專利名稱：喜樹堿衍生物及其制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的抗腫瘤藥物化合物，特別是一種喜樹堿的新衍生物，它們的制備及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
喜樹堿的E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)的化合物中已發(fā)現(xiàn)一些活性與喜樹堿相當(dāng)或更好、毒性比喜樹堿小的新衍生物。其中有的可溶于水，因而適于制成注射劑等使用更方便的劑型。例如，日本第一制藥公司曾用NH2CH2CH2N(CH3)2對(duì)E環(huán)進(jìn)行開環(huán)反應(yīng)，然后再將17-羥基?；玫降囊幌盗蠩環(huán)開環(huán)的新化合物(參見(jiàn)J.P.A，H1131179；CN1126212A)。意大利的Indena S.P.A.公司通過(guò)堿性水解使喜樹堿的E環(huán)開環(huán)生成堿金屬羧酸鹽，再將17-羥基酰基化，也獲得一系列水溶性喜樹堿新衍生物(參見(jiàn)US006,121,277A)。但這些喜樹堿新衍生物的抗腫瘤活性及低毒型仍然不夠理想。
本發(fā)明提供了鏈端含雜環(huán)堿基或氫化雜環(huán)堿基的新的E環(huán)開環(huán)化合物，或進(jìn)一步將這些開環(huán)化合物的17-位上的羥基用不同的酰化試劑進(jìn)行?；幕衔?。這些化合物由于端基上含雜環(huán)堿基(咪唑、吡啶、嘧啶、吡嗪等)或氫化雜環(huán)堿基(哌啶、哌嗪、嗎啉等)且容易與HCl、CF3COOH、RSO3H等形成可溶性鹽，制備簡(jiǎn)單，而且水溶性好、抗癌活性高、毒性小。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種喜樹堿的新衍生物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下 其中R1代表9、10或11-位上的0-3個(gè)相同或不同的取代基，這些取代基選自鹵原子、羥基、烷氧基；如F、Cl、Br、OH、OMe、OEt、-OCH2O-、-OCH2CH2O-等。
R2代表C2-C5的直鏈或支鏈亞烷基；如-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2(CH2)2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-等。R3代表氫原子或R4CO-，R4代表低級(jí)烷基、低級(jí)烷氨基亞烷基或低級(jí)烷氧基亞烷基；如-CH3-CH2CH3、-(CH2)nCH3、-(CH2)nOCH3、-(CH2)nNHCH3、-(CH2)nN(CH3)2等(n＝1-3)Y代表咪唑、吡啶、嘧啶、吡嗪等雜環(huán)堿基或氫化雜環(huán)堿基，如哌啶、哌嗪、嗎啉。
優(yōu)選的化合物是R1代表H、OHR2代表-CH2CH2CH2-R3代表H、R4COR4代表-CH3、-CH2CH3、-(CH2)nNR2Y代表1-咪唑基、1-嗎啉基最優(yōu)選的化合物是R1代表HR2代表-CH2CH2CH2-R3代表H、R4COR4代表-CH3、-CH2CH3Y代表1-咪唑基、1-嗎啉基最優(yōu)選的化合物的化學(xué)名稱是21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-羥基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝H，Y＝1-嗎啉基)；21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-乙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝R4CO，R4＝-CH3，Y＝1-嗎啉基)；21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-丙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝R4CO，R4＝-CH2CH3，Y＝1-嗎啉基)；21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-羥基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝H，Y＝1-咪唑基)；21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-乙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝R4CO，R4＝-CH3，Y＝1-咪唑基)；21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-丙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝R4CO，R4＝-CH2CH3，Y＝1-咪唑基)。
