專利名稱：一種含胍基雜環(huán)化合物凝血酶抑制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬化學(xué)合成領(lǐng)域，涉及含胍基雜環(huán)化合物抑制劑，具體涉及一種含 胍基雜環(huán)化合物的凝血酶抑制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
血栓栓塞及其并發(fā)癥是導(dǎo)致當(dāng)今社會人們發(fā)病和致死最主要的原因之一。 研究表明，凝血酶在凝血進(jìn)階方面起著非常重要的作用，因此成為研制抗凝藥 物的首選標(biāo)靶。過去數(shù)十年抗凝制劑領(lǐng)域的研究十分活躍，且取得了相當(dāng)大的 進(jìn)展。而對于研發(fā)具有高效、安全和易于口服且令人滿意的藥動和藥代性質(zhì)的 抗凝藥物是近年來該領(lǐng)域的重點(diǎn)和方向。
早期臨床上用于抗凝血治療所使用的藥物如華發(fā)林，肝素或低分子量肝素 以及天然凝血酶抑制劑水蛭素等，由于它們的治療范圍狹窄，不具有專屬性， 或者在使用過程中需要投入大量的監(jiān)護(hù)，且易于引起其它并發(fā)癥等缺點(diǎn)，致使 其應(yīng)用范圍受到了較大的限制。
為了提高抗凝活性和更好的控制凝血酶的產(chǎn)生，許多抗凝策略被應(yīng)用于研 究之中。經(jīng)過多年的不懈努力，人工合成的凝血酶抑制劑作為抗凝血活性研究 已經(jīng)取得許多重大的進(jìn)步，而研發(fā)具有口服生物活性的直接的凝血酶抑制劑業(yè) 已成為該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。目前對此方面所研發(fā)出的凝血酶抑制劑類化合 物已經(jīng)從第一代發(fā)展到了第二代，但它們中只有少數(shù)具有適合的體內(nèi)藥動學(xué)和 藥效學(xué)性質(zhì)，而這正是判斷它們能否進(jìn)一步進(jìn)行臨床研究的重要依據(jù)。
阿加曲班(Argatroban)是首次(19卯年于日本)能夠應(yīng)用于臨床的第 一代凝血酶抑制劑，用來治療動脈栓塞和由急性中風(fēng)而引起的出血。2000年， 阿加曲班已經(jīng)通過了美國FDA認(rèn)證，用來專門治療血小板減少癥。但臨床實(shí) 踐表明，阿加曲班的口服生物利用度較低，只能通過靜脈給藥，且在人體中的 半衰期僅有30min。即使如此，阿加曲班仍然是臨床治療栓塞的首選用藥。具有高選擇性的美拉加群(Melagatran)對溶纖蛋白酶和胰凝乳蛋白酶具有 很好的選擇性，但口服生物利用度不高。因此，將其做成雙前藥——希美加群 (Ximelagatran)，從而提髙了 口服生物利用度。經(jīng)過長期臨床研究，希美加群 可以一天兩次給藥，且不需要監(jiān)護(hù)。它可以用來預(yù)防外科嬌形手術(shù)引發(fā)的靜脈血 栓栓塞，也可作為治療靜脈栓塞的長期輔助性藥物，還可以預(yù)防心臟瓣膜前房的 原纖維的形成，因此成為法國批準(zhǔn)的(2003年12月)第一個(gè)可大量合成的抗凝 制劑。從已經(jīng)報(bào)道的文獻(xiàn)來看，美拉加群和希美加群作為凝血酶抑制劑的臨床療 效是令人滿意的。
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2002年德國的Norbert H. Hauel U Med CAe附.2002, 45， 1757-1766)課題 組報(bào)道了 5tfWr/"gw /"ge狄w'w /Vifl/wa iT( 公司開發(fā)的第二代凝血酶抑制劑 BIBR-953及其雙前藥BIBR-1048的合成
<formula>formula see original document page 6</formula>
BIBR-953及其前藥BIBR-1048作為一種高效、高選擇性的凝血酶抑制劑， 體內(nèi)外試驗(yàn)顯示它與凝血酶具有極高的親和力，并具有良好的體內(nèi)活性前景。 但該路線中以CDI為縮合劑合成關(guān)鍵中間體化合物(i)產(chǎn)率較低，中國專利申請(公開號CN1861596)使用HOBt/EDCI代替CDI，同時(shí)對部分步驟進(jìn)行
