專(zhuān)利名稱(chēng)：：抗協(xié)同刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子ailim的人單克隆抗體及其藥物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：ICOS(誘導(dǎo)型協(xié)同刺激物))的人抗體；結(jié)合AILIM或其一部分的人單克隆抗體；編碼所述人單克隆抗體或其一部分的DNA,或所述DNA的一部分；產(chǎn)生所述人單克隆抗體或其一部分的細(xì)胞(包括基因重組細(xì)胞)；由所述基因重組細(xì)胞產(chǎn)生的人單克隆抗體或其一部分；含有所述人單克隆抗體或其一部分的藥物組合物；治療與遲發(fā)型過(guò)l文反應(yīng)相關(guān)的疾病的含有抗AILIM抗體的藥物組合物；鑒定，定量測(cè)定或分析結(jié)合AILIM或AILIM配體的物質(zhì)的方法；和用于所述方法的試劑盒。
背景技術(shù)：
：哺乳動(dòng)物活體具有排斥侵入該活體的病原性微生物(病毒，細(xì)菌，寄生蟲(chóng)等)或異物(下文中這兩者被稱(chēng)為"抗原")的免疫應(yīng)答系統(tǒng)。其中之一被稱(chēng)為先天性免疫應(yīng)答系統(tǒng)，另一個(gè)是獲得性免疫應(yīng)答系統(tǒng)。前者的排斥機(jī)理包括吞噬細(xì)胞(包括多形核白細(xì)胞，單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞等)的吞噬作用，自然殺傷(NK)細(xì)胞的進(jìn)攻，和補(bǔ)體對(duì)抗原的非特異性識(shí)別例如調(diào)理作用。后者，獲得性免疫應(yīng)答系統(tǒng)，是通過(guò)淋巴細(xì)胞(主要是T細(xì)胞和B細(xì)胞)的排斥機(jī)理，所述淋巴細(xì)胞獲得對(duì)抗原的特異性(即激活的淋巴細(xì)胞)。獲得抗原特異性的B細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生對(duì)該抗原特異性的抗體進(jìn)攻存在于這些細(xì)胞外部的抗原。獲得抗原特異性的T細(xì)胞(即激活的T細(xì)胞)分為輔助T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞(細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞，CTL)。輔助T細(xì)胞調(diào)節(jié)B細(xì)胞的分化和抗體的產(chǎn)生，并且與巨噬細(xì)胞共同作用破壞抗原。后者，CTL自身進(jìn)攻病毒感染的纟田月包等(實(shí)驗(yàn)藥物(ExperimentalMedicine):增刊，"BioScienceTermLibrary,Immunity(生物科學(xué)術(shù)語(yǔ)文庫(kù)，免疫)'，，Yodosha，pp.14-17(1995))。細(xì)胞(APC)例如巨噬細(xì)胞，B細(xì)胞或樹(shù)突細(xì)胞呈遞的抗原的識(shí)別開(kāi)始的?？乖蔬f細(xì)胞處理所摻入的抗原并且通過(guò)將他們與主要組織相容性復(fù)合體(MHC)結(jié)合來(lái)呈遞這些處埋過(guò)的抗原。通過(guò)細(xì)胞膜表面上存在的T細(xì)胞受體(TcR)和CD3抗原之間的復(fù)合體(TcR/CD3復(fù)合體)識(shí)別抗原呈遞細(xì)胞呈遞的處理過(guò)的抗原，T細(xì)胞接受激活細(xì)胞的第一信號(hào)(或獲得特異性)。但是，TcR/CD3復(fù)合體-介導(dǎo)的第一信號(hào)單獨(dú)不能充分地激活T細(xì)胞并且導(dǎo)致無(wú)應(yīng)答性或克隆無(wú)反應(yīng)性，這樣這些細(xì)胞此后不能與接受的任何刺激反應(yīng)。白細(xì)胞介素2(IL-2)的自分泌對(duì)于T細(xì)胞被激活，T細(xì)胞分化成抗原特異性T細(xì)胞克隆，和T細(xì)胞增殖是必需的。在克隆無(wú)反應(yīng)性中，T細(xì)胞由于沒(méi)有產(chǎn)生IL-2等物質(zhì)且沒(méi)有細(xì)胞分裂而失活。即，IL-2等細(xì)胞因子的產(chǎn)生伴隨的T細(xì)胞的激活需要通過(guò)TcR/CD3復(fù)合體的第一信號(hào)之后的第二信號(hào)。此第二信號(hào)被稱(chēng)為協(xié)同刺激信號(hào)。T細(xì)胞接受該第二信號(hào)并且通過(guò)T細(xì)胞表面上除TcR/CD3復(fù)合體之外遞到細(xì)胞中。該第二信號(hào)避免了細(xì)胞無(wú)反應(yīng)性(克隆無(wú)反應(yīng)性)并且激活這些細(xì)胞。盡管還沒(méi)有對(duì)抗原呈遞細(xì)胞和淋巴細(xì)胞例如T細(xì)胞之間的第二信號(hào)傳遞的一部分機(jī)理的詳細(xì)解釋?zhuān)瞧駷橹沟难芯勘砻鞯诙盘?hào)傳遞的一個(gè)重要因素是主要在T細(xì)胞和胸腺細(xì)胞上表達(dá)的細(xì)胞表面分子CD28(也稱(chēng)之為T(mén)p44，T"或9,3抗原)與在抗原呈遞細(xì)胞(巨噬細(xì)胞，單核細(xì)胞，樹(shù)突細(xì)胞等)上表達(dá)的細(xì)胞表面分子CD80(也稱(chēng)之為B7-l，B7,BB1，或B7/BB1)以及與抗原呈遞細(xì)胞上的細(xì)胞表面分子CD86(也稱(chēng)之為B7-2或B70)的相互作用(即，通過(guò)這些細(xì)胞之間的結(jié)合發(fā)生的細(xì)胞粘附)。此外，通過(guò)實(shí)驗(yàn)解釋了認(rèn)為其表達(dá)依據(jù)第二信號(hào)而加強(qiáng)的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)與CD80(B7-1)和CD86(B7-2)的相互作用(即，通過(guò)這些細(xì)胞之間的結(jié)合發(fā)生的細(xì)胞粘附)在通過(guò)第二信號(hào)調(diào)節(jié)T細(xì)胞激活時(shí)起著重要作用。換句話(huà)說(shuō)，通過(guò)第二信號(hào)的傳遞而調(diào)節(jié)T細(xì)胞激活至少涉及CD28和CD80/CD86之間的相互作用，據(jù)認(rèn)為是依據(jù)該相互作用的CTLA-4表達(dá)的增強(qiáng)，和CTLA-4與CD80/CD86之間的相互作用。已知CD28是傳遞激活T細(xì)胞和避免無(wú)反應(yīng)性所需的第二信號(hào)(協(xié)同刺激信號(hào))的協(xié)同刺激物分子。通過(guò)該分子結(jié)合抗原呈遞細(xì)胞上的CD80(B7-1)和CD86(B7-2)協(xié)同刺激物分子(通過(guò)這些分子之間的結(jié)合而發(fā)生細(xì)胞粘附)所傳遞的第二信號(hào)穩(wěn)定Thl-型細(xì)胞因子的mRNA，并且接著促進(jìn)T細(xì)胞產(chǎn)生大量Th1-型細(xì)胞因子例如IL-2，IFNY和TNFa。TcR/CD3傳遞的第一信號(hào)誘導(dǎo)CTLA-4的表達(dá)，并且CD28和CD80之間的結(jié)合傳遞的第二信號(hào)還將該表達(dá)增強(qiáng)。證明CTLA-4接受這些信號(hào)來(lái)抑制T細(xì)胞功能，這與CD28傳遞的第二信號(hào)對(duì)T細(xì)胞的激活作用相反。人CD28和CTLA-4分別是分子量分別是44Kd和41-43Kd的I型糖蛋白。這兩者都具有免疫球蛋白樣區(qū)，屬于免疫球蛋白超家族，并且具有作為細(xì)胞粘附分子的功能和作為信號(hào)傳遞分子的功能。人CD28通過(guò)二硫鍵形成異二聚體，而CTLA-4以單體存在。CD28和CTLA-4基因兩者都定位于人染色體上"2q33"和小鼠染色體上"1C"，都由四個(gè)(4)夕卜顯子組成。人CD28和CTLA-4分別由220和223個(gè)氨基酸組成，包括前導(dǎo)序列，并且它們之間的氨基酸同源性是20-30%。CD28和CTLA-4在人和小鼠中的的配體是CD80(B7-1)和CD86(B7-2)。CTLA-4對(duì)兩種配體的親和性是CD28對(duì)兩種配體的親和性的約20倍。已經(jīng)闡明了動(dòng)物物種間保守的氨基酸序列結(jié)構(gòu)"MYPPPY(Met-Tyr-Pro畫(huà)Pro-Pro-Tyr)"對(duì)于CD28和CTLA-4與CD80(B7-1)的結(jié)合是重要的。還報(bào)道過(guò)，當(dāng)CD28被刺激時(shí)，PI3激酶(磷酸肌醇3激酶，PI3K)與CD28的部分序列"YMNM(Tyr-Met-Asn-Met)"中的磷酸化酪氨酸殘基結(jié)合，并且CD28在通過(guò)該"YxxM"結(jié)構(gòu)的胞內(nèi)信號(hào)傳遞中起著重要的作用。此外，報(bào)道過(guò)CTLA-4在其胞質(zhì)區(qū)中還具有"YxxM"代表的序列，即"YVKM(Tyr-Val-Lys-Met)"，并且在受刺激后SYP與該序列結(jié)合。CD28在胸腺細(xì)胞和外周血T細(xì)胞中特異表達(dá)，CTLA-4在激活的T細(xì)胞中特異表達(dá)(細(xì)胞工程(CellEngineering):增刊，"HamdbookofAdhesienMolecule(粘附分子手冊(cè))"，Shujunsha，93-102頁(yè)(1994);同上120-136頁(yè)；實(shí)驗(yàn)藥物(ExperimentalMedicine):增刊，"生物科學(xué)術(shù)語(yǔ)文庫(kù)，免疫，，，Yodosha，pp.94-98(1995);實(shí)驗(yàn)藥物(ExperimentalMedicine):增刊，"生物科學(xué)術(shù)語(yǔ)文庫(kù)，胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)"，Yodosha，pp.58-59(1995);NihonRinsho，55巻，No.6，pp.215-220(1997))。在T細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)(T細(xì)胞功能的激活和抑制)中，多個(gè)分子例如協(xié)同刺激物分子(CD28，CD80(B7-1),CD86(B7-2)等)和與它們一同作用的CTLA-4之間的相互作用的重要性被認(rèn)識(shí)到了，這引起了人們對(duì)這些分子和疾病之間的關(guān)系以及通過(guò)調(diào)節(jié)這些分子的功能來(lái)治療疾病的注意。如上所述，盡管活體激活對(duì)活體(自身)來(lái)說(shuō)是外物的抗原的獲得性免疫應(yīng)答系統(tǒng)，但是其也具有免疫耐受性，這樣就不表現(xiàn)出針對(duì)其自身成分(自身抗原)的免疫應(yīng)答。如果由于某些原因破壞了免疫耐受性，則發(fā)生對(duì)自身抗原的免疫應(yīng)答，通過(guò)上述相同機(jī)理誘導(dǎo)自身抗原-反應(yīng)性T細(xì)胞進(jìn)入免疫異常狀態(tài)，從而引發(fā)各種自身免疫疾病。換句話(huà)說(shuō)，因?yàn)楫?dāng)活體免疫系統(tǒng)正常時(shí)，正常組織中未受刺激的抗原呈遞細(xì)胞(APC)不表達(dá)協(xié)同刺激分子，即使存在與自身抗原反應(yīng)的自身抗原-反應(yīng)T細(xì)胞，T細(xì)胞仍處于無(wú)應(yīng)答狀態(tài)而保持免疫耐受性。有人提出，免疫異常狀態(tài)下，協(xié)同刺激分子異常過(guò)度的持續(xù)表達(dá)，更多的自身抗原-反應(yīng)T細(xì)胞被激活，從而引起自身免疫疾病。最近基于這樣的觀(guān)點(diǎn)，有人嘗試通過(guò)調(diào)節(jié)協(xié)同刺激信號(hào)的傳遞，例如上述CD28/CTLA-4和CD80/CD86之間的信號(hào)傳遞，來(lái)治療各種自身免疫疾病。這些嘗試的結(jié)果還沒(méi)有詳細(xì)闡明協(xié)同刺激分子與相關(guān)分子之間的相互作用激活T細(xì)胞的機(jī)理。該機(jī)理中可能涉及其它未知分子。最近，鑒定出了一種新的類(lèi)似上述"CD28"和"CTLA-4"的協(xié)同刺激分子，認(rèn)為其實(shí)現(xiàn)對(duì)淋巴細(xì)胞例如T細(xì)胞的激活所必需的第二信號(hào)(協(xié)同刺激信號(hào))的轉(zhuǎn)導(dǎo)，并且實(shí)施與所述激活的淋巴細(xì)胞例如激活的T細(xì)胞的信號(hào)相伴的功能調(diào)節(jié)。該分子已經(jīng)被指定為AILIM(激活誘導(dǎo)型淋巴細(xì)胞免疫調(diào)制分子)(在人體，小鼠和大鼠體內(nèi)國(guó)際免疫學(xué)(Int.Immunol.)12巻，No.1，p.51-55，2000),也稱(chēng)作ICOS(可誘導(dǎo)型共同刺激物)(人體內(nèi)自然(Nature),397巻，No.6716，p.263-266,1999)。另一方面，最近已經(jīng)鑒定了稱(chēng)為B7h，B7RP-1，GL50或LICOS的新的分子，它們是與該協(xié)同刺激傳遞分子AILIM(ICOS)相互作用的配體(AILIM配體)(自然(Nature),402巻，No.6763，p.827-832，1999;天然藥物(NatureMedicine),5巻，No.12，p.1365-1369，1999;免疫學(xué)雜志(J.Immunology),164巻，p.1653-1657,2000;當(dāng)今生物學(xué)(Curr.Biol.)，10巻，No.6，p.333-336,2000)。將這兩類(lèi)新的分子，即AILIM(ICOS)和B7RP-l(B7h，GL50,LICOS)鑒定為上述淋巴細(xì)胞例如T細(xì)胞的激活以及激活的T細(xì)胞的功能控制所必需的協(xié)同刺激信號(hào)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑表明，除了已知的第一和第二信號(hào)途徑，即CD28和CD80(B7-l)/CD86(B7-2)之間的以及CTLA4和CD80(B7-1)/CD86(B7-2)之間的轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之外，還存在通過(guò)AILIM(ICOS)和B7RP-l(B7h,GL50，LICOS)之間相互作用而轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)的新的第三途徑。有關(guān)這些新分子的生物學(xué)功能，通過(guò)所迷分子傳導(dǎo)第三協(xié)同刺激信號(hào)而對(duì)淋巴細(xì)胞例如T細(xì)胞的功能控制，以及新的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和疾病之間的關(guān)系的研究正在進(jìn)展之中(免疫學(xué)雜志(J.Immunol.),166(1)，l頁(yè)，2001;免疫學(xué)雜志(J.Immunol.)，165(9),5035頁(yè),2000;Biochem.Biophys.Res.Commun.,276(1)，335頁(yè)，2000;免疫學(xué)(Immunity),13(1)，95頁(yè)，2000;實(shí)驗(yàn)藥物學(xué)雜志(J.Exp.Med.)，192(1),53頁(yè)，2000;歐洲免疫學(xué)雜志(Eur.J.Immunol.)，30(4)，1040頁(yè)，2000;WO01/15732)。
發(fā)明內(nèi)容具體地說(shuō)，本發(fā)明的目的是公開(kāi)^皮認(rèn)為類(lèi)似于"CD28"和"CTLA-4"的新分子AILIM,作為傳遞淋巴細(xì)胞例如T細(xì)胞的激活所必需的第二信號(hào)(協(xié)同刺激信號(hào))并且通過(guò)與該信號(hào)一起作用來(lái)控制激活的淋巴細(xì)胞例如激活的T細(xì)胞的功能的生物學(xué)功能；公開(kāi)AILIM的表達(dá)與疾病之間的關(guān)系；以及提供根據(jù)AILIM的表達(dá)方式能抑制各種疾病的發(fā)展的方法和藥物或通過(guò)使用所述醫(yī)藥方法(例如單克隆抗體和低分子量化合物等藥物)控制AILIM的生物功能來(lái)治療所述疾病的方法和藥物。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明人主動(dòng)繼續(xù)研究抗哺乳動(dòng)物AILIM(特別是人AILIM)的人抗體(特別是人單克隆抗體)，結(jié)果通過(guò)用AILIM(具體地是表達(dá)人AILIM的細(xì)胞的細(xì)胞膜級(jí)分)對(duì)應(yīng)用基因重組技術(shù)制備的轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行免疫以產(chǎn)生人抗體，在世界上第一次成功地制備了結(jié)合人AILIM的各種單克隆抗體，特別是能調(diào)節(jié)人AILIM介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的那些與人AILIM結(jié)合型單克隆抗體。因?yàn)楸景l(fā)明的抗體(特別是單克隆抗體)是從人體得到的，所以它們根本會(huì)在宿主中由于抗人的免疫原性，HAMA(人抗小鼠抗原性)而誘導(dǎo)任何嚴(yán)重8的免疫排斥，所述免疫原性是使用含有從非人哺乳動(dòng)物例如'J、鼠得到的抗體的抗體藥物進(jìn)行治療時(shí)的一個(gè)大問(wèn)題(副作用)，因此本發(fā)明大大提高了抗體作為藥物的價(jià)值。因此，本發(fā)明的結(jié)合哺乳動(dòng)物AILIM(特別是人AILIM)的人抗體(特別是人單克隆抗體)和含有所述人抗體(特別是^v單克隆抗體)的藥物組合物可用作不誘導(dǎo)宿主中HAMA所致免疫排斥而控制各種生理反應(yīng)的藥物，所述生理反應(yīng)相關(guān)于A(yíng)ILIM介導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)向AILIM-表達(dá)細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)(例如AILIM-表達(dá)細(xì)胞的增殖，AILIM-表達(dá)細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生，AILIM-表達(dá)細(xì)胞的免疫胞解或凋亡，誘導(dǎo)對(duì)AILIM-表達(dá)細(xì)胞的抗體-依賴(lài)性細(xì)胞毒性的活性，等等)，和/或所述抗體和組合物可用作抑制和預(yù)防各種與所述AILIM介導(dǎo)之信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的疾病的癥狀發(fā)生和/或發(fā)展的藥物，以及可用作治療或預(yù)防所述疾病的藥物。具體地說(shuō)，本發(fā)明的藥物組合物能控制(抑制或刺激)AILIM-表達(dá)細(xì)胞的增殖或AILIM-表達(dá)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子(例如Y干擾素或白細(xì)胞介素-4等)，從而能夠抑制各種病理癥狀和治療或預(yù)防與AILIM介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的生理現(xiàn)象引起的各種疾病。應(yīng)用本發(fā)明的藥物組合物能抑制，預(yù)防和/或治療例如，各種疾病(例如，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化，自身免疫性曱狀腺炎，過(guò)敏性接觸型皮炎，慢性炎性皮膚病例如扁平苔蘚，系統(tǒng)性紅斑狼癡，胰島素依賴(lài)性糖尿病，牛皮癬等等)，這些疾病分為自身免疫疾病或過(guò)敏性疾病(特別是細(xì)胞免疫引起的自身免疫疾病和遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng))；關(guān)節(jié)病(例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)和骨關(guān)節(jié)炎(OA))，炎癥(例如肝炎)；移植物抗宿主反應(yīng)(GVH反應(yīng))；移植物抗宿主病(GVHD);伴隨組織(例如皮膚，角膜，骨等組織)或器官(肝臟，心臟，肺，腎，胰臟等)移植(同種移植或異種移植)的免疫排斥；外來(lái)抗原或自身抗原引發(fā)的免疫應(yīng)答(例如抗所述抗原的抗體的產(chǎn)生，細(xì)胞增殖，細(xì)胞因子的產(chǎn)生)；以及可能由異常腸免疫引起的疾病(具體是炎性腸疾病(特別是結(jié)腸(clone)病和潰瘍性結(jié)腸炎)和食物過(guò)敏反應(yīng))。此外，在抑制/治療上述組織和器官的移植伴隨的免疫排斥的領(lǐng)域，通過(guò)將本發(fā)明的藥物組合物與已知在這類(lèi)移植治療中用于抑制免疫排斥的藥物聯(lián)合應(yīng)用，可能會(huì)加強(qiáng)已知免疫抑制劑對(duì)移植排斥作用的抑制效果。此外，本發(fā)明的藥物組合物能夠用于治療或預(yù)防任何能用各種甾族化合物消炎的炎癥。本發(fā)明的藥物組合物能夠用于炎癥疾病，例如各種關(guān)節(jié)炎伴隨的炎癥(例如，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎)，肺炎，肝炎(包括病毒性肝炎)，傳染病伴隨的炎癥，炎性結(jié)腸病，小腸性腸炎，腎炎(腎小^求腎炎伴隨的炎癥，腎纖維化)，胃炎，脈管炎，胰腺炎，腹膜炎，支氣管炎，心肌炎，腦炎，局部缺血后再灌注損傷(心肌缺血再灌注損傷)中的炎癥，組織和器官移植之后免疫排斥所致炎癥，燒傷，各種皮膚炎癥(牛皮癬，過(guò)敏接觸型皮炎，作為慢性炎癥皮膚病的扁平苔蘚)，多器官衰竭中的炎癥，PTCA或PTCR術(shù)后炎癥，和動(dòng)脈硬化伴隨的炎癥，和自身免疫性曱狀腺炎。此外，通過(guò)應(yīng)用是本發(fā)明一個(gè)方面用于鑒定結(jié)合AILIM或AILIM配體的物質(zhì)的方法，使得有有可能篩選具有通過(guò)結(jié)合AILIM或AILIM配體來(lái)調(diào)節(jié)它們的相互作用所介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)治療各種疾病的潛在活性的藥物(化學(xué)合成化合物或抗體)。具體地說(shuō)，本發(fā)明是下面(1)至(108)描述的本發(fā)明。(1)結(jié)合AILIM的人抗體。(2)(l)的人抗體，其中所述AILIM從人體得到。(3)結(jié)合AILIM或其一部分的人單克隆抗體。(4)(3)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述AILIM從人體得到。(5)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有抑制通過(guò)AILIM介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞中的活性。(6)(5)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述抑制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活性是下面的(a)或(b):(a)抑制AILIM-表達(dá)細(xì)胞增殖的活性，或(b)抑制細(xì)胞因子從AILIM-表達(dá)細(xì)胞產(chǎn)生的活性。(7)(6)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述細(xì)胞因子是Thl-型或Th2-型T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子之一。(8)(7)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述細(xì)胞因子是y干擾素或白細(xì)胞介素-4。(9)(5)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有阻止混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的活性。(10)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有10誘導(dǎo)通過(guò)AILIM介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞中的活性。(11)(10)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述誘導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活性是下面的(a)或(b):(a)誘導(dǎo)AILIM-表達(dá)細(xì)胞增殖的活性，或(b)誘導(dǎo)細(xì)胞因子從AILIM-表達(dá)細(xì)胞產(chǎn)生的活性。(12)(11)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述細(xì)胞因子是Thl-型或Th2-型T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子之一。(13)(12)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述細(xì)胞因子是Y干擾素或白細(xì)胞介素-4。(14)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有誘導(dǎo)對(duì)AILIM-表達(dá)細(xì)胞的抗體-依賴(lài)性細(xì)胞毒活性，和/或AILIM-表達(dá)細(xì)胞的免疫胞解或凋亡的活性。(15)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述單克隆抗體和AILIM之間的結(jié)合速度常數(shù)(ka)是1.0X103(1/M.秒)或更大。(16)(15)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述結(jié)合速度常數(shù)(ka)是1.0X104(1/M.秒)或更大。(17)(16)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述結(jié)合速度常數(shù)(ka)是1.0X105(1/M.秒)或更大。(18)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述單克隆抗體和AILIM之間的解離速度常數(shù)(kd)是1.0X10、l/秒)或更小。(19)(18)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述解離速度常數(shù)(kd)是1.oxio-4(i/秒)或更小。(20)(19)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述解離速度常數(shù)(kd)是1.0X10、l/秒)或更小。(21)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述單克隆抗體和AILIM之間的解離常數(shù)(Kd)是1.0X10，M)或更小。(22)(21)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述解離常數(shù)(Kd)是1.0X10—7(M)或更小。(23)(22)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述解離常數(shù)(Kd)是1.0X10'8(M)或更小。(24)(23)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述解離常數(shù)(Kd)是1.ii0X10-9(M)或更小。(25)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中編碼所述人單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的V區(qū)DNA是從人免疫球蛋白重鏈V基因片段1-02或3-13衍生的。(26)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中編碼所述人單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的V區(qū)DNA是從人免疫球蛋白輕鏈V基因片段L5或A27衍生的。(27)(25)或(26)的人單克隆抗體或其一部分，其中編碼所述人單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的V區(qū)DNA是從人免疫球蛋白重鏈V基因片段1-02或3-13衍生的，并且其中編碼所述人單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的V區(qū)DNA是從人免疫球蛋白輕鏈V基因片段L5或A27衍生的。(28)(27)的人單克隆抗體或其一部分，其中編碼所述人單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的V區(qū)DNA是從人免疫球蛋白重鏈V基因片段1-02衍生的，并且其中編碼所述人單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的V區(qū)DNA是從人免疫球蛋白輕鏈V基因片段L5衍生的。(29)(27)的人單克隆抗體或其一部分，其中編碼所述人單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的V區(qū)DNA是從人免疫球蛋白重鏈V基因片段3-13衍生的，并且其中編碼所述人單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的V區(qū)DNA是從人免疫球蛋白輕鏈V基因片段A27衍生的。(30)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體的重鏈可變區(qū)具有下面(a)至(f)任一項(xiàng)中定義的氨基酸序列(a)包括SEQIDNO:28的20-117位氨基酸的氨基酸序列，(b)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:28的20-117位氨基酸的氨基酸序列，(c)包括SEQIDNO:32的20-116位氨基酸的氨基酸序列，(d)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:32的20-U6位氨基酸的氨基酸序列，(e)包括SEQIDNO:36的20'116位氨基酸的氨基酸序列，(f)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:36的20-116位氨基酸的氨基酸序列。(31)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體的重鏈多肽具有下面(a)至(f)任一項(xiàng)中定義的氨基酸序列(a)包括SEQIDNO:28的20-470位氨基酸的氨基酸序列，(b)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:28的20-470位氨基酸的氨基酸序列，(c)包括SEQIDNO:32的20-470位氨基酸的氨基酸序列，(d)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:32的20-470位氨基酸的氨基酸序列，(e)包括SEQIDNO:36的20-470位氨基酸的氨基酸序列，(f)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:36的20-470位氨基酸的氨基酸序列。(32)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)具有下面(a)至(f)任一項(xiàng)中定義的氨基酸序列(a)包括SEQIDNO:30的23-116位氨基酸的氨基酸序列，(b)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:30的23-116位氨基酸的氨基酸序列，(c)包括SEQIDNO:34的21-116位氨基酸的氨基酸序列，(d)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:34的21-116位氨基酸的氨基酸序列，(e)包括SEQIDNO:38的21-116位氨基酸的氨基酸序列，(t)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:38的21-116位氨基酸的氨基酸序列。(33)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體的輕鏈多肽具有下面(a)至(f)任一項(xiàng)中定義的氨基酸序列13(a)包括SEQIDNO:30的23-236位氨基酸的氨基酸序列，(b)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:30的23-236位氨基酸的氨基酸序列，(c)包括SEQIDNO:34的21-236位氨基酸的氨基酸序列，(d)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:34的21-236位氨基酸的氨基酸序列，(e)包括SEQIDNO:38的21-236位氨基酸的氨基酸序列，或(f)包括其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的SEQIDNO:38的21-236位氨基酸的氨基酸序列。(34)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面的特征(a)和(b):(a)重鏈可變區(qū)具有包括SEQIDNO:28的20-117位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和(b)輕鏈可變區(qū)具有包括SEQIDNO:30的23-116位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。(35)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面的特征(a)和(b):(a)重鏈多肽具有SEQIDNO:28的20-470位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和(b)輕鏈多肽具有SEQIDNO:30的23-236位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。(36)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面的特征(a)和(b):(a)重鏈可變區(qū)具有包括SEQIDNO:32的20-116位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和(b)輕鏈可變區(qū)具有包括SEQIDNO:34的21-116位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。(37)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面14的特征(a)和(b):(a)重鏈多肽具有包括SEQIDNO:32的20-470位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和(b)輕鏈多肽具有包括SEQIDNO:34的21-236位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。(38)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面的特征(a)和(b):(a)重鏈可變區(qū)具有包括SEQIDNO:36的20-116位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和(b)輕鏈可變區(qū)具有包括SEQIDNO:38的21-116位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。(39)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面的特征(a)和(b):(a)重鏈多肽具有包括SEQIDNO:36的20-470位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和(b)輕鏈多肽具有包括SEQIDNO:38的21-236位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。(40)(3)-(29)任一項(xiàng)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體是從能產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物產(chǎn)生的單克隆抗體。(41)(40)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體是通過(guò)用AILIM-表達(dá)細(xì)胞，從所述細(xì)胞衍生的膜級(jí)分，構(gòu)成AILIM的完整分子或其一部分，或編碼AILIM或其一部分的基因?qū)δ軌虍a(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物進(jìn)行免疫而獲得的。(42)(40)或(41)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物是轉(zhuǎn)基因小鼠。(43)編碼選自下面(a)-(f)的多肽的DNA或其一部分(a)包括SEQIDNO:28的氨基酸20-117的氨基酸序列的多肽，(b)包括SEQIDNO:30的氨基酸23-116的氨基酸序列的多肽，(c)包括SEQIDNO:32的氨基酸20-116的氨基酸序列的多肽，(d)包括SEQIDNO:34的氨基酸21-116的氨基酸序列的多肽，(e)包括SEQIDNO:36的氨基酸20-116的氨基酸序列的多肽，15:f)包括SEQIDNO:38的氨基酸21-116的氨基酸序列的多肽。:44)編碼選自下面(a)-(f)的多肽的DNA或其一部分:a)包括SEQIDNO:28的氨基酸20-470的氨基酸序列的多肽，:b)包括SEQIDNO:30的氨基酸23-236的氨基酸序列的多肽，:c)包括SEQIDNO:32的氨基酸20-470的氨基酸序列的多肽，:d)包括SEQIDNO:34的氨基酸21-236的氨基酸序列的多肽，:e)包括SEQIDNO:36的氨基酸20-470的氨基酸序列的多肽，:f)包括SEQIDNO:38的氨基酸21-236的氨基酸序列的多肽。:45)選自下面(a)-(f)的DNA或其一部分a)包括SEQIDNO:27的核芬酸126-419的核芬酸序列的DNA，:b)包括SEQIDNO:29的核苦酸105-386的核苷酸序列的DNA，c)包括SEQIDNO:31的核苷酸151-441的核苷酸序列的DNA，:d)包括SEQIDNO:33的核苷酸88-375的核苷酸序列的DNA，e)包括SEQIDNO:35的核苷酸153-443的核香酸序列的DNA,和:f)包括SEQIDNO:37的核苷酸93-380的核普酸序列的DNA。46)選自下面(a)-(f)的DNA或其一部分a)包括SEQIDNO:27的核苷酸69-1481的核苷酸序列的DNA，:b)包括SEQIDNO:29的核苷酸39-749的核苦酸序列的DNA,c)包括SEQIDNO:31的核香酸94-1506的核香酸序列的DNA，:d)包括SEQIDNO:33的核苷酸28-738的核普酸序列的DNA，e)包括SEQIDNO:35的核香酸96-1508的核普酸序列的DNA,和:f)包括SEQIDNO:37的核苦酸33-743的核苦酸序列的DNA。:47)包含(43)-(46)任一項(xiàng)的DNA的載體。:48)包含下面(a)-(c)任一項(xiàng)的DNA的(47)的載體:a)包括SEQIDNO:27的核苷酸126-419的核香酸序列的DNA，:b)包括SEQIDNO:31的核普酸151-441的核普酸序列的DNA,或:c)包括SEQIDNO:35的核苷酸153-443的核-芬酸序列的DNA。:49)包含下面(a)-(c)任一項(xiàng)的DNA的(47)的載體:a)包括SEQIDNO:27的核苷酸69-1481的核苷酸序列的DNA，:b)包括SEQIDNO:31的核苷酸94-1506的核普酸序列的DNA,或:c)包括SEQIDNO:35的核苷酸96-1508的核苷酸序列的DNA。(50)包含下面(a)-(c)任一項(xiàng)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:29的核苷酸105-386的核苷酸序列的DNA，(b)包括SEQIDNO:33的核普酸88-375的核香酸序列的DNA,或(c)包括SEQIDNO:37的核芬酸93-380的核苦酸序列的DNA。