專利名稱：Exendin 4的類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及Exendin4類似物的多肽，該多肽具有降低血糖作用，可用于治療II型糖尿病。本發(fā)明還提供了通過化學(xué)合成和重組DNA生產(chǎn)工藝生產(chǎn)這些多肽的方法。
背景技術(shù)：
世界各國糖尿病患者人數(shù)逐年增多，現(xiàn)在中國有4000萬，印度6000萬，美國1800萬，日本600萬，糖尿病患者分為兩種，一是胰島素依賴型糖尿病(I型糖尿病)和非胰島素依賴型糖尿病(II糖尿病)。其中，II型糖尿病占糖尿病患者的90％以上。
II型糖尿病患者表現(xiàn)了許多特征，如餐后胰島素分泌量不足，胰島素分泌時(shí)間滯后，高血糖等。肥胖II型糖尿病患者周邊細(xì)胞胰島素受體敏感性降低，因而產(chǎn)生血糖高，血液中胰島素水平也高的情況，糖化血紅蛋白，HbAlc在8％以上(正常為4-6％)。接著就會(huì)產(chǎn)生糖尿病并發(fā)癥，如心臟病及腎功能衰竭等。
如今，控制糖尿病的有6類藥物●促胰島素分泌類磺酰脲類，melitioneds類●非胰島素促分泌藥物胰島素，α-葡萄糖苷酶抑制劑，雙胍類及Thioagolinediones。
根據(jù)英國UKPDS對(duì)數(shù)千名II型糖尿病患者的6年跟蹤研究報(bào)告指出上述6類藥物對(duì)II型糖尿病患者皆無能為力，不能遏制胰臟β-細(xì)胞的不斷進(jìn)行性的惡化，不能降低HbAlc水平，也不能阻止糖尿病的并發(fā)癥如心臟病、腎衰竭。因此需要研究新的II型糖尿病治療藥物。
Exendin4和Exendin3是南美產(chǎn)巨蜥蜴(Gila monster，HelodermeSuspectum)的唾液中分泌的兩種多肽，其中Exendin 4由39個(gè)氨基酸殘基組成，其結(jié)構(gòu)與GLP-1在氨基酸序列上有50％的同源性。
研究表明Ex4作為GLP-1的類似物與GLP-1的受體相結(jié)合。動(dòng)物及II型糖尿病患者的臨床1、2、3期試驗(yàn)證明，Ex4能促進(jìn)胰島素原的合成，促胰島素分泌，降低血糖，當(dāng)血糖正常之后不再繼續(xù)作用，因而不產(chǎn)生低血糖昏迷、休克，十分安全。它能降低HbAlc，增加β-細(xì)胞量，增加II型糖尿病患者胰島素受體的敏感性，抑制胰高血糖素分泌等作用。
與GLP-1相比，Ex4的臨床應(yīng)用，劑量為每日2次，每次5-10μg，而GLP-1則為200μg左右，且Ex4在血液中不受DPPIV二肽酶作用，半衰期比GLP-1長(zhǎng)，但也存在不足之處，Ex4來源于巨蜥蜴，而GLP-1是人的內(nèi)源物質(zhì)，臨床試驗(yàn)報(bào)告Ex4有52％的患者產(chǎn)生抗體(Diabetes(1997)46，433-439；Diabetes Care(2002)25，330-336；JAMA(2002)287，373-379；Diabetes(1995)44，1249-1258；Diabetes(2002)512796-2803；Diabetes Care(2000)2364-69，N.Engl.J.Med(2002)346，393-463，Lancet(1998)352，837-853)。