優(yōu)化，取得了較好的結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種含胍基雜環(huán)化合物的凝血酶抑制劑。 本發(fā)明的進(jìn)一步目的旨在提供上述凝血酶抑制劑的制備方法。 鑒于BIBR-953通過其氨基端與凝血酶活性位點(diǎn)結(jié)合，本發(fā)明對其氨基端進(jìn)
行優(yōu)化改造，以增強(qiáng)其與凝血酶活性位點(diǎn)的親和力，從而更好的抑制凝血酶產(chǎn)生。
本方法以1,2，5-三取代苯并咪唑?yàn)橹行墓羌埽瑯?gòu)建與凝血酶活性位點(diǎn)高親 和力的堿性基團(tuán)，建立新型、高效、高產(chǎn)率的非手性，非肽類的含胍基雜環(huán)化 合物。
本發(fā)明的更進(jìn)一步目的旨在提供該類化合物的抗凝血酶生成的用途。 本發(fā)明所述的含胍基雜環(huán)化合物凝血酶抑制劑是以取代1，2,5-三取代苯并 咪唑?yàn)橹行墓羌埽哂腥缦陆Y(jié)構(gòu)式
其中，R！為苯基或取代苯基-C6H5, 4-X-C6H4，或者為雜環(huán)類如吡啶或 取代吡啶-C5H4N， 4-CH3-C5H3N， 6- CH3-C5H3N， 6-X-C6H4N; 112為胍基或 取代胍基-NHC(=NH)-NH2, -NHC(=NR，)-NHR"， -CH2-NHC(=NH)-NH2， -CH2 -NHC(-NR，)-NHR"，其中R，， R"為含C廣do的取代基；X為鹵素。
上述含胍基化合物優(yōu)化了帶有以1 ，2，5-三取代苯并咪唑?yàn)橹行墓羌艿幕?物基團(tuán)的結(jié)構(gòu)，從而增強(qiáng)了凝血酶的活性位點(diǎn)與該介導(dǎo)底物的結(jié)合。所述的化 合物對凝血酶的產(chǎn)生具有明顯的抑制作用。
本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
本發(fā)明優(yōu)選具有下述結(jié)構(gòu)I , II ， III， IV， V和VI的化合物<formula>formula see original document page 8</formula>VI
本發(fā)明所述的化合物通過如下的合成方法制備，
其中，特定的合成產(chǎn)物根據(jù)結(jié)構(gòu)式中的編號，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示c
1.制備原料化合物l (其合成方法見國家發(fā)明專利CN1861596):
<formula>formula see original document page 8</formula>
其中R4為苯基或取代苯基-C6H5， 4-X-QH4，或者為雜環(huán)類如吡啶或取代 吡啶-C5H4N， 4-CH3-C5H3N， 6-CH3-C5H3N， 6-X-C6H4N; X為鹵素； 制備含胍基的化合物6 (其合成方法參考^"^m^ 2004,1， 37-42)
<formula>formula see original document page 8</formula>
其中R，為d Cu)的取代基，推薦為芐氧羰基C8H702，苯氧羰基(:711502，
叔丁氧羰基C5H902，正己氧羰基C8H!602或其它。
2.按下述合成路線合成目標(biāo)化合物<formula>formula see original document page 9</formula>
合成目標(biāo)化合物包括下述步驟
(1) 化合物1溶于一種醇溶液，加入鈀碳后，通入氫氣，連續(xù)攪拌10~30h， 過濾，濃縮即得化合物2;或者化合物l溶于一種溶劑中，加入還原劑，連續(xù)攪 拌直至反應(yīng)完全，經(jīng)處理得到化合物2;或者化合物1溶于一種醇溶液，加入催 化劑，通入氣體直至所謂的醇溶液飽和，再通入氫氣，在該氛圍下反應(yīng)直至完全， 過濾，濃縮即得化合物2。
所說的醇溶液是指甲醇，乙醇，叔丁醇，正丁醇，正己醇等，特別是指甲 醇和乙醇。
所說的一種溶劑指醚類溶劑，包括乙醚，甲基叔丁基醚，四氫呋喃等，特 別是指四氫呋喃。