本發(fā)明的化合物是用一系列含雙堿性基團(tuán)的試劑NH2-(CH2)n-Y(Y代表雜環(huán)堿基或氫化雜環(huán)堿基)對(duì)喜樹堿的E環(huán)進(jìn)行開環(huán)反應(yīng)得到的。
制備方法列在以下反應(yīng)式中其中，式(1)代表的化合物是由式(2)定義的喜樹堿(CPT)、10-羥基CPT、10或11-甲氧基CPT等天然物質(zhì)或由半合成的9，10，11-位上含有(1)式中定義的取代基的CPT衍生物經(jīng)式(3)定義的氨解試劑氨解開環(huán)，或進(jìn)一步將17-羥基酯化制備得到，反應(yīng)式如下 式中的R1，R2，R3，R4，Y定義同式(1)化合物。
反應(yīng)式下方的R2和Y代表的化合物是本發(fā)明最優(yōu)選的化合物。
氨解開環(huán)反應(yīng)雖然也可采用不加溶劑直接用過(guò)量的氨解試劑與式(2)定義的CPT衍生物原料反應(yīng)。但因本發(fā)明中使用的氨解試劑沸點(diǎn)較高、不宜用減壓蒸餾的方法除去過(guò)量的氨解試劑，會(huì)給接下來(lái)的產(chǎn)品分離純化帶來(lái)困難，因此采用稍許過(guò)量的氨解試劑與式(2)定義的原料在適當(dāng)?shù)娜軇┲蟹磻?yīng)。反應(yīng)后將反應(yīng)混合物倒入乙醚或石油醚或二者的混合溶劑中，使產(chǎn)物沉淀，濾出的沉淀，進(jìn)一步用柱層析純化得產(chǎn)物。
開環(huán)產(chǎn)物17-位羥基的酯化，可用相應(yīng)的?；瘎?，如酸酐、酰氯或其它相當(dāng)?shù)孽；瘎┰谶拎ぁCC或DMAP催化下進(jìn)行。
例如可將開環(huán)產(chǎn)物與酸酐在吡啶存在下加熱攪拌過(guò)夜，所得反應(yīng)混合物倒入石油醚中，濾出的黃色固體，經(jīng)硅膠柱層析分離，得到很純的?；a(chǎn)物。
本發(fā)明獲得的各種CPT新衍生物與等摩爾藥用許可的各種酸，如鹽酸、甲磺酸或三氟乙酸反應(yīng)，可得各種可溶性鹽。
本發(fā)明還包括用本發(fā)明的喜樹堿衍生物制備的藥物制劑，本發(fā)明的藥物制劑包括藥物有效量的本發(fā)明的喜樹堿衍生物或其生理可接受的鹽，必要時(shí)還可加入藥物可接受的載體，所述制劑采用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備，優(yōu)選的制劑形式為單位劑量的注射用的制劑形式。
以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，說(shuō)明本發(fā)明的有益效果一、XY-8對(duì)體外培養(yǎng)人腫瘤細(xì)胞的抗腫瘤作用1.XY-8體外抗腫瘤活性篩選1.1受試物XY-8(為本發(fā)明實(shí)施例一制備的化合物)合肥中科大生物技術(shù)有限公司提供。陽(yáng)性藥羥基喜樹堿注射液(HCPT)，2ml∶2mg，黃石飛云制藥有限公司，批號(hào)041001。
1.2受試細(xì)胞株選用人肺癌細(xì)胞A549，人低分化胃腺癌細(xì)胞BGC-823，人肝癌細(xì)胞SMMC-7721，人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞HL-60四個(gè)細(xì)胞株。
1.3試驗(yàn)方法取處于指數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)良好的細(xì)胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使貼壁細(xì)胞脫落，計(jì)數(shù)2～4×104個(gè)/ml，制成細(xì)胞懸液。取細(xì)胞懸液接種于96孔板上，180μl/孔，置恒溫CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。換液，加入受試藥物，20μl/孔，培養(yǎng)48小時(shí)。將MTT加入96孔板中，20μl/孔，培養(yǎng)箱中反應(yīng)4小時(shí)。吸去上清液，加入DMSO，150μl/孔，平板搖床上振搖5分鐘。受試物考察三個(gè)濃度(1×10-7，1×10-6，1×10-5mol/L)，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在波長(zhǎng)為570nm處測(cè)定每孔的吸光值，分別計(jì)算各濃度下的細(xì)胞抑制率。
細(xì)胞抑制率％＝(陰性對(duì)照組OD值-藥敏組OD值)/陰性對(duì)照組OD值×100％1.4抗腫瘤活性篩選判斷標(biāo)準(zhǔn)體外抗腫瘤作用篩選中，不同類型受試物的陽(yáng)性作用判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)下表

1.5篩選結(jié)果XY-8對(duì)體外培養(yǎng)人腫瘤細(xì)胞的抗腫瘤作用篩選結(jié)果見(jiàn)表1。其中XY-8對(duì)人低分化胃腺癌細(xì)胞BGC-823有弱效；對(duì)人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞HL-60和人肺癌細(xì)胞A549有強(qiáng)效。
