專利名稱：：Rage融合蛋白及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及高級糖基化終產(chǎn)物的受體(ReceptorforAdvancedGlycatedEndproducts,RAGE)的調(diào)節(jié)。更具體而言，本發(fā)明描述了包含RAGE多肽的融合蛋白，制備此類融合蛋白的方法，以及此類蛋白用于治療基于RAGE的病癥的用途。
背景技術(shù)：
：蛋白質(zhì)或脂質(zhì)與醛糖糖類一起孵育導致蛋白質(zhì)上氨基的非酶促糖基化和氧化從而形成Amadori加合物。隨著時間的進程，該加合物經(jīng)歷另外的重排、脫水以及與其他蛋白質(zhì)交聯(lián)而形成已知為高級糖基化終產(chǎn)物(AdvancedGlycationEndProducts,AGEs)的復合物。促進AGEs形成的因素包括延遲的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換(例如，在淀粉樣變性中)、具有高賴氨酸含量的大分子的積聚以及高血糖水平(例如，在糖尿病中)(Hori等人，/.270:25752—761，(1995))。AGEs已涉及各種病癥，包括與糖尿病相關(guān)的并發(fā)癥，和正常的衰老。AGEs顯示出與在單核細胞、巨噬細胞、微血管系統(tǒng)的內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞、腎小球膜細胞(mesengialeel1)和神經(jīng)元上的細胞表面受體的特異性和可飽和性結(jié)合。高級糖基化終產(chǎn)物的受體(RAGE)是免疫球蛋白超基因家族分子的成員。RAGE的胞外(N-末端)結(jié)構(gòu)域包含三個免疫球蛋白類型區(qū)域一個V(可變的)類型結(jié)構(gòu)域，隨后為兩個C-型(恒定的)結(jié)構(gòu)域(Neeper等人，/.S/o人C力e邁.，267:14998-15004(1992);Schmidt等人，"rc.96#194(1997))。單個跨膜穿越結(jié)構(gòu)域和短的、高度帶電荷的胞質(zhì)尾部在胞外域之后。通過RAGE的蛋白質(zhì)水解或通過分子生物學方法可以分離N-末端的胞外域以產(chǎn)生包含V和C結(jié)構(gòu)域的可溶性RAGE(sRAGE)。RAGE表達于多種細胞類型中，包括白細胞、神經(jīng)元、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞和血管內(nèi)皮(例如，Hori等人，/.C力e邁.，270:25752-761(1995))。在衰老組織中(Schleicher等人，/.，99(3):457-468(1997)),以及在糖尿病患者的視網(wǎng)膜、脈管系統(tǒng)和腎臟中(Schmidt等人，^"re#ef/.,1:1002-1004(1995))中也發(fā)現(xiàn)RAGE水平增加。除了AGEs之外，其他化合物也可結(jié)合并調(diào)節(jié)RAGE。RAGE結(jié)合多個在功能和結(jié)構(gòu)上不同的配體，包含淀粉樣蛋白P(AP)、血清淀粉樣蛋白A(SAA)、高級糖基化終產(chǎn)物(AGEs)、S100(鈣粒蛋白家族的促炎性成員)、羧甲基賴氨酸(CML)、兩性蛋白(amphoterin)和CDllb/CD18(Bucciarelli等人，丄/尸"c/.，59:1117-128(2002);Chavakis等人，腸ro6es/力尸e".，6:1219-1225(2004);Kokkola等人，Scs"i/././邁邁"/o厶，61:1—9(2005);Schmidt等人，/.(7///.//7^^.，108:949-955(2001);Rocken等人，」瓜/.尸"力o/.162:1213-1220(2003))。已顯示配體例如AGEs、S100/鉤粒蛋白、p-淀粉樣蛋白、CML(N￡-羧曱基賴氨酸)和兩性蛋白與RAGE的結(jié)合可以修飾各種基因的表達。這些相互作用隨后可以啟動信號轉(zhuǎn)導機制，包括p38活化、p21ras、MAP激酶、Erkl-2磷酸化以及炎性信號傳導的轉(zhuǎn)錄介質(zhì)NF-kB的活化(Yeh等人,"/""es,50:1495-1504(2001))。例如，在許多細胞類型中，RAGE與其配體之間的相互作用可以產(chǎn)生氧化應激，它從而導致自由基敏感性轉(zhuǎn)錄因子NF-kB的活化，以及NF-kB調(diào)節(jié)的基因的活化，例如細胞因子IL-lp和TNF-a。此外，RAGE的表達經(jīng)由NF-kB上調(diào)，并且在炎癥或氧化應激位點處顯示出表達增強(Tanaka等人，/.A/'o/.C力e瓜，275:25781-25790(2000))。因此，由配體結(jié)合啟動的正反饋回路可以推動向上的并且通常是有害的盤旋上升。在不同的組織和器官中的RAGE活化可以導致眾多病理生理學的后果。RAGE已涉及各種病狀，包括急性和慢性炎癥(Hofmann等人，Ce//97:889-901(1999)),糖尿病晚期并發(fā)癥的發(fā)展，例如血管通透性增強(Wautier等人，/.C7/幾/謂".，97:238-243(1995))、腎病(Teillet等人，/.敘A^/力ro/.，11:1488-1497(2000))、動務K多更4匕(Vlassara等人，T/e/Y/mysAVed/ca/5Vc/e^rh".船A，28:419-426(1996))和視網(wǎng)膜病(Hammes等人，Z/""o/o^，42:603-607(1999))。RAGE還涉及阿爾茨海默病(Yan等人，^"wre，382:685-691(1996))以及胂瘤侵襲和轉(zhuǎn)移(Taguchi等人，^s/"re，405:354-357(2000))。盡管RAGE有著廣泛表達及其在多種不同的疾病模型中的明顯多效的作用，但RAGE似乎并非是正常發(fā)育所必需的。例如，RAGE敲除的小鼠沒有明顯的異常表型，這提示盡管RAGE在受長期剌激時能夠在疾病病理中起作用，但RAGE的抑制似乎并不有助于任何不希望的急性表型(Liliensiek等人，/."/仏//2reW.，113:1641-50(2004))。生理學配體與RAGE的拮抗性結(jié)合可以下調(diào)由過量濃度的AGEs及其他RAGE配體引起的病理生理學改變。通過減少內(nèi)源性配體與RAGE的結(jié)合，可以減少與RAGE介導的病癥相關(guān)的癥狀?？扇苄訰AGE(sRAGE)能夠有效地拮抗RAGE配體與RAGE的結(jié)合。然而，當在體內(nèi)施用時，sRAGE可以具有可能太短以至于不能對一種或多種病癥治療有用的半壽期。因此，需要開發(fā)拮抗AGEs及其他生理學配體結(jié)合RAGE受體的化合物，其中該化合物具有所希望的藥代動力學特性。發(fā)明概述本發(fā)明的實施方案包括RAGE融合蛋白及此類蛋白的使用方法。本發(fā)明可以以各種方式實施。本發(fā)明的實施方案可以包括包含RAGE多肽的RAGE融合蛋白，所述RAGE多肽與第二種非RAGE多肽連接。在一個實施方案中，RAGE融合蛋白包含RAGE配體結(jié)合位點。RAGE融合蛋白可以進一步包含直接與包含免疫球蛋白CH2結(jié)枸域或部分Ch2結(jié)構(gòu)域的多肽連接的RAGE多肽。本發(fā)明還包括制備RAGE融合蛋白的方法。在一個實施方案中，該方法包括將RAGE多肽與第二種非RAGE多肽連接。在一個實施方案中，RAGE多肽包含RAGE配體結(jié)合位點。該方法可以包括將RAGE多肽直接與包含免疫球蛋白"2結(jié)構(gòu)域或部分(:2結(jié)構(gòu)域的多肽連接。在其他實施方案中，本發(fā)明可以包括治療受試者中RAGE介導的病癥的方法和組合物。該方法可以包括對受試者施用本發(fā)明的RAGE融合蛋白。該組合物可以包含在藥物學上可接受的載體(carrier)中的本發(fā)明的RAGE融合蛋白。存在可能與本發(fā)明的具體實施方案相關(guān)的各種優(yōu)點。在一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白當施用于受試者時可以是代謝穩(wěn)定的。此外，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以顯示與RAGE配體的高親和力結(jié)合。在某些實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白以高nM至低jaM范圍內(nèi)的親和力與RAGE配體結(jié)合。通過以高親和力與生理學RAGE配體結(jié)合，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以用于抑制內(nèi)源性配體與RAGE的結(jié)合，從而提供了改善RAGE介導的疾病的手段。此外，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以以蛋白質(zhì)或核酸的形式提供。在一個示例實施方案中，RAGE融合蛋白可以被全身性地施用并且停留在脈管系統(tǒng)中以有效力地治療部分地由RAGE介導的脈管疾病。在另一示例實施方案中，RAGE融合蛋白可以被局部施，以治療其中RAGE配體有助于疾病病理的疾病。備選地，通過使用合適的載體例如病毒或棵露的DNA可以將編碼RAGE融合蛋白的核酸構(gòu)建體輸送到暫時的局部表達可以局部抑制RAGE配體和受體之間相互作用的位點處。因此，施用在性質(zhì)上可以是暫時的(例如，當施用RAGE融合蛋白時)或較持久的(例如，當作為重組DNA施用RAGE融合蛋白時)。本發(fā)明的另外的特征將在下文中描述。應當理解本發(fā)明在其應用方面不局限于下述權(quán)利要求、說明書和附圖中所述的細節(jié)。本發(fā)明能夠有其他的實施方案并且能夠以各種方式被實踐或施行。附圖簡述本發(fā)明的各種特征、方面和優(yōu)點在參照下列附圖后將變得更為明顯。圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明的備選實施方案的各種RAGE序列和免疫球蛋白序列圖A，SEQIDN0:1，人RAGE的氨基酸序列；和SEQIDNO:2，不含信號序列氨基酸1-22的人RAGE的氨基酸序列；圖B，SEQIDNO:3，不含信號序列氨基酸1-23的人RAGE的氨基酸序列；圖C，SEQIDNO:4，人sRAGE的氨基酸序列；SEQIDNO:5，不含信號序列氨基酸l-22的人sRAGE的氨基酸序列；和SEQIDNO:6，不含信號序列氨基酸1-23的人sRAGE的氨基酸序列；圖D，SEQIDNO:7,包含人RAGE的V-結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列；SEQIDNO:8，包含人RAGE的V-結(jié)構(gòu)域的備選氨基酸序列；SEQIDNO:9，人RAGE的V-結(jié)構(gòu)域的N-末端片段；SEQIDNO:10，人RAGE的V-結(jié)構(gòu)域的備選N-末端片段；SEQIDNO:11，人RAGE氨基酸124-221的氨基酸序列；SEQIDNO:12，人RAGE氨基酸227-317的氨基酸序列；SEQIDNO:13，人RAGE氨基酸23-123的氨基酸序列；圖E,SEQIDNO:14，人RAGE氨基酸24-123的氨基酸序列；SEQIDNO:15，人RAGE氨基酸23-136的氨基酸序列；SEQIDNO:16，人RAGE氨基酸24-136的氨基酸序列；SEQIDNO:17，人RAGE氨基酸23-226的氨基酸序列；SEQIDNO:18,人RAGE氨基酸24-226的氨基酸序列；圖F，SEQIDNO:19，人RAGE氨基酸23-251的氨基酸序列；SEQIDNO:20;人RAGE氨基酸24-251的氨基酸序列；SEQIDNO:21，RAGE域間連接體；SEQIDNO:22,第二個RAGE域間連接體；SEQIDNO:23，第三個RAGE域間連接體；SEQIDNO:24，第四個RAGE域間連接體；圖G，SEQIDNO:25，編碼人RAGE氨基酸1-118的DNA;SEQIDNO:26，編碼人RAGE氨基酸l-123的DM;和SEQIDNO:27，編碼人RAGE氨基酸1-136的DNA;圖H,SEQIDNO:28,編碼人RAGE氨基酸1-230的DNA;和SEQIDNO:29，編碼人RAGE氨基酸1-251的DNA;圖I，SEQIDNO:38，人IgGCH2和CH3結(jié)構(gòu)域的部分氨基酸序列；SEQIDNO:39，編碼人IgG的人CH2和CH3結(jié)構(gòu)域的部分的DNA;SEQIDNO:40，人lgGCH2和CH3結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列；圖J，SEQIDNO:41,編碼人IgG的人Ch2和CH3結(jié)構(gòu)域的DNA;SEQIDNO:42，人IgGCH2結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列；SEQIDNO:43,人IgGCH3結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列；和SEQIDNO:44,第5個RAGE域間連接體。圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的第一種RAGE融合蛋白(TTP-4000)編碼區(qū)的DNA序列(SEQIDNO:30)。以粗體突出的編碼序列1-753編碼RAGEN-末端的蛋白質(zhì)序列，而序列754-1386編碼人IgG(yl)的蛋白質(zhì)序列。圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的第二種RAGE融合蛋白(TTP-3000)編碼區(qū)的DNA序列(SEQIDNO:31)。以粗體突出的編碼序列1-408編碼RAGEN-末端的蛋白質(zhì)序列，而序列409-l(Ml編碼人IgG(y1)的蛋白質(zhì)序列。圖4顯示了根據(jù)本發(fā)明的備選實施方案的氨基酸序列SEQIDNO:32、SEQIDNO:33和SEQIDNO:34，每一個均編碼四結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白。RAGE序列以粗字體突出。圖5顯示了根據(jù)本發(fā)明的備選實施方案的氨基酸序列SEQIDNO:35、SEQIDNO:36和SEQIDNO:37，每一個均編碼三結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白。RAGE序列以粗字體突出。圖6，圖A顯示人RAGE和人IgY-lFc蛋白的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域比較，以及用于制備根據(jù)本發(fā)明的備選實施方案的TTP-3000(在位置136處)和TTP-4000(在位置251處)的裂解位點；和圖B顯示根據(jù)本發(fā)明的備選實施方案的TTP-3000和TTP-4000的結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)。圖7顯示了根椐本發(fā)明的一個實施方案，sRAGE以及第一種RAGE融合蛋白TTP-4000(TT4)和第二種RAGE融合蛋白TTP-3000(TT3)與RAGE配體即淀粉樣蛋白-p(A-P)、S100b(S100)和兩性蛋白(Ampho)的體外結(jié)合測定。圖8顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，與僅包含免疫檢測試劑("僅復合物")的陰性對照相比，第一種RAGE融合蛋白TTP-4000(TT4)("蛋白質(zhì)，，)與淀粉樣蛋白-P的體外結(jié)合測定結(jié)果，以及RAGE拮抗劑("RAGE配體")對此類結(jié)合的拮抗作用。圖9顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，與僅包含免疫檢測試劑("僅復合物，，)的陰性對照相比，第二種RAGE融合蛋白TTP-3000(TT3)("蛋白質(zhì)")與淀粉樣蛋白-P的體外結(jié)合測定結(jié)果，以及RAGE拮抗劑("RAGE配體")對此類結(jié)合的拮抗作用。圖10顯示了基于細胞的測定結(jié)果，所述測定測量根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的RAGE融合蛋白TTP-3000(TT3)和TTP-4000(TT4)以及sRAGE對S100b-RAGE誘導的TNF-ot產(chǎn)生的抑制。圖11顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的RAGE融合蛋白TTP-4000的藥代動力學特性曲線圖，其中每條曲線代表在相同實驗條件下的一種不同的動物。圖12顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，作為炎癥應答的量度，由于受RAGE融合蛋白TTP-4000刺激和人IgG刺激而從THP-1細胞中釋放的TNF-ot的相對水平。圖13顯示了根據(jù)本發(fā)明的備選實施方案使用RAGE融合蛋白TTP-4000減少了糖尿病動物中的再狹窄，其中圖A顯示與陰性對照(IgG)相比TTP—OOORAGE融合蛋白減小了內(nèi)膜/中膜比(intima/mediaratio)，和圖B顯示TTP-4000RAGE融合蛋白以劑量-響應方式減少了血管平滑肌細胞增殖。圖14顯示了根據(jù)本發(fā)明的備選實施方案使用RAGE融合蛋白TTP-4000減少了阿爾茨海默病(AD)動物中的淀粉樣蛋白形成和認知障礙，其中圖A顯示TTP-4000RAGE融合蛋白減少了大腦中的淀粉樣蛋白的負荷，和圖B顯示TTP-4000RAGE融合蛋白改善了認知功能。圖15顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，TTP-4000與各種被固定的已知RAGE配體的飽和-結(jié)合曲線。圖16顯示了根據(jù)本發(fā)明的備選實施方案的各種RAGE序列和免疫球蛋白序列圖A，SEQIDN0:45，不含信號序列氨基酸1-23的人sRAGE的氨基酸序列，其中N-末端處的谷氨酰胺殘基已環(huán)化從而形成焦谷氨酸，SEQIDNO:46，包含人sRAGE的V結(jié)構(gòu)域的備選氨基酸序列，其中N-末端處的谷氨酰胺殘基已環(huán)化從而形成焦谷氨酸，SEQIDNO:47，人RAGE的V結(jié)構(gòu)域的備選N-末端片段，其中N-末端處的谷氨酰胺殘基已環(huán)化從而形成焦谷氨酸，SEQIDNO:48，人RAGE的氨基酸24-123的氨基酸序列，其中N-末端處的谷氨酰胺殘基已環(huán)化從而形成焦谷氨酸；圖B，SEQIDNO:49，人RAGE的氨基酸24-136的氨基酸序列，其中N-末端處的谷氨酰胺殘基已環(huán)化從而形成焦谷氨酸，SEQIDNO:50，人RAGE的氨基酸24-226的氨基酸序列，其中N-末端處的谷氨酰胺殘基已環(huán)化從而形成焦谷氨酸，SEQIDNO:51，人RAGE的氨基酸24—251的氨基酸序列，其中N-末端處的谷氨酰胺殘基已環(huán)化從而形成焦谷氨酸；圖C，SEQIDNO:52，編碼SEQIDNO:38中的人IgG的人CH2和CH3結(jié)構(gòu)域之一部分的備選DNA序列，SEQIDNO:53，編碼SEQIDNO:40中的人IgG的人CH2和CH3結(jié)構(gòu)域的備選DNA序列。圖17顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的第一種RAGE融合蛋白(TTP-4000)編碼區(qū)的備選DM序列(SEQIDNO:54)。以粗體突出的編碼序列1-753編碼RAGEN-末端的蛋白質(zhì)序列，和序列754-1386編碼人IgG(yU的蛋白質(zhì)序列。圖18顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的第二種RAGE融合蛋白(TTP-3000)編碼區(qū)的備選DNA序列(SEQIDNO:55)。以粗體突出的編碼序列1-408編碼RAGEN-末端的蛋白質(zhì)序列，和序列409-1041編碼人IgG(Yl)的蛋白質(zhì)序列。圖19顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個備選實施方案，編碼四結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白的氨基酸序列SEQIDNO:56。RAGE序列以粗字體突出。圖20顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個備選實施方案，編碼三結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白的氨基酸序列SEQIDN0:57。RAGE序列以粗字體突出。圖21顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個備選實施方案，RAGE融合蛋白TTP-4000用于減少同種異體胰島細胞移植物的排斥的用途，其中空心的(未填充的)圓圏標明未處理的對照動物；具有斜紋影線的圓圏標明用TTP-4000以第一種劑量處理的動物；具有波狀影線的圓圏標明用TTP-4000以第二種劑量處理的動物；菱形填充的圓圏標明用對照PBS處理的動物；和實心圓圏標明用對照IgG處理的動物。圖22顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個備選實施方案，RAGE融合蛋白TTP-4000用于減少同種同基因胰島細胞移植物的排斥的用途，其中空心的(未填充的)圓圈標明未處理的對照動物；和實心圓圏標明用TTP-4000處理的動物。發(fā)明詳述為了本說明書的目的，除非另有說明，本說明書中所使用的表示成分的量、反應條件等等的所有數(shù)字被理解為在所有情況下被術(shù)語"大約"修飾。因此，除非有相反的說明，下述說明書中所列出的數(shù)字參數(shù)為近似值，它可以依據(jù)本發(fā)明所尋求獲得的所需特性而改變。最低限度，并且不企圖限制對于權(quán)利要求范圍應用等同原則，每個數(shù)字參數(shù)應當至少根據(jù)所報告的有效數(shù)字的數(shù)目并且通過應用普通的舍入法進行解釋。雖然闡述出本發(fā)明的寬范圍的數(shù)字范圍和參數(shù)為近似值，但在具體實例中列出的數(shù)值盡可能精確地給出。然而，任何數(shù)值固有地包含由標準差必然引起的某些誤差，所述標準差發(fā)現(xiàn)于它們各自的測試測量之中。此外，應理解本文所公開的所有范圍涵蓋其中所包含的任何及所有亞范圍。例如，指定的范圍"1-10"應視為包含最小值l和最大值IO之間(并包含1和10)的任何及所有亞范圍；即，以1或更大的最小值開始的所有亞范圍，例如l-6.1，和以10或更小的最大值結(jié)束的所有亞范圍，例如5.5-10。另外，任何提及"合并入本文，，之處應理解為以其整體合并。進一步指出的是，如本說明書中所使用的，除非清楚明確地限定為一個事物，否則單數(shù)形式的"a"、"an"和"the"包括復數(shù)。除非上下文另有明確說明，否則術(shù)語"或"與術(shù)語"和/或"可互換使用。另外，術(shù)語"部分"和"片段"可互換地用于指多肽、核酸或其他分子構(gòu)建體的部分。"多肽"和"蛋白質(zhì)"在本文中可互換地用于描述可以包含部分或全長蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)分子。如本領(lǐng)域已知的，"蛋白質(zhì)"、"肽"、"多肽"和"寡肽"是其ot碳通過肽鍵進行連接的氨基酸(通常為L-氨基酸)的鏈，所述肽鍵通過一個氨基酸的ot碳的羧基和另一個氨基酸的ot碳的氨基之間的縮合反應而形成。通常，構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸按順序進行編號，從氨基末端殘基開始，并以朝向蛋白質(zhì)的羧基末端殘基的方向增加。如本文所使用的，術(shù)語"上游"在分子為蛋白質(zhì)時指位于第二個殘基N-末端的殘基，或者在分子為核酸時指位于第二個殘基5，端的殘基。同樣如本文所使用的，術(shù)語"下游"在分子為蛋白質(zhì)時指位于第二個殘基C-末端的殘基，或者在分子為核酸時指位于第二個殘基3'端的殘基。除非另外定義，本文所使用的所有技術(shù)和科學術(shù)語具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。關(guān)于本領(lǐng)域的定義和術(shù)語，從業(yè)者特另'J可參見CurrentProtocolsinMolecularBiology(參見例如，Ausubel,F.M.等人，幼oi^7/M/ec〃/arWo7c^7，第4版，第2章，JohnWiley&Sons,N.Y.)。氨基酸殘基的縮寫是本領(lǐng)域用于指20種常見L-氨基酸之一的標準的3字母和/或1字母代碼。"核酸"是多核苷酸例如脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)。該術(shù)語用于包括單鏈核酸、雙鏈核酸以及由核苷酸或核苷類似物制備的RNA和DNA。術(shù)語"栽體(vector)，，指可以用于將第二種核酸分子運送到細胞內(nèi)的核酸分子。在一個實施方案中，載體允許插入到該栽體中的DNA序列復制。載體可以包含啟動子以增強核酸分子在至少某些宿主細胞中的表達。載體可以自主復制(染色體外的)或者可以整合到宿主細胞染色體中。在一個實施方案中，載體可以包括能夠產(chǎn)生蛋白質(zhì)的表達載體，所述蛋白質(zhì)來源于插入到載體中的至少部分核酸序列。如本領(lǐng)域已知的，核酸序列彼此雜交的條件可以被描述為從低到高嚴緊性的范圍。一般地，高嚴緊性雜交條件指在低鹽緩沖液中在高溫下洗涂雜交物。雜交可以濾選出結(jié)合的DNA，利用本領(lǐng)域的標準雜交溶液例如0.5MNaHP04、7%十二烷基硫酸鈉(SDS)，在65C并且在0.25MNaHP04、3.5%SDS中洗滌，隨后取決于探針的長度在室溫至68C在0.1xSSC/0.1%SDS中洗滌(Ausubel等人)。