段的截取值。
任何由上述所產(chǎn)生的模式可經(jīng)由接受器操作特征(receiver-operating characteristic ；ROC)分析法產(chǎn)生ROC曲線，評(píng)估其診斷價(jià)值。在ROC分析中理想的多變量模式(multivariable model)將可得到最大的曲線下面積(Area under Curve, AUC)。該模式可見(jiàn)下述實(shí)施例1-3。在另一發(fā)明方面，本發(fā)明關(guān)于一種監(jiān)測(cè)個(gè)體中糖尿病腎病發(fā)展的方法，根據(jù)前述的任一種生物標(biāo)記。更具體地說(shuō)，來(lái)自個(gè)體的2個(gè)尿液樣本及/或血清樣本可在適當(dāng)期間內(nèi)(例如2個(gè)星期至12個(gè)月)取得及檢查，以測(cè)定前述任一生物標(biāo)記的程度，之后如上述決定其疾病級(jí)數(shù)。如果在較晚取得的樣本中代表生物標(biāo)記程度的疾病級(jí)數(shù)高于較早取得的樣本時(shí)，表示該個(gè)體的糖尿病腎病惡化。上述監(jiān)測(cè)方法可應(yīng)用于罹患或具有風(fēng)險(xiǎn)罹患糖尿病腎病的人體。當(dāng)該個(gè)體為具有風(fēng)險(xiǎn)罹患糖尿病腎病或?yàn)樘悄虿∧I病早期階段時(shí)，可在每6 12個(gè)月監(jiān)測(cè)一次該生物標(biāo)記的程度，以監(jiān)測(cè)糖尿病腎病的發(fā)展。當(dāng)該個(gè)體已為糖尿病腎病晚期階段時(shí)，最好于每3 6 個(gè)月檢查一次該生物標(biāo)記的程度。上述的監(jiān)測(cè)方法也可根據(jù)一般方法應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物，以研究糖尿病腎病。此述 “實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物”為通常用于動(dòng)物試驗(yàn)的脊椎動(dòng)物，例如小鼠、大鼠、兔、貓、狗、豬、及非人的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物最好于每2 M個(gè)星期檢查一次，確認(rèn)生物標(biāo)記的程度。任一個(gè)上述的生物標(biāo)記可用于評(píng)估個(gè)體(即人糖尿病腎病患者或患有糖尿病腎病的實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物)的糖尿病腎病治療的有效性。此方法中，測(cè)定在治療前、治療中及治療后其代表前述生物標(biāo)記程度的疾病級(jí)數(shù)。如果在治療過(guò)程中疾病級(jí)數(shù)維持相同或降低，表示該治療為有效。在此亦公開(kāi)有效于實(shí)施任一前述方法的試劑盒。該試劑盒包括2、3或4種具有不同抗原特異性的抗體。每一種該抗體可結(jié)合至(i) α -2-HS-醣蛋白、(ii) α -1抗胰蛋白酶、(iii) α-l酸性醣蛋白、或(iv)骨橋蛋白之其一。與蛋白質(zhì)⑴、(ii)、(iii)及(iv) 具有特異性結(jié)合的抗體可結(jié)合至該蛋白質(zhì)的片段MGVVSLGSPSGEVSHPRKT(SEQ ID NO 2), KGKffERPFEVKDTEEEDF(SEQ ID NO 3), MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK(SEQ ID NO 4), EDPQ⑶AAQ KTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA(SEQ ID NO 6), GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGL S (SEQ ID NO 7), YPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQNAVS SEETNDFKQETLPSK(SEQ ID NO :8)，或 KYPDAVAT WLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK(SEQ ID NO :9)，亦即對(duì)于這些片段中包含的任何抗體表位是特異性的。在一實(shí)施例中，該試劑盒只包含與欲偵測(cè)的抗原(例如與糖尿病腎病相關(guān)的蛋白質(zhì)分子)具有特異性的抗體，以實(shí)施前述的方法。亦即，該試劑盒基本上由該抗體所組成。前述試劑盒可包括結(jié)合于相同抗原的兩種不同抗體(亦即涂布抗體(coating antibody)及偵測(cè)抗體(detecting antibody))。