專利名稱：孤啡肽的類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類新的化合物，具體講是一類孤啡肽的類似物，以及這類化合物的制備方法。
背景技術(shù)：
孤啡肽(Orphanin FQ/Nociceptin，NC)，是阿片受體(OP4)的內(nèi)源性配基。經(jīng)研究，孤啡肽有相當(dāng)廣泛的生物學(xué)活性。它能影響細(xì)胞和離子通道，如抑制Ca2+通道，激活K+通道，抑制腺苷酸環(huán)化酶的生成。在神經(jīng)系統(tǒng)中，它在脊髓和脊髓上水平影響痛閾；它具有抗焦慮樣作用；它可以調(diào)節(jié)自發(fā)運動的活性；它能刺激食欲；并與藥物濫用和癲癇有關(guān)。在心血管系統(tǒng)和腎功能方面，它能誘導(dǎo)產(chǎn)生低血壓和心率過緩；并具有利尿和抗尿鈉排泄作用。它還影響胃腸道功能，抑制胃腸道的活動。在呼吸系統(tǒng)中，它能抑制氣管和支氣管的收縮。
由此，研究者認(rèn)為OP4受體的配體具有如下的藥用前景(a)OP4受體的激動劑可以作為抗焦慮、刺激食欲、鞘內(nèi)鎮(zhèn)痛、抑制藥物濫用、抗癲癇、高鈉血征和水潴留征等的治療藥物。(b)OP4受體的拮抗劑可以減低食欲、鎮(zhèn)痛(單獨或與阿片肽聯(lián)合使用)。
孤啡肽是一個以羧基結(jié)尾的17肽。其中1、4位氨基酸為L型苯丙氨酸(L-Phenylalanine，L-Phe)，7、11位氨基酸為L型丙氨酸(L-Alanine，L-Ala)，14位氨基酸為L型亮氨酸(L-Leucine，L-Leu)，15位氨基酸為L型丙氨酸(L-Alanine，L-Ala)。其結(jié)構(gòu)參見下式H2N-Phe-Gly-Gly-Phe-Thr-Gly-Ala-Arg-Lys-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Ala-Asn-Gln-COOH研究還發(fā)現(xiàn)，孤啡肽作為阿片受體(OP4)的內(nèi)源性配基易被酶水解。如何解決這一問題，可以使孤啡肽延長作用時間、抗體內(nèi)酶解，并增強效價。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一類新的經(jīng)改造的孤啡肽類似物，這類化合物可以克服現(xiàn)有孤啡肽的不足，不易被酶解。
本發(fā)明的第二個目的是提供前述新化合物的制備方法。
孤啡肽的類似物，其特征是H2N-Aa1-Gly-Gly-Aa4-Thr-Gly-Aa7-Arg-Lys-Ser-Aa11-Arg-Lys-Aa14-Aa15-Asn-Gln-COOH其中1位氨基酸(Aa1)、4位氨基酸(Aa4)、7位氨基酸(Aa7)、11位氨基酸(Aa11)、14位氨基酸(Aa14)和15位氨基酸(Aa15)被不同于孤啡肽相應(yīng)位置的氨基酸的其它類型氨基酸所取代。
更為具體地講，本發(fā)明的化合物中其1位氨基酸(Aa1)為L型苯丙氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸，7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸，11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸；14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸，15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
或者其1位氨基酸(Aa1)為N-芐基甘氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸；7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸；11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸；14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸，15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
或者其1位氨基酸(Aa1)為N-芐基甘氨酸，4位氨基酸(Aa4)為L型苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸、11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸、14位氨基酸(Aa14)為L型亮氨酸、15位氨基酸(Aa15)為L型丙氨酸。
或者是1位氨基酸(Aa1)為L型苯丙氨酸，4位氨基酸(Aa4)為L型苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸，11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸，14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸，15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
或者是1位氨基酸(Aa1)為N-芐基甘氨酸，4位氨基酸(Aa4)為L型苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸，11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸，14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸，15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