例如，高嚴緊性洗滌包括在6xSSC/0.05%焦磷酸鈉中洗滌，對于14個堿基的寡核苷酸探針在37C或?qū)τ?7個堿基的寡核苷酸探針在48X:,或?qū)τ?0個堿基的寡核苷酸探針在55X:，或?qū)τ?5個堿基的寡核苷酸探針在60"C，或?qū)τ陂L度約250個核苷酸的核苷酸探針在65X:。核酸探針可以用含末端標記的放射性核苷酸例如[Y-"P]ATP，或通過隨機引物標記而摻入的放射標記核苷酸例如[oc-"P]dCTP進行標記。備選地，可以通過摻入生物素化的或熒光素標記的核苷酸來標記探針，并且利用鏈霉抗生物素蛋白或抗熒光素抗體來檢測探針。如本文所使用的，"有機小分子"是分子量小于2，000道爾頓的分子，它包含至少l個碳原子。術(shù)語"融合蛋白"指具有來源于兩種或更多種蛋白質(zhì)的氨基酸序列的蛋白質(zhì)或多肽。融合蛋白還可包含在來源于分開的蛋白質(zhì)的氨基酸部分之間的氨基酸連接區(qū)。如本文所使用的，"非RAGE多肽"是不來源于RAGE或其片段的任何多肽。此類非RAGE多肽包括免疫球蛋白肽、二聚化性多肽、穩(wěn)定化性多肽、兩親性肽或包含為靶向或純化蛋白質(zhì)提供"標簽"的氨基酸序列的多肽。如本文所使用的，"免疫球蛋白肽"可以包含免疫球蛋白重鏈或其部分。在一個實施方案中，重鏈的部分可以是Fc片段或其部分。如本文所使用的，F(xiàn)c片段包含以單體或二聚體形式的免疫球蛋白重鏈的重鏈鉸鏈多肽以及CH2和CH3結(jié)構(gòu)域?；蛘?，CH1和Fc片段可以用作免疫球蛋白多肽。重鏈(或其部分)可以來源于任何一個已知的重鏈同種型IgG(y)、IgM(ju)、IgD(5)、IgE(s)或IgA(oc)。此外，重鏈(或其部分)可以來源于任何一個已知的重鏈亞型IgGl(y1)、IgG2(y2)、IgG3(y3)、IgG4(y4)、IgAl(ct1)、IgA2(oc2)，或者這些同種型或亞型的改變生物學活性的突變?？梢员桓淖兊纳飳W活性的實例包括例如通過鉸鏈區(qū)的修飾來降低同種型結(jié)合某些Fc受體的能力。術(shù)語"同一性"或"百分比同一"指兩個氨基酸序列之間或兩個核酸序列之間的序列同一性。百分比同一性可以通過比對兩個序列來確定并且指在被比較的序列所共有的位置處的相同殘基(即氨基酸或核苷酸)的數(shù)目。序列比對和比較可以利用本領(lǐng)域的標準算法(例如，Smith和Wate函n，1981，脅.場/.淑力.2:482;Needleman和Wunsch，1970，/,謝.飾/.48:443;Pearson和Upman,1988，尸，.ScA，MW，85:2444)或通過公眾可獲得的這些算法的計算機化版本(WisconsinGeneticsSoftwarePackageRelease7.0，GeneticsComputerGroup,575ScienceDrive,Madison,WI)如BLAST和FASTA來進行。此夕卜，通過NationalInstitutesofHealth,BethesdaMD可獲得的ENTREZ也可以用于序列比較。在一個實施方案中，兩個序列的百分比同一性可以利用GCG以l的缺口權(quán)重來確定，從而使得每個氨基酸缺口是加權(quán)的，就好像它是兩個序列之間的單個氨基酸錯配。如本文所使用的，術(shù)語"保守殘基"指在具有相同結(jié)構(gòu)和/或功能的多個蛋白質(zhì)中為相同的氨基酸。保守殘基區(qū)對于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)或功能可能是重要的。因此，在三維蛋白質(zhì)中鑒定出的鄰接的保守殘基對于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)或功能可能是重要的。為了找出保守殘基，或3-D結(jié)構(gòu)的保守區(qū)，可以進行來自不同物種或相同物種的不同個體的相同或相似蛋白質(zhì)的序列比較。如本文所使用的，術(shù)語"同系物"是指與野生型氨基酸序列具有一定程度的同源性的多肽。同源性比較可以通過眼睛或更通常地借助于易獲得的序列比較程序來進行。這些商業(yè)上可獲得的計算機程序可以計算出兩個或更多個序列之間的同源性百分數(shù)(例如Wilbur,W.J.和Up,，D.J.，1983，戶雄.5W.腦，80:726-730)。例如，同源序列可以用于包括在備選實施方案中彼此至少70%同一、75%同一、80%同一、85%同一、90%同一、95%同一、97%同一、或98°/。同一、或99%同一的氨基酸序列。如本文所使用的，術(shù)語"與其至少90%同一"包括與所示序列具有90-99.99%同一性的序列，并且包括兩者之間的所有范圍。因此，術(shù)語"與其至少90%同一，，包括與所示序列91、91.5、92、92.5、93、93.5、94、94.5、95、95.5、96、96.5、97、97.5、98、98.5、99、99.5%同一的序列。類似地，術(shù)語"至少70%同一"包括70-99.99%同一的序列，以及兩者之間的所有范圍。同一性百分比的確定使用本文描述的算法來進行。如本文所使用的，多肽或蛋白質(zhì)"結(jié)構(gòu)域，，包括沿著多肽或蛋白質(zhì)的區(qū)域，其包含獨立單元。結(jié)構(gòu)域可以依據(jù)結(jié)構(gòu)、序列和/或生物學活性進行限定。在一個實施方案中，多肽結(jié)構(gòu)域可以包含以基本上不依賴于蛋白質(zhì)其余部分的方式進行折疊的蛋白質(zhì)區(qū)域。利用結(jié)構(gòu)域數(shù)據(jù)庫例如，但不限于PFAM、PR0D0M、PR0SITE、BL0CKS、PRINTS、SBASE、ISRECPR0FILES、SAMRT和PR0CLASS，可以鑒定結(jié)構(gòu)域。如本文所使用的，"免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域"是在結(jié)構(gòu)上與免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域同源或相同的氨基酸序列。免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列的長度可以是任何長度。在一個實施方案中，免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域可以少于250個氨基酸。在一個示例實施方案中，免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的長度可以是約80-150個氨基酸。例如，IgG的可變區(qū)以及&1、Ch2和CH3區(qū)每一個均為免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。在另一實例中，IgM的可變區(qū)以及CJ、Ch2、Ch3和Ch4區(qū)每一個均為免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。如本文所使用的，"RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域"是來自RAGE蛋白的氨基酸序列，其在結(jié)構(gòu)上與免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域同源或相同。例如，RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域可以包括RAGEV-結(jié)構(gòu)域、RAGEIg-樣C2-型1結(jié)構(gòu)域("C1結(jié)構(gòu)域")或RAGEIg-樣C2-型2結(jié)構(gòu)域("C2結(jié)構(gòu)域，，)。如本文所使用的，"域間連接體"包括將兩個結(jié)構(gòu)域連接在一起的多肽。Fc鉸鏈區(qū)是IgG中的域間連接體的實例。如本文所使用的，"直接連接"鑒定了在兩個不同基團(例如核苷酸序列、多肽、多肽結(jié)構(gòu)域)之間的共價鍵，其在被連接的兩個基團之間沒有任何插入性原子。如本文所使用的，"配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域"指負責結(jié)合配體的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域。術(shù)語配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的同系物或其部分。在這方面，只要配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合特異性被保留，基于殘基的極性、電荷、溶解性、疏水性或親水性方面的相似性，就可以在配體結(jié)合位點處進行慎重的氨基酸置換。如本文所使用的，"配體結(jié)合位點"包括蛋白質(zhì)中直接與配體相互作用的殘基，或參與配體定位并非常接近與配體直接相互作用的那些殘基的殘基。配體結(jié)合位點中的殘基的相互作用可以通過殘基與配體在模型或結(jié)構(gòu)中的空間接近來定義。術(shù)語"配體結(jié)合位點"包括配體結(jié)合位點的同系物或其部分。在這方面，只要配體結(jié)合位點的結(jié)合特異性被保留，基于殘基的極性、電荷、溶解性、疏水性或親水性方面的相似性，就可以在配體結(jié)合位點處進行慎重的氨基酸置換。配體結(jié)合位點可以存在于蛋白質(zhì)或多肽的一個或多個配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域中。如本文所使用的，術(shù)語"相互作用"指配體或化合物或其部分或片段與第二種目的分子的一部分之間接近的情況。相互作用可以是非共價的，例如，由于氫鍵、范德華相互作用或靜電或疏水相互作用，或者它可以是共價的。如本文所使用的，"配體"指與配體結(jié)合位點相互作用的分子或化合物或?qū)嶓w，包括底物或其類似物或部分。如本文所描述的，術(shù)語"配體"可以指與目的蛋白結(jié)合的化合物。配體可以是激動劑、拮抗劑或調(diào)節(jié)劑。或者，配體可以不具有生物效應?；蛘?，配體可以阻斷其他配體的結(jié)合從而抑制生物效應。配體可以包括，但不限于，小分子抑制劑。這些小分子可以包括肽、擬肽(peptidomimetics)、有機化合物等。配體還可以包括多肽和/或蛋白質(zhì)。如本文所使用的，"調(diào)節(jié)劑化合物"指轉(zhuǎn)變或改變目的分子的生物學活性的分子。調(diào)節(jié)劑化合物可以增加或減少目的分子的活性，或改變其物理或化學特征、或功能或免疫學特性。對于RAGE，調(diào)節(jié)劑化合物可以增加或減少RAGE或其部分的活性，或改變其特征、或功能或免疫學特性。調(diào)節(jié)劑化合物可以包括天然的和/或化學合成的或人工的肽、修飾過的肽(例如砩酸肽)、抗體、糖類、單糖、寡糖、多糖、糖脂、雜環(huán)化合物、核苷或核苷酸或其部分、和有機或無機小分子。調(diào)節(jié)劑化合物可以是內(nèi)源性生理學化合物，或者它可以是天然的或合成的化合物?；蛘撸{(diào)節(jié)劑化合物可以是有機小分子。術(shù)語"調(diào)節(jié)劑化合物"還包括化學修飾的配體或化合物，并且包括異構(gòu)體和外消旋形式。"激動劑，，包括與受體結(jié)合而形成復合物的化合物，它引起對所涉及的受體特異的藥理學應答。"拮抗劑"包括與激動劑或受體結(jié)合而形成復合物的化合物，它不引起實質(zhì)的藥理學應答并且可以抑制由激動劑誘導的生物學應答。因此RAGE激動劑可以結(jié)合RAGE并刺激RAGE介導的細胞過程，和RAGE拮抗劑可以抑制RAGE介導的過程被RAGE激動劑激發(fā)。例如，在一個實施方案中，由RAGE激動劑激發(fā)的細胞過程包括TNF-cx基因轉(zhuǎn)錄的活化。術(shù)語"肽模擬物(peptidemimetics)，，指在分子間相互作用中充當肽替^物的結(jié)構(gòu)(Morgan等人，1989，J/w.，24:243-252)。肽模擬物可以包括合成的結(jié)構(gòu)，所述合成的結(jié)構(gòu)可以含有或不含氨基酸和/或肽鍵但保留肽或激動劑或拮抗劑的結(jié)構(gòu)和功能特征。肽模擬物還包括類肽(peptoid)、寡類肽(Simon等人.，1972，尸roc.hflf/.^4，89:9367);以及包含有設(shè)計長度的肽的肽文庫，其代表相應于本發(fā)明的肽或激動劑或拮抗劑的所有可能的氨基酸序列。術(shù)語"進行治療"指改善疾病或病癥的癥狀并且可以包括治愈病癥，基本上阻止病癥發(fā)作，或改善受試者的病狀。如本文所使用的，術(shù)語"治療"指對于患者所患有的給定病癥的全方位治療，包括由那種病癥引起的一種癥狀或大多數(shù)癥狀的減輕，特定病癥的治愈，或阻止病癥的發(fā)作。如本文所使用的，術(shù)語"EC50"被定義為導致50%被測量的生物效應的試劑濃度。例如，具有可測量的生物效應的治療劑的EC50可以包括該試劑顯示50%生物效應時的值。如本文所使用的，術(shù)語"IC50"被定義為導致被測量的效應的50%抑制的試劑濃度。例如，RAGE結(jié)合的拮抗劑的IC50可以包括拮抗劑將配體與RAGE的配體結(jié)合位點的結(jié)合減少50%時的值。如本文所使用的，"有效量"是指對于在受試者中產(chǎn)生預期效果有效的試劑量。術(shù)語"治療有效量，，表示將會引起所調(diào)查的動物或人的治療應答的藥物或藥物試劑的量。包括有效量的實際劑量可以取決于給藥途徑、受試者的尺寸和健康狀況、被治療的病癥等。如本文所使用的，術(shù)語"藥物學上可接受的載體"可以指適合于在人類或動物受試者中使用的化合物和組合物，例如，對于為了治療RAGE介導的病癥或疾病而施用的治療組合物。如本文所使用的，術(shù)語"藥物組合物"表示可以以包含常規(guī)的無毒性載體、稀釋劑、佐劑、媒介物(vehicle)等的單位劑量制劑形式，例如口服地、腸胃外地、局部地、通過吸入噴霧、鼻內(nèi)地或直腸地施用于哺乳動物宿主的組合物。如本文所使用的，術(shù)語"腸胃外"包括皮下注射，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腦'池內(nèi)注射或輸注才支術(shù)。如本文所使用的，"排斥"指對于組織的免疫或炎癥應答，其導致細胞、組織或器官的破壞，或?qū)е录毎?、組織或器官的損傷。被排斥的細胞、組織或器官可以來源于正產(chǎn)生排斥應答的相同受試者，或者可以從不同受試者移植到正顯示排斥的受試者內(nèi)。如本文所使用的，術(shù)語"細胞"指哺乳動物生存系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能單元，其各自包含獨立的生存系統(tǒng)。如本領(lǐng)域已知的，細胞包含有細胞核、細胞質(zhì)、胞內(nèi)細胞器、和圍繞該細胞并允許該細胞獨立于其他細胞的細胞壁。如本文所使用的，術(shù)語"組織"指具有類似的結(jié)構(gòu)和功能，或者一起發(fā)揮作用以執(zhí)行特定功能的細胞聚集物。組織可以包括類似細胞和所述細胞周圍的細胞間物質(zhì)的集合。組織包括但不限于，肌肉組織、神經(jīng)組織和骨。如本文所使用的，"器官"指動物中完全分化的結(jié)構(gòu)和功能單元，其經(jīng)特化以用于某些特定的功能。器官可以包含執(zhí)行特定功能或一組功能的一群組織。器官包括但不限于，心臟、肺、腦、眼、胃、脾、胰腺、腎、肝、腸、皮膚、子宮、膀胱和骨。RAGE融合蛋白本發(fā)明的實施方案包括RAGE融合蛋白、制備此類融合蛋白的方法以及此類融合蛋白的使用方法。本發(fā)明可以以各種方式進行實施。例如，本發(fā)明的實施方案提供了包含RAGE多肽的RAGE融合蛋白，所述RAGE多肽與第二種非RAGE多肽連接。在一個實施方案中，RAGE融合蛋白可以包含RAGE配體結(jié)合位點。在一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含RAGE融合蛋白的最N-末端結(jié)構(gòu)域。RAGE配體結(jié)合位點可以包含RAGE的V結(jié)構(gòu)域或其部分。在一個實施方案中，RAGE配體結(jié)合位點包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:IO或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:47或與其至少90%同一的序列。在另一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDNO:1的氨基酸23-53。在另一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDNO:1的氨基酸24-52。在另一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDN0:1的氨基酸31-52。在另一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDNO:1的氨基酸31-116。在另一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDNO:1的氨基酸19-52。在一個實施方案中，RAGE多肽可以與包含免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的部分(例如，其片段)的多肽連接。在一個實施方案中，包含免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的多肽包含人IgG的CH2或CH3結(jié)構(gòu)域中至少一個的至少一部分。RAGE蛋白或多肽可以包含全長的人RAGE蛋白(例如SEQIDNO:1)，或人RAGE的片段。如本文所使用的，RAGE多肽的片段的長度為至少5個氨基酸，可以大于30個氨基酸，但小于全長氨基酸序列。在本發(fā)明的蛋白質(zhì)、方法和組合物的備選實施方案中，RAGE多肽可以包含與人RAGE至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%同一的序列或其片段。例如，在一個實施方案中，RAGE多肽可以包含以甘氨酸而不是曱硫氨酸作為第一個殘基的人RAGE或其片段(參見，例如Neeper等人，(1992))?；蛘?，人RAGE可以包含去除信號序列的全長RAGE(例如，SBQIDNO:2或SEQIDNO:3)(圖1A和1B)或那個氨基酸序列的一部分。本發(fā)明的RAGE融合蛋白還可包含sRAGE(例如SEQIDNO:4)、與sRAGE至少90%同一的多肽或sRAGE的片段。如本文所使用的，sRAGE是不包含跨膜區(qū)或胞質(zhì)尾部的RAGE蛋白(Park等人，^&re，4:1025-1031(1998))。例如，RAGE多肽可以包含以甘氨酸而不是甲硫氨酸作為第一個殘基的人sRAGE或其片段(參見，例如Neeper等人，(1992))?；蛘?，RAGE多肽可以包含去除信號序列的人sRAGE(參見例如，圖IC中的SEQIDNO:5或SEQIDNO:6，或者圖16A中的SEQIDNO:45)或那個氨基酸序列的一部分。在其他實施方案中，RAGE蛋白可以包含RAGEV結(jié)構(gòu)域(參見例如，圖ID中的SEQIDNO:7或SEQIDNO:8(Neeper等人，(1992);Schmidt等人,(1997))，或者圖16A中的SEQIDNO:46)。或者，可以使用與RAGEV結(jié)構(gòu)域至少90%同一的序列或其片段?；蛘?，RAGE蛋白可以包含RAGEV結(jié)構(gòu)域的片段(例如，圖ID中的SEQIDN0:9或SEQIDNO:10,或者圖16A中的SEQIDNO:47)。在一個實施方案中，RAGE蛋白可以包含配體結(jié)合位點。在一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:10或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:47或與其至少90%同一的序列。在另一實施方案中，RAGE片段是合成肽。因此，用于本發(fā)明RAGE融合蛋白的RAGE多肽可以包含全長RAGE的片段。如本領(lǐng)域已知的，RAGE包含三個免疫球蛋白樣多肽結(jié)構(gòu)域，即V結(jié)構(gòu)域以及CI和C2結(jié)構(gòu)域，每個結(jié)構(gòu)域通過域間連接體相互連接。全長RAGE還包含位于C2結(jié)構(gòu)域下游(C-末端)并與C2結(jié)構(gòu)域連接的跨膜多肽和胞質(zhì)尾部。在一個實施方案中，RAGE多肽不包含任何信號序列殘基。RAGE的信號序列可以包含全長RAGE的殘基1-22或殘基1-23。此外，如本領(lǐng)域已知的，在其中融合蛋白的N-末端是谷氨酰胺的實施方案中，(例如，信號序列包含殘基1-23)，N-末端谷氨酰胺(Q24)可以環(huán)化從而形成焦谷氨酸(pE)。此類分子的構(gòu)建體實例顯示為SEQIDNO:45、46、47、48、49、50和51，以及RAGE融合蛋白顯示為56和57。如本領(lǐng)域認識到的，當在某些重組系統(tǒng)中表達時，本發(fā)明的RAGE融合蛋白的CH3區(qū)可以通過翻譯后修飾來切除其C-末端氨基酸。(參見例如，Li等人，BioProcessingJ.，2005;4，23-30)。在一個實施方案中，切除的C-末端氨基酸是賴氨酸(K)。因此，在各種實施方案中，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-116(SEQIDNO:7)或與其至少90%同一的序列，或者人RA(JE的氨基酸24-116(SEQIDNO:8)或與其至少90%同一的序列，或者其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-116(SEQIDNO:46)或與其至少90%同一的序列，相應于RAGE的V結(jié)構(gòu)域。或者，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸124-221(SEQIDNO:11)或與其至少90%同一的序列，相應于RAGE的Cl結(jié)構(gòu)域。在另一實施方案中，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸227-317(SEQIDNO:12)或與其至少90%同一的序列，相應于RAGE的C2結(jié)構(gòu)域?；蛘撸琑AGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-123(SEQIDNO:13)或與其至少90%同一的序列，或人RAGE的氨基酸24-123(SEQIDNO:14)或與其至少90%同一的序列，相應于RAGE的V結(jié)構(gòu)域以及下游的域間連接體?；蛘撸琑AGE多肽可以包含其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-123(SEQIDNO:48)或與其至少90%同一的序列?；蛘撸琑AGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-226(SEQIDNO:17)或與其至少90%同一的序列，或人RAGE的氨基酸24-226(SEQIDNO:18)或與其至少90%同一的序列，相應于V結(jié)構(gòu)域、Cl結(jié)構(gòu)域以及連接這兩個結(jié)構(gòu)域的域間連接體?；蛘?，RAGE多肽可以包含其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-226(SEQIDNO:50)或與其90%同一的序列?；蛘?，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-339(SEQIDNO:5)或與其至少90%同一的序列，或人RAGE的氨基酸24-339(SEQIDN0:6)或與其至少90%同一的序列，相應于sRAGE(即，編碼V、Cl和C2結(jié)構(gòu)域以及域間連接體)?；蛘?，RAGE多肽可以包含其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-339(SEQIDNO:45)或與其至少90%同一的序列?；蛘?，可以利用這些序列中每一個的片段。RAGE融合蛋白可以包含不來源于RAGE或其片段的幾種類型的肽。RAGE融合蛋白的第二種多肽可以包括來源于免疫球蛋白的多肽。在一個實施方案中，免疫球蛋白多肽可以包含免疫球蛋白重鏈或其部分(即片段)。例如，重鏈片段可以包含來源于免疫球蛋白Fc片段的多肽，其中該Fc片段包含作為單體的免疫球蛋白重鏈的重鏈鉸鏈多肽以及CH2和CH3結(jié)構(gòu)域。重鏈(或其部分)可以來源于任何一個已知的重鏈同種型IgG(y)、IgM(n)、IgD(5)、IgE(s)或IgA(ot)。此外，重鏈(或其部分)可以來源于任何一個已知的重鏈亞型IgGl(y1)、IgG2(y2)、IgG3(y3)、IgG4(y4)、IgAl(oc1)、IgA2(oc2)，或這些同種型或亞型的改變生物學活性的突變。第二種多肽可以包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域或這些結(jié)構(gòu)域中任一或兩者的一部分。作為一個示例實施方案，包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽可以包含SEQIDNO:38或SEQIDNO:40。免疫球蛋白肽可以由SEQIDNO:39或SEQIDNO:41的核酸序列編碼。SEQIDNO:38或SEQIDNO:40中的免疫球蛋白序列還可以由SEQIDNO:52或SEQIDNO:53編碼，其中對于編碼在該序列C-末端處的脯氨酸(CCG至CCC)和甘氨酸(GGT至GGG)的密碼子所進行的沉默堿基變化去除了接近末端密碼子的隱蔽的RNA剪接位點。免疫球蛋白鏈的Fc部分在體內(nèi)可以是促炎癥的。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白包含來源于RAGE的域間連接體而不是來源于免疫球蛋白的域間鉸鏈多肽。