專利名稱：納他霉素的提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗真菌素的提取純化方法，特別是一種納他霉素的提取純化方法。
背景技術(shù)：
納他霉素的分子式為C33H47NO13。分子量為665.75，其結(jié)構(gòu)式為 它是一種多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌素，它能抑制有害真菌的生長而不作用于人體有益菌群，可作為食品防腐劑使用。目前市售的納他霉素價格較高，其應(yīng)用受到一定的影響。
本發(fā)明采用微生物發(fā)酵法即在發(fā)酵時所加進(jìn)去的菌種經(jīng)培養(yǎng)、發(fā)酵代謝后的納他霉素發(fā)酵液，經(jīng)一定的步驟及工藝條件后獲取的目標(biāo)產(chǎn)物納他霉素，它具有產(chǎn)率高、純度高、成本低等優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種高效的提取純化生物發(fā)酵液中納他霉素的工藝方法。
本發(fā)明的目的可以通過如下措施來達(dá)到，該方法包括以下步驟及工藝條件步驟1.用減壓濃縮法或離心法濃縮發(fā)酵液將發(fā)酵后所獲得的納他霉素發(fā)酵液用減壓濃縮法或離心法進(jìn)行濃縮，減壓濃縮法其溫度控制在50～60℃；步驟2.用潔凈水沖洗濃縮液或固體當(dāng)發(fā)酵液濃縮至不能濃縮時或離心后，加入未濃縮前發(fā)酵液體積的10％潔凈水沖洗濃縮液或固體后，再濃縮去水至不能濃縮時或離心得固體；步驟3.加溶劑及加酸、堿調(diào)節(jié)提取液的PH值后提取。
加入與濃縮發(fā)酵液或固體等體積(1∶1V/V)的溶劑(甲醇、丙酮、乙醇)提取濃縮發(fā)酵液中的納他霉素；加酸或加堿調(diào)節(jié)提取液的PH值后提取，加入酸時調(diào)節(jié)PH值1.0～4.5，若加入堿時調(diào)節(jié)PH值10.0～11.0，提取溫度2～25℃，提取時間0.5～4.5h；步驟4.提取液的固液分離，獲得上清液當(dāng)達(dá)到提取時間后，提取液用離心方法進(jìn)行固液分離，獲得上清液步驟5.調(diào)節(jié)上清液的PH值，進(jìn)行固液分離，收集固體。
上清液經(jīng)加酸或堿調(diào)節(jié)PH值在5.5～7.0，靜置1～2h后進(jìn)行固液分離，收集固體，之后用固體2倍體積的水洗固體2次，固體干燥后即得納他霉素。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點產(chǎn)率高、純度高(≥80％)、成本低。
具體實施例方式
本發(fā)明下面將結(jié)合實施例作進(jìn)一步詳述。
例1步驟1.用減壓法濃縮發(fā)酵液。
取發(fā)酵后所獲得的納他霉素發(fā)酵液400升(納他霉素含量為6.0g/L)，放置于500升真空濃縮罐中，在50～60℃溫度下進(jìn)行濃縮，直至不能濃縮為止。
步驟2.用潔凈水沖洗濃縮液。
用40升潔凈水沖洗濃縮液，再濃縮去水至不能濃縮時。
步驟3.加溶劑及加酸調(diào)節(jié)提取液的PH值后提取加入與濃縮后的發(fā)酵液等體積的丙酮，讓發(fā)酵液與丙酮充分?jǐn)嚢杈鶆颉Ｓ?0～30％的酸(可用鹽酸、醋酸、磷酸、硝酸、硫酸、碳酸)調(diào)節(jié)PH值至1.0，在5℃下提取3h。
