專(zhuān)利名稱(chēng)：一種富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種牛蒡苷的純化方法，特別是涉及一種利 用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法。
背景技術(shù)：
牛蒡別名牛菜、大力子、惡實(shí)、牛蒡子、蝙蝠刺、牛鞭草，為我國(guó)古老的藥食兩用食 物蔬菜。牛蒡?yàn)槎晟荼局参?，? 2m。基生葉叢生，大形，有長(zhǎng)柄；莖生葉廣卵形或 心形，邊緣微波狀或有細(xì)齒，基部心形，下面密被白短柔毛。頭狀花序多數(shù)，排成傘房狀； 總苞球形，總苞片披針形，先端具短鉤；花淡紅色，全為管狀。瘦果橢圓形，具棱，灰褐色， 冠毛短剛毛狀。牛蒡果實(shí)含牛蒡甙(arctiin)，水解生成牛蒡甙元(arctigenin)及葡萄 糖(glucose)。又含羅漢松脂酚(matairesinol)，絡(luò)石甙元(trachelogenin)，倍半木質(zhì)素 (sesquiligenan)AL-D 及 AL-F。種子含牛蒡甙，牛蒡酚(lap-paol)A、B、C、D、E、F、H。又含 脂肪油，其中脂肪酸成分有花生酸(arachic acid)，硬脂酸(steraic acid)，棕櫚酸(pal mitic acid)和亞油酸(linoleic acid)。研究表明，牛蒡有明顯的降血糖、降血脂、降血壓、 補(bǔ)腎壯陽(yáng)、潤(rùn)腸通便和抑制癌細(xì)胞滋生、擴(kuò)散及移棄水中重金屬的作用，是非常理想的天然 保健食品。牛蒡苷又叫牛蒡子苷，牛蒡子苷具有抗胰腺癌活性，其作用機(jī)理之一是誘導(dǎo)細(xì)胞 凋亡。本品能引起血管擴(kuò)張，血壓下降；使冷血及溫血?jiǎng)游锂a(chǎn)生驚厥，大劑量引起呼吸衰竭， 對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)及骨胳呈麻痹作用，在臨床上已經(jīng)得到應(yīng)用。近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)牛蒡中含有大量 的牛蒡苷，而其原料牛蒡來(lái)源廣泛且容易栽種，對(duì)牛蒡苷的研究已取得了可惜的進(jìn)展。名稱(chēng) 為“一種牛蒡子提取物及其制備方法和應(yīng)用”的專(zhuān)利中請(qǐng)中便公開(kāi)了將牛蒡經(jīng)醇沉乙酸乙 酯萃取得牛蒡苷工藝流程。上述專(zhuān)利文獻(xiàn)中的牛蒡提取工藝主要是經(jīng)過(guò)用乙醇回流提取后 萃取等步驟提取而成，其分離效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如大孔吸附樹(shù)脂處理后在進(jìn)行硅膠柱層析分離的 效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)技術(shù)提取率相對(duì)較低、提取純度低等缺點(diǎn)，提供一種 利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其步驟如下(1)將干牛蒡粉碎后用乙醇加熱回流提取；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的牛蒡提取液抽濾，將提取液減壓回收乙醇至無(wú)醇，得初提 物；(3)將所獲初提物加入乙酸乙酯萃取，用酸調(diào)其PH值為2. 0 2. 5，靜置、抽濾、并 用水洗滌至中性，減壓濃縮得牛蒡苷粗提物；(4)將所得牛蒡粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附；
(5)用不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集牛蒡苷各階段洗脫液；(6)將牛蒡苷各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得牛蒡苷半成品，其含量為35%以上；(7)將所得牛蒡苷半成品上硅膠層析柱，并以丙酮，甲醇以不同體積比例進(jìn)行洗 脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集牛蒡苷各階段洗脫液；(8)將所收集的牛蒡苷洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得牛蒡苷，其含 量在90%以上。所述的步驟(1)中，牛蒡粉碎后過(guò)30 80目篩在進(jìn)行有機(jī)溶劑提取。所述的步驟(1)中，所用乙醇濃度為50 90%，可提取2 3次，每次3 6h。所述的步驟(1)中，提取的方法為浸泡法、回流提取法、滲漉法、煎煮法、連續(xù)提取 法中的一種或一種以上。所述的步驟(1)中，加入乙醇的體積為牛蒡粉碎體積的5 10倍。所述的步驟(3)中，加入乙酸乙酯的量按體積計(jì)算為提取物水溶液的5 10倍， 調(diào)節(jié)PH值所用的酸為鹽酸。所述的步驟(4)中所用的大孔吸附樹(shù)脂為天津南開(kāi)大學(xué)所產(chǎn)生的X-5、NKA-9、 S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型樹(shù)脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài) 吸附。所述的步驟(5)中所述的洗脫為用30 90%的乙醇進(jìn)行洗脫。所述的在步驟(5)和(7)中，所采取的檢測(cè)方法均為薄層色譜法跟蹤檢測(cè)。所述的步驟(7)中所采取的丙酮與甲醇的體積為1 7 1。本發(fā)明應(yīng)用大孔吸附技術(shù)分離純化牛蒡苷，對(duì)牛蒡苷的吸附選擇性良好，吸附快 解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來(lái)源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提 取純度高，可以得到含量35%以上的牛蒡苷半成品和含量90%以上的牛蒡苷終產(chǎn)品，克服 了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力 強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹(shù)脂，不容于酸、堿及有機(jī)媒，對(duì)有機(jī)物選擇性較好，不受無(wú)機(jī)鹽 類(lèi)及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，可以通過(guò)物理吸附從溶液中有選擇地吸附牛蒡苷， 吸附快、解析也快，吸附容量較大。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 一種利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其步驟如下(1)將干牛蒡粉碎后過(guò)60目篩，用牛蒡粉體積5倍的60%乙醇回流提取2次，每 次3小時(shí)；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的牛蒡提取液抽濾，將提取液減壓回收乙醇得初提物；(3)將所獲初提物加入體積為提取物醇溶液體積5倍的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，然后 用酸調(diào)其PH值為2.0，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得牛蒡苷粗提物；(4)將所得牛蒡苷粗提物用大孔吸附樹(shù)脂層析柱上進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂為 天津南開(kāi)大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-II型樹(shù)脂；(5)用30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇在大孔吸附樹(shù)脂層柱中依次進(jìn)行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集牛蒡苷各階段洗脫液；