因此，在一個實施方案中，RAGE融合蛋白可以包含直接與包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或者免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的片段或部分的多肽連接的RAGE多肽。在一個實施方案中，CH2結(jié)構(gòu)域或其片段包含SEQIDNO:42。在一個實施方案中，SEQIDNO:42的片段包含去除了前10個氨基酸的SEQIDNO:42。在一個實施方案中，RAGE多肽可以包含配體結(jié)合位點。RAGE配體結(jié)合位點可以包含RAGE的V結(jié)構(gòu)域或其部分。在一個實施方案中，RAGE配體結(jié)合位點包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:10或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:47或與其至少90%同一的序列。用于本發(fā)明RAGE融合蛋白的RAGE多肽可以包含RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。附加地或備選地，RAGE的片段可以包含域間連接體?；蛘撸琑AGE多肽可以包含與上游(即更接近N-末端)或下游(即，更接近C-末端)域間連接體連接的RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。在另外一個實施方案中，RAGE多肽可以包含兩個(或更多個)RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，每個結(jié)構(gòu)域通過域間連接體相互連接。RAGE多肽可以進一步包含通過一個或多個域間連接體相互連接的多個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，并且有末端域間連接體連接在N-末端RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和/或C-末端免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域上。RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和域間連接體的另外組合也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在一個實施方案中，RAGE多肽包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE域間連接體，從而使得RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸連接至域間連接體的N-末端氨基酸，并且RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其片段的多肽的N-末端氨基酸。包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽可以包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域或這些結(jié)構(gòu)域中任一或兩者的一部分。作為一個示例實施方案，包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽可以包含SEQIDNO:38或SEQIDNO:40。如上所述，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以包含單個或多個來自RAGE的結(jié)構(gòu)域。此外，包含與RAGE多肽結(jié)構(gòu)域連接的域間連接體的RAGE多肽可以包含全長RAGE蛋白的片段。例如，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-136(SEQIDNO:15)或與其至少90%同一的序列，或者人RAGE的氨基酸24-136(SEQIDNO:16)或與其至少90%同一的序列，或者其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-136(SEQIDNO:49)或與其至少90%同一的序列，相應于RAGE的V結(jié)構(gòu)域以及下游的域間連接體?；蛘撸琑AGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-251(SEQIDNO:19)或與其至少90%同一的序列，或者人RAGE的氨基酸24-251(SEQIDNO:20)或與其至少90%同一的序列，或者其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-251(SEQIDNO:51)或與其至少90%同一的序列，相應于V結(jié)構(gòu)域、CI結(jié)構(gòu)域、連接這兩個結(jié)構(gòu)域的域間連接體以及CI下游的第二個域間連接體。例如，在一個實施方案中，RAGE融合蛋白可以包含來源于RAGE蛋白的兩個免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域以及來源于人Fc多肽的兩個免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。RAGE融合蛋白可以包含與第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第二個RAGE域間連接體連接的第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第一個RAGE域間連接體，從而使得第一個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸連接至第一個域間連接體的C-末端氨基酸，第二個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，以及第二個RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸。在一個實施方案中，四結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白可以包含SEQIDNO:32。在一個備選的實施方案中，四結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白包含SEQIDNO:33、SEQIDNO:34或SEQIDNO:56。備選地，三結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白可以包含一個來源于RAGE的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域以及兩個來源于人Fc多肽的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。例如，RAGE融合蛋白可以包含經(jīng)由RAGE域間連接體與Ch2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或部分CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸連接的單個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。在一個實施方案中，三結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白可以包含SEQIDNO:35。在備選的實施方案中，三結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白可以包含SEQIDNO:36、SEQIDNO:37或SEQIDNO:57。RAGE域間連接體片段可以包含天然地位于RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域下游并因此與之連接的肽序列。例如，對于RAGEV結(jié)構(gòu)域，域間連接體可以包含天然地位于V結(jié)構(gòu)域下游的氨基酸序列。在一個實施方案中，連接體可以包含SEQIDNO:21，相應于全長RAGE的氨基酸117-123?；蛘撸B接體可以包含具有天然RAGE序列的另外部分的肽。例如，可以利用包含SEQIDNO:21的上游和下游數(shù)個氨基酸(例如1-3、1-5、或1-10、或1-15個氨基酸)的域間連接體。因此，在一個實施方案中，域間連接體包含SEQIDNO:23，其包含全長RAGE的氨基酸117-136?；蛘?，可以利用從連接體的任何一端刪除例如1、2或3個氨基酸的SEQIDNO:21的片段。在備選的實施方案中，連接體可以包含與SEQIDNO:21或SEQIDNO:23至少70%同一、75%同一、80%同一、85%同一、90%同一、95%同一、97%同一、98o/。同一或99%同一的肽。對于RAGECl結(jié)構(gòu)域，連接體可以包含天然地位于Cl結(jié)構(gòu)域下游33的肽序列。在一個實施方案中，連接體可以包含SEQIDNO:22，相應于全長RAGE的氨基酸222-251?；蛘?，連接體可以包含具有天然RAGE序列的另外部分的肽。例如，可以利用包含SEQIDNO:22的上游和下游數(shù)個氨基酸(例如1-3、1-5、或I-IO、或1-15個氨基酸)的連接體?；蛘?，可以利用從連接體的任何一端刪除例如l-3、1-5、或1-10、或1-15個氨基酸的SBQIDN0:22的片段。例如，在一個實施方案中，RAGE域間連接體可以包含SEQIDNO:24，相應于氨基酸222-226?；蛘?，域間連接體可以包含SEQIDNO:44，相應于RAGE的氨基酸318-342。此外，技術(shù)人員會認識到在所編碼的序列中改變、添加或刪除單個氨基酸或小百分比氨基酸(通常小于約5%、更通常小于約1%)的獨個置換、缺失或添加是經(jīng)保守修飾的變化形式，其中所述改變導致用一個化學上相似的氨基酸置換一個氨基酸。提供功能上相似的氨基酸的保守置換表是本領(lǐng)域眾所周知的。下列實例組各自包含彼此為保守置換的氨基酸1)丙氨酸(A)、絲氨酸(S)、蘇氨酸(T);2)天冬氨酸(D)、谷氨酸U);3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q);4)精氨酸U)、賴氨酸(K);5)異亮氨酸U)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、纈氨酸(V);和6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。保守置換是這樣的置換，即其中置換用氨基酸(天然存在的或經(jīng)修飾的)與被置換的氨基酸在結(jié)構(gòu)上相關(guān)，即具有與被置換的氨基酸大約相同的大小和電子性質(zhì)。因此，置換用氨基酸在側(cè)鏈中將具有與原始氨基酸相同或相似的官能團。"保守置換"還指利用這樣的置換用氨基酸，所述置換用氨基酸與被置換的氨基酸相同，除了側(cè)鏈中的官能團被合適的保護基團保護之外。如本領(lǐng)域已知的，氨基酸可以通過酶促或非酶促反應機制而變得在化學上由其天然結(jié)構(gòu)進行了修飾。例如，在一個實施方案中，N-末端谷氨酸或谷氨酰胺可以環(huán)化(伴隨水的喪失)從而形成焦谷氨酸(pyroE或pE)(Chelius等人，C/e/z，78:2370-2376(2006),和Burstein等人，戶roc.Ais〃o/7a/Sc/.，73:2604-2608(1976))。此外，SEQIDNO:56的RAGE融合蛋白可以潛在地通過在殘基24處編碼谷氨酸而不是在殘基24處編碼谷氨酰胺(基于全長RAGE的編號)的核酸序列而產(chǎn)生。產(chǎn)生RAGE融合蛋白的方法本發(fā)明還包括制備RAGE融合蛋白的方法。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明包括制備RAGE融合蛋白的方法，其包括共價連接與第二種非RAGE多肽連接的RAGE多肽的步驟，其中該RAGE多肽包含RAGE配體結(jié)合位點。例如，被連接的RAGE多肽和第二種非RAGE多肽可以由重組DNA構(gòu)建體編碼。該方法可以進一步包括將所述DNA構(gòu)建體整合到表達栽體中的步驟。此外，該方法可以包括將表達載體插入到宿主細胞中的步驟。例如，本發(fā)明的實施方案提供了包舍RAGE多肽的RAGE融合蛋白，所述RAGE多肽與第二種非RAGE多肽連接。在一個實施方案中，RAGE融合蛋白可以包含RAGE配體結(jié)合位點。在一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含RAGE融合蛋白的最N-末端結(jié)構(gòu)域。RAGE配體結(jié)合位點可以包含RAGE的V結(jié)構(gòu)域或其部分。在一個實施方案中，RAGE配體結(jié)合位點包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:IO或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:47或與其至少90%同一的序列。在一個實施方案中，RAGE多肽可以與包含免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的部分(例如其片段)的多肽連接。在一個實施方案中，包含免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的多肽包含人IgG的CH2或CH3結(jié)構(gòu)域中至少一個的至少一部分。RAGE融合蛋白可以通過重組DNA技術(shù)進行改造。例如，在一個實施方案中，本發(fā)明可以包括分離的核酸序列，其包含編碼與第二種非RAGE多肽連接的RAGE多肽的多核普酸序列，或與該多核普酸序列互補，或與多核苷酸序列具有顯著同一性。在一個實施方案中，RAGE多肽可以包含RAGE配體結(jié)合位點。RAGE蛋白或多肽可以包含全長的人RAGE(例如，SEQIDNO:1)或人RAGE的片段。在一個實施方案中，RAGE多肽不包含任何信號序列殘基。RAGE的信號序列可以包含全長RAGE(SEQIDNO:l)的殘基1-22或殘基1-23。在備選的實施方案中，RAGE多肽可以包含與人RAGE至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%同一的序列或其片段。例如，在一個實施方案中，RAGE多肽可以包含以甘氨酸而不是甲硫氨酸作為第一個殘基的人RAGE或其片段(參見，例如Neeper等人，(1992))?；蛘?，人RAGE可以包含去除信號序列的全長RAGE(例如，SEQIDNO:2或SEQIDNO:3)(圖1A和1B)或那個氨基酸序列的一部分。本發(fā)明的RAGE融合蛋白還可以包含sRAGE(例如SEQIDNO:4)、與sRAGE至少90%同一的多肽或sRAGE片段。例如，RAGE多肽可以包含以甘氨酸而不是甲硫氨酸作為第一個殘基的人sRAGE或其片段(參見，例如Neeper等人，(l"2))?；蛘撸薘AGE可以包含去除了信號序列的sRAGE(參見例如，圖1C中的SEQIDNO:5或SEQIDNO:6，或圖16A中的SEQIDNO:45)或那個氨基酸序列的一部分。在其他實施方案中，RAGE蛋白可以包含V結(jié)構(gòu)域(參見例如，圖ID中的SEQIDNO:7或SEQIDNO:8,或圖16A中的SEQIDNO:46)?；蛘撸梢允褂门cV結(jié)構(gòu)域至少90%同一的序列或其片段?；蛘?，RAGE蛋白可以包含含有部分V結(jié)構(gòu)域的RAGE片段(參見例如，圖ID中的SEQIDNO:9或SEQIDNO:10，或圖16A中的SEQIDNO:47)。在一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:10或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:47或與其至少90%同一的序列。在另外一個實施方案中，RAGE片段是合成肽。在一個實施方案中，核酸序列包含SEQIDNO:"以編碼人RAGE的氨基酸1-118或其片段。例如包含SEQIDNO:25的核苷酸1-348的序列可以用于編碼人RAGE的氨基酸1-116。或者，該核酸可以包含SEQIDNO:26以編碼人RAGE的氨基酸1-123?；蛘?，該核酸可以包含SEQIDNO:27以編碼人RAGE的氨基酸1-136?；蛘撸摵怂峥梢园琒EQIDNO:28以編碼人RAGE的氨基酸1-230?；蛘撸摵怂峥梢园琒EQIDNO:29以編碼人RAGE的氨基酸1-251?；蛘?，這些核酸序列的片段可以用于編碼RAGE多肽片段。RAGE融合蛋白可以包含不來源于RAGE或其片段的幾種類型的肽。RAGE融合蛋白的第二種多肽可以包含來源于免疫球蛋白的多肽。重鏈(或其部分)可以來源于任何一個已知的重鏈同種型IgG(y)、IgM(ji)、IgD(5)、IgE(s)或IgA(a)。此外，重鏈(或其部分)可以來源于任何一個已知的重鏈亞型IgGl(Yl)、IgG2(y2)、IgG3(y3)、IgG4(y4)、IgAl(a1)、IgA2(a2)，或這些同種型或亞型的改變生物學活性的突變。笫二種多肽可以包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域或這些結(jié)構(gòu)域中任一或兩者的一部分。作為一個示例實施方案，包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽可以包含SEQIDNO:38或SEQIDNO:40。免疫球蛋白肽可以由SEQIDNO:39或SEQIDNO:41的核酸序列編碼。在備選的實施方案中，SEQIDNO:38或SEQIDNO:40中的免疫球蛋白序列也可以分別由SEQIDNO:52或SEQIDNO:53編碼。免疫球蛋白鏈的Fc部分在體內(nèi)可以是促炎癥的。因此，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以包含來源于RAGE的域間連接體而不是來源于免疫球蛋白的域間鉸鏈多肽。例如，在一個實施方案中，RAGE融合蛋白可以由重組DNA構(gòu)建體編碼。此外，該方法可以包括將DNA構(gòu)建體整合到表達栽體中的步驟。此外，該方法可以包括將該表達載體轉(zhuǎn)染到宿主細胞中。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明包括制備RAGE融合蛋白的方法，其包括將RAGE多肽與包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽共價連接的步驟。在一個實施方案中，RAGE融合蛋白可以包含RAGE配體結(jié)合位點。RAGE配體結(jié)合位點可以包含RAGE的V結(jié)構(gòu)域或其部分。在一個實施方案中，RAGE配體結(jié)合位點包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:IO或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:47或與其至少90%同一的序列。例如，在一個實施方案中，本發(fā)明包含編碼RAGE多肽的核酸，所述RAGE多肽直接與包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其片段的多肽連接。在一個實施方案中，CH2結(jié)構(gòu)域或其片段包含SEQIDNO:42。在一個實施方案中，SEQIDNO:42的片段包含去除了前10個氨基酸的SEQIDNO:42。第二種多肽可以包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域。作為一個示例實施方案，包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域的多肽可以包含SEQIDNO:38或SEQIDNO:40。免疫球蛋白肽可以由SEQIDNO:39或SEQIDNO:41的核酸序列編碼。SEQIDNO:38或SEQIDNO:40中的免疫球蛋白序列還可以由SEQIDNO:52或SEQIDNO:53編碼，其中對于編碼在該序列C-末端處的脯氨酸(CCG至CCC)和甘氨酸(GGT至GGG)的密碼子所進行的沉默堿基變化去除了接近末端密碼子的隱蔽的RNA剪接位點。在一個實施方案中，RAGE多肽可以包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE域間連接體，從而使得RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸連接至域間連接體的N-末端氨基酸，并且RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其片段的多肽的N-末端氨基酸。包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽可以包括包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域或這些結(jié)構(gòu)域中任一或兩者的一部分的多肽。作為一個示例實施方案，包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽可以包含SEQIDNO:38或SEQIDNO:40。本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以包含單個或多個來自RAGE的結(jié)構(gòu)域。此外，包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的域間連接體的RAGE多肽可以包含全長RAGE蛋白的片段。例如，在一個實施方案中，RAGE融合蛋白可以包含來源于RAGE蛋白的兩個免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域以及來源于人Fc多肽的兩個免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。RAGE融二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第二個RAGE域間連接體連接的第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第一個域間連接體，從而使得第一個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸連接至第一個域間連接體的C-末端氨基酸，第二個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，以及第二個RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或其片段的多肽的N-末端氨基酸。例如，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-251(SEQIDNO:19)或與其至少90%同一的序列，或人RAGE的氨基酸24-251(SEQIDNO:20)或與其至少90%同一的序列，或其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-251(SEQIDNO:51)或與其至少90%同一的序列，相應于V結(jié)構(gòu)域、CI結(jié)構(gòu)域、連接這兩個結(jié)構(gòu)域的域間連接體以及C1下游的第二個域間連接體。在一個實施方案中，包含SEQIDNO:30或其片段的核酸構(gòu)建體可以編碼四結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白。在另一個實施方案中，包含SEQIDNO:54的核酸構(gòu)建體可以編碼四結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白，其中加入了對于編碼在該序列C-末端處的脯氨酸(CCG至CCC)和甘氨酸(GGT至GGG)的密碼子所進行的沉默堿基變化，以去除接近末端密碼子的隱蔽的RNA剪接位點。備選地，三結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白可以包含一個來源于RAGE的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域以及兩個來源于人Fc多肽的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。例如，RAGE融合蛋白可以包含經(jīng)由RAGE域間連接體與包含CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或其片段的多肽的N-末端氨基酸連接的單個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。例如，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-136(SEQIDNO:15)或與其至少90%同一的序列，或人RAGE的氨基酸24-136(SEQIDNO:16)或與其至少90%同一的序列，或其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-136(SEQIDNO:49)或與其至少90%同一的序列，相應于RAGE的V結(jié)構(gòu)域以及下游的域間連接體。在一個實施方案中，包含SEQIDNO:31或其片段的核酸構(gòu)建體可以編碼三結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白。在另一個實施方案中，包含SEQIDNO:55的核酸構(gòu)建體可以編碼三結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白，其中對于編碼在該序列C-末端處的脯氨酸(CCG至CCC)和甘氨酸(GGT至GGG)的密碼子所進行的沉默堿基變化去除了接近末端密碼子的隱蔽的RNA剪接位點。