關(guān)于Ex4改構(gòu)的研究從C-端開始縮短肽鏈，結(jié)果表明Ex4的C-端9個(gè)氨基酸殘基是活性所必需的，從N-端開始不斷縮短肽鏈結(jié)果表明除掉一個(gè)氨基酸His，活性影響不大。然而，這些結(jié)果都是離體實(shí)驗(yàn)得到的，以GLP-1受體結(jié)合能力的大小，促胰島瘤細(xì)胞分泌胰島素的多少和cAMP的形成量來進(jìn)行評(píng)價(jià)帶有局限性(J.Biol.Chem.(1997)272，21201-21206；Regulatory Peptides(2003)114，153-158；Trend inpharmacological Sci.(2003)24，377-383；PCT，WO03/011892，A2)。
本發(fā)明目的在于改變Exendin4的化學(xué)結(jié)構(gòu)，從C端縮短其肽鏈長(zhǎng)度并改變氨基酸結(jié)構(gòu)，保持其降血糖活性，從而提高與Exendin 4的氨基酸序列的同源性，同時(shí)在結(jié)構(gòu)上滿足化學(xué)合成和基因工程方法生產(chǎn)的要求，適宜大量制造，降低成本，適應(yīng)廣大II型糖尿病患者的需要。本發(fā)明不采用離體的cAMP生成，胰島素的分泌及GLP-1受體結(jié)合能力方法，而直接采用降低血糖方法對(duì)Exendin4類似物進(jìn)行評(píng)價(jià)，有利于指導(dǎo)臨床的應(yīng)用。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了下列Exendin4類似物HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKN28PPSX3Em32HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNG29PPSX3Em33HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNGG30PPSX3Em34HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNGGP31PPSX3Em35HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNGGPSPPSX3 Em36
HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNGGPSSPPSX3 Em37HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNGGPSSGPPSX3Em38X1＝Met、Leu或Ile；X2＝Lys；X3＝Arg、OH或NH2。
另外本發(fā)明還提供了含有上述類似物的藥物組合及制備上述Exendin4類似物的方法，使向廣大的II型糖尿病患者大量提供Exendin4治療藥物成為可能。