一般而言，偵測(cè)抗體藉由自體或連接其它試劑而結(jié)合可發(fā)出偵測(cè)訊號(hào)的分子。此述“抗體”為一完整的免疫球蛋白或其片段，例如保留抗原結(jié)合活性的Fab或F(ab’)2。該抗體可自然發(fā)生或以基因工程產(chǎn)生(例如單鏈抗體(single-chain antibody)、嵌合抗體(chimeric antibody)、或人源化抗體(humanized antibody))0本發(fā)明試劑盒所含的抗體可獲自商業(yè)販?zhǔn)?，或者可由一般方法制?例如參考 Harlow and Lane, (1988)Antibodies :A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York.)。為了制造上列生物標(biāo)記的抗體，該生物標(biāo)記(marker)可視需要連接于攜帶蛋白(例如KLH)，并與佐劑混合，注射于宿主動(dòng)物。動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生的抗體之后可經(jīng)親和性層析法純化。通常使用的宿主動(dòng)物包括兔、小鼠、豚鼠、及大鼠。可用以增加免疫反應(yīng)的多種佐劑根據(jù)宿主種類(lèi)而選擇，可包括弗氏佐劑(Freund’ s adjuvant)(完全及不完全)；礦物膠，例如氫氧化鋁、CpG ；表面活性物質(zhì)，例如溶血卵磷脂(lysolecithin)、多聚醇(Pluronic polyols)、聚陰離子(polyanions)、肽、油乳化劑、匙孔血藍(lán)蛋白(keyhole limpet hemocyanin)及二硝基酚(dinitrophenol)。有用的人用佐劑包括BCG(分枝桿菌 (bacille Calmette-Guerin))及短小棒狀桿菌(Corynebacterium parvum)。多克隆抗體， 亦即存在于經(jīng)免疫的動(dòng)物血清中的異質(zhì)抗體分子群體。單克隆抗體，亦即同質(zhì)抗體分子群體，可使用標(biāo)準(zhǔn)的雜交瘤技術(shù)制造(例如參考 Kohler 等(1975)Nature 256,495 ；Kohler 等(1976)Eur. J. Immunol. 6，511 ；Kohler 等 (1976)Eur J Immunol 6，292 ；禾口 Hammerling 等(1981)Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas, Elsevier, N. Y.) 0特別是，單克隆抗體可獲自培養(yǎng)連續(xù)細(xì)胞系而生產(chǎn)抗體分子的任何技術(shù)，如Kohler等(1975) Nature 256，495及美國(guó)專利號(hào)4，376，110所述；以人B-細(xì)胞的雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)者，如Kosbor等(1983) Immunol Today 4，72 ；Cole等(1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80，2026 ；以 EBV-雜交瘤生產(chǎn)者，如 Cole 等(1983)Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. , pp. 77-96。前述抗體可為任何免疫球蛋白族群，包括IgG，IgM，IgE，IgA，IgD及其任何的亞類(lèi)(subclass)。生產(chǎn)本發(fā)明的單克隆抗體的雜交瘤可在體外或體內(nèi)培養(yǎng)。由于雜交瘤具有在體內(nèi)生產(chǎn)高效價(jià)的單克隆抗體的能力，為特別有效的生產(chǎn)方法。而且，抗體片段可由已知方法產(chǎn)生。例如該片段可包含F(xiàn)(ab)’2片段，可由抗體分子經(jīng)胃蛋白酶作用而產(chǎn)生，及Fab片段，可由還原F(ab) ’ 2片段的二硫鍵而產(chǎn)生，但不限于此。沒(méi)有進(jìn)一步的闡述，相信本領(lǐng)域技術(shù)人員基于前述之說(shuō)明可利用本發(fā)明至最大程度。以下之特定實(shí)施例因此僅為說(shuō)明，不以任何方式限制本文的公開(kāi)。所有此處引述之公開(kāi)信息在此并入作為參考。實(shí)施例1 以尿中α-2-HS-醣蛋白、尿中α-1抗胰蛋白酶、尿中α-1酸性醣蛋白、 或血清中骨橋蛋白，診斷糖尿病腎病(DN)材料及方法(i)個(gè)體由臺(tái)北三軍總醫(yī)院根據(jù)美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)(American Diabetic Association)設(shè)立的標(biāo)準(zhǔn)，征募83位糖尿病患者(稱為DM個(gè)體)及82位糖尿病腎病患者(稱為DN個(gè)體)DM 罹患糖尿病但未罹患糖尿病腎病(標(biāo)準(zhǔn)如下述)；DN:罹患糖尿病及尿中蛋白的分泌濃度高于每日l(shuí)g、由切片檢查確定患有糖尿病腎病、或患有尿毒癥。