專利名稱：高純度丹參酮ⅱa的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬丹參酮IIA的制備方法領(lǐng)域，特別是涉及一種高純度丹參酮IIA的制備方法。 背暈玟術(shù)
丹參為唇形科鼠尾草屬植物(SalviamiltiorrhizaBunge)丹參的干燥根部及根莖，具活 血化瘀，涼血消腫，清心除煩之功效。丹參酮IIA (TanshinoneIIA， Tan)結(jié)構(gòu)如圖1，是 丹參中含量較高，是主要的藥效成分之一，對(duì)心腦血管疾病、腫瘤、白血病等具有潛在的 治療作用，已引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視李瑞環(huán)，王玲.丹參酮IIA的藥理研究進(jìn)展.現(xiàn)代中 西醫(yī)結(jié)合雜志，2006,15(23): 3303-3305。
然而作為主要的有效成分之一，丹參酮IIA目前常用的提取分離方法中普遍存在得率 低，溶劑消耗量大，能耗大等問題，主要原因在于工藝流程過長(zhǎng)、后處理方法繁瑣，如文 獻(xiàn)報(bào)道采用一定濃度的乙醇提取獲得浸膏后，用熱水洗去浸膏中的水溶性成分，再通過氧 化鋁柱層析以苯等有機(jī)溶劑洗脫分段切割法等來分離出較純的單體成分王慶偉，楊頻， 張立偉.丹參酮的有效分離.山西大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，1994,17(3》294-298。由于該 方法操作復(fù)雜、步驟多，且使用的溶劑有很強(qiáng)的毒性，既污染環(huán)境，又危害人們的身體健 康，對(duì)于長(zhǎng)時(shí)間做此分離工作的人員有較大的傷害，難以在工業(yè)化生產(chǎn)中應(yīng)用。也有在用 乙醇提取丹參獲得浸膏，再用甲醇溶解除去不溶性雜質(zhì)，將甲醇溶解物采用Sephadex LH-20 分離獲得丹參酮IIA的報(bào)道董蕊，鄭毅男.丹參中丹參酮成分的分離與鑒定.吉林師范大 學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2004,5(2): 100-104，但由于SephadexLH-20材料昂貴、載樣量小， 因此目前多停留在實(shí)驗(yàn)室研究階段。
由于丹參酮中存在丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹參酮I、隱丹參酮等一系列化學(xué)結(jié)構(gòu)極其 相似的化合物，使得丹參酮IIA的純化工作非常困難。然而隨著近年來分子生物學(xué)和細(xì)胞生 物學(xué)的研究進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)丹參酮IIA越來越廣泛、突出的生物活性，如可抑制AngII所誘導(dǎo)的 心肌細(xì)胞的凋亡和肥大謝輝，鄭智.丹參酮IIA對(duì)血管緊張素II誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大、凋 亡的影響.高血壓雜志，2004,12(4): 359、顯著改善自發(fā)性高血壓大鼠的左心室肥厚柳 鋒，鄭智，鐘強(qiáng).丹參酮nA對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠左心室肥厚心肌細(xì)胞凋亡的影響.中華實(shí) 用中西醫(yī)雜志，2004，17(8):1096，對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞氧應(yīng)激所致脂質(zhì)過氧化的抑制作用， 在細(xì)胞水平上表現(xiàn)出顯著的抗肝纖維化效應(yīng)楊偉峰，陳厚昌，夏筆軍.丹參酮IIA對(duì)肝星 狀細(xì)胞增殖及分泌細(xì)胞外基質(zhì)的影響.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2003，19(11): 1191以及通過改善腦線