表1.XY-8對(duì)體外培養(yǎng)人腫瘤細(xì)胞的抗腫瘤作用篩選結(jié)果


a抗腫瘤藥物初篩樣本數(shù)n＝32.XY-8對(duì)體外培養(yǎng)人肺癌細(xì)胞A549抑制作用的IC50值2.1受試物XY-8合肥中科大生物技術(shù)有限公司提供。陽(yáng)性藥羥基喜樹堿注射液(HCPT)，2ml∶2mg，黃石飛云制藥有限公司，批號(hào)041001。
2.2受試細(xì)胞株選用人肺癌細(xì)胞A549。
2.3試驗(yàn)方法取處于指數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)良好的細(xì)胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使貼壁細(xì)胞脫落，計(jì)數(shù)2～4×104個(gè)/ml，制成細(xì)胞懸液。取細(xì)胞懸液接種于96孔板上，180μl/孔，置恒溫CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。換液，加入受試藥物，20μl/孔，培養(yǎng)48小時(shí)。將MTT加入96孔板中，20μl/孔，培養(yǎng)箱中反應(yīng)4小時(shí)。吸去上清液，加入DMSO，150μl/孔，平板搖床上振搖5分鐘。受試物考察6個(gè)濃度(1×10-8～1×10-5mol/L)，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在波長(zhǎng)為570nm處測(cè)定每孔的吸光值，分別計(jì)算各濃度下細(xì)胞抑制率，用IC50計(jì)算軟件計(jì)算受試化合物IC50。
細(xì)胞抑制率％＝(陰性對(duì)照組OD值-藥敏組OD值)/陰性對(duì)照組OD值×100％2.4結(jié)果


注每個(gè)樣品IC50復(fù)測(cè)次數(shù)n≥3。
二、XY-8對(duì)小鼠移植性腫瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用1.材料與方法1.1動(dòng)物ICR小鼠50只，雌性，18-22g，由中國(guó)藥科大學(xué)動(dòng)物室提供，合格證號(hào)蘇動(dòng)質(zhì)SCXK(蘇)2002--0011。
1.2瘤種小鼠S180肉瘤和H22肝癌由中科院上海藥物研究所提供。
1.3受試物XY-8合肥中科大生物技術(shù)有限公司提供。陽(yáng)性藥羥基喜樹堿注射液(HCPT)，2ml∶2mg，黃石飛云制藥有限公司，批號(hào)041001。
2.試驗(yàn)方法2.1XY-8對(duì)小鼠S180肉瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用選用生長(zhǎng)良好的7～11天的S180瘤種，接種于小鼠右側(cè)腋部皮下，約4.5～5×106細(xì)胞/只，接種24小時(shí)后隨機(jī)分籠，靜脈給藥，給藥容積為0.4ml/只。受試物XY-8設(shè)10、5、2.5mg/kg三個(gè)劑量組，陽(yáng)性藥HCPT設(shè)8mg/kg，各組于接種后第2、5天給藥。給藥期間每天測(cè)定體重，第8天處死動(dòng)物，稱瘤重，計(jì)算各組平均瘤重，按下公式求出腫瘤抑制率并進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2.2XY-8對(duì)小鼠H22肝癌的實(shí)驗(yàn)治療作用試驗(yàn)方法同S180肉瘤試驗(yàn)，受試物XY-8設(shè)10、5、2.5mg/kg三個(gè)劑量組，陽(yáng)性藥HCPT設(shè)8mg/kg。
3.結(jié)果3.1XY-8對(duì)小鼠S180肉瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用結(jié)果見(jiàn)表4。與生理鹽水對(duì)照組相比，XY-8 10、5、2.5mg/kg三個(gè)劑量組均能顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)(P＜0.01)，其中XY-8 10mg/kg的作用明顯強(qiáng)于HCPT8mg/kg(P＜0.01)。
表4.XY-8對(duì)小鼠S180肉瘤的腫瘤生長(zhǎng)抑制作用(x±sd)

d1、d7接種后第1、7天；**P＜0.01，與生理鹽水組比較；##P＜0.01，與HCPT組比較。
3.2 XY-8對(duì)小鼠H22肝癌的實(shí)驗(yàn)治療作用結(jié)果見(jiàn)表5。與生理鹽水對(duì)照組相比，XY-8 10、5、2.5mg/kg三個(gè)劑量組均能顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)(P＜0.01)，其中XY-8 10、5mg/kg的作用明顯強(qiáng)于HCPT8mg/kg(P＜0.01，P＜0.05)。
表5.XY-8對(duì)小鼠H22肝癌的腫瘤生長(zhǎng)抑制作用(x±sd)

d1、d7接種第1、7天；**P＜0.01，與生理鹽水組比較；#P＜0.05，##P＜0.01，與HCPT組比較。