(51)包含下面(a)-(c)任一項(xiàng)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:29的核香酸39-749的核苷酸序列的DNA,(b)包括SEQIDNO:33的核香酸28-738的核苷酸序列的DNA，或(c)包括SEQIDNO:37的核苷酸33-743的核苷酸序列的DNA。(52)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:27的核香酸126-419的核香酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:29的核苷酸105-386的核苷酸序列的DNA。(53)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:27的核苦酸69-1481的核普酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:29的核苦酸39-749的核苷酸序列的DNA。(54)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:31的核苷酸151-441的核苷酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:33的核苦酸88-357的核苦酸序列的DNA。(55)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:31的核苷酸94-1506的核香酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:33的核苷酸28-738的核苷酸序列的DNA。(56)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:35的核苷酸153-443的核香酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:37的核苷酸93-380的核苷酸序列的DNA。(57)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:35的核苷酸96-1508的核苷酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:37的核苷酸33-743的核苷酸序列的DNA。(58)產(chǎn)生(3)-(42)任一項(xiàng)的人單克隆抗體的細(xì)胞。(59)(58)的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是通過(guò)融合來(lái)自能產(chǎn)生所述人單克隆抗體的哺乳動(dòng)物的B細(xì)胞和來(lái)自哺乳動(dòng)物的骨髓瘤細(xì)胞而獲得的融合細(xì)胞。(60)通過(guò)轉(zhuǎn)移下面(a)中描述的DNA或包含所述DNA的載體，下面(b)中描述的DNA或包含所述DNA的載體，或下面(a)和(b)中描述的兩個(gè)DNA或包含所述兩個(gè)DNA的載體而轉(zhuǎn)化的基因重組宿主(a)編碼結(jié)合人AILIM的單克隆抗體的重鏈多肽或其一部分的DNA;或(b)編碼結(jié)合人AILIM的單克隆抗體的輕鏈多肽或其一部分的DNA。(61)(60)的基因重組宿主，其中所述單克隆抗體是人單克隆抗體。(62)(60)或(61)的基因重組宿主，其中所述宿主是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。(63)(60)或(61)的基因重組宿主，其中所述宿主是哺乳動(dòng)物受精卵。(64)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中所述重鏈多肽選自下面(a)-(c)的重鏈多肽之一(a)包括SEQIDNO:28的氨基酸20-117的氨基酸序列的重鏈多肽，(b)包括SEQIDNO:32的氨基酸20-116的氨基酸序列的重鏈多肽，和(c)包括SEQIDNO:36的氨基酸20-116的氨基酸序列的重鏈多肽。(65)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中所述重鏈多肽選自下面(a)-(c)的重鏈多肽之一(a)包括SEQIDNO:28的氨基酸20-470的氨基酸序列的重鏈多肽，(b)包括SEQIDNO:32的氨基酸20-470的氨基酸序列的重鏈多肽，和(c)包括SEQIDNO:36的氨基酸20-470的氨基酸序列的重鏈多肽。(66)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中所述輕鏈多肽選自下面(a)-(c)的輕鏈多肽之一(a)包括SEQIDNO:30的氨基酸23-116的氨基酸序列的輕鏈多肽，(b)包括SEQIDNO:34的氨基酸21-116的氨基酸序列的輕鏈多肽，和(c)包括SEQIDNO:38的氨基酸21-116的氨基酸序列的輕鏈多肽。(67)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中所述輕鏈多肽選自下面(a)-(c)的輕鏈多肽之一(a)包括SEQIDNO:30的氨基酸23-236的氨基酸序列的輕鏈多肽，(b)包括SEQIDNO:34的氨基酸21-236的氨基酸序列的輕鏈多肽，和(c)包括SEQIDNO:38的氨基酸21-236的氨基酸序列的輕鏈多肽。(68)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:28的氨基酸20-117的氨基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:30的氨基酸23-116的氨基酸序列的輕鏈多肽。(69)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:28的氨基酸20-470的氨基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:30的氨基酸23-236的氨基酸序列的輕鏈多肽。(70)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:32的氨基酸20-116的氨基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:34的氨基酸21-116的氨基酸序列的輕鏈多肽。(71)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:32的氨基酸20-470的氨基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:34的氨基酸21-236的氨基酸序列的輕鏈多肽。(72)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:36的氨基酸20-116的氨基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:38的氨基酸21-116的氨基酸序列的輕鏈多肽。(73)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:36的氨基酸20-470的氨基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:38的氨基酸21-236的氨基酸序列的輕鏈多肽。(74)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)-(c)任一項(xiàng)中定義的DNA:(a)包括SEQIDNO:27的核苷酸126-4]9的核香酸序列的DNA，(b)包括SEQIDNO:31的核苷酸151-441的核苷酸序列的DNA,和(c)包括SEQIDNO:35的核苷酸153-443的核普酸序列的DNA。(75)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)-(c)任一項(xiàng)中定義的DNA:(a)包括SEQIDNO:27的核香酸69-1481的核香酸序列的DNA,(b)包括SEQIDNO:31的核香酸94-1506的核香酸序列的DNA，和(c)包括SEQIDNO:35的核香酸96-1508的核苷酸序列的DNA。(76)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中編碼所述輕鏈多肽的DNA19是下面(a)-(c)任一項(xiàng)中定義的DNA:(a)包括SEQIDNO:29的核苷酸105-386的核苷酸序列的DNA，(b)包括SEQIDNO:33的核苷酸88-375的核苷酸序列的DNA,和(c)包括SEQIDNO:37的核普酸93-380的核普酸序列的DNA。(77)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(a)-(c)任一項(xiàng)中定義的DNA:(a)包括SEQIDNO:29的核苦酸39-749的核苷酸序列的DNA，(b)包括SEQIDNO:33的核普酸28-738的核苷酸序列的DNA，和(c)包括SEQIDNO:37的核苦酸33-743的核苷酸序列的DNA。(78)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA,編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包括SEQIDNO:27的核苷酸126-419的核香酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:29的核香酸105-386的核苷酸序列的DNA。(79)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA,編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包括SEQIDNO:27的核苷酸69-1481的核苷酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:29的核苷酸39-749的核芬酸序列的DNA。(80)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包3舌SEQIDNO:31的核芬酸151-441的核苷酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:33的核苷酸88-375的核苦酸序列的DNA。(81)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包括SEQIDNO:31的核香酸94-1506的核苷酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:33的核苷酸28-738的核苦酸序列的DNA。(82)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包括SEQIDNO:35的核苷酸153-443的核苷酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:37的核苷酸93-380的核苦酸序列的DNA。(83)(60)-(63)任一項(xiàng)的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA,編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包括SEQIDNO:35的核苷酸96-1508的核苦酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:37的核苷酸33-743的核苦酸序列的DNA。(84)(60)-(62)任一項(xiàng)，或(64)-(83)任一項(xiàng)的基因重組宿主(前提是排除所述宿主是受精卯的情況)產(chǎn)生的人單克隆抗體或其一部分。(85)含有(1)或(2)的人抗體和可藥用載體的藥物組合物。(86)含有(3)-(42)任一項(xiàng)的人單克隆抗體或其一部分和可藥用載體的藥物組合物。(87)含有(84)的人單克隆抗體或其一部分和可藥用載體的藥物組合物。(88)(85)-(87)任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來(lái)抑制AILIM介導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。(89)(85)-(87)任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來(lái)預(yù)防AILIM-表達(dá)細(xì)胞的增殖。(90)(85)-(87)任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來(lái)預(yù)防AILIM-表達(dá)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子。(91)(85)-(87)任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來(lái)誘導(dǎo)AILIM介導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。(92)(85)-(87)任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來(lái)誘導(dǎo)AILIM-表達(dá)細(xì)胞的增殖。(93)(85)-(87)任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來(lái)誘導(dǎo)AILIM-表達(dá)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子。(94)(85)-(87)任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來(lái)誘導(dǎo)針對(duì)AILIM-表達(dá)細(xì)胞的抗體-依賴(lài)性細(xì)胞毒活性，和/或針對(duì)AILIM-表達(dá)細(xì)胞的免疫胞解或凋亡。(95)用來(lái)阻止，治療或預(yù)防遲發(fā)型過(guò)敏的藥物組合物，含有在調(diào)節(jié)AILIM介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中有活性的物質(zhì)，和可藥用載體。(96)(95)的藥物組合物，其中所述物質(zhì)是一種蛋白物質(zhì)。(97)(96)的藥物組合物，其中所述蛋白物質(zhì)選自下面的物質(zhì)(a)結(jié)合AILIM的抗體或其一部分；(b)包括AILIM胞外區(qū)的全部或部分的多肽；(c)包括AILIM胞外區(qū)的全部或部分，以及免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)的全部或部分的融合多肽；和(d)結(jié)合AILIM的多肽。(98)(97)的藥物組合物，其中所述結(jié)合AILIM的抗體是(1)或(2)的人抗體。(99)(97)的藥物組合物，其中所述結(jié)合AILIM的抗體是(3)-(")任一項(xiàng)的人單克隆抗體。(100)(97)的藥物組合物，其中所述抗AILIM的抗體是(84)的人單克隆抗體。(101)(95)的藥物組合物，其中所述物質(zhì)是非蛋白物質(zhì)。(102)(101)的藥物組合物，其中所述非蛋白物質(zhì)是DNA，RNA，或一種化學(xué)合成的化合物。(103)—種鑒定結(jié)合AILIM或AILIM配體的物質(zhì)的方法，包括下面的步驟(a)制備不溶性載體，AILIM的全部胞外區(qū)或其一部分都固定在上面；(b)制備包括用發(fā)出可檢測(cè)信號(hào)的標(biāo)記材料標(biāo)記的AILIM配體的全部胞外區(qū)或其一部分的多肽；(c)使步驟(a)中的不溶性載體與步驟(b)中的多肽反應(yīng)；(d)使步驟(a)的不溶性載體，步驟(b)的多肽，以及所述物質(zhì)以任何順序相互反應(yīng)；(e)分別檢測(cè)步驟(c)中制備的復(fù)合體中包含的所述標(biāo)記材料發(fā)出的信號(hào)，和步驟(d)中制備的復(fù)合體中包含的所述標(biāo)記材料發(fā)出的信號(hào)；和(f)比較步驟(e)中檢測(cè)到的各個(gè)信號(hào)的大小。(104)—種鑒定結(jié)合AILIM或AILIM配體的物質(zhì)的方法，包括下面的步驟(a)制備不溶性載體，AILIM的全部胞外區(qū)或其一部分都固定在上面；(b)制備包括用發(fā)出可^r測(cè)信號(hào)的標(biāo)記材料標(biāo)記的AILIM的全部胞外22區(qū)或其一部分的多肽；(c)使步驟(a)中的不溶性載體與步驟(b)中的多肽反應(yīng)；(d)使步驟(a)的不溶性載體，步驟(b)的多肽，以及所述物質(zhì)以任何順序相互反應(yīng)；Ce)分別檢測(cè)步驟(c)中制備的復(fù)合體中包含的所述標(biāo)記材料發(fā)出的信號(hào)，和步驟(d)中制備的復(fù)合體中包含的所述標(biāo)記材料發(fā)出的信號(hào)；和(f)比較步驟(e)中檢測(cè)到的各個(gè)信號(hào)的大小。(105)(103)或(104)的方法，其中所述包括AILIM的全部胞外區(qū)或其一部分的多肽是一種包括AILIM的全部胞外區(qū)或其一部分，和免疫球蛋白重鏈的全部恒定區(qū)或其一部分的融合多肽。(106)(103)或(104)的方法，其中所述包括AILIM配體的全部胞外區(qū)或其一部分的多肽是一種包括AILIM配體的全部胞外區(qū)或其一部分，和免疫球蛋白重鏈的全部恒定區(qū)或其一部分的融合多肽。(107)(103)-(106)任一項(xiàng)的方法，其中所述AILIM是人AILIM。(108)(103)-(107)任一項(xiàng)的方法，其中所述AILIM配體是人AILIM配體。下面通過(guò)定義本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)詳細(xì)描述本發(fā)明。本文中"哺乳動(dòng)物"指人，牛，山羊，兔，小鼠，大鼠，倉(cāng)鼠和豚鼠；優(yōu)選指人，兔，大鼠，倉(cāng)鼠或小鼠并且特別優(yōu)選指人，大鼠，倉(cāng)鼠或小鼠。這里使用的術(shù)語(yǔ)"除人以外的哺乳動(dòng)物"和"非人哺乳動(dòng)物"彼此是同義詞，指上文定義的人之外的所有哺乳動(dòng)物。這里使用的術(shù)語(yǔ)"氨基酸"指自然界存在的每一種氨基酸，優(yōu)選根據(jù)下面給出的三字母縮寫(xiě)或單字母縮寫(xiě)描述的那些氨基酸甘氨酸(Gly/G),丙氨酸(Ala/A)，纈氨酸(Val/V),亮氨酸(Leu/L),異亮氨酸(Ile/L),絲氨酸(Ser/S),蘇氨酸(Thr/T)，天冬氨酸(Asp/D)，谷氨酸(Glu/E)，天冬酰胺(Asn/N),谷氨酰胺(Gln/Q)，賴(lài)氨酸(Lys/K),精氨酸(Arg/R)，半胱氨酸(Cys/C),蛋氨酸(Met/M)，苯丙氨酸(Phe/F)，酪氨酸(Tyr/Y)，色氨酸(Trp/W)，組氨酸(His/H)，脯氨酸(Pro/P)。這里使用的術(shù)語(yǔ)"AILIM"是激活誘導(dǎo)型淋巴細(xì)胞免疫調(diào)制分子的縮寫(xiě)，指具有先前報(bào)告中已經(jīng)描述的結(jié)構(gòu)和功能的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面分子，更優(yōu)選地，特別是來(lái)自人的AILIM(例如，國(guó)際免疫學(xué)(InternationalImmunology),12巻，No.1，p.51-55;基因庫(kù)登記號(hào):BAA82129(人)，23BAA82128(大鼠)，BAA82127(大鼠變種)，和BAA82126(小鼠))?；?，此AILIM也被稱(chēng)為ICOS(待審公開(kāi)的日本專(zhuān)利申請(qǐng)(JP-A)平11-29599,國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)W098/38216)，這些縮寫(xiě)指相同的分子。這里使用的"AILIM配體"指與所述協(xié)同刺激分子AILIM(ICOS)相互作用，并被稱(chēng)為B7h,B7RP-1，GL50或LICOS的細(xì)胞表面分子(自然(Nature),402巻,No.6763,p.827-832，1999;天然藥物(NatureMedicine),5巻,No.12，p.1365-1369,1999;免疫學(xué)雜志(J.Immunology),164巻，p.1653-1657,2000;當(dāng)今生物學(xué)(Curr.Biol.)，10巻，No.6，p.333-336,2000)。此外，這里使用的"AILIM"也包括與參考文獻(xiàn)中描述的各哺乳動(dòng)物的AILIM,特別優(yōu)選人AILIM，具有基本上相同的氨基酸序列的多肽。此外，與已經(jīng)報(bào)道過(guò)的大鼠AILIM變體(基因庫(kù)登記號(hào)BAA82127)相似的人AILIM變體也包括在本發(fā)明的"AILIM"之內(nèi)。這里使用的"AILIM配體"也具有上述相似意義。這里"具有基本上相同的氨基酸序列的多肽"指下文所述變體多肽。即，只要這些變體多肽具有基本上等價(jià)于天然型AILIM(特別優(yōu)選來(lái)自人的AILIM)的生物學(xué)性質(zhì)，則它們就是本發(fā)明的多肽。如具有天然型AILIM的氨基酸序列，且其中多個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選1-10個(gè)氨基酸殘基，最優(yōu)選1-5個(gè)氨基酸殘基被缺失和/或修飾，或已向其中添加多個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選1-10個(gè)氨基酸殘基，最優(yōu)選1-5個(gè)氨基酸殘基的那些變體。此外，它們可以是分子中具有所述多個(gè)氨基酸取代，缺失，修飾和添加的變體多肽。本發(fā)明中的"AILIM配體"也具有上述相似意義。除了基因重組技術(shù)之外，通過(guò)適當(dāng)?shù)厥褂帽?br>技術(shù)領(lǐng)域：
公知的方法例如化學(xué)合成方法，細(xì)胞培養(yǎng)方法等，或這些的改進(jìn)方法，能夠制備本發(fā)明中的AILIM(特別是人AILIM)和AILIM配體(特別是人AILIM配體)。根據(jù)常規(guī)方法(實(shí)驗(yàn)藥物:增刊，"遺傳工程手冊(cè)"(1992);等等)實(shí)現(xiàn)氨基酸的這些取代，缺失，或插入。用來(lái)制備上述突變多肽的方法的例子是合成寡核苷酸定點(diǎn)誘變(缺口雙鏈法)，用亞硝酸鹽或亞^L酸鹽處理隨^/L導(dǎo)入點(diǎn)突變的點(diǎn)誘變法，利用Bal31酶等制備缺失突變體的方法，盒式誘變，接頭分區(qū)方法，錯(cuò)摻方法，錯(cuò)配引物方法，DNA片段合成方法等等。24例如可以如下進(jìn)行合成寡核苷酸定點(diǎn)誘變(缺口雙鏈方法)。將要誘變的區(qū)克隆到具有琥珀突變的M13噬菌體載體中來(lái)制備單鏈?zhǔn)删wDNA。通過(guò)限制酶處理將沒(méi)有琥珀突變的M13載體的RFIDNA線(xiàn)性化之后，將DNA與上述單鏈?zhǔn)删wDNA混合，變性，退火，從而形成"缺口雙鏈DNA"。其中導(dǎo)入了突變的合成寡核苷酸與該缺口雙鏈DNA雜交，并且通過(guò)DNA聚合酶和DNA連接酶進(jìn)行的反應(yīng)制備閉合環(huán)雙鏈DNA。用該DNA轉(zhuǎn)染錯(cuò)配修復(fù)活性有缺陷的大腸桿菌mutS細(xì)胞。用成熟噬菌體感染沒(méi)有抑制活性的大腸桿菌細(xì)胞，只篩選出沒(méi)有琥珀突變的噬菌體。用亞硝酸鹽導(dǎo)入點(diǎn)突變的方法應(yīng)用例如下文所述原理。如果用亞硝酸鹽處理DNA,44基經(jīng)脫氨基作用將腺。票呤變?yōu)榇吸S噪呤，胞嘧啶變?yōu)槟蜞奏?，鳥(niǎo)噪呤變?yōu)辄S噪呤。如果將脫氨基化DNA導(dǎo)入細(xì)胞，則"A:T"和"G:C，，分別被"G:C"和"A:T"置換，因?yàn)樵贒NA復(fù)制中，次黃嘌呤，尿嘧啶和黃噤呤分別與胞嘧啶，腺嘌呤和胸腺嘧啶形成》咸基對(duì)。實(shí)際上，用亞硝酸鹽處理過(guò)的單鏈DNA片段與"缺口雙鏈DNA"雜交，然后通過(guò)與合成寡核苷酸定點(diǎn)誘變(缺口雙鏈方法)相同的方法操作來(lái)分離突變抹。另外，"AILIM"在這里也包括所述AILIM的"一部分"。這里，"一部分"指包括上面定義的AILIM氨基酸序列的任何部分序列的多肽。優(yōu)選地，所述部分指上面定義的AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)的胞外區(qū)或其任何部分。本發(fā)明中的"AILIM配體"也具有上述相似意義。所述AILIM的"部分"(優(yōu)選AILIM的胞外區(qū)或其任何部分)可根據(jù)下述本領(lǐng)域公知方法或其改良法，經(jīng)基因重組技術(shù)或化學(xué)合成，或使用蛋白水解酶適當(dāng)裂解從細(xì)胞培養(yǎng)分離的AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)等等而制備。通過(guò)上述相似方法也可以制備"AILIM配體的部分"。本發(fā)明的"人抗體"是結(jié)合上面定義的AILIM或其一部分(特別優(yōu)選來(lái)自人的AILIM或其一部分)的人抗體。具體地說(shuō)，它指來(lái)自人的多克隆抗體(人多克隆抗體，人抗血清)或來(lái)自人的單克隆抗體(人單克隆抗體)。本發(fā)明的"人單克隆抗體，，是結(jié)合上面定義的AILIM或其一部分(特別優(yōu)選來(lái)自人的AILIM或其一部分)的人單克隆抗體。更具體地說(shuō)，包括重鏈(H-鏈)的可變區(qū)和恒定區(qū)，和輕鏈(L-鏈)的可變25區(qū)和恒定區(qū)的所有區(qū)都由編碼所述人免疫球蛋白的基因衍生的人免疫球蛋白組成。L-鏈舉例來(lái)說(shuō)是人K鏈或人入鏈。本發(fā)明的結(jié)合AILIM(特別優(yōu)選來(lái)自人的AILIM)或其一部分的人單克隆抗體是具有上述(5)-(42)或(84)任一項(xiàng)中定義的特征的人單克隆抗體。更具體地說(shuō)，包括具有實(shí)施例和附圖中描述的各種特征和工業(yè)實(shí)用性的各種人單克隆抗體。本發(fā)明的人單克隆抗體的優(yōu)選實(shí)施方案是上述(5)-(42)或(84)任一項(xiàng)中定義的結(jié)合AILIM或其一部分的人單克隆抗體。最優(yōu)選的實(shí)施方案是上述(30)或(39)中描述的結(jié)合人AILIM的人單克隆抗體。通過(guò)用下述任何免疫原(抗原)免疫下面的產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物能夠制備本發(fā)明的"人單克隆抗體"?；蛉斯そ⒌募?xì)胞系；AILIM(特別優(yōu)選來(lái)自人的AILIM)的基因重組細(xì)胞；(c)通過(guò)將上述(a)或(b)中的細(xì)胞溶解而獲得的細(xì)胞溶胞產(chǎn)物，或從所述細(xì)胞溶胞產(chǎn)物純化的AILIM(特別優(yōu)選來(lái)自人的AILIM)的多肽片段；(d)利用基因重組技術(shù)制備的以可溶性多肽形式表達(dá)上述AILIM(特別優(yōu)選來(lái)自人的AILIM)的一部分(特別優(yōu)選胞外區(qū)或其任何優(yōu)選的肽)的基因重組細(xì)月包；(e)通過(guò)培養(yǎng)上述(d)中基因重組細(xì)胞獲得的培養(yǎng)上清液或從該培養(yǎng)上清液純化的AILIM(特別優(yōu)選來(lái)自人的AILIM)的胞外區(qū)多肽(可溶性AILIM);或①化學(xué)合成的AILIM(特別優(yōu)選來(lái)自人的AILIM)的一部分(特別優(yōu)選胞外區(qū)或其任何優(yōu)選的肽)。此外，通過(guò)培養(yǎng)"基因重組宿主"[這里，所述宿主是除了受精卵之外的真核細(xì)胞(優(yōu)選哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如CHO，淋巴細(xì)胞，和骨髓瘤細(xì)胞)]，從培養(yǎng)上清液也可以獲得本發(fā)明的單克隆抗體，其中所述宿主可以應(yīng)用基因重組技術(shù)將編碼本發(fā)明人單克隆抗體的各重鏈和輕鏈的cDNA(優(yōu)選包含所述cDNA的載體)轉(zhuǎn)化宿主來(lái)制備，其產(chǎn)生基因重組型人單克隆抗體。具體地說(shuō)，通過(guò)培養(yǎng)本發(fā)明的上述(60)-(62)或(64)-(80)任一項(xiàng)中描述的基因重組宿主能夠獲得本發(fā)明的單克隆抗體(這里，所述宿主是除了受精卵之外的真核細(xì)胞(優(yōu)選哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如CHO，淋巴細(xì)胞，和骨髓瘤細(xì)胞))。另夕卜，本發(fā)明的人單克隆抗體可以是具有屬于IgG(IgGl,IgG2，IgG3，和IgG4),IgM，IgA(IgAl和IgA2)，IgD或IgE的任何同種型的人單克隆抗體。優(yōu)選地，所述單克隆抗體屬于IgG(IgGl，IgG2，IgG3，和lgG4),更優(yōu)選IgGl,IgG2或IgG4。根據(jù)已知的常用方法，用上述(a)-(f)中任一種免疫原(抗原)免疫能產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物例如下述能產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠，能夠制備本發(fā)明的人單克隆抗體。即，例如，根據(jù)情況要求用與弗氏佐劑混合的所述抗原免疫能產(chǎn)生人抗體的所述轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物。從所述免疫動(dòng)物采集血清可以獲得多克隆抗體。使從所述免疫動(dòng)物分離的所述抗體產(chǎn)生細(xì)胞與不能產(chǎn)生自身抗體的骨髓瘤細(xì)胞制備融合細(xì)胞(雜交瘤)，并且克隆所述雜交瘤，從而篩選產(chǎn)生對(duì)用來(lái)免疫所述哺乳動(dòng)物的抗原具有特異親和力的多克隆抗體的克隆，最終制備單克隆抗體。更具體地說(shuō)，如下所述制備單克隆抗體。即，通過(guò)皮內(nèi)，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)，足墊中，或腹膜內(nèi)將上面(aHc)中提到的任何免疫原注射一次至幾次，或?qū)⑺雒庖咴浦驳剿霾溉閯?dòng)物體內(nèi)，來(lái)免疫所述產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物(特別優(yōu)選"產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠，，)。通常，第一次接種之后，每隔1-14天對(duì)每只小鼠接種一至四次。在最后一次接種的約1-5天后從這樣免疫過(guò)的哺乳動(dòng)物獲得產(chǎn)生抗體的細(xì)胞。接種的次數(shù)和時(shí)間間隔可以適當(dāng)根據(jù)，例如，使用的免疫原的特性而安排。通過(guò)Kohler和Milstein的方法(自然(Nature)，256巻，p.495-497(1975))或其改良法可以制備分泌人單克隆抗體的雜交瘤。也就是說(shuō)，從根據(jù)上述免疫的產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物獲得脾，淋巴結(jié)，骨髓或扁桃體(優(yōu)選脾)，使其中含有的產(chǎn)生抗體的細(xì)胞與優(yōu)選從哺乳動(dòng)物例如小鼠，大鼠，豚鼠，倉(cāng)鼠，兔或人，更優(yōu)選小鼠，大鼠或人獲得的沒(méi)有產(chǎn)生自身抗體能力的骨髓瘤融合，來(lái)制備雜交瘤。例如，來(lái)自小鼠的骨髓瘤P3/X63-AG8.653(ATCCNo.CRL-1580),P3/NSI/l-Ag4-l(NS-l)，P3/X63-Ag8.U1(P3U1)，SP2/0-Agl4(Sp2/0，Sp2)，NSO,PAI,F0,或BW5147，來(lái)自大鼠的骨髓瘤210RCY3-Ag.2.3.，或來(lái)自人的骨髓瘤U-266AR1，GM1500-6TG-A1-2,UC729-6，CEM-AGR,D1R11或CEM-T15可以作為用于細(xì)胞融合的骨髓瘤。通過(guò)，例如，在微量滴定板中培養(yǎng)細(xì)胞和通過(guò)測(cè)定有雜交瘤生長(zhǎng)的孔中的培養(yǎng)上清液對(duì)用于上述接種的免疫原的反應(yīng)性，可以篩選產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞(例如，雜交瘤)，所用方法如酶免疫方法分析例如》文射免疫分析(RIA)和酶聯(lián)免疫-溶劑試驗(yàn)(ELISA)。通過(guò)體外或體內(nèi)，例如在小鼠，大鼠，豚鼠，倉(cāng)鼠或兔，優(yōu)選小鼠或大鼠，更優(yōu)選小鼠的腹水中培養(yǎng)雜交瘤，并且從所得培養(yǎng)上清液或哺乳動(dòng)物的腹水分離抗體，能夠從雜交瘤產(chǎn)生單克隆抗體。通過(guò)下面的方法能夠大規(guī)模制備本發(fā)明的單克隆抗體(1)從所述雜交瘤分別克隆出編碼所述單克隆抗體的重鏈和輕鏈的相應(yīng)基因(cDNA等)；(2)將分別編碼重鏈和輕鏈的克隆基因插入不同載體或單個(gè)載體中，以制備表達(dá)載體；(3)將所述表達(dá)載體轉(zhuǎn)移到目標(biāo)非人哺乳動(dòng)物(例如山羊)的受精卵中；(4)將轉(zhuǎn)移有所述基因的所述受精卵移植到代孕母體的子宮中獲得嵌合非人動(dòng)物；(5)通過(guò)進(jìn)一步使所述嵌合山羊與另一個(gè)非人哺乳動(dòng)物交配，產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物(牛，山羊，綿羊或豬)，其中編碼重鏈和輕鏈的基因已分別插入到內(nèi)源基因中；和(6)從所述轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物的奶中大規(guī)模獲得從所述人單克隆抗體基因衍生的單克隆抗體(NikkeiScience,1997年4月，p.78-84)。根據(jù)，例如，要培養(yǎng)的細(xì)胞的性質(zhì)，研究目的，和培養(yǎng)方法的各種條件，通過(guò)應(yīng)用公知的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基或從已知用于培養(yǎng)，維持和貯存雜交瘤的基礎(chǔ)培養(yǎng)基衍生的任何營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，能夠進(jìn)行產(chǎn)單克隆抗體的細(xì)胞的體外培養(yǎng)，來(lái)在培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生單克隆抗體?；A(chǔ)培養(yǎng)基的例子是低4丐濃度培養(yǎng)基，例如Ham，F(xiàn)12培養(yǎng)基，MCDB153培養(yǎng)基，或低釣濃度MEM培養(yǎng)基，和高鈣濃度培養(yǎng)基，例如MCDB104培養(yǎng)基，MEM培養(yǎng)基，D-MEM培養(yǎng)基，RPMI1640培養(yǎng)基，ASF104培養(yǎng)基，或RD培養(yǎng)基?；A(chǔ)培養(yǎng)基可以根據(jù)目的含有，例如，血清，激素，28細(xì)胞因子，和/或各種無(wú)機(jī)或有機(jī)物。通過(guò)飽和硫酸銨沉淀，優(yōu)球蛋白沉淀方法，己酸方法，辛酸方法，離子交換層析(DEAE或DE52)，使用抗免疫球蛋白柱或蛋白A柱的親和層析，可以從上述培養(yǎng)上清液或腹水中分離和純化單克隆抗體。本發(fā)明的人單克隆抗體包括由重鏈和/或輕鏈組成的人單克隆抗體，其中每條鏈的氨基酸序列中有一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基缺失，被取代或添加。這里，"多個(gè)氨基酸殘基"指多個(gè)氨基酸，特別是1-10個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選1-5個(gè)氨基酸殘基。通過(guò)部分改變編碼本發(fā)明的人單克隆抗體的氨基酸序列的堿基序列，可以向所述氨基酸序列引入如上所述部分修飾(缺失，取代，插入或添加)。所述對(duì)堿基序列的部分改變可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法使用已知的定點(diǎn)誘變技術(shù)(美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA),81巻，p.5662-5666，1984)導(dǎo)入。根據(jù)公開(kāi)的文獻(xiàn)可以制備"轉(zhuǎn)基因的產(chǎn)生人抗體的非人哺乳動(dòng)物"，特別是產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠，其是一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案(自然遺傳(NatureGenetics),7巻，p,13-21,1994;自然遺傳(NatureGenetics),15巻，p.146-156,1997;國(guó)際公開(kāi)號(hào)平4-504365的公開(kāi)的日文譯本；國(guó)際公開(kāi)號(hào)平7-509137的公開(kāi)的日文譯本；NikkeiScience,1995年6月，p.40-50;國(guó)際專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)W094/25585;自然(Nature),368巻，p.856-859，1994;和國(guó)際公開(kāi)號(hào)平6-500233的公開(kāi)的日文譯本等等)。具體地說(shuō)，例如，應(yīng)用由下面過(guò)程組成的技術(shù)，能夠制備所述產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠(1)制備基因敲除小鼠，其內(nèi)源免疫球蛋白重鏈基因已功能性失活，方法是通過(guò)同源重組用抗藥性標(biāo)記基因(例如新霉素耐藥基因)取代小鼠內(nèi)源免疫球蛋白K重鏈的基因座位的至少一部分；(2)制備基因敲除小鼠，其內(nèi)源免疫球蛋白輕鏈基因(特別是K鏈基因)已功能性失活，方法是通過(guò)同源重組用抗藥性標(biāo)記基因(例如新霉素耐藥基因)取代小鼠內(nèi)源免疫球蛋白輕鏈的基因座位的至少一部分；(3)制備轉(zhuǎn)基因小鼠，其中已通過(guò)諸如能攜帶大基因的酵母人工染色體(YAC)等載體將人免疫球蛋白重鏈基因座位的所需區(qū)整合到小鼠染色體中；(4)制備轉(zhuǎn)基因小鼠，其中已通過(guò)諸如能攜帶大基因的酵母人工染色體(YAC)等載體將人免疫球蛋白輕鏈基因座位(特別是K鏈基因)的所需區(qū)整合到小鼠染色體中；和(5)制備轉(zhuǎn)基因小鼠，其內(nèi)源免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因座位都功能性失活，并且已將人免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因座位的所需區(qū)整合到其染色體中，方法是使上述(1)至(4)的基因敲除小鼠和轉(zhuǎn)基因小鼠以任意順序交酉己。上述基因敲除小鼠可如下制備通過(guò)同源重組，用外源標(biāo)記基因(例如新霉素耐藥基因)取代小鼠內(nèi)源免疫球蛋白基因座位的適當(dāng)區(qū)，以失活所述基因座位，從而避免重排。利用所述同源重組進(jìn)行的失活可以使用例如稱(chēng)之為陽(yáng)性陰性選擇(PNS)的方法(NikkeiScience,1994年5月，p.52-62)。通過(guò)在J-或C-區(qū)的一部分(例如，Cju區(qū))中導(dǎo)入損傷，可以實(shí)現(xiàn)免疫球蛋白重鏈基因座位的功能失活。通過(guò)在J-或C-區(qū)的一部分中導(dǎo)入損傷，或在跨越了J-和C-區(qū)的一個(gè)區(qū)中導(dǎo)入損傷，可以實(shí)現(xiàn)免疫球蛋白輕鏈(例如K鏈)的功能失活。根據(jù)通常用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法(例如，參見(jiàn)"動(dòng)物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)最新手冊(cè)(NewestManualofAnimalCellExperiment)",LIC出版社，第7章，p.361-408(1990))，能夠制備轉(zhuǎn)基因小鼠。