圖1是合成的Exendin4類似物基因片斷序列圖；圖2是基因工程法生產(chǎn)Exendin4類似物的流程圖；圖3是含多拷貝Exendin4基因的質(zhì)粒的構(gòu)建示意圖；圖4是用固相合成法合成Em32的示意圖；圖5是本發(fā)明Exendin4類似物的HPLC分析結(jié)構(gòu)；圖6A-B本發(fā)明Exendin4類似物的降血糖效果圖；圖7是本發(fā)明Exendin4類似物的促胰島素分泌效果圖。
發(fā)明詳述本發(fā)明的一個(gè)方面提供了結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，而仍具有降糖活性的Exendin4類似物，其具有如上所述的結(jié)構(gòu)式。優(yōu)選地，X1為Met或Leu，X2為L(zhǎng)ys。更優(yōu)選地，X1為Met，X3為Arg。
本發(fā)明的另一方面提供了含有上述Exendin4類似物的藥物組合物，該組合物含有一種或多種具有上述結(jié)構(gòu)式的化合物和一種藥學(xué)上可接受的稀釋劑或賦形劑，優(yōu)選地該組合物為單位劑量形式，如片劑、丸劑、膠囊(包括持續(xù)釋放或延遲釋放形式)、粉劑、顆粒、酏劑、酊劑、糖漿和乳液，消毒的注射用溶液或懸液，氣霧劑或液體噴劑，滴劑、針劑、自動(dòng)注射裝置或栓劑。例如，以片劑或膠囊地形式口服給藥，上述活性藥物組分可以與一種口服的無毒的藥學(xué)可接受的惰性載體，如乙醇、甘油、水及其類似物結(jié)合。另外，本發(fā)明還提供了上述化合物及藥物組合物的在制備治療疾病中的用途，優(yōu)選地該疾病是糖尿病。
本發(fā)明的又一個(gè)方面提供了制備上述Exendin4類似物的方法，包括化學(xué)合成方法和基因工程方法。對(duì)于X3為Arg的上述化合物，可以用基因工程方法來合成，還可以通過化學(xué)方法來合成，但優(yōu)選用基因工程方法來合成。對(duì)于X3為OH或NH2的上述化合物，可以通過化學(xué)方法來合成。優(yōu)選的化學(xué)方法為固相合成法。
實(shí)施例1用基因工程方法生產(chǎn)HGEGTFTSDLSKQMEEEAVKLFI EWLKNPPSR32材料克隆載體含lac啟動(dòng)子質(zhì)粒；宿主菌JM103Promega公司；T4多核苷酸激酶試劑盒Promega公司；T4連接酶試劑盒Promega公司；限制性內(nèi)切酶EcoRI、Sal I、Bgl II、BamH I試劑盒Promega公司；分子量標(biāo)準(zhǔn)λDNA、φ×174DNAPromega公司；低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)上海思吉生物制品有限公司；ATP(Adenosine-5’-triphosphate，腺苷-5’-三磷酸)Boehringer Mannheim公司；丙烯酸胺E.Merck；甲叉雙丙烯酰胺Fluka；溴乙錠(Ethidum bromid)Serva；TrisA.R上海思吉生物制品有限公司(進(jìn)口分裝)；SDSA.R上海思吉生物制品有限公司(進(jìn)口分裝)。
LB培養(yǎng)液胰胨(Tryptone)Oxoid，酵母浸出粉Oxoid，氯化鈉(A.R)中國醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑站。
其他化學(xué)試劑均為AR級(jí)，中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑站提供。
基因片段的連接(1)5’-AAT TCC ATG AGA TCT CGT CAC GGT GAA GGT ACC TTCACC AGC GAT CTG AGC AAA CAG CTG GAA G(2)5’-AA GAA GCG GTT AAA CTG TTC ATC GAA TGG CTG AAAAAC CCG CCG AGC CGT GGA TCC TAG G’(3)5’-TTC TTC TTC CAG CTG TTT GCT CAG ATC GCT GGT GAAGGT ACC TTC ACC GTG ACG AGA TCT CAT GG(4)5’-TC GAC CTA GGA TCC ACG GCT CGG CGG GTT TTT CAGCCA TTC GAT GAA CAG TTT AAC CGC將以上四個(gè)基因片段(含量均為A260nm＝3(0.D.))各加雙蒸水30μl。取正負(fù)鏈DNA片段各2μl分別混合于兩個(gè)塑料管中(即(1)+(3)和(2)+(4))，并加入下列試劑進(jìn)行5’端磷酸化反應(yīng)