三、XY-8對(duì)人癌裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用1.目的考察新化合物XY-8對(duì)人癌裸小鼠移植瘤有無(wú)生長(zhǎng)抑制作用及作用強(qiáng)度2.材料與方法2.1受試物新化合物XY-8由合肥中科大生物技術(shù)有限公司提供，為淡黃色粉末，易溶于水，給藥前用生理鹽水配制所需濃度；陽(yáng)性藥羥基喜樹堿注射液(HCPT)，2ml∶2mg，黃石飛云制藥有限公司，批號(hào)041001，每次給藥前用生理鹽水稀釋至所需濃度。
2.2移植瘤選用人肺腺癌A-549裸小鼠移植瘤、人胃腺癌BGC-823裸小鼠移植瘤、人胃腺癌SGC-7901裸小鼠移植瘤，分別由人肺腺癌A-549、人胃腺癌BGC-823和人胃腺癌SGC-7901細(xì)胞株接種于裸小鼠皮下而建立。細(xì)胞接種量為2×106，接種形成移植瘤后再在裸小鼠體內(nèi)傳3代后使用。
2.3動(dòng)物雌性BALB/cA裸小鼠，日齡35-40天，體重18-22g，由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。合格證編號(hào)滬動(dòng)合證字122號(hào)。每組動(dòng)物數(shù)為陰性對(duì)照組10只，給藥組5只。
2.4試驗(yàn)方法取生長(zhǎng)旺盛期的瘤組織剪切成1.5mm3左右，在無(wú)菌條件下，接種于裸小鼠右側(cè)腋窩皮下。裸小鼠移植瘤用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤直徑，待腫瘤生長(zhǎng)至100～300mm3后將動(dòng)物隨機(jī)分組。使用測(cè)量瘤徑的方法，動(dòng)態(tài)觀察被試物抗腫瘤的效應(yīng)。腫瘤直徑的測(cè)量次數(shù)為每周3次，每次測(cè)量同時(shí)還需稱鼠重。給藥組每周靜脈給藥3次，陽(yáng)性對(duì)照組每周靜脈給藥2次，陰性對(duì)照組同時(shí)給等量生理鹽水。
2.5檢測(cè)指標(biāo)及計(jì)算方法(1)腫瘤體積(tumor volume，TV)，計(jì)算公式為TV＝1/2×a×b2其中a、b分別表示長(zhǎng)寬。
(2)相對(duì)腫瘤體積(relative tumor volume，RTV)，計(jì)算公式為RTV＝TVt/TV0。
其中TV0為分籠給藥時(shí)(即d0)腫瘤體積，TVt為每一次測(cè)量時(shí)的腫瘤體積。
(3)相對(duì)腫瘤增殖率T/C(％)，計(jì)算公式為T/C(%)=TRTVCRTV×100]]>
TRTV治療組RTV；CRTV陰性對(duì)照組RTV。
試驗(yàn)結(jié)果以相對(duì)腫瘤增殖率T/C(％)作為抗腫瘤活性的評(píng)價(jià)指標(biāo)。
3.結(jié)果3.1XY-8對(duì)人肺腺癌A-549裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用XY-8對(duì)人肺腺癌A-549的實(shí)驗(yàn)性治療結(jié)果見(jiàn)表6和圖1。XY-8對(duì)人肺腺癌A-549裸小鼠移植瘤有一定的生長(zhǎng)抑制作用。XY-8 2.5、5和10mg/kg劑量組對(duì)A-549的T/C(％)分別為為60.7、103.6和53.6，HCPT 8mg/kg劑量組T/C(％)為71.4。實(shí)驗(yàn)組無(wú)明顯毒副反應(yīng)。
表6.XY-8對(duì)人肺腺癌A-549裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用

d0分籠給藥時(shí)間3.2XY-8對(duì)人胃腺癌BGC-823裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用XY-8對(duì)人胃腺癌BGC-823的實(shí)驗(yàn)性治療結(jié)果見(jiàn)表7和圖2。XY-8對(duì)人胃腺癌BGC-823裸小鼠移植瘤有一定的生長(zhǎng)抑制作用。XY-8 2.5、5和10mg/kg劑量組對(duì)A-549的T/C(％)分別為39.8、36.6和27.3，HCPT 8mg/kg劑量組T/C(％)為37.3。實(shí)驗(yàn)組無(wú)明顯毒副反應(yīng)。
表7.XY-8對(duì)人胃腺癌BGC-823裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用


d0分籠給藥時(shí)間3.3XY-8對(duì)人胃腺癌SGC-7901裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用XY-8對(duì)人胃腺癌SGC-7901的實(shí)驗(yàn)性治療結(jié)果見(jiàn)表8和圖3。XY-8對(duì)人胃腺癌SGC-7901裸小鼠移植廇有一定的生長(zhǎng)抑制作用。XY-8 2.5、5和10mg/kg劑量組對(duì)A-549的T/C(％)分別為82.2、62.5和43.3，HCPT 8mg/kg劑量組T/C(％)為54.8。實(shí)驗(yàn)組無(wú)明顯毒副反應(yīng)。