所有個(gè)體被分派為訓(xùn)練群(training group)及測(cè)試群(testing group)，比例為 7 3。(ii)樣本收集及處理收集來(lái)自上述個(gè)體的早晨第一次排出的尿液樣本及血清樣本。尿液樣本中的肽以尿液基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(MALDI-TOF-MQ及同重元素相對(duì)與絕對(duì)定量標(biāo)記法(iTRAQ)檢查。包括α -2-HS-醣蛋白(DN2)、α -1抗胰蛋白酶(DN5)、骨橋蛋白(DNO)、及α -1酸性醣蛋白(GR3)的蛋白質(zhì)分子，以ELISA測(cè)量，確認(rèn)其在尿液及血清樣本中的程度。簡(jiǎn)單地說(shuō)，將尿液樣本與蛋白酶抑制劑混合，與稀釋緩沖液稀釋為1 100，血清樣本則稀釋為 1 10。將稀釋的樣本置于ELISA板中進(jìn)行一式三份重復(fù)實(shí)驗(yàn)。DN0、DN2、DN5及GR3的程度各以其標(biāo)準(zhǔn)的三明治ELISA方法測(cè)量。程度的計(jì)算使用4-參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線。只納入包含CV(% )低于15的標(biāo)準(zhǔn)品及樣本，未符合標(biāo)準(zhǔn)者則重復(fù)上述步驟。尿液中的蛋白質(zhì)濃度以在相同尿液樣本中肌酸酐 (creatinine)濃度校正，肌酸酐以 Quantichrom Creatinine Assay (BioAssay Systems, (Hayward)California, USA)測(cè)量。(iii)統(tǒng)計(jì)分析測(cè)量前述蛋白質(zhì)分子于尿中及血清中的程度，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，顯示其獨(dú)立的區(qū)分DN 個(gè)體及DM個(gè)體的能力，其auROC范圍為0. 44 0. 87。對(duì)于每個(gè)個(gè)體，各值間的校正根據(jù)常態(tài)的偵測(cè)結(jié)果，以Spearman或Pearson分析法確認(rèn)。群間的平均值或中間值的比較以Mudent T-test或非參數(shù)的Mann-Whitney Test 適當(dāng)比較。當(dāng)ρ < 0. 05時(shí)為統(tǒng)計(jì)學(xué)上具顯著性。統(tǒng)計(jì)上呈現(xiàn)平均值士平均標(biāo)準(zhǔn)差(SEM) 或作為帶有[25%，75% ]的中位值。結(jié)果(i)患者特征表1及表2顯示訓(xùn)練群及測(cè)試群中的患者特征及DM、DN群的患者特征。
權(quán)利要求
1.一種診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，包括確認(rèn)懷疑為患有糖尿病腎病的個(gè)體中生物標(biāo)記的程度，該生物標(biāo)記選自下組(i)第一尿中蛋白質(zhì)分子，為α-2-HS-醣蛋白前體 (precursor α-2-HS-glycoprotein)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；( )第二尿中蛋白質(zhì)分子，為尿中α-l抗胰蛋白酶(α-lantitrypsin)或其具有至少 10個(gè)氨基酸的片段；(iii)第三尿中蛋白質(zhì)分子，為尿中α-1酸性醣蛋白(a-Iacidglycoprotein)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；及(iv)血清中蛋白質(zhì)分子，為骨橋蛋白(osteopontin)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；以及根據(jù)該生物標(biāo)記的程度評(píng)估該個(gè)體是否患有糖尿病腎病；其中，相較于未患有糖尿病腎病個(gè)體，該生物標(biāo)記的程度增加時(shí)，表示該個(gè)體患有糖尿病腎病。
2.如權(quán)利要求1所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，其中該生物標(biāo)記為第一尿中蛋白質(zhì)分子。