混合后于37℃保溫30分鐘，然后于水浴中加熱至95℃，維持3分鐘后徐徐退火，自然冷卻至室溫。再將退火后的二個(gè)雙股DNA片段混合(即(1+3)+(2+4))，并加入下列試劑

混勻后，于16℃維持過夜使之連接。然后經(jīng)過12％PAGE或1％瓊脂糖凝膠電泳，溴乙錠染色，以λDNA/EcoR I，Sal I雙酶切DNA片段或φ×174DNA/Sal I酶切片段為分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物，分取連接的基因片段經(jīng)過抽提、回收、干燥，溶解備用。
如圖1所示，將獲得的基因片斷用EcoR I/Sal I雙酶切，從而獲得粘性末端。
Exendin4類似物基因的克隆取含有Lac啟動(dòng)子的質(zhì)粒1μg(1μg/ml)，加1×10中鹽緩沖液1μl，新制備的雙蒸水6μl，然后加入限制性內(nèi)切酶EcoRI、Sal I各1μl，于37℃保溫30分鐘，經(jīng)氯仿-酚試劑抽提，并用氯仿洗滌水層后，用60％異丙醇沉淀，離心、干燥后備用。
用4μl雙蒸水溶解上述質(zhì)粒片段，并與連接所得的Exendin4類似物基因片段2μl混合，加1×10連接酶緩沖液1μl、ATP 1μl、及T4連接酶2μl，于16℃連接過夜。
如圖3所示，將獲得的質(zhì)粒經(jīng)限制內(nèi)切酶BamH I/Sal I雙酶切后，再與經(jīng)Bg III/Sal I雙酶切的上述基因片斷連接，就可以得到含雙基因片斷的質(zhì)粒。反復(fù)進(jìn)行該步驟可以得到含有8個(gè)串聯(lián)拷貝的質(zhì)粒。
轉(zhuǎn)化取一個(gè)大腸桿菌JM103的單菌落，置LB培養(yǎng)液中過夜，從中取500μl接種于100mlLB培養(yǎng)液中，于37℃振蕩培養(yǎng)，當(dāng)菌體濃度達(dá)A600nm＝0.6(0.D.)時(shí)停止。于6000rpm離心，收集菌體，菌體懸浮于2ml0.1mol/LMgCl2溶液中，于冰浴中維持20分鐘。再于6000rpm離心，收集菌體，重新懸浮于2ml 0.1mol/LCaCl2溶液中，置冰浴中保存?zhèn)溆?；或?5％甘油，于-84℃冷凍備用。
取以上感受態(tài)細(xì)胞100μl，加入含Exendin4類似物基因的Lac啟動(dòng)子質(zhì)粒，于冰浴中維持30分鐘，然后轉(zhuǎn)移至42℃維持2分鐘，冷卻，涂板(1％瓊脂粉，含50μg/ml氨芐青霉素(AP))，37℃培養(yǎng)過夜；挑取菌落，分別轉(zhuǎn)移至含50μg/ml AP的LB培養(yǎng)液的試管中，37℃振蕩培養(yǎng)過夜，以備抽提質(zhì)粒鑒定用。與此同時(shí)，將所提取的每個(gè)單菌落都劃線于LB-瓊脂平板上，經(jīng)37℃培養(yǎng)過夜，得到工程菌PE8/JM103(含8個(gè)拷貝)，作留種用(備用種)。
發(fā)酵發(fā)酵使用LB培養(yǎng)液，含蛋白胨10g，酵母粉5g及NaCl 10g/L。
接種PE8/JM103工程菌于10升發(fā)酵液中進(jìn)行發(fā)酵，條件為攪拌速度500rpm，通氣量為每分鐘一個(gè)罐體積，37℃，pH7～8，溶氧30～50％。發(fā)酵20小時(shí)后6000rpm離心收集菌體，菌體懸浮于20mmol/L磷酸緩沖液中(含NaCl 1mol/L)。按1000∶1加溶菌酶，30℃保溫1小時(shí)，進(jìn)行破壁，破壁后離心(10,000rpm)收集沉淀。沉淀懸浮于4倍體積的6M的鹽酸胍中，攪拌抽提過夜，20,000rpm離心，將上清夜對(duì)水透析，10,000離心收集沉淀，得包涵體。將包涵體濕重100g懸浮于1000ml水中，攪拌條件下滴加10ml 2-甲基琥珀酸酐，過程中不斷添加少量Na2CO3粉劑，維持溶液PH8-9，反應(yīng)2小時(shí)，使之完全，然后對(duì)水透析去鹽。在PH7.0，20mmole/L磷酸緩沖液中加胰蛋白酶(1∶1000w/w)37℃保溫2小時(shí)裂解，用4mole/L鹽酸調(diào)節(jié)PH2-3，攪拌維持4小時(shí)除去保護(hù)基，經(jīng)HPLC純化，梯度是A相含0.5％的甲酸水溶液；B相含乙腈80％(v/v)及甲酸0.5％的溶液。A相，B相溶液以線形梯度洗脫，20ml/分鐘流速280nm，220mM紫外波長(zhǎng)檢測(cè)，得純品GLP-1類似物。整個(gè)工藝流程見圖2。
本發(fā)明的X3為Arg的其它化合物皆用如實(shí)施例1所述相同的方法制備。
實(shí)施例2、用固相合成法合成Em32化學(xué)結(jié)構(gòu)