表8.XY-8對(duì)人胃腺癌SGC-7901裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用

d0分籠給藥時(shí)間其他新喜樹堿衍生物的抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)結(jié)果


其中Aa代表21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-羥基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝H，Y＝1-嗎啉基)，Bam代表21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-乙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝R4CO，R4＝-CH3，Y＝1-嗎啉基)，Ban代表21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-丙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝R4CO，R4＝-CH2CH3，Y＝1-嗎啉基)，Ab代表21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-羥基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝H，Y＝1-咪唑基)，Bbm代表21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-乙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝R4CO，R4＝-CH3，Y＝1-咪唑基)，Bbn代表21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-丙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿(R1＝H，R2＝-CH2CH2CH2-，R3＝R4CO，R4＝-CH2CH3，Y＝1-咪唑基)。
2實(shí)驗(yàn)方法MTT法1.取處于指數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)良好的細(xì)胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使貼壁細(xì)胞脫落，計(jì)數(shù)2～4×10-4個(gè)/mL，制成細(xì)胞懸液。
2.取細(xì)胞懸液接種于96孔板上，180μl/孔，置恒溫CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
3.換液，加入受試藥物，20μl/孔，培養(yǎng)48小時(shí)。
4.將MTT加入96孔板中，20μl/孔，培養(yǎng)箱中反應(yīng)4小時(shí)。
5.吸去上清夜，加入DMSO，150μl/孔，平板搖床上振搖5分鐘。
6.用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在波長(zhǎng)為570nm處測(cè)定每孔的吸光值，并計(jì)算細(xì)胞抑制。
XY-8靜脈給藥對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn)XY-8的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明小鼠靜脈注射(iv)給藥的LD50值為269.7mg/kg。小鼠的中毒癥狀表現(xiàn)為攝食減少，自發(fā)活動(dòng)明顯下降，腹臥，眼瞼下垂，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍，動(dòng)物安靜而亡。最高劑量組給藥3h后即出現(xiàn)動(dòng)物死亡，各劑量組動(dòng)物死亡均發(fā)生在48h內(nèi)，約48小時(shí)后，小鼠活動(dòng)開始增加并恢復(fù)正常。死亡小鼠肉眼尸檢，臟器未見(jiàn)明顯病變。
試驗(yàn)結(jié)果按Bliss法計(jì)算，測(cè)得小鼠iv XY-8的LD50值為269.7mg/kg，其95％的置信限為257.7～280.2mg/kg。


圖1.XY-8對(duì)人肺癌A-549裸小鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制作用圖2.XY-8對(duì)人胃腺癌BGC-823裸小鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制作用圖3.XY-8對(duì)人胃腺癌SGC-7901裸小鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制作用