步驟4.提取液的固液分離，獲得上清液當(dāng)達(dá)到提取時間后，提取液用離心方法進(jìn)行固液分離，獲得上清液。步驟5.調(diào)節(jié)上清液PH值，進(jìn)行固液分離，收集固體。
用20～30％的堿(可以用氫氧化鈉、氫氧化鉀)調(diào)節(jié)PH值至6.0，靜置1.5h，離心，收集固體，用潔凈水洗固體兩次，干燥后即得納他霉素1450g，純度為88％。
例2步驟1.用離心法濃縮發(fā)酵液。
取發(fā)酵后所獲得的納他霉素發(fā)酵液4000升(納他霉素含量為5.5g/L)用離心機離心，收集固體。
步驟2.用潔凈水沖洗固體。
用400升潔凈水沖洗固體20min，沖洗完后再離心，收集固體。
步驟3.加溶劑及加堿調(diào)節(jié)提取液的PH值后提取。。
加入與離心后的固體等體積的甲醇，讓固體與甲醇充分?jǐn)嚢杈鶆?。?0～30％的堿(可以用氫氧化鈉、氫氧化鉀)調(diào)節(jié)PH值至10.9，在25℃下提取0.5h。
步驟4.提取液的固液分離，獲得上清液當(dāng)達(dá)到提取時間后，提取液用離心方法進(jìn)行固液分離，獲得上清液步驟5.調(diào)節(jié)上清液PH值，進(jìn)行固液分離，收集固體。
用20～30％的酸(可用鹽酸、醋酸、磷酸、硝酸、硫酸、碳酸)調(diào)節(jié)PH值至6.0，靜置1.5h，離心，收集固體，用潔凈水洗固體兩次，干燥后即得納他霉素13.5kg，純度為90％。
權(quán)利要求
1.一種納他霉素的提取純化方法，其特征在于該方法包括以下步驟及工藝條件步驟1.用減壓濃縮法或離心法濃縮發(fā)酵液將發(fā)酵后所獲得的納他霉素發(fā)酵液用減壓濃縮法或離心法進(jìn)行濃縮，減壓濃縮法其溫度控制在50～60℃；步驟2.用潔凈水沖洗濃縮液或固體當(dāng)發(fā)酵液濃縮至不能濃縮時或離心后，加入未濃縮前發(fā)酵液體積的10％潔凈水沖洗濃縮液或固體后，再濃縮去水至不能濃縮時或離心得固體；步驟3.加溶劑及加酸、堿調(diào)節(jié)提取液的PH值后提??；加入與濃縮發(fā)酵液或固體等體積(1∶1V/V)的溶劑(甲醇、丙酮、乙醇)提取濃縮發(fā)酵液中的納他霉素；加酸或加堿調(diào)節(jié)提取液的PH值后提取，加入酸時調(diào)節(jié)PH值1.0～4.5，若加入堿時調(diào)節(jié)PH值10.0～11.0，提取溫度2～25℃，提取時間0.5～4.5h；步驟4.提取液的固液分離，獲得上清液當(dāng)達(dá)到提取時間后，提取液用離心方法進(jìn)行固液分離，獲得上清液步驟5.調(diào)節(jié)上清液的PH值，進(jìn)行固液分離，收集固體上清液經(jīng)加酸或堿調(diào)節(jié)PH值在5.5～7.0，靜置1～2h后進(jìn)行固液分離，收集固體，之后用固體2倍體積的水清洗固體2次，固體干燥后即得納他霉素。
全文摘要
本發(fā)明涉及關(guān)于一種納他霉素的提取純化方法。它采用微生物發(fā)酵法，將經(jīng)過培養(yǎng)、發(fā)酵代謝后的納他霉素發(fā)酵液，經(jīng)五個步驟及工藝條件提取純化目標(biāo)產(chǎn)物納他霉素。它具有產(chǎn)率高、純度高(≥80％)、成本低等優(yōu)點。
文檔編號C07H1/06GK1891709SQ20051003558
公開日2007年1月10日 申請日期2005年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月5日
發(fā)明者姚朔影, 譚穎嫦, 藍(lán)碧鋒, 明飛平, 彭維, 梁淑娃, 李展鵬 申請人:廣州市微生物研究所