具體地說(shuō)，應(yīng)用原生質(zhì)球融合技術(shù)，將例如來(lái)自正常小鼠胚泡的HPRT-陰性(次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因缺陷)ES細(xì)胞(胚胎干細(xì)胞)與包含插入了編碼所述人免疫球蛋白重鏈基因座位或輕鏈基因座位或其一部分的基因和HPRT基因的YAC載體的酵母融合。通過(guò)HAT篩選方法篩選其小鼠內(nèi)源基因與所述外源基因整合的ES細(xì)胞。然后，將篩選到的ES細(xì)胞顯微注射到從另一個(gè)正常小鼠獲得的受精卵(胚泡)中(美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA),77巻，p.7380-7384，1980;美國(guó)專(zhuān)利No.4873191)。將該胚泡移植到作為代孕母體的另一只正常小鼠的子宮中。然后，從代孕母體小鼠生出嵌合的轉(zhuǎn)基因小鼠。通過(guò)使該嵌合的轉(zhuǎn)基因小鼠與正常小鼠交配，得到異基因轉(zhuǎn)基因小鼠。根據(jù)Mendel法則，通過(guò)使該異基因轉(zhuǎn)基因小鼠彼此交配，得到同基因轉(zhuǎn)基因小鼠。本發(fā)明中使用的"單克隆抗體的部分"指本發(fā)明上述人單克隆抗體的一部分，具體地說(shuō)，包括F(ab，)2,Fab，，F(xiàn)ab;Fv(抗體的可變區(qū)片段)，sFv，dsFv(二硫鍵穩(wěn)定型Fv)，或dAb(單一結(jié)構(gòu)域抗體)(Exp.Opin.Ther.Patents,6巻，No.5,p.441-456(1996))。30"F(ab，)2"和"Fab，"可通過(guò)用蛋白酶例如胃蛋白酶和木瓜蛋白酶處理免疫球蛋白(單克隆抗體)來(lái)制備，它們表示通過(guò)在兩條H鏈之間的絞鏈區(qū)中接近二硫鍵處消化免疫球蛋白產(chǎn)生的抗體片段。例如，木瓜蛋白酶裂解IgG兩條H鏈之間的絞鏈區(qū)中二硫鍵的上游，產(chǎn)生兩個(gè)同源抗體片段，其中由VJL鏈可變區(qū))和Cl(L鏈恒定區(qū))組成的L鏈，和由VH(H鏈可變區(qū))和CHYl(H鏈的恒定區(qū)中的y1區(qū))組成的H鏈片段通過(guò)二石危鍵在它們的C末端區(qū)連接。這兩個(gè)同源抗體片段都稱(chēng)為Fab，。胃蛋白酶也裂解IgG兩條H鏈之間絞鏈區(qū)中二硫鍵的下游，產(chǎn)生比由上述兩個(gè)Fab，在絞鏈區(qū)連接形成的片段稍微大一些的抗體片段。該抗體片段稱(chēng)為F(ab，)2。"結(jié)合速度常數(shù)(ka)"表示根據(jù)抗體抗原反應(yīng)動(dòng)力學(xué)計(jì)算的所述單克隆抗體與靶抗原的結(jié)合強(qiáng)度(程度)。"解離速度常數(shù)(kd)"表示所述單克隆抗體與靶抗原解離的強(qiáng)度(程度)。"解離常數(shù)(Kd)"是通過(guò)將所述"解離速度常數(shù)(kd)"除以"結(jié)合速度常數(shù)(ka)"得到的值。這些常數(shù)用來(lái)代表所述單克隆抗體對(duì)抗原的親和力及它們中和抗原的活性。所述常數(shù)可以根據(jù)各種方法來(lái)分析，并可使用商售分析試劑盒BiacoreX(AmershamPharmacia)或類(lèi)似的試劑盒，才艮據(jù)試劑盒所附的i)L明和實(shí)-驗(yàn)方法，容易地分析所述常數(shù)。使用所述試劑盒得到的ka，kd和Kd分別以1/M.秒，1/秒和M(摩爾)單位表示。ka值越高表明所測(cè)單克隆抗體的抗原結(jié)合活性越強(qiáng)，Kd值越小表明抗體的抗原中和活性越強(qiáng)。本發(fā)明的人單克隆抗體包括那些具有下面(l)-(3)所示ka，kd和Kd值的人單克隆抗體(1)以1.0X104(1/M.秒)或更大，優(yōu)選1.0X105(1/M.秒)或更大的結(jié)合速度常數(shù)(ka)結(jié)合人AILIM或其一部分的人單克隆抗體。(2)以1.0X10、l/秒)或更小，優(yōu)選1.0X10-s(l/秒)或更小的解離速度常數(shù)(kd)結(jié)合人AILIM或其一部分的人單克隆抗體。(3)具有對(duì)人AILIM或其一部分的反應(yīng)性，解離常數(shù)(Kd)是1.0X10-7(M)或更小，優(yōu)選1.0X10-s(M)或更小，更優(yōu)選1.0X10，M)或更小的人單克隆抗體。在該情況下，預(yù)期上述ka,kd和Kd各個(gè)值隨著在測(cè)定時(shí)不同的條件而稍有波動(dòng)，有誤差范圍，但是一般情況下特定指數(shù)沒(méi)有波動(dòng)。本發(fā)明的"產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞，，或產(chǎn)生人單克隆抗體的基因重組31的"基因重組宿主"(這里，所述宿主是除受精卵以外的細(xì)胞)指產(chǎn)生上述本發(fā)明人單克隆抗體的任何細(xì)胞。具體地說(shuō)，例如，它包括下面(l)-(3)任一項(xiàng)中描述的細(xì)胞，但是不局限于它們(1)通過(guò)用上面定義的免疫原(抗原)免疫上述產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物并且從所述接受免疫的動(dòng)物收集細(xì)胞而獲得的產(chǎn)生人單克隆抗體的B細(xì)月包。(2)通過(guò)使這樣獲得的產(chǎn)生人單克隆抗體的B細(xì)胞與來(lái)自哺乳動(dòng)物的骨髓瘤細(xì)胞融合得到的上述融合細(xì)胞(雜交瘤)。(3)通過(guò)用編碼從所述產(chǎn)生人單克隆抗體的B細(xì)胞或產(chǎn)生人單克隆抗體的融合細(xì)胞(雜交瘤)分離的所述人單克隆抗體的基因(編碼重鏈的基因或編碼輕鏈的基因，或兩者)轉(zhuǎn)化除所述B細(xì)胞和雜交瘤以外的細(xì)胞(例如CHO(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢)細(xì)胞，BHK(倉(cāng)鼠胚腎)細(xì)胞，淋巴細(xì)胞例如骨髓瘤)，獲得的產(chǎn)生人單克隆抗體的基因重組細(xì)胞。這里，(3)中提到的產(chǎn)生人單克隆抗體的基因重組細(xì)胞即指產(chǎn)生由上述(l)中B細(xì)胞或上述(2)中雜交瘤產(chǎn)生的人單克隆抗體的基因重組體的基因重組細(xì)"包。本發(fā)明的"基因重組宿主"中的"宿主"除了上述各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞之外，包括任何非人哺乳動(dòng)物(山羊，豬，綿羊，牛，等)的受精卵。通過(guò)將本發(fā)明編碼抗人AILIM的任何單克隆抗體(優(yōu)選人單克隆抗體)的基因(編碼重鏈的基因或編碼輕鏈的基因，或兩者)轉(zhuǎn)移到該受精卵中，能夠獲得本發(fā)明的基因重組受精卵。該基因重組受精卵被能制備能大規(guī)模從奶中生產(chǎn)蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(NikkeiScience,1997年4月，p.78-84)。本發(fā)明包括的"物質(zhì)"，具體地說(shuō)"在調(diào)節(jié)AILIM介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面有活性的物質(zhì)"，更具體地說(shuō)"在抑制AILIM-表達(dá)細(xì)胞的增殖方面，或在抑制AILIM-表達(dá)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的方面有活性的物質(zhì)"指自然界存在的天然物質(zhì)，或人工制備的任意物質(zhì)。與"結(jié)合AILIM的物質(zhì)"和"結(jié)合AILIM配體的物質(zhì)"相關(guān)的"物質(zhì)"在這里也指自然界存在的任何天然物質(zhì)，或人工制備的任意物質(zhì)。這里，"AILIM介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)"指導(dǎo)致AILIM-表達(dá)細(xì)胞的任意表型變化(細(xì)胞增殖，細(xì)胞的激活，細(xì)胞的失活，凋亡，和/或從AILIM-表達(dá)細(xì)胞產(chǎn)生任意細(xì)胞因子的能力改變)的經(jīng)由AILIM的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。"物質(zhì)，，可以主要分類(lèi)為"蛋白質(zhì)物質(zhì)"和"非蛋白質(zhì)物質(zhì)"。"蛋白質(zhì)物質(zhì)"的例子是下面的多肽，抗體(多克隆抗體，單克隆抗體，或單克隆抗體的一部分，并且特別優(yōu)選上述人抗體)。當(dāng)所述物質(zhì)是一種抗體時(shí)，所述物質(zhì)優(yōu)選是一種單克隆抗體。當(dāng)所述物質(zhì)是一種單克隆抗體時(shí)，所述物質(zhì)不僅包括來(lái)自非人哺乳動(dòng)物的單克隆抗體，還包括重組嵌合單克隆抗體，重組人源化單克隆抗體和人單克隆抗體。這里，"重組嵌合單克隆抗體"是一種通過(guò)基因工程制備的單克隆抗體，具體地指一種嵌合抗體例如小鼠/人嵌合單克隆抗體，其可變區(qū)來(lái)自非人哺乳動(dòng)物(小鼠，大鼠，倉(cāng)鼠等)的免疫球蛋白，其恒定區(qū)來(lái)自人免疫球蛋白。本發(fā)明的"人源化單克隆抗體(CDR-移植型抗體)"是一種通過(guò)基因工程制備的單克隆抗體，具體地指其中高變區(qū)中互補(bǔ)決定區(qū)的部分或全部來(lái)自非人哺乳動(dòng)物(小鼠，大鼠，倉(cāng)鼠等)單克隆抗體高變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)，可變區(qū)的框架區(qū)來(lái)自人免疫球蛋白可變區(qū)的框架區(qū)，恒定區(qū)來(lái)自人免疫球蛋白恒定區(qū)的人源化單克隆抗體。高變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)存在于抗體可變區(qū)的高變區(qū)中，并且指直接結(jié)合并互補(bǔ)于抗原的三個(gè)區(qū)(互補(bǔ)決定區(qū)殘基，CDR1，CDR2，和CDR3)?？勺儏^(qū)的框架區(qū)指位于這三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)的上游，下游或之間的四個(gè)比較保守的區(qū)(框架區(qū)，F(xiàn)R1,FR2,FR3，和FR4)。換句話(huà)說(shuō)，人源化單克隆抗體指其中除了來(lái)自非人哺乳動(dòng)物單克隆抗疫球蛋白的區(qū)置換的單克隆抗體。來(lái)自人免疫球蛋白的恒定區(qū)具有各種同種型例如IgG(IgGl，IgG2，IgG3，和lgG4)，IgM，IgA，IgD和IgE中固有的氨基酸序列。本發(fā)明的人源化單克隆抗體的恒定區(qū)可以是來(lái)自屬于任何同種型的人免疫球蛋白。優(yōu)選地，其是人IgG的恒定區(qū)。對(duì)來(lái)自人免疫球蛋白恒定區(qū)的框架區(qū)沒(méi)有特別限定。當(dāng)本發(fā)明的物質(zhì)是一種多肽時(shí)，所述物質(zhì)包括下面的多肽，其片段(寡肽)，融合多肽，其化學(xué)修飾的多肽。寡肽的例子是包括5-30個(gè)，優(yōu)選5-20個(gè)氨基酸的肽?；瘜W(xué)修飾可以根據(jù)不同目的設(shè)計(jì)，例如，體內(nèi)給藥的情況下提高血液半衰期，或口服的情況下在消化道中增強(qiáng)對(duì)降解作用的耐受性或促進(jìn)消化道吸收。下面是多肽的例子(1)包括AILIM的胞外區(qū)的全部或部分的多肽；(2)包括AILIM的胞外區(qū)的全部或部分以及免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)的全部或部分的融合多肽；或(3)結(jié)合AILIM的多肽。"非蛋白質(zhì)"的例子是DNA，RNA，和化學(xué)合成的化合物。這里，"DNA"指根據(jù)編碼上述AILIM(優(yōu)選人AILIM)的DNA(包括cDNA和基因組DNA)的核苷酸序列設(shè)計(jì)的可用作反義DNA藥物的"包括所述DNA或其化學(xué)修飾型DNA的部分核苷酸序列的DNA"。具體地說(shuō)，所述反義DNA能通過(guò)與編碼AILIM的DNA或RNA雜交，抑制編碼AILIM的DNA轉(zhuǎn)錄為mRNA，或抑制該mRNA翻譯為蛋白質(zhì)。"部分核苷酸序列"在這里指包括任意區(qū)中任意個(gè)核苷酸的部分核苷酸序列。所述部分核苷酸序列由5-100個(gè)連續(xù)的核苷酸，優(yōu)選5-70個(gè)連續(xù)的核苷酸，更優(yōu)選5-50個(gè)連續(xù)的核苷酸，更優(yōu)選5-30個(gè)連續(xù)的核苷酸組成。當(dāng)DNA被用作反義DNA藥物時(shí)，可以部分化學(xué)修飾該DNA序列以延長(zhǎng)給藥后該DNA的血液半衰期(穩(wěn)定性)，以提高該DNA的胞質(zhì)膜滲透性，或提高口服給藥時(shí)該DNA在消化器官中的抗降解性或促進(jìn)吸收。化學(xué)修飾包括對(duì)磷酸酯鍵，核糖，核苷酸堿基，糖部分，寡核苷酸DNA結(jié)構(gòu)中的3，末端和/或5'末端的修飾。磷酸酯鍵的修飾包括，例如，將一個(gè)或多個(gè)磷酸酯鍵轉(zhuǎn)化為磷酸二酯鍵(D-寡)，硫代磷酸酯鍵，二硫代磷酸酯鍵(S-寡)，膦酸甲酯(MP-寡)，氨基磷酸酯鍵，非磷酸酯鍵或硫代膦酸曱酯鍵，或它們的組合。核糖的修飾包括例如轉(zhuǎn)化為2，-氟代核糖或2，-0-曱基核糖。核苷酸堿基的修飾包括例如轉(zhuǎn)化為5-丙炔基尿嘧啶或2-氨基腺嘌呤。這里，"RNA，，指根據(jù)編碼上述AILIM(優(yōu)選人AILIM)的RNA的核苷酸序列設(shè)計(jì)的用作反義RNA藥物的"包括所述RNA或其化學(xué)修飾型RNA的部分核苷酸序列的RNA"。所述反義RNA能通過(guò)與編碼AILIM的DNA或RNA雜交，抑制編碼AILIM的DNA轉(zhuǎn)錄為mRNA,或抑制mRNA翻34譯為蛋白質(zhì)。"部分核苷酸序列"在這里指包括任意區(qū)中任意個(gè)核苷酸的部分核苷酸序列。所述部分核普酸序列由5-100個(gè)連續(xù)的核苷酸，優(yōu)選5-70個(gè)連續(xù)的核苷酸，更優(yōu)選5-50個(gè)連續(xù)的核苷酸，更優(yōu)選5-30個(gè)連續(xù)的核苷酸組成?？蓪?duì)反義RNA的序列進(jìn)行部分化學(xué)修飾，以延長(zhǎng)給藥后該RNA的血液半衰期(穩(wěn)定性)，提高該RNA的胞質(zhì)膜滲透性，或提高口服時(shí)RNA在消化器官中的抗降解性或促進(jìn)吸收。化學(xué)修飾的例子是適用于上述反義DNA的化學(xué)修飾。"化學(xué)合成的化合物"的例子是除了上述DNA，RNA和蛋白質(zhì)物質(zhì)之外的具有約100至約1000分子量的任何化合物，優(yōu)選具有約100至約800分子量，更優(yōu)選約100至約600分子量的任何化合物。包括在上文"物質(zhì)，，的定義中的"多肽"指構(gòu)成AILIM(優(yōu)選人AILIM)的多肽鏈的部分(片段)，優(yōu)選構(gòu)成AILIM的多肽的胞外區(qū)的全部或部分(可以任選地在該區(qū)的N-端和/或C-端加上1-5個(gè)氨基酸)。本發(fā)明中涉及的AILIM是包括1或2個(gè)多肽鏈的穿透細(xì)胞膜的跨膜分子。這里，"跨膜蛋白，，指通過(guò)一次或幾次穿透該膜的脂雙層的疏水肽區(qū)與膜連接的蛋白質(zhì)，并且其結(jié)構(gòu)整體由三個(gè)主要的區(qū)組成，它們是胞外區(qū)，跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)，正如在很多受體或細(xì)胞表面分子中見(jiàn)到的一樣。這樣一種跨膜蛋白與具有相同或不同氨基酸序列的另一條鏈構(gòu)成單體，同型二聚體，異二聚體或寡聚體形式的受體或細(xì)胞表面分子。這里，"胞外區(qū)"指上述跨膜蛋白的完整結(jié)構(gòu)中存在于膜外的部分結(jié)構(gòu)(部分區(qū))的全部或部分。換句話(huà)說(shuō)，指跨膜蛋白中除了插入膜中的區(qū)(跨膜區(qū))和緊接跨膜區(qū)而存在于胞質(zhì)中的區(qū)(胞質(zhì)區(qū))之外的區(qū)的全部或部分。包括在上述"蛋白質(zhì)物質(zhì)"中的"融合多肽"指包括構(gòu)成AILIM(優(yōu)選人AILIM)的多肽的胞外區(qū)的全部或部分，和"免疫球蛋白重鏈(Ig,優(yōu)選人Ig)恒定區(qū)的全部和部分，，的融合多肽。優(yōu)選地，所述融合多肽是包括AILIM的胞外區(qū)和人IgG重鏈恒定區(qū)的一部分的融合多肽，特別優(yōu)選地是AILIM的胞外區(qū)與人IgG重鏈中包括絞鏈區(qū)，CH2區(qū)和CH3區(qū)的區(qū)(Fc)的融合多肽。IgG優(yōu)選IgGl，AILIM優(yōu)選人，小鼠或大鼠的AILIM(優(yōu)選人的)。這里使用的"人免疫球蛋白(Ig)重鏈的恒定區(qū)的全部或部分"指如上所35述來(lái)自人的免疫球蛋白重鏈(H鏈)的恒定區(qū)或Fc區(qū)，或其一部分。免疫球蛋白可以是屬于任何類(lèi)和任何亞類(lèi)的免疫球蛋白。具體地說(shuō)，免疫球蛋白的例子是IgG(IgGl,IgG2，IgG3，和lgG4)，IgM，IgA(IgAl和IgA2),IgD或IgE。優(yōu)選地，免疫球蛋白是IgG(IgGl,IgG2，IgG3，和IgG4),或IgM。本發(fā)明特別優(yōu)選的免疫球蛋白的例子是屬于來(lái)自人的IgG(IgGl，IgG2，IgG3，和lgG4)的那些。免疫球蛋白具有Y-形結(jié)構(gòu)單元，其中四條鏈由兩條同源輕鏈(L鏈)和兩條同源重鏈(H鏈)組成并且通過(guò)二硫鍵(S-S鍵)連接。輕鏈由輕鏈可變區(qū)(VO和輕鏈恒定區(qū)(CO組成。重鏈由重鏈可變區(qū)(VH)和重鏈恒定區(qū)(CH)組成。重鏈恒定區(qū)由具有各類(lèi)(IgG,IgM,IgA,IgD和IgE)和各亞類(lèi)(IgGl，IgG2，IgG3，IgG4，IgAl和IgA2)固有的氨基酸序列的一些區(qū)組成。IgG(IgGl，IgG2，IgG3，和IgG4)的重鏈由VH,CH1區(qū)，絞鏈區(qū)，CH2區(qū)和CH3區(qū)以此順序自N末端構(gòu)成。類(lèi)似地，IgGl的重鏈由VH，Cy!l區(qū)，絞鏈區(qū)，CYi2區(qū)和Cy!3區(qū)以此順序自n末端構(gòu)成。IgG2的重鏈由vh，Cy21區(qū)，絞鏈區(qū)，CYz2區(qū)和CY23區(qū)以此順序自N末端構(gòu)成。IgG3的重鏈由VH，CY31區(qū)，絞鏈區(qū)，cy32區(qū)和cy33區(qū)以此順序自n末端構(gòu)成。IgG4的重鏈由vh，cy4區(qū)，絞鏈區(qū)，Cy42區(qū)和CY43區(qū)以此順序自N末端構(gòu)成。IgA的重鏈由Vh,Ca1區(qū)，絞鏈區(qū)，Ca2區(qū)和Ca3區(qū)以此順序自N末端構(gòu)成。類(lèi)似地，IgAl的重鏈由VH，Ca!1區(qū)，絞鏈區(qū)，Con2區(qū)和Ca,3區(qū)以此順序自N末端構(gòu)成。IgA2的重鏈由VH，Ca2l區(qū)，絞鏈區(qū)，Ca22區(qū)和Ca23區(qū)以此順序自N末端構(gòu)成。IgD的重鏈由vh,c51區(qū)，絞鏈區(qū)，c52區(qū)和c53區(qū)以此順序自N末端構(gòu)成。IgM的重鏈由VH,1區(qū)，CjLi2區(qū)和CjLi3區(qū)，和Cy4以此順序自N末端構(gòu)成，沒(méi)有IgG，IgA和IgD中見(jiàn)到的絞鏈區(qū)。IgE的重鏈由VH，Cs1區(qū)，Cs2區(qū)和Ce3區(qū)，和Cs4以此順序自N末端構(gòu)成，沒(méi)有IgG，IgA和IgD中見(jiàn)到的絞鏈區(qū)。如果，例如，用木瓜蛋白酶處理IgG，在絞鏈區(qū)中連接兩條重鏈的二硫鍵以外偏N-末端處裂解產(chǎn)生兩個(gè)同源Fab,其中由Vh和CHI組成的重鏈片段通過(guò)二石克鍵與一條輕鏈連接，還產(chǎn)生一個(gè)Fc，其中由絞《連區(qū)，CH2區(qū)和CH3區(qū)組成的兩條同源重鏈片段通過(guò)二硫鍵連接(參見(jiàn)ImmunologyIllustrated,原第2版，Nankodo，p.65-75(1992);和最新藥物科學(xué)焦點(diǎn)(免疫系統(tǒng)識(shí)另'J才幾理)(FocusofNewestMedicalScience'RecognitionMechanismofImmuneSystem'),Nankodo，p.4匿7(1991)等等)。即，上文提到的"免疫球蛋白重鏈的恒定區(qū)的一部分"指免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)中具有如上所述結(jié)構(gòu)特征的部分，優(yōu)選地，是沒(méi)有CI區(qū)或Fc區(qū)的恒定區(qū)。具體地說(shuō)，其例子是由來(lái)自IgG，IgA,和IgD的絞鏈區(qū)，C2區(qū)和C3區(qū)組成的區(qū)，和由來(lái)自IgM和IgE的C2區(qū)，C3區(qū)和C4區(qū)組成的區(qū)。其特別優(yōu)選的例子是來(lái)自人IgGl的Fc區(qū)。上述融合多肽具有下面的優(yōu)點(diǎn)，即通過(guò)利用蛋白質(zhì)A與免疫球蛋白片段特異性結(jié)合的性質(zhì)經(jīng)親和柱層析可以非常容易地純化融合多肽，因?yàn)楸景l(fā)明的融合多肽具有免疫球蛋白例如上述IgG的恒定區(qū)的一部分(Fc)作為融合配對(duì)物。此外，由于抗各種免疫球蛋白的Fc的各種抗體是可獲得的，因此可用抗Fc抗體容易地進(jìn)行融合多肽的免疫測(cè)定。上文"物質(zhì)"的定義中包括的"多肽"包括"結(jié)合AILIM的多肽"。"結(jié)合AILIM的多肽"的具體例子是構(gòu)成已知的作為與AILIM相互作用的配體的B7h，B7RP-l，GL50或稱(chēng)為L(zhǎng)ICOS分子的多肽的全部或部分(自然(Nature),402巻，No.6763,p.827-832，1999;天然藥物(NatureMedicine),5巻，No.12,p.1365-1369,1999;免疫學(xué)雜志(J.Immunology),164巻，p.1653-1657，2000;當(dāng)今生物學(xué)(Curr.Biol.)，10巻，No.6，p.333-336,2000)。優(yōu)選地，所述多肽是包括上述配體(B7h，B7RP-1,GL50)胞外區(qū)的全部或部分的多肽，或包括該多肽和免疫球蛋白重鏈(優(yōu)選人免疫球蛋白)恒定區(qū)的全部或部分的融合多肽。這里，術(shù)語(yǔ)"胞外區(qū)"和"免疫球蛋白重鏈的恒定區(qū)"具有和上面相同的意義。上述多肽，多肽的部分(片段)和融合多肽不僅可以通過(guò)下面提到的重組DNA技術(shù)制備，而且還可以通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法例如化學(xué)合成方法和細(xì)胞培養(yǎng)方法或其改進(jìn)的方法來(lái)制備。本發(fā)明的"抗體"可以是上文定義的抗哺乳動(dòng)物AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)的多克隆抗體(抗血清)或單克隆抗體，優(yōu)選是單克隆抗體。具體地，所述抗體是具有通過(guò)結(jié)合AILIM而抑制AILIM-表達(dá)細(xì)胞增殖活性的抗體。這里"遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)"是細(xì)胞免疫介導(dǎo)的(特別是Thl-型T細(xì)胞介導(dǎo)的)過(guò)敏反應(yīng)，即，被抗原(記憶T細(xì)胞記憶的抗原)致敏的T細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏反應(yīng)，并且指任何過(guò)敏反應(yīng)，它是當(dāng)抗原致敏的活體生物再次接觸該相同抗原時(shí)，約24-48小時(shí)表現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，并伴隨所述記憶T細(xì)胞引起的炎癥。該遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)包括針對(duì)傳染性致病抗原例如來(lái)自結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)的結(jié)核桿菌素的過(guò)敏反應(yīng)，針對(duì)少量蛋白的瞬時(shí)Jones-Mote遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)，對(duì)化學(xué)品例如苦基氯或纟直物毒素例如天然漆的接觸型過(guò)敏反應(yīng)，或在異源移植中見(jiàn)到的對(duì)移植物的移植排斥相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)。"藥物組合物"這里指含有結(jié)合AILIM(優(yōu)選人AILIM)或其一部分的抗體(優(yōu)選人抗體)，或單克隆抗體(優(yōu)選人單克隆抗體)或其一部分作為有效成分并含有"可藥用載體"而作為藥物使用的組合物。"可藥用載體"包括賦形劑，稀釋劑，膨脹劑，分解劑，穩(wěn)定劑，防腐劑，緩沖劑，乳化劑，芳香劑，著色劑，甜味劑，增粘劑，矯味劑，增溶劑或其它添加劑。使用一種或多種這樣的載體，能夠?qū)⑺幬锝M合物配制成片劑，丸劑，粉末劑，顆粒劑，注射劑，溶液，膠嚢，糖錠，酏劑，懸浮液，乳液或糖漿。藥物組合物可以口服或腸胃外給藥。腸胃外給藥的其它形式包括常規(guī)方法制備的含有一種或多種活性成分的外用溶液，直腸施用的栓劑，和陰道栓。劑量根據(jù)患者的年齡，性別，體重和癥狀，治療效果，給藥途徑，治療周期，或藥物組合物中含有的活性成分的類(lèi)型(上述多肽或抗體)而不同。通常，對(duì)成人，可以以IO微克至1000毫克(或IO微克至500毫克)/每次給藥的劑量施用藥物組合物。根據(jù)各種條件，小于上述劑量的劑量在某些情況下可能是足夠的，而大于上述劑量的劑量在另外情況下可能是必需的。特別地，通過(guò)將抗體溶解于或懸浮于無(wú)毒的可藥用載體例如生理鹽水或市售注射用蒸餾水中，將濃度調(diào)節(jié)為0.1微克抗體/毫升載體至10毫克抗38體/毫升載體，可以制備注射劑?？梢砸?微克至100毫克/千克體重，優(yōu)選50微克至50毫克/千克體重的劑量一天一次或多次對(duì)需要治療的患者施用這樣制備的注射液。給藥途徑的例子是藥學(xué)可接受的給藥途徑，例如靜脈注射，皮下注射，皮內(nèi)注射，肌內(nèi)注射，或腹膜內(nèi)注射，優(yōu)選靜脈內(nèi)注射。也可以將注射液制備到不含水的稀釋液(例如丙二醇，聚乙二醇，植物油例如橄欖油，醇例如乙醇)，懸浮劑或乳劑中。通過(guò)用細(xì)菌不能穿透的除菌濾膜過(guò)濾，通過(guò)與殺菌劑混合或通過(guò)輻射，可將注射劑滅菌。還可將注射劑制備成使用時(shí)制備的形式。即，將其凍干成無(wú)菌固體組合物，并且在使用前可以溶解于注射用無(wú)菌蒸餾水或另一種溶劑中。含有本發(fā)明的人抗體的藥物組合物可作為藥物制劑用于控制與AILIM-介導(dǎo)的向AILIM-表達(dá)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)(第二信號(hào))相關(guān)的各種生物反應(yīng)(例如AILIM表達(dá)細(xì)胞的增殖，AILIM表達(dá)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，AILIM細(xì)胞表達(dá)的免疫胞解或死亡(凋亡)或其它)而不誘發(fā)HAMA(人抗小鼠抗體)所致宿主免疫排斥作用，和/或用于通過(guò)阻抑和抑制與AILIM-介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的疾病的發(fā)生和/或進(jìn)展來(lái)治療或預(yù)防各種疾病。術(shù)語(yǔ)"免疫胞解"這里指下面的一種生物現(xiàn)象。通過(guò)抗體(特別是細(xì)胞-溶解抗體)以及通過(guò)與殺傷細(xì)胞結(jié)合能夠誘導(dǎo)細(xì)胞的裂解(胞解)。細(xì)胞-溶解抗體是一種細(xì)胞毒活性抗體，其特別具有對(duì)細(xì)胞例如免疫細(xì)胞，組織細(xì)胞或精子的溶解活性。當(dāng)該抗體結(jié)合細(xì)胞-表面抗原時(shí)，其引起對(duì)細(xì)胞的細(xì)胞毒作用或在補(bǔ)體的存在下誘導(dǎo)細(xì)胞溶解。補(bǔ)體作用與抗體對(duì)細(xì)胞-表面抗原的特異性結(jié)合聯(lián)合誘導(dǎo)免疫胞解。與表面抗原結(jié)合的抗體激活Cl補(bǔ)體(C1)。接著，通過(guò)與C2-C9補(bǔ)體(C2-C9)的一系列補(bǔ)體-固定反應(yīng)形成細(xì)胞損傷位點(diǎn)，然后從細(xì)胞釋放細(xì)胞內(nèi)含物從而〉容解細(xì)月包。術(shù)語(yǔ)"抗體-依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性"這里指一種生物作用，也縮寫(xiě)為"ADCC"，并且是效應(yīng)細(xì)胞例如淋巴細(xì)胞，巨噬細(xì)胞或多形核白細(xì)胞對(duì)耙細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，其需要的不僅是效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞，而且還有參與誘導(dǎo)細(xì)胞毒作用的抗體。術(shù)語(yǔ)"混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)"這里指縮寫(xiě)為"MLR"的生物現(xiàn)象。該反應(yīng)也稱(chēng)為混合的白細(xì)胞反應(yīng)。將來(lái)自不同個(gè)體的異源白細(xì)胞或淋巴細(xì)胞相互混合并且培養(yǎng)幾天，從而使細(xì)胞形成母細(xì)胞并且在細(xì)胞中合成DNA(即細(xì)胞增殖)。該反應(yīng)被稱(chēng)為MLR(異源MLR)。通過(guò)抑制任一淋巴細(xì)胞的增殖可以分析DNA合成(細(xì)胞增殖)。通過(guò)輻射或絲裂霉素處理可以完成抑制。通過(guò)測(cè)定其它淋巴細(xì)胞中合成的DNA量可以進(jìn)行分析。通過(guò)測(cè)定用放射性同位素例如摻入到細(xì)胞核中的氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核普可以分析合成的DNA的量。根據(jù)通常使用的方法，用從編碼AILIM的mRNA克隆出cDNA的方法；分離基因組DNA并剪接它們的方法；以cDNA序列或mRNA序列作為模板經(jīng)PCR制備DNA的方法；或化學(xué)合成DNA的方法，能夠獲得本發(fā)明的編碼AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)的DNA。用上述相同的方法還能夠獲得根據(jù)本發(fā)明的編碼AILIM配體的DNA。通過(guò)用合適的限制酶酶切(消化)包括編碼這樣制備的AILIM的DNA的DNA能夠制備根據(jù)本發(fā)明的編碼AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)的DNA，如果需要，通過(guò)使用合適的DNA聚合酶等使所得DNA片段與接頭DNA或標(biāo)記相連。用相同的方法還能夠制備編碼AILIM配體的DNA。下面將給出一個(gè)從mRNA克隆出編碼AILIM(特別優(yōu)選人AILIM;下面稱(chēng)該蛋白質(zhì)為目的蛋白)的cDNA的例示方法。用相同的方法還能夠克隆編碼AILIM配體的DNA。首先，從表達(dá)和產(chǎn)生目的蛋白的組織和細(xì)胞制備編碼目的蛋白的信使RNA。通過(guò)已知方法，例如硫氰酸胍方法(Chirgwin，J.M.等，生物化學(xué)(Biochemistry),18巻，p.5294，1979)，熱酚方法，或AGPC方法，從分離的總RNA可以制備mRNA，并且對(duì)其進(jìn)行親和層析(使用寡-dT纖維素或聚尿苦酸Sepharose)。然后，使用所得mRNA作為模板，合成cDNA,例如，通過(guò)公知的使用逆轉(zhuǎn)錄酶的方法，例如Okayama等的方法(分子細(xì)胞生物學(xué)(Mol.Cell.Biol),2巻,p.161(1982);出處同上，3巻，p.280(1983))或Hoffman等的方法(基因(Gene)，25巻，p.263(1983)),并且轉(zhuǎn)化為雙鏈cDNA。通過(guò)用包含該cDNA的質(zhì)粒載體，噬菌體載體或粘粒載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌或通過(guò)體外包裝之后轉(zhuǎn)染大腸桿菌而制備CDNA文庫(kù)。本發(fā)明中使用的質(zhì)粒載體沒(méi)有限制，只要它們能在宿主中維持并復(fù)制。也可以使用能在宿主中復(fù)制的任何噬菌體載體。通常使用的克隆載體的例子是pUC19，入gt10，Agtll,等等。當(dāng)該載體被應(yīng)用于下述免疫篩選時(shí)，優(yōu)選使用包含能在宿主中表達(dá)編碼本發(fā)明多肽的基因的啟動(dòng)子的載體。通過(guò)，例如Maniatis等的方法(分子克隆，實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，第二版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室，p.1.53,1989)將cDNA插入質(zhì)粒中。通過(guò)，例如Hyunh等的方法(DNA克隆，操作指南，vol.1，p.49,1985)將cDNA插入噬菌體載體中。通過(guò)使用市售克隆試劑盒(例如，購(gòu)自TakaraShuzo的產(chǎn)品)簡(jiǎn)單地進(jìn)行這些方法。將這樣獲得的重組質(zhì)?；蚴删w載體導(dǎo)入合適的宿主細(xì)胞例如原核細(xì)月包(例如大腸桿菌:XLlBlueMRF，DH5a，HB101,MC1061/P3,等)中。將質(zhì)粒導(dǎo)入宿主的方法有分子克隆，實(shí)驗(yàn)手冊(cè)(第二版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室，p.1.74，(1989))中描述的氯化鈣方法，氯化4丐/氯化銣法，和電穿孔方法。通過(guò)例如其中噬菌體DNA在體外包裝后被導(dǎo)入培養(yǎng)宿主中的方法將噬菌體載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞。用市售體外包裝試劑盒(例如購(gòu)自Stratagene或Amersham的產(chǎn)品)能容易進(jìn)行體外包裝。通過(guò)組合通用的cDNA篩選方法能夠從根據(jù)上述方法制備的cDNA文庫(kù)分離編碼本發(fā)明多肽的cDNA。例如，通過(guò)已知的菌落雜交方法(Cmnstein等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)72巻，p.3961(1975))或噬菌斑雜交方法(分子克隆，實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，第二版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室，p.2.108，1989),使用3￥-標(biāo)記的化學(xué)合成的相應(yīng)于本發(fā)明多肽之氨基酸序列的寡核苷酸作為探針能夠篩選包含目標(biāo)cDNA的克隆?；蛲ㄟ^(guò)用合成的PCR引物經(jīng)PCR擴(kuò)增所述區(qū)能夠篩選包含編碼本發(fā)明多肽中特定區(qū)的DNA片斷的克隆。當(dāng)利用以cDNA表達(dá)載體(例如入ZAPII噬菌體載體)制備的cDNA文庫(kù)時(shí)，通過(guò)使用抗本發(fā)明多肽的抗體經(jīng)抗原-抗體反應(yīng)能夠篩選所需克隆。當(dāng)篩選很多克隆時(shí)優(yōu)選#_用應(yīng)用了PCR方法的篩選方法。通過(guò)Maxam-Gilbert方法(Maxam等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,vol.74,p.560(1977))或使用噬菌體M13的雙脫氧核香酸合成鏈終止方法(Sanger等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,vol.74,p.5463-5467(1977))，能夠測(cè)定這樣獲得的DNA的核苷酸序列。通41過(guò)用限制酶等酶切如上所述獲得的克隆能夠獲得編碼本發(fā)明多肽的基因的全部或部分。通過(guò)下面的方法能夠從如上所述得自表達(dá)本發(fā)明多肽的細(xì)胞的基因組DNA分離編碼本發(fā)明多肽的DNA。這些細(xì)胞優(yōu)選通過(guò)SDS或蛋白酶K溶解并且通過(guò)酚反復(fù)萃取將DNA脫蛋白。優(yōu)選用核糖核酸酶消化RNA。用合適的限制酶對(duì)所得DNA進(jìn)行部分消化，獲得的DNA片段用合適的噬菌體或粘粒擴(kuò)增以產(chǎn)生文庫(kù)。含所需序列的克隆通過(guò)例如用放射性標(biāo)記的DNA探針檢測(cè)，編碼本發(fā)明多肽的基因的全部或部分通過(guò)用限制酶等切割這些克隆而獲得。根據(jù)常規(guī)方法("用于基因擴(kuò)增的PCR技術(shù)-基礎(chǔ)和新技術(shù)"KYORITSUSHUPPAN，1992，等)通過(guò)使用已知的編碼目的蛋白的mRNA或cDNA作為模板能經(jīng)PCR制備編碼目的蛋白的DNA。以編碼目的蛋白的核香酸序列為基礎(chǔ)通過(guò)常規(guī)方法也可以化學(xué)合成編碼目的蛋白的DNA。根據(jù)包含常用基因重組技術(shù)的常規(guī)方法，使用合適的限制酶經(jīng)上述方法切割編碼AILIM的DNA(cDNA或含有內(nèi)含子的基因組DNA)以給出編碼AILIM的DNA片段，然后根據(jù)需要，用合適的DNA酶等將所得DNA片段與接頭DNA或標(biāo)記相連，可以制備作為重組蛋白的本發(fā)明的AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)或其一部分(優(yōu)選胞外區(qū))。用相同的方法能制備AILIM配體(特別優(yōu)選人AILIM配體)或其一部分(優(yōu)選胞外區(qū))。下面詳細(xì)說(shuō)明一個(gè)具體的例子。即，將上述制備的DNA插入載體(下面將詳細(xì)說(shuō)明)中，得到表達(dá)載體。然后使用該表達(dá)載體來(lái)轉(zhuǎn)化如下所述宿主細(xì)胞以獲得轉(zhuǎn)化體。培養(yǎng)該轉(zhuǎn)化體并允許在培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生目的蛋白。利用柱層析等能容易地純化培養(yǎng)上清液中的目的蛋白。對(duì)產(chǎn)生重組AILIM(或其胞外區(qū))的表達(dá)載體的類(lèi)型沒(méi)有特別限制，只要該載體在各種宿主例如原核細(xì)胞和/或真核細(xì)胞中能自我復(fù)制并維持或自動(dòng)產(chǎn)生即可。這樣的表達(dá)載體包括質(zhì)粒載體和噬菌體載體(克隆載體:實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，Elsevier,紐約，1985)。通過(guò)常規(guī)方法將編碼AILIM(或其胞外區(qū))的DNA與本領(lǐng)域可獲得的用于重組的載體(質(zhì)粒DNA和噬菌體DNA)相連，能夠容易制備表達(dá)載體。使42用的用于重組的載體的具體例子是得自大腸桿菌的質(zhì)粒例如pBR322,pBR325,pUC12,pUC13，和pUC19，得自酵母的質(zhì)粒例如pSH19和pSH15，得自枯草芽孢桿菌的質(zhì)粒，例如pUB110，pTP5和pC194。噬菌體的例子是細(xì)菌噬菌體例如入噬菌體，和動(dòng)物或昆蟲(chóng)病毒(pVL1393,Invitrogen)例如逆轉(zhuǎn)錄病毒，痘苗病毒，和核形多角體病病毒。當(dāng)要在宿主細(xì)胞中表達(dá)編碼本發(fā)明的AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)或其可溶性胞外區(qū)的DNA從而在宿主表面上表達(dá)AILIM,或要產(chǎn)生AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)的可溶性胞外區(qū)時(shí)，可使用質(zhì)粒載體。對(duì)這樣的質(zhì)粒載體沒(méi)有特別限制，只要載體能表達(dá)編碼AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)或其可溶性胞外區(qū)的基因并且在各種宿主細(xì)胞例如原核細(xì)胞和/或真核細(xì)胞中產(chǎn)生編碼蛋白即可。例如，這樣的質(zhì)粒包括pMALC2，pcDNA3.1(-)，pEF-BOS(核酸研究(NucleicAcidResearch),Vol.18,p.5322，1990;等)，pME18S("基因工程手冊(cè)"，實(shí)驗(yàn)藥物(ExperimentalMedicine),增刊，1992;等)，等。當(dāng)使用細(xì)菌特別是大腸桿菌作為宿主時(shí)，表達(dá)載體一般至少由啟動(dòng)子-操縱子區(qū)，起始密碼子，編碼目的蛋白的DNA，終止密碼子，終止子區(qū)和復(fù)制子組成。當(dāng)使用酵母，動(dòng)物細(xì)胞或昆蟲(chóng)細(xì)胞作為宿主時(shí)，表達(dá)載體優(yōu)選至少由啟動(dòng)子，起始密碼子，編碼本發(fā)明的AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)或其胞外區(qū)的DNA，和終止密碼子組成。也可以包括編碼信號(hào)肽的DNA，增強(qiáng)子序列，編碼本發(fā)明AILIM的基因的5，-和3，-非翻譯區(qū)，剪接連接區(qū)，聚腺苷酸化位點(diǎn)，選擇標(biāo)記區(qū)和復(fù)制子。如果需要，表達(dá)載體還可以包含通常使用的用于基因擴(kuò)增(標(biāo)記)的基因。在細(xì)菌中表達(dá)本發(fā)明的AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)或其胞外區(qū)的啟動(dòng)子-操縱子區(qū)包括啟動(dòng)子，操縱子和Shine-Dalgamo(SD)序歹iJ(例如AAGG)。例如，當(dāng)宿主是埃希氏菌時(shí)，其優(yōu)選包括Trp啟動(dòng)子，lac啟動(dòng)子，recA啟動(dòng)子，人PL啟動(dòng)子，lpp啟動(dòng)子，tac啟動(dòng)子等等。在酵母中表達(dá)本發(fā)明的AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)或其胞外區(qū)的啟動(dòng)子的例子是PH05啟動(dòng)子，PGK啟動(dòng)子，GAP啟動(dòng)子，ADH啟動(dòng)子等等。當(dāng)宿主是芽孢桿菌時(shí)，其例子是SL01啟動(dòng)子，SP02啟動(dòng)子，penP啟動(dòng)子等等。當(dāng)宿主是真核細(xì)胞例如哺乳動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，其例子是SV40-衍生的啟動(dòng)子，逆轉(zhuǎn)錄病毒啟動(dòng)子，熱休克啟動(dòng)子等等。當(dāng)然，啟動(dòng)子不局限于上面的例子。另外，使用增強(qiáng)子對(duì)于表達(dá)是有效的。優(yōu)選的起始密碼子是例如曱硫氨酸密碼子(ATG)。通常使用的終止密碼子(例如，TAG,TGA，TAA等)可作為終止密碼子的例子。使用常用的天然或合成終止子作為終止子區(qū)。復(fù)制子指能在宿主細(xì)胞中復(fù)制整個(gè)DNA序列的DNA,包括天然質(zhì)粒，人工修飾的質(zhì)粒(從天然質(zhì)粒制備的DNA片段)，合成質(zhì)粒等等。優(yōu)選的質(zhì)粒的例子是用于大腸桿菌的pBR322或其人工衍生物(通過(guò)用合適的限制酶處理pBR322獲得的DNA片段)，用于酵母的酵母2ju質(zhì)?；蚪湍溉旧wDNA,用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的pRSVneoATCC37198，pSV2dhfrATCC37145,pdBPV-MMTneoATCC37224，pSV2neoATCC37149，pSV2bsr等等。也可以使用本領(lǐng)域通常使用的增強(qiáng)子序列，聚腺苷酸化位點(diǎn)和剪接連接區(qū)，例如從SV40衍生的那些?？梢愿鶕?jù)常規(guī)方法使用通常使用的選擇標(biāo)記。其例子是針對(duì)抗生素的抗藥性基因，例如四環(huán)素，氨千青霉素或卡那霉素抗藥性基因，和胸苷激酶基因。用于基因擴(kuò)增的基因的例子是二氳葉酸還原酶(DHFR)基因，胸苷激酶基因，新霉素抗藥性基因，谷氨酸合酶基因，腺苷脫氨酶基因，鳥(niǎo)氨酸脫羧酶基因，潮霉素-B-磷酸轉(zhuǎn)移酶基因，天冬氨酸轉(zhuǎn)氨曱酰酶基因等等。通過(guò)將至少上面提到的啟動(dòng)子，起始密碼子，編碼本發(fā)明蛋白的DNA，終止密碼子和終止子區(qū)與合適的復(fù)制子依次環(huán)狀連接，能夠制備本發(fā)明的表達(dá)載體。如果需要，可通過(guò)常規(guī)方法例如用限制酶消化或用T4DNA連接酶連接而使用合適的DNA片段(例如接頭，用其它限制酶產(chǎn)生的限制性酶切位點(diǎn))。通過(guò)將上述表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞中能制備本發(fā)明的轉(zhuǎn)化體。本發(fā)明中使用的宿主細(xì)胞沒(méi)有限制，只要與上述表達(dá)載體相容并且能夠被轉(zhuǎn)化。其例子是本發(fā)明