所說的氣體特別指氨氣。
所說的還原劑包括氫化鋰鋁，硼氫化鈉，硼氫化鋰，硼垸四氫呋喃，硼垸 二甲硫醚等，特別指氫化鋰鋁和硼垸四氫呋喃。
所說的催化劑指還原鐵粉，瑞尼鎳，紅鋁(Red-Al)，還原鋅粉等，特別指 瑞尼鎳。
(2) 化合物2溶于一種有機(jī)溶劑中，加入一種有機(jī)堿，再加入化合物6，隨后加入一種無機(jī)鹽。連續(xù)攪拌l~10h，經(jīng)過濾，萃取，濃縮硅膠柱層析后得到化 合物3。
所說的一種有機(jī)溶劑指甲醇，乙醇，二甲亞砜，N，N-二甲基甲酰胺，環(huán)丁 砜，二氯甲烷，三氯甲烷，四氯化碳等，特別是N，N-二甲基甲酰胺或二甲亞砜。
所說的有機(jī)堿指二甲胺，三乙胺，異丙胺，N,N-二異丙基乙胺，叔丁胺， 正丁胺等，特別是N，N-二異丙基乙胺或三乙胺。
所說的一種無機(jī)鹽指高價(jià)金屬氯化物，包括氯化鐵，氯化汞，氯化鈣，氯 化銅等，特別是氯化汞。
(3)化合物3的一種有機(jī)溶液中，加入一種酸，反應(yīng)2 8h，濃縮，堿化即 得化合物4;或者化合物3溶于一種醇溶液，加催化劑，通入氫氣,連續(xù)反應(yīng)3~10h， 經(jīng)過濾，濃縮即得到化合物4。
所說的有機(jī)溶液是指CrC4的氯代烴，或者是甲醇，乙醇，二氧六環(huán)，N,N-二甲基甲酰胺，二甲亞砜等，特別是二氯甲烷或二氧六環(huán)；
所說的酸是有機(jī)酸，特別是三氟乙酸，或者是指酸性氣體，特別是氯化氫。
所說的醇溶液是甲醇，乙醇，叔丁醇，正己醇等，特別是甲醇或乙醇。
所說的催化劑指金屬催化劑，包括鈀，鈷，鐵，鋅等，或者指所述的金屬 催化劑的固載物或合金，包括氫氧化鈀碳，鈀碳，瑞尼鎳，鐵鎳合金，鐵鋅合金 等，特別是鈀碳或氫氧化鈀碳。
(4)化合物4溶于一種醇與水的混合液中，加入無機(jī)堿，攪拌2 10h，加水 稀釋，酸化即有沉淀析出，過濾即得化合物5。
所說的醇特別是指甲醇或乙醇。所說的無機(jī)堿特別指氫氧化鉀，氫氧化鈉或 氫氧化鋰。
同時(shí)，本發(fā)明為了構(gòu)建與苯環(huán)直接連接的胍基基團(tuán)，按照合成化合物l的方 法，合成了化合物7:
I Y02
1) HOBt/EDCI
2) CH3COOH, reflux
COOC2H5
HN^coOH <^OOC2H5
目標(biāo)化合物11的合成路線與上述路線一致:<formula>formula see original document page 11</formula>
(5) 化合物7溶于一種醇溶液，加鈀碳，通入氫氣，連續(xù)反應(yīng)3 10h， 經(jīng)過濾，濃縮即得到化合物8。
所說的醇溶液是甲醇，乙醇，叔丁醇，正己醇等，特別是甲醇或乙醇。
(6) 由化合物8合成化合物9，其與上述條件(2)完全一致。
(7) 由化合物9合成化合物10，其與上述條件(3)完全一致。
(8) 由化合物10合成化合物11，其與上述條件(4)完全一致。 本發(fā)明構(gòu)建了一種與凝血酶活性位點(diǎn)高親和力的堿性基團(tuán)，合成了具有抗凝
效果的化合物，可制備直接凝血酶抑制劑。其突出的優(yōu)點(diǎn)在于合成方法步驟操作 分離簡單，所用的試劑均為常用試劑，路線較短，各步驟產(chǎn)率較高。
本發(fā)明的化合物對凝血酶的產(chǎn)生具有明顯的抑制作用。
本發(fā)明的方法簡單易行，產(chǎn)率較高。制得的化合物所具有的胍基結(jié)構(gòu)能夠更 為有效的與凝血酶的活性位點(diǎn)結(jié)合。所得目標(biāo)化合物經(jīng)過活性測試，具有抑制凝 血酶產(chǎn)生的效果，是一種直接凝血酶抑制劑類化合物。
具體實(shí)施例方式
下面以實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例l
當(dāng)R!為2-吡啶時(shí)，
合成3- ({2-[ (4-氰基-苯亞胺)-亞甲萄-l-亞甲基-l氫-苯并咪唑-5-羰基}-吡啶 -2-亞胺)-丙酸乙酯(1)