3.如權(quán)利要求2所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，其中該α-2-HS-醣蛋白前體的片段為成熟的α -2-HS-醣蛋白，VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO 1)或 MGVVSLGSPSGEVSHPRKT(SEQ ID NO :2)。
4.如權(quán)利要求3所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，還包括在該評(píng)估步驟之后，使該生物標(biāo)記的程度與糖尿病腎病的狀態(tài)形成關(guān)聯(lián)，其中，相較于未患有糖尿病腎病個(gè)體，該生物標(biāo)記的程度增加時(shí)，表示該個(gè)體為糖尿病腎病晚期。
5.如權(quán)利要求1所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，其中該生物標(biāo)記為第二尿中蛋白質(zhì)分子。
6.如權(quán)利要求5所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，其中該α-1抗胰蛋白酶的片段為 KGKWERPFEVKDTEEEDF(SEQ ID NO 3)、MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK(SEQ ID NO 4)、 EDPQ⑶AAQKTDT SHHDQDHPTFNKITPNLAE(SEQ ID NO :5)、或EDPQ⑶AAQKTDTSHHDQDHPTFNKITP NLAEFA(SEQ ID NO :6)。
7.如權(quán)利要求6所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，還包括在該評(píng)估步驟后，根據(jù)表示糖尿病腎病早期及晚期的生物標(biāo)記程度的預(yù)定參考程度，使該生物標(biāo)記的程度與糖尿病腎病的狀態(tài)形成關(guān)聯(lián)。
8.如權(quán)利要求1所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，其中該生物標(biāo)記為第三尿中蛋白質(zhì)分子。
9.如權(quán)利要求8所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，其中該第三尿中蛋白質(zhì)分子為 GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(SEQ ID NO :7)。
10.如權(quán)利要求9所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，還包括在該評(píng)估步驟后，根據(jù)表示糖尿病腎病早期及晚期的生物標(biāo)記程度的預(yù)定參考程度，使該生物標(biāo)記的程度與糖尿病腎病的狀態(tài)形成關(guān)聯(lián)。
11.如權(quán)利要求1所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，其中該生物標(biāo)記為血清蛋白質(zhì)分子。
12.如權(quán)利要求11所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，其中該骨橋蛋白的片段為YP DAVATWLNPDPSQKQNLLAPQNAVSSEETNDFKQETLPSK(SEQ ID NO 8)或 KYPDAVATWLNPDPSQKQNLL APQTLPSK(SEQ ID NO 9)
13.如權(quán)利要求11所述的診斷個(gè)體中糖尿病腎病的方法，還包括在該評(píng)估步驟后，使該生物標(biāo)記的程度與糖尿病腎病的狀態(tài)形成關(guān)聯(lián)，其中，相較于未患有糖尿病腎病個(gè)體，該生物標(biāo)記的程度增加時(shí)，表示該個(gè)體為糖尿病腎病晚期。
14.一種評(píng)估個(gè)體中糖尿病腎病的治療有效性的方法，包括確認(rèn)該個(gè)體中生物標(biāo)記的治療前程度，該生物標(biāo)記選自下組(i)第一尿中蛋白質(zhì)分子，為α-2-HS-醣蛋白前體 (precursor α-2-HS-glycoprotein)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；( )第二尿中蛋白質(zhì)分子，為尿中α "I抗胰蛋白酶(α -!antitrypsin)或其具有至少 10個(gè)氨基酸的片段；(iii)第三尿中蛋白質(zhì)分子，為尿中α-1酸性醣蛋白(a-Iacidglycoprotein)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；及(iv)血清中蛋白質(zhì)分子，為骨橋蛋白(osteopontin)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；確認(rèn)該個(gè)體中該生物標(biāo)記的治療后程度，以及根據(jù)該生物標(biāo)記的程度在治療后的改變，評(píng)估該治療的有效性， 其中，當(dāng)該生物標(biāo)記的治療后程度與該生物標(biāo)記的治療前程度相同或較低時(shí)，表示該治療為有效。