技術(shù)領(lǐng)域：
中通常使用的各種細(xì)胞例如天然細(xì)胞或人工建立的重組細(xì)胞(例如細(xì)菌(埃希氏菌屬或芽孢桿菌屬)，酵母(糖酵母屬，畢赤氏酵母屬等)，動(dòng)物細(xì)胞或昆蟲(chóng)細(xì)胞)。優(yōu)選使用大腸桿菌或動(dòng)物細(xì)胞。具體的例子是大腸桿菌(DH5a，DH10B,TB1，HBIOI，XL-2Blue，等)，來(lái)自小鼠的細(xì)胞(COP，L，C127，Sp2/0,NS-1，NIH3T3，等)，來(lái)自大鼠的細(xì)胞，來(lái)自倉(cāng)鼠的細(xì)胞(BHK，CHO，等)，來(lái)自猴的細(xì)胞(COSl，COS3，COS7,CV1，Velo等)，和來(lái)自人的細(xì)月包(Hela，二倍體成纖維細(xì)胞衍生的細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞，Namalwa等)。通過(guò)已知方法能將表達(dá)載體導(dǎo)入(轉(zhuǎn)化/轉(zhuǎn)導(dǎo)至)宿主細(xì)胞中。根據(jù)例如下面的方法能進(jìn)行轉(zhuǎn)化:當(dāng)宿主是細(xì)菌(大腸桿菌，枯草芽孢桿菌等)時(shí)，Cohen等的方法(美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，69巻,p.2110(1972)),原生質(zhì)體方法(分子基因遺傳學(xué)(Mol.Gen.Genet.)，168巻，p.111(1979))，或感受態(tài)方法(分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)，56巻，p.209(1971));當(dāng)宿主是啤酒糖酵母時(shí)，Hinnen等的方法(美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，75巻，p.1927(1978))，或鋰方法(J.Bacteriol.153巻，p.163(1983));當(dāng)宿主是動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，Graham的方法(病毒學(xué)(Virology),52巻，p.456(1973));當(dāng)宿主是昆蟲(chóng)細(xì)胞時(shí)，Summers等的方法(分子細(xì)胞生物學(xué)(Mol.Cell.Biol.)，3巻，pp.2156-2165(1983))。通過(guò)在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)包含上述制備的表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化體(下文中該術(shù)語(yǔ)包括轉(zhuǎn)導(dǎo)體)能夠產(chǎn)生本發(fā)明AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)的胞外區(qū)。用相同方法能產(chǎn)生AILIM配體。營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基優(yōu)選包括宿主細(xì)胞(轉(zhuǎn)化體)生長(zhǎng)必需的碳源，無(wú)機(jī)氮源，或有機(jī)氮源。碳源的例子是葡萄糖，葡聚糖，可溶性淀粉和蔗糖，無(wú)機(jī)或有機(jī)氮源的例子是銨鹽，硝酸鹽，氨基酸，玉米漿，蛋白胨，酪蛋白水解物，肉提取物，大豆餅和馬鈴薯提取物。如果需要，它們可以含有其它營(yíng)養(yǎng)物(例如無(wú)機(jī)鹽(例如氯化鈞，磷酸二氫鈉和氯化鎂)，維生素，抗生素(例如四環(huán)素，新霉素，氨芐青霉素，卡那霉素等))。通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法進(jìn)行培養(yǎng)。適當(dāng)選擇培養(yǎng)條件例如溫度，培養(yǎng)基的pH,和培養(yǎng)時(shí)間，使得超量產(chǎn)生本發(fā)明的蛋白質(zhì)。下面詳細(xì)說(shuō)明根據(jù)宿主細(xì)胞使用的具體培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。當(dāng)宿主是細(xì)菌，放線(xiàn)菌，酵母，絲狀真菌時(shí)，包括上述營(yíng)養(yǎng)源的液體培養(yǎng)基是合適的。優(yōu)選使用pH5-8的培養(yǎng)基。當(dāng)宿主是大腸桿菌時(shí)，優(yōu)選的培養(yǎng)基的例子是LB培養(yǎng)基，M9培養(yǎng)基(Miller等，實(shí)驗(yàn)分子遺傳學(xué)(Exp.Mol.Genet.)，冷泉港實(shí)驗(yàn)室，p.431(1972))，YT培養(yǎng)基等。使用這些培養(yǎng)基，通常在14°C-43。C下培養(yǎng)約3-24小時(shí)，如果需要，通氣并攪拌。當(dāng)宿主是芽孢桿菌時(shí)，通常在30°C-40。C下培養(yǎng)約16-96小時(shí)，如果需要，通氣并攪拌。當(dāng)宿主是酵母時(shí)，培養(yǎng)基的例子是Burlholder基本培養(yǎng)基(Bostian,美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，77巻，p.4505,1980)。pH優(yōu)選為5-8。通常在20°C-35。C下培養(yǎng)約14-144小時(shí)，如果需要，通氣并攪拌。當(dāng)宿主是動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)基的例子是含有5-20%胎牛血清的MEM培養(yǎng)基(科學(xué)(Science),122巻，p.501(1952))，DMEM培養(yǎng)基(病毒學(xué)(Virology),8巻，p.396(1959)),RPMI1640培養(yǎng)基(美國(guó)藥物學(xué)會(huì)雜志(J，Am.Med.Assoc.)，199巻，p.519(1967))，199培養(yǎng)基(Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，73巻，p.1(1950)),HamF12培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基的pH優(yōu)選是約6-8。通常在約30。C-40。C下培養(yǎng)約15-72小時(shí)，如果需要，通氣并攪拌。當(dāng)宿主是昆蟲(chóng)細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)基的例子是含有胎牛血清的Grace's培養(yǎng)基(美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，82巻，p.8404,1985)。其pH優(yōu)選是約5-8。通常在約20°C-40。C下培養(yǎng)約15-100小時(shí)，如果需要，通氣并攪拌。通過(guò)培養(yǎng)上述轉(zhuǎn)化的細(xì)胞(特別是動(dòng)物細(xì)胞或大腸桿菌)并且使之分泌蛋白質(zhì)到培養(yǎng)上清液中，能產(chǎn)生本發(fā)明的AILIM(特別優(yōu)選人AILIM)的胞外區(qū)(可溶性AILIM)。即，通過(guò)例如將所得培養(yǎng)物過(guò)濾或離心可獲得培養(yǎng)物濾液(上清液)，并且通過(guò)常用于純化和分離天然或合成蛋白的方法從培養(yǎng)物濾液純化和分離本發(fā)明的多肽或多肽片段。分離和純化方法的例子是利用特異性親和力的方法，例如親和層析，利用溶解度的方法，例如鹽析和溶劑沉淀方法，利用分子量差異的方法，例如透析，超濾，凝膠過(guò)濾和十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，利用電荷的方法，例如離子交換層析和羥基磷灰石層析，利用疏水性差異的方法，例如反相高效液相色鐠，和利用等電點(diǎn)差異的方法，例如等電聚焦。當(dāng)培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化體的周質(zhì)或胞質(zhì)中存在目的蛋白時(shí)，首先通過(guò)常規(guī)方法例如過(guò)濾或離心收集真菌菌體或細(xì)胞并且懸浮于合適的緩沖液中。通過(guò)例如超聲溶解，溶菌酶，和凍融等方法破壞細(xì)胞的細(xì)胞壁和/或細(xì)胞膜之后，通過(guò)例如離心或過(guò)濾的方法獲得含有本發(fā)明多肽的膜級(jí)分。這樣的膜級(jí)分用去污劑例如Triton-X100溶解獲得粗提取物。最后，通過(guò)如上述常規(guī)方法從該粗提取物分離并純化所述多肽或多肽片段。在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"不溶性載體"指用來(lái)通過(guò)物理吸附或化學(xué)連接將多肽固定于其上的載體。例如，所述載體可以是(l)平板，試管，管，或具有內(nèi)部空間的類(lèi)似物，小珠，球，濾膜，膜，或由水不溶性材料包括塑料例如聚苯乙烯樹(shù)脂，聚碳酸酯樹(shù)脂，有機(jī)硅樹(shù)脂或尼龍樹(shù)脂，或玻璃制成的物件，和(2)親和層析中使用的不溶性載體，例如纖維素載體，瓊脂糖載體，聚丙烯酰胺載體，葡聚糖樹(shù)脂，聚苯乙烯載體，聚乙烯醇載體，聚氨基酸載體，多孔硅樹(shù)脂載體等。本發(fā)明的"能給出可檢測(cè)信號(hào)的標(biāo)記物質(zhì)"包括，例如，酶，焚光材料，發(fā)光材料，生物素，抗生物素蛋白或放射性同位素，更具體地說(shuō)，酶例如過(guò)氧化物酶(例如辣根過(guò)氧化物酶)，堿性磷酸酶，p-D-半乳糖苷酶，葡糖氧化酶，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，乙醇脫氫酶，蘋(píng)果酸脫氫酶，青霉素酶，過(guò)氧化氫酶，脫-葡萄糖氧化酶，脲酶，螢光素酶，乙酰膽堿酯酶等；熒光材料例如異硫氰酸熒光素，藻膽蛋白，稀土金屬螯合劑，丹磺酰氯，異硫氰酸四曱基羅丹明等；放射性同位素例如&,14C，1251,1311等；生物素，抗生物素蛋白和發(fā)光材料。其中，放射性同位素或熒光材料甚至單獨(dú)使用時(shí)都能給出可檢測(cè)信號(hào)。另一方面，當(dāng)單獨(dú)使用時(shí)，酶，發(fā)光材料，生物素或抗生物素蛋白不提供可檢測(cè)信號(hào)，但是當(dāng)使其與一種或多種物質(zhì)反應(yīng)時(shí)，其能提供可檢測(cè)信號(hào)。例如，當(dāng)標(biāo)記是一種酶時(shí)，^r測(cè)時(shí)必需有至少一種底物。才艮據(jù)用于測(cè)定酶活性的方法的類(lèi)型(比色法，熒光檢查，利用生物發(fā)光或化學(xué)發(fā)光的方法等)可以使用不同類(lèi)型的底物。例如，當(dāng)標(biāo)記是過(guò)氧化物酶時(shí)，可以使用過(guò)氧化氫作為底物?；?，當(dāng)標(biāo)記是生物素時(shí)，通常使用抗生物素蛋白或酶-修飾的抗生物素蛋白，但是不局限于此。根據(jù)需要，可按所使用的底物的類(lèi)型使用各種發(fā)光物質(zhì)。本發(fā)明中可以使用任何上述標(biāo)記。但是，考慮到檢測(cè)或測(cè)試的靈敏度以及操作的方便，優(yōu)選的標(biāo)記是酶，例如過(guò)氧化物酶或生物素。根據(jù)本發(fā)明的"用于鑒定能結(jié)合AILIM或AILIM配體的物質(zhì)的方法"建立在免疫測(cè)定的原理上。具體地說(shuō)，可以利用"免疫測(cè)定，，(第三版，編著，EijiIshikawa等，47Igakushoin,1987)中描述的各種方法的原理。優(yōu)選利用的原理有固相-一抗體方法，液相兩抗體方法，固相兩抗體方法，夾心方法和一鍋法(one-pot),如描述于審查公開(kāi)的日本專(zhuān)利申請(qǐng)(JP-B)平2-39747。此外，利用抗原-抗體反應(yīng)的測(cè)定方法有EMIT法(酶放大免疫測(cè)定技術(shù))，酶通道免疫分析，酶調(diào)節(jié)劑介導(dǎo)的酶免疫分析(EMMIA)，酶抑制劑免疫分析，免疫酶計(jì)量(immunoenzymometric)測(cè)定，酶增強(qiáng)的免疫分析和近側(cè)鍵合的免疫分析定。在本發(fā)明中，根據(jù)目的可以適當(dāng)選擇所述免疫分析原理的任何一個(gè)。但是，要考慮程序的方便和/或經(jīng)濟(jì)利益，特別是臨床通用性，優(yōu)選利用夾心方法，一鍋法，或固相一抗體方法，更優(yōu)選夾心方法或一鍋法。特別優(yōu)選的是利用有很多孔的多孔微量滴定板例如96孔微滴培養(yǎng)板的夾心法，或利用固定有多肽的d、珠并使用經(jīng)酶例如過(guò)氧化物酶或經(jīng)生物素標(biāo)記的配對(duì)物的一鍋法。附圖簡(jiǎn)述圖1給出利用流式細(xì)胞儀通過(guò)細(xì)胞ELISA分析的抗-人IgG抗體，抗-人IgK抗體，和抗-人IgFc抗體對(duì)人抗-人AILIM單克隆抗體的各自反應(yīng)性。(a)-(l)組分別給出了下述測(cè)定的各自結(jié)果。(a)組:在不存在一抗的情況下向已經(jīng)平鋪了野生型HPB-ALL細(xì)胞的微量培養(yǎng)板加入作為二抗的生物素-標(biāo)記的抗-人IgG抗體的測(cè)定結(jié)果。(b)組:在不存在一抗的情況下向已經(jīng)平鋪了野生型HPB-ALL細(xì)胞的微量培養(yǎng)板加入作為二抗的生物素-標(biāo)記的抗-人IgK抗體的測(cè)定結(jié)果。(c)組:在不存在一抗的情況下向已經(jīng)平鋪了野生型HPB-ALL細(xì)胞的微量培養(yǎng)板加入作為二抗的生物素-標(biāo)記的抗-人IgFc抗體的測(cè)定結(jié)果。(d)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-136用作一抗并且生物素-標(biāo)記的抗-人IgG抗體用作二抗的測(cè)定結(jié)果。(e)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-136用作一抗并且生物素-標(biāo)記的抗-人IgK抗體用作二抗的測(cè)定結(jié)果。(f)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-136用作一抗并且生物素-標(biāo)記的抗-人IgFc抗體用作二抗的測(cè)定結(jié)果。(g)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-138用作一抗并且生物素-標(biāo)記的抗-人IgG抗體用作二抗的測(cè)定結(jié)果。(h)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-138用作一抗并且生物素-標(biāo)記的抗-人IgK抗體用作二抗的測(cè)定結(jié)果。(i)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-138用作一抗并且生物素-標(biāo)記的抗-人IgFc抗體用作二抗的測(cè)定結(jié)果。(j)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-139用作一抗并且生物素-標(biāo)記的抗-人IgG抗體用作二抗的測(cè)定結(jié)果。(k)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-139用作一抗并且生物素-標(biāo)記的抗-人IgK抗體用作二抗的測(cè)定結(jié)果。(1)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-139用作一抗并且生物素-標(biāo)記的抗-人IgFc抗體用作二抗的測(cè)定結(jié)果。各組中帶有空心符號(hào)的曲線(xiàn)對(duì)應(yīng)于用人抗-KLH單克隆抗體作為對(duì)照抗體的測(cè)定結(jié)果。圖2給出用抗-人IgG抗體經(jīng)夾心ELISA測(cè)定的人IgG單克隆抗體(標(biāo)準(zhǔn)品)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)?？v軸指示焚光強(qiáng)度，橫軸指示標(biāo)準(zhǔn)品的濃度。圖3給出各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)人AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性。縱軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的熒光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定的結(jié)果，"人"指對(duì)人AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定的結(jié)果。圖4給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體或作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體對(duì)人AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性。縱軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的熒光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果，"人，，指對(duì)人AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果。圖5給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)人AILIM-過(guò)表達(dá)型重組49CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性?？v軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的熒光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果，"人"指對(duì)人AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果。圖6給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)人AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性?？v軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的熒光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果，"人"指對(duì)人AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果。圖7給出大鼠抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)小鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性?？v軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的焚光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果，"小鼠"指對(duì)小鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果。圖8給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體或作為陰性對(duì)照的人抗-KLG單克隆抗體對(duì)小鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性?？v軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的熒光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果，"小鼠"指對(duì)小鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果。圖9給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)小鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性?？v軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的熒光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果，"小鼠"指對(duì)小鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果。圖10給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)小鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性?？v軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的焚光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果，"小鼠"指對(duì)小鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果。圖11給出各種小鼠抗-大鼠AILIM單克隆抗體對(duì)大鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性?？v軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的焚光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果，"大鼠"指對(duì)大鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果。圖12給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體或作為陰性對(duì)照的人抗-KLG單克隆抗體對(duì)大鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性。縱軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的熒光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果，"大鼠"指對(duì)大鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果。圖13給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)大鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性?？v軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的熒光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果，"大鼠"指對(duì)大鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果。圖14給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)大鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞或野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合活性?？v軸指示作為與重組細(xì)胞的結(jié)合活性指數(shù)的熒光強(qiáng)度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術(shù)語(yǔ)"CHO"指對(duì)野生型CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果，"大鼠"指對(duì)大鼠AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞的結(jié)合測(cè)定結(jié)果。圖15給出用抗-人CD3單克隆抗體和小鼠抗-人AILIM單克隆抗體一51起包被的微量培養(yǎng)板分析各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者A"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。圖16給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者A，，的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。圖17給出用抗-人CD3單克隆抗體和小鼠抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者B"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[311]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHCr，指其中抗-人CETP單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖18給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者B，，的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖19給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者B，，的T細(xì)胞的增殖活性。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖20給出用抗-人CD3單克隆抗體和小鼠抗-人AILIM單克隆抗體一52起包被的微量培養(yǎng)板分析各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者C"的T細(xì)胞的增殖活性。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHC1"指其中抗-人CETP單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖21給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者C"的T細(xì)胞的增殖活性。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺普摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"124":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。圖22給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者C"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。圖23給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者C"的T細(xì)胞的增殖活性。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。"138":人抗-人AIUM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。圖24給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者C"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺普摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖25給出用抗-人CD3單克隆抗體和小鼠抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者D"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHC1"指其中抗人CETP單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖26給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者D"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺香摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替54人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"124":人抗-人AILIM單克隆抗體JMaM24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。圖27給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者D，，的T細(xì)胞的增殖活性。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苦摻入細(xì)胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注^奪如下"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。圖28給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者D"的T細(xì)胞的增殖活性。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。圖29給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者D"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖30給出用抗-人CD3單克隆抗體和小鼠抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者E"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHCl"指其中抗人CETP單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖31給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者E"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"124":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab124。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab126。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab127。圖32給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者E"的T細(xì)胞的增殖活性。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl35。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。圖33給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者E，，的T細(xì)胞的增殖活性。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3閉腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab138。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab139。圖34給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，正常健康"供者E"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab140。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖35給出當(dāng)單獨(dú)向用抗-人CD3單克隆抗體包被的樣i量培養(yǎng)板加入小鼠抗-人AILIM單克隆抗體(于液相中)的溶液時(shí)，對(duì)各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性的測(cè)定中正常健康"供者D"的T細(xì)胞的增殖活性。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHCl"指其中抗人CETP單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖36給出當(dāng)單獨(dú)向用抗-人CD3單克隆抗體包被的微量培養(yǎng)板加入人抗-人AILIM單克隆抗體(于液相中)的溶液時(shí)，對(duì)各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性的測(cè)定中正常健康"供者D"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AIUM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"124":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"125":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl25。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。圖37給出當(dāng)單獨(dú)向用抗-人CD3單克隆抗體包被的微量培養(yǎng)板加入人抗-人AILIM單克隆抗體(于液相中)的溶液時(shí)，對(duì)各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性的測(cè)定中正常健康"供者D"的T細(xì)胞的增殖活性。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"128":人抗-人AILIM單克隆抗體jMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab136。