(6)將牛蒡苷各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量為35%牛蒡苷半成品；(7)將所得牛蒡苷半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集牛蒡 苷各階段洗脫液；(8)將所收集的牛蒡苷洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量93% 牛蒡苷。實(shí)施案例2 —種利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其步驟如下(1)將干牛蒡粉碎后過(guò)40目篩，用牛蒡粉體積8倍的75%乙醇回流提取3次，每 次4小時(shí)；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的牛蒡提取液抽濾，將提取液減壓回收乙醇得初提物；(3)將所獲初提物加入體積為提取物醇溶液體積8倍的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，然后 用酸調(diào)其PH值為2. 3，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得牛蒡苷粗提物；(4)將所得牛蒡苷粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂為天津南開(kāi) 大學(xué)所生產(chǎn)的D4006型樹(shù)脂；(5)用30%、50%、70%、90%的乙醇在大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟 蹤檢測(cè)，收集牛蒡苷各階段洗脫液；(6)將牛蒡苷各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35. 8%牛蒡苷半成品；(7)將所得牛蒡苷半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集牛蒡 苷各階段洗脫液；(8)將所收集的牛蒡苷洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量92% 牛蒡苷。實(shí)施案例3 —種利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其步驟如下(1)將干牛蒡粉碎后過(guò)80目篩，用牛蒡粉體積10倍的85%乙醇回流提取3次，每 次4小時(shí)6小時(shí)；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的牛蒡提取液抽濾，將提取液減壓回收乙醇得初提物；(3)將所獲初提物加入體積為提取物醇溶液體積10倍的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，然后 用酸調(diào)其PH值為2. 5，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得牛蒡苷粗提物；(4)將所得牛蒡苷粗提物用大孔吸附樹(shù)脂層析柱子、上進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂 為天津南開(kāi)大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-9型樹(shù)脂；(5)用40%、60%、80%的乙醇在大孔吸附樹(shù)脂層析柱子中依次進(jìn)行梯度洗脫，用 薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集牛蒡苷各階段洗脫液；(6)將牛蒡苷段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量37%牛蒡苷半成品；(7)將所得牛蒡苷半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集牛蒡 苷各階段洗脫液；(8)將所收集的牛蒡苷洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量95% 牛蒡苷。
權(quán)利要求
1.一種利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征在于，其步驟如下(1)將干牛蒡粉碎后用乙醇加熱回流提取；(2)將經(jīng)(1)處理的牛蒡提取液過(guò)濾，減壓回收乙醇；(3)將所收獲初提物加入乙酸乙酯中萃取，調(diào)PH值至2-2.5，分離、收集沉淀物，并用水 洗滌至中性，得到牛蒡苷的粗提物。(4)將所得牛蒡苷粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附；(5)用不同濃度乙醇水溶液對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，收集牛蒡苷段洗脫液；(6)將牛蒡苷洗脫液濃縮回收洗脫劑，得牛蒡苷半成品；(7)將所得牛蒡苷半成品上硅膠層析柱，并以甲醇，丙酮以不同體積比進(jìn)行洗脫，收集 牛蒡苷各階段洗脫液；(8)將所收集到得牛蒡苷洗脫液進(jìn)行精制的牛蒡苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法其特質(zhì)是 所述的步驟(1)中，牛蒡粉后過(guò)30 80目篩再進(jìn)行乙醇加熱回流提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用大孔吸附樹(shù)脂富集純牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征是 在所屬的步驟(1)中，所用乙醇濃度在50 90 %，可提取2 3次，提取時(shí)間為3 6小 時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征 是所述的步驟(1)中，提取的方法為浸漬法、回流提取法，滲漉法、煎煮法、連續(xù)提取法中 的一種或一種以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征 是；所屬的步驟(1)中，加入乙醇的體積為牛蒡粉體積的5 10倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征 是在所述的步驟(3)中，加入乙酸乙酯的量按體積計(jì)為提取物醇溶液的5 10倍，調(diào)節(jié)PH 值所用的酸為鹽酸
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征 是步驟中所述吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附步驟(5)中所述的洗脫為用30 90%的 乙醇水溶液進(jìn)行洗脫。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征 是在步驟( 和(7)中，洗脫過(guò)程中采用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征 是步驟(7)中所采用丙酮與甲醇得體積比為1 7 1。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征 是在步驟(8)中，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化牛蒡中牛蒡苷的方法。其特點(diǎn)是應(yīng)用大孔吸附技術(shù)分離純化牛蒡苷，對(duì)牛蒡苷的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來(lái)源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量35％以上的牛蒡苷半成品和含量90％以上的牛蒡苷終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹(shù)脂，可以通過(guò)物理吸附從溶液中有選擇地吸附牛蒡苷，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
文檔編號(hào)C07H15/26GK102070685SQ20101062313
公開(kāi)日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2010年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月20日
發(fā)明者姚德利, 姚德坤, 姚航, 鄭君, 閆峰, 黃運(yùn)生 申請(qǐng)人:大興安嶺林格貝有機(jī)食品有限責(zé)任公司