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例一N-(3-氨基丙基)嗎啉對(duì)CPT的氨解開環(huán)產(chǎn)物(1)Aa的制備105mg(0.3mmol)CPT溶于15ml甲醇，加入1.2當(dāng)量的氨解試劑N-(3-氨基丙基)嗎啉(3)a，于75℃下反應(yīng)14小時(shí)后，體系變澄清，將反應(yīng)混合物倒入乙醚中，析出黃色沉淀，濾出沉淀，用冷乙醚洗滌。由TLC可看出，產(chǎn)物中含有未反應(yīng)的CPT。將產(chǎn)物溶于少量CHCl3，用氧化鋁柱層析分離(洗脫劑∶乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1→4∶1)得純的開環(huán)產(chǎn)物(1)Aa 106mg，產(chǎn)率88％。
IR(KBr)ν1620.61cm-1(-CONH-)。
1HNMR(CDCl3，300MHz)δppm1.07(t，J＝7.20Hz，3H，18-CH3)，1.76(m，2H，19-CH2)，2.25(m，1H，22-CH2)，2.43(m，1H，22-CH2)，2.44(m，6H，22-CH2，and 2x24-CH2)，3.41(m，2H，21-CH2)，3.75(m，4H，2x25-CH2)，4.88(q，JAB＝12.70Hz，2H，17-CH2)，5.04(s，2H，5-CH2)，7.47(t，J＝8.4Hz，1H，10-H)，7.48(s，1H，14-H)，7.56(d，J＝7.20Hz，1H，9-H)，7.67(t，J＝5.20Hz，2H，11-H)，7.87(s，1H，7-H)，7.97(d，J＝8.46Hz，1H，12-H)，8.20(s，1H，NH)。
實(shí)施例二、CPT的氨解開環(huán)產(chǎn)物(1)Aa的17-羥基乙?；a(chǎn)物(1)Bam的制備126mg N-(3-氨基丙基)嗎啉的CPT開環(huán)產(chǎn)物(1)Aa(0.25mmol)溶于2mL(24.8mmol)吡啶中，加入1mL(10.6mmol)乙酸酐，加熱使溫度維持在40℃左右，攪拌過(guò)夜。減壓蒸去溶劑。殘留物用少量的CHCl3溶解，倒入20mL石油醚乙醚等體積比的混合液中，析出沉淀，過(guò)濾，冷乙醚洗滌。再用CHCl3溶解，硅膠柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1→純乙酸乙酯)，得黃色的固體粉末(1)Bam 112mg。產(chǎn)率81.9％。
IR(KBr)ν1733.69cm-1(-CO-CH3)，1620.61cm-1(-CONH-)。
1HNMR(CDCl3，300MHz)δppm1.10(t，J＝7.17Hz，3H，18-CH3)，1.77(m，2H，19-CH2)，2.06(s，3H，-CO-CH3)，2.30(m，1H，22-CH2)，2.52～2.54(m，7H，23-CH2，2x24-CH2，1/2x22-CH2)，3.31～3.42(m，2H，21-CH2)，3.78(d，J＝4.38Hz，4H，25-CH2)，5.15(q，J＝19.41Hz，2H，5-CH2)，5.47(dd，JAB＝11.58Hz，2H，17-CH2)，7.43(t，J＝7.42Hz，1H，10-H)，7.58(s，1H，14-H)，7.63(d，J＝8.11Hz，1H，9-H)，7.69(t，J＝7.23Hz，1H，11-H)，8.04(d，J＝8.34Hz，1H，12-H)，8.14(s，1H，7-H)，8.17(s，1H，NH)實(shí)施例三、CPT的氨解開環(huán)產(chǎn)物(1)Aa的17-羥基丙?；a(chǎn)物(1)Ban的制備150mg(0.30mmol)N-(3-氨基丙基)嗎啉的CPT開環(huán)產(chǎn)物(1)Aa，1.5mL吡啶(18.6mmol)和1mL丙酸酐(7.7mmol)混合加熱至40℃，攪拌過(guò)夜，蒸去低沸點(diǎn)溶劑，剩余物倒入50mL乙醚，析出淡黃色固體，經(jīng)硅膠柱層析進(jìn)一步純化(洗脫劑∶乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1→3∶1)得(1)Bam純產(chǎn)品111mg，產(chǎn)率66.4％。
IR(KBr)ν1729.83cm-1(-COCH2CH3)，1654.52cm-1(-CONH-)1HNMR.(CDCl3，300MHz)δppm1.11(t，J＝7.23Hz，3H，18-CH3)，1.21(t，J＝7.05Hz，3H，-CO-C-CH3)，1.77(m，2H，19-CH2)，2.31(m，1H，1/2x22-CH2)，2.40～2.15(m，1H，1/2x22-CH2)，2.55～2.56(m，6H，23-CH2and 2x24-CH2)，3.32(m，1H，1/2x21-CH2)，3.44(m，1H，1/2x21-CH2)，3.48(q，J＝6.99Hz，2H，-CO-CH2-)，3.79(t，J＝4.50Hz，4H，2x25-CH2)，5.13(q，J＝19.17Hz，2H，5-CH2)，5.47(q，J＝AB＝11.58Hz，2H，17-CH2)，7.45(t，J＝7.41，1H，10-H)，7.57(s，1H，14-H)，7.60(d，J＝8.10，1H，9-H)，7.68(t，J＝7.51，1H，11-H)，8.03(d，J＝8.46，1H，12-H)，8.12(s，1H，7-H)，8.21(s，1H，NH)。