圖38給出當(dāng)單獨(dú)向用抗-人CD3單克隆抗體包被的微量培養(yǎng)板加入人抗-人AILIM單克隆抗體(于液相中)的溶液時(shí)，對(duì)各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同剌激信號(hào)的活性的測(cè)定中正常健康"供者D"的T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。圖39給出當(dāng)單獨(dú)向用抗-人CD3單克隆抗體包被的微量培養(yǎng)板加入人抗-人AILIM單克隆抗體(于液相中)的溶液時(shí)，對(duì)各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同剌激信號(hào)的活性的測(cè)定中正常健康"供者D"的T細(xì)胞的增殖活性。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷的細(xì)胞摻入的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"140，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl41。圖40給出在用小鼠抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板中培養(yǎng)的來(lái)自正常健康"供者B，，的T細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生的IFN-Y的量?？v軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHC1"指其中抗-人CETP單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖41給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板中培養(yǎng)的來(lái)自正常健康"供者B，，的T細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生的IFN-Y的量?？v軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替59人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖42給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板中培養(yǎng)的來(lái)自正常健康"供者B"的T細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生的IFN-y的量?？v軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖43給出在用小鼠抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板中培養(yǎng)的來(lái)自正常健康"供者C"的T細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生的IFN-Y的量?？v軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHCl"指其中抗-人CETP單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖44給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板中培養(yǎng)的來(lái)自正常健康"供者C"的T細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生的IFN-Y的量?？v軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"124":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"125":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab125。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab126。圖45給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板中培養(yǎng)的來(lái)自正常健康"供者C"的T細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生的IFN-Y的量?？v軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。60在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。圖46給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板中培養(yǎng)的來(lái)自正常健康"供者C，，的T細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生的IFN-Y的量?？v軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。圖47給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板中培養(yǎng)的來(lái)自正常健康"供者C，，的T細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生的IFN-Y的量?？v軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。其它注釋如下"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab]41。圖48給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，各種試驗(yàn)樣品在正常健康"供者A，，的T細(xì)胞與正常健康"供者D，，的PBMC共同培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。縱軸是能指示細(xì)胞增殖程度的卩H]腺苷摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。附圖中的各說(shuō)明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig":人CTLA4-IgFc嵌合分子"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖49給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體在正常健康"供者A，，的T細(xì)胞與正常健康"供者D"的PBMC共培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用?？v軸為指示細(xì)胞增殖程度的[3司腺苦摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。其它注;降如下"抗-KLH，，作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl35。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。圖50給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，各種試驗(yàn)樣品在正常健康"供者D，，的T細(xì)胞與正常健康"供者B"的PBMC共培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用?？v軸為指示細(xì)胞增殖程度的卩H]腺苷摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。附圖中的各說(shuō)明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig，，人CTLA4-IgFc嵌合分子"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖51給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)各種人抗-人AILIM單克隆抗體在正常健康"供者D，，的T細(xì)胞與正常健康"供者B"的PBMC共培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細(xì)胞增殖程度的pH]腺苷摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。其它注釋如下"抗-KLH":作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。圖52給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，各種試驗(yàn)樣品在正常健康"供者C，，的T細(xì)胞與正常健康"供者A"的PBMC共培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用?？v軸為指示細(xì)胞增殖程度的[3司腺苷摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。附圖中的各說(shuō)明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig，，人CTLA4-IgFc嵌合分子"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖53給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體在正常健康"供者C，，的T細(xì)胞與正常健康"供者A"的PBMC共培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用?？v軸為指示細(xì)胞增殖程度的[3司腺苷摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。其它注釋如下"抗-KLH":作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl35。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab136。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。圖54給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，各種試驗(yàn)樣品在正常健康"供者E"的T細(xì)胞與正常健康"供者G"的PBMC共培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用?？v軸為指示細(xì)胞增殖程度的卩H]腺苷摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。附圖中的各說(shuō)明如下。"對(duì)照mlgG":抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CD80+86Ab":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig":人CTLA4-IgFc嵌合分子。圖55給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體在正常健康"供者E"的T細(xì)胞與正常健康"供者G"的PBMC共培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用?？v軸為指示細(xì)胞增殖程度的[311]腺苷摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。其它注釋如下"抗-KLH，，作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-136，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab138。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖56給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，各種試驗(yàn)樣品在正常健康"供者F，，的T細(xì)胞與正常健康"供者E"的PBMC共培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。64縱軸為指示細(xì)胞增殖程度的[3司腺苷摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。附圖中的各說(shuō)明如下。"對(duì)照mlgG，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CD80+86Ab":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"SA12":抗-人AILIM小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig，，人CTLA4-IgFc嵌合分子。圖57給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，各種試驗(yàn)樣品在正常健康"供者F"的T細(xì)胞與正常健康"供者E，，的PBMC共培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用?？v軸為指示細(xì)胞增殖程度的[3司腺苦摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。附圖中各說(shuō)明如下"抗-KLH":作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-136，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖58給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，各種試驗(yàn)樣品在正常健康"供者G"的T細(xì)胞與正常健康"供者F"的PBMC共培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用?？v軸為指示細(xì)胞增殖程度的[3司腺苷摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。附圖中的各i兌明如下。"對(duì)照mlgG，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CD80+86Ab":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"SA12":抗-人AILIM小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig，'人CTLA4-IgFc嵌合分子。圖59給出在通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢驗(yàn)T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，各種試驗(yàn)樣品在正常健康"供者G，，的T細(xì)胞與正常健康"供者F，，的PBMC65共培養(yǎng)的情況下對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細(xì)胞增殖程度的[3印腺苦摻入量，橫軸指示試驗(yàn)樣品的濃度。附圖中各說(shuō)明如下"抗-KLH，，作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl41。圖60給出在使用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的測(cè)試中，各種對(duì)照試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。來(lái)自正常健康"供者A，，的T細(xì)胞與來(lái)自正常健康"供者D"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預(yù)培養(yǎng)的PBMC共同培養(yǎng)?？v軸為指示細(xì)胞增殖程度的[3司腺苷摻入細(xì)胞量，橫軸指示試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。附圖中的各說(shuō)明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl":抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖61給出在使用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的測(cè)試中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。來(lái)自正常健康"供者A，，的T細(xì)胞與來(lái)自正常健康"供者D，，的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預(yù)培養(yǎng)的PBMC共同培養(yǎng)?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。其它注釋如下"抗-KLH，，作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。66"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab137。圖62給出在使用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的測(cè)試中，各種對(duì)照試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。來(lái)自正常健康"供者D，，的T細(xì)胞與來(lái)自正常健康"供者B，，的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預(yù)培養(yǎng)的PBMC共同培養(yǎng)。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的^H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。附圖中的各說(shuō)明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl":抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖63給出在使用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的測(cè)試中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。來(lái)自正常健康"供者D"的T細(xì)胞與來(lái)自正常健康"供者B，，的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預(yù)培養(yǎng)的PBMC共同培養(yǎng)。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。其它注釋如下"抗-KLH":作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。圖64給出在使用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的測(cè)試中，各種對(duì)照試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。來(lái)自正常健康"供者C"的T細(xì)胞與來(lái)自正常健康"供者A"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預(yù)培養(yǎng)的PBMC共同培養(yǎng)?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苦摻入細(xì)胞的量，橫軸指示試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。附圖中的各說(shuō)明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖65給出在使用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的測(cè)試中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。來(lái)自正常健康"供者C"的T細(xì)胞與來(lái)自正常健康"供者A"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預(yù)培養(yǎng)的PBMC共同培養(yǎng)。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。其它注纟奪如下"抗-KLH":作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。圖66給出在使用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的測(cè)試中，各種對(duì)照試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。來(lái)自正常健康"供者E"的T細(xì)胞與來(lái)自正常健康"供者G"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預(yù)培養(yǎng)的PBMC共同培養(yǎng)。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苦摻入細(xì)胞的量，橫軸指示試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。附圖中的各說(shuō)明如下。"對(duì)照mlgG，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CD80+86Ab":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖67給出在使用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的測(cè)試中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。來(lái)自正常健康"供者E，，的T細(xì)胞與來(lái)自正常健康"供者G"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預(yù)培養(yǎng)的PBMC共同培養(yǎng)?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。其它注;降如下"抗-KLH，，作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-136，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab138。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖68給出在使用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的測(cè)試中，各種對(duì)照試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。來(lái)自正常健康"供者G，，的T細(xì)胞與來(lái)自正常健康"供者F，，的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預(yù)培養(yǎng)的PBMC共同培養(yǎng)?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。附圖中的各說(shuō)明如下。"對(duì)照mlgG，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CD80+86Ab，，抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖69給出在使用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的測(cè)試中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。來(lái)自正常健康"供者G"的T細(xì)胞與來(lái)自正常健康"供者F"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預(yù)培養(yǎng)的PBMC共同培養(yǎng)。縱軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的[3司腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。其它注釋如下"抗-KLH":作為陰性對(duì)照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-136，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖70給出野生型CHO細(xì)胞用作輩巴細(xì)胞情況下，各種人抗-人AILIM單克隆抗體和對(duì)照抗體的ADCC-誘導(dǎo)活性?？v軸指示抗體的ADCC-誘導(dǎo)活性引起的細(xì)胞毒性率，橫軸指示抗體的濃度。圖71給出人AILIM-過(guò)表達(dá)型重組CHO細(xì)胞用作靶細(xì)胞情況下，各種人抗-人AILIM單克隆抗體和對(duì)照抗體的ADCC-誘導(dǎo)活性。縱軸指示抗體的ADCC-誘導(dǎo)活性導(dǎo)致的細(xì)胞損傷率，橫軸指示抗體的濃度。圖72給出抗-AILIM抗體對(duì)遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)的抑制作用。縱軸指示作為遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生指數(shù)的紅斑大小，橫軸指示給予動(dòng)物受試者的試驗(yàn)樣品的類(lèi)型。圖73給出用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板測(cè)定各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，猴T細(xì)胞的增殖活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對(duì)照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測(cè)試結(jié)果。圖74給出陰性對(duì)照抗體對(duì)可溶性AILIM配體(hB7h-IgFc)與各種濃度的可溶性AILIM(AILIM-IgFc)之間的結(jié)合的抑制活性?？v軸指示作為抑制活性指數(shù)的吸收度，橫軸指示可溶性AILIM的濃度。圖75給出抗AILIM抗體對(duì)可溶性ALLIM配體(hB7h-IgFc)與各種濃度的可溶性AILIM(AILIM-IgFc)之間的結(jié)合的抑制活性?？v軸指示作為抑制活性指數(shù)的吸收度,橫軸指示可溶性AILIM的濃度。與可溶性AILIM(AILIM-IgFc)之間的結(jié)合的抑制活性?？v軸指示作為抑制活性指數(shù)的吸收度,橫軸指示可溶性AILIM的濃度。圖77給出用可溶性人AILIM配體(hB7h-IgFc)和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板測(cè)定轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)人T細(xì)胞增殖的抑制活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苦摻入細(xì)胞的量，橫軸指示抗體的濃度。圖78給出用可溶性人AILIM配體(hB7h-IgFc)和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養(yǎng)板測(cè)定轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性時(shí)，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)猴T細(xì)胞增殖的抑制活性?？v軸指示作為細(xì)胞增殖程度指數(shù)的卩H]腺苷摻入細(xì)胞的量，橫軸指示抗體的濃度。實(shí)施本發(fā)明的最佳方式下面參考實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但是這不應(yīng)視為限制。實(shí)施例1:免疫原的制備<1-1>制備表達(dá)人AILIM的重組細(xì)胞依照在早期公開(kāi)(JP-ANo.Hei11-29599和W098/38216)，以及本發(fā)明人之一，Tezuka的早期報(bào)告(Int.Immunology,Vo1.12，No.l，p.51-55，2000)中所述方法制備過(guò)表達(dá)人AILIM的兩種重組細(xì)胞(CHO細(xì)胞和HPB-ALL細(xì)胞)。具體地，此方法如下將含有編碼人AILIM的全長(zhǎng)ORF的cDNA(GenBank登記號(hào)AB023135(cDNA);BAA82129(氨基酸))插入到載體pEF-neo中。然后用GenePulser(BioRad)經(jīng)常用的電穿孔法(960pF,320V)將上述所得重組表達(dá)載體引入中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)和人胸腺瘤細(xì)胞系HPB-ALL細(xì)胞中。每種細(xì)胞培養(yǎng)在含遺傳霉素(0.8mg/ml;GibcoBRL)和10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基中以挑選抗藥性的轉(zhuǎn)化細(xì)胞。<1-2〉選擇過(guò)表達(dá)人AILIM的重組HPB-ALL細(xì)胞將在上述<1-1>中所選的抗藥性HPB-ALL細(xì)胞培養(yǎng)液離心得到細(xì)胞沉71淀。將本發(fā)明人早期建立并報(bào)導(dǎo)(JP-A11-29599(實(shí)施例12)和W098/38216(實(shí)施例12))的稱(chēng)為"SA12"的小鼠抗-人AILIM單克隆抗體(小鼠抗-人JTT-1抗原單克隆抗體)力。入到細(xì)胞沉淀中(濃度以100|111/105細(xì)胞的比例加入經(jīng)EDTA-BSA/PBS稀釋的抗體溶液(10jug/m1))。所得混合物4°C下保溫30分鐘。用上述EDTA-BSA/PBS(200jil)洗細(xì)胞兩次，然后再加入用藻紅蛋白標(biāo)記的鏈霉抗生物素(SA-PE;100)al500倍稀釋液)。將所得混合物4。C下保溫30分鐘。保溫后，用EDTA-BSA/PBS洗細(xì)胞3次，制備細(xì)胞懸浮液。用流式細(xì)胞儀FACSort(Beckton-Dichinson)分析細(xì)胞懸浮液中不同細(xì)胞的人AILIM表達(dá)水平，以挑選出過(guò)表達(dá)人AILIM的重組HPB-ALL細(xì)胞。在含有10%FCS和G418(lmg/ml)的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)所選細(xì)胞到鋪滿(mǎn)。<1-3>對(duì)過(guò)表達(dá)人AILIM的重組CHO細(xì)胞的篩選將在上述<1-1>中所選的抗藥性CHO細(xì)胞培養(yǎng)液離心得到細(xì)胞沉淀。將上述已用FITC標(biāo)記的小鼠抗人AILIM單克隆抗體SA12加入到每種細(xì)胞沉淀中(用EDTA-BSA/PBS稀釋的抗體溶液(100iag/m1))。將所得混合物4°C下保溫30分鐘。用上述EDTA-BSA/PBS清洗細(xì)胞，向細(xì)胞沉淀中加入EDTA-BSA/PBS(500idl)制備細(xì)胞懸浮液。用流式細(xì)胞儀FACSort(Beckton-Dichinson)分析細(xì)胞懸浮液中不同細(xì)胞的人AILIM表達(dá)水平，以挑選出過(guò)表達(dá)人AILIM的重組HPB-ALL細(xì)胞。在含有10%FCS和G418(lmg/ml)的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)所選細(xì)胞到鋪滿(mǎn)。<1-4〉從過(guò)表達(dá)人AILIM的HPB-ALL細(xì)胞制備免疫原將上述<1-2〉中所得過(guò)表達(dá)人AILIM的HPB-ALL細(xì)胞離心。用磷酸緩沖液(PBS;NikkenSeibutsu)清洗回收的細(xì)胞沉淀4次，然后重懸于含蛋白酶抑制劑的緩沖液(含有25mMHEPES(pH7.4),10mMMgCl2，0.25M蔗糖，和蛋白酶抑制劑(10U/ml抑蛋白酶肽，2pg/ml胃蛋白酶抑制劑，50|ag/ml亮抑蛋白酶肽，和0.35mg/mlPMSF))。在Potter型勻漿器中處理細(xì)胞懸浮液，并低速離心(4。C下1，500rpmIO分鐘)。然后將所得上清超速離心(100,000g4。C下l小時(shí))?；厥粘恋淼哪ぜ?jí)分，并懸浮在磷酸緩沖液中(調(diào)整膜級(jí)分濃度使lmlPBS包含得自1x107個(gè)細(xì)胞的膜級(jí)分)。-S(TC下保存該懸浮液。包含細(xì)胞膜級(jí)分的懸浮液用作抗原(免疫原)以制備本發(fā)明的人抗體，下面有對(duì)此的記述。<1-5〉從過(guò)表達(dá)人AILIM的CHO細(xì)胞制備免疫原將上述<1-3〉中所得過(guò)表達(dá)人AILIM的CHO細(xì)胞用刮刀分散并離心?；厥盏募?xì)胞沉淀用磷酸緩沖液(PBS;NikkenSeibutsu)清洗4次，然后重懸于含蛋白酶抑制劑的緩沖液(含有25mMHEPES(pH7.4)，10mMMgCl2，0.25M蔗糖，和蛋白酶抑制劑(10U/ml抑蛋白酶肽，2|Lig/ml胃蛋白酶抑制劑，50pg/ml亮抑蛋白酶肽，和0.35mg/mlPMSF))。在Potter型勻漿器中處理細(xì)胞懸浮液，并低速離心(4。C下1,500rpm10分鐘)。然后所得上清液超速離心(100,000g4。C下1小時(shí))。回收沉淀的膜級(jí)分，并懸浮在磷酸緩沖液中(調(diào)整膜級(jí)分濃度使lmlPBS包含得自1x10個(gè)細(xì)胞的膜級(jí)分)。-80。C下保存懸浮液。包含細(xì)胞膜級(jí)分的懸浮液用作抗原(免疫原)制備本發(fā)明的人抗體，下面有對(duì)此的記述。實(shí)施例2:制備能產(chǎn)生人抗-人AILIM單克隆抗體的雜交瘤在本實(shí)施例中，依照"實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)(增刊)，細(xì)胞技術(shù)手冊(cè)"(T.Kuroki等編，Yodosha,pp.66-74,1992)和"單克隆抗體實(shí)驗(yàn)手冊(cè)"(T.Ando等，Kodansha，1991)所述典型方法進(jìn)行單克隆抗體的制備。實(shí)施例1中制備自過(guò)表達(dá)人AILIM的重組細(xì)胞的細(xì)胞膜級(jí)分用作人AILIM的免疫原。進(jìn)行免疫的動(dòng)物是通過(guò)上述方法(NatureGenetics,Vol.7，p.l3-21，1994;NatureGenetics,Vol.15，p.146-156，1997;公開(kāi)的國(guó)際申請(qǐng)日語(yǔ)翻譯件Hei4-504365;公開(kāi)的國(guó)際申請(qǐng)日語(yǔ)翻i奪件Hei7-509137;NikkiScience,6月，pp.40-50,1995;等)產(chǎn)生的生產(chǎn)人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠。采用多孔微量培養(yǎng)板進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。<2-1>免疫和雜交瘤的制備對(duì)上述產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠給予上述<1-4>中(得自HPB-ALL)或<1-5>中(得自CHO)制備的免疫原(100W/小鼠/給藥)。將免疫原與wit弗氏完全佐劑(ICN/CAPPEL)—起注射進(jìn)足墊作為初次免疫(0天)。初次免疫后，以一周的間隔繼續(xù)在足墊注射任一種免疫原作為第二次和/或第三次免疫。以同樣方式進(jìn)行末次注射，兩天后，如下制備'淋巴細(xì)胞。末次免疫的兩天后，從各自免疫的轉(zhuǎn)基因小鼠的(腹股溝下和膝下)淋巴結(jié)和脾制備淋巴細(xì)胞。將淋巴細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞P3/X63-AG8.653(ATCC編號(hào)CRL-1580)以5:1的比例混合，加入聚乙二醇1500(BoehringerMannheim)作為融合劑。然后，用IO倍體積的無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基EX-CELL301(JRHBioscience)稀釋混合物?；旌系募?xì)胞隨后用基礎(chǔ)培養(yǎng)基清洗，然后懸浮在HAT培養(yǎng)基(1L基礎(chǔ)培養(yǎng)基中含13.61mg次黃嘌呤，176嗎氨基蝶呤，和3.88mg胸苷)中。將細(xì)胞鋪于96孔微量培養(yǎng)板上，培養(yǎng)10-14天完成細(xì)胞融合。細(xì)胞融合產(chǎn)生許多雜交瘤。<2-2〉篩選產(chǎn)生人單克隆抗體的雜交瘤上述<2-1>中制備的幾種雜交瘤采用下述的細(xì)胞ELISA方法進(jìn)行篩選，以挑選出生產(chǎn)抗人AILIM人單克隆抗體的雜交瘤。分別將上述過(guò)表達(dá)人AILIM的重組HPB-ALL細(xì)胞和重組CHO細(xì)胞鋪板在ELISA96孔微量培養(yǎng)板的每一孔中(lx105個(gè)細(xì)胞/孔)。37。C下保溫2天。隨后，棄去每孔的上清，加入每種雜交瘤培養(yǎng)液的上清樣品(50)il/孔)，保溫混合物1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，棄去混合的樣品液，每孔用含有1。/。BSA(Sigma)的PBS清洗3次。隨后，在每孔加入過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的山羊抗-人免疫球蛋白(Fc)抗體(每孔50|nl2000倍稀釋液；AmericanCorex;1。/。BSA/PBS)以檢測(cè)雜交瘤上清中的人免疫球蛋白(人單克隆抗體)重鏈?；旌衔锸覝叵卤?小時(shí)。另一方面，在每孔加入過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的山羊抗-人免疫球蛋白K鏈抗體(每孔50nl2000倍稀釋液)以檢測(cè)雜交瘤上請(qǐng)中的人免疫球蛋白(人單克隆抗體)輕鏈?；旌衔锸覝叵卤?5分鐘。從微量培養(yǎng)板的每孔除去抗-人IgFc抗體或抗-人IgK抗體，然后用含有1%BSA的PBS清洗微量培養(yǎng)板的每孔3次。每孔中加入四甲聯(lián)苯胺(3,3，，5，5，-四曱基聯(lián)苯胺(TMB)，100nl/孔，BIO-RAD)，所得混合物室溫下保溫15分鐘。隨后，每孔中加入INH2SO4(50(al/孔)以終止反應(yīng)。采用微量培養(yǎng)板讀取儀(3550型微量培養(yǎng)板讀取儀，BIO-RAD)在450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸收值以監(jiān)控反應(yīng)。以上述同樣的方法進(jìn)行對(duì)照ELISA實(shí)驗(yàn)，使用下列選項(xiàng)74(1)野生型HPB-ALL細(xì)胞，替代表達(dá)人AILIM的重組HPB-ALL細(xì)胞；(2)野生型CHO細(xì)胞，替代表達(dá)人AILIM的重組CHO細(xì)胞；(3)抗人AILIM小鼠單克隆抗體(SA12或SG430;JP-A1l-29599(實(shí)施例12)和W098/38216(實(shí)施例12))替代雜交瘤上清；(4)抗KLH(匙孔血藍(lán)蛋白，P正RCE)的人單克隆抗體，替代雜交瘤上清。