或者是1位氨基酸(Aa1)為L型苯丙氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為L型丙氨酸、11位氨基酸(Aa11)為L型丙氨酸、14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸、15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
或者是1位氨基酸(Aa1)為N-芐基甘氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為L型丙氨酸、11位氨基酸(Aa11)為L型丙氨酸、14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸、15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
或者是1位氨基酸(Aa1)為L型苯丙氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸、11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸、14位氨基酸(Aa14)為L型亮氨酸、15位氨基酸(Aa15)為L型丙氨酸。
或者是1位氨基酸(Aa1)為N-芐基甘氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸、11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸、14位氨基酸(Aa14)為L型亮氨酸、15位氨基酸(Aa15)為L型丙氨酸。
關(guān)于本發(fā)明所述類似物可參見表1
表1 NC類似物的序列

本發(fā)明的制備方法，是采用氨基酸氮Fmoc保護的固相多肽合成方法，或者采用氨基酸氮Boc保護的固相多肽合成方法。
實驗表明本發(fā)明的孤啡肽類似物可有效地延長作用時間、抗體內(nèi)酶解，并有更強的效價。


附圖1為本發(fā)明的一種OP4受體激動劑對小鼠結(jié)腸收縮作用的影響曲線，其中橫坐標(biāo)為濃度負(fù)對數(shù)，縱坐標(biāo)為收縮率，圖中帶有棱形塊的曲線為H2N-Phe-Gly-Gly-p(F)Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-Lys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-COOH對小鼠結(jié)腸收縮影響曲線，帶有方形塊的曲線為孤啡肽對小鼠結(jié)腸收縮的影響曲線。
附圖2為本發(fā)明的一種OP4受體拮抗劑對小鼠結(jié)腸收縮作用的影響曲線，其中橫坐標(biāo)為濃度負(fù)對數(shù)，縱坐標(biāo)為收縮率，圖中帶有棱形塊的曲線為孤啡肽對小鼠結(jié)腸收縮的影響曲線，其余曲線為不同濃度的OP4受體拮抗劑，(H2N-Nphe-Gly-Gly-p(F)Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-Lys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-COOH)對NC引起的小鼠結(jié)腸收縮影響曲線，其中帶有×形塊的曲線所用濃度為0.01μM(微摩爾，以下同)，帶有三角塊的曲線所用濃度為0.1μM，帶有方形塊的曲線所用濃度為1μM。
具體實施例方式
以下結(jié)合實施例解說實施例1[p(F)Phe4，Aib7，Aib11，Arg14，Lys15]NCNH2采取氨基酸氮Fmoc保護策略合成I取Rink-Amide-MBHA-Resin(100-200mesh，1％DVB，S＝0.4mmol/g resin)500mg，按如下的方法進行(1)用DMF洗滌樹脂三遍(以下簡記為DMF×3)；(2)用20％piperidine/DMF處理三遍(以下簡記為20％piperidine/DMF×3)，時間為4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Gln(Trt)-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；II上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)加入相應(yīng)氨基酸及縮合劑進行縮合反應(yīng)(Fmoc-Asn(Trt)-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)inDMF 1h)；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；III上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Lys(Boc)-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；IV上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Arg(Pbf)-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；V上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Lys(Boc)-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；VI上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Arg(Pbf)-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；VII上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Aib-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；VIII上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