專利名稱：：長春氟寧精氨酸酯及其制備方法和在制備靶向治療實體瘤和癌癥的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種具有靶向治療腫瘤和癌癥的藥物——長春氟寧精氨酸酯，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：長春氟寧是法國PierreFabre公司開發(fā)(商品名Javlor)，2004年在歐洲用于治療膀胱癌和非小細胞肺癌進行三期臨床階段；其用于治療乳腺癌和卵巢癌則處于二期臨床試驗。長春氟寧(vinflimine)是繼長春瑞濱之后又一種新型的半合成長春堿類生物堿抗腫瘤藥，它與長春瑞濱的區(qū)別在于在C-19'位上由兩個氟原子取代兩個氫原子，在15'和20'位的碳碳雙鍵被還原成單鍵。國外研究資料表明，動物實驗已經(jīng)顯示出對P338白血病、B16惡性黑素瘤及對人體肺部和胸部腫瘤的抗腫瘤活性，而作為抗癌藥物，長春氟寧也具有抗癌藥物的缺點一副作用大，如骨髓抑制，白細胞減少等。因此開發(fā)具有低副作用的抗癌藥物或?qū)﹂L春氟寧進行結(jié)構(gòu)的修飾具有非常重要的意義。目前，利用氨基酸修飾美法侖、雌莫司汀、卡莫司汀等，在提高上述藥物的靶向性上取得了一些成果，而長春堿類藥物非活性位點的修飾還未見文獻報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的就在于提供一種長春氟寧衍生物一一長春氟寧精本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種長春氟寧精氨酸酯，其具有如下結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>本發(fā)明還提供了上述長春氟寧精氨酸的制備方法，包括如下過(1)將長春氟寧在堿性條件下水解，將C-3位水解為-COOH;(2)將(1)所得的產(chǎn)物和L-精氨酸為原料，在極性溶劑中反應(yīng)合成長春氟寧精氨酸酯。本發(fā)明的制備方法，步驟(1)中的堿性條件可以為醇鈉、氫氧化鈉或氫氧化鉀的水或醇溶液。堿性條件PH值為1013，pH過高容易引起反應(yīng)產(chǎn)率下降，副反應(yīng)增多。本發(fā)明的制備方法，步驟(2)中的溶劑可為氯仿-甲醇、氯仿-乙醇、二甲基亞砜和水。歩驟(2)中的反應(yīng)溫度可以控制為各溶劑的回流溫度。本發(fā)明的制備方法，反應(yīng)中原料長春氟寧和L-精氨酸的摩爾比優(yōu)選為長春氟寧L-精氨酸=1:3-5，使長春氟寧能夠完全參與反應(yīng)，提高長春氟寧的利用率，降低反應(yīng)成本。本發(fā)明還提供了上述長春氟寧精氨酸酯在制備靶向治療實體瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了上述長春氟寧精氨酸酯在制備靶向治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。特別是在制備靶向治療肝癌和肺癌的藥物中的應(yīng)用。在保證長春氟寧藥物藥理活性的前提下，在長春氟寧上接入--些可以提高藥物靶向性的L-氨基酸基團，通過對長春氟寧結(jié)構(gòu)的修飾，增加藥物對癌細胞的指向性和滯留性，并進而可以降低藥物對正常細胞的毒性，減少劑量，提高藥物制劑的生物利用度。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，以助于理解本發(fā)明的內(nèi)容。實施例l、長春氟寧精氨酸的制備(1)取長春氟寧5.0g，加入甲醇150ml溶液中，接著加入醇鈉10g，pH值為10，置水浴上加熱到85"，回流5個小時后，用氯仿萃取3次后合并，旋轉(zhuǎn)蒸干，得固體4.19g。(2)將前面得到的固體加入到體積比為1:1氯仿-甲醇混合液100ml中，置水浴上加熱至溶解。在7(TC回流攪拌的條件下，緩緩加入含5.gL-精氨酸的水溶液15ml，繼續(xù)回流30分鐘至溶液透明澄清。趁熱過濾，濾液回收氯仿、甲醇。取殘余水溶液冷凍干燥，得長春氟寧精氨酸酯，共4.42g。實施例2(1)取長春氟寧3.0g，加入甲醇150ml溶液中，接著加入氫氧化鈉10g，pH值為11，置水浴上加熱到85"，回流3個小時后，用氯仿萃取3次后合并，旋轉(zhuǎn)蒸干，得固體1.98g。(2)將前面得到的固體加入到體積比為1:1氯仿-乙醇混合液100ml中，置水浴上加熱至溶解。在7(TC回流攪拌的條件下，緩緩加入含L-精氨酸2.lg的水溶液，繼續(xù)回流60分鐘。趁熱過濾，濾液回收氯仿、乙醇。取殘余水溶液冷凍干燥，得長春氟寧精氨酸酯，共2.6g。實施例3(1)取長春氟寧6.0g，加入l:1水-甲醇150ml溶液中，接著加入氫氧化鉀13g，pH值為13，置水浴上加熱到95°C，回流5個小時后，用氯仿萃取3次后合并，旋轉(zhuǎn)蒸干，得固體4.96g。