15.如權(quán)利要求14所述的評(píng)估個(gè)體中糖尿病腎病的治療有效性的方法，其中該 α-2-HS-醣蛋白前體的片段為成熟的α-2-HS-醣蛋白，VVSLGSPSGEVSHPRKT(SEQ ID NO: 1)或 MGWSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO :2)；該 α-1 抗胰蛋白酶的片段為 KGKWERPFEVKDTEEEDF(SEQ ID NO :3)、 MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK(SEQ ID NO :4)、EDPQGDAAQKTDT SHHDQDHPTFNKITPNLAE(SEQ ID NO :5)、或 EDPQ⑶AAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA(SEQ ID NO 6)；該 α-1 酸性醣蛋白的片段為 GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(SEQ ID NO 7)；及該骨橋蛋白的片段為 YPDAVAI￥LNPDPSQKQNLLAPQNAVSSEETNDH(QETLPSK(SEQ ID NO 8) 或 KYPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK(SEQ ID NO :9)。
16.如權(quán)利要求14所述的評(píng)估個(gè)體中糖尿病腎病的治療有效性的方法，其中該個(gè)體為人。
17.如權(quán)利要求14所述的評(píng)估個(gè)體中糖尿病腎病的治療有效性的方法，其中該個(gè)體為實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物。
18.—種確認(rèn)個(gè)體中糖尿病腎病階段的方法，包括從懷疑患有糖尿病腎病個(gè)體中獲得尿液樣本及任選地取得血清樣本； 確認(rèn)該樣本中由至少兩個(gè)蛋白質(zhì)分子所構(gòu)成的生物標(biāo)記的程度，及任選地采用一個(gè)或多個(gè)的臨床因子，其中至少兩個(gè)蛋白質(zhì)分子選自下列五個(gè)蛋白質(zhì)分子(i)第一尿中蛋白質(zhì)分子，為α-2-HS-醣蛋白前體 (precursor α -2-HS-glycoprotein)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；( )第二尿中蛋白質(zhì)分子，為α-1抗胰蛋白酶(α-lantitrypsin)或其具有至少10 個(gè)氨基酸的片段；(iii)第三尿中蛋白質(zhì)分子，為尿中α-1酸性醣蛋白(a-Iacidglycoprotein)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；及(iv)血清中蛋白質(zhì)分子，為骨橋蛋白(osteopontin)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；及(ν)第四尿中蛋白質(zhì)分子，為為骨橋蛋白(osteopontin)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；該臨床因子選自年齡、性別、HbAlc、白蛋白(albumin)/肌酸酐(creatinine)比例、及腎小球過(guò)濾率(glomerular filtration rate)； 根據(jù)該生物標(biāo)記的程度計(jì)算疾病級(jí)數(shù)；及根據(jù)該疾病級(jí)數(shù)與表示不同糖尿病腎病階段的預(yù)定截取值(cutoff value)的比較，評(píng)估該個(gè)體的糖尿病腎病階段。
19.如權(quán)利要求18所述的確認(rèn)個(gè)體中糖尿病腎病階段的方法，其中該疾病級(jí)數(shù)由選自 ^01/3^1/ (ridge regression analysis) > 13 ^!/]1 (factor analysis) ^^ !] 分析法(discriminant function analysis)、及邏輯回歸分析法(logistic regression analysis)的分析法所計(jì)算。