實(shí)施例四、1-(3-氨基丙基)咪唑?qū)PT的氨解開環(huán)產(chǎn)物(1)Ab的制備639mg CPT(1.84mmol)與約1.2當(dāng)量的1-(3-氨基丙基)咪唑和1mLCHCl3，攪拌，加熱(約60℃)至變?yōu)槌吻?，蒸去CHCl3，殘留液倒入40mL的NHCl4飽和溶液，用5×40mL的CHCl3萃取，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，硅膠柱層析提純(洗脫劑乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1→純乙酸乙酯)，最終得到黃色粉末狀固體(1)Ab 815mg。產(chǎn)率93.7％。
IR(KBr)ν1651.08cm-1(-CONH-)1HNMR.(CDCl3，300MHz)δppm1.06(t，J＝6.44Hz，3H，18-CH3)，2.05(m，2H，19-CH2)，2.30～2.39(m，2H，22-CH2)，3.33(m，2H，21-CH2)，4.01(t，J＝6.97Hz，2H，23-CH2)，4.92(dd，JAB＝12.64Hz，2H，17-CH2)，5.04(s，2H，5-CH2)，6.94(s，1H，)，7.01(s，1H，)，7.45(t，J＝7.23Hz，1H，10-H)，7.51(d，J＝7.10Hz，1H，9-H)，7.56(s，1H，14-H)，7.65(d，J＝9.11Hz，1H，12-H)，7.70(t，J＝7.42Hz，1H，11-H)，8.03(s，1H，)，8.05(s，1H，7-H)。
實(shí)施例五、CPT的氨解開環(huán)產(chǎn)物(1)Ab的17-羥基乙?；a(chǎn)物(1)Bbm的制備153mg(0.32mmol)(1)Ab溶于1.8mL(22.3mmol)的吡啶，加入1.2mL(12.7mmol)的乙酸酐。加熱使溫度在50℃左右，過(guò)夜。冷卻，旋轉(zhuǎn)蒸去部分溶劑，然后用乙醚沉淀，過(guò)濾。固體在通過(guò)硅膠柱層析提純(洗脫劑乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1→純乙酸乙酯)，最終得到干燥黃色固體粉末產(chǎn)物(1)Bbm 123mg。產(chǎn)率88.4％。
IR(KBr)ν1722.12cm-1(-CO-CH3)，1651.08cm-1(-CONH-)1HNMR.(CDCl3，300MHz)δppm1.07(t，J＝7.20Hz，3H，18-CH3)，2.06(s，3H，-CO-CH3)，2.10(m，2H，19-CH2)，2.32～2.46(m，2H，22-CH2)，3.33(m，2H，21-CH2)，4.07(t，J＝7.02Hz，2H，23-CH2)，5.20(m，2H，5-CH2)5.52(dd，JAB＝11.49Hz，2H，17-CH2)，7.01(s，1H，)，7.10(s，1H，)，7.54(t，J＝7.23Hz，1H，10-H)，7.61(s，1H，14-H)，7.76(d，1H，J＝7.13，9-H)，7.79(t，J＝7.42Hz，1H，11-H)，7.82(s，1H，)，8.12(d，J＝9.11Hz，1H，12-H)，8.23(s，1H，7-H)。
實(shí)施例六、CPT的氨解開環(huán)產(chǎn)物(1)Ab的17-羥基丙?；a(chǎn)物(1)Bbn的制備127mg(0.27mmol)(1)Ab溶于1.5mL(18.6mmol)吡啶，加入1.0mL(7.7mmol)丙酸酐。加熱至50℃左右，攪拌過(guò)夜。減壓蒸去部分溶劑，然后用石油醚-乙醚沉淀，過(guò)濾。固體經(jīng)硅膠柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1→純乙酸乙酯)，得黃色固體粉末(1)Bbn 103mg。產(chǎn)率72.4％。
IR(KBr)ν1726.12cm-1(-CO-C2H5)，1652.23cm-1(-CONH-)1HNMR.(CDCl3，300MHz)δppm1.01(t，J＝7.13Hz，3H，18-CH3)，1.23(t，J＝7.11，3H，-CO-C-CH3)，2.04(m，2H，19-CH2)，2.30～2.47(m，4H，-CO-CH2-and22-CH2)，3.31(m，2H，21-CH2)，4.04(t，J＝6.99Hz，2H，23-CH2)，5.16(m，2H，5-CH2)5.52(dd，JAB＝11.61Hz，2H，17-CH2)，6.98(s，1H，)，7.06(s，1H，)，7.51(t，J＝7.18Hz，1H，10-H)，7.59(s，1H，14-H)，7.60(s，1H，)，7.67(d，1H，J＝7.07，9-H)，7.73(t，J＝7.42Hz，1H，11-H)，8.01(d，J＝9.02Hz，1H，12-H)，8.18(s，1H，7-H)。
權(quán)利要求
1.一種結(jié)構(gòu)如下式的喜樹堿衍生物 其中R1代表9、10或11-位上的0-3個(gè)相同或不同的取代基，這些取代基選自鹵原子、羥基、烷氧基；R2代表C2-C5的直鏈或支鏈亞烷基；R3代表氫原子或R4CO-；R4代表低級(jí)烷基、低級(jí)烷氨基亞烷基或低級(jí)烷氧基亞烷基；Y代表雜環(huán)堿基或氫化雜環(huán)堿基。