粒體能量代謝、抗氧化作用對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用胡霞敏，周密妹，胡先敏，王 君.丹參酮IIA對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦損傷的保護(hù)作用及對(duì)能量代謝的影響.中國(guó)臨床藥學(xué) 雜志，2006,15(3): 176-179。隨著研究的深入展開，丹參酮IIA的需求會(huì)不斷增加，因此迫 切需要研制出一種低毒、低能耗、高純度、高收率的丹參酮IIA的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高純度丹參酮IIA的制備方法，該方法不僅適合實(shí)驗(yàn)室制備高 純度丹參酮IIA樣品，更適合工業(yè)化生產(chǎn)的要求。
本發(fā)明的高純度丹參酮IIA的制備方法，包括下列步驟
(1) 將藥材丹參根及根莖以醇提取，濃縮析出膠質(zhì)，過濾或離心除去雜質(zhì)；
(2) 加水，得丹參總酮沉淀，過濾干燥；
(3) 將丹參總酮采用正相層析，通過多功能層析系統(tǒng)進(jìn)行分離，洗脫液濃縮，重結(jié)晶， 得高純度丹參酮HA。
所述步驟(1)中的以醇提取是用甲醇或乙醇經(jīng)回流、超聲或滲漉方法提取； 所述步驟(2)中的加水是加水量為1% 99%;
所述多功能層析系統(tǒng)是集回流、柱色譜分離、樣品收集于一體的系統(tǒng)，其中樣品洗脫 采用回流方法，可根據(jù)需要選擇減壓回流及常壓回流，溫度控制在0 60'C，設(shè)備示意圖 見圖2;
所述多功能層析系統(tǒng)的柱色譜分離中的色譜分離溶劑為一種低極性與一種中極性溶 劑的組合，其體積比為99:1 90:10，其中低極性溶劑為石油醚、正己烷或環(huán)己垸中的一 種，中極性溶劑為乙酸乙酯、二氯甲垸或二氯乙烷中的一種；
所述多功能層析系統(tǒng)的柱色譜分離中的色譜材料為硅膠或氧化鋁；
所述步驟(3)中的濃縮是得含量90%-100%的丹參酮11八；
所述步驟(3)中的重結(jié)晶是用乙醇反復(fù)重結(jié)晶；
所述的高純度丹參酮IIA是含量98% 100%丹參酮IIA，該丹參酮IIA可以通過藥劑 學(xué)方法制成注射劑。
本發(fā)明采用的多功能層析系統(tǒng)主要由三部分組成底部溶劑回流裝置、恒壓滴液裝置、 冷凝裝置，為便于說明，以玻璃儀器裝置圖示意說明如下 (1)溶劑回流裝置
該部分既相當(dāng)于加熱引起回流的熱源部分，又相當(dāng)于柱色譜的溶劑接收裝置，主要包 含三部分1A、 1B、 1C，其中1A為裝洗脫溶劑的裝置，在實(shí)驗(yàn)室裝置中可為三頸瓶；1B
為回流洗脫完后溶劑的出口；可以真空抽出，1C為溶劑加入的進(jìn)口。在實(shí)驗(yàn)室操作中回流 的熱源常用水浴，在工業(yè)化生產(chǎn)中可以將1A制造成帶夾層的提取罐，夾層通入蒸汽加熱 形成溶劑回流。
(2) 恒壓滴液裝置
該部分實(shí)際上相當(dāng)于一個(gè)柱色譜系統(tǒng)，主要包含2A、 2A'、 2B、 2C,其中2A、 2A' 為兩個(gè)活塞連接裝置，2A相當(dāng)于層析柱的開關(guān)，2A'處的活塞在回流洗脫后溶劑從1B抽 出時(shí)處于關(guān)閉狀態(tài)，保證真空度；2B為裝填色譜材料的層析系統(tǒng)，可以做成球形、梨形， 目的是增大體積、降低普通柱層析的高度以方便操作，該部分可以裝填硅膠或氧化鋁；2C 為該系統(tǒng)裝填色譜材料的側(cè)方開的進(jìn)口。
(3) 冷凝裝置
該部分在實(shí)驗(yàn)室操作時(shí)可以接一球形冷凝管(3A)，上部通過連接活塞(3B)引入真 空減壓操作，使1A的溶劑加熱在較低溫度下即可形成回流。在工業(yè)化生產(chǎn)中，3A設(shè)備通 常為冷卻塔，3B為經(jīng)冷卻塔接入真空系統(tǒng)的配套連接口。
本發(fā)明的有益效果-
(1) 本發(fā)明工藝過程簡(jiǎn)單、可控，用醇溶液提取丹參藥材繼而通過濃縮后冷卻靜置，除 去膠質(zhì)，加入適當(dāng)量的水得到丹參總酮的沉淀，大大簡(jiǎn)化了操作程序；
(2) 本發(fā)明工藝過程污染小、成本低，本發(fā)明在整個(gè)工藝過程中舍棄了苯、氯仿等毒性 大的溶劑，改用基本無毒的己烷、乙酸乙酯等系統(tǒng)，大大降低了對(duì)操作人員的危害，減少 了環(huán)境污染，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)；
(3) 本發(fā)明分離速度快，生產(chǎn)周期短，采用多功能層析系統(tǒng)使得回流、柱色譜分離、樣 品收集于一體，通過重結(jié)晶，2 3天即可完成一個(gè)生產(chǎn)周期，因此具有很好的應(yīng)用前景。