20.如權(quán)利要求18所述的確認(rèn)個(gè)體中糖尿病腎病階段的方法，其中該α-2-HS-醣蛋白前體的片段為成熟的α -2-HS-醣蛋白，VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO 1)或 MGVVSLGSPSGEVSHPRKT(SEQ ID NO 2)；該α -1抗胰蛋白酶的片段為KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO 3)、MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK(SEQID NO 4)、EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAE(SEQ ID NO :5)、或 EDPQ⑶AAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA (SEQ ID NO 6)；該 α-1 酸性醣蛋白的片段為 GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(SEQ ID NO 7)；及該骨橋蛋白的片段為 YPDAVAI￥LNPDPSQKQNLLAPQNAVSSEETNDH(QETLPSK (SEQ IDNO 8)或 KYPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK(SEQ ID NO :9)。
21.如權(quán)利要求20所述的確認(rèn)個(gè)體中糖尿病腎病階段的方法，其中該取得步驟由收集尿液樣本及血清樣本而進(jìn)行并且所述生物標(biāo)記由所有蛋白質(zhì)分子(i) (ν)所組成。
22.如權(quán)利要求20所述的確認(rèn)個(gè)體中糖尿病腎病階段的方法，其中該取得步驟由收集尿液樣本而進(jìn)行并且所述生物標(biāo)記由蛋白質(zhì)分子(i) (iii)及(ν)中的至少兩個(gè)蛋白質(zhì)分子所組成。
23.—種監(jiān)測(cè)個(gè)體中糖尿病腎病發(fā)展的方法，包括從懷疑患有糖尿病腎病個(gè)體中獲得第一尿液樣本及任選地取得第一血清樣本； 在2星期至12個(gè)月之后，從該個(gè)體中取得第二尿液樣本及任選地取得第二血清樣本； 確認(rèn)第一及第二樣本中由至少兩個(gè)蛋白質(zhì)分子所組成的生物標(biāo)記的程度，及任選地采用一個(gè)或多個(gè)的臨床因子，其中至少兩個(gè)蛋白質(zhì)分子選自下列五種蛋白質(zhì)分子(i)第一尿中蛋白質(zhì)分子，為α-2-HS-醣蛋白前體 (precursor α -2-HS-glycoprotein)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；( )第二尿中蛋白質(zhì)分子，為尿中α "I抗胰蛋白酶(α -!antitrypsin)或其具有至少 10個(gè)氨基酸的片段；(iii)第三尿中蛋白質(zhì)分子，為尿中α-1酸性醣蛋白(a-Iacidglycoprotein)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；及(iv)血清中蛋白質(zhì)分子，為骨橋蛋白(osteopontin)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；及(ν)第四尿中蛋白質(zhì)分子，為骨橋蛋白(osteopontin)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；該臨床因子選自年齡、性別、HbAlc、白蛋白(albumin)/肌酸酐(creatinine)比例、及腎小球過(guò)濾率(glomerular filtration rate)；根據(jù)第一及第二樣本中的該生物標(biāo)記的程度，分別計(jì)算第一疾病級(jí)數(shù)及第二疾病級(jí)數(shù)；及評(píng)估該個(gè)體中的疾病發(fā)展；其中，當(dāng)?shù)诙膊〖?jí)數(shù)高于第一疾病級(jí)數(shù)時(shí)，表示糖尿病腎病惡化。
24.如權(quán)利要求23所述的監(jiān)測(cè)個(gè)體中糖尿病腎病發(fā)展的方法，其中該疾病級(jí)數(shù)由選自 ^01/3^1/ (ridge regression analysis) > 13 ^!/]1 (factor analysis) ^^ !] 分析法(discriminant function analysis)、及邏輯回歸分析法(logistic regression analysis)中的分析法所計(jì)算。
