專利名稱：人表皮生長因子受體特異性融合蛋白的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及DNA重組技術和藥物領域D具體的說，本發(fā)明涉及一種具有人表皮生長因子受體(hEGFR)特異性的融合蛋白，及以該蛋白為活性成分的藥物及在制藥行業(yè)中的應用。
背景技術：
人表皮生長因子(hEGF)是正常人體內(nèi)的一種細胞因子，系一單鏈多肽，由53個氨基酸組成。hEGF是一種作用較廣的促有絲分裂原，具有多種生物學功能。在人乳腺癌、肺癌等實體腫瘤細胞的表面，存在著異常大量的表皮生長因子受體。依據(jù)這已特性，可以利用EGFR的配體或抗體與毒素蛋白融合，研制導向毒素式的抗腫瘤藥物。
人內(nèi)皮抑素是人體內(nèi)正常存在的蛋白，是一種血管生成抑制因子。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種人表皮生長因子受體特異性的融合蛋白，該蛋白可以特異性的進入靶細胞，并將靶細胞殺死。
本發(fā)明的融合蛋白由人表皮生長因子與人內(nèi)皮抑素融合而成，該融合蛋白的編碼基因具有人表皮細胞因子的核苷酸序列及人內(nèi)皮抑素的核苷酸序列。
本發(fā)明的另一目的是提供一種新的以本發(fā)明的融合蛋白為活性成分的抗腫瘤的藥物，特別是乳腺癌、肺癌、及腸癌。
本發(fā)明的又一目的是提供本發(fā)明的融合蛋白在制備抗腫瘤藥物方面的用途。以本發(fā)明的融合蛋白作為活性成分，該藥物用于治療腫瘤。在需要的時候，在上述藥物中還可以含有一種或多種藥物可接受的載體。所述載體包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、填充劑、濕潤劑等。
具體實施例方式
1、 構建融合蛋白
根據(jù)hEGF和人內(nèi)皮抑素基因的序列，分別設計引物，以RT-PCR法擴增出兩者的cDNA,酶切后連接入pET22b,經(jīng)過酶切鑒定及測序分析為正確序列。
2、 融合蛋白表達
所構建的融合蛋白基因轉化大腸桿菌，經(jīng)過IPTG誘導，SDS-PAGE分析，上述融合蛋白在大腸桿菌中髙效表達。
3、 融合蛋白的變性、復性及純化融合蛋白在大腸桿菌中以包涵體形式表達，經(jīng)過超聲破碎，包涵體變性，在復性液中復性，利用層析法獲得純度95%以上的融合蛋白。對該蛋白測序表明，所得到的蛋白
確實為所發(fā)明的目的蛋白。4、觀察融合蛋白對不同腫瘤細胞的生長的抑制作用。
以該融合蛋白分別對幾株不同的腫瘤細胞株作了量效關系實驗，比較融合蛋白對不同腫瘤細胞株體外細胞毒作用。
權利要求
1、一種具有人表皮生長因子受體(hEGFR)特異性的融合蛋白，其特征在于具有人表皮生長因子和人內(nèi)皮抑素的氨基酸序列。
2、 如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于在以人表皮生長因子受體和人內(nèi)皮抑素 融合蛋白為活性成分的抗腫瘤的藥物上的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有人表皮生長因子受體(hEGFR)特異性的融合蛋白，及以該蛋白為活性成分的藥物及在制藥行業(yè)中的應用。本發(fā)明的融合蛋白由人表皮生長因子與人內(nèi)皮抑素融合而成，該融合蛋白的編碼基因具有人表皮細胞因子的核苷酸序列及人內(nèi)皮抑素的核苷酸序列。提供一種新的以本發(fā)明的融合蛋白為活性成分的抗腫瘤的藥物，特別是乳腺癌、肺癌、肝癌及腸癌。
文檔編號C07K19/00GK101469022SQ20071017323
公開日2009年7月1日 申請日期2007年12月26日 優(yōu)先權日2007年12月26日
發(fā)明者峰 李 申請人:上海匯康生物科技有限公司