RAGE域間連接體片段可以包含天然地位于RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域下游并因此與之連接的肽序列。例如，對于RAGEV結(jié)構(gòu)域，域間連接體可以包含天然地位于V結(jié)構(gòu)域下游的氨基酸序列。在一個實施方案中，連接體可以包含SEQIDNO:21，相應于全長RAGE的氨基酸117-123。或者，連接體可以包含具有天然RAGE序列的另外部分的肽。例如，可以利用包含SEQIDNO:21的上游和下游數(shù)個氨基酸(例如1-3、1-5、或1-10、或1-15個氨基酸)的域間連接體。因此，在一個實施方案中，域間連接體包含SEQIDNO:23，其包含全長RAGE的氨基酸117-136?；蛘?，可以利用從連接體的任何一端刪除例如1、2或3個氨基酸的SEQIDNO:21的片段。在備選的實施方案中，連接體可以包含與SEQIDNO:21或SEQIDNO:23至少70%同一、或80%同一、或90%同一的序列。對于RAGECI結(jié)構(gòu)域，連接體可以包含天然地位于CI結(jié)構(gòu)域下游的肽序列。在一個實施方案中，連接體可以包含SEQIDNO:22，相應于全長RAGE的氨基酸222-251?；蛘撸B接體可以包含具有天然RAGE序列的另外部分的肽。例如，可以利用包含SEQIDNO:22的上游和下游數(shù)個氨基酸(例如l-3、1-5、或I-IO、或1-15個氨基酸)的連接體。或者，可以利用從連接體的任何一端刪除例如1-3、1-5、或1-10、或1-15個氨基酸的SEQIDNO:22的片段。例如，在一個實施方案中，RAGE域間連接體可以包含SEQIDNO:24，相應于氨基酸222-226。或者，域間連接體可以包含SEQIDNO:44，相應于RAGE的氨基酸318-342。該方法可以進一步包括將DNA構(gòu)建體整合到表達載體中的步驟。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明包括編碼RAGE融合蛋白的表達載體，所述RAGE融合蛋白包含直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽的RAGE多肽。在一個實施方案中，RAGE多肽包含具有與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE域間連接體的構(gòu)建體，例如本文所描述的那些，從而使得RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸連接至域間連接體的N-末端氨基酸，并且RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽的N-末端氨基酸。例如，用于轉(zhuǎn)染細胞的表達載體可以包含核酸序列SEQIDNO:30或其片段、或者核酸序列SEQIDNO:54或其片段、或者核酸序列SEQIDNO:31或其片段、或者核酸序列SEQIDNO:55或其片段。該方法可以進一步包括用本發(fā)明的表達載體轉(zhuǎn)染細胞的步驟。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明包括用表達本發(fā)明的RAGE融合蛋白的表達栽體轉(zhuǎn)染的細胞，從而使得該細胞表達RAGE融合蛋白，所述RAGE融合蛋白包含直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽的RAGE多肽。在一個實施方案中，RAGE多肽包含具有與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE域間連接體的構(gòu)建體，例如本文所描述的那些，從而使得RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸連接至域間連接體的N-末端氨基酸，并且RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽的N-末端氨基酸。例如，表達載體可以包含核酸序列SEQIDNO:30或其片段、核酸序列SEQIDNO:54或其片段、核酸序列SEQIDNO:31或其片段、或者核酸序列SEQIDNO:55或其片段。例如，可以通過將不同長度的人RAGE的5，cDNA序列與人IgGl(Yl)的3，cDNA序列融合來構(gòu)建表達RAGE-IgG融合蛋白的質(zhì)粒。利用標準重組技術(shù)可以將表達盒序列插入到表達載體例如PCDM3.1表達載體(Invitrogen，CA)中。此外，該方法還可以包括將表達栽體轉(zhuǎn)染到宿主細胞中。RAGE融合蛋白可以在哺乳動物表達系統(tǒng)中進行表達，包括其中使用病毒例如逆轉(zhuǎn)錄病毒或腺病毒將表達構(gòu)建體引入哺乳動物細胞內(nèi)的系統(tǒng)?？捎米饔糜诒磉_的宿主的哺乳動物細胞系是本領(lǐng)域眾所周知的，并且包括可從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,ATCC)獲得的許多永生化細胞系。這些尤其包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、NSO、SP2細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人肝細胞癌細胞(例如，HepG2)、A549細胞以及許多其他細胞系?？梢酝ㄟ^確定哪些細胞系具有RAGE融合蛋白的高表達水平來選擇細胞系?？梢允褂玫钠渌毎凳抢ハx細胞系，例如Sf9細胞。植物宿主細胞包括例如煙草屬(iV/co〃a/a)、擬南芥屬(Jra6/^/^/s)、浮萍、玉米、小麥、馬鈴薯等。細菌宿主細胞包括大腸桿菌(Aco//)和鏈霉菌屬(^re/^o/z/yces)物種。酵母宿主細胞包括粟酒裂殖酵母(Sc力/^^acc/aro邁/ces/70/z/6e)、酉良酒酵母(SaccAaro邁7cescere"'s/ae)和巴斯德畢赤酵母(/VcA/a;s"ar")。當將編碼RAGE融合蛋白基因的重組表達載體引入哺乳動物宿主細胞中時，RAGE融合蛋白通過下述方式來產(chǎn)生將宿主細胞培養(yǎng)一段時間，所述時間足以允許RAGE融合蛋白在宿主細胞中表達或RAGE融合蛋白分泌到培養(yǎng)基(宿主細胞在所述培養(yǎng)基中生長)中?？梢允褂脴藴实鞍踪|(zhì)純化方法從培養(yǎng)基中回收RAGE融合蛋白。編碼RAGE融合蛋白的核酸分子和包含這些核酸分子的表達載體可以用于轉(zhuǎn)染合適的哺乳動物、植物、細菌或酵母宿主細胞。轉(zhuǎn)化可以通過用于將多核苷酸引入宿主細胞中的任何已知方法來進行。用于將異源多核苷酸引入哺乳動物細胞中的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，并且包括葡聚糖介導的轉(zhuǎn)染、磷酸鈣沉淀法、polybrene介導的轉(zhuǎn)染、原生質(zhì)體融合、電穿孔、將多核苷酸包嚢在脂質(zhì)體中、和將DNA直接顯微注射到細胞核內(nèi)。此外，可以通過病毒載體將核酸分子引入哺乳動物細胞中。用于轉(zhuǎn)化植物細胞的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，包括例如土壤桿菌介導的轉(zhuǎn)化、生物射彈轉(zhuǎn)化、直接注射、電穿孔和病毒轉(zhuǎn)化。用于轉(zhuǎn)化細菌和酵母細胞的方法也是本領(lǐng)域眾所周知的。還可以使用DNA生物射彈將表達載體遞送至表達系統(tǒng)，其中將質(zhì)粒沉淀在微型顆粒(優(yōu)選地，金顆粒)上，并將顆粒被推進到靶細胞或表達系統(tǒng)中。DNA生物射彈技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知的，并且裝置例如"基因槍"是商購可得的以用于將微粒遞送到細胞(例如，HeliosGeneG叫Bio-RadUbs.，Hercules,CA)和皮膚中(PMEDDevice,PowderMedLtd.,Oxford,UK)。可以使用許多已知技術(shù)來增強由生產(chǎn)細胞系表達RAGE融合蛋白。例如，谷氨酰胺合成酶基因表達系統(tǒng)(GS系統(tǒng))和原生質(zhì)編碼的新霉素抗性系統(tǒng)是用于在一定條件下增強表達的常用方法。由不同細胞系表達的RAGE融合蛋白可以具有彼此不同的糖基化模式。然而，由本文提供的核酸分子編碼的、或者包含本文提供的氨基酸序列的所有RAGE融合蛋白是本發(fā)明的一部分，不論RAGE融合蛋白的糖基化如何。在一個實施方案中，重組表達載體可以被轉(zhuǎn)染到中國倉鼠卵巢細胞(CH0)中并在表達方面進行優(yōu)化。在備選的實施方案中，所述細胞可以產(chǎn)生0.1-20克/升、或O.5-10克/升、或約l-2克/升。如本領(lǐng)域所已知的，此類核酸構(gòu)建體可以通過突變進行修飾，例如，通過用包含目的突變的引物對核酸模板進行PCR擴增。這樣，可以設(shè)計具有不同的對于RAGE配體的親和力的多肽。在一個實施方案中，突變的序列可以與起始DNA有90%或更高的同一性。照此，變體可以包括在嚴緊條件(即相當于在1M鹽中低于DNA雙鏈體的解鏈溫度(TM)約20-27X:)下雜交的核苷酸序列。通過將表達載體轉(zhuǎn)染到合適的宿主中可以表達編碼序列。例如，重組栽體可以穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染到中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中，并且選擇和克隆表達RAGE融合蛋白的細胞。在一個實施方案中，通過應用抗生素G418就質(zhì)粒編碼的新霉素抗性對表達重組構(gòu)建體的細胞進行選擇?？梢赃x擇單獨的克隆，和可以擴展由細胞上清液的Western印跡分析而檢測的表達高水平重組蛋白的克隆，并使用A蛋白柱通過親和層析來純化基因產(chǎn)物。編碼本發(fā)明RAGE融合蛋白的重組核酸的樣品實施方案顯示于圖2-5和圖17-20中。例如，如上所述，由重組的DNA構(gòu)建體產(chǎn)生的RAGE融合蛋白可以包含與第二種非RAGE多肽連接的RAGE多肽。RAGE融合蛋白可以包含兩個衍生自RAGE蛋白的結(jié)構(gòu)域以及兩個衍生自免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)域。圖2(SEQIDNO:30)和圖17(SEQIDNO:54)中顯示了編碼具有這種類型結(jié)構(gòu)的RAGE融合蛋白TTP-4000(TT4)的核酸構(gòu)建體的實例。如圖2和圖17中所示，編碼序列1-753(以粗體突出)編碼RAGEN-末端蛋白質(zhì)序列，而754-1386的序列編碼IgG蛋白質(zhì)序列。當衍生自SEQIDNO:30或SEQIDNO:54或與其至少90%同一的序列時，RAGE融合蛋白可以包含SEQIDNO:32的四結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，或者去除了信號序列的多肽(參見例如，圖4中的SEQIDNO:33或SEQIDNO:34，或圖19中的SEQIDNO:56)。在圖4和圖19中，RAGE氨基酸序列用粗字體突出。免疫球蛋白序列為IgG的CH2和"3免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。如圖6B中所示，全長的TTP-4000RAGE融合蛋白的最初251個氨基酸包含下列序列作為RAGE多肽序列包含氨基酸1-22/23的信號序列、包含氨基酸23/24-116的V免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(包括配體結(jié)合位點)、包含氨基酸117-123的域間連接體、包含氨基酸124-221的第二個免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(C1)和包含氨基酸222-251的下游域間連接體。在一個實施方案中，RAGE融合蛋白不必包含第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。例如，RAGE融合蛋白可以包含一個衍生自RAGE的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域以及兩個衍生自人Fc多肽的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。圖3(SEQIDNO:31)和圖18(SEQIDNO:55)中顯示了編碼這種類型的RAGE融合蛋白的核酸構(gòu)建體的實例。如圖3和圖18中所示，核苷酸l-408的編碼序列(以粗體突出)編碼RAGEN-末端蛋白質(zhì)序列，而409-1041的序列編碼IgGl(Yl)蛋白質(zhì)序列。當衍生自SEQIDNO:31或SEQIDNO:55或與其至少90%同一的序列時，RAGE融合蛋白可以包含SEQIDNO:35的三結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，或去除了信號序列的多肽(參見例如，圖5中的SEQIDN0:36或SEQIDNO:37，或圖20中的SEQIDNO:57)。在圖5和圖20中，RAGE氨基酸序列用粗字體突出。如圖6B中所示，全長的TTP-3000RAGE融合蛋白的最初136個氨基酸包含下列序列作為RAGE多肽包含氨基酸1-22/23的信號序列、包含氨基酸23/24-116的V免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(包括配體結(jié)合位點)和包含氨基酸117-136的域間連接體。137-346的序列包含IgGCH2和CH3免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以具有相對于不包含第二種多肽的RAGE多肽來說得到改善的體內(nèi)穩(wěn)定性。RAGE融合蛋白可以被進一步修飾以增加穩(wěn)定性、有效性、效能和生物利用度。因此，可以通過翻譯后加工或通過化學修飾來修飾本發(fā)明的RAGE融合蛋白。例如，可以合成制備RAGE融合蛋白以包含L-氨基酸、D-氨基酸或非天然的氨基酸，ot-雙取代的氨基酸，或N-烷基氨基酸。此外，蛋白質(zhì)可以通過乙?；?、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、附加脂質(zhì)例如磷脂酰肌醇、二硫鍵形成等進行修飾。此外，可以加入聚乙二醇以增加RAGE融合蛋白的生物穩(wěn)定性。RAGE拮抗劑與RAGE融合蛋白的結(jié)合本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以具有眾多應用。例如，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以用于結(jié)合測定法中以鑒別RAGE配體，例如RAGE激動劑、拮抗劑或調(diào)節(jié)劑。例如，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了檢測RAGE調(diào)節(jié)劑的方法，其包括(a)提供包含與第二種非RAGE多肽連接的RAGE多肽的RAGE融合蛋白，其中所述RAGE多肽包含配體結(jié)合位點；(b)將目的化合物和具有已知RAGE結(jié)合親和力的配體與RAGE融合蛋白混和；和(c)在目的化合物存在下測量已知的RAGE配體與RAGE融合蛋白的結(jié)合。在一個實施方案中，配體結(jié)合位點包含RAGE融合蛋白的最N-末端結(jié)構(gòu)域。RAGE融合蛋白還可以提供用于檢測RAGE調(diào)節(jié)劑的試劑盒。例如，在一個實施方案中，本發(fā)明的試劑盒可以包含(a)具有已知RAGE結(jié)合親和力的化合物，作為陽性對照；(b)包含與第二種非RAGE多肽連接的RAGE多肽的RAGE融合蛋白，其中所述RAGE多肽包含RAGE配體結(jié)合位點；和(c)用法說明書。在一個實施方案中，配體結(jié)合位點包含RAGE融合蛋白的最N-末端結(jié)構(gòu)域。例如，RAGE融合蛋白可以用于結(jié)合測定法中以鑒別潛在的RAGE配體。在此類結(jié)合測定法的一個示例實施方案中，可以將已知的RAGE配體以約5微克/孔的濃度包被在固體基質(zhì)(例如Maxisorb板)上，其中每個孔包含約100微升(yL)的總體積。板可以在4r孵育過夜以允許配體吸收。備選地，可以采用在更高溫度(例如室溫)下的更短孵育期。允許配體與基質(zhì)結(jié)合一段時間后，可以吸出測定孔中的液體并加入封閉緩沖液(例如含1%BSA的50mM咪唑(imidizole)緩沖液，pH7.2)以封閉非特異性結(jié)合。例如，可以在室溫下將封閉緩沖液加入板中并保持1小時。隨后可以吸出板中液體和/或用洗滌緩沖液洗滌。在一個實施方案中，含有20mM咪唑、150mMNaCl、0.05%Tween-20、5mMCaCl2和5mMMgCh的pH7.2的緩沖液可以用作洗滌緩沖液。隨后以增加的稀釋度將RAGE融合蛋白加入測定孔中。然后可以允許RAGE融合蛋白與固定的配體一起在測定板中孵育，從而使得結(jié)合能夠達到平衡。在一個實施方案中，允許RAGE融合蛋白與固定的配體一起在37X:孵育約1小時。在備選的實施方案中，可以采用在更低溫度下的更長孵育期。在RAGE融合蛋白和固定的配體已經(jīng)孵育后，可以洗滌板以去除任何未結(jié)合的RAGE融合蛋白?？梢砸愿鞣N方式檢測與固定的配體結(jié)合的RAGE融合蛋白。在一個實施方案中，采用ELISA進行檢測。因此，在一個實施方案中，可以向固定在測定板孔中的RAGE融合蛋白加入包含單克隆小鼠抗人IgGl、生物素化的山羊抗小鼠IgG和連接有抗生物素蛋白的堿性磷酸酶的免疫檢測復合物?？梢栽试S免疫檢測復合物與固定的RAGE融合蛋白結(jié)合，從而使得RAGE融合蛋白和免疫檢測復合物之間的結(jié)合達到平衡。例如，可以允許復合物在室溫下與RAGE融合蛋白結(jié)合1小時。在那時，可以通過用洗滌緩沖液洗滌測定孔來去除任何未結(jié)合的復合物。通過加入堿性磷酸酶底物磷酸對硝基苯酯(PNPP)，并以在405nm處吸光度的增加來測量PNPP至對硝基苯酚(PNP)的轉(zhuǎn)化，可以檢測結(jié)合的復合物。在一個實施方案中，RAGE配體以納摩爾濃度(nM)或微摩爾濃度(|uM)的親和力結(jié)合RAGE融合蛋白。圖7中顯示了圖解說明RAGE配體與本發(fā)明的RAGE融合蛋白結(jié)合的實驗。制備起始濃度分別為1.082mg/mL和370|ug/mL的TTP-3000(TT3)和TTP-4000(TT4)溶液。如圖7中所示，在各種稀釋度下，RAGE融合蛋白TTP-3000和TTP—OOO能夠結(jié)合固定的RAGE配體即淀粉樣蛋白-P(Abeta)(來自Biosource的AmyloidBeta(1-40))、S100b(S100)和兩性蛋白(Ampho),導致吸光度增加。在沒有配體時(即僅用BSA包被)，沒有吸光度的增加。本發(fā)明的結(jié)合測定法可以用于量化與RAGE結(jié)合的配體。在備選的實施方案中，RAGB配體可以以0.1-1000納摩爾濃度(nM)、或l-500nM、或10-80nM的結(jié)合親和力與本發(fā)明的RAGE融合蛋白結(jié)合。本發(fā)明的RAGE融合蛋白還可用于鑒別具有結(jié)合RAGE的能力的化合物。如圖8和9中分別顯示的，可以評測RAGE配體與固定的淀粉樣蛋白P竟爭結(jié)合TTP-4000(TT4)或TTP-3000(TT3)RAGE融合蛋白的能力。因此，可以看出，在起始TTP"000溶液(圖8)或TTP-3000(圖9)的濃度為1:3、1:10、1:30和1:100時，最終測定濃度(FAC)為lOjuM的RAGE配體可以取代RAGE融合蛋白與淀粉樣蛋白-P的結(jié)合。細胞效應物的調(diào)節(jié)本發(fā)明RAGE融合蛋白的實施方案可以用于調(diào)節(jié)由RAGE介導的生物應答。例如，可以設(shè)計RAGE融合蛋白以調(diào)節(jié)RAGE誘導的基因表達的增加。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以用于調(diào)節(jié)生物酶的功能。例如，RAGE與其配體之間的相互作用可以產(chǎn)生氧化應激，并激活NF-kB，以及NF-kb調(diào)節(jié)的基因，例如細胞因子IL-1P、TNF-cx等。另外，已顯示幾種其他的調(diào)節(jié)途徑，例如涉及p21ras、MAP激酶、ERK1和ERK2的那些，；陂AGEs和其他配體與RAGE的結(jié)合激活。圖10中顯示了本發(fā)明RAGE融合蛋白調(diào)節(jié)細胞效應物TNF-a的表達的用途?？梢栽谘a充有10。/qFBS的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)THP-1骨髓細胞，并且用S100b誘導其經(jīng)由RAGE的刺激而分泌TNF-a。當此類刺激發(fā)生在RAGE融合蛋白存在下時，由SIOOb結(jié)合RAGE而對TNF-a的誘導可以得到抑制。因此，如圖IO中所示，10|ugTTP-3000(TT3)或TTP-4000(TT4)RAGE融合蛋白的加入使TNF-a的S100b誘導減少了約50%-75%。RAGE融合蛋白TTP-4000在阻斷TNF-oc的SlOOb誘導方面至少與sRAGE—樣有效(圖10)。將IgG單獨加入到經(jīng)SlOOb刺激的細胞中的實驗顯示了對于TTP-4000和TTP-3000的RAGE序列的抑制特異性。IgG和SlOOb加入到該測定中顯示與SlOOb單獨時相同的TNF-oc水平。RAGE融合蛋白的生理學特征盡管sRAGE在調(diào)節(jié)RAGE介導的疾病方面可以具有治療益處，但基于sRAGE在血漿中相對較短的半壽期，人sRAGE作為獨立治療劑可能有限制。例如，當通過sRAGE免疫反應性保留進行評估時，雖然嚙齒類動物的sRAGE在正常和糖尿病大鼠中的半壽期為大約20小時，但人sRAGE的半壽期小于2小時(Renard等人，/,戶力flr則co厶f".r/er.，290:1458-1466(1999))。為了產(chǎn)生具有與sRAGE類似的結(jié)合特征但具有更穩(wěn)定的藥代動力學特性的RAGE治療劑，可以使用包含與一個或多個人免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE配體結(jié)合位點的RAGE融合蛋白。如本領(lǐng)域已知的，免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域可以包含免疫球蛋白重鏈的Fc部分。免疫球蛋白的Fc部分可以賦予RAGE融合蛋白數(shù)種屬性。例如，F(xiàn)c融合蛋白通?？梢詫⒋祟惾诤系鞍椎难灏雺燮趶臄?shù)小時增加到數(shù)日。藥代動力學穩(wěn)定性的增加一般是Fc片段的CH2和CH3區(qū)域之間的連接體與FcRn受體相互作用的結(jié)果(Wines等人，/.//腿mo/.，164:5313-5318(2000))。盡管包含免疫球蛋白Fc多肽的融合蛋白可以提供穩(wěn)定性增加的優(yōu)點，但當引入宿主中時免疫球蛋白融合蛋白可以引起炎癥應答。炎癥應答在很大程度上可能是由于融合蛋白的免疫球蛋白的Fc部分。如果靶表達在需要被清除的患病細胞類型(例如，癌細胞、導致自身免疫疾病的淋巴細胞或淋巴細胞群)上，那么促炎癥應答可以是所希望的特征。如果靶為可溶性蛋白，由于大多數(shù)可溶性蛋白不激活免疫球蛋白，那么促炎癥應答可以是中性的特征。然而，如果靶表達在其破壞將導致不利副作用的細胞類型上，那么促炎癥應答可以是負面的特征。此外，如果在融合蛋白與組織耙結(jié)合的位點處炎性級聯(lián)是確定的，那么促炎癥應答可以是負面的特征，因為許多炎癥的介質(zhì)對周圍組織可能是有害的，和/或可能導致全身效應。免疫球蛋白Fc片段上的主要促炎癥位點位于CH1和CH2之間的鉸鏈區(qū)。這個鉸鏈區(qū)與各種白細胞上的FcRl-3相互作用并引發(fā)這些細胞攻擊把。(Wines等人，/./邊/z7W2oA，164:5313-5318(2000))。作為RAGE介導的疾病的治療劑，RAGE融合蛋白可以不需要炎癥應答的產(chǎn)生。因此，本發(fā)明RAGE融合蛋白的實施方案可以包括包含與免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE多肽的RAGE融合蛋白，其中Fc鉸鏈區(qū)從該免疫球蛋白中去除并用RAGE多肽代替。這樣，可以將RAGE融合蛋白與炎性細胞上的Fc受體之間的相互作用降到最低。然而，重要的是維持RAGE融合蛋白的各種免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域之間的正確堆疊及其他三維結(jié)構(gòu)的相互作用。因此，本發(fā)明RAGE融合蛋白的實施方案可以用生物學惰性但結(jié)構(gòu)上類似的將RAGE的V和CI結(jié)構(gòu)域隔開的RAGE域間連接體，或?qū)AGE的CI和C2結(jié)構(gòu)域隔開的連接體，來代替免疫球蛋白重鏈的正常鉸鏈區(qū)。因此，RAGE融合蛋白的RAGE多肽可以包含在RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域下游天然發(fā)現(xiàn)的域間連接體序列以形成RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域/連接體片段。這樣，可以維持由RAGE或免疫球蛋白支持的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域之間的三維相互作用。在一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白與sRAGE比較可以具有藥代動力學穩(wěn)定性的實質(zhì)增加。例如，圖11顯示，一旦RAGE融合蛋白TTP-4000飽和了其配體，它就可以保留大于300個小時的半壽期。這可以與sRAGE在人血漿中僅幾小時的半壽期形成對照。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以用于拮抗生理學配體與RAGE的結(jié)合，以作為治療RAGE介導的疾病的手段而不產(chǎn)生不可接受的量的炎癥。