圖1是丹參酮IIA的結(jié)構(gòu)式；
圖2是實(shí)施例1中提取丹參總酮的流程圖3是本發(fā)明中的多功能層析系統(tǒng)；
圖4是實(shí)施例1中制得的丹參酮IIA的HPLC譜圖5是實(shí)施例2中制得的丹參酮IIA的HPLC譜圖6是實(shí)施例3中制得的丹參酮IIA的HPLC譜圖7是實(shí)施例4中制得的丹參酮IIA的HPLC譜圖8是丹參酮IIA的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限 定的范圍。
實(shí)施例1
1. 丹參總酮的提取
取丹參藥材10kg (直徑約lcm)，加入8倍量95y。乙醇80'C回流提取2h,過濾，藥渣 再加入6倍量95。/。乙醇回流提取2h，過濾，合并濾液，在2"C環(huán)境中靜置24h，析膠，過 濾，濃縮至藥材的8倍量體積，緩緩加水充分?jǐn)嚢枋勾紳舛冗_(dá)到約50%，充分?jǐn)嚢?，然?靜置24h (2'C)，抽濾干燥得到真空總酮，母液再加水沉淀，靜置24h (2'C)抽濾干燥總 酮，總酮得率約1.05%。流程圖見圖3。
2. 丹參酮IIA的分離
將上述過程得到的總酮稱重，得到105g總酮，在球形色譜系統(tǒng)中裝入3倍量的硅膠 (正己垸濕法裝入)，另總酮和硅膠1:1拌樣后上樣，在底部燒瓶中加入適量正己烷和乙 酸乙酯99:1 (體積比)混合溶劑，在真空狀態(tài)下加熱到55'C開始洗脫，使回流速度和液 滴的速度達(dá)到平衡，提取5h后更換溶劑系統(tǒng)比例，以正己垸和乙酸乙酯98:2洗脫，濃縮 洗脫液，用95。/。乙醇反復(fù)重結(jié)晶得到高純度的丹參酮IIA， HPLC外標(biāo)法測(cè)得含量為98.2% (圖4)。
實(shí)施例2
1. 丹參總酮的提取
取丹參藥材20kg(直徑約lcm)，同實(shí)施例1工藝操作，得到丹參總酮238g，得率1.19%。
2. 丹參酮IIA的分離
將上述過程得到的總酮238g,在球形色譜系統(tǒng)中裝入5倍量的硅膠(環(huán)己烷濕法裝入)， 另總酮和硅膠l:l拌樣后上樣，在底部燒瓶中加入適量環(huán)己垸和二氯甲烷98:2 (體積比) 混合溶劑，在真空狀態(tài)下加熱到50'C開始洗脫，使回流速度和液滴的速度達(dá)到平衡，提取 5h后更換溶劑系統(tǒng)比例，以環(huán)己垸和二氯甲烷95:5洗脫，濃縮洗脫液，用95%乙醇反復(fù) 重結(jié)晶得到高純度的丹參酮IIA， HPLC外標(biāo)法測(cè)得含量為99.3。/。(圖5)。
實(shí)施例3
1.丹參總酮的提取
取丹參藥材30kg(直徑約lcm)，同實(shí)施例1工藝操作，得到丹參總酮366g，得率1.22%。 2.丹參酮IIA的分離
將上述過程得到的總酮366g，在梨形色譜系統(tǒng)中裝入6倍量的硅膠(環(huán)己烷濕法裝入)， 另總酮和硅膠l:l拌樣后上樣，在底部燒瓶中加入適量環(huán)己烷和二氯乙烷99:1 (體積比) 混合溶劑，在真空狀態(tài)下加熱到5(TC開始洗脫，使回流速度和液滴的速度達(dá)到平衡，提取 5h后更換溶劑系統(tǒng)比例，以環(huán)己烷和二氯乙烷97:3洗脫，濃縮洗脫液，用95%乙醇反復(fù) 重結(jié)晶得到高純度的丹參酮IIA， HPLC外標(biāo)法測(cè)得含量為98.8% (圖6)。
實(shí)施例4
1. 丹參總酮的提取
取丹參藥材50kg(直徑約lcm)，同實(shí)施例1工藝操作，得到丹參總酮596g，得率1.19%。
2. 丹參酮IIA的分離
將上述過程得到的總酮596g，在梨形色譜系統(tǒng)中裝入6倍量的硅膠(石油醚(沸程 30-60°C)濕法裝入)，另總酮和硅膠l:l拌樣后上樣，在底部燒瓶中加入適量石油醚和二 氯甲烷96:4 (體積比)混合溶劑，加熱到58t:開始回流洗脫，使回流速度和液滴的速度 達(dá)到平衡，提取5h后更換溶劑系統(tǒng)比例，以石油醚和二氯甲烷90:10洗脫，濃縮洗脫液， 用95%乙醇反復(fù)重結(jié)晶得到高純度的丹參酮IIA， HPLC外標(biāo)法測(cè)得含量為98.5% (圖7)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線附圖取丹參酮1IA對(duì)照品30.0mg，精密稱定，加甲醇溶解并定容至25mL, 精密移取上述溶液各1.0mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度即得對(duì)照品溶液。取對(duì) 照品溶液，分別進(jìn)樣2、 4、 6、 8、 10、 20nL，以進(jìn)樣量(嗎)為橫坐標(biāo)X，色譜峰面積 為縱坐標(biāo)Y,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖8)。