固相樹脂的選擇當(dāng)多肽C-末端為羧基時(shí)選擇常規(guī)的王樹脂(Wang Resin，購于上海吉爾生化公司)進(jìn)行固相合成。在合成結(jié)束后，將得到的帶側(cè)鏈保護(hù)基的多肽樹脂進(jìn)行裂解(即脫保護(hù)基和切斷樹脂一步完成)，而多肽的C-末端就從王樹脂上斷裂下來形成羧基。
當(dāng)多肽C-末端為酰胺時(shí)選擇常規(guī)的氨基樹脂(Fmoc-PAL-PEG-PS Resin，購于PE AppliedBiosystem公司)進(jìn)行固相合成。在合成結(jié)束后，將得到的帶側(cè)鏈保護(hù)基的多肽樹脂進(jìn)行裂解(即脫保護(hù)基和切斷樹脂一步完成)，而多肽的C-末端就從氨基樹脂上斷裂下來形成酰胺。
制備步驟17種帶側(cè)鏈保護(hù)基的Fmoc-氨基酸原料→固相合成→脫側(cè)鏈保護(hù)基→HPLC純化→冷凍干燥→Em321.氨基酸單體

2.固相合成的過程如圖4所示，固相合成系將Em32的C-末端精氨酸先連接在氨基樹脂(Fmoc-PAL-PEG-PS樹脂)上，然后一個(gè)一個(gè)氨基酸從C-端向N-端延伸，共進(jìn)行33步。
(1)儀器設(shè)備Applied Biosystem多肽合成儀，433A型(2)試劑

其中DMF＝N，N-二甲基甲酰胺，DIEA＝N，N-二異丙基乙胺，NMP＝N-甲基吡咯烷酮，DMAP＝二甲氨基吡啶，HOBT＝1-羥基苯并三唑，HBTU＝2-(1H-苯并三唑-基-1，1，3，3-四甲基-Uroniumhedrofluorophosphate。
(3)操作；
以0.25mmole規(guī)模為例，稱取樹脂約0.5g，置入多肽合成儀上的反應(yīng)器中，將各種帶保護(hù)基氨基酸稱取1mmole裝瓶，按Em32s的氨基酸序列從C-端向N-端排列在合成儀中，于25℃室溫條件下，由電腦程序(SynthAssiat)控制自動(dòng)進(jìn)行脫Fmoc保護(hù)、活化、連結(jié)，按圖所示再進(jìn)行下一輪循環(huán)，如此進(jìn)行33步完成合成。
氨基酸縮合過程中，需要將羧基活化，一般有HBTU-Fast moc法，

HOBt/DCC法，通用的DCC，酸酐法等方法。我們采用HBTU-Fast moc法進(jìn)行羧基活化，如下圖。
當(dāng)合成結(jié)束后，將得到的帶側(cè)鏈保護(hù)基的多肽樹脂在多肽合成儀上吹干后稱重，接著脫保護(hù)基和切斷樹脂一步完成。
3.脫保護(hù)基及切斷樹脂(1)儀器設(shè)備磁力攪拌儀(2)試劑


將帶保護(hù)基的Em32s多肽樹脂置于具塞三角燒瓶，加入裂解試劑如下表

然后在恒溫30℃條件下，電磁攪拌反應(yīng)6小時(shí)；過濾、收集濾液，樹脂用少量三氟乙酸洗滌；合并收集液與洗滌液，加入乙醚(約200-250mL)產(chǎn)生沉淀，過濾，沉淀用少量乙醚洗滌后立即放入干燥器中。
4.HPLC分離純化儀器設(shè)備

試劑


通過兩步HPLC反相層析來制備得到純度為95％以上的產(chǎn)品。
(1).第一步粗分a).色譜柱采用C18介質(zhì)的反相層析柱。
b).流動(dòng)相A相含0.5％(v/v)乙酸的水溶液；B相含乙睛80％(v/v)和0.5％(v/v)乙酸的水溶液；c).上樣溶液將多肽-樹脂經(jīng)裂解去除樹脂及側(cè)鏈保護(hù)基的多肽粗品(純度約30-50％)用0.5％乙酸溶液配成濃度為5.0mg/ml的溶液。
d).冼脫條件采用線性梯度冼脫，操作流速為20ml/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，柱溫為室溫，洗脫梯度為

e).樣品收集收集20-60％B的冼脫主峰，產(chǎn)品純度約75-85％。
(2).第二步精制a).色譜柱采用C18介質(zhì)的反相層析柱。
b).流動(dòng)相與第一步粗分相同。
c).上樣溶液將第一步粗分得到的收集液(純度約75-85％)加同體積的雙蒸水稀釋。
d).冼脫條件采用分段逐次冼脫，操作流速為20ml/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，柱溫為室溫，冼脫程序?yàn)?0％B2個(gè)柱體積 35％B2個(gè)柱體積 50％B6個(gè)柱體積；e).樣品收集收集50％B的冼脫液，產(chǎn)品的純度＞95％。結(jié)果如圖5所示。
5.冷凍干燥(1)儀器設(shè)備