本發(fā)明的RAGE融合蛋白與IgG比較可以顯示出在產(chǎn)生促炎癥應答方面的實質(zhì)減少。例如，如圖12中所示，在檢測到人IgG刺激TNF-oc釋放的情況下，RAGE融合蛋白TTP-4000不刺激TNF-ot從細胞中釋放。用RAGE融合蛋白治療疾病本發(fā)明還包括治療人類受試者中RAGE介導的病癥的方法。在一個實施方案中，該方法可以包括對受試者施用RAGE融合蛋白，所述RAGE融合蛋白包含含有RAGE配體結(jié)合位點且與第二種非RAGE多肽連接的RAGE多肽。在一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以通過各種途徑施用。本發(fā)明RAGE融合蛋白的施用可以采用腹膜內(nèi)(IP)注射。備選地，RAGE融合蛋白可以口服、鼻內(nèi)或作為氣霧劑施用。在另一實施方案中，施用是靜脈內(nèi)的(IV)。RAGE融合蛋白還可以皮下注射。在另一實施方案中，RAGE融合蛋白的施用是動脈內(nèi)的。在另一實施方案中，施用是舌下的。此外，施用還可以采用定時釋放膠囊。在另外一個實施方案中，施用可以是經(jīng)直腸的，例如通過栓劑等。例如，當希望自我給藥時，皮下施用可以用于治療慢性病癥。各種動物模型已經(jīng)用于驗證作為治療劑調(diào)節(jié)RAGE的化合物的用途。這些模型的實例如下a)在糖尿病和正常大鼠中，通過抑制經(jīng)由RAGE的內(nèi)皮細胞、平滑肌和巨噬細胞的激活，sRAGE抑制在動脈損傷后再狹窄的大鼠模型中的新生內(nèi)膜形成(Zhou等人，"rcw/fl〃o/7107:2238-2243(2003));b)在全身性淀粉樣變性的小鼠模型中，利用sRAGE或抗RAGE抗體抑制RAGE/配體相互作用減少了淀粉樣蛋白斑的形成(Yan等人，A"".#e&，6:643-651(2000))。在被治療的動物中，伴隨淀粉樣蛋白斑減少的是炎性細胞因子白介素-6(IL-6)和巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)的減少以及NF-KB的活化的減少；c)在AD小鼠模型中，RAGE轉(zhuǎn)基因小鼠(RAGE過表達的小鼠和RAGE顯性失活表達的小鼠)顯示出斑形成和認知缺陷(Arancio等人，層".，23:4096-4105(2004));d)用sRAGE治療糖尿病大鼠降低了血管通透性(Bonnardel-Phu等人，"/a6"es，48:2052-2058(1999));e)用sRAGE治療減少了在載脂蛋白E缺陷的糖尿病小鼠中的動脈粥樣硬化損傷，并在db/db小鼠中阻止了糖尿病性腎病的功能和形態(tài)學指征(Hudson等人，"/ocAe瓜A/opArs.，419:80-88(2003));以及f)在膠原誘導型關(guān)節(jié)炎的小鼠模型(Hofmann等人，6^/2^/邁邁wo/.，3:123-135(2002))、實驗性過敏性腦脊髓炎的小鼠模型(Yan等人，A^.#ecT.，9:28-293(2003))以及炎性腸病的小鼠模型(Hofmann等人，Ce//，97:889-901(1999))中，sRAGE減弱了炎癥的嚴重度。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以用于治療糖尿病的癥狀和/或經(jīng)RAGE介導的由糖尿病引起的并發(fā)癥。在備選的實施方案中，糖尿病的癥狀或糖尿病的晚期并發(fā)癥可以包括糖尿病性腎病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性足部潰瘍、糖尿病的心血管并發(fā)癥或糖尿病性神經(jīng)病變。最初被鑒別為其表達與糖尿病病理相關(guān)的分子的受體，RAGE自身對于糖尿病并發(fā)癥的病理生理學是必要的。在體內(nèi)，在多個糖尿病并發(fā)癥和炎癥模型中已顯示，抑制RAGE與其配體的相互作用是有治療作用的(Hudson等人，5/oc力e邁."2'o/力〃.，419:80-88(2003))。例如，在糖尿病小鼠中，兩個月的抗RAGE抗體治療使腎功能正常化并且減少了異常的腎組織病理(Flyvbjerg等人，Z/a6"e"3:166-172(2004))。此外，用結(jié)合RAGE配體并抑制RAGE/配體相互作用的可溶形式的RAGE(sRAGE)進行治療減少了在載脂蛋白E缺陷的糖尿病小鼠中的動脈粥樣硬化損傷，并且在db/db小鼠中減弱了糖尿病性腎病的功能和形態(tài)學病理(Bucciarelli等人，C/rcw"〃'加106:2827-2835(2002))。此外，還已顯示，在高血糖癥及與全身或局部氧化應激相關(guān)的其他條件存在下，在腎衰竭中，在炎癥位置處，最終導致高級糖基化終產(chǎn)物(AGEs)形成的大分子非酶促糖氧化(glycoxidation)是增強的(Dyer等人，/.//^W.，91:2463-2469(1993);Reddy等人，脅c力e邁，，34:10872-10878(1995);Dyer等人，/.脅/.，266:11654-11660(1991);Degenhardt等人，Ce//腺.S/o厶，44:1139-1145(1998))。AGEs在脈管系統(tǒng)中的積聚可以在灶部發(fā)生，如在發(fā)現(xiàn)于透析相關(guān)的淀粉樣變性患者中的由AGE-p2-微球蛋白組成的關(guān)節(jié)淀粉樣蛋白之中(Miyata等人，/.C7/".//7reW.，92:1243-1252(1993);Miyata等人，/.67/il//^eW.，98:1088-1094(1996))，或者一般地，如由糖尿病患者的脈管系統(tǒng)和組織所例證的(Schmidt等人，，1:1002-1004(1995))。糖尿病患者中AGEs隨著時間過去而漸進的積聚提示，內(nèi)源性清除機制在AGE沉積位置處不能有效地發(fā)揮作用。此類積聚的AGEs能夠通過眾多機制改變細胞特性。盡管在正常組織和脈管系統(tǒng)中RAGE以低水平表達，但已顯示在受體的配體積聚的環(huán)境中RAGE變成上調(diào)(Li等人，/."/oA，272:16498-16506(1997);Li等人,/.C/e瓜，273:30870-30878(1998);Tanaka等人，/.C力e邁.，275:25781-25790(2000))。在糖尿病的脈管系統(tǒng)中，RAGE的表達在內(nèi)皮、平滑肌細胞和浸潤性單核吞噬細胞中是增加的。此外，細胞培養(yǎng)中研究也已證實，AGE-RAGE相互作用導致在血管內(nèi)穩(wěn)定中重要的細胞特性改變。圖13中圖解說明了RAGE融合蛋白在治療糖尿病相關(guān)病理中的用途。在再狹窄的糖尿病大鼠模型中評估RAGE融合蛋白TTP-4000,其中包括測量血管損傷后的平滑肌增殖和內(nèi)膜擴張。如圖13中所圖解說明的，在糖尿病相關(guān)的再狹窄中TTP-4000治療可以以劑量-響應方式顯著地減少內(nèi)膜/中膜(I/M)比(圖13A;表1)。此外，TTP-4000治療還可以以劑量-響應方式顯著地減少再狹窄相關(guān)的血管平滑肌細胞增殖。表lTTP-4000在大鼠再狹窄模型中的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>"對于高和低劑量，均使用3mg/動物的負荷劑量。在其他實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白還可用于治療或逆轉(zhuǎn)淀粉樣變性和阿爾茨海默病。RAGE是淀粉樣蛋白P(A|3)以及其他淀粉樣變性原性(amyloidogenic)蛋白(包括SAA和糊精(amylin))的受體(Yan等人，iV由re，382:685-691(1996);Yan等人，尸薦.A^〃.JcaA就，編，94:5296-5301(1997);Yan等人，編.，6:643-651(2000);Sousa等人，Za6//^eW.，80:1101-1110(2000))。此外，在男性老年斑周圍的組織中也發(fā)現(xiàn)了RAGE配體，包括AGEs、S100b和AP蛋白(Luth等人，Cere6.Co"^r15:211-220(2005);Petzold等人，iYei/rosc/.丄e〃.，336:167-170(2003);Sasaki等人，"ra//7Wes.，12:256-262(2001);Yan等人，Ae"or.Afei/ro/.iVeruwc/.，12:167-173(1998))。已顯示，RAGE結(jié)合P-折疊纖維狀材料而不管亞基的組成(淀粉樣蛋白-P肽、糊精、血清淀粉樣蛋白A、朊蛋白起源的肽)(Yan等人，射"re，382:685-691(1996);Yan等人，#ecT.，6:643-651(2000))。此外，已顯示，淀粉樣蛋白的沉積導致RAGE表達增強。例如，在阿爾茨海默病(AD)患者的大腦中，在神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)中RAGE表達增加(Yan，等人，Ais"re382:685-691(1996))。與RAGE配體的表達同時發(fā)生的是，在患有AD的個體的海馬中的星形膠質(zhì)細胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細胞中RAGE是上調(diào)的，但在沒有AD的個體中不是上調(diào)的(Lue等人，fi;7.iVe"ro/.，171:29-45(2001))。這些發(fā)現(xiàn)提示，在老年斑附近，表達RAGE的細胞經(jīng)由RAGE/RAGE配體相互作用而被激活。此外，在體外，AP介導的小神經(jīng)膠質(zhì)細胞的活化也可以被針對RAGE的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體阻斷(Yan等人，iVa〃.5W.,^S^，94:5296-5301(1997))。還證實，RAGE可以充當原纖維裝配的焦點(Deane等人，9:907-913(2003))。此外，在全身性淀粉樣變性的小鼠模型中，利用sRAGE或抗RAGE抗體體內(nèi)抑制RAGE/配體相互作用可以減少淀粉樣蛋白斑的形成(Yan等人，船&，6:643-651(2000))。在神經(jīng)元中過量表達人RAGE以及含Swedish和London突變的人淀粉樣蛋白前體蛋白(APP)(突變體hAPP)的雙轉(zhuǎn)基因小鼠，早于它們的單突變體hAPP轉(zhuǎn)基因?qū)镄纬蓪W習缺陷和神經(jīng)病理學異常。與此相反，在相同的突變體hAPP背景下，雙轉(zhuǎn)基因小鼠由于神經(jīng)元表達顯性失活形式的RAGE而具有減少的A0信號傳導能力，其與它們的單APP轉(zhuǎn)基因?qū)锵啾蕊@示延遲的神經(jīng)病理學和學習異常的發(fā)作(Arancio等人，^fii/^/.，23:4096-4105(2004))。此外，RAGE-淀粉樣蛋白相互作用的抑制還已顯示減少了細胞RAGE和細胞應激標記物的表達(以及NF-kB活化)，并且減少了淀粉樣蛋白沉積(Yan等人，A^.，6:643-651(2000))，提示在富含淀粉樣蛋白的環(huán)境中的細胞特性擾動中(甚至在早期)以及在淀粉樣蛋白積聚中RAGE-淀粉樣蛋白相互作用均起著作用。因此，本發(fā)明的RAGE融合蛋白還可用于治療淀粉樣變性，以及減少與阿爾茨海默病(AD)相關(guān)的淀粉樣蛋白斑和認知障礙。如上所述，在AD動物模型中，sRAGE已顯示減少大腦中淀粉樣蛋白斑的形成以及后續(xù)的炎性標記物的增加。圖14A和14B顯示，與接受媒介物或人IgG陰性對照(IgGl)的動物相比，患有AD并且用TTP-4000或小鼠sRAGE治療3個月的小鼠具有較少的淀粉樣蛋白PUP)斑和較小的認知障礙。像sRAGE—樣，TTP-4000也可減少與AD相關(guān)的炎性細胞因子IL-1和TNF-oc(數(shù)據(jù)未顯示)。此外，本發(fā)明的RAGE融合蛋白還可以用于治療動脈粥樣硬化及其他心血管病癥。因此，已顯示，缺血性心臟病在糖尿病患者中特別高(Robertson等人，"6J/^e",，18:538-551(1968);Kannel等人，/.j邁.，241:2035—2038(1979);Kannel等人，"/a6,2:120-126(1979))。此外，研究已顯示，與不患有糖尿病的患者相比，糖尿病患者中的動脈粥樣硬化是更加速且更廣泛的(參見，例如Waller等人，j邁./.y)/^/.，69:498-506(1980);Crall等人，J瓜/.64:221-230(1978);Hamby等人，Oze"，2:251-257(1976);以及Pyorala等人，，3:463-524(1978))。盡管在糖尿病背景下動脈粥樣硬化加速的原因有很多，但已顯示AGEs的減少可以減少斑的形成。例如，本發(fā)明的RAGE融合蛋白還可用于治療中風。當在疾病相關(guān)的中風動物模型中比較TTP-4000與sRAGE時，發(fā)現(xiàn)TTP-4000在梗塞體積方面提供了明顯更大的減少。在這個模型中，結(jié)扎小鼠的頸中動脈并隨后再灌注以形成梗塞。為了評估RAGE融合蛋白治療或預防中風的有效性，在即將進行再灌注之前用sRAGE或TTP-4000或?qū)φ彰庖咔虻鞍滋幚硇∈?。如可以從?中看出的，TTP-4000在限制這些動物中的梗塞面積方面比sRAGE更有效，提示由于其在血漿中更佳的半壽期，TTP-4000能夠維持比sRAGE更大的保護。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>顯著至p<0.001;與鹽水比較在另一實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以用于治療癌癥。在一個實施方案中，利用本發(fā)明的RAGE融合蛋白治療的癌癥包含表達RAGE的癌細胞。例如，可以用本發(fā)明的RAGE融合蛋白治療的癌癥包括某些肺癌、某些神經(jīng)膠質(zhì)瘤、某些乳突狀瘤等。兩性蛋白是已顯示與RAGE相互作用的高遷移率組I非組蛋白染色體DNA結(jié)合蛋白(Rauvala等人，/.萬/o人，262:16625-16635(1987);Parkikinen等人，/.S/o/.268:19726-19738(1993))。已顯示，兩性蛋白促進神經(jīng)突長出，并且在纖維蛋白溶解系統(tǒng)中充當?shù)鞍酌笍秃象w的裝配表面(還已知有助于細胞運動性)。此外，在原發(fā)性腫瘤模型(C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤)、Lewis肺轉(zhuǎn)移模型(Taguchi等人，AW,405:354-360(2000))以及在表達v-Ha-ras轉(zhuǎn)基因的小鼠中自發(fā)出現(xiàn)的乳突狀瘤(Leder等人，，87:9178-9182(1990))之中觀察到阻斷RAGE具有局部腫瘤生長抑制作用。在另外一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以用于治療炎癥。在備選的實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以用于治療與炎性腸病相關(guān)的炎癥、與類風濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)的炎癥、與牛皮癬相關(guān)的炎癥、與多發(fā)性硬化癥相關(guān)的炎癥、與缺氧相關(guān)的炎癥、與中風相關(guān)的炎癥、與心臟病發(fā)作相關(guān)的炎癥、與出血性休克相關(guān)的炎癥、與敗56血病相關(guān)的炎癥、與器官移植相關(guān)的炎癥、與傷口愈合不良相關(guān)的炎癥、或與自身(例如，自身免疫)或非自身(例如，移植的)細胞、組織或器官的排斥相關(guān)的炎癥。例如，在溶栓治療后，炎性細胞例如粒細胞滲入局部缺血的組織中并產(chǎn)生氧自由基，它可以破壞的細胞比缺氧殺死的細胞更多。用抗體或其他蛋白質(zhì)拮抗劑抑制嗜中性粒細胞上負責嗜中性粒細胞能夠滲入組織的受體已顯示出可改善應答。因為RAGE是這種嗜中性粒細胞受體的配體，所以包含RAGE片段的RAGE融合蛋白可以充當誘飾，和阻止嗜中性粒細胞輸送至再灌注位點并從而阻止進一步的組織破壞。通過研究可以表明RAGE在防止炎癥中的作用，所述研究顯示在糖尿病和正常大鼠中，sRAGE抑制在動脈損傷后再狹窄的大鼠模型中的新生內(nèi)膜擴張，推測通過抑制經(jīng)由RAGE的內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞增殖和巨噬細胞激活(Zhou等人，(7/rcw/a"'Oi3，107:2238-2243(2003))。此外，sRAGE抑制炎癥的模型，包括遲發(fā)型超敏反應、實驗性自身免疫性腦炎和炎性腸病(Hofman等人，Ce〃，97:889-901(1999))。在一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白還可以用于治療基于自身免疫的病癥。例如，在一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以用于治療腎衰竭。因此，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以用于治療全身性狼瘡腎炎或炎性狼瘡腎炎。例如，S100/鈣粒蛋白已顯示出包括緊密相關(guān)的鈣結(jié)合多肽家族，其特征為由連接肽相連的兩個EF-手區(qū)(Schafer等人，r風21:134-140(1996);Zimmer等人，to/"紋》w7/.，37:417—429(1995);Rammes等人，/.，272:9496—9502(1997);Lugering等人，i""r,/,/i7reW.，25:659-664(1995))。盡管S100/鉤粒蛋白缺少信號肽，但早就知道它們可以進入細胞外間隙，特別是在慢性免疫/炎性應答的部位，如在嚢性纖維病和類風濕性關(guān)節(jié)炎中。RAGE是S100/鈣粒蛋白家族中許多成員的受體，介導它們對細胞例如淋巴細胞和單核吞噬細胞的促炎癥作用。此外，對于遲發(fā)型超敏反應應答、IL-10缺陷小鼠中的結(jié)腸炎、膠原誘導型關(guān)節(jié)炎以及實驗性自身免疫性腦炎模型的研究還提示，RAGE-配體相互作用(推測與S100/鉤粒蛋白)在炎癥級聯(lián)中具有接近的作用。I型糖尿病是可以通過用本發(fā)明的RAGE融合蛋白治療進行預防或改善的自身免疫病癥。例如，已顯示，sRAGE可以允許脾細胞從非肥胖糖尿病(non-obesediabetic,NOD)小鼠轉(zhuǎn)移至具有重癥聯(lián)合免疫缺陷的NOD-小鼠(NOD-scid小鼠)。NOD-scid小鼠并不自發(fā)地顯示出糖尿病，而需要能夠破壞胰島細胞的免疫細胞的存在，從而使得糖尿病隨后被誘導?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)，與未用sRAGE治療的NOD-scid受者相比較，用sRAGE治療的NOD-scid受體顯示出減少的由轉(zhuǎn)移自糖尿病(NOD)小鼠的脾細胞所誘導的糖尿病發(fā)作(美國專利公開2002/0122799)。如由本發(fā)明人在該專利公開中所述，在這種模型中使用sRAGE的實驗結(jié)果與人疾病例如其中未來的免疫療法和胰島移植可能發(fā)生的臨床情況相關(guān)。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以用于治療與器官、組織或多個細胞中的至少一種從第一個位點移植至第二個位點相關(guān)的炎癥。所述第一個和第二個位點可以在不同受試者中，或在相同受試者中。在備選的實施方案中，所述經(jīng)移植的細胞、組織或器官包括胰腺、皮膚、肝、腎、心臟、肺、骨髓、血液、骨、肌肉、內(nèi)皮細胞、動脈、靜脈、軟骨、甲狀腺、神經(jīng)系統(tǒng)或干細胞的細胞。例如，本發(fā)明的RAGE融合蛋白的施用可以用于促進胰島細胞從第一個非糖尿病受試者移植至第二個糖尿病受試者。在另一個實施方案中，本發(fā)明可以提供通過給受試者施用治療有效量的本發(fā)明的RAGE融合蛋白來治療骨質(zhì)疏松癥的方法。(Zhou等人，/,^77.，203:1067-1080(2006))。在一個實施方案中，所述治療骨質(zhì)疏松癥的方法可以進一步包括增加受試者的骨密度或者降低受試者的骨密度減少速率的步驟。因此，在各種所選擇的實施方案中，本發(fā)明可以提供通過對受試者施用治療有效量的本發(fā)明RAGE融合蛋白來抑制受試者中AGE與RAGE相互作用的方法。利用本發(fā)明RAGE融合蛋白治療的受試者可以是動物。在一個實施方案中，受試者是人。受試者可以患有AGE相關(guān)的疾病，例如糖尿病，糖尿病并發(fā)癥例如腎病、神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜病、足部潰瘍、淀粉樣變性或腎衰竭，以及炎癥?；蛘?，受試者可以是患有阿爾茨海默病的個體。在一個備選的實施方案中，受試者可以是患有癌癥的個體。在另外其他的實施方案中，受試者可以患有全身性紅斑狼瘡或炎性狼瘡腎炎。其他疾病可以由RAGE介導，并因此可以使用本發(fā)明的RAGE融合蛋白進行治療。因此，在本發(fā)明的另外的備選的實施方案中，RAGE融合蛋白可以用于治療人或動物受試者中的克羅恩病、關(guān)節(jié)炎、脈管炎、腎病、視網(wǎng)膜病和神經(jīng)病變。在其他實施方案中，涉及自身免疫應答(例如，自身排斥)和非自身免疫應答(例如，非自身排斥)的炎癥可以由RAGE介導，并因此可以使用本發(fā)明的RAGE融合蛋白進行治療。治療有效量可以包括能夠阻止受試者中RAGE與AGE或其他類型的內(nèi)源性RAGE配體相互作用的量。相應地，所述量將依被治療的受試者而改變。化合物的施用可以是每小時1次、每天1次、每周1次、每月l次、每年l次或作為單獨事件。在各種備選的實施方案中，RAGE融合蛋白的有效量范圍可以是約1ng/kg體重-約100mg/kg體重，或約10jag/kg體重-約50mg/kg體重，或約100jig/kg體重-約20mg/kg體重。利用本領(lǐng)域的標準方法，通過劑量/響應測定法可以確定實際的有效量(Johnson等人，"/We^y.42:1179，(1993))。因此，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，有效量可以取決于化合物的生物利用度、生物活性和生物降解性。組合物本發(fā)明可以包括包含與藥物學上可接受的栽體混合的本發(fā)明RAGE融合蛋白的組合物。RAGE融合蛋白可以包含與第二種非RAGE多肽連接的RAGE多肽。在一個實施方案中，RAGE融合蛋白可以包含RAGE配體結(jié)合位點。在一個實施方案中，配體結(jié)合位點包含RAGE融合蛋白的最N-末端結(jié)構(gòu)域。RAGE配體結(jié)合位點可以包含RAGE的V結(jié)構(gòu)域或其部分。在一個實施方案中，RAGE配體結(jié)合位點包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:10或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:47或與其至少90%同一的序列。在另一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDNO:1的氨基酸22-51。在另一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDNO:1的氨基酸23-51。在另一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDNO:l的氨基酸31-51。在另一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDNO:1的氨基酸31-116。在一個實施方案中，RAGE多肽可以與包含免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的部分(例如其片段)的多肽連接。在一個實施方案中，包含免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的多肽包含人IgG的CH2或CH3結(jié)構(gòu)域中至少一個的至少一部分。RAGE蛋白或多肽可以包含全長的人RAGE(例如，SEQIDNO:1)或人RAGE的片段。在一個實施方案中，RAGE多肽不包含任何信號序列殘基。RAGE的信號序列可以包含全長RAGE(SEQIDNO:l)的殘基1-22或殘基1-23。在備選的實施方案中，RAGE多肽可以包含與人RAGE至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%同一的序列或其片段。例如，在一個實施方案中，RAGE多肽可以包含以甘氨酸而不是甲硫氨酸作為第一個殘基的人RAGE或其片段(參見，例如Neeper等人，(1992))?；蛘?，人RAGE可以包含去除信號序列的全長RAGE(例如，SEQIDNO:2或SEQIDNO:3)(圖1A和IB)或那個氨基酸序列的一部分。本發(fā)明的RAGE融合蛋白還可以包含sRAGE(例如SEQIDNO:4)、與sRAGE至少90%同一的多肽或sRAGE片段。例如，RAGE多肽可以包含以甘氨酸而不是甲硫氨酸作為第一個殘基的人sRAGE或其片段(參見，例如Neeper等人，(1992))?；蛘撸薘AGE可以包含去除了信號序列的sRAGE(參見例如，圖IC中的SEQIDNO:5或SEQIDNO:6，或圖16A中的SEQIDNO:45)或那個氨基酸序列的一部分。在其他實施方案中，RAGE蛋白可以包含V結(jié)構(gòu)域(參見例如，圖ID中的SEQIDNO:7或SEQIDNO:8，或圖16A中的SEQIDNO:46)?；蛘?，可以使用與V結(jié)構(gòu)域至少90%同一的序列或其片段。或者，RAGE蛋白可以包含含有部分V結(jié)構(gòu)域的RAGE片段(參見例如，圖ID中的SEQIDNO:9或SEQIDNO:10，或圖16A中的SEQIDNO:47)。在一個實施方案中，配體結(jié)合位點可以包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:10或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:47或與其至少90%同一的序列。