將化合物2- (4-氰基-苯氨基)-乙酸(2.32g， 13.2mmo1)溶于80ml DMF 中，加入HOBT (1.96g， 14.5mmo1)，于0°C以下加入EDCI (2.77g， 14.5mmo1) 攪拌10 60min，緩慢升至室溫，加入二胺化合物3- (N， N- (2-吡啶)-[3-氨 基-4-甲胺基-苯甲?；鵠-丙酸乙酯(5.0g， 14.5mmo1)。反應(yīng)2~6h，濃縮，以大 量乙酸乙酯稀釋，飽和食鹽水洗三次，經(jīng)Na2S04干燥后，濃縮，粗產(chǎn)品在60ml 乙酸中回流l,5h，濃縮后，加堿化，用乙酸乙酯萃取(60 mL X3)三次，有 機(jī)相以飽和食鹽水洗一次，經(jīng)Na2S04干燥后，濃縮，粗產(chǎn)品用硅膠柱層析純 化，得到白色固體l(5.8g， 89.6%)。
合成3- ({2-[ (4-氨甲基-苯亞胺)-亞甲基]-l-亞甲基-l氫-苯并咪唑-5-羰基}-吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(2)
將化合物l(5.5g， 11.40mmo1)溶于100ml無水甲醇中，加入催化劑瑞尼 鎳，然后與密閉容器中通入氨氣至溶液飽和，再在通氫氣氛圍下連續(xù)反應(yīng) 2~18h。反應(yīng)完畢，濾去固體物質(zhì)，濾液濃縮后，得白色固體2(5.308， 93%)。
合成3- ({2-[ (4-甲基胍基-苯亞胺)-亞甲基]-l-亞甲基-l氫-苯并咪唑-5-羰基}-吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(4) 推薦如下兩種方法
1)將甲硫基咪基硫酸鹽(l.Og， 7.19mmo1)溶于15ml水中，隨后加入 等體積的二氧六環(huán)和1N的氫氧化鈉溶液10 ml,攪拌數(shù)分鐘后，加入(Boc)20 (7.85g， 35.97mmo1)。反應(yīng)2 10h，直至反應(yīng)完全。濃縮反應(yīng)體系，至有大量 固體析出，濾出固體，加乙酸乙酯溶解，以0。C 70'C的飽和食鹽水洗三次， 有機(jī)相合并后以Na2S04干燥，濃縮，粗產(chǎn)品重結(jié)晶，得白色固體6(1.77g， 88%)。
將化合物2 (3.0g, 6.17mmo1)溶于25ml DMF中，加入0.9ml三乙胺， 攪拌數(shù)分鐘，隨后加入化合物6 (3.68g， 10.30mmo1)，再向體系中加入氯化汞(1.78g, 6.17mrno1)。反應(yīng)2~6h,加水30ml,以乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽 和食鹽水洗三次，以Na2S04干燥，濃縮，粗產(chǎn)品用硅膠柱層析純化，得到白 色固體3(3.64g， 81.1%)。
將化合物2 (2.0g, 2.74mmo1)溶于8ml二氯甲烷，加入16ml三氟乙酸， 攪拌2 5h，反應(yīng)完畢后，旋蒸去反應(yīng)液，殘余加1.5N氨水堿化，蒸干，得粗 產(chǎn)物4,該化合物未經(jīng)進(jìn)一步純化。
2)將甲硫基咪基硫酸鹽(l.Og, 7.19mmo1)溶于15ml水中，加入1N的 氫氧化鈉溶液30 ml和過量碳酸氫鈉，攪拌數(shù)分鐘后，加入Cbz-Cl (3.68g， 21.59mmo1)。反應(yīng)2 5h。加30 ml碳酸氫鈉飽和溶液，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相 以飽和食鹽水洗三次，Na2S04干燥，濃縮，粗產(chǎn)品用硅膠柱層析純化，得到 白色固體6(2.50g， 97%)。
將化合物2 (5.0g， 10.30mmo1)溶于40mlDMF中，加入1.5ml三乙胺， 攪拌數(shù)分鐘，隨后加入化合物6 (3.68g， 10.30mmoD，再向體系中加入氯化汞 (2.79g， 10.30mmo1)。反應(yīng)2~6h，加水50ml，以乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽 和食鹽水洗三次，以Na2S04干燥，濃縮，粗產(chǎn)品用硅膠柱層析純化，得到白 色固體3(6.35g， 82.0%)。
將化合物3 (4.00g, 5.03mmo1)溶于80ml無水甲醇，加腦Pd/C l.Og， 20'C^6(TC下通氫氣反應(yīng)直至完全。濾出固體，濾液濃縮，得白色固體4(2.42g， 91.0%)。