權(quán)利要求
1.高純度丹參酮IIA的制備方法，包括下列步驟(1)將藥材丹參根及根莖以醇提取，濃縮析出膠質(zhì)，過濾或離心除去雜質(zhì)；(2)加水，得丹參總酮沉淀，過濾干燥；(3)將丹參總酮采用正相層析，通過多功能層析系統(tǒng)進(jìn)行分離，洗脫液濃縮，重結(jié)晶，得高純度丹參酮IIA。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度丹參酮IIA的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中 的以醇提取是用甲醇或乙醇經(jīng)回流、超聲或滲漉方法提取。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度丹參酮IIA的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中 的加水是加水量為1% 99%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度丹參酮IIA的制備方法，其特征在于所述多功能層析系統(tǒng)是回流、柱色譜分離、樣品收集于一體的系統(tǒng)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的高純度丹參酮IIA的制備方法，其特征在于所述多功能層析系 統(tǒng)中樣品洗脫用回流方法，溫度控制在0 6(TC。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的高純度丹參酮IIA的制備方法，其特征在于所述多功能層析系 統(tǒng)的柱色譜分離中的色譜分離溶劑為一種低極性與一種中極性溶劑的組合，其體積比為 99:1 90:10，其中低極性溶劑為石油醚、正己烷或環(huán)己烷中的一種，中極性溶劑為乙酸 乙酯、二氯甲垸或二氯乙烷中的一種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4或6所述的高純度丹參酮IIA的制備方法，其特征在于所述多功能層 析系統(tǒng)的柱色譜分離中的色譜材料為硅膠或氧化鋁。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度丹參酮IIA的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中 的濃縮是濃縮得含量90%-100%的丹參酮IIA。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度丹參酮IIA的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中 的重結(jié)晶是用乙醇反復(fù)重結(jié)晶。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度丹參酮IIA的制備方法，其特征在于所述的髙純度丹 參酮IIA是含量98% 100%丹參酮IIA。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高純度丹參酮IIA的制備方法，包括(1)將藥材丹參根及根莖以醇提取，濃縮析出膠質(zhì)，過濾或離心除去雜質(zhì)；(2)加水，得丹參總酮沉淀，過濾干燥；(3)將丹參總酮采用正相層析，通過多功能層析系統(tǒng)進(jìn)行分離，洗脫液濃縮，重結(jié)晶，得高純度丹參酮IIA。該方法收率及純度高、成本低，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07J73/00GK101200490SQ20071017225
公開日2008年6月18日 申請(qǐng)日期2007年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月13日
發(fā)明者周長(zhǎng)新, 尹金瑤, 朱志彬, 霞 趙 申請(qǐng)人:上海朗薩醫(yī)藥科技有限公司