在另外一個實施方案中，RAGE片段是合成肽。例如，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-116(SEQIDNO:7)或與其至少90%同一的序列，或人RAGE的氨基酸24-116(SEQIDNO:8)或與其至少90%同一的序列，或其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-116(SEQIDNO:46)或與其至少90%同一的序列，相應于RAGE的V結(jié)構(gòu)域?；蛘?，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸124-221(SEQIDNO:11)或與其至少90%同一的序列，相應于RAGE的CI結(jié)構(gòu)域。在另一實施方案中，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸227-317(SEQIDNO:12)或與其至少90%同一的序列，相應于RAGE的C2結(jié)構(gòu)域?；蛘?，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-123(SEQIDNO:13)或與其至少90%同一的序列，或人RAGE的氨基酸24-123(SEQIDNO:14)或與其至少90%同一的序列，相應于RAGE的V結(jié)構(gòu)域以及下游的域間連接體。或者，RAGE多肽可以包含其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-123(SEQIDNO:48)或與其至少90%同一的序列?；蛘?，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-226(SEQIDNO:17)或與其至少90%同一的序列，或人RAGE的氨基酸24-226(SEQIDNO:18)或與其至少90%同一的序列，相應于V結(jié)構(gòu)域、CI結(jié)構(gòu)域以及連接這兩個結(jié)構(gòu)域的域間連接體?；蛘?，RAGE多肽可以包含其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-226(SEQIDNO:50)或與其90%同一的序列?；蛘?，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-339(SEQIDNO:5)或與其至少90%同一的序列，或人RAGE的24-339(SEQIDNO:6)或與其至少90%同一的序列，相應于sRAGE(即，編碼V、C1和C2結(jié)構(gòu)域以及域間連接體)?；蛘撸琑AGE多肽可以包含其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-339(SEQIDNO:45)或與其至少90%同一的序列。或者，可以利用這些序列中每一個的片段。RAGE融合蛋白可以包含不來源于RAGE或其片段的幾種類型的肽。RAGE融合蛋白的第二種多肽可以包括來源于免疫球蛋白的多肽。重鏈(或其部分)可以來源于任何一個已知的重鏈同種型IgG(y)、IgM(iu)、IgD(5)、IgE(s)或IgA(oc)。此外，重鏈(或其部分)可以來源于任何一個已知的重鏈亞型IgGl(yl)、IgG2(y2)、IgG3(y3)、IgG4(y4)、IgAl(cx1)、IgA2(a2)，或這些同種型或亞型的改變生物學活性的突變。第二種多肽可以包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域或這些結(jié)構(gòu)域中任一或兩者的一部分。作為一個示例實施方案，包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽可以包含SEQIDNO:38或SEQIDNO:40。免疫球蛋白肽可以由SEQIDNO:39或SEQIDNO:41的核酸序列編碼。SEQIDNO:38或SEQIDNO:40中的免疫球蛋白序列還可以由SEQIDNO:52或SEQIDNO:53編碼。免疫球蛋白鏈的Fc部分在體內(nèi)可以是促炎癥的。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的RAGE融合蛋白包含來源于RAGE的域間連接體而不是來源于免疫球蛋白的域間鉸鏈多肽。因此，在一個實施方案中，RAGE融合蛋白可以進一步包含直接與包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其片段的多肽連接的RAGE多肽。在一個實施方案中，CH2結(jié)構(gòu)域或其片段包含SEQIDNO:42。在一個實施方案中，SEQIDNO:42的片段包含去除了前10個氨基酸的SEQIDNO:42。在一個實施方案中，RAGE多肽包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE域間連接體，從而使得RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸連接至域間連接體的N-末端氨基酸，并且RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其片段的多肽的N-末端氨基酸。包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽可以包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域、或這些結(jié)構(gòu)域中的兩者或任一的部分。作為一個示例實施方案，包含人IgGl的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽可以包含SEQIDNO:38或SEQIDNO:40。本發(fā)明的RAGE融合蛋白可以包含單個或多個來自RAGE的結(jié)構(gòu)域。此外，包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的域間連接體的RAGE多肽可以包含全長RAGE蛋白的片段。例如，在一個實施方案中，RAGE融合蛋白可以包含來源于RAGE蛋白的兩個免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域以及來源于人Fc多肽的兩個免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。RAGE融合蛋白可以包含與第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第二個RAGE域間連接體連接的第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第一個域間連接體，從而使得第一個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸連接至第一個域間連接體的C-末端氨基酸，第二個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，以及第二個RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含Ch2免疫球蛋白結(jié)枸域或其片段的多肽的N-末端氨基酸。例如，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-251(SEQIDNO:19)或與其至少90%同一的序列，或人RAGE的氨基酸24-251(SEQIDNO:20)或與其至少90%同一的序列，或其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-251(SEQIDNO:51)或與其至少90%同一的序列，相應于V結(jié)構(gòu)域、CI結(jié)構(gòu)域、連接這兩個結(jié)構(gòu)域的域間連接體以及C1下游的第二個域間連接體。在一個實施方案中，包含SEQIDNO:30或其片段的核酸構(gòu)建體可以編碼四結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白。在另一個實施方案中，包含SEQIDNO:54的核酸構(gòu)建體可以編碼四結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白，其中加入了對于編碼在該序列C-末端處的脯氨酸(CCG至CCC)和甘氨酸(GGT至GGG)的密碼子所進行的沉默堿基變化，以去除接近末端密碼子的隱蔽的RNA剪接位點。備選地，三結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白可以包含一個來源于RAGE的63免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域以及兩個來源于人Fc多肽的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。例如，RAGE融合蛋白可以包含經(jīng)由RAGE域間連接體與包含CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或其片段的多肽的N-末端氨基酸連接的單個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。例如，RAGE多肽可以包含人RAGE的氨基酸23-136(SEQIDNO:15)或與其至少90%同一的序列，或人RAGE的氨基酸24-136(SEQIDNO:16)或與其至少90%同一的序列，或其中Q24環(huán)化從而形成pE的人RAGE的氨基酸24-136(SEQIDNO:49)或與其至少90%同一的序列，相應于RAGE的V結(jié)構(gòu)域以及下游的域間連接體。在一個實施方案中，包含SEQIDNO:31或其片段的核酸構(gòu)建體可以編碼三結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白。在另一個實施方案中，包含SEQIDNO:55的核酸構(gòu)建體可以編碼三結(jié)構(gòu)域的RAGE融合蛋白，其中加入了對于編碼在該序列C-末端處的脯氨酸(CCG至CCC)和甘氨酸(GGT至GGG)的密碼子所進行的沉默堿基變化，以去除接近末端密碼子的隱蔽的RNA剪接位點。RAGE域間連接體片段可以包含天然地位于RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域下游并因此與之連接的肽序列。例如，對于RAGEV結(jié)構(gòu)域，域間連接體可以包含天然地位于V結(jié)構(gòu)域下游的氨基酸序列。在一個實施方案中，連接體可以包含SEQIDNO:21，相應于全長RAGE的氨基酸117-123?；蛘撸B接體可以包含具有天然RAGE序列的另外部分的肽。例如，可以利用包含SEQIDNO:21的上游和下游數(shù)個氨基酸(例如1-3、1-5、或1-10、或1-15個氨基酸)的域間連接體。因此，在一個實施方案中，域間連接體包含SEQIDNO:23，其包含全長RAGE的氨基酸117-136?；蛘?，可以利用從連接體的任何一端刪除例如1、2或3個氨基酸的SEQIDNO:21的片段。在備選的實施方案中，連接體可以包含與SEQIDNO:21或SEQIDNO:23至少70%同一、或80%同一、或90%同一的序列。對于RAGECI結(jié)構(gòu)域，連接體可以包含天然地位于CI結(jié)構(gòu)域下游的肽序列。在一個實施方案中，連接體可以包含SEQIDNO:22，相應于全長RAGE的氨基酸222-251?；蛘?，連接體可以包含具有天然RAGE序列的另外部分的肽。例如，可以利用包含SEQIDNO:22的上游和下游數(shù)個氨基酸(例如l-3、1-5、或1-10、或1-15個氨基酸)的連接體?；蛘撸梢岳脧倪B接體的任何一端刪除例如1-3、1-5、或I-IO、或1-15個氨基酸的SEQIDN0:22的片段。例如，在一個實施方案中，RAGE域間連接體可以包含SEQIDNO:24，相應于氨基酸222-226。或者，域間連接體可以包含SEQIDNO:44，相應于RAGE的氨基酸318-342。藥物學上可接受的載體可以包括任何一種本領(lǐng)域已知的標準的藥物學上可接受的載體。在一個實施方案中，藥物栽體可以是液體，和RAGE融合蛋白或核酸構(gòu)建體可以是溶液形式。在另一實施方案中，藥物學上可接受的載體可以是粉末、凍干粉末或片劑形式的固體。或者，藥物栽體可以是凝膠、栓劑或乳骨。在備選的實施方案中，載體可以包括脂質(zhì)體、微膠囊、聚合物包封的細胞、或病毒。因此，術(shù)語"藥物學上可接受的載體"涵蓋，但不限于，任何一種標準的藥物學上可接受的栽體，例如水、醇、磷酸鹽緩沖鹽水溶液、糖(例如蔗糖或甘露醇)、油或乳狀液例如油/水乳狀液或甘油三脂乳狀液、各種類型的濕潤劑、片劑、包衣片劑以及膠嚢。本發(fā)明RAGE融合蛋白的施用可以釆用各種途徑。因此，本發(fā)明RAGE融合蛋白的施用可以采用腹膜內(nèi)(IP)注射。備選地，RAGE融合蛋白可以口服、鼻內(nèi)或作為氣霧劑施用。在另一實施方案中，施用是靜脈內(nèi)的(IV)。RAGE融合蛋白還可以皮下注射。在另一實施方案中，RAGE融合蛋白的施用是動脈內(nèi)的。在另一實施方案中，施用是舌下的。此外，施用還可以采用定時釋放膠囊。例如，當希望自我給藥時，皮下施用可以用于治療慢性病癥。藥物組合物可以是在無毒的腸胃外可接受的溶劑或媒介物中的無菌注射液形式?？梢圆捎玫目山邮艿拿浇槲锖腿軇┌ㄋ?、林格氏溶液、3-丁二醇、等滲氯化鈉溶液或水性緩沖液，例如，生理學上可接受的檸檬酸鹽、乙酸鹽、甘氨酸、組氨酸、磷酸鹽、tris或琥珀酸鹽緩沖液。注射液可以包含穩(wěn)定劑以防止化學降解和聚集物形成。穩(wěn)定劑可以包括抗氧化劑例如丁基化羥基苯甲醚(BHA)和丁基化羥基甲苯(BHT),緩沖質(zhì)(檸檬酸鹽、甘氨酸、組氨酸)或表面活性劑(聚山梨酯80、泊洛沙姆)。該溶液還可包含抗微生物性防腐劑，例如苯甲醇和對羥基苯甲酸酯。該溶液還可包含表面活性劑以減少聚集，例如聚山梨酯80、泊洛沙姆或本領(lǐng)域已知的其他表面活性劑。該溶液還可包含其他添加劑，例如糖或鹽水，以將組合物的滲透壓調(diào)整至與人類血液相似。藥物組合物可以是無菌凍干粉劑形式，其用稀釋劑重構(gòu)后可用于注射。稀釋劑可以是注射用水、抑菌性注射用水或無菌鹽水。通過將融合蛋白溶液冷凍干燥以產(chǎn)生干燥形式的蛋白質(zhì)，可以生產(chǎn)凍干粉劑。如本領(lǐng)域已知的，與蛋白質(zhì)的液體溶液相比，凍干的蛋白質(zhì)一般具有增加的穩(wěn)定性和更長的保存期。凍干粉劑(塊狀物)可以包含緩沖質(zhì)以調(diào)整pH，所述緩沖質(zhì)例如為生理學上可接受的檸檬酸鹽、乙酸鹽、甘氨酸、組氨酸、磷酸鹽、tris或琥珀酸鹽緩沖質(zhì)。凍干粉劑還可包含冷凍保護劑(lyoprotectant)以維持其物理和化學穩(wěn)定性。通常4吏用的冷凍保護劑是非還原性糖和二糖例如蔗糖、甘露醇或海藻糖。凍千粉劑可以包含穩(wěn)定劑以防止化學降解和聚集物形成。穩(wěn)定劑可以包括，但不限于，抗氧化劑(BHA、BHT)、緩沖質(zhì)(檸檬酸鹽、甘氨酸、組氨酸)或表面活性劑(聚山梨酯80、泊洛沙姆)。凍干粉劑還可包含抗微生物性防腐劑，例如苯甲醇和對羥基苯甲酸酯。凍千粉劑還可包含表面活性劑以減少聚集，例如，但不限于，聚山梨酯80和泊洛沙姆。凍干粉劑還可包含添加劑(例如糖或鹽水)以在對粉末進行重構(gòu)后將滲透壓調(diào)整至與人類血液相似。凍干粉劑還可包含填充劑，例如糖和二糖。注射用的藥物組合物還可以是油性懸浮液的形式。利用上述合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑，根據(jù)已知方法可以配制這種懸浮液。此外，無菌的固定油很方便用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為了這個目的，利用合成的甘油單酯或甘油二酯，可以采用任何溫和的固定油。此外，還可以通過將活性成分懸浮在植物油例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油，或者礦物油例如液體石蠟中來配制油性懸浮液。例如，脂肪酸例如油酸可用于制備注射劑。油性懸浮液可以包含增稠劑例如蜂蠟、固體石蠟或鯨蠟醇。通過添加抗氧化劑例如抗壞血酸可以保存這些組合物。本發(fā)明的藥物組合物還可以是水包油乳狀液或水性懸浮液形式。油相可以是植物油例如橄欖油或花生油，或礦物油例如液體石蠟，或其混合物。合適的乳化劑可以是天然存在的樹膠例如阿拉伯膠或黃蓍膠，天然存在的磷脂例如大豆、卵磷脂，以及來源于脂肪酸和己糖醇脫水物的酯或偏酯例如脫水山梨糖醇單油酸酯，和所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇。水性懸浮液還可包含與賦形劑混合的活性化合物。此類賦形劑可以包括懸浮劑例如羥甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或濕潤劑，例如天然存在的磷脂例如卵磷脂，或氧化烯與脂肪酸的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物例如十七乙烯氧鯨蠟醇(heptadecaethyleneoxycetanol),或環(huán)氧乙坑與來源于脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯，或環(huán)氧乙烷與來源于脂肪酸和己糖醇脫水物的偏酯的縮合產(chǎn)物例如聚乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。適合于通過添加水制備水性懸浮液的可分散的粉劑和顆粒可以提供與分散劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混合的活性化合物。合適的防腐劑、分散劑和懸浮劑在上文中得到描述。所述組合物還可以是用于本發(fā)明化合物的直腸給藥的栓劑形式。通過將藥物與合適的非刺激性賦形劑混合可以制備這些組合物，所述賦形劑在常溫下是固體但在直腸溫度下是液體，并因此將會在直腸中熔化以釋放藥物。此類材料包括例如可可脂和聚乙二醇。對于局部使用，可以采用包含本發(fā)明化合物的乳骨、軟骨、膠凍劑、溶液或懸浮液。局部應用還可包括口腔洗劑和漱口劑?？梢允褂煤线m的防腐劑、抗氧化劑例如BHA和BHT、分散劑、表面活性劑或緩沖質(zhì)。本發(fā)明的化合物還可以以脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)的形式施用，例如小單層嚢泡、大單層嚢泡和多層囊泡。脂質(zhì)體可以由各種磷脂例如膽固醇、硬脂胺或磷脂酰膽堿形成。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物可以被修飾以進一步延緩被代謝酶從循環(huán)中清除。在一個實施方案中，所述化合物可以通過共價連接水溶性聚合物進行修飾，所述水溶性聚合物例如為聚乙二醇(PEG)、PEG和聚丙二醇的共聚物、聚乙烯吡咯烷酮或聚脯氨酸、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇等。此類修飾還可以增加化合物在水性溶液中的溶解度。聚合物例如PEG可以與一種或多種反應性氨基殘基、巰基殘基或羧基殘基共價連接。已經(jīng)描述了眾多活化形式的PEG，包括羧酸的活性酯類或碳酸酯衍生物，特別是其中離去基團為下列的那些用于與氨基基團反應的N-羥基琥珀酰亞胺、對硝基苯酚、咪唑或l-羥基-2-硝基苯-3-砜，用于與巰基基團反應的多模態(tài)(multimode)或卣素乙酰基衍生物，以及用于與碳水化合物基團反應的氨基肼或酰肼衍生物。制備可以與本發(fā)明融合蛋白進行使用的蛋白質(zhì)制劑的另外方法在美國專利號6，267，958和5,567，677中得到描述。在本發(fā)明的進一步的方面，可以以輔助治療性處理或與其他已知治療劑的聯(lián)合治療性處理的形式利用本發(fā)明的RAGE融合蛋白。下述為可以與本發(fā)明的RAGE融合蛋白調(diào)節(jié)劑組合使用的佐劑和另外的治療劑的非詳盡列表抗癌劑的藥理學分類1.烷化劑環(huán)磷酰胺、亞硝基脲、卡鉑、順鉑、丙卡巴肼2.抗生素博來霉素、柔紅霉素、多柔比星3.抗代謝藥甲氨蝶呤、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、和細胞毒性癌癥化療治療劑4.植物生物堿長春堿、長春新堿、依托泊苷、紫杉醇5.激素他莫昔芬、醋酸奧曲肽、非那雄胺、氟他胺6.生物應答調(diào)節(jié)劑干擾素、白細胞介素；類風濕性關(guān)節(jié)炎治療的藥理學分類1.止痛劑阿司匹林2.NSAIDs(非甾體抗炎藥)布洛芬、萘普生、雙氯芬酸3.DMARDs(緩解疾病的抗風濕藥)甲氨蝶呤、金制劑、羥氯喹、柳氮磺吡啶4.生物應答調(diào)節(jié)劑，DMARDs:依那西普、英夫利昔單抗、糖皮質(zhì)激素(例如倍可松、甲潑尼龍、倍他米松、潑尼松、地塞米松和氫化可的松)；糖尿病治療的藥理學分類1.磺脲類甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、格列本脲、格列吡嗪2.雙胍類二甲雙胍3.其他的口服藥劑阿卡波糖、曲格列酮4.胰島素；阿爾茨海默病治療的藥理學分類1.膽堿酯酶抑制劑他克林、多奈哌齊2.抗精神病藥氟哌啶醇、硫利達嗪3.抗抑郁藥地昔帕明、氟西汀、曲唑酮、帕羅西汀4.抗驚厥藥卡馬西平、丙戊酸。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物可以包含與單一或多種另外的治療劑相組合的治療有效量的RAGE融合蛋白。除了上述試劑外，下迷治療劑也可以與本發(fā)明的RAGE融合蛋白聯(lián)合使用免疫抑制劑例如環(huán)孢素、他克莫司、雷帕霉素和其他FK-506型免疫抑制劑。在一個實施方案中，本發(fā)明因此可以提供治療RAGE介導的疾病的方法，該方法包括對有此需要的受試者施用與治療劑組合的治療有效量的RAGE融合蛋白，所述治療劑選自烷化劑、抗代謝藥、植物生物堿、抗生素、激素、生物應答調(diào)節(jié)劑、止痛劑、NSAIDs、DMARDs、生物應答調(diào)節(jié)劑(例如，糖皮質(zhì)激素)、磺脲類、雙胍類、胰島素、膽堿酯酶抑制劑、抗精神病藥、抗抑郁藥、抗驚厥藥以及免疫抑制劑(例如環(huán)孢素、他克莫司、雷帕霉素和其他FK-506型免疫抑制劑)。在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明提供了如上所述的本發(fā)明藥物組合物，其進一步包含一種或多種治療劑，所述治療劑選自烷化劑、抗代謝藥、植物生物堿、抗生素、激素、生物應答調(diào)節(jié)劑、止痛劑、NSAIDs、DMARDs、生物應答調(diào)節(jié)劑(例如，糖皮質(zhì)激素)、磺脲類、雙胍類、胰島素、膽堿酯酶抑制劑、抗精神病藥、抗抑郁藥、抗驚厥藥以及免疫抑制劑(例如環(huán)孢素、他克莫司、雷帕霉素和其他FK-506型免疫抑制劑)。實施例在接下來的實施例中進一步舉例說明了本發(fā)明所涵蓋的發(fā)明構(gòu)思的特征和優(yōu)點。實施例1A:RAGE融合蛋白的產(chǎn)生構(gòu)建兩種質(zhì)粒用于表達RAGE-IgG融合蛋白。通過將不同長度的來自人RAGE的5，cDNA序列與來自人IgG(yl)的相同的3，cDNA序列進行連接來構(gòu)建這兩種質(zhì)粒。然后將這些表達序列(即連接產(chǎn)物)插入到pcDNA3.1表達載體(Invitrogen，CA)中。圖2和3中顯示了編碼RAGE融合蛋白編碼區(qū)的核酸序列。對于TTP-4000RAGE融合蛋白，核酸序列1-753(以粗體突出)編碼RAGEN-末端蛋白質(zhì)序列，而核酸序列754-1386編碼IgG蛋白質(zhì)序列(圖2)。對于TTP-3000，核酸序列1-408(以粗體突出)編碼RAGEN-末端蛋白質(zhì)序列，而核酸序列409-1041編碼IgG蛋白質(zhì)序列(圖3)。為了產(chǎn)生RAGE融合蛋白，將包含SEQIDNO:30或SEQIDNO:31的核酸序列的表達載體穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染到CH0細胞中。就由質(zhì)粒所賦予的新霉素抗性挑選出陽性轉(zhuǎn)化子并進行克隆。將通過上清液的Western印跡分析而檢測為高產(chǎn)克隆進行擴增，并利用A蛋白柱通過親和層析純化基因產(chǎn)物。對表達進行優(yōu)化從而使得細胞以約1.3克/升的水平產(chǎn)生重組TTP-4000。實施例IB:RAGE融合蛋白的產(chǎn)生構(gòu)建質(zhì)粒用于表達RAGE-IgG融合蛋白。該質(zhì)粒通過將來自人RAGE的5，cDNA序列與來自人IgG(Yl)的3，cDNA序列連接來構(gòu)建。將PCR用于擴增cDM。此外，在5，末端上，PCR引物添加了來自克隆過程的EcoRI限制酶位點和Kozak共有翻譯起始序列。在3，末端上，PCR引物緊在末端密碼子后添加了XhoI限制位點。在3，末端上，PCR引物還包括了2個沉默堿基變化，其去除接近末端密碼子的在免疫球蛋白部分中的隱蔽的RM剪接位點。編碼脯氨酸的密碼子(基于SEQIDNO:32中的蛋白質(zhì)序列中的編號的殘基409)從CCG變成CCC，和編碼甘氨酸的密碼子(基于SEQIDNO:32中的蛋白質(zhì)序列中的編號的殘基410)從GGT變成GGG。PCR片段用EcoRI和XhoI進行消化，并隨后插入已用MfeI進行消化(以形成與EcoRI相容的末端)和用XhoI進行消化的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(retrovector)質(zhì)粒(pCNS-newMCS-WPRE(newori),可從Gala，Inc.獲得)中。對經(jīng)克隆的質(zhì)粒的插入部分和克隆接頭進行測序以確保在克隆過程中沒有發(fā)生突變。為了產(chǎn)生RAGE-IgG融合蛋白，將包含核酸序列SEQIDNO:54的表達載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染入CHO細胞中。