合成3- ({2-[ (4-甲基胍基-苯亞胺)-亞甲基]-l-亞甲基-l氫-苯并咪唑-5-羰基}-吡啶-2-亞胺)-丙酸(5)
將化合物4(0.83g， 1.57mmo1)溶于15ml無水乙醇30mlH20中，加入氫 氧化鈉(180g, 4.71mmo1)，室溫下攪拌3h。加水稀釋，以適量乙酸中和后， 靜置，有沉淀析出，濾去溶液，固體用水，無水乙醇，無水乙醚淋洗，即得到 白色固體5 (0.62 g， 78.8%)。
'HNMR《(300MHz， DMSO國A) : 9.21(br， 1H)， 8.33(m， 1H)， 7.56-7.54(m， 2H), 7.49(s, 1H)， 7.39-7.36(d, 2H)， 7.19-6.97(m, 5H), 6.70-6.68(d， 2H)， 6.33(m, 1H)， 4.52-4.51(d，2H)， 4.08誦4.02(m， 4H)， 3.76(s,3H), 2.25-2.23(t， 2H);ESI-MS(M/z): 501.3 (1VT+1) 實(shí)施例2
當(dāng)R!為2-吡啶時(shí)
合成3- ({2-[ (4-硝基-苯亞胺)-亞甲萄-l-亞甲基-l氫-苯并咪唑-5-羰基}-吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(7)
將化合物2- (4-硝基-苯氨基)-乙酸(3.14g， 15.95mmo1)溶于20ml DMF 中，加入HOBT (2.40g， 17.54mmo1)，于0。C以下加入EDCI (3.35g， 17.54mmo1) 攪拌5 60min，緩慢升至室溫，加入二胺化合物3- (N, N- (2-吡啶)-[3-氨基-4-甲胺基-苯甲酰基]-丙酸乙酯(6.0g， 17.54mmo1)。反應(yīng)2~6h，濃縮，以大量乙 酸乙酯稀釋，飽和食鹽水洗三次，經(jīng)Na2S04干燥后，濃縮，粗產(chǎn)品在30ml乙酸 中回流1.5h，濃縮后，加堿化，用乙酸乙酯萃取G0mL X3)三次，有機(jī)相以 飽和食鹽水洗一次，經(jīng)Na2S04干燥后，濃縮，粗產(chǎn)品用硅膠柱層析純化，得到 白色固體7(4.32g， 53%)。
合成3- ({2-[ (4-氨基-苯亞胺)-亞甲基]-l-亞甲基-l氫-苯并咪唑-5-羰基}-吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(8)
將化合物7(4.32g， 8.61mmol)溶于100ml無水甲醇中，加入10% Pd/C 450mg， 在通氫氣氛圍下連續(xù)反應(yīng)2 10h。反應(yīng)完畢，濾去固體物質(zhì)，濾液濃縮后，得白 色固體8(3.90g, 95%)。
合成3- ({2-[ (4-胍基-苯亞胺)-亞甲基]-l-亞甲基-l氫-苯并咪唑-5-羰基}-吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(10)
將甲硫基咪基硫酸鹽(l.Og, 7.19mmo1)溶于15ml水中，加入1N的氫氧 化鈉溶液30 ml和過量碳酸氫鈉，攪拌數(shù)分鐘后，加入Cbz-Cl( 3.68g， 21.59mmo1)。 反應(yīng)2 5h。加30ml碳酸氫鈉飽和溶液，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相以飽和食鹽水洗 三次，Na2S04干燥，濃縮，粗產(chǎn)品用硅膠柱層析純化，得到白色固體6(2.50g， 97%)。
將化合物8 (4.00g， 8.47mmo1)溶于40mlDMF中，加入1.3ml三乙胺，攪 拌數(shù)分鐘，隨后加入化合物6(3.03g， 8.47mmo1)，再向體系中加入氯化汞(2.30g，8.47mmoi)。反應(yīng)2~6h，加水50ml,以乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽和食鹽水洗 三次，以Na2S04干燥，濃縮，粗產(chǎn)品用硅膠柱層析純化，得到白色固體9(6.11g， 92.6%)。
將化合物9(5.0g， 6.41mmol)溶于100ml無水甲醇，加10%Pd/C l.Og， 20-60 'C下通氫氣反應(yīng)直至完全。濾出固體，濾液濃縮，得白色固體10(2.20g， 73.3%)。