2.權(quán)利要求1的喜樹堿衍生物，其中Y代表雜環(huán)堿基選自咪唑、吡啶、嘧啶、吡嗪，氫化雜環(huán)堿基選自哌啶、哌嗪、嗎啉等。
3.權(quán)利要求1的喜樹堿衍生物，其中R1代表H、OHR2代表-CH2CH2CH2-R3代表H、R4COR4代表-CH3、-CH2CH3、-(CH2)nNR2Y代表1-咪唑基、1-嗎啉基
4.權(quán)利要求1的喜樹堿衍生物，其中R1代表HR2代表-CH2CH2CH2-R3代表H、R4COR4代表-CH3、-CH2CH3Y代表1-咪唑基、1-嗎啉基
5.權(quán)利要求1的喜樹堿衍生物，是如下化合物21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-羥基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿，21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-乙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿，21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-丙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿，21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-羥基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿，21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-乙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿，21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-丙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿。
6.權(quán)利要求1的喜樹堿衍生物的制備方法，其特征在于，經(jīng)過(guò)以下步驟制備含雙堿性基團(tuán)的試劑NH2-(CH2)n-Y對(duì)喜樹堿的E環(huán)進(jìn)行開環(huán)反應(yīng)得到，其中Y代表雜環(huán)堿基或氫化雜環(huán)堿基。
7.權(quán)利要求6的制備方法，其特征在于，經(jīng)過(guò)以下步驟制備將通式(2)代表的喜樹堿或其衍生物原料與過(guò)量的NH2-(CH2)n-Y化合物反應(yīng)以打開內(nèi)酯環(huán)，生成相應(yīng)的開環(huán)化合物，根據(jù)需要，進(jìn)一步的將開環(huán)后的化合物用相應(yīng)的?；瘎?7-羥基酰基化。 式中R1的定義同通式(1)。
8.權(quán)利要求7的制備方法，其特征在于，其中Y代表雜環(huán)堿基或氫化雜環(huán)堿基。
9.權(quán)利要求7的制備方法，其特征在于，其中?；瘎┻x自乙酰氯，丙酰氯，乙酸酐，丙酸酐等。
10.權(quán)利要求7的制備方法，其特征在于，開環(huán)產(chǎn)物以及開環(huán)后17-羥基進(jìn)一步?；a(chǎn)物是21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-羥基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿，21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-乙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿，21-N[3-(1-嗎啉基)丙基]酰胺-17-丙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿，21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-羥基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿，21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-乙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿，21-N[3-(1-咪唑基)丙基]酰胺-17-丙酰氧基E內(nèi)酯環(huán)開環(huán)喜樹堿。
全文摘要
本發(fā)明提供(1)式所代表的喜樹堿衍生物及其制備，其中R
文檔編號(hào)C07D221/00GK1821245SQ20051009874
公開日2006年8月23日 申請(qǐng)日期2005年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月5日
發(fā)明者尤田耙, 王宗貴, 耿燕, 李明宗 申請(qǐng)人:合肥中科大生物技術(shù)有限公司