Ser(But)-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；VIIII上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Lys(Boc)-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；X上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(5)Fmoc-Arg(Pbf)-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(6)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；XI上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Aib-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；XII上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Gly-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；XIII上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Thr(But)-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；XIIII上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Phe(4-F)-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；XV上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Gly-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；XVI上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Gly-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；XVII上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Fmoc-Phe-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；XVIII全長的肽樹脂合成完成后，抽干，在室溫下用Reagent K試劑(TFA/phenol/H2O/thioanisole/ethanedithiol，82.5∶5∶5∶5∶2.5)切割兩小時(15mL/gresin)。將樹脂過濾后，溶液在真空下濃縮，濃縮液用冷乙醚沉淀。粗肽使用Waters600 system制備型反相HPLC純化。使用HPLC檢測純度＞95％。肽使用質(zhì)譜鑒定(MS，electrospray)。高分辨質(zhì)譜(ESI-MS)m/z652.0373(M+3H)/3；m/z489.2817(M+4H)/4；C84H141N32O21F，計算值1953.0933實施例2[Nphe1，p(F)Phe4，Aib7，Aib11，Arg14，Lys15]NCNH2采取氨基酸氮Fmoc保護策略合成本實施例中反應(yīng)步驟I至XVI和合成過程與實施例1相同；XVII上步反應(yīng)后的肽樹脂按如下的方法進行(1)DMF×3；(2)20％piperidine/DMF×3，4min；(3)DMF×3；(4)Boc-N-benzyl-Gly-OH acid(2.5eq.)/HBTU(2.5eq.)/HOBt(2.5eq.)/DIPEA(5eq.)in DMF 1h；(5)DMF×3，中間各過程采用茚三酮檢驗；XVIII全長的肽樹脂合成完成后，抽干，在室溫下用Reagent K試劑(TFA/phenol/H2O/thioanisole/ethanedithiol，82.5∶5∶5∶5∶2.5)切割兩小時(15mL/gresin)。將樹脂過濾后，溶液在真空下濃縮，濃縮液用冷乙醚沉淀。粗肽使用Waters600 system制備型反相HPLC純化。使用HPLC檢測純度＞95％。肽使用質(zhì)譜鑒定(MS，electrospray)。高分辨質(zhì)譜(ESI-MS)m/z652.0373(M+3H)/3；m/z489.2817(M+4H)/4；C84H141N32O21F，計算值1953.0933實施例3[p(F)Phe4，Aib7，Aib11，Arg14，Lys15]NCNH2采取氨基酸氮Boc保護策略合成I取MBHA-Resin(100-200mesh，1％DVB，S＝0.4mmol/g resin)500mg，按表2所示步驟由C端向N端逐個縮合各個被保護的氨基酸，每步反應(yīng)完成后，經(jīng)負(fù)壓作用過濾去除各試劑表2

每進入下一個氨基酸縮合循環(huán)用Kaiser試劑檢驗游離氨已確定縮合和脫保護是否完全。按上述反應(yīng)步驟由C端氨基酸逐個向N端延伸肽鏈后得到目的肽鏈樹脂，將樹脂從反應(yīng)器中移出后進行真空干燥。
II將干燥的肽樹脂置于反應(yīng)器中，加入苯甲醚(1ml/g樹脂)，反應(yīng)器外使用液氮/冰水冷浴，通入無水HF液體(5ml/0.1mmol肽)，冰浴下反應(yīng)2小時。移去冰浴，真空泵除去HF，將反應(yīng)物用無水乙醚洗滌3次，使用10％、20％、30％的乙酸梯度抽提粗肽3次，去離子水稀釋后冷凍干燥。
III粗肽使用Waters 600 system制備型反相HPLC純化。使用HPLC檢測純度＞95％。肽使用質(zhì)譜鑒定(MS，electrospray)。高分辨質(zhì)譜(ESI-MS)m/z652.0373(M+3H)/3；m/z 489.2817(M+4H)/4；C84H141N32O21F，計算值1953.0933本發(fā)明的其他類似物的全合成過程與以上實施例相同并能得到類似的結(jié)果。