通過(guò)用KLH(匙孔血藍(lán)蛋白，P正RCE)免疫上述生產(chǎn)人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠，以與<2-1>同樣的方法制備人抗-KLH單克隆抗體。通過(guò)所述篩選挑選能生產(chǎn)與人AILIM結(jié)合的人單克隆抗體的許多雜交瘤。<2-3>雜交瘤的初次克隆通過(guò)下列試驗(yàn)從<2-2〉所挑選的產(chǎn)生抗人AILIM的人單克隆抗體的多種雜交瘤(親本細(xì)胞系)建立多類(lèi)雜交瘤單克隆。將上述<2-2>中所選的雜交瘤分別鋪板在24孔微量培養(yǎng)板上。通過(guò)滴度確定每孔中的雜交瘤細(xì)胞數(shù)。隨后，將10。/。胎牛血清(FCS;TraceBiosciencePTY)，1%青霉素/鏈霉素(Sigma),1%HTSupplement(GibcoBRL)含4.0mML-谷胺酰胺和脂類(lèi)的EX-CELL301培養(yǎng)基(JRHBioscience)。用如此改變的培養(yǎng)基將雜交瘤稀釋到1x10"田胞/ml，將細(xì)胞懸浮在每孔中。將每孔的細(xì)胞懸浮液(300|^1或600inl)與改變的培養(yǎng)基(150ml或300ml)充分混合，然后在多個(gè)96孔板的每孔加入200|Lil細(xì)胞懸浮液，使每孔含有4個(gè)雜交瘤細(xì)胞。將上述改變的培養(yǎng)基(50ml或100ml)新鮮加入到剩下的已充分混合的細(xì)胞懸浮液中，然后將所得的細(xì)胞懸浮液加入到其它新制備的多個(gè)96孔農(nóng)i量培養(yǎng)板的每孔中，使每孔含有兩個(gè)雜交瘤細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)1到2周。培養(yǎng)后，在許多孔中發(fā)現(xiàn)了得自單個(gè)雜交瘤的單菌落o采用如上<2-2〉所述細(xì)胞ELISA方法，證實(shí)在含菌落的每孔的培養(yǎng)上清中產(chǎn)生了抗人AILIM的人單克隆抗體。<2-4>雜交瘤的再次克隆將如上<2-3〉所述所得不同雜交瘤克隆的每一克隆亞克隆(再次克隆)，方法如上<2-3〉所述。96孔微量培養(yǎng)板中每孔的細(xì)胞密度在本實(shí)驗(yàn)中調(diào)整為1個(gè)細(xì)胞/孔。篩選產(chǎn)生了許多生產(chǎn)抗人AILIM的人單克隆抗體的雜交瘤單克隆。這些克隆部分如下(克隆名稱(chēng))AIF34(JMabl24)，AIF182(JMab-126),AIF348(JMab-127),AIF620(JMab-128),AIF1052(JMab-135)，AIH5D3(JMab-136),AIH386(JMab-137),AII289(JMab-138),AII394(JMab-139)，AII488(JMab-140)，AIJ40(JMab-141),以上名稱(chēng)在本發(fā)明全文中使用，即在包含本實(shí)施例的下述所有實(shí)施例中，包含本實(shí)施例所得分析結(jié)果的圖表中使用。實(shí)施例3:分析單克隆抗體的性質(zhì)<3-1>重鏈和輕鏈的分析通過(guò)使用下述ELISA和流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)，如上<2-4>中所述克隆的每一雜交瘤克隆產(chǎn)生的抗人AILIM單克隆抗體確實(shí)是人單克隆抗體。將實(shí)施例1中制備的過(guò)表達(dá)人AILIM的重組HPB-ALL細(xì)胞鋪板在微量培養(yǎng)板的每一V形孔中(3x104個(gè)細(xì)胞/孔)。在含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基中37。C下培養(yǎng)細(xì)胞。培養(yǎng)完成后，將板離心(1800rpm,2分鐘)以沉淀細(xì)胞，然后棄去所得上清。隨后，將如上<2-4>所述克隆的每一雜交瘤培養(yǎng)液的上清樣品(50|111/孔)，或作為對(duì)照抗體的小鼠抗-人AILIM單克隆抗體SA12(2嗎/50ial)或備選地人抗-KLH單克隆抗體(50iul/孔)加入到每孔中。使該混合物在冰箱中反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)后，棄去樣品液，用磷酸緩沖液(含5mMEDTA的0.5%BSA-PBS)清洗每孔。隨后，將下列第二抗體的任一加入到每孔中(用上述磷酸緩沖液稀釋1000倍，加入量為50pl/孔)使細(xì)胞懸浮。懸浮液在冰箱中反應(yīng)30分鐘。(第二抗體)生物素標(biāo)記的抗-人IgG抗體(Zymed);生物素標(biāo)記的抗-人IgG抗體(Protos);生物素標(biāo)記的抗-人IgFc抗體(EYLaboratories);或生物素標(biāo)記的抗-人IgK抗體(Vector)。反應(yīng)后，棄去第二抗體并用上述磷酸緩沖液清洗板上每一孔。隨后，將藻紅蛋白標(biāo)記的鏈霉抗生物素(鏈霉抗生物素-PE;Pharmingen;用上述磷酸緩沖液稀釋500倍，加入量為50|11/孔)加入到每孔中?；旌衔镌谒渲蟹?6應(yīng)30分鐘。反應(yīng)后，用上述磷酸緩沖液清洗每孔。然后，將上述磷酸緩沖液加入到每孔中(200lal/孔)使細(xì)胞懸浮。分析確定每一雜交瘤克隆的培養(yǎng)上清中的抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)每孔中過(guò)表達(dá)人AILIM的HPB-ALL細(xì)胞的反應(yīng)性。使用下列項(xiàng)以與上述相同的方法進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)(1)野生型HPB-ALL細(xì)胞，替代表達(dá)人AILIM的重組HPB-ALL細(xì)胞；(2)抗KLH(匙孔血藍(lán)蛋白，PIERCE)人單克隆抗體，替代雜交瘤上清。以如上<2-1〉所述相同方法，通過(guò)用KLH(匙孔血藍(lán)蛋白，PIERCE)免疫上述生產(chǎn)人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠制備人抗-KLH單克隆抗體?；谶@些實(shí)驗(yàn)結(jié)果，上述<2-4>中所有雜交瘤克隆都被證實(shí)為由人-源重鏈和人源K輕鏈組成的單克隆抗體。圖1顯示了這些結(jié)果的一個(gè)例子，它包括對(duì)雜交瘤克隆AIH5D3(JMab-136)，AII289(JMab-138)，AII394(JMab-139)的分析結(jié)果。<3-2>人單克隆抗體的同種型分型鑒定在<2-4>中克隆并在<3-1>中分析的雜交瘤產(chǎn)生的每一種人抗-人AILIM單克隆抗體的同種型。采用人單克隆抗體同種型分型試劑盒(AmericanQualex)依照試劑盒所附的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行鑒定。所有的人抗-人AILIM單克隆抗體都鑒定為IgG2/K。實(shí)施例4:抗人AILIM的人單克隆抗體(人抗-人AILIM單克隆抗體)的大規(guī)模制備及其純化<4-1〉方法1將已在上述<2-4>中制備的產(chǎn)生人抗-人AILIM單克隆抗體的每一雜交瘤克隆的細(xì)胞加入到組織培養(yǎng)瓶(50ml，F(xiàn)ALCON)中，在含有10。/o極低(UltraLow)牛IgGFBS(GIBCO-BRL)的ASF104培養(yǎng)基(Ajinomoto)中37。C下于5。/。C02中培養(yǎng)至鋪滿(mǎn)。隨后，將全部培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到新的組織培養(yǎng)搖并瓦(750ml，F(xiàn)ALCON)中，將細(xì)胞培養(yǎng)在含有10%極低牛IgGFBS(GIBCO-BRL)的ASF104培養(yǎng)基(Ajinomoto)中37°C下于5%C02中培養(yǎng)至鋪滿(mǎn)。培養(yǎng)10-20天后，回收每一雜交瘤的培養(yǎng)上清并轉(zhuǎn)移到50-ml聚丙烯圓錐管(FALCON)中。將試管在500g下離心5分鐘。隨后，將所得離心上清用除菌過(guò)濾組件(NALGEN)過(guò)濾，回收濾液。以3ml/min的流速將濾液上柱到已用磷酸緩沖液(30ml)預(yù)平衡的HiTrap蛋白G柱(HiTrap親和柱蛋白G;AmershamPharmacia)。隨后，用磷酸緩沖液(20ml)洗柱，目的抗體用100mM檸檬酸鹽緩沖液(pH2.0)以約lml/min的低流速洗脫。隨后，濾液用750mMTris-HCl溶液(pH9.0)中和，經(jīng)濾膜(Millipore)過(guò)濾除去白色沉淀。所得濾液對(duì)磷酸緩沖液透析(過(guò)夜)，并經(jīng)濾膜(Millipore)過(guò)濾。這樣從每一雜交瘤細(xì)胞系得到純化的抗-AILIM人單克隆抗體。用分光光度計(jì)測(cè)定A28()的吸光度以確定蛋白濃度(1A28()=1.41mg/ml)。<4-2>方法2將<2-4〉中制備的每一雜交瘤克隆的細(xì)胞置于含有10%極低牛IgGFBS(GffiCO-BRL)的ASF104培養(yǎng)基(Ajinomoto)中(每種為1-2x1()6個(gè)細(xì)胞/ml)，鋪板并培養(yǎng)在IntegraCellLine1000(INTEGRACL1000,INTEGRABIOSCIENCE)中。培養(yǎng)7-10天后，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1x1()8個(gè)/ml時(shí)，回收每一雜交瘤培養(yǎng)液的上清。以3ml/min的流速將每一培養(yǎng)上清液上柱到已用磷酸緩沖液(30ml)預(yù)平-衡的HiTrap蛋白G柱(HiTrap親和柱蛋白G;AmershamPharmacia)。隨后，用磷酸緩沖液(20ml)洗柱，抗體用100mM檸檬酸鹽緩沖液(pH2.0)以約lml/min的低流速洗脫。隨后，濾液用750mMTris-HCl溶液(pH9.0)中和，經(jīng)濾膜(Millipore)過(guò)濾除去白色沉淀。所得濾液對(duì)磷酸緩沖液透析(過(guò)夜)，并經(jīng)濾膜(Millipore)過(guò)濾。這樣從每一雜交瘤細(xì)胞系得到純化的抗-AILIM人單克隆抗體。實(shí)施例5:人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)人AILIM的反應(yīng)性，以及其對(duì)小鼠AILIM和大鼠AILIM的交叉反應(yīng)性采用細(xì)胞ELISA方法分析上述各種純化的人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)人AILIM的反應(yīng)性，以及對(duì)小鼠AILIM和大鼠AILIM的交叉反應(yīng)性。<5-1〉建立可測(cè)定IgG抗體濃度的ELISA系統(tǒng)并制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上述所有純化的人抗-人AILIM單克隆抗體都是IgG(IgG2)抗體，可建立ELISA系統(tǒng)以確定IgG抗體的濃度。在96孔ELISA微量培養(yǎng)板(Nunc)的每孔加入山羊抗-人IgG(Fc)抗體(PBS中1.2|ig/ml;1OO^il/孔；OrganonTeknika)。將培養(yǎng)板室溫下保溫2小時(shí)，使抗-IgG(Fc)抗體吸附到微量培養(yǎng)板上。隨后，棄去上清，用含0.05%78吐溫20的磷酸緩沖液(PBS)洗板3次。向每孔中加入封閉試劑(含0.5%牛血清白蛋白(BSA)和0.1%吐溫20的PBS)(200nl/孔)，將板室溫下保溫2小時(shí)以封閉板上的抗-IgG(Fc)抗體-游離位點(diǎn)。然后，棄去封閉試劑，用PBS清洗每孔2次。向培養(yǎng)板的不同孔中加入各種濃度(O-100ng/ml)的用作標(biāo)準(zhǔn)抗體的人源IgG2抗體(50|11/孔；TheBindingSite)，將板室溫下保溫2小時(shí)。棄去多余的標(biāo)準(zhǔn)抗體溶液，用含0.05%吐溫20的磷酸緩沖液洗每孔3次。隨后，向每孔加入過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的山羊抗-人IgG/K抗體(4000倍稀釋?zhuān)?00(il/孑L，Protos)，將板室溫下保溫l小時(shí)。棄去上清，用含0.05%吐溫20的磷酸緩沖液洗微量培養(yǎng)板3次。向每孔加入含有底物的緩沖液(組成鄰苯二胺(OPD;20mg)/檸檬酸-磷酸緩沖液(pH5.0，50ml)/30。/。過(guò)氧化氫水溶液(15^il))(100nl/孔)，將板室溫下保溫約7分鐘。隨后，向每孔中加入2M硫酸(50nl/孔)終止反應(yīng)?；谖⒘颗囵B(yǎng)板讀取儀4卯nm波長(zhǎng)測(cè)定的吸光度結(jié)果繪制標(biāo)定曲線(xiàn)(圖2)。單獨(dú)以培養(yǎng)基或BSA溶液為實(shí)驗(yàn)物質(zhì)以如上相同的方法進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。<5-2>各種純化的人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)人AILIM的反應(yīng)性以及對(duì)小鼠AILIM和大鼠AILIM的交叉反應(yīng)性的分析<5-2-1>試劑的制備如下制備在此細(xì)胞ELISA中所用的試劑<5-2-1-1>過(guò)表達(dá)小鼠AILIM的重組CHO細(xì)胞的制備用<1-1>和<1-3〉中所述方法制備并得到過(guò)表達(dá)小鼠AILIM的重組CHO細(xì)胞。將含有小鼠AILIM全長(zhǎng)ORF的cDNA(GenBank登記號(hào)AB023132(cDNA);BAA82126(氨基酸))插入到載體pEF-neo中，然后將所得重組表達(dá)載體采用GenePulser(BioRad)通過(guò)常用的電穿孔方法(960^F,320V)引入中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)。將細(xì)胞培養(yǎng)在含遺傳霉素(0.8mg/ml;GibcoBRL)和10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基中以挑選抗藥性的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，這樣就得到了過(guò)表達(dá)小鼠AILIM的重組CHO細(xì)胞。<5-2-l-2〉過(guò)表達(dá)大鼠AILIM的重組CHO細(xì)胞的制備用<1_1〉和<1_3〉中所述方法制備并得到過(guò)表達(dá)大鼠AILIM的重組CHO細(xì)胞。將含有大鼠AILIM全長(zhǎng)ORF的cDNA(GenBank登記號(hào)AB023134(cDNA);BAA82128(氨基酸))插入到載體pEF-neo中，然后將所得重組表達(dá)載體采用GenePulser(BioRad)通過(guò)常用的電穿孔方法(960pF，320V)引入中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)。將細(xì)胞培養(yǎng)在含遺傳霉素(0.8mg/ml;GibcoBRL)和10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基中以挑選抗藥性的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，這樣就得到了過(guò)表達(dá)大鼠AILIM的重組CHO細(xì)胞。<5-2-1-3>抗小鼠AILIM單克隆抗體的制備將如上<5-2-1-1>中制備的過(guò)表達(dá)小鼠AILIM的重組CHO細(xì)胞勻漿，進(jìn)行超速離心(100000g)?；厥账煤?xì)胞膜級(jí)分的沉淀并將其懸于PBS中。將所得細(xì)胞膜級(jí)分同弗氏完全佐劑一起注射進(jìn)入Wistar大鼠足墊進(jìn)行初次免疫(第0天)。在初次免疫后第7天，14天，28天，進(jìn)一步對(duì)大鼠足墊給予細(xì)胞膜級(jí)分抗原。末次免疫的2天后收集它們的淋巴結(jié)細(xì)胞。將所述淋巴結(jié)細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞PAI(JCRNo.B0113;Res.Disclosure,Vol.217，p,155，1982)以5:1的比例組合。采用聚乙二醇4000(BoehringerMannheim)作融合劑將所述細(xì)胞相互融合，以制備生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤。將雜交瘤培養(yǎng)在含HAT，10%胎牛血清和氨基蝶呤的ASF104培養(yǎng)基(Ajinomoto)中以便篩選。通過(guò)將培養(yǎng)上清與上述表達(dá)小鼠AILIM的CHO細(xì)胞反應(yīng)，然后采用EPICS-ELITE流式細(xì)胞儀測(cè)定FITC標(biāo)記型抗-大鼠IgG(Cappel)染色的細(xì)胞的熒光強(qiáng)度，以此測(cè)定每一雜交瘤的培養(yǎng)上清中的大鼠單克隆抗體對(duì)小鼠AILIM的反應(yīng)性。篩選得到多個(gè)雜交瘤，它們可以生產(chǎn)具有對(duì)小鼠AILIM的反應(yīng)性的單克隆抗體。在這些雜交瘤中，有一雜交瘤細(xì)胞系命名為"B10.5."。將此雜交瘤的細(xì)胞腹膜內(nèi)注射(10、10"個(gè)細(xì)胞/0.5ml/小鼠)給ICRnu/nu小鼠(雌性，7到8周齡)。注射10到20天后，依照常規(guī)方法于麻醉下通過(guò)剖腹術(shù)從每只小鼠收集腹水。從腹水大規(guī)模制備大鼠抗-小鼠AILIM單克隆抗體B10.5(IgGl)。<5-2-2>抗體對(duì)人，小鼠和大鼠AILIM的反應(yīng)性基于上述<5-1>中的ELISA和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)確定以下ELISA中所用人抗-人AILIM單克隆抗體和對(duì)照抗體的濃度。80實(shí)施例1中制備的過(guò)表達(dá)人AILIM的重組CHO細(xì)胞，上述<5-2-1-1>中制備的過(guò)表達(dá)小鼠AILIM的重組CHO細(xì)胞，以及上述<5-2-1-2>中所述過(guò)表達(dá)大鼠AILIM的重組CHO細(xì)胞分別鋪板在96孔ELISA微量培養(yǎng)板的孔中(7x103個(gè)細(xì)胞/孔)，37。C下培養(yǎng)至鋪滿(mǎn)。隨后，棄去上清，向每孔加入如上制備的純化的任一種人抗-人AILIM單克隆抗體或?qū)φ湛贵w(抗體濃度用含1%BSA的PBS將200|iil/ml的抗體稀釋3倍，32倍，33倍，34倍，35倍，36倍，37倍，38倍，39倍，31()倍，3"倍，312倍)，加入量為50^1/孔，將板在室溫下反應(yīng)2小時(shí)。棄去單克隆抗體液，用含1。/。BSA(Sigma)的磷酸緩沖液洗孔3次。隨后，每孔加入辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的抗-人IgG(Fc)抗體(稀釋1000倍，50|11/孔；AmericanQualex)，將板室溫下保溫l小時(shí)。棄去多余的標(biāo)記抗體液，用含1。/。BSA(Sigma)的磷酸緩沖液洗板3次。向每孔加入含底物的緩沖液(組成鄰笨二胺(OPD;20mg)/檸檬酸-磷酸緩沖液(pH5.0,50m)/過(guò)氧化氫的30。/Q水溶液(15jil))(100^i/孔)，將板室溫下保溫約7分鐘。隨后，向孔中加入2M硫酸(50iil/孔)以終止反應(yīng)。使用微量培養(yǎng)板讀取儀(Bio-Rad)于490nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。采用下列對(duì)照抗體，按照上述同樣的方法進(jìn)行對(duì)照ELISA檢測(cè)，以評(píng)價(jià)上述抗體(1)抗人AILIM的小鼠單克隆抗體SA12或SG430(JP-A11-29599(實(shí)施例12)和W098/38216(實(shí)施例12));(2)抗小鼠AILIM的大鼠單克隆抗體B10.5(如〈5-2-l-3〉所述)；(3)抗大鼠AILIM的小鼠單克隆抗體JTT2(由1996年10月11日以國(guó)際保藏號(hào)FERMBP-5708保藏在根據(jù)布達(dá)佩斯條約的微生物國(guó)際保藏單位，通商產(chǎn)業(yè)省工業(yè)技術(shù)院國(guó)立生命科學(xué)和人體技術(shù)研究所)；JP-All-29599(實(shí)施例1和2)和W098/38216(實(shí)施例1和2))。(4)如上制備的抗KLH(鑰孔血藍(lán)素，PIERCE)人單克隆抗體，而非雜交瘤上清。采用下列野生型CHO細(xì)胞，而非表達(dá)AILIM的重組CHO細(xì)胞，按照上述同樣的方;去進(jìn)行ELISA對(duì)照實(shí)驗(yàn)。結(jié)果示于圖3到14中。81基于結(jié)果，計(jì)算50。/。有效濃度(ED50:ng/ml)作為每種人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)人AILIM(過(guò)表達(dá)人AILIM的重組CHO細(xì)胞)，小鼠AILIM(過(guò)表達(dá)小鼠AILIM的重組CHO細(xì)胞)，大鼠AILIM(過(guò)表達(dá)大鼠AILIM的重組CHO細(xì)胞)的反應(yīng)性的指標(biāo)。計(jì)算所得結(jié)果列于下(A)過(guò)表達(dá)人AILIM的CHO的ED50值A(chǔ)IF34(JMab-124):5.3ng/mlAIF182(JMab-126):3.6ng/mlAIF348(JMab-127):9.1ng/mlAIF620(她b-128):10.1ng/mlAIF1052(JMab-135):2.0ng/mlAIH5D3(她b隱136):7,5ng/mlAIH386(JMab畫(huà)137):9.6ng/mlAII289(JMab-138):10.5ng/mlAII394(JMab-139):10.6ng/mlAII488(她b匿140):11.0ng/mlAIJ40(她b-141):3.7ng/mlSA12:1.8ng/ml。wju:i.zng/mi(B)過(guò)表達(dá)小鼠AILIM的CHO的ED50值A(chǔ)IF34(JMab-124):42ng/mlAIF348(她b-127):81ng/mlAIF620(JMab畫(huà)128):100ng/mlAII289(JMab-138):53ng/mlAII394(JMab畫(huà)139):60ng/mlAII488(JMab-140):70ng/ml(C)過(guò)表達(dá)大鼠AILIM的CHO的ED50值A(chǔ)IF34(JMab-124):45ng/mlAIF348(JMab-127):62ng/mlAIF620(JMab-128):97ng/mlAII289(她b-138):57ng/mlAII394(JMab-139):90ng/mlA浦8(JMab-140):90ng/ml結(jié)果表明本發(fā)明的人抗-人AILIM單克隆抗體表現(xiàn)出對(duì)人AILIM的極高的特異性。此外，還顯示6種類(lèi)型的人抗-人AILIM單克隆抗體(如上(B)和(C)所示)對(duì)小鼠AILIM和大鼠AILIM都有反應(yīng)性(結(jié)合能力，交叉反應(yīng)性)。實(shí)施例6:測(cè)定人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)抗原(人AILIM)的親和力和中和活性采用市售試劑盒BiacoreX(AmershamPahrmacia)測(cè)定如上制備的每種純化的人抗-人AILIM單克隆抗體與人AILIM之間反應(yīng)的結(jié)合速度常數(shù)(ka)，解離速度常數(shù)(kd)和解離常數(shù)(Kd)。<6-1〉制備固定在傳感器芯片上的抗原試劑盒中固定在傳感器芯片上的抗原以重組嵌合抗原的形式(下文中稱(chēng)為"人AILIM-IgFc")制備，其由人AILIM的胞外區(qū)和人IgGl的恒定區(qū)(Fc)組成。將本發(fā)明人之一，Tezuka的早期文獻(xiàn)(JP-A11-29599(實(shí)施例16(2))和W098/38216(實(shí)施例16(2))所述方法所得的抗原進(jìn)一步純化可制備人AILIM-IgFc。將生產(chǎn)人AILIM-IgFc的重組細(xì)胞的培養(yǎng)上清以流速3ml/min上樣到已用磷酸緩沖液預(yù)平衡的HiTrap蛋白G柱(HiTrap親和柱蛋白G;AmershamPharmacia),以將培養(yǎng)上清中的人AILIM-IgFc吸附到柱上。隨后，用磷酸緩沖液(20ml)洗柱，然后用100mM檸檬酸緩沖液(pH2.0)以約lml/min的流速洗脫人AILIM-IgFc。隨后，洗脫液用750mMTris-HCl(pH9.0)中和，再對(duì)磷酸緩沖液透析(過(guò)夜)。然后，將透析過(guò)的溶液經(jīng)濾膜(Millipore)過(guò)濾。這樣就得到了純化的抗-人AILIM-IgFc。采用分光光度計(jì)測(cè)定A280吸收度來(lái)確定蛋白濃度(lA28()=lmg/ml)。人AILIM-IgFc的濃度經(jīng)測(cè)定為0.28mg/ml。依照上述同樣的方法制備由大鼠AILIM胞外區(qū)和人IgGl恒定區(qū)(Fc)組成的純化嵌合蛋白(大鼠AILIM-IgFc;JP-A11-29599(實(shí)施例16(2))和W098/38216(實(shí)施例16(2))。所得大鼠AILIM-IgFc的濃度經(jīng)測(cè)定為0.45mg/ml。<6-2>親和力和中和活性的測(cè)定除下述的在傳感器芯片上固定抗原(人AILIM-IgFc)的步驟外，其它實(shí)驗(yàn)步驟都基于市售檢測(cè)試劑盒BiacoreX(Amersham-Pharmacia)所附的指導(dǎo)手冊(cè)和實(shí),瞼方法。使HPS緩沖液(含0.01MHEPES,0.15MNaCl，3mMEDTA和0.005%去污劑P20,(pH7.0))流過(guò)試劑盒所附FlowCell-1，流速5pl/min。隨后，加入含0.005MNHS(N-羥基琥珀酰亞胺)和0.2MEDC(N-乙基-N，-(二曱基氨丙基)碳二亞胺)的溶液(15!il)以活化包被在傳感器芯片表面的CM的羧基。隨后，加入23^1人AILIM-IgFc溶液(10iig/ml;溶于10mM乙酸鈉緩沖液(pH5.0))中以將人AILIM-IgFc固定在傳感器芯片上。隨后，加入35^11M鹽酸乙醇胺以封閉未反應(yīng)的活化羧基。通過(guò)2次固定化處理固定的人AILIM-IgFc的量分別為2444RU(共振單位)和2213RU。RU對(duì)應(yīng)每單位面積的質(zhì)量；lRU=lpg/mm2。FlowCell-2，是一個(gè)參比流槽，以如上同樣的方式在沒(méi)有人AILIM-IgFc的情況下進(jìn)行包被處理。使磷酸緩沖液以20^/min的流速流過(guò)所述流槽(傳感器芯片)，向其中加入上面實(shí)施例中制備的每一種純化的人抗-人AILIM單克隆抗體(10-50pg/ml，60|iil)。測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)條件是結(jié)合階段3分鐘，解離階段10分鐘。按時(shí)間進(jìn)程監(jiān)控每種抗體結(jié)合抗原和與抗原分離的量以得到傳感圖(sensorgram)。通過(guò)使PBS以20|^l/min的流速流過(guò)傳感器芯片而實(shí)現(xiàn)抗原與抗體的解離?；谒脗鞲袌D數(shù)據(jù)，通過(guò)試劑盒所附分析軟件(BIAevaluation3.0)計(jì)算結(jié)合速度常數(shù)(ka),解離速度常數(shù)(kd)和解離常數(shù)(Kd;Kd=kd/ka)。以與上述同樣的方法分析上述實(shí)施例制備的小鼠單克隆抗體SA12和SG430對(duì)人AILIM的親和力和中和活性。所得各數(shù)值列于下。<克隆名稱(chēng)><ka(l/M.Sec)><kd[l/Sec]><Kd(M)>AIF34(JMab-124)1.6xl04l.OxlO-46.3xl(T9AIF182(JMab-126)3.2M042.8x10-58.8x10"。AIF348(JMab-127)1.9xl046.4x10-53.4xl0-9AIF620(JMab-128)I."IO4l.OxlO-8AIF1052(JMab-135)1.6xl046.3xl0-53.9xl0-9AIH5D3(JMab-136)2.8xl044.9x1(T6AIH386(JMab-137)1.2xl053.1xl0-42.6x10-9AII289(JMab-138)3.7xl044.2xl(T5l.lxlO-9AII394(JMab-139)3.1xl042.4xl0-57,7"0-10AII488(JMab-140)2.3xl043.5xl(T51.5xl(T9AIJ40(JMab-141)1.9xl04—1.9x10-5l.Oxl(T9SA127.8xl037.9xl(T5l.Oxi(r8SG4302.2xl041.5x0-46.8xl0-9結(jié)果顯示所有人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人AILIM小鼠單克隆抗體都表現(xiàn)出對(duì)人AILIM具有明顯很高的親和力和中和活性。實(shí)施例7:人抗-人AILIM單克隆抗體向人T細(xì)胞中轉(zhuǎn)導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)的活性對(duì)本發(fā)明的人抗-人AILIM單克隆抗體是否具有控制(增強(qiáng)和/或抑制)人T細(xì)胞應(yīng)答(生產(chǎn)細(xì)胞因子如IFN-y和IL-4，細(xì)胞增殖等)的能力，即所述抗體是否表現(xiàn)出對(duì)AILIM介導(dǎo)的協(xié)同刺激信號(hào)的細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)具有調(diào)控活性進(jìn)行了分析?；谌薚細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子(IFN-Y和IL-4)的量和人T細(xì)胞增殖的程度作為指標(biāo)進(jìn)行分析。<7-1>抗體的稀釋用磷酸緩沖液(PBS)稀釋抗-人CD3單克隆抗體OKT3(ATCCCRL-8001)使終濃度為8^ig/ml。如上制備的每一種人抗-人AILIM單克隆抗體都用PBS稀釋到最終濃度為40]ug/ml?？贵w溶液進(jìn)一步用PBS稀釋以制備各種濃度的抗體(40pg/ml-0.0049|ug/ml)。<7-2>用抗體包被微量培養(yǎng)板用(l)抗-人CD3單克隆抗體OKT3(8|ng/ml;每孔25|111)和任一種人抗-人AILIM單克隆抗體(40嗎/ml-0.0049嗎/ml;每孔25|il)，或單獨(dú)用(2)抗-人CD3單克隆抗體OKT3(8嗎/ml;每孔25(al)包被96孔微量培養(yǎng)板的每孔。將板37。C下保溫2小時(shí)。隨后，棄去抗體液，每孔用PBS洗3次。然后，將含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基加入到每孔中(100|111/孔)，37。C下將板保溫1小時(shí)。這樣，板上不同的孔被上述(1)或(2)所述抗體包被。依照同樣的方法進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，所用板分別用下列單克隆抗體，而非人抗-人AILIM單克隆抗體作對(duì)照抗體進(jìn)行包被。(l)抗人AILIM的小鼠單克隆抗體SA12或SG430(JP-A11-29599(實(shí)施85實(shí)施例12));P)小鼠抗-人CETP單克隆抗體JHC1(也稱(chēng)為JMablO9;JP-A9-20800);和(3)人抗-KLH單克隆抗體(也稱(chēng)為JMab23;上述實(shí)施例)。在下述分析中使用抗體包被的微量培養(yǎng)板。<7-3>人T細(xì)胞懸浮液的制備從每一正常健康人采集外周血(5人；供者A，B,C，D和E)。采用LymphoPrep(Nycomed)通過(guò)密度-梯度離心制備含單核細(xì)胞的級(jí)分。使用Pan-T細(xì)胞分離試劑盒(Miltenyi)和磁性分揀儀(MagneticSorter)按說(shuō)明書(shū)從人單核細(xì)胞級(jí)分分離人T細(xì)胞。采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)T細(xì)胞。將人T細(xì)胞懸浮在含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基中制備人T細(xì)胞懸浮液(lx106個(gè)細(xì)胞/ml)。<7-4>細(xì)胞培養(yǎng)(1)用抗-人CD3抗體和抗-人AILIM抗體包被的微量培養(yǎng)板進(jìn)行的培養(yǎng)向用上述抗體包被的微量培養(yǎng)板的每孔加入人T細(xì)胞懸浮液(供者A，B，C，D和E;100|^1/孔；lxi()5個(gè)細(xì)胞/孔)，將板在C02培養(yǎng)箱中于37'C下保溫3天。培養(yǎng)后，取所得培養(yǎng)液上清的等分試樣(50jil)保藏于-2(TC，并在后面所述分析中使用(IFNy分析)。在采集了培養(yǎng)液上清的等分樣品后，使用不同的微量培養(yǎng)板進(jìn)行下列分析(2)單獨(dú)使用抗-人CD3抗體包被的微量培養(yǎng)板進(jìn)行的培養(yǎng)人T細(xì)胞懸浮液(供者D;100ilU/孔；1x105個(gè)細(xì)胞/孔)加入到用上述抗體包被的微量培養(yǎng)板的每孔中，然后將任一種人抗-人AILIM單克隆抗體加入其中(25^il40(ig/ml-0.0049嗎/ml的抗體)。將板在C02培養(yǎng)箱中于37°C下保溫3天。<7-5>測(cè)定T細(xì)胞的增殖活性保溫后，向各板的每孔加入曱基[3H]胸苷(0.5fiCi/孑L;Amersham-Pharmacia),將各板在0)2培養(yǎng)箱中于37°C下保溫6小時(shí)。然后，用細(xì)胞收集器將細(xì)胞捕獲在GF/C濾膜(Packard)上。隨后，將濾膜40°C下干燥3小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，然后向其中加入Mi畫(huà)cinti0(20iul/孔；Packard)。用P-計(jì)數(shù)器(TOPCOUNT)測(cè)定濾膜捕獲的細(xì)胞中摻入的3H放射性來(lái)分析培養(yǎng)86后T細(xì)胞增殖的程度。結(jié)果顯示于圖15到39。此分析結(jié)果顯示當(dāng)用抗-人AILIM單克隆抗體(人單克隆抗體或小鼠單克隆抗體)與抗-人CD3抗體一起包被微量培養(yǎng)板時(shí)，人T細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞濃度顯著增殖。此外，在各個(gè)供者中細(xì)胞增殖的程度有所不同。在另一方面，當(dāng)單獨(dú)用抗-人CD3抗體包被各板并在細(xì)胞培養(yǎng)期間在溶液(液相)中使用抗-人AILIM單克隆抗體(人單克隆抗體或小鼠單克隆抗體)時(shí)人T細(xì)胞沒(méi)有顯著生長(zhǎng)。<7-6>T細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFNY的定量對(duì)<7-4>的(1)中所述丁細(xì)胞(供者B和C)的各自培養(yǎng)物，通過(guò)市售人IFNYELISA試劑盒(Amersham-Pharmacia;Endogen)測(cè)定培養(yǎng)上清中IFNy的量。結(jié)果顯示于圖40到47。此分析結(jié)果顯示IFNy的生產(chǎn)隨抗-人AILIM單克隆抗體(人單克隆抗體或小鼠單克隆抗體)的濃度顯著提高。實(shí)施例8:人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的調(diào)節(jié)活性通過(guò)分析對(duì)與異源混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(異源MLR)相關(guān)的T細(xì)胞增殖的控制活性(即，細(xì)胞中DNA的合成)作為指標(biāo)，檢測(cè)本發(fā)明的人抗-人AILIM單克隆抗體是否能夠控制(增強(qiáng)和/或抑制)T細(xì)胞應(yīng)答(生產(chǎn)細(xì)胞因子如IFN-Y和IL-4，細(xì)胞增殖等)，即對(duì)AILIM介導(dǎo)的協(xié)同刺激信號(hào)向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行調(diào)節(jié)的能力。<8-1>人PBMC和T細(xì)胞的制備從正常健康人(7人；供者A，B,C，D，E，F(xiàn)，G)采集外周血(200ml)，分散在微管(50ml;Falcon)中的Lymphoprep(15ml;Nycomed)層上。離心(1600rpmIO分鐘)，回收中間層。用磷酸緩沖液將回收的細(xì)胞稀釋兩倍或更多，然后離心(1800rpm，IO分鐘)。這樣，制備得到PBMC(外周血單核細(xì)胞；2xl08-5x108個(gè)細(xì)胞)。采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定細(xì)胞數(shù)。取MLR分析中所用細(xì)胞的等分試樣(1.08x108/9個(gè)微量培養(yǎng)板)并冰上保存。其它細(xì)胞用于下述T細(xì)胞的分離。PanT分離試劑盒(MiltenyiBiotech)用于從PBMC分離T細(xì)胞。依照試劑盒所附手冊(cè)，將剩余的PBMC加入到試劑盒所附的溶液中，保溫所述溶液。隨后，用含5mMEDTA和0.5%BSA的PBS洗滌細(xì)胞，然后重懸于PBS中。隨后，將細(xì)胞懸浮液上樣至已用PBS溶脹的陽(yáng)性選擇柱VS+(MiltenyiBiotech),回收未吸附的級(jí)分。此外，將PBS上樣至該柱，回收洗液。再同樣處理一次。混合回收的溶液得到T細(xì)胞級(jí)分。T細(xì)胞級(jí)分離心后，將細(xì)胞重懸在PBS中。使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定細(xì)胞數(shù)。所述細(xì)胞用于下列檢測(cè)。<8-2〉混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)如上所述，已知CD28與CD80(B7-1)/CD86(B7-2)之間以及CTLA4與CD80(B7-1)/CD86(B7-2)之間的兩個(gè)信號(hào)傳遞途徑(已進(jìn)4亍過(guò)詳細(xì)分析)是淋巴細(xì)胞如T細(xì)胞等活化所必需的協(xié)同刺激信號(hào)傳遞途徑。即，通過(guò)兩個(gè)已知途徑中的任一個(gè)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可誘導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)而增殖。這樣，通過(guò)使用下述底物，本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)可分析(l)通過(guò)阻斷CTLA4-介導(dǎo)的信號(hào)傳遞途徑而對(duì)MLR的抑制；(2)通過(guò)阻斷CD80(B7-l)/CD86(B7-2)-介導(dǎo)的信號(hào)傳遞途徑而對(duì)MLR的抑制；(3)通過(guò)同時(shí)阻斷CTLA4-介導(dǎo)的信號(hào)傳遞途徑和CD80(B7-l)/CD86(B7-2)-介導(dǎo)的信號(hào)傳遞途徑而對(duì)MLR的抑制；(4)通過(guò)阻斷與AILIM相關(guān)的第三信號(hào)傳遞途徑而對(duì)MLR的抑制；(5)通過(guò)同時(shí)阻斷CTLA4-介導(dǎo)途徑和AILIM介導(dǎo)途徑而對(duì)MLR的抑制。采用下列實(shí)驗(yàn)底物。(1)人抗-人AILIM單克隆抗體(如上述實(shí)施例制備)；(2)小鼠抗-人AILIM單克隆抗體SA12(與上述實(shí)施例相同)；(3)人抗-KLH單克隆抗體(陰性對(duì)照；與上述實(shí)施例相同)；(4)小鼠IgG抗體(抗-人CD34;陰性對(duì)照；Immunotech);(5)抗-人CDSO單克隆抗體(Pharmingen)和抗-人CD86單克隆抗體(Pharmingen);(6)人CTLA4-IgFc嵌合分子(Ancell)。采用從<8-1>所述供者制備的PBMC和T細(xì)胞對(duì)下述組合進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR):(i)T細(xì)胞(供者A)/PBMC(供者D)(ii)T細(xì)胞(供者D)/PBMC(供者B)88(iii)T細(xì)胞(供者C)/PBMC(供者A)(iv)T細(xì)胞(供者E)/PBMC(供者G)(v)T細(xì)胞(供者F)/PBMC(供者E)(vi)T細(xì)胞(供者G)/PBMC(供者F)如下調(diào)整實(shí)驗(yàn)中所用PBMC和T細(xì)胞的濃度。