合成3- ({2-[ (4-胍基-苯亞胺)-亞甲基]-l-亞甲基-l氫-苯并咪唑-5-羰基}-吡啶-2-亞胺)-丙酸(11)
將化合物10 (1.5g， 2.91mmo1)溶于25ml無水乙醇50ml H20中，加入氫氧 化鈉G50mg， 8.73mmo1),室溫下攪拌3h。加水稀釋，以適量乙酸中和后，靜 置，有沉淀析出，濾去溶液，固體用水，無水乙醇，無水乙醚淋洗，即得到白色 固體5 (U7g， 83.6%)。
NMR《(300MHz， DMSO-^) : 9.29(br， 1H)， 8,39-8.37(m， 1H)， 7,58-7.41(m， 3H)， 7.19-7.14(3， 6H)， 6.99-6.95 (m， 3H)， 6.80-6.77(d， 2H), 4.54(s， 2H)， 4.20-4.15(t, 2H), 3.79(s，3H)， 2.64-2.90(t, 2H); ESI-MS(M/z): 486.5 (MM) 實(shí)施例3
當(dāng)R!為4-氟-苯基時(shí)，
合成3- ({2-[ (4-甲基胍基-苯亞胺)-亞甲基]-l-亞甲基-l氫-苯并咪唑-5-羰基}-4-氟苯基-2-亞胺)-丙酸 合成方法如實(shí)施例l，
& NMR 5(300MHz， DMSO-^) :7.87(m， 1H) ， 7.54-7.49(m, 2H)， 7.29-7.24(m，4H)， 7.11-7.04(m, 5H)， 6.73-6.71(d， 2H)， 4.60(s,2H)， 4.17-4.15(d, 2H), 4.06-4.01 (t,2H), 3.81(s，3H) ， 2.58-2.53(t， 2H); ESI-MS(M/z): 517.6 (M++1) 實(shí)施例4
當(dāng)R!為4-甲基-2-吡啶時(shí)，
合成3- ({2-[ (4-甲基胍基-苯亞胺)-亞甲萄-l-亞甲基-l氫-苯并咪唑-5-羰基}-4-甲基-吡啶-2-亞胺)-丙酸合成方法如實(shí)施例l,
'H畫R "300MHz， DMSOO : 8.11-8.09(d， 1H)， 7. 47(s, 1H), 7.35-7.33 (d， 1H), 7.17-7.15(d， 1H)， 7.03-6.90(m， 4H), 6.67-6.65(d, 2H)， 4.47(s，2H), 4.05(s, 2H)， 3.97-3.92(t， 2H), 3.72(s, 3H)， 2.22-2.17(t, 2H) ， 2.09(s,3H);
ESI-MS (M/z): 514.3 (M++l)。 實(shí)施例5抗凝血酶活性實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)用化合物為實(shí)施例4中固體粉末，分子量為513.5。
與正常對照組血漿凝固時(shí)間(20.6土0.9秒)相比，該化合物加樣組有極顯著 性差異，結(jié)果分別為l*E-5 (178.8土14.4**), l*E-6 (33.3±2.9**), l*E-7 (20.3 ±0.6)。表明該化合物具有體外的抗凝血酶活性，各劑量組間呈現(xiàn)明顯的量效關(guān) 系。(l*E-6與l*E-7比較P<0.01與生理鹽水對照組相比)經(jīng)初步活性測試，該 化合物具有較強(qiáng)的抗凝血酶活性。
權(quán)利要求
1、一種含呱基雜環(huán)化合物的凝血酶抑制劑，其特征在于其中所述的化合物具有如下結(jié)構(gòu)式其中，R1為苯基或取代苯基-C6H5，4-X-C6H4，或者為雜環(huán)類如吡啶或取代吡啶-C5H4N，4-CH3-C5H3N，6-CH3-C5H3N，6-X-C6H4N；R2為胍基或取代胍基-NHC(＝NH)-NH2，-NHC(＝NR’)-NHR”，-CH2-NHC(＝NH)-NH2，-CH2-NHC(＝NR’)-NHR”，其中R’，R”為含C1～C10的取代基；X為鹵素。
2、按權(quán)利要求1所述的含呱基雜環(huán)化合物的凝血酶抑制劑，其特征在于， 其中所述的含胍基雜環(huán)化合物是具有下述結(jié)構(gòu)I ， II ， III， IV， V和VI的化合 物<formula>formula see original document page 2</formula>