對本發(fā)明的類似物進行藥理實驗1電刺激引起的小鼠輸精管收縮實驗，2是小鼠結(jié)腸收縮實驗。實驗結(jié)果統(tǒng)計分析，并用計算機軟件處理，統(tǒng)計的各項指標(biāo)都用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示。具體的實驗結(jié)果如下1、mVD(電刺激引起的小鼠輸精管收縮)實驗實驗動物為昆明系小鼠，雄性，體重30±2g。將受試小鼠頸椎脫臼處死，剖腹取兩側(cè)輸精管，放入盛有Krebs氏液(Krebs氏液在使用前臨時配制，其配方NaCl 6.9g，KCl 0.35g，KH2PO40.16g，NaHCO32.1g，葡萄糖1.98g，溶于1000ml的雙蒸水中，再緩慢的加入CaCl20.28g，)的小蠟盤中，用眼科鑷子小心地將輸精管上的脂肪、血管等結(jié)締組織剝離，以避免實驗時影響藥物的透入而導(dǎo)致實驗的失敗。用棉球輕輕地將管中的精液排出，使之成為一根空心管。用零號手術(shù)線將經(jīng)前處理的輸精管兩端綁緊，一端綁在電極的小鉤上，然后將輸精管連同電極迅速地放入盛有Krebs氏液的恒溫35℃、通有95％O2和5％CO2混合氣體的麥?zhǔn)显」苤?，將另一端手術(shù)線懸掛在肌肉張力換能器上，加300mg的靜息張力，開始平衡。前0.5hr每5min換一次Krebs氏液，后1hr每15min換一次Krebs氏液口，平衡1.5hr后開始實驗。對樣本給予一定強度的電刺激(刺激參數(shù)為波寬1ms，頻率6次/min，負(fù)載電壓60V)，記錄4次基礎(chǔ)收縮強度。在實驗中每組受試樣本數(shù)大于5，其中對比組注入藥物為孤啡呔，而給藥組注入藥物參見表3，按累積濃度單獨給藥每隔6min加入濃度依次遞增的待測藥品，加藥后孵育5min，再給予電刺激，記錄收縮強度，與基礎(chǔ)收縮強度比較，求出抑制百分率。具體結(jié)果見表3。
表3 NC及其類似物對電刺激引起的小鼠輸精管收縮的作用

2、小鼠結(jié)腸收縮實驗A、采用昆明系小鼠，雄性，體重25-30g。頸椎脫臼處死，剪開腹腔，取出結(jié)腸后端置于Kerbs氏液(Krebs氏液的配方同上)營養(yǎng)液中，排出內(nèi)容物，剪掉伴行血管，掛在浴管中，循環(huán)水浴溫度為37℃，每10分鐘換液一次，一小時后開始打藥。實驗中每組受試樣本大于5，受試組中對比組所注入藥物為孤啡呔，而給藥組注入藥物為[p(F)Phe4，Aib7，Aib11，Arg14，Lys15]NCNH2，先打低濃度的激動劑，作用3分鐘后，換液洗去，之后每5分鐘換液，換液3次，再打入高濃度的激動劑；最后以1uM碳酰膽堿(carbachol)引起的收縮做對照。本實驗只列出[p(F)Phe4，Aib7，Aib11，Arg14，Lys15]NCNH2，其實驗結(jié)果參見附圖1。對本發(fā)明的其它激動劑類似物進行的相關(guān)實驗表明，其實驗結(jié)果類似。
B、試驗動物及樣本處理方法與A相同，受試組中對比組所注入藥物為OP1受體激動劑NC，而給藥組先注入藥物[Nphe1，p(F)Phe4，Aib7，Aib11，Arg14，Lys15]NCNH2，15分鐘后再注入不同濃度的OP4受體激動劑NC，低濃度的NC作用3分鐘后，換液洗去，之后每5分鐘換液，換液3次，再打入高濃度的NC；最后以1uM碳酰膽堿(carbachol)引起的收縮做對照。其實驗結(jié)果參見附圖2。對本發(fā)明的其它拮抗劑類似物進行的相關(guān)實驗表明，其實驗結(jié)果類似。
我們的結(jié)果顯示1、所有p(F)Phe4對Phe4的替代都增加了活性。
2、所有包含Aib的肽比NC的活性高，由于Aib在肽鏈中比較容易形成α螺旋，故而支持了受體結(jié)合中NC在地址域采取了螺旋結(jié)構(gòu)的理論。
3、這些結(jié)果顯示引入Arg14，Lys15在沒有改變類似物的藥理學(xué)性質(zhì)的基礎(chǔ)上增加了類似物的生理活性，說明Arg14，Lys15位于NC的地址域，因而其可以改變類似物效價而不影響對受體的激活。
4、在所有1位含Nphe替換的類似物均為拮抗劑，說明此結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)徹底改變了受體的激活。
此外，這些穩(wěn)定和加強配體與受體相互作用的因素之間一定程度上是可以疊加的。首先Phe4的的變化并不影響Aib7，Aib11和Arg14，Lys15的作用發(fā)揮，我們推測(pF)沒有與配體上的氫原子生成氫鍵，因為如果形成鏈內(nèi)氫鍵的話，根據(jù)計算機模型研究結(jié)果其有可能是與1-4位的的氫源形成氫鍵，這會對1-4位的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生較大影響而使得結(jié)合活性下降，因而Phe4上F原子可能與受體上某個位點形成了氫鍵，從而增強了配體與受體之間的作用；同時Aib7，Aib11的引入增加了類似物的生理活性，這一方面說明在NC的結(jié)合構(gòu)象中5-13位有可能就是采取α-螺旋的結(jié)構(gòu)，另一方面說明NC的C末端4個氨基酸殘基的構(gòu)象要求較低，發(fā)生的變動并不會影響受體與配體的相互作用。
這些充分說明NC與OP4受體相互作用時是個多位點的作用，各種穩(wěn)定和加強這種結(jié)合的作用在某種程度上可以產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。
權(quán)利要求