將PBMC懸于PBS中，然后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)平皿(60mm)。用輻射儀(HitachiMEDICO)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行X-射線(xiàn)照射。回收細(xì)胞，離心然后加入到含10%FCS的PRMI1640培養(yǎng)基中。調(diào)整細(xì)胞數(shù)量為2xio5個(gè)/50inl。所得每個(gè)供者的T細(xì)胞也加入到含10%FCS的PRMI1640培養(yǎng)基中，調(diào)整細(xì)胞數(shù)量為1x105個(gè)/50|^1。<8-2-1>用人抗-人AILIM單克隆抗體抑制MLR向具有U-形孔的96孔微量培養(yǎng)板的每孔加入含10%FCS的PRMI1640培養(yǎng)基。用含10%FCS的PRMI1640培養(yǎng)基稀釋人抗-人AILIM單克隆抗體溶液或小鼠抗-人AILIM單克隆抗體SA12溶液以制備具有多種抗體濃度的溶液。將稀釋的抗體溶液加入孔中(最終濃度0，0.31,1.25,5和20pg/ml)。隨后，將T細(xì)胞加入孔中(50pl)。37。C下C02培養(yǎng)箱(NAPCO)中將板保溫1小時(shí)。反應(yīng)完成后，孔中加入另一供者的PBMC(50ial)以引發(fā)MLR。當(dāng)使用非人抗-人AILIM單克隆抗體的抗體(如上(3H6)所述)作為實(shí)驗(yàn)物質(zhì)進(jìn)行MLR時(shí)，使PBMC與該實(shí)驗(yàn)物質(zhì)一起保溫后，再與另一供者的T細(xì)月包反應(yīng)。在培養(yǎng)的第5天，向每孔中加入用含10%FCS的PRMI1640培養(yǎng)基稀釋的氚標(biāo)記的胸苷pH-胸苷；20nl;lfiCi/孔)。繼續(xù)培養(yǎng)1天。培養(yǎng)完成后，用細(xì)胞收集器(Packard)收獲細(xì)胞。用P-計(jì)數(shù)器(TOPCOUNT;Packard)測(cè)定細(xì)胞中摻入的SH放射性來(lái)分析培養(yǎng)后T細(xì)胞的增殖速度。結(jié)果顯示于圖48到59。<8-2-2>在CTLA4-介導(dǎo)的信號(hào)傳遞途徑已預(yù)先阻斷的MLR系統(tǒng)中，用人抗-人AILIM單克隆抗體抑制MLR向具有U-形孔的96孔微量培養(yǎng)板的每孔加入含10%FCS的PRMI1640培養(yǎng)基。用含10%FCS的PRMI1640培養(yǎng)基稀釋人抗-人AILIM單克隆抗體溶液或小鼠抗-人AILIM單克隆抗體SA12溶液以制備具有多種抗體濃度的溶液。將稀釋的抗體溶液加入孔中(最終濃度0，0.31,1.25，5和20ng/ml)。隨后，將T細(xì)胞加入孔中(50nl)。37。C下c02培養(yǎng)箱(NAPCO)中將板保溫1小時(shí)。除培養(yǎng)T細(xì)胞外，另一供者的PBMC(在含10%FCS的PRMI1640培養(yǎng)基中)在添加了人CTLA4-IgFc后單獨(dú)培養(yǎng)。37。C下C02培養(yǎng)箱(NAPCO)中培養(yǎng)1小時(shí)。在MLR開(kāi)始時(shí)CTLA4-IgFc濃度調(diào)整到20|ul/ml。隨后，向上述T細(xì)胞培養(yǎng)液中加入PBMC(50jal)以引發(fā)MLR。當(dāng)使用非人抗-人AILIM單克隆抗體的抗體(如上(3)-(5)所述)作為實(shí)驗(yàn)物質(zhì)進(jìn)行MLR時(shí)，使PBMC(已在CTLA4-IgFc存在下培養(yǎng))與所述實(shí)驗(yàn)物質(zhì)一起保溫后，再與另一供者的T細(xì)胞反應(yīng)。在培養(yǎng)的第5天，向每孔中加入用含10%FCS的PRMI1640培養(yǎng)基稀釋的氚標(biāo)記的胸苷f(shuō)H-胸苷；20^1;liuCi/孔)。繼續(xù)培養(yǎng)1天。培養(yǎng)完成后，用細(xì)胞收集器(Packard)收獲細(xì)胞。用P-計(jì)數(shù)器(TOPCOUNT;Packard)測(cè)定細(xì)胞中摻入的^放射性來(lái)分析培養(yǎng)后T細(xì)胞的增殖速度。結(jié)果顯示于圖60到69。得自上述兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下(1)CTLA4-IgFc阻斷CTLA-4介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，并因此抑制了異源MLR-誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖。(2)抗-CD80抗體和抗-CD86抗體抑制CD80/CD86(CTLA4和CD28的配體)介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，這樣就抑制了異源MLR-誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖。(3)抗人AILIM的單克隆抗體，如CTLA4-IgFc,抗-CD80抗體和抗-CD86抗體以抗體濃度依賴(lài)性方式顯著抑制異源MLR-誘導(dǎo)的與AILIM-介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的t細(xì)胞增殖。也就是說(shuō)，這些結(jié)果顯示除已知由CTLA4/CD80/Cd86介導(dǎo)的和CD28/CD80/CD86介導(dǎo)的途徑外，由AILIM及其配體介導(dǎo)的第三途徑作為T(mén)細(xì)胞活化必需的協(xié)同刺激信號(hào)傳遞途徑而存在，還顯示AILIM-介導(dǎo)的信號(hào)傳遞途徑纟皮抗AILIM抗體抑制。此外，出現(xiàn)了這樣的可能性AILIM-介導(dǎo)的途徑對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用與CTLA4/CD80/Cd86介導(dǎo)的途徑和CD28/CD80/CD86介導(dǎo)的途徑相當(dāng)。實(shí)施例9:人抗-人AILIM單克隆抗體i秀導(dǎo)抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性(ADCC)由抗體引起的生物活性包括對(duì)抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性(ADCC)的誘導(dǎo)。ADCC是除效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞外，還需要抗體來(lái)誘導(dǎo)由效應(yīng)細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞，巨噬細(xì)胞或多形核白細(xì)胞誘發(fā)的對(duì)靶細(xì)胞的破壞的一種細(xì)胞毒作用。如下分析了本發(fā)明的抗-人AILIM單克隆抗體誘導(dǎo)ADCC的活性51Cr(0.lmCi/106個(gè)細(xì)胞；Amersham-Pharmacia)力。入到上述實(shí)施例中制備的過(guò)表達(dá)人AILIM的重組HPB-ALL細(xì)胞培養(yǎng)中，將混合物37。C下保溫2小時(shí)。用RPMI1640培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞8次。所得同位素標(biāo)記的細(xì)胞用作靶細(xì)胞。采用該同位素標(biāo)記的野生型人HPB-ALL細(xì)胞作為對(duì)照細(xì)胞依照上述同樣的方法進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。通過(guò)使用LymphoseparI(IBL),從正常健康人體的外周血分離PBMC級(jí)分。所得人PBMC用作效應(yīng)細(xì)胞。將靶細(xì)胞鋪板在具有U-形孔的96孔微量培養(yǎng)板(Nunc)的每孔上(lx104個(gè)細(xì)胞/孔；25(al/孔)。隨后，向各孔加入用含5%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基(O.OOOl-1.0jag/ml;25jal/孔)，或只用所述培養(yǎng)基(25pl/孔)或用l%NonidetP-40(25pl/孔；具有細(xì)胞裂解活性的去污劑)稀釋的不同濃度的人抗-人AILIM單克隆抗體，然后室溫下將板保溫20分鐘。使用抗-人CD3單克隆抗體0KT3(ATCCCRL-8001)作為陽(yáng)性對(duì)照抗體隨后，各孔加入效應(yīng)細(xì)胞(E/T比=50;1乂105個(gè)細(xì)胞/孔；50f^l/孔)，37。C下將板在C02培養(yǎng)箱中保溫16小時(shí)。培養(yǎng)后，將樣品離心(4。C下1500rpmIO分鐘)?；厥账蒙锨濉Ｍㄟ^(guò)Y-計(jì)數(shù)器測(cè)定離心所得上清中的放射性。所述放射性代表由于A(yíng)DCC造成的細(xì)胞膜損害而使51Cr從細(xì)胞中釋放到培養(yǎng)液中的量。假設(shè)只采用培養(yǎng)基的情況下觀(guān)察到的放射性對(duì)應(yīng)于0%細(xì)胞膜損害(O)，采用Nonidet的情況下所測(cè)放射性對(duì)應(yīng)于100%細(xì)胞膜損害(O),測(cè)定由抗-AILIM抗體或抗-CD3抗體誘導(dǎo)的ADCC造成的細(xì)胞膜損害的百分比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于圖70和71。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的人抗-人AIUM單克隆抗體表現(xiàn)出濃度依賴(lài)性ADCC誘導(dǎo)活性。實(shí)施例10:人抗-人AILIM單克隆抗體的基因和氨基酸序列的測(cè)定及其分析如下所述測(cè)定了上述實(shí)施例中制備的各種人抗-人AILIM單克隆抗體的重鏈以及輕鏈的cDNA序列。還對(duì)這些基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行了分析。采用QuickPrepmRNA純化試劑盒(AmershamPharmacia),從如上述實(shí)施例制備的產(chǎn)生人抗-人AILIM單克隆抗體的各雜交瘤(克隆AIH5D3(JMab-136),AII289(JMab-138),AIB94(JMab誦139))4是取并純化PolyA+RNA。將雜交瘤細(xì)胞懸浮于細(xì)胞裂解緩沖液(LysisBuffer)中，通過(guò)使用注射器使其裂解而將其溶解。將Oligo(dT)樹(shù)脂加入到該已解的物質(zhì)中，輕微振蕩混合物。隨后，沖洗Oligo(dT)樹(shù)脂，然后用ElutionBuffer洗脫P(yáng)olyA+RNA。洗脫下來(lái)的PolyA+RNA用乙醇沉淀，再溶解在Tris-EDTA緩沖液中。在260nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度確定PolyA+RNA濃度。采用市售cDNA合成試劑盒(GIBCOBRL)依照M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶方法，以PolyA+RNA作模板，合成的寡DNANotI-T(SEQIDNO:l)作引物合成雙鏈cDNA。具體地，在含有純化自雜交瘤的PolyA+RNA作模板(約5嗎)，引物(400pmol)和M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶的溶液(約50pl)中，37。C下1小時(shí)合成單鏈cDNA。隨后，向反應(yīng)液(4(il)中加入dNTP,DNA聚合酶I，RNaseH，DNA連接酶，緩沖液和蒸餾水，使混合物16。C下保溫2小時(shí)以合成雙鏈cDNA。用酚/氯仿提取所述雙鏈cDNA，然后用乙醇沉淀。隨后，向含有所述雙鏈cDNA的TE緩沖液(50ili1)中加入EcoRI接頭DNA(約300pmole)和DNA連接酶(LigationHigh;33^1;TOYOBO),將混合物16。C下保溫約80分鐘以用接頭DNA連接所述cDNA。所用接頭DNA是由已經(jīng)常M^方法5，-磷酸化并相互退火的寡DNA(20adp;SEQIDNO:2)和寡DNA(24adp;SEQIDNO:3)組成的雙鏈DNA。用酚/氯仿提取DNA連接體，然后用乙醇沉淀。隨后，用市售限制酶Notl(TOYOBO)消化該DNA反應(yīng)物，然后與市售ATP溶液(GIBCOBRL)和T4激酶(TOYOBO)37。C一起保溫30分鐘以使其5，末端磷酸化。所得DNA用乙醇沉淀，然后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分級(jí)分離。切下含約500到2000bp的DNA片段。用UV燈在照相設(shè)備中目視觀(guān)察用溴乙啶染色的DNA，進(jìn)行切膠。切下的膠打碎然后懸浮在TE緩沖液中。離心懸浮液，回收所得上清。92在市售DNA連接酶(LigationHigh;TOYOBO)存在下，將回收的DNA與市售入噬菌體載體AJEXcell(0.25ng;AmershamPharmacia)連接(16。C下30分鐘)。然后，采用市售人噬菌體包裝試劑盒GigapackIIIGold(STRATAGENE)將DNA連接體包裝進(jìn)入X噬菌體，所得噬菌體顆粒感染大腸桿菌NM522宿主以制備cDNA文庫(kù)。所有操作依照試劑盒所附實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行。隨后，如下通過(guò)噬菌斑雜交方法篩選cDNA文庫(kù)(Maniatis等，"分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)"，冷泉港實(shí)驗(yàn)室，冷泉港，紐約)cDNA文庫(kù)(lx104噬菌斑)鋪板在瓊脂平板上，采用Hybond-N尼龍膜(AmershamPharmacia)制備其影印濾膜。按照噬菌斑雜交方法采用Y32P-ATP標(biāo)記的探針在雜交緩沖液中對(duì)這些影印濾膜進(jìn)行雜交處理。對(duì)抗體輕鏈所用的探針是HIGLC(SEQIDNO:4)，對(duì)抗體重鏈所用的探針是NHCc2(SEQIDNO:5)。從得自初次篩選和二次篩選的陽(yáng)性克隆進(jìn)行單個(gè)噬菌斑分離。通過(guò)采用單一PCR引物和TaqPCR試劑盒(TAKARA),以每一陽(yáng)性克隆的噬菌體懸浮液作模板DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增抗體的每一重鏈和輕鏈。抗體輕鏈所用引物對(duì)是ExcellE(SEQIDNO:6)和ckl17(SEQIDNO:7),抗體重鏈所用引物對(duì)是Excel正(SEQIDNO:6)和NHCc2(SEQIDNO:5)。依照常見(jiàn)方法采用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)所得PCR產(chǎn)物分級(jí)分離。切下對(duì)應(yīng)于重鏈和輕鏈的含約600bpDNA的膠段。采用DNA測(cè)序儀(37SA;PE-AppliedBiosystems),ABIPRISM測(cè)序軟件(PE畫(huà)AppliedBiosystems)和ABIPRISM自動(dòng)裝配儀(PE-AppliedBiosystems)分析從膠中純化的DNA的核苷酸序列。證實(shí)每一陽(yáng)性克隆的DNA具有足夠長(zhǎng)度的核苷酸序列。用來(lái)自每一陽(yáng)性克隆的噬菌斑的X噬菌體感染大腸桿菌NP66以便體內(nèi)切割目的質(zhì)粒DNA，將所得絲狀噬菌體鋪板在含氨千青霉素的平板上以得到菌落。隨后，采用常用方法從菌落回收并純化質(zhì)粒DNA,用所述質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109。隨后，將轉(zhuǎn)化細(xì)胞鋪板在含氨千青霉素的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上以形成菌落。隨后，將得自每一菌落的細(xì)菌在含氨千青霉素的LB培養(yǎng)基中的懸浮液轉(zhuǎn)移到液體營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，37。C下培養(yǎng)24小時(shí)。從培養(yǎng)液中收獲細(xì)菌，采用質(zhì)粒純化試劑盒(Quiagen)純化所述質(zhì)粒DNA。每一質(zhì)粒DNA用限制酶EcoRI/NotI消化以證實(shí)載體DNA和插入的DNA(重鏈cDNA或輕鏈cDNA)的存在。93采用DNA測(cè)序儀(377A;PE-AppliedBiosystems),ABIPRISM測(cè)序軟件(PE-AppliedBiosystems)和ABIPRISM自動(dòng)裝配儀(PE-AppliedBiosystems)，通過(guò)常用方法測(cè)定已插入每種純化質(zhì)粒的、編碼抗體重鏈和輕鏈的每種cDNA的核苦酸序列。用于序列測(cè)定的引物如下<用于測(cè)定重鏈cDNA的引物〉M13R引物(SEQIDNO:8;STRATAGENE)，ExcellE(SEQIDNO:6)，136H(SEQIDNO:9)，138/9H(SEQIDNO:10),AILIMHCL(SEQIDNO:11),HCcl(SEQIDNO:12)，HCc2(SEQIDNO:5),HCc7(SEQIDNO:13)，HCc8(SEQIDNO:14)，HCc3(SEQIDNO:15)，HCc4(SEQIDNO:16)，HCc6(SEQIDNO:17),HIGHC(SEQIDNO:18)，HCc9(SEQIDNO:19)，HCc5(SEQIDNO:20)和polyA(SEQIDNO:2).<用于測(cè)定輕鏈cDNA的引物>M13R引物(SEQIDNO:8;STRATAGENE)，ExcellE(SEQIDNO:6)，AILIMLCl(SEQIDNO:22),AILIMLC2(SEQIDNO:23),LCcl(SEQIDNO:24),ckll7(SEQIDNO:7),HIGHC(SEQIDNO:4),LCc2(SEQIDNO:25),HIK(SEQIDNO:26)和polyA(SEQIDNO:21).下列所列序列包括編碼抗人AILIM的人單克隆抗體(由上述每一雜交瘤產(chǎn)生)重鏈和輕鏈的cDNA序列，以及由cDNA序列導(dǎo)出的氨基酸序列。克隆AIH5D3(JMab-136)<重鏈>DNA序列SEQIDNO:27(信號(hào)序列核苷酸編號(hào)69到125,V區(qū)核苷酸編號(hào)126到419)氨基酸序列SEQIDNO:28(包含信號(hào)序列氨基酸編號(hào)1到19，可變區(qū)氨基酸編號(hào)20到118)<輕鏈>DNA序列SEQIDNO:29(信號(hào)序列核苷酸編號(hào)39到104，V區(qū)核苷酸編號(hào)105到386)氨基酸序列SEQIDNO:30(包含信號(hào)序列氨基酸編號(hào)1到22，可變區(qū)氨基酸編號(hào)23到116)克隆AII289(JMab-138)<重鏈>DNA序列SEQIDNO:31(信號(hào)序列核苷酸編號(hào)94到150，V區(qū)核苦酸編號(hào)151到441)氨基酸序列SEQIDNO:32(包含信號(hào)序列氨基酸編號(hào)1到19，可變區(qū)氨基酸編號(hào)20到116)<輕鏈>DNA序列SEQIDNO:33(信號(hào)序列核苷酸編號(hào)28到87，V區(qū)核苷酸編號(hào)88到375)氨基酸序列SEQIDNO:34(包含信號(hào)序列氨基酸編號(hào)1到20，可變區(qū)氨基酸編號(hào)21到116)克隆AIB94(JMab-139)<重鏈>DNA序列SEQIDNO:35(信號(hào)序列核苷酸編號(hào)96到152，V區(qū)核普酸編號(hào)153到443)氨基酸序列SEQIDNO:36(包含信號(hào)序列氨基酸編號(hào)1到19，可變區(qū)氨基酸編號(hào)20到116)<輕鏈〉DNA序列SEQIDNO:37(信號(hào)序列核苷酸編號(hào)33到92，V區(qū)核苷酸編號(hào)93到380)氨基酸序列SEQIDNO:38(包含信號(hào)序列氨基酸編號(hào)1到20,可變區(qū)氨基酸編號(hào)21到116)用基因序列分析軟件在由Tomlinson等(Immunol.Today,Vol.l6，No.5,p.237-242,1995)構(gòu)建的人免疫球蛋白可變區(qū)基因的VBASE序列庫(kù)中檢索在此測(cè)定的每一DNA序列。結(jié)果表明上述人單克隆抗體的重鏈和輕鏈的V-區(qū)基因分別由下列片段構(gòu)成。<重鏈V-區(qū)基因〉克隆AIH5D3(JMab-136):1-02克隆AII289(JMab-138):3-13克隆AII394(JMab-139):3-13〈輕鏈V-區(qū)基因>95克隆AIH5D3(JMab-136):L5克隆AII289(JMab-138):A27克隆AII394(JMab-139):A27實(shí)施例U:人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)的抑制作用免疫應(yīng)答系統(tǒng)的功能是消除對(duì)生命體有害的抗原(致病性微生物如病毒，細(xì)菌，寄生蟲(chóng)，異物等)，它可以廣義地分為先天性免疫和獲得性免疫。前者是基于非特異性識(shí)別的排除作用系統(tǒng)，包括吞噬細(xì)胞(多形核白細(xì)胞，單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞等)的吞噬作用，自然殺傷細(xì)胞(NK)的攻擊，和補(bǔ)體的抗原調(diào)理作用等。后者，獲得性免疫應(yīng)答，是獲得了抗原特異性(活化)的淋巴細(xì)胞(主要是T細(xì)胞和B細(xì)胞)實(shí)施的排除作用系統(tǒng)。此外，獲得性免疫應(yīng)答可廣義地分為細(xì)胞免疫和體液免疫。與依賴(lài)于抗體的體液免疫不同，細(xì)胞免疫通常是以T細(xì)胞對(duì)作為標(biāo)靶的抗原的直接作用為表現(xiàn)的免疫應(yīng)答。已知細(xì)胞免疫涉及對(duì)病毒或腫瘤的免疫應(yīng)答，組織或器官移植后誘發(fā)的免疫應(yīng)答，對(duì)某些藥物的超敏反應(yīng)，和某些自身免疫疾病。細(xì)胞免疫最典型的現(xiàn)象是公知的結(jié)核桿菌素過(guò)敏(基本上與結(jié)核桿菌素超敏反應(yīng)同義)。結(jié)核桿菌素過(guò)敏是結(jié)核桿菌感染引發(fā)的遲發(fā)型過(guò)敏。該過(guò)敏源于結(jié)核桿菌感染并且可通過(guò)對(duì)活體皮內(nèi)注射結(jié)核桿菌培養(yǎng)上清中的結(jié)核桿菌素蛋白引起免疫應(yīng)答而誘發(fā)。遲發(fā)型過(guò)敏是抗原致敏的T細(xì)胞(能記憶抗原的記憶T細(xì)胞)介導(dǎo)的過(guò)敏性。這種過(guò)敏稱(chēng)為"遲發(fā)型"是因?yàn)楸豢乖旅舻幕铙w再次與所述抗原接觸時(shí)，需要24到48小時(shí)才表達(dá)出對(duì)記憶T細(xì)胞誘導(dǎo)的炎癥的過(guò)敏性應(yīng)答。結(jié)核桿菌素過(guò)敏現(xiàn)象是一種有代表性的遲發(fā)型過(guò)敏，通常被用于"結(jié)核桿菌素試驗(yàn)"中以診斷在動(dòng)物體內(nèi)是否已經(jīng)建立了對(duì)結(jié)核桿菌感染的過(guò)敏性。具體地，如下進(jìn)行該試驗(yàn)對(duì)動(dòng)物皮內(nèi)注射純化的結(jié)核桿菌素(純蛋白衍生物；PPD;普通診斷使用O.lml的濃度為0.05嗎/0.1ml(2.5TU)的所述衍生物)，它是純化自結(jié)核桿菌培養(yǎng)物的結(jié)核桿菌素蛋白；注射的48小時(shí)后測(cè)定注射點(diǎn)皮膚紅斑的主軸；根據(jù)所測(cè)主軸長(zhǎng)可診斷結(jié)核桿菌感染的存在。如果紅斑的主軸短于4mm,則受試體是陰性的；如果該主軸在4-9mm的范圍內(nèi)，則受試者為假陽(yáng)性；如果主軸為10mm或更長(zhǎng)則受試體是陽(yáng)性的。與細(xì)胞免疫相關(guān)的遲發(fā)型過(guò)敏包括，例如，少量蛋白或類(lèi)似物瞬時(shí)誘發(fā)的Jones-Mote型超敏反應(yīng)，對(duì)某些藥物如苦基氯或植物毒素如日本漆的接觸過(guò)敏，或與移植排斥(如異源移植)相關(guān)的過(guò)敏，以及上述對(duì)感染性病原體的抗原的過(guò)敏，如由上述結(jié)核桿菌引起的結(jié)核桿菌素過(guò)敏。此試驗(yàn)中，利用上述結(jié)核桿菌素試驗(yàn)評(píng)價(jià)抗-AILIM抗體對(duì)遲發(fā)型超敏反應(yīng)(遲發(fā)型過(guò)敏)的抑制作用。所述試驗(yàn)如下進(jìn)行將已用BCG(卡介苗)(一種減毒的牛型結(jié)核桿菌活菌)致敏的每一只恒河猴(cynomolgusmonkeys)(雄性,體重6,0-8.5kg,EnvironmentalBiologicalLifeScienceResearchCenterInc.;每組3只)用鹽酸氯胺酮麻醉(10mg/kg，肌肉內(nèi)注射)，在其胸部的每一注射點(diǎn)(每只6個(gè)注射點(diǎn))皮內(nèi)注射0.1ml下列的任一試驗(yàn)樣品。樣品注射點(diǎn)間距離是3cm或更長(zhǎng)。(1)人抗-人AILIM單克隆抗體(JMab-i:36;02mg;每個(gè)注射點(diǎn)lOpg)和結(jié)核桿菌素(4)ag/lml生理鹽水)的1:1混合溶液；(2)人抗-人AILIM單克隆抗體(JMab-l^;2mg;每個(gè)注射點(diǎn)100|ug)和結(jié)核桿菌素(4嗎/lml生理鹽水)的1:1混合溶液；(3)磷酸鹽緩沖液(PBS(-))作對(duì)照；(4)市售甾類(lèi)消炎劑，強(qiáng)的松龍(0.2mg;每個(gè)注射點(diǎn)10昭)和結(jié)核桿菌素(4嗎/lml生理鹽水)的1:1混合溶液作為陽(yáng)性對(duì)照；(5)人抗-KLH單克隆抗體(實(shí)施例<2-2〉；0.2mg;每個(gè)注射點(diǎn)10pg)和結(jié)核桿菌素(4嗎/lml生理鹽水)的1:1混合溶液作為陰性對(duì)照；每個(gè)樣品注射24小時(shí)后，測(cè)量每個(gè)注射點(diǎn)紅斑的長(zhǎng)軸和短軸，確定紅斑面積。所得結(jié)果示于圖72。所得結(jié)果表明與對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，遲發(fā)型過(guò)敏引起的紅斑在接受了抗-AILIM抗體注射的組別中受到了顯著抑制。此抑制作用與作為陽(yáng)性對(duì)照的甾類(lèi)消炎藥的作用相當(dāng)。實(shí)施例12:分析在移才直物抗宿主疾病(GVHD〗病人的各種組織中AILIM的表達(dá)采用常規(guī)方法分析病人活組織檢查所得多種組織中AILIM的表達(dá)，所述病人是移植了來(lái)自供者的異源移植物的受者，并在移植后經(jīng)臨床診斷患有急性或慢性移植物抗宿主疾病(GVHD)。用HE和如上述實(shí)施例中制備的人抗-人AILIM單克隆抗體(JMab-36)將組織染色。使用采自急性GVHD病人(28例)各種組織的33個(gè)樣品以及慢性GVHD病人(5例)的5個(gè)樣品進(jìn)行分析。結(jié)果如下AILIM-陽(yáng)性反應(yīng)可見(jiàn)于29個(gè)皮膚樣品中的15個(gè)；3個(gè)胃組織樣品中的1個(gè)；1個(gè)結(jié)腸組織樣品中的1個(gè)，上述所有樣品全部得自急性GVHD病人。AIUM-陽(yáng)性反應(yīng)可見(jiàn)于3個(gè)皮膚樣品中的1個(gè)；2個(gè)結(jié)腸組織樣品中的2個(gè)；這些樣品全部得自慢性GVHD病人。此外，在13個(gè)觀(guān)察到顯著淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的樣品中有10個(gè)發(fā)現(xiàn)AILIM-陽(yáng)性反應(yīng)。實(shí)施例13:人抗-人AILIM單克隆抗體將協(xié)同刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至猴T細(xì)胞中的活性實(shí)施例7中進(jìn)行的試驗(yàn)表明本發(fā)明的人抗-人AILIM單克隆抗體通過(guò)控制人T細(xì)胞應(yīng)答，具體是控制AILIM介導(dǎo)的協(xié)同刺激信號(hào)向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)而促進(jìn)人T細(xì)胞增殖。在此試驗(yàn)中，如實(shí)施例7相同的方式分析了人單克隆抗體是否表現(xiàn)出促進(jìn)猴T細(xì)胞增殖的活性。<13-1〉抗體的稀釋用磷酸緩沖液(PBS)稀釋抗-人CD3單克隆抗體SP34(BD-Pharmingen)，使最終濃度為l嗎/ml。用PBS稀釋如上制備的人抗-人AILIM單克隆抗體JMAbl36至終濃度40pg/ml。再進(jìn)一步用PBS稀釋抗體溶液以制備多種濃度的抗體(40fig/ml-0.064嗎/ml)。<13-2>用抗體包被微量培養(yǎng)板96孔微量培養(yǎng)板的每一孔用抗人CD3單克隆抗體SP34(l|ug/ml;每孔25|^1)和人抗-人AILIM單克隆抗體JMAbl36(40|ag/ml-0.064fig/ml;每孔25lal)包被。將板37。C下保溫2小時(shí)。隨后，棄去抗體溶液，每孔用PBS洗3遍。洗后，向每孔加入含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基(100iul/孔)，將板37。C下保溫1小時(shí)。從而用上述抗體包被了^反的各孔。以相同的方法進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)，板上包被的對(duì)照抗體是人抗-KLH單克隆抗體(JMAb23;參見(jiàn)前面的實(shí)施例)，而非人抗-人AILIM單克隆抗體。在下面的試驗(yàn)中使用用所述抗體包被的微量培養(yǎng)板。98<13-3〉猴T細(xì)胞懸浮液的制備從恒河猴采集外周血，采用NycoPrepl.077A(Nycomed)通過(guò)密度梯度離心分離單核細(xì)胞。依照實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，使用抗-人CD4抗體M-T477(BD-Pharmingen)，抗-人CD8抗體RPA-T8(BD-Pharmingen)，抗-小鼠IgG微珠(Miltenyi)和磁性分揀儀從恒河猴單核細(xì)胞分離猴T細(xì)胞。采用血球計(jì)數(shù)器測(cè)定T細(xì)胞數(shù)。將猴T細(xì)胞懸在含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基中。這樣就制備得到了猴T細(xì)胞懸浮液(lx106個(gè)細(xì)胞/ml)。<13-4>細(xì)胞培養(yǎng)(l)用抗-人CD3抗體和抗-人AILIM抗體包被的微量培養(yǎng)板進(jìn)行培養(yǎng)將猿猴(Simian)T細(xì)胞懸浮液加入到用上述抗體包被的微量培養(yǎng)板的每孔，將板置于C02培養(yǎng)箱中37。C下保溫2天。培養(yǎng)完成后，各板進(jìn)行下列試驗(yàn)<13-5>T細(xì)胞增殖活性的測(cè)定向保溫后的每孔加入甲基[3H]胸香(0.5i^Ci/孔，AmershamPharmacia),將板置于C02培養(yǎng)箱中37。C下保溫6小時(shí)。保溫后，用細(xì)胞收集器將細(xì)胞捕獲在GF/C濾膜(Packard)上。隨后，將濾膜40°C下干燥3小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，然后向其中加入Microscinti0(20)nl/孔；Packard)。用(3-計(jì)數(shù)器(TOPCOUNT)測(cè)定濾膜上捕獲的細(xì)胞中所摻入的311放射性來(lái)分析培養(yǎng)后T細(xì)胞增殖的程度。結(jié)果顯示于圖73。本試驗(yàn)結(jié)果表明當(dāng)用抗-人AILIM單克隆抗體(人單克隆抗體或小鼠單克隆抗體)與抗-人CD3抗體一起包被微量培養(yǎng)板時(shí)，隨著所述細(xì)胞濃度的增加猿猴T細(xì)胞顯著增殖。該結(jié)果也"^是示，本發(fā)明的人抗-人AILIM單克隆抗體可與猴AILIM結(jié)合，且具有調(diào)節(jié)猴AILIM功能的活性。實(shí)施例14:建立用于鑒定和定量能與AILIM或AILIM配體結(jié)合的物質(zhì)的方法建立一種ELISA(酶聯(lián)免疫溶劑檢測(cè))方法以鑒定或定量能與AILIM(ICOS)或AILIM配體(B7h/B7RPl/GL50/LICOS)結(jié)合的物質(zhì)。下文詳述的方法的原理是基于通過(guò)ELISA估計(jì)的所述物質(zhì)對(duì)可溶性AIUM(hAILIM-IgFc)和可溶性人AILIM配體(hB7h-IgFc)間結(jié)合的抑制程度。<14-1>樣品使用下列樣，(1)鏈霉抗生素-HRP(SouthernBiotechnologyAssociates,Inc.);(2)可溶性人AILIM配體(人B7h的胞外區(qū)與人IgGl的恒定區(qū)之間的融合蛋白)；所述蛋白由下述<14-2>的方法制備；(3)生物素標(biāo)記的可溶性AILIM-IgFc;依照本發(fā)明人之一的Tezuka的較早文獻(xiàn)(JP-A11-29599(實(shí)施例16(2))和WO98/38216(實(shí)施例16(2)))所述同樣的方法所得抗原可通過(guò)進(jìn)一步純化而制備AILIM-IgFc;(4)人抗-人AILIM單克隆抗體(JMab-136;如上所述)；(5)人抗-KLH單克隆抗體(陰性對(duì)照抗體；JMab-23;如上所述)；(6)磷酸鹽緩沖液(PBS(-);NikkenSeibutsu);(7)RPMI1640培養(yǎng)基(NikkenSeibutsu);(8)胎牛血清(FCS;JRH-Bioscience);(9)30。/。牛血清白蛋白(BSA;Sigma);(10)吐溫20(BioRad);(11)TMB+底物色素原(Dako)。<14-2>可溶性人AILIM配體(人B7h的胞外區(qū)與人IgGl的恒定區(qū)的融合蛋白(hB7h-IgFc))的制備RNA。以所得總RNA(5昭)為模板并使用PreamplificationSystem用于第一鏈cDNA的合成(GIBCO-BRL)的Superscript預(yù)擴(kuò)增系統(tǒng)合成cDNA。然后，設(shè)計(jì)并合成5，引物(5'-GAGGTCTCCGCCCTCGAGATGCGGCTGGGCAGTCC-3，，SEQIDNO:39)，其末端具有Xhol限制性位點(diǎn)，3，引物(5'-CACAGGACAGCCAGGGGATCCCACGTGGCCGCG畫(huà)3，，SEQIDNO'.40)，其末端具有BamHI限制性位點(diǎn)，通過(guò)PCR擴(kuò)增編碼人AILIM配體(hB7h)胞外區(qū)的cDNA。使用所述cDNA為模板并用所述引物經(jīng)PCR制備DNA,所述DNA包含編碼人B7h胞外區(qū)的cDNA且在其不同末端具有Xhol和BamHI位點(diǎn)。所得PCR產(chǎn)物用Xhol和BamHI消化，通過(guò)瓊脂糖100凝膠電泳分級(jí)以分離得到預(yù)計(jì)編碼目的胞外區(qū)的相當(dāng)于約720bpcDNA片段的區(qū)帶。將分離的cDNA片段亞克隆進(jìn)入預(yù)先用Xhol和BamHI消化的質(zhì)粒pBluescriptIISK(+)(Stratagene)。采用自動(dòng)焚光DNA測(cè)序儀(AppliedBiosystems)通過(guò)序列分析證實(shí)所述cDNA片段包含編碼人B7h胞外區(qū)的部分。另一方面，通過(guò)用Xbal和BamHI消化質(zhì)粒(參見(jiàn)，細(xì)胞，Vol.61，p.1303-1313,1990;Dr.Seed等制備，馬塞諸塞州總醫(yī)院)來(lái)制備BamHI-XbaIDNA片段形式(約1.3kb)的編碼作為融合配對(duì)物的人IgGl的Fc的DNA。所述片段包含編碼人IgGl，Cy12和Cy13的鉸鏈區(qū)的外顯子。將如上制備的編碼人B7h(hB7h)胞外區(qū)的XhoI-BamHI片段和包含編碼人IgGl的Fc(縮寫(xiě)為"IgFc，，)的外顯子的BamHI-XbaI片段亞克隆進(jìn)入預(yù)先用Xhol和Xbal消化的質(zhì)斗立pBluescriptIISK(+)(Stratagene)。隨后，用Xhol和Xbal消化所述質(zhì)粒以制備約1.8kb的DNA片段，其包含人B7h與人IgFc胞外區(qū)的融合DNA。通過(guò)使用T4DNA連接酶，將此融合DNA片段插入到表達(dá)載體pME18S(MedicalImmunology,Vol.20，No.1,p.27-32,1990，和"基因工程手冊(cè)，'，ExperimentalMedicine,supplement,Yodosha,pp.101-107,1992)的Xhol和Xbal位點(diǎn)之間，以構(gòu)建質(zhì)粒phB7h-IgFc。在含10%胎牛血清和氨千青霉素的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)單層COS7細(xì)胞(ATCCCRL-1651)至亞鋪滿(mǎn)，用質(zhì)粒phB7h-IgFc通過(guò)電穿孔轉(zhuǎn)化所述細(xì)胞以產(chǎn)生轉(zhuǎn)化細(xì)胞。將轉(zhuǎn)化細(xì)胞在無(wú)血清ASF104培養(yǎng)基中培養(yǎng)72小時(shí)以表達(dá)hB7h-IgFc。采用蛋白GSepharose親和柱(AmershamPharmacia)如下纟屯化HB7h-IgFc:將上述培養(yǎng)上清離心得到上清。將所得上清上樣到已用結(jié)合緩沖液預(yù)平衡的蛋白GSepharose親和柱。隨后，用結(jié)合緩沖液洗柱，用洗脫緩沖液進(jìn)行洗脫?；厥障疵撘海缓髮?duì)磷酸鹽緩沖液透析。將外部透析緩沖液更換2或更多次。這樣就得到了純化的hB7h-IgFc。<14-3〉抗體和可溶性人AILIM(hAILIM-IgFc)的稀釋及其反應(yīng)抗-人AILIM單克隆抗體(JMab-136)和作為陰性對(duì)照抗體的人抗-KLH單克隆抗體(JMab-23)原液系列稀釋為11個(gè)水平，將每一樣品(200inl)與200|al101含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基充分混合。如此制備好各種濃度的抗體溶液。向所制備的各種濃度的溶液中加入生物素標(biāo)記的hAILIM-IgFc(2pl/管；終濃度l嗎/ml)。將所得溶液充分混合并在室溫下保溫30分鐘?！?4-4〉抗-AILIM單克隆抗體抑制hAILIM-IgFc與hB7h-IgFc結(jié)合的活性的檢測(cè)向96孔微量培養(yǎng)板的每孔加入hB7h-IgFc(50)tU/孔(800ng/孔))。將板密封并在37。C下保溫1小時(shí)。從每孔移去溶液，用PBS(120lul)清洗每孔3次。隨后，將含0.5%BSA的PBS(100ial/孔)加入到每孔中以封閉未反應(yīng)的點(diǎn)。將板密封并在37。C下保溫1小時(shí)。保溫后，除去溶液，用PBS(120nl)清洗每孔3次。隨后將〈14-3〉中制備的每一樣品加入孔中(50jul/孔)。將板密封并在37。C下保溫1小時(shí)。棄去溶液，用37。C下預(yù)熱的含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基(120]Lil)清洗每孔3次。隨后，向每孔加入含3.7%福爾馬林的PBS(100pl/孔)，將板冰上保溫5分鐘。將每孔的溶液棄去，用0.1%吐溫20洗孔3次(120W)。隨后，向每孔加入鏈霉抗生物素-HRP(50(W孔)。將板密封并在室溫下保溫30分鐘。將每孔的溶液棄去，用含0.1%吐溫20的PBS洗孔3次(120iul)。隨后，向每孔加入TMB+底物色素原(50^il/孔)。將板室溫下保溫20分鐘。隨后，向每孔加入2N硫酸(50pl/孔)以終止反應(yīng)。采用THERMOmax(MolecularDevices)在450nm波長(zhǎng)測(cè)定每孔的吸光度。結(jié)果示于圖74到76。結(jié)果顯示抗-AILIM單克隆抗體具有以劑量依賴(lài)方式抑制hAILIM-IgFc與hB7h-IgFc結(jié)合的活性。相應(yīng)地，本實(shí)施例指出一種由本發(fā)明方法闡明的檢測(cè)系統(tǒng)可用于篩選和鑒定能與AILIM或AILIM配體結(jié)合的物質(zhì)(例如，抗體或合成的〗氐分子量化合物)。