(2)將前面得到的固體加入到100ml水中，置油浴上加熱至溶解。在ll(TC回流攪拌的條件下，緩緩加入含3gL-精氨酸的水溶液15ml，繼續(xù)回流30分鐘至溶液透明澄清。有100ml氯仿萃取三次，合并萃取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得長春氟寧精氨酸酯，共3.78g。為驗證長春氟寧精氨酸酯的靶向性，進行了如下實驗。1、熒光標記長春氟寧精氨酸酯的制備及體內(nèi)分布研究精密稱取按上述方法制備的長春氟寧精氨酸酯300mg溶于水溶液10ml中，調(diào)節(jié)pH值到6.9，加入21mgFITC(異硫氰熒光素)，混合均勻后室溫下反應(yīng)24小時，透析。將透析后的樣品冷凍干燥。測定熒光素含量為6.56%(w/w)。取小鼠20只，雄性，重量在25-30g之間，隨機每4只為一組，一共5組，按注射劑量40mg/kg計算，尾靜脈分別注射FITC-長舂氟寧精氨酸酯。分別15min、30min、60min、120min處死小鼠，取心、肝、脾、肺、腎，稱重，并制備成組織勻漿，沉淀蛋白后，用熒光分光光度計測定含量，計算出每只小鼠每種組織中長春氟寧精氨酸酯的量占總注射量的百分數(shù)。結(jié)果如表l:表1長春氟寧精氨酸酯在不同臟器中的分布<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)果證明，長春氟寧精氨酸酯是一種具有良好肝、肺靶向性的藥物。2、各種長春氟寧精氨酸酯前體藥物在小鼠體內(nèi)腫瘤細胞中分布研究取帶腫瘤的小鼠20只，雄性，重量在25-30g之間，隨機每4只為一組，一共5組，按注射劑量28mg/kg計算，尾靜脈分別注射長春氟寧、長春氟寧精氨酸酯。分別在15min、30min、60min、120min處死小鼠，取出腫瘤細胞，搗碎，加入甲醇和10%(wt%)三氯乙酸沉淀蛋白，漩渦振搖5分鐘，離心(14000轉(zhuǎn)/分，15分鐘)，高效液相色譜測定上清液游離藥物濃度，計算出平均每克腫瘤細胞組織中，長春氟寧的含量(Ug)，結(jié)果如表2。表2長春氟寧精氨酸酯前體藥物在小鼠體內(nèi)腫瘤細胞中分布<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>從上面的數(shù)據(jù)可以看出，當長春氟寧與精氨酸形成前體藥物以后，在腫瘤細胞中水解，并且水解后的原藥一長春氟寧的濃度比直接注射長春氟寧后的濃度高，因此可以證明形成的前體藥物具有明顯的靶向作用。權(quán)利要求1、一種長春氟寧精氨酸酯，其具有如下結(jié)構(gòu)式2、一種權(quán)利要求1所述長春氟寧精氨酸酯的制備方法，其特征在于主要包括如下過程(1)將長春氟寧在堿性條件下水解，將O3位水解為-C00H;(2)將(1)所得的產(chǎn)物和L-精氨酸為原料，在極性溶劑中反應(yīng)合成長春氟寧精氨酸酯。3、如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述步驟(1)堿性條件是指pH值為10—13。4、如權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于步驟(2)中的溶劑為氯仿-甲醇、氯仿-乙醇、二甲基亞砜或水。5、如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于合成反應(yīng)的溫度為相應(yīng)溶劑的回流溫度。6、如權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于反應(yīng)中原料長春氟寧和L-精氨酸的摩爾比1:3-5。7、一種權(quán)利要求1所述長春氟寧精氨酸酯在制備靶向治療實體瘤的藥物中的應(yīng)用。8、一種權(quán)利要求1所述長春氟寧精氨酸酯在制備靶向治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。9、如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述的癌癥是指肺癌。10、如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述的癌癥是指肝癌。全文摘要本發(fā)明公開了一種長春氟寧精氨酸酯，以及其制備方法，是將長春氟寧C-3位水解為-COOH并與L-精氨酸反應(yīng)合成長春氟寧精氨酸酯。通過對長春氟寧結(jié)構(gòu)的修飾，增加藥物對癌細胞的指向性和滯留性，因此可以降低藥物對正常細胞的毒性，減少劑量，提高藥物制劑的生物利用度。文檔編號C07D519/00GK101386624SQ20081017523公開日2009年3月18日申請日期2008年11月4日優(yōu)先權(quán)日2008年11月4日發(fā)明者伍曾利,敏劉,劉全勝申請人:劉全勝