25.如權(quán)利要求23所述的監(jiān)測(cè)個(gè)體中糖尿病腎病發(fā)展的方法，其中該α-2-HS-醣蛋白前體的片段為成熟的α -2-HS-醣蛋白，VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO 1)或 MGVVSLGSPSGEVSHPRKT(SEQ ID NO 2)；該 α -1 抗胰蛋白酶的片段為 KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO 3)、 MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK(SEQ ID NO :4)、EDPQ⑶AAQKTDT SHHDQDHPTFNKITPNLAE(SEQ ID NO :5)、或 EDPQ⑶AAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA(SEQ ID NO 6)；該 α-1 酸性醣蛋白的片段為 GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(SEQ ID NO 7)；及該骨橋蛋白的片段為 YPDAVAI￥LNPDPSQKQNLLAPQNAVSSEETNDH(QETLPSK(SEQ ID NO 8) 或 KYPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK(SEQ ID NO 9)。
26.如權(quán)利要求25所述的監(jiān)測(cè)個(gè)體中糖尿病腎病發(fā)展的方法，其中該取得步驟由收集尿液樣本及血清樣本而進(jìn)行并且所述生物標(biāo)記由所有蛋白質(zhì)分子(i) (ν)所組成。
27.如權(quán)利要求25所述的監(jiān)測(cè)個(gè)體中糖尿病腎病發(fā)展的方法，其中該取得步驟由收集尿液樣本而進(jìn)行并且所述生物標(biāo)記由蛋白質(zhì)分子(i) (iii)及(ν)中的至少兩個(gè)所組成。
28.一種評(píng)估個(gè)體中糖尿病腎病的治療有效性的方法，包括 在治療前從個(gè)體中獲得第一尿液樣本及任選地取得第一血清樣本； 在治療后從該個(gè)體中獲得第二尿液樣本及任選地取得第二血清樣本；確認(rèn)該樣本中由至少兩個(gè)蛋白質(zhì)分子所組成的生物標(biāo)記的程度，及任選地采用一個(gè)或多個(gè)的臨床因子，其中至少兩個(gè)蛋白質(zhì)分子選自下列五種蛋白質(zhì)分子(i)第一尿中蛋白質(zhì)分子，為α-2-HS-醣蛋白前體 (precursor α -2-HS-glycoprotein)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；( )第二尿中蛋白質(zhì)分子，為α-1抗胰蛋白酶(α-lantitrypsin)或其具有至少10 個(gè)氨基酸的片段；(iii)第三尿中蛋白質(zhì)分子，為尿中α-1酸性醣蛋白(a-Iacidglycoprotein)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；及(iv)血清中蛋白質(zhì)分子，為骨橋蛋白(osteopontin)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；及(ν)第四尿中蛋白質(zhì)分子，為骨橋蛋白(osteopontin)或其具有至少10個(gè)氨基酸的片段；該臨床因子選自年齡、性別、HbAlc、白蛋白(albumin)/肌酸酐(creatinine)比例、及腎小球過(guò)濾率(glomerular filtration rate)；根據(jù)第一及第二樣本中該生物標(biāo)記的程度，分別計(jì)算第一疾病級(jí)數(shù)及第二疾病級(jí)數(shù)；及評(píng)估該個(gè)體中的治療有效性；其中，當(dāng)該第二疾病級(jí)數(shù)相等于或低于該第一疾病級(jí)數(shù)時(shí)，表示該治療為有效。
29.如權(quán)利要求觀所述的評(píng)估個(gè)體中糖尿病腎病的治療有效性的方法，其中該疾病級(jí) ■由^ 自歸(ridge regression analysis) > 13 ^!/]1 (factor analysis) > 鑒別函數(shù)分析法(discriminant function analysis)、及邏輯回歸分析法(logistic regression analysis)中白勺分 1/ %計(jì)胃。