分離的由經(jīng)轉(zhuǎn)染的細胞表達的RAGE融合蛋白TTP-4000的序列通過各種表征研究,皮證實為SEQIDNO:34或SEQIDNO:56或SEQIDNO:34和SEQIDNO:56兩者。因此，由SEQIDNO:32的前23個氨基酸編碼的信號序列被切割，并且N-末端殘基為谷氨酰胺(Q)或焦谷氨酸(pE)或其混合物。表征研究還顯示出在N2和N288(基于SEQIDNO:34或SEQIDNO:56的編號)處的糖基化位點，并且顯示出當在這種重組系統(tǒng)中表達時，RAGE融合蛋白的CH3區(qū)可以通過翻譯后修飾而切除其C-末端殘基。實施例2:測試RAGE-IgGl融合蛋白的活性的方法A.體外配體結(jié)合將已知的RAGE配體以5微克/孔的濃度包被在Maxisorb板表面上。板在4X:孵育過夜。配體孵育后，吸出板中的液體，和在室溫下向板中加入含1%BSA的50mM咪唑緩沖液(pH7.2)這樣的封閉緩沖液并保持l小時。然后吸出板中液體和/或用洗滌緩沖液(20mM咪哇、150mMNaCl、0.05%Tween-20、5mMCaCl2和5mMMgCl2,pH7.2)洗滌。制備起始濃度為1.082mg/mL的TTP-3000(TT3)溶液和起始濃度為370jug/mL的TTP-4000(TT4)溶液。以增加的起始樣品的稀釋度加入RAGE融合蛋白。允許RAGE融合蛋白與固定的配體一起在37"C孵育1小時，孵育后對板進行洗滌并就RAGE融合蛋白的結(jié)合進行檢測。通過添加免疫檢測復合物來檢測結(jié)合，所述免疫檢測復合物包含以1:11，OOO稀釋至最終測定濃度(FAC)為21ng/10(UL的單克隆小鼠抗人IgGl、以1:500稀釋至FAC為500ng/pL的生物素化的山羊抗小鼠IgG以及連接有抗生物素蛋白的堿性磷酸酶。所述復合物與所述固定的RAGE融合蛋白一起在室溫下孵育1小時，隨后對板進行洗滌并加入堿性磷酸酶底物磷酸對硝基苯酯(PNPP)。通過測量PNPP至對硝基苯酚(PNP)的轉(zhuǎn)化，可以量化所述復合物與所述固定的RAGE融合蛋白的結(jié)合，所述轉(zhuǎn)化通過分光光度法在405mn處進行測量。如圖7中圖解說明的，RAGE融合蛋白TTP-4000(TT4)和TTP-3000(TT3)與已知的RAGE配體淀粉樣蛋白-p(Abeta)、S100b(S100)和兩性蛋白(Ampho)特異性地相互作用。在不存在配體時，即僅用BSA包被(BSA或BSA+洗滌)時，吸光度沒有增加而超過由免疫檢測復合物非特異性結(jié)合引起的水平。當?shù)矸蹣拥鞍譖用作標記的配體時，可能需要在測定前預孵育淀粉樣蛋白P。預孵育可以允許淀粉樣蛋白0自聚集成褶狀片形式，因為褶狀片形式的淀粉樣蛋白P可以優(yōu)先與RAGE結(jié)合。RAGE融合蛋白TTP-4000和TTP-3000與RAGE配體之間特異性相互作用的另外證據(jù)在顯示RAGE配體能夠與已知的RAGE配體有效地竟爭結(jié)合RAGE融合蛋白的研究中例證。在這些研究中，如上所述將淀粉樣蛋白-e(A-P)固定在Maxisorb板上并加入RAGE融合蛋白。此夕卜，將RAGE配體與RAGE融合蛋白同時加入到某些孔中。發(fā)現(xiàn)當TTP-4000以123jag/mL存在時(l:3稀釋，圖8)，RAGE配體可以以約25%-30%的程度阻斷TTP-4000(TT4)結(jié)合。當TTP-4000起始溶液以10或30倍進行稀釋時(1:10或1:30)，RAGE融合蛋白與固定的配體的結(jié)合被RAGE配體完全抑制。類似地，當TTP-3000以360ng/mL存在時(1:3稀釋，圖9)，RAGE配體以約50%的程度阻斷TTP-3000(TT3)結(jié)合。當TTP-3000起始溶液以10倍進行稀釋時(1:10)，RAGE融合蛋白與固定的配體的結(jié)合被RAGE配體完全抑制。因此，RAGE融合蛋白與RAGE配體的特異性結(jié)合是劑量依賴性的。此外，如圖8和9中所示，在不存在RAGE融合蛋白時，即只使用免疫檢測復合物("僅復合物")，基本上檢測不到結(jié)合。B.RAGE融合蛋白在基于細胞的測定法中的效用先前的工作已顯示，骨髓THP-1細胞可以響應RAGE配體而分泌TNF-oc。在這個測定中，利用ATCC提供的規(guī)程，在補充有10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)THP-1細胞。在不存在和存在RAGE融合蛋白TTP-3000(TT3)或TTP-4000(TT4)(10pig)、sRAGE(10jag)和人IgG(lOiug)(即，作為陰性對照)的情況下，使用0.1mg/mlSlOOb誘導細胞經(jīng)由RAGE的刺激而分泌TNF-oc。在蛋白質(zhì)加到細胞培養(yǎng)物中之后24小時，利用商業(yè)上可獲得的用于TNF-cc的ELISA試劑盒(R&DSystems,Minneapolis,MN)測量由THP-1細胞分泌的TNF-oc的量。圖IO中的結(jié)果證實，RAGE融合蛋白在這些細胞中抑制S100b/RAGE誘導的TNF-a的產(chǎn)生。如圖10中所示，加入10TTP-3000或TTP-4000RAGE融合蛋白后，由SlOOb(0.1mg/mlFAC)對TNF-a的誘導分別減少了約45%-70%。融合蛋白TTP-4000在阻斷TNF-ct的S100b誘導方面至少與sRAGE—樣有效(圖10)。將IgG單獨加入到經(jīng)S100b刺激的細胞中的實驗顯示了對于TTP-4000和TTP-3000的RAGE序列的抑制特異性。IgG和S100b加入到該測定中顯示與S100b單獨時相同的TNF-oc水平。將IgG單獨加入到經(jīng)S100b刺激的細胞中的實驗顯示了，就RAGE融合蛋白的RAGE序列來說TTP-4000和TTP-3000抑制TNF-ot誘導的特異性。可以看出，在測定中加入IgG即沒有RAGE序列的人IgG(以10jug/孔加入Sig歸人IgG)和S100b顯示與S100b單獨時相同的TNF-ot水平。實施例3:TTP-4000的藥代動力學特性為了確定TTP-4000與人sRAGE比較是否具有更優(yōu)良的藥代動力學特性，對大鼠和非人靈長類給予TTP-4000靜脈內(nèi)(IV)注射(5mg/kg)，并隨后就TTP-4000的存在對血漿進行評估。在這些實驗中，兩只首次用于實驗的雄猴在外周靜脈中接受了單次IV大劑量的TTP-4000(5mg/ml/kg)，隨后為大約1.0毫升UL)的鹽水沖洗(flush)。在按劑量給藥前(即，注射TTP-4000之前)或在按劑量給藥后0.083、0.25、0.5、2、4、8、12、24、48、72、96、120、168、240、288和336小時將血液樣品(大約1.OmL)收集到含肝素鋰的管中。收集后，將管放置在濕水上(最多30分鐘)直至在冷卻(在2-8C)下以MOOxg離心15分鐘。然后將每個收獲的血漿樣品冷凍貯存(-70t:士10"C)直至如實施例6中所述利用ELISA在注射后的不同時間點上就RAGE多肽進行測定。圖11中所示的動力學特性曲線顯示，一旦TTP-4000已使其配體飽和(如在兩個動物中由oc階段的相當陡的斜率所證明的)，它就保持大于300小時的終末半壽期。這個半壽期明顯大于人sRAGE在血漿中的半壽期(一般約2小時)，并提供了對于急性和半慢性適應癥進行單次注射的機會。在圖11中，每條曲線代表在相同實驗條件下的不同的動物。實施例4:TTP-4000Fc激活進行實驗以測量與人IgG相比較RAGE融合蛋白TTP-4000對于Fc受體的激活。通過測量表達Fc受體的THP-1細胞的TNF-a分泌來測量Fc受體的激活。在這些實驗中，用10ng/孔的TTP-4000或人IgG包被96孔板。Fc刺激導致TNF-a分泌。通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)測量TNF-a的量。因此，在這個測定中，根據(jù)ATCC的指導在補充有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中維持骨髓細胞林THP-1(ATTC#TIB-202)。一般地，通過用lOiag/孔的熱聚集的(63匸，30分鐘)TTP-4000或人IgGl預包被孔，經(jīng)由Fc受體刺激來誘導每孔40，000-80，000個細胞分泌TNF-a。利用商業(yè)上可獲得的TNFELISA試劑盒(R&DSystems,Minneapolis,MN#DTAOOC)并根據(jù)用法說明書，在從經(jīng)處理的孔中的24小時細胞培養(yǎng)物收集的上清液之中測量由THP-1細胞分泌的TNF-a的量。結(jié)果顯示于圖12中，其中可以看出TTP-4000產(chǎn)生少于2ng/孔的TNF，和IgG產(chǎn)生大于40ng/孔的TNF。實施例5:TTP-4000的體內(nèi)活性在幾種人類疾病的體內(nèi)模型中將TTP-4000的活性與sRAGE進行比較。A.在再狹窄動物模型中的TTP-4000在再狹窄的糖尿病大鼠模型中評估RAGE融合蛋白TTP-4000，其中涉及在血管損傷21天后測量平滑肌增殖和內(nèi)膜擴張。在這些實驗中，使用標準操作程序在Zucker糖尿病和非糖尿病大鼠中進行左頸總動脈的球嚢損傷(ballooninjury)。在損傷前1天腹膜內(nèi)(IP)施用負荷劑量(3mg/大鼠)的IgG、TTP-4000或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。損傷后每隔1天輸送維持劑量直至第7天(即，在損傷后第1、3、5和7天)。維持劑量對于一個組高至1mg/動物，對于第二個組低至0.3mg/動物。為了測量血管平滑肌細胞(VSMC)增殖，在損傷后4天和21天處死動物。為了測量細胞增殖，4天的動物在安樂死前18、12和2小時接受50mg/kg的溴脫氧尿苷(BrDdU)的腹膜內(nèi)注射。處死后，收獲整個左和右頸動脈。包埋前樣本在Histochoice中l(wèi)&存至少24小時。利用小鼠抗BrdU單克隆抗體進行VSMC增殖的評估。應用熒光標記的山羊抗小鼠二抗。由對治療方案毫不知情的兩名觀測者對每個切片的BrdU-陽性細胞核數(shù)目進行記數(shù)。剩余的大鼠在21天時被處死用于形態(tài)測定分析。由對研究組毫不知情的觀測者利用計算機化的數(shù)字顯微鏡測面積法軟件Image-ProPlus對經(jīng)VanGieson染色法染色的頸動脈連續(xù)切片(相隔5mm)進行形態(tài)測定分析。所有數(shù)據(jù)表示為平均值土SD。使用SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析。使用不成對t檢驗比較連續(xù)變量。P<0.05的值被認為具有統(tǒng)計學顯著性。如圖13A和13B中所示，TTP-4000處理以劑量-響應的方式顯著減少了內(nèi)膜/中膜比以及血管平滑肌細胞增殖。在圖13B中，y軸代表BrdU增殖性細胞的數(shù)目。B.在AD動物模型中的TTP-4000進行實驗以評估TTP-4000在AD小鼠模型中是否能影響淀粉樣蛋白形成和認知障礙。實驗釆用在PDGF-B鏈啟動子控制下表達人Swedish突變型淀粉樣蛋白前體蛋白(APP)的轉(zhuǎn)基因小鼠。隨著時間過去，這些小鼠產(chǎn)生高水平的RAGE配體、淀粉樣蛋白P(AP)。早先，3個月的sRAGE處理已顯示減少了大腦中淀粉樣蛋白斑的形成并且在這個模型中減少了炎性標記物的相關(guān)增加。通過在血小板衍生生長因子B(PDGF-B)鏈基因啟動子控制下將人APP基因(含Swedish和London突變)微注射到小鼠卵細胞中來設(shè)計在這個實驗中使用的APP小鼠(雄性)。小鼠在CS7BL/6背景下產(chǎn)生并由MolecularTherapeuticsInc.培育。讓動物隨意取食并通過兄弟姐妹交配進行維持。從這個構(gòu)建體產(chǎn)生的小鼠在6個月大時開始形成淀粉樣蛋白沉積物。讓動物活6個月，然后維持90天并處死用于定量淀粉樣蛋白。6個月大時開始每隔1天[qod(i.p.)]對APP轉(zhuǎn)基因小鼠施用媒介物或TTP-4000至90天。在實驗結(jié)束時，處死動物并檢查大腦中的AP斑負荷量(即，斑數(shù)目)。使用6個月的對照APP組來確定淀粉樣蛋白沉積物的基線。此外，在研究結(jié)束時，對動物實施行為(Morris水迷宮)分析。調(diào)查者對研究化合物毫不知情。樣品以0.25ml/小鼠/每隔1天的方式給予小鼠。此外，一組小鼠給予200jug/天的人sRAGE。丄淀;j^袢蛋冷y沉積關(guān)于組織學檢查，通過腹膜內(nèi)注射(IP)戊巴比妥鈉(50mg/kg)來麻醉動物。動物經(jīng)頸動脈灌注41C的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)隨后為4%的低聚甲醛。取出大腦并放置在4%的低聚甲醛中過夜。用石蠟處理大腦并進行包埋。獲得IO個穿過大腦的厚度為30ym的連續(xù)切片。在4'C對切片施加一抗過夜(AP肽抗體)以便檢測轉(zhuǎn)基因動物大腦中的淀粉樣蛋白沉積物(Guo等人，/.#e"ro"/,，22:5900-5909(2002))。用Tris緩沖鹽水(TBS)洗滌切片，和加入二抗并在室溫下孵育1小時。洗滌后，如VectorABCElite試劑盒(VectorLaboratories)中所指導的對切片進行孵育，并用二氨基苯甲酸(DAB)染色。在水中停止反應，并在用二甲苯處理后蓋上蓋玻片。用計算機輔助圖像分析系統(tǒng)測定每個切片中的淀粉樣蛋白面積，所述系統(tǒng)由裝備有QuickCapture幀接收卡的PowerMacintosh計算機、架在Olympus顯微鏡上的HitachiCCD照相機以及相機架組成。使用NIHImageAnalysisSoftware,v.1.55。捕獲圖像并測定10個切片上淀粉樣蛋白的總面積。由對處理狀況毫不知情的單名操作者進行所有測量。對切片的淀粉樣蛋白體積進行總計并除以切片總數(shù)，以計算淀粉樣蛋白體積。對于定量分析，利用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)來測量APP轉(zhuǎn)基因小鼠大腦中的人總AP，AP總和A3H2的水平(BiosourceInternational,Camarillo，CA)。如廠商所述，通過鹽酸胍從小鼠大腦中提取AP總和AP卜42并進行定量。這個測定從大腦中提取了總AP肽(溶解的和聚集的)。么"余^然Morris水迷宮測試如下進行在實驗結(jié)束時在Morris水迷宮測試中對所有小鼠進行一次測試。在1.2m開放場所水迷宮中訓練小鼠。池中裝入30cm深的水并保持在25lC。逃離平臺(IO平方厘米)放置在水面下方l厘米。在試驗過程中，從池中移開平臺。在用白幕環(huán)繞以隱藏任何迷宮外線索(extra-mazecue)的池中進行經(jīng)提示的測試。所有動物接受連續(xù)3天的非空間預訓練(NSP)。這些試驗是為了準備動物以用于最終的行為測試作，從而確定找到平臺的記憶保留。這些試驗沒有被記錄，而是僅用于訓練目的。對于訓練和學習研究，為了迷宮外線索去除幕布(這允許鑒別有游泳障礙的動物)。在第1天，將小鼠放置在隱藏的平臺上20秒(試驗l)，對于試驗2-3在水中在距離提示的平臺或隱藏的平臺(試驗4)IO厘米處釋放動物并允許游泳至平臺。在試驗的第2天，隱藏的平臺在池中心或每個四分之一區(qū)的中心之間隨機移動。將動物釋放到池中，隨機面對壁，并允許60秒到達平臺(3次試驗)。在第3次試驗中，動物給予3次試驗，2次用隱藏的平臺而1次用提示的平臺。NSP之后2天，對動物實施最后的行為試驗(Morris水迷宮測試)。對于這些試驗(3次/動物)，將平臺放置在池的一個四分之一區(qū)的中心，并隨機地以面對壁的方式釋放動物。允許動物有60秒(潛伏期，發(fā)現(xiàn)平臺花費的時間)的時間發(fā)現(xiàn)平臺或游泳。在4-6小時的按劑量給藥中測試所有動物，并由對測試組毫不知情的操作者隨機選擇用于測試。結(jié)果表示為平均值±標準差(SD)。利用t-檢驗分析淀粉樣蛋白研究和行為研究中的差異顯著性。在6個月大的APP對照組和TTP-4000處理的動物之間，以及9個月大的APP媒介物處理組和TTP-4000處理組之間進行比較。小于0.05的差異被認為是顯著的。通過獲取每組數(shù)據(jù)的總和并除以比較(即，1，i.P,/6個月的對照-%變化)來確定淀粉樣蛋白和行為的變化百分數(shù)。圖14A和14B顯示，與經(jīng)媒介物和陰性對照人IgGl(IgGl)處理的動物相比，用TTP-4000或小鼠sRAGE處理3個月的小鼠具有較少的AP斑和較少的認知障礙。這個數(shù)據(jù)提示，TTP-4000在轉(zhuǎn)基因小鼠模型中于減少AD病理方面是有效的。還發(fā)現(xiàn)，與sRAGE相似，TTP-4000可以減少炎性細胞因子IL-1和TNF-a(數(shù)據(jù)未顯示)。C.TTP-4000在中風動物模型中的有效性TTP-4000還在疾病相關(guān)的中風動物模型中與sRAGE進行比較。在這個模型中，結(jié)扎小鼠的頸中動脈l小時隨后再灌注23小時，在那時處死小鼠并評估大腦中的梗塞面積。在即將進行再灌注之前用sRAGE或TTP-4000或?qū)φ彰庖咔虻鞍滋幚硇∈?。在這些實驗中，對雄性C57BL/6注射250ja1/小鼠的媒介物或TTP測試品(250ju1/小鼠的TTP-3000、TTP-4000)。在局部缺血開始后1小時，小鼠接受腹膜內(nèi)注射。對小鼠實施1小時的腦缺血，隨后為24小時的再灌注。為了誘導局部缺血，將每只小鼠進行麻醉并通過外部加溫將體溫維持在36-37"C。通過在頸部的中線切口暴露左頸總動脈(CCA)。將微型手術(shù)夾放置在頸內(nèi)動脈(ICA)的起點周圍。用絲線結(jié)扎ECA遠端并進行橫切。將6-O絲線松散地系在ECA殘干周圍。將尼龍縫線的用火燒過而變光的末端輕輕地插入ECA殘干中。將6-0絲線圏在殘干周圍勒緊，并使尼龍縫線向前進入并穿過頸內(nèi)動脈(ICA)，直至其停留在大腦前動脈中，從而堵塞大腦前交通動脈和大腦中動脈。尼龍縫線放置l小時后，將動物再次麻醉，記錄直腸溫度并去除縫線和閉合切口。通過腹膜內(nèi)注射戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉動物并隨后取出大腦，來測定梗塞體積。然后將大腦切成4個穿過梗塞區(qū)的2毫米切片，并在2%的氯化三苯基四氮唑(TTC)中放置30分鐘。此后，將切片放置在4%低聚曱醛中過夜。用計算機輔助圖像分析系統(tǒng)確定每個切片中的梗塞面積，所述系統(tǒng)由裝備有QuickCapture幀接收卡的PowerMacintosh計算機、架在相機架上的HitachiCCD照相機組成。使用NIHImageAnalysisSoftware,v.1.55。捕獲圖寸象并確定所述切片上的梗塞總面積。由對處理狀況毫不知情的單名操作者進行所有測量。對切片的梗塞體積進行總計從而計算出總梗塞體積。結(jié)果表示為平均值土標準差(SD)。利用t-檢驗分析梗塞體積的差異顯著性。如表2中的數(shù)據(jù)所舉例說明的，TTP-4000在限制這些動物的梗塞面積方面比sRAGE更有效，提示TTP-4000由于其在血漿中更佳的半壽期，從而能夠在這些小鼠中維持更大的保護。實施例6:通過ELISA檢測RAGE融合蛋白最初，50jli1RAGE特異性單克隆抗體1HB1011以在1xPBSpH7.3中10mg/mL的濃度經(jīng)由過夜孵育而包被在板上。當準備使用時，用300pL的1x咪唑-Tween洗滌緩沖液將板洗滌3次并用1%BSA封閉。以lOOyL的終體積加入樣品(稀釋的)和標準稀釋度的已知TTP-4000稀釋物。允許樣品在室溫下孵育1小時。孵育后，將板洗滌3次。加入在含1。/。BSA的lxPBS中的山羊抗人IgGl(SigmaA3312)AP綴合物并允許在室溫下孵育1小時。將板洗滌3次。用磷酸對硝基苯酯顯示顏色。實施例7:與RAGE融合蛋白結(jié)合的RAGE配體的定量圖15顯示了TTP-4000與各種固定的已知RAGE配體的飽和結(jié)合曲線。將配體固定在微量滴定板上，并在濃度從0增加到360nM的RAGE融合蛋白存在下進行孵育。利用與堿性磷酸酶綴合的多克隆抗體來檢測RAGE融合蛋白-配體相互作用，所述多克隆抗體對融合嵌合體的IgG部分特異。利用GraphpadPrizm軟件并與RAGE-RAGE配體值的確定文獻值進行相比，從而計算出相對的Kds。HMGlB-兩性蛋白(Ampoterin)，CML-羧曱基賴氨酸，Abeta-淀粉樣蛋白P1-40。實施例8:RAGE融合蛋白預防異基因移植排斥的用途RAGE的阻斷可以被預期阻斷同種異體移植物排斥。這些實驗探究了使用本發(fā)明的RAGE融合蛋白阻斷配體-RAGE相互作用是否將減弱已從健康供體移植到糖尿病動物內(nèi)的胰島細胞的排斥，如通過被移植動物使血糖水平維持在靶濃度下的時間長度所測量的。如本文所討論的，發(fā)現(xiàn)在2種(同種異體和同種同基因)移植動物模型中，給已接受胰島細胞移植物的糖尿病動物施用RAGE融合蛋白(例如，TTP-4000)顯著延遲了高血糖癥的復發(fā)，并因此延遲了移植的胰島細胞的排斥。A.小鼠中的同種異體胰島移植第一組實驗測試了在糖尿病的C57BL/6J(B6)小鼠模型中，RAGE融合蛋白(TTP-4000)的施用是否將調(diào)節(jié)移植的胰島細胞的同種異體排斥和糖尿病的復發(fā)。糖尿病的動物模型通過以200mg/kg單次靜脈內(nèi)注射鏈脲佐菌素(STZ)(SigmaChemicalCo,，St.Louis,MO)來使C57BL/6J(6-8周齡)(B6)小鼠患上糖尿病。BALB/cJ(6-8周齡)(BALB)小鼠充當用于胰島移植的供體，從而提供用于胰島移植物的同種異體-錯配(allo-mismatch)。胰島的分離用氯胺酮HC1/賽拉嗪HC1溶液(Sigma,St.LouisMO)麻醉小鼠(BALB/c)。在導管內(nèi)注射包含1.5mg/ml膠原酶P(RocheDiagnostics,Branchburg，NJ)的3mlHank's平衡鹽溶液(HBSS,Gibco，GrandIslandNY)后，通過手術(shù)獲得胰腺并于37"C消化20分鐘。胰島用HBSS進行洗滌，并使用具有4種不同密度(26%、23%、20%和11%)的Polysucrose400(Cellgro，HerndonVA)通過不連續(xù)梯度離心進行純化。收集在20%和23%層的界面處的組織片段，洗滌，并重懸浮于HBSS中。在倒置顯微鏡下用手挑選不含附著的腺泡、血管和導管組織的獨個胰島，從而產(chǎn)生高度純化的胰島以用于移植。胰島的移植患有鏈脲佐菌素誘導的糖尿病的C57BL/6(B6)小鼠在糖尿病診斷的2天內(nèi)接受胰島移植物。BALB/cJ(6-8周齡)(BALB)小鼠充當用于同種異體胰島移植的供體。對于移植，用輸液裝置挑取來自供體小鼠的500-600個新鮮分離的胰島(即，大約550胰島當量)，并移植到受者右腎的被膜下空間(subcapularspace)內(nèi)。用測試化合物進行處理一旦移植了胰鳥，就施用測試化合物；施用持續(xù)大約60天，這取決于對照動物如何進食。根據(jù)下文的規(guī)程(表3)，給小鼠注射0.25ml磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、在PBS中的TTP-4000、或在PBS中的IgG。表3測試化合物及/或媒介物的施用<table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table>胰島移植物功能的監(jiān)控通過系列血糖測量來監(jiān)控胰島移植物的功能，其中在胰島移植后的前2周每天1次，隨后為其后每隔l天l次。糖尿病的逆轉(zhuǎn)被定義為在2次連續(xù)測量中血糖水平低于200mg/dl。當在2次連續(xù)測量中血糖超過250mg/dl時，確定移植物喪失。結(jié)果顯示于表4中。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table>*值反映了每只動物的移植物喪失的日子，如由增加的血糖水平的復發(fā)所定義的。在圖21中，將施用TTP-4000對于B6小鼠中BALB/c胰島的同種異體移植排斥的影響顯示為Kaplan-Meier累積存活圖?？梢钥闯?，與完全未處理的動物(對照)或者用媒介物(PBS)或(人IgGl)處理的動物相反，對于用TTP-4000處理的動物(組1和3)，在檢測到移植失敗之前的時間方面存在增加。通過使用各種統(tǒng)計學分析(Mantel-CoxLogrank，Breslow-Gehan-Wilcoxon;Tarone-Ware，Peto-Peto-Wilcoxin;和Harrington-Fleming)，對照和TTP-4000(組1和3)之間的差異是顯著的(表5)。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage84</column></row><table>*自由度(DegreesofFreedom)B.在作為自身免疫疾病模型的NOD-小鼠中的胰島移植第二組實驗測試了施用RAGE融合蛋白(即TTP-4000或TTP-3000)是否將調(diào)節(jié)NOD小鼠中的復發(fā)性糖尿病的進程，其中使用同種同基因NOD移植模型。糖尿病的動物模型自發(fā)性自身免疫非肥胖糖尿病小鼠(NOD/UJ)(12-25周齡)充當關(guān)于胰島細胞的受者，而年幼的前驅(qū)糖尿病(pre-diabetic)NOD/LtJ小鼠(6-7周齡)在同種同基因胰島移植中充當供體。如上在部分A(同種異體胰島移植)中所述的，分離出用于移植的胰島。胰島的移植糖尿病NOD/LtJ小鼠在糖尿病診斷的2天內(nèi)接受胰島移植物。用輸液裝置挑取來自供體小鼠的500一600個新鮮分離的胰島(大約550胰島當量)，并移植到右腎的被膜下空間內(nèi)。用測試化合物進行處理一旦移植了胰島，就施用測試化合物，并持續(xù)大約8周。根據(jù)下文的規(guī)程(表6)，給小鼠注射0.25mlPBS、在PBS中的TTP-4000、或在PBS中的TTP-3000。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table>胰島移植物功能的監(jiān)控通過系列血糖測量來監(jiān)控胰島移植物的功能，其中在胰島移植后的前2周每天1次，隨后為其后每隔l天l次。糖尿病的逆轉(zhuǎn)被定義為在2次連續(xù)測量中血糖低于200mg/dl。