實(shí)施例15:人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)與AILIM-AILIM配體介導(dǎo)的協(xié)同刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的人T細(xì)胞增殖進(jìn)行抑制的活性通過(guò)測(cè)定人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)人T細(xì)胞與AILIM配體(B7h/B7RPl/GL50/LICOS)相接觸而誘發(fā)的細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)，分析本發(fā)明的抗-人AILIM單克隆抗體是否具有調(diào)節(jié)人T細(xì)胞表面AILIM所介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活性。<15-1>抗體的稀釋用磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋抗-人CD3單克隆抗體OKT3(ATCCCRL-8001)到終濃度為8|ug/ml。用PBS稀釋如上制備的可溶性人AILIM配體(hB7h-lgFc)到終濃度為40)ag/ml?？贵w溶液用PBS進(jìn)一步稀釋以得到多種濃度的抗體(40(ig/ml-0.064嗎/ml)。<15-2>用抗體包被微量培養(yǎng)板用(1)抗-人CD3單克隆抗體OKT3(8jag/ml;每孔25pl)和hB7h-lgFc(40|Lig/ml-0.064(ag/ml;每孔25pl)包被96孔微量培養(yǎng)板的每一孔。將板37°C下保溫2小時(shí)。隨后棄去抗體溶液，每孔用PBS洗3次。清洗后，向每孔加入含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基(100jil/孔)，將板37。C下保溫1小時(shí)。使板的各孔都被包被。<15-3〉人T細(xì)胞懸浮液的制備從正常健康人體采集外周血，采用LymphoPrep(Nycomed)通過(guò)密度梯度離心對(duì)單核細(xì)胞分級(jí)。使用pan-T細(xì)胞分離試劑盒(Miltenyi)和磁性分揀儀，按說(shuō)明書(shū)從人單核細(xì)胞分離人T細(xì)胞。采用血球計(jì)數(shù)器測(cè)定T細(xì)胞數(shù)。將人T細(xì)胞懸浮在添加了人抗-人AILIM單克隆抗體Jmabl36(20嗎/ml)的含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基中。將制備好的人T細(xì)胞懸浮液(lx106個(gè)細(xì)胞/ml)室溫下保溫30分鐘。用人抗-人AILIM單克隆抗體JMAb23(20(ig/ml)作為陰性對(duì)照抗體。<15-4>細(xì)胞培養(yǎng)依照上述同樣的方式，向已用抗-人CD3抗體和hB7h-IgFc包被的微量培養(yǎng)板的每孔加入人T細(xì)胞懸浮液(100pl/孔；lxl()S個(gè)細(xì)胞/孔)，將板置于032培養(yǎng)箱中37。C下保溫3天。<15-5〉T細(xì)胞增殖活性的測(cè)定保溫后，向各板的每孔加入甲基[3H]胸苷(0.5|iCi/孑L;Amersham-Pharmacia)，將各板在0)2培養(yǎng)箱中于37°C下保溫6小時(shí)。然后，用細(xì)胞收集器將細(xì)胞捕獲在GF/C濾膜(Packard)上。隨后，將濾膜40。C下干燥3小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，然后向其中加入Microscinti0(20|^1/孔；Packard)。用P-計(jì)數(shù)器(TOPCOUNT)測(cè)定濾膜上捕獲的細(xì)胞中摻入的"H放射性來(lái)分析培養(yǎng)后T細(xì)胞增殖的程度。結(jié)果顯示于圖77。1此分析結(jié)果顯示人T細(xì)胞生長(zhǎng)顯著依賴(lài)于人B7h-IgFc濃度(在使用陰性對(duì)照抗體的檢測(cè)中)。此外，人抗-人AILIM單克隆抗體顯著抑制人T細(xì)胞的殖。實(shí)施例16:人抗-人AILIM單克隆抗體對(duì)與AILIM-AILIM配體介導(dǎo)的協(xié)同刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的猴T細(xì)胞增殖的抑制活性以猴T細(xì)胞取代人T細(xì)胞如上實(shí)施例15所述進(jìn)行同樣的實(shí)驗(yàn)。<16-1>抗體的稀釋及其它用磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋抗-人CD3單克隆抗體SP34(BD-Pharmacia)到終濃度為lpg/ml。用PBS稀釋如上制備的人B7h-IgFc到終濃度為40嗎/ml。用PBS進(jìn)一步稀釋抗體溶液以得到多種濃度的抗體(40嗎/ml-0.064嗎/ml)。<16-2>用抗體包被微量培養(yǎng)板用(l)抗-人CD3單克隆抗體SP34(BD-Pharimingen)(l嗎/ml;每孔25|ul)和人B7h-lgFc(40|ig/ml-0.064ng/ml;每孔25(^1)包被96孔微量培養(yǎng)板的每一孔。將板37。C下保溫2小時(shí)。隨后棄去抗體溶液，每孔用PBS洗3次。清洗后，向每孔加入含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基(100pl/孔)，將板37。C下保溫l小時(shí)。使板的各孔都被包被。<16-3〉猴T細(xì)胞懸浮液的制備從恒河猴采集外周血。采用NycoPrepl.077A(Nycomed)通過(guò)密度梯度離心制備含單核細(xì)胞的級(jí)分。使用抗-人CD4抗體M-T477(BD-Pharimingen),抗-人CD8抗體RPA-T8(BD-Pharimingen)，抗-小鼠IgG微珠(Miltenyi)和磁性分揀儀，按說(shuō)明書(shū)從恒河猴單核細(xì)胞分離猴T細(xì)胞。采用血球計(jì)數(shù)器測(cè)定T細(xì)胞數(shù)。將猴T細(xì)胞懸浮在含人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36(20嗎/ml)和10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基中以制備猴T細(xì)胞懸浮液(lx106個(gè)細(xì)胞/ml)。將所述懸浮液室溫下保溫30分鐘。將人抗-KLH單克隆抗體JMab23(20pg/ml)用作陰性對(duì)照抗體。<16-4>細(xì)胞培養(yǎng)依照上述同樣的方式，向已用抗-人CD3抗體和hB7h-IgFc包被的微量培養(yǎng)板的每孔加入猴T細(xì)胞懸浮液(100pl/孔；lxl()S個(gè)細(xì)胞/孔)，將板置于C02培養(yǎng)箱中37。C下保溫3天。<16-5>T細(xì)胞增殖活性的測(cè)定104培養(yǎng)后，向各板的每孔加入曱基[3H]胸苷(0.5|LiCi/孔；Amersham-Pharmacia)，將各板在C02培養(yǎng)箱中于37°C下保溫6小時(shí)。然后，用細(xì)胞收集器將細(xì)胞捕獲在GF/C濾膜(Packard)上。隨后，將濾膜40°C下干燥3小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，然后向其中加入Microscinti0(20)ul/孔；Packard)。用(3-計(jì)數(shù)器(TOPCOUNT)測(cè)定濾膜上捕獲的細(xì)胞中摻入的^放射性來(lái)分析培養(yǎng)后T細(xì)胞增殖的程度。結(jié)果顯示于圖78。此分析結(jié)果顯示猴T細(xì)胞生長(zhǎng)顯著依賴(lài)于人B7h-IgFc濃度(在使用陰性對(duì)照抗體的檢測(cè)中)。此外，抗-人AILIM單克隆抗體顯著抑制猴T細(xì)胞增殖。工業(yè)應(yīng)用本發(fā)明的能與人AILIM結(jié)合的單克隆抗體是人源的，因此這些抗體不會(huì)由于對(duì)人的抗原性，即宿主中的HAMA(人抗小鼠抗原性)，誘發(fā)嚴(yán)重的免疫排斥反應(yīng)，所述HAMA在包含非-人哺乳動(dòng)物來(lái)源的抗體，如小鼠源抗體的抗體治療制劑中已經(jīng)是一個(gè)嚴(yán)重的治療性問(wèn)題(副作用)。因此本發(fā)明的抗體就具有作為抗體藥物的巨大價(jià)值。所以本發(fā)明抗AILIM(具體地是人AILIM)的人單克隆抗體和含有所述人單克隆抗體的藥物制劑根本不會(huì)誘發(fā)HAMA引起的宿主免疫排斥反應(yīng)；所以能作為治療劑用于控制與AILIM介導(dǎo)的共信號(hào)(第二信號(hào))轉(zhuǎn)導(dǎo)到AILIM表達(dá)細(xì)胞有關(guān)的多種生物反應(yīng)(如，AILIM表達(dá)細(xì)胞的增殖，由AILIM表達(dá)細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，引起AILIM表達(dá)細(xì)胞的免疫性細(xì)胞溶解或細(xì)胞死亡(凋亡)，誘導(dǎo)對(duì)AILIM表達(dá)細(xì)胞的抗體依賴(lài)性損害)；和/或用于治療或預(yù)防與AILIM介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的多種疾病，控制和抑制這些疾病的發(fā)作和/或發(fā)展。具體地，通過(guò)提供包含本發(fā)明的人抗-人AILIM單克隆抗體或其一部分作為活性成分的藥物制劑，可能能抑制或治療和預(yù)防多種疾病(如，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化，自身免疫性甲狀腺炎，過(guò)敏性接觸型皮炎，慢性炎性疾病扁平莒癬，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，胰島素依賴(lài)型糖尿病，牛皮癬等)，這些疾病可分類(lèi)為自身免疫病或過(guò)敏性疾病(具體地，由于細(xì)胞免疫引起的自身免疫病和遲發(fā)型過(guò)敏)；關(guān)節(jié)病(例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)，骨關(guān)節(jié)炎(OA)),炎癥(如肝炎)；移植物抗宿主反應(yīng)(GVH反應(yīng))；移植物抗宿主疾病(GVHD);與組織(如皮膚，角膜和骨)或器官(肝，心，肺，腎，胰臟等)移植(同種移植或異種移植)有關(guān)的免疫排斥反應(yīng)；對(duì)外來(lái)抗原或自身抗原的免疫應(yīng)答(例如抗所述抗原的抗體的生產(chǎn)，細(xì)胞增殖，細(xì)胞因子的生產(chǎn)等)；可能由腸免疫異常(具體地，炎性腸疾病(特別是Crohn's病和潰瘍性結(jié)腸炎)引起的疾病；食物過(guò)敏反應(yīng)等。本發(fā)明的藥物組合物使得有可能治療或預(yù)防某些采用甾族藥物作消炎藥的炎癥，例如，與各種關(guān)節(jié)炎性皮滲相關(guān)的炎癥(類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎等)，肺炎，肝炎(包括病毒性肝炎)，與傳染性疾病相關(guān)的炎癥，炎性腸疾病，腸炎，腎炎(腎小球腎炎，與腎纖維化相關(guān)的炎癥，胃炎，脈管炎，胰腺炎，腹膜炎，支氣管炎，心肌炎，腦炎，與局部缺血-再灌注液損傷相關(guān)的炎癥(心肌缺血-再灌注損傷等)，與組織或器官移植后的免疫排斥反應(yīng)有關(guān)的炎癥，燙傷，各種皮膚炎癥(牛皮癬，過(guò)敏性接觸型皮炎，慢性炎性皮膚病扁平苔癬)，與多器官衰竭有關(guān)的炎癥，PTCA或PTCR手術(shù)后炎癥，與動(dòng)脈粥樣硬化癥有關(guān)的炎癥，自身免疫曱狀腺炎等。此外，在上迷抑制和治療與組織或器官移植相關(guān)的免疫排斥反應(yīng)方面，本發(fā)明的藥物組合物可與已知用于抑制移植治療中的免疫排斥反應(yīng)的免疫抑制劑聯(lián)合使用，從而可提高已知藥物對(duì)移植排斥的抑制效應(yīng)。而且，通過(guò)使用本發(fā)明的用于鑒定能與AILIM或AILIM配體結(jié)合的物質(zhì)的方法，有可能通過(guò)與AILIM或AILIM配體的結(jié)合來(lái)控制與AILIM和AILIM配體間作用有關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，這樣就可以篩選和選擇具有治療上述各種疾病的潛在活性的藥物制劑(合成的化學(xué)化合物和抗體)。序列表說(shuō)明文字SEQIDNO:1其它信息人工序列的描述人工合成的引物序列，Notl-T。SEQIDNO:2其它信息人工序列的描述人工合成的接頭序列，20adp。SEQIDNO:3其它信息人工序列的描述人工合成的接頭序列，24adp。SEQIDNO:4其它信息人工序列的描述人工合成的引物序列，HIGLCSEQIDNO:5其它信息人工序列的描述SEQIDNO:6其它信息人工序列的描述SEQIDNO:7其它信息人工序列的描述SEQIDNO:8其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:9其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:10其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:11其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:12其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:13其它信息人工序列的描述SEQIDNO:14其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:15其它信息人工序列的描述SEQIDNO:16其它信息人工序列的描述SEQIDNO:17其它信息人工序列的描述SEQIDNO:18其它信息人工序列的描述SEQIDNO:19其它信息人工序列的描述SEQIDNO:20人工合成的引物序列，NHCc2。人工合成的引物序列，ExcellE。人工合成的引物序列，ckl17。人工合成的引物序列，M13R。人工合成的引物序列，136H。人工合成的引物序列，138/9H。人工合成的？i物序列，AILIMHC1。人工合成的引物序列，HCcl。人工合成的引物序列，HCc7。人工合成的引物序列，HCc8。人工合成的引物序列，HCc3。人工合成的引物序列，HCc4。人工合成的引物序列，HCc6。人工合成的引物序列，HIGHC。人工合成的引物序列，HCc9。107其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:21其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:22其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:23其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:24其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:25其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:26其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:39其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:40其它信息人工序列的描述:人工合成的引物序列，HCc5。人工合成的引物序列，polyA。人工合成的引物序列，AILIMLC1。人工合成的引物序列，AILIMLC2。人工合成的引物序列，LCcl。人工合成的引物序列，LCc2。人工合成的引物序列，HIK。人工合成的引物序列人工合成的引物序列108序列表<110〉日本煙草產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社(JapanTobacco,Inc.)〈120〉抗協(xié)同刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子AILIM的人單克隆抗體及其藥物用途<130〉J1-A0101Y1P<140〉<141〉<150〉JPP2000-147116<151>2000-05-18<150>JPP2001-99508<151>2001-03-30<160>40〈170〉Patentln2.1版<210〉1<211〉45〈212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的引物序列Not1-T<220〉<221>primer—bind<222>(1)..敏〈400〉1aactggaagcttcagcggccgcagagatttttttttttttttttt45〈210〉2〈211〉20〈212〉DNA<213>人工序列<220><223〉人工序列的描述人工合成的接頭序列，20adp<400〉2cgtggtgtcatggcactgcg20<210>3<211>24<212>DNA<213>人工序列<220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的接頭序列，24adp〈400〉3aattcgcagtgccatgacaccacg24<210〉4<211>23<212>DNA〈213〉人工序列<220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列HIGLC〈220〉<221〉primer—bind〈222〉(1)..(53)〈400〉4gtctgctttg(:tcagcgtcaggg23〈210>5〈211〉21<212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列NHCc2<220〉<221〉primer—bind<222〉(1).加〈400〉5caccggttcggggaagtagtc〈210〉6〈211〉21〈212〉DNA〈213〉人工序列<220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列ExcellE<400>6ggtgacactatagaatacagg21<210>7<211>25〈212〉DNA〈213〉人工序列<220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列ck117<220>〈221>primer—bind〈222〉(1)..(55)〈400〉7gcaggcacacaacagaggcagttcc<210〉8〈211〉20<212>DNA<213>人工序列primer—bind(l)..加o12222222<w\Z〈220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列M13R<220><221〉primer_bind<222>(1)..咖<400>8cacaggaaacagctatgacc〈210〉9<211〉21<212〉DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述人工合成的引物序列136H〈220〉<221〉primer—bind<222>(1)..加<400〉9cctggacaagggcttgagtgg<210〉10〈211>21〈212〉薩〈213〉人工序列<220><223〉人工序列的描述人工合成的引物序列138/9H〈220〉<221>primer—bind<222〉(1)..加<400>10acaggaaaaggtctggagtgg〈210〉11<211〉21<212>DNA<213〉人工序列〈220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列AILIMHC1<220〉〈221>primer—bind〈222〉(1).加〈400〉11acagtaatacacggccgtgtc<210>12<211>21〈212〉腿〈213〉人工序列<220>111<223>人工序列的描述人工合成的引物序列HCcl<220><221>primer_bind<222>(1)..加〈■>12gactacttccccgaaccggtg21<210〉13〈211〉22<212>DNA<213〉人工序列〈220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列HCc7〈220〉<221>primer—bind<222>(1).(幼<400〉13gtggcaggaccgtcagtcttcc22<210>14<211〉24〈212>DNA<213〉人工序列〈220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列HCc8<220〉〈221〉primer—bind<222>(1).(54)〈400〉14aagaggaagactgacggtcctgcc24<210〉15〈211>23<212>腿<213>人工序列〈220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的引物序列HCc3<220>〈221〉primer—bind<222>(1)..(53)〈400〉15ccgttgtgcaccaggactggctg23<210>16〈211>23〈212〉DNA〈213>人工序列〈220><223>人工序列的描述人工合成的引物序列HCc4112<220>〈221〉<222〉primer—bind(l)..咖<400>16tgcacttgtactccttgccgttc<210>17<211>23<212〉DNA<213〉人工序列〈220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列HCc6<220>〈221〉primer—bind<222〉(1)..(2—3)<400>17cagccggagaacaactacaagac23<210〉18<211〉22<212>DNA<213〉人工序列<220><223〉人工序列的描述人工合成的引物序列HIGHC<220〉<221〉primer—bind〈222〉(1)..(幼〈210〉19<211>22〈212〉DNA<213>人工序列〈220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的引物序列HCc9<220〉〈221>primer—bind〈222〉(1)..(幼〈400〉19tacttcccaggcacccagcatg22〈210〉20〈211〉23<212>DNA〈213〉人工序列〈220><223>人工序列的描述人工合成的引物序列HCc5<400〉18tcttgtagttgttctccggc<220>〈221〉primer—bind〈222〉(1)..(53)<400〉20atgctgggtgcctgggaagtatg23<210〉21<211>21<212>DNA〈213>人工序列〈220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列polyA〈220>〈221〉primer—bind〈222〉(1).加〈400〉21tcaaactatcggccttgctgg21〈210〉22<211>21<212>腿<213>人工序列<220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的引物序列AILIMLC1<220>〈221>primer—bind〈222〉(1)..加<400>22tagcctggtatcagcagaaac21〈210〉23〈211〉21〈212〉DNA〈213>人工序列〈220〉〈223>人工序列的描述人工合成的引物序列AILIMLC2<220〉〈221〉primer—bind<222>(1)..加<400〉23gtttctgctgataccaggcta21<210〉24〈211〉22<212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列LCcl〈220〉〈221〉primer—bind〈222〉(1)..(52)〈400〉24gcaccatctgtcttcatcttcc22〈210〉25〈211〉21〈212〉DNA<213〉人丁序列<220〉<223>人工序列的描述人工合成的引物序列LCc2<220>〈221〉primer—bind<222>(1).加〈400〉25caaagagcttcaacaggggag21〈210〉26〈211〉20〈212〉DNA<213〉人工序列〈220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的引物序列HIK<220〉<221〉primer—bind〈222〉(1)..(50)<400>26aggctggaactgaggagcag20〈210〉27<211>1616〈212〉DNA<213>人(Homosapiens)〈220〉<221>5'UTR<222〉(1)..(68)〈220〉〈221〉CDS〈222〉(69)..(1481)<220〉〈221〉3'UTR<222>(1482)..(1616)<220〉<221〉sig—peptide<222〉(69丁..(125)<400>27gaattcgcagtgccatgacaccacgcatctgtcctctagagaatcccctgagagctccgt60tcctcaccatggactggacctggaggateetcttcttggtggcagcagcc110MetAspTrpThrTrpArglieLeuPheLeuValAlaAlaAla115<formula>formulaseeoriginaldocumentpage116</formula>aaggacaccetcatgateteceggacccctgaggtcacgtgcgtggtg926LysAspThrLeuMetlieSerArgThrProGluValThrCysValVal275280285gtggacgtgagecacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtg974ValAspValSerHisGluAspProGluValGinPheAsnTrpTyrVal290295300gacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccaegggaggagcag1022AspGlyValGluValHisAsnAlaLysThrLysProArgGluGluGin305310315ttcaacageacgttccgtgtggtcagegtcetcaccgttgtgcaccag1070PheAsnSerThrPheArgValValSerValLeuThrValValHisGin320325330gactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctecaacaaaggc1118AspTrpLeuAsnGlyLysGluTyrLysCysLysValSerAsnLysMy335340345350etcccagcccccategagaaaaccatetecaaaaceaaagggcagccc1166LeuProAlaProlieGluLysThrlieSerLysThrLysGlyGinPro355360365cgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatecegggaggagatgacc1214ArgG]uProGinValTyrThrLeuProProSerArgGluGluMetThr370375380aagaaccaggtcagectgacctgcctggtcaaaggcttctaccccage1262LysAsnGinValSerLeuThrCysLeuValLysGlyPheTyrProSer385390395gacategccgtggagtgggagageaatgggcagccggagaacaactac1310AsplieAlaValGluTrpGluSerAsnGlyGinPro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105110ValThrHisGluTyrTyrTyrGlyThrThrVal140ThrValSerSerPheProLeuAlaProCysSerArg155160LeuGlyCysl>euValLysAspTyr170175TrpAsnSerGlyAlaLeuThrSer185190LeuGinSerSerGly205LeuTyrSerSerSerAsnPhe220GlyThrGinThrProSerAsnThrLysValAspLys235240GluCysProProCysProAlaPro250255LeuPheProProLysProLysAsp265270GluValThrCysVal285ValValAspGinPheAsnTrp300TyrValAspGlyLysProArgGluGluGinPheAsn315320LeuThrValValHisGinAspTrp330335LysVslSerAsnLysGlyLeuPro345350LysThrLysGlyGin365ProArgGluSerArgGluGlu380MetThrLysAsnLysGlyPheTyrProSerAsplie395400GinProGluAsnAsnTyrLysThr410415GlySerPhePheLeuTyrSerLys425430GinGinGlyAsnVal445PheSerCysAsnHisTyrThrGinLysSerLeu460<210〉37<211〉970<212>DNA<213>人(Homosapiens)<220〉<221>5'UTR<222>(1),,(32)<220〉〈221>CDS〈222〉(33).(743)<220>〈221〉3，UTR〈222〉(744).(970)<220><221〉sigj印tide<222>(33丁..(92)〈400〉37gaattcgcagtgccatgacaccacggggaaccatggaaaccccagcgcagctt53MetGluThrProAlaGinLeu15etcttcetcctgetaetctggetcccagataccaccggagaaattgtg101LeuPheLeuLeuLeuLeuT卬LeuProAspThrThrGlyGlulie寸al101520ttgacgcagtctccaggcaccctgtctttgtctccaggggaa￡igagcc149LeuThrGinSerProGlyThrLeuSerLeuSerProGlyGluArgAla253035accetctectgcagggccagtcagagtattageageagetecttagcc197ThrLeuSerCysArgAlaSerGinSerlieSerSerSerSerLeuAla40455055tggtaccagcagaaacctggccaggetcccgggetcetcatetttggt245TrpTyrGinGinLysProGlyGin人laProGlyLeuLeuliePheGly606570gcatecageagggccactggcateccagacaggttcagtggcagtggg293AlaSerSerArgAlaThrGlylieProAspArgPheSerGlySerGly758085tctgggacagacttcactetcaccateageagactggagcctgaagat341SerGlyThrAspPheThrLeuThrlieSerArgLeuGluProGluAsp9095100tttgcagtgtattactgtcagcagtttggtageteacctatgtgcagt389PheAlaValTyrTyrCysGinGinPheGlySerSerProMetCysSer105110115'tttggccaggggaccaagctggagateaaacgaactgtggetgcacca437PheGlyGinG]yThrLysLeuGlulieLysArgThrValAlaAlaPro120125130135tctgtcttcatettcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaact485SerValPheliePheProProSerAspGluGinLeuLysSerGlyThr140145150gcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaa533AlaSerValValCysLeuLeuAsnAsnPheTyrProArgGluAlaLys155160165gtacagtggaaggtggataacgccetccaategggtaacteccaggag581ValGinTrpLysValAspAsnAlaLeuGinSerGlyAsnSerGinGlu170175180agtgtcacagagcaggacageaaggacageacctacageetcageage629SerValThrGluGinAspSerLysAspSerThrTyrSerLeuSerSer185190195accctgacgctgage犯agcagactacgagaaacacaaagt:ctacgcc677ThrLeuThrLeuSerLysAlaAspTyrGluLysHisLysValTyrAla200205210215tgcgaagtcacccatcagggcctgagetegcccgtcacaaagagettc725CysGluValThrHisGinGlyLeuSerSerProValThrLysSerPhe220225230aacaggggagagtgttagagggagaagtgcccccacctgctcctcagt773AsnArgGlyGluCys235tccagcctgaccccctxccatcctttggcctctgacccttetattgeggtcctccagctcatctttcacctcacccccctatgctaatgttggaggagaatgaataaataaagtgaatctaaaatxtctgcggccgctttccacaggggacctaccc833cctcctccttggctttaatt893ttgca^a^a^aB3a^朋a^953970〈210〉38<211〉236〈212〉PRT<213〉人(Homosapiens)〈400〉38MetGluThrProAlaGinLeuLeuiAspThrThrGlyGlulieValLeu20LeuSerProGlyGluArgAlaThr3540lieSerSerSerSerLeuAlaTrp5055ProGlyLeuLeuliePheGlyAla6570AspArgPheSerGlySerGlySer85SerArgLeuGluProGluAspPhe100GlySerSerProMetCysSerPhe115120LysArgThrValAlaAlaProSer130135GluGinLeuLysSerGlyThrAla145150PheTyrProArgGluAlaLysVal165GinSerGlyAsnSerGinGluSer180SerThrTyrSerLeuSerSerThr195200GluLysHis匕ysValTyrAlaCys210215SerProValThrLysSerPheAsn225230PheLeuLeuLeuLeuTrpLeuPro1015ThrGinSerProGlyThrLeuSer2530LeuSerCysArgAlaSerGinSer45TyrGinGinLysProGlyGinAla60SerSerArgAlaThrGlyliePro7580GlyThrAspPheThrLeuThrlie9095AlaValTyrTyrCysGinGinPhe105110GlyGinGlyThrLysLeuGlulie125ValPheliePheProProSerAsp140SerValValCysLeuLeuAsnAsn155160GinTrpLysValAspAsnAlaLeu170175ValThrGluGinAspSerLysAsp185190LeuThrLeuSerLysAlaAspTyr205GluValThrHisGinGlyLeuSer220ArgGlyGluCys235〈210>39<211>35〈212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉<223〉人工序列的描述人工合成的引物序列131<220><221>primer_bind<222>(1).(55)<400〉39gaggtctccgccctcgagatgcggctgggcagtcc35〈210〉40〈211〉33<212>DNA〈213〉人工序歹ij〈220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的引物序列〈220〉<221〉primer—bind<222〉(1)..加<400〉40cacaggacagccaggggatcccacgtggccgcg3權(quán)利要求1.鑒定與AILIM或AILIM配體結(jié)合的物質(zhì)的方法，包括下列步驟(a)制備不溶性載體，AILIM的整個(gè)胞外區(qū)或其一部分固定于該載體上；(b)制備包含AILIM配體的整個(gè)胞外區(qū)或其一部分的多肽，用能發(fā)出可檢測(cè)信號(hào)的標(biāo)記物質(zhì)對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記；(c)將步驟(a)中不溶性載體與步驟(b)中的多肽反應(yīng)；(d)將步驟(a)中不溶性載體，步驟(b)中多肽以及所述物質(zhì)以任意次序相互反應(yīng)；(e)分別檢測(cè)步驟(c)產(chǎn)生的復(fù)合物中所述標(biāo)記物質(zhì)發(fā)出的信號(hào)，以及步驟(d)產(chǎn)生的復(fù)合物中所述標(biāo)記物質(zhì)發(fā)出的信號(hào)；然后(f)對(duì)比步驟(e)中檢測(cè)到的各個(gè)信號(hào)的大小。2.鑒定與AILIM或AILIM配體結(jié)合的物質(zhì)的方法，包括下列步驟(a)制備不溶性載體，AILIM配體的整個(gè)胞外區(qū)或其一部分固定于該載體上；(b)制備包含AILIM的整個(gè)胞外區(qū)或其一部分的多肽，用能發(fā)出可4企測(cè)信號(hào)的標(biāo)記物質(zhì)對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記。(c)將步驟(a)中不溶性載體與步驟(b)中的多肽反應(yīng)；(d)將步驟(a)中不溶性載體，步驟(b)中多肽以及所述物質(zhì)以任意次序相互反應(yīng)；(e)分別檢測(cè)步驟(c)產(chǎn)生的復(fù)合物中所述標(biāo)記物質(zhì)發(fā)出的信號(hào)，以及步驟(d)產(chǎn)生的復(fù)合物中所述標(biāo)記物質(zhì)發(fā)出的信號(hào)；然后(f)對(duì)比步驟(e)中檢測(cè)到的各個(gè)信號(hào)的大小。3.權(quán)利要求1或2的方法，其中包含AILIM的整個(gè)胞外區(qū)或其一部分的所述多肽是包含AILIM的整個(gè)胞外區(qū)或其一部分，以及免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)的全部或其一部分的多肽的融合多肽。4.4又利要求1或2的方法，其中包含AILIM配體的整個(gè)月包外區(qū)或其一部分的所述多肽是包含AILIM配體的整個(gè)胞外區(qū)或其一部分，以及免疫3求蛋白重鏈恒定區(qū)的全部或其一部分的多肽的融合多肽。5.權(quán)利要求1到4任一項(xiàng)的方法，其中所述AILIM是人AILIM。6.權(quán)利要求1到5任一項(xiàng)的方法，其中所述AILIM配體是人AILIM配體。全文摘要本發(fā)明涉及抗協(xié)同刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子AILIM的人單克隆抗體、其鑒定方法及其藥物用途，具體涉及用AILIM分子作為抗原對(duì)用遺傳工程技術(shù)得到的產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行免疫，結(jié)果得到能結(jié)合AILIM并且能控制各種與AILIM-介導(dǎo)的協(xié)同刺激信號(hào)(第二信號(hào))轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的生物反應(yīng)(例如細(xì)胞增殖，細(xì)胞因子產(chǎn)生，免疫胞解，細(xì)胞死亡，ADCC的誘導(dǎo)等)的各種人單克隆抗體。此外，本發(fā)明公開(kāi)了所述人單克隆抗體對(duì)于治療和預(yù)防與AILIM-介導(dǎo)的協(xié)同刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的各種疾病是有效的，其能抑制這些疾病的發(fā)生和/或發(fā)展。文檔編號(hào)C07K16/28GK101498731SQ200910126200公開(kāi)日2009年8月5日申請(qǐng)日期2001年5月15日優(yōu)先權(quán)日2000年5月18日發(fā)明者堀伸明,手塚克成,孝辻申請(qǐng)人:日本煙草產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社