1.孤啡肽的類似物，其特征是H2N-Aa1-Gly-Gly-Aa4-Thr-Gly-Aa7-Arg-Lys-Ser-Aa11-Arg-Lys-Aa14-Aa15-Asn-Gln-COOH其中1位氨基酸(Aa1)、4位氨基酸(Aa4)、7位氨基酸(Aa7)、11位氨基酸(Aa11)、14位氨基酸(Aa14)和15位氨基酸(Aa15)被不同于孤啡肽相應(yīng)位置的氨基酸其它類型氨基酸所取代。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的孤啡肽的類似物，其特征是1位氨基酸(Aa1)為L型苯丙氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸，7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸，11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸；14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸，15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的孤啡肽的類似物，其特征是1位氨基酸(Aa1)為N-芐基甘氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸；7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸；11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸；14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸，15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的孤啡肽的類似物，其特征是1位氨基酸(Aa1)為N-芐基甘氨酸，4位氨基酸(Aa4)為L型苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸、11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸、14位氨基酸(Aa14)為L型亮氨酸、15位氨基酸(Aa15)為L型丙氨酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的孤啡肽的類似物，其特征是1位氨基酸(Aa1)為L型苯丙氨酸，4位氨基酸(Aa4)為L型苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸，11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸，14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸，15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的孤啡肽的類似物，其特征是1位氨基酸(Aa1)為N-芐基甘氨酸，4位氨基酸(Aa4)為L型苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸，11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸，14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸，15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的孤啡肽的類似物，其特征是1位氨基酸(Aa1)為L型苯丙氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為L型丙氨酸、11位氨基酸(Aa11)為L型丙氨酸、14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸、15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的孤啡肽的類似物，其特征是1位氨基酸(Aa1)為N-芐基甘氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為L型丙氨酸、11位氨基酸(Aa11)為L型丙氨酸、14位氨基酸(Aa14)為L型精氨酸、15位氨基酸(Aa15)為L型賴氨酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的孤啡肽的類似物，其特征是1位氨基酸(Aa1)為L型苯丙氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸、11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸、14位氨基酸(Aa14)為L型亮氨酸、15位氨基酸(Aa15)為L型丙氨酸。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的孤啡肽的類似物，其特征是1位氨基酸(Aa1)為N-芐基甘氨酸，4位氨基酸(Aa4)為對氟苯丙氨酸、7位氨基酸(Aa7)為α甲基丙氨酸、11位氨基酸(Aa11)為α甲基丙氨酸、14位氨基酸(Aa14)為L型亮氨酸、15位氨基酸(Aa15)為L型丙氨酸。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至10所述的任一孤啡肽的類似物的制備方法，其特征是用Rink-Amide-MBHA-Resin采用氨基酸氮Fmoc保護的固相多肽合成方法。
12.根據(jù)權(quán)利要求1至10所述的任一孤啡肽的類似物的制備方法，其特征是用MBHA-Resin采用氨基酸氮Boc保護的固相多肽合成方法。
全文摘要
本發(fā)明公開一類孤啡肽的類似物，以及這類化合物的制備方法。本發(fā)明的制備方法是采用氨基酸氮Fmoc保護的固相多肽合成方法，或者采用氨基酸氮Boc保護的固相多肽合成方法。本發(fā)明的孤啡肽的類似物是H
文檔編號C07K7/00GK1634980SQ20041008531
公開日2005年7月6日 申請日期2004年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月10日
發(fā)明者王銳, 常民, 彭雅麗 申請人:蘭州大學(xué)