當在2次連續(xù)測量中血糖超過25Qmg/dl時，測定移植物喪失百分比。結(jié)果顯示于表7中。表7在NOD小鼠中，TTP-4000和TTP-3000對于同種同基因胰島移植中的復發(fā)性糖尿病的影響*<table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table>*值反映了每只動物的移植物喪失的日子，如由增加的血糖水平的復發(fā)所定義的。在圖22中，將施用TTP-4000對于糖尿病NOD小鼠中同種同基因移植的胰島的排斥的影響顯示為Kaplan-Meier累積存活圖。如表7的數(shù)據(jù)中所顯示的，與完全未處理的動物(對照)相反，對于用TTP-4000(組1)和TTP-3000(組2)處理的動物，在檢測到移植失敗之前的時間方面存在增加。圖22顯示了對于用TTP-4000處理的動物(組1)和完全未處理的動物，在檢測到移植失敗之前的時間方面的增加。通過Y吏用各種統(tǒng)計學分沖斤(Mantel-CoxLogrank，Breslow-Gehan-Wilcoxon;Tarone-Ware，Peto-Peto-Wilcoxin;Harrington-Fleming),對照和TTP-4000(組1)以及對照和TTP-3000(組2)之間的差異是顯著的(表8)。表8統(tǒng)計學方法<table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table>*自由度以上所述被視為僅例證本發(fā)明的原則。因為眾多修改和變化對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說將是很容易想到的，所以并不希望將本發(fā)明限制于所顯示和描述的確切實施方案，并且包括在所附權(quán)利要求書范圍內(nèi)的所有合適的修改方案和等價方案均被視為在本發(fā)明的構(gòu)思之內(nèi)。權(quán)利要求1.融合蛋白，其包含直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽的RAGE多肽。2.權(quán)利要求1的融合蛋白，其中所述RAGE多肽包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE域間連接體，從而使得所述RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸連接至所述域間連接體的N-末端氨基酸，并且所述RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽的N-末端氨基酸。3.權(quán)利要求l的融合蛋白，其中所迷RAGE多肽包含配體結(jié)合位點。4.權(quán)利要求3的融合蛋白，其中所述RAGE配體結(jié)合位點包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:IO或與其至少90%同一的序列。5.權(quán)利要求2的融合蛋白，其中包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的域間連接體的所述RAGE多肽包含全長RAGE蛋白的片段。6.權(quán)利要求5的融合蛋白，其進一步包含與第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第二個RAGE域間連接體連接的第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第一個RAGE域間連接體，從而使得第一個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸連接至第一個域間連接體的C-末端氨基酸，第二個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，以及第二個RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸。7.權(quán)利要求6的融合蛋白，其包含氨基酸序列SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34或SEQIDNO:56。8.權(quán)利要求6的融合蛋白，其包含不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:33、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:34、或不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:56。9.權(quán)利要求6的融合蛋白，其中直接與免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分連接的所述RAGE域間連接體包含SEQIDNO:22或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:24或與其至少90%同一的序列。10.權(quán)利要求5的融合蛋白，其包含經(jīng)由RAGE域間連接體與包含CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽的N-末端氨基酸連接的單個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。11.權(quán)利要求10的融合蛋白，其包含氨基酸序列SEQIDNO:35、SEQIDNO:36、SEQIDNO:37或SEQIDNO:57。12.權(quán)利要求10的融合蛋白，其包含不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:36、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:37、或不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:57。13.權(quán)利要求10的融合蛋白，其中直接與免疫球蛋白Ch2連接的所述RAGE連接體包含SEQIDNO:21或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:23或與其至少90%同一的序列。14.分離的核酸序列，其編碼權(quán)利要求1的融合蛋白。15.權(quán)利要求14的分離的核酸序列，其中所述RAGE多肽包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE域間連接體，從而使得所述RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸連接至所述域間連接體的N-末端氨基酸，并且所述RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽的N-末端氨基酸。16.權(quán)利要求15的核酸序列，其包含SEQIDNO:30的序列或其片段，或者SEQIDNO:31的序列或其片段，或者SEQIDNO:54的序列或其片段，或者SEQIDNO:55的序列或其片段。17.表達栽體，其編碼權(quán)利要求l的RAGE融合蛋白。18.權(quán)利要求17的表達載體，其中所述RAGE多肽包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE域間連接體，從而使得所述RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸連接至所述域間連接體的N-末端氨基酸，并且所述RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽的N-末端氨基酸。19.權(quán)利要求17的表達栽體，其包含序列SEQIDNO:30的序列或其片段，或者SEQIDNO:31的序列或其片段，或者SEQIDNO:54的序列或其片段，或者SEQIDNO:55的序列或其片段。20.用權(quán)利要求17的表達載體轉(zhuǎn)染的細胞，從而使得所述細胞表達融合蛋白，所述融合蛋白包含直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽的RAGE多肽。21.用權(quán)利要求17的表達載體轉(zhuǎn)染的細胞，從而使得所述細胞表達RAGE融合蛋白，所述RAGE融合蛋白包含SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO:36、SEQIDNO:37、SEQIDNO:56或SEQIDNO:57中所示的氨基酸序列。22.用權(quán)利要求17的表達載體轉(zhuǎn)染的細胞，從而使得所述細胞表達RAGE融合蛋白，所述RAGE融合蛋白包含不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:33、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:34、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:36、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:37、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:56或者不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:57。23.組合物，其包含治療有效量的權(quán)利要求l的RAGE融合蛋白。24.權(quán)利要求23的組合物，其中所述RAGE多肽包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE域間連接體，從而使得所述RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸連接至所述域間連接體的N-末端氨基酸，并且所述RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽的N-末端氨基酸。25.權(quán)利要求23的組合物，其中所述RAGE多肽包含配體結(jié)合位點。26.權(quán)利要求25的組合物，其中所述RAGE配體結(jié)合位點包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:IO或與其至少90%同一的序列。27.權(quán)利要求24的組合物，其中包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的域間連接體的所述RAGE多肽包含全長RAGE蛋白的片段。28.權(quán)利要求23的組合物，其中所述RAGE多肽包含與第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第二個RAGE域間連接體連接的第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第一個RAGE域間連接體，從而使得第一個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸連接至第一個域間連接體的C-末端氨基酸，第二個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，以及第二個RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸。29.權(quán)利要求28的組合物，其中所述RAGE融合蛋白包含氨基酸序列SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34或SEQIDNO:56。30.權(quán)利要求28的組合物，其中所述RAGE融合蛋白包含不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:33、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:34、或不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:56。31.權(quán)利要求27的組合物，其中所述融合蛋白包含經(jīng)由RAGE域間連接體與包含CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽的N-末端氨基酸連接的單個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。32.權(quán)利要求31的組合物，其中所述RAGE融合蛋白包含氨基酸序列SEQIDNO:35、SEQIDNO:36、SEQIDNO:37或SEQIDNO:57。33.權(quán)利要求31的組合物，其中所述RAGE融合蛋白包含不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SBQIDNO:36、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:37、或不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:57。34.權(quán)利要求23的組合物，其中所述RAGE融合蛋白被配制為可注射的溶、液。35.權(quán)利要求23的組合物，其中所述RAGE融合蛋白被配制為無菌凍干粉劑。36.用于制備權(quán)利要求1的RAGE融合蛋白的方法，其包括將RAGE多肽與包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽共價連接的步驟。37.權(quán)利要求36的方法，其中所述RAGE多肽包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE域間連接體，從而使得所述RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸連接至所述域間連接體的N-末端氨基酸，并且所述RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽的N-末端氨基酸。38.權(quán)利要求36的方法，其中所述RAGE多肽包含配體結(jié)合位點。39.權(quán)利要求38的方法，其中所述RAGE配體結(jié)合位點包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:IO或與其至少90%同一的序列。40.權(quán)利要求37的方法，其中包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的域間連接體的所述RAGE多肽包含全長RAGE蛋白的片段。41.權(quán)利要求40的方法，其中所述RAGE多舦包含與第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第二個RAGB域間連接體連接的第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第一個RAGE域間連接體，從而使得第一個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸連接至第一個域間連接體的C-末端氨基酸，第二個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，以及第二個RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸。42.權(quán)利要求40的方法，其中所述RAGE多肽包含經(jīng)由RAGE域間連接體與包含Ch2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽的N-末端氨基酸連接的單個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。43.權(quán)利要求36的方法，其中所述融合蛋白由重組DNA構(gòu)建體編碼。44.權(quán)利要求36的方法，其進一步包括將所述DNA構(gòu)建體整合到表達載體中的步驟。45.權(quán)利要求44的方法，其進一步包括將所述表達載體轉(zhuǎn)染到宿主細胞內(nèi)。46.用于產(chǎn)生權(quán)利要求1的RAGE融合蛋白的方法，其包括在細胞中表達所述RAGE融合蛋白，其中所述細胞包含編碼所述RAGE融合蛋白的核酸序列。47.權(quán)利要求46的方法，其中所表達的RAGE融合蛋白包含SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO:36、SEQIDNO:37、SEQIDNO:56、SEQIDNO:57的氨基酸序列。48.權(quán)利要求46的方法，其中所表達的RAGE融合蛋白包含不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:33、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:34、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:36、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:37、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:56、或不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:57。49.用于產(chǎn)生RAGE融合蛋白的方法，所述RAGE融合蛋白包含直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽的RAGE多肽，所述方法包括在細胞中表達由權(quán)利要求16的核酸編碼的RAGE融合蛋白。50.權(quán)利要求49的方法，其中所述細胞是哺乳動物細胞。51.權(quán)利要求49的方法，其中所述細胞選自CHO細胞、NSO細胞、HeLa細胞、COS細胞和SP2細胞。52.權(quán)利要求51的方法，所述方法進一步包括培養(yǎng)所述細胞并從其中回收所述蛋白質(zhì)。53.治療受試者中RAGE介導的病癥的方法，其包括給受試者施用權(quán)利要求1的MGE融合蛋白。54.權(quán)利要求53的方法，其中所迷RAGE多肽包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的RAGE域間連接體，從而使得所迷RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸連接至所迷域間連接體的末端氨基酸，并且所述RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至包含免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分的多肽的N-末端氨基酸。55.權(quán)利要求53的方法，其中所述RAGE配體結(jié)合位點包含SEQIDNO:9或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:IO或與其至少90%同一的序列。56.權(quán)利要求54的方法，其中包含與RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域連接的域間連接體的所迷RAGE多肽包含全長RAGE蛋白的片段。57.權(quán)利要求56的方法，其進一步包括與第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第二個RAGE域間連接體連接的第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和第一個RAGE域間連接體，從而使得第一個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第一個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸連接至第一個域間連接體的C-末端氨基酸，第二個域間連接體的N-末端氨基酸連接至第二個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的C-末端氨基酸，以及第二個RAGE域間連接體的C-末端氨基酸直接連接至CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白C2結(jié)構(gòu)域的N-末端氨基酸。58.權(quán)利要求57的方法，其中所述RAGE融合蛋白包含氨基酸序列SEQIDNO:33、SEQIDNO:34或SEQIDNO:56。59.權(quán)利要求57的方法，其中所述RAGE融合蛋白包含不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:33、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:34、或不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:56。60.權(quán)利要求57的方法，其中直接與免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域或其部分連接的所述RAGE域間連接體包含SEQIDNO:22或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:24或與其至少90%同一的序列。61.權(quán)利要求56的方法，其包括經(jīng)由RAGE域間連接體與包含CH2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或部分免疫球蛋白CH2結(jié)構(gòu)域的多肽的N-末端氨基酸連接的單個RAGE免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。62.權(quán)利要求61的方法，其中所述RAGE融合蛋白包含氨基酸序列SEQIDNO:36、SEQIDNO:37或SEQIDNO:57。63.權(quán)利要求61的方法，其中所述RAGE融合蛋白包含不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:36、不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:37、或不含C-末端賴氨酸氨基酸殘基的氨基酸序列SEQIDNO:57。64.權(quán)利要求61的方法，其中直接與免疫球蛋白Ch2結(jié)枸域或其部分連接的所述RAGE域間連接體包含SEQIDNO:21或與其至少90%同一的序列，或者SEQIDNO:23或與其至少90%同一的序列。65.權(quán)利要求53的方法，其中施用方法包括下列之中的至少一種施用給所述受試者靜脈內(nèi)施用、腹膜內(nèi)施用或皮下施用所述RAGE融合蛋白。66.權(quán)利要求53的方法，其中所述融合蛋白用于治療糖尿病的癥狀或糖尿病晚期并發(fā)癥的癥狀。67.權(quán)利要求66的方法，其中所述糖尿病或糖尿病晚期并發(fā)癥的癥狀包括糖尿病性腎病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性足部潰瘍、心血管并發(fā)癥或糖尿病性神經(jīng)病變中的至少一種。68.權(quán)利要求53的方法，其中所述融合蛋白用于治療淀粉樣變性或阿爾茨海默病中的至少一種。69.權(quán)利要求53的方法，其中所述融合蛋白用于治療癌癥。70.權(quán)利要求53的方法，其中所述融合蛋白用于治療炎癥。71.權(quán)利要求53的方法，其中所述融合蛋白用于治療與自身免疫、炎性腸病、類風濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、多發(fā)性硬化癥、缺氧、中風、心臟病發(fā)作、出血性休克、敗血病或傷口愈合不良中的至少一種相關(guān)的炎癥。72.權(quán)利要求71的方法，其中所述自身免疫包括皮膚細胞、胰腺細胞、神經(jīng)細胞、肌細胞、內(nèi)皮細胞、心臟細胞、肝細胞、腎細胞、心臟、骨髓細胞、骨、血細胞、動脈細胞、靜脈細胞、軟骨細胞、甲狀腺細胞或干細胞中的至少一種的排斥。73.權(quán)利要求53的方法，其中所述融合蛋白用于治療腎衰竭。74.權(quán)利要求53的方法，其中所述融合蛋白用于治療與器官、組織或多個細胞中的至少一種從第一個位點移植至第二個位點相關(guān)的炎癥和/或排斥。75.權(quán)利要求74的方法，其中所述第一個和第二個位點在不同的受試者中。76.權(quán)利要求74的方法，其中所述第一個和第二個位點在相同的受試者中。77.權(quán)利要求74的方法，其中所述經(jīng)移植的細胞、組織或器官包括胰腺、皮膚、肝、腎、心臟、骨髓、血液、骨、肌肉、動脈、靜脈、軟骨、甲狀腺、神經(jīng)系統(tǒng)或千細胞的細胞、組織或器官。78.用于預防細胞、組織或器官的移植物排斥的方法，所述方法包括施用治療有效量的權(quán)利要求1的RAGE融合蛋白。全文摘要公開了包含RAGE多肽序列的RAGE融合蛋白，所述RAGE多肽序列與第二種非RAGE多肽連接。RAGE融合蛋白可以利用RAGE多肽結(jié)構(gòu)域，所述RAGE多肽結(jié)構(gòu)域包含RAGE配體結(jié)合位點以及直接與免疫球蛋白C_H2結(jié)構(gòu)域連接的域間連接體。此類融合蛋白可以提供與RAGE配體的特異且高親和力的結(jié)合。還公開了所述RAGE融合蛋白作為RAGE介導的病理學的治療劑的用途。文檔編號C07K14/705GK101410411SQ200780011020公開日2009年4月15日申請日期2007年1月23日優(yōu)先權(quán)日2006年2月9日發(fā)明者A·M·M·米加里,J·C·韋伯斯特,R·羅恩萊因,Y·E·田申請人:轉(zhuǎn)化技術(shù)制藥公司