3、權(quán)利要求1所述的含呱基雜環(huán)化合物的凝血酶抑制劑的制備方法，其特征 在于，所述的含胍基雜環(huán)化合物按下述合成路線合成，<formula>formula see original document page 3</formula>其中，化合物1或化合物7經(jīng)催化還原，所得的還原產(chǎn)物直接與胍基試劑耦 合，脫保護(hù)得相應(yīng)的前藥，經(jīng)水解得目標(biāo)化合物。
4、 按權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中以化合物1或7為原 料，在金屬試劑的催化下被還原得到相應(yīng)的伯胺，該氨基與胍基試劑相耦合。
5、 按權(quán)利要求4所述的方法，其中所說的金屬試劑是瑞尼鎳或鈀碳。
6、 按權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中由化合物2或8與胍 基試劑溶于一種有機(jī)溶劑，在堿的作用下發(fā)生反應(yīng)，經(jīng)加水稀釋，萃取，干燥， 濃縮，硅膠柱層析，得R，基團(tuán)保護(hù)的化合物3或9。
7、 按權(quán)利要求6所述的方法，其中所述的堿是叔胺；其中所述的一種有機(jī) 溶劑是N，N-二甲基甲酰胺；其中所述的R'基團(tuán)是叔丁氧羰基或芐氧羰基。
8、 按權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中所述的化合物3在一 種有機(jī)溶液中加酸脫保護(hù)基R',經(jīng)濃縮，堿化，得化合物4。
9、 按權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的有機(jī)溶液是二氯甲垸或二氧六環(huán)； 其中所述的酸是三氟乙酸或酸性氣體氯化氫；其中所述的保護(hù)基R'是叔丁氧羰 基。
10、 按權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中所述的化合物9在金 屬催化劑存在下脫保護(hù)基R'，經(jīng)過濾、濃縮得化合物IO。
11、 按權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的金屬催化劑是鈀碳或氫氧化鈀 碳；其中所述的保護(hù)基R'是芐氧羰基。
12、 按權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中所述的化合物4或 10的乙醇水溶液和氫氧化鈉反應(yīng)，加水稀釋后，酸化后析出固體，經(jīng)過濾、洗 滌得目標(biāo)化合物5或U。
13、 按權(quán)利要求1所述的含呱基雜環(huán)化合物的凝血酶抑制劑，其特征在于所 述的凝血酶抑制劑是一種直接凝血酶抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明屬化學(xué)合成領(lǐng)域，涉及一種含胍基雜環(huán)化合物的凝血酶抑制劑及其制備方法。本發(fā)明構(gòu)建了一種與凝血酶活性位點(diǎn)高親和力的堿性基團(tuán)，合成了具有抗凝效果的具有下結(jié)構(gòu)式的化合物，可制備直接凝血酶抑制劑。本發(fā)明所得目標(biāo)化合物經(jīng)過活性測試，結(jié)果顯示，對凝血酶的產(chǎn)生具有明顯的抑制作用。本發(fā)明的合成方法步驟操作分離簡單，所用的試劑均為常用試劑，路線較短，各步驟產(chǎn)率較高。
文檔編號C07D235/00GK101440085SQ20071017075
公開日2009年5月27日 申請日期2007年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月21日
發(fā)明者遜 孫, 嶺 張, 朱海波, 林國強(qiáng), 王進(jìn)賢, 馬景毅, 魏邦國 申請人:復(fù)旦大學(xué);中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所