30.如權(quán)利要求觀所述的評(píng)估個(gè)體中糖尿病腎病的治療有效性的方法，其中該 α-2-HS-醣蛋白前體的片段為成熟的α-2-HS-醣蛋白，VVSLGSPSGEVSHPRKT(SEQ ID NO: 1)或 MGWSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO :2)；該 α-1 抗胰蛋白酶的片段為 KGKWERPFEVKDTEEEDF(SEQ ID NO :3)、 MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK (SEQ ID NO :4)、EDPQ⑶AAQKTDT SHHDQDHPTFNKITPNLAE (SEQ ID NO :5)、或 EDPQ⑶AAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA(SEQ ID NO 6)；該 α-1 酸性醣蛋白的片段為 GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(SEQ ID NO 7)；及該骨橋蛋白的片段為 YPDAVAI￥LNPDPSQKQNLLAPQNAVSSEETNDH(QETLPSK(SEQ ID NO 8) 或 KYPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK(SEQ ID NO :9)。
31.如權(quán)利要求30所述的評(píng)估個(gè)體中糖尿病腎病的治療有效性的方法，其中該取得步驟由收集尿液樣本及血清樣本而進(jìn)行并且所述生物標(biāo)記由所有蛋白質(zhì)分子(i) (ν)所組成。
32.如權(quán)利要求30所述的評(píng)估個(gè)體中糖尿病腎病的治療有效性的方法，其中該取得步驟由收集尿液樣本而進(jìn)行并且所述生物標(biāo)記由蛋白質(zhì)分子(i) (iii)及(ν)中的至少兩個(gè)所組成。
33.一種經(jīng)分離的抗體，特異性結(jié)合于選自下組的肽 MGWSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO :2)； KGKffERPFEVKDTEEEDF(SEQ ID NO :3)； MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK(SEQ ID NO :4)；EDPQ⑶AAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA(SEQ ID NO :6)； GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(SEQ ID NO :7)；YPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQNAVS SEETNDFKQETLPSK(SEQ ID NO 8)；及KYPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK(SEQ ID NO :9)。
34.一種診斷糖尿病腎病的試劑盒，包括2、3、或4種抗體，每一種抗體可結(jié)合于(i) α-2-HS-醣蛋白(a-2-HS-glycoprotein)、(ii)a-l 抗胰蛋白酶(a-lantitrypsin)、 (iii) α-1 酸性醣蛋白(α-lacid glycoprotein)、或(iv)骨橋蛋白(osteopontin)，其中該2、3或4種抗體具有不同的抗原特異性。
35.如權(quán)利要求34所述的診斷糖尿病腎病的試劑盒，其中該抗體為完整的免疫球蛋白分子。
36.一種診斷糖尿病腎病的試劑盒，基本上由2、3或4種抗體所組成，每一種抗體可結(jié)合于⑴α -2-HS-醣蛋白(a -2-HS-glycoprotein)、(ii) α -1抗胰蛋白酶 (α-lantitrypsin), (iii) α-1 酸性醣蛋白(α-lacid glycoprotein)、或(iv)骨橋蛋白 (osteopontin)，其中該2、3或4種抗體具有不同的抗原特異性。
全文摘要
尿液及血清中生物標(biāo)記在診斷糖尿病腎病、評(píng)估糖尿病腎病階段、監(jiān)測(cè)糖尿病腎病發(fā)展及評(píng)估糖尿病腎病的治療有效性中的用途。該生物標(biāo)記包括尿中α-2-HS-醣蛋白前體、尿中α-1抗胰蛋白酶、尿中α-1酸性醣蛋白、尿中骨橋蛋白、血清中骨橋蛋白、前述之片段及前述之組合。
文檔編號(hào)C07K16/18GK102300877SQ201080005751
公開(kāi)日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2010年1月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月28日
發(fā)明者葉亞平, 徐采薇, 曾錙翎, 李彥朋, 李泓毅, 林微雅, 林裕峰, 鄭平福, 陳怡婷, 陳金順 申請(qǐng)人:財(cái)團(tuán)法人工業(yè)技術(shù)研究院