(2)操作先將Em32溶液放入低溫冰箱中冷凍2小時(shí)，然后將其放進(jìn)冷凍干燥設(shè)備中進(jìn)行凍干得到所需化合物。
本發(fā)明的X3為OH或NH2的其它化合物皆用如實(shí)施例2所述相同的方法制備。
實(shí)施例3Exendin4類似物的降低血糖作用取C57小鼠(中國科學(xué)院上海動(dòng)物中心)，8周齡(體重20g)，9只，分為3組。只給飲水，禁食過夜。
對(duì)照組0時(shí)，眼竇取血30μl，置于0.3ml 0.9％NaCl溶液中，然后腹腔注射20％葡萄糖溶液200μl，分別于60，120，150，180分鐘同樣采血，其中于120分鐘時(shí)第二次腹腔注射20％葡萄糖200μl。血樣經(jīng)3000rpm離心5分鐘后，使血球沉淀，取全部離心上清液，以國家衛(wèi)生部，上海生物制品研究所出品的血糖測(cè)定試劑盒進(jìn)行血糖測(cè)定。
Ex4組，按照對(duì)照組同樣方法，0時(shí)取血后腹腔注射20％葡萄糖溶液200μl，皮下注射Exendin4類似物2μg，血糖測(cè)定按對(duì)照組同樣方法進(jìn)行。
Em32-38組，按Ex4組同樣方法進(jìn)行。
三組降血糖測(cè)定結(jié)果如圖6A和B所示。
實(shí)施例4Exendin4類似物的促胰島素分泌作用C57小鼠(體重20g)禁食過夜，腹腔注射40％葡萄糖100μl，第一組僅給葡萄糖，皮下注射生理鹽水100μl，第二組給糖后皮下注射Exendin4類似物溶液100μl(2μg含藥量)，于0，2，5，10，20，30，60，90，120min取血20μl，吹入離心管中(預(yù)加20μl EDTA 1％)，離心取血清用胰島素試劑盒(Crystal Chem Inc)測(cè)胰島素。結(jié)果見圖7。
權(quán)利要求
1.Exendin 4類似物，其具有如下結(jié)構(gòu)式HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKN28PPSX3Em32HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNG29PPSX3Em33HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNGG30PPSX3Em34HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNGGP31PPSX3Em35其中X1＝Met、Leu或Ile；X2＝Lys；X3＝Arg、OH或NH2。
2.如權(quán)利要求1所述的Exendin 4類似物，其中所述的X1是Met。
3.如權(quán)利要求1所述的Exendin 4類似物，其中所述的X1是Leu。
4.如權(quán)利要求1所述的Exendin 4類似物，其中所述的X1是Ile。
5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的Exendin 4類似物，其中所述的X3是R。
6.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的Exendin 4類似物，其中所述的X3是OH。
7.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的Exendin 4類似物，其中所述的X3是NH2。
8.一種藥物組合物，其含有如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的Exendin 4類似物。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其還含有藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或載體。
10.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其中所述的載體選自如乙醇、甘油、水。
11.如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的Exendin 4類似物在制備治療糖尿病藥物中的用途。
12.如權(quán)利要求11所述的用途，其中的糖尿病是II型糖尿病。
13.如權(quán)利要求8-10任一項(xiàng)所述的藥物組合在制備治療糖尿病藥物中的用途。
14.如權(quán)利要求13所述的用途，其中的糖尿病是II型糖尿病。
全文摘要
本發(fā)明提供了Exendin 4類似物多肽，該多肽具有降低血糖作用，可用于治療II型糖尿病。本發(fā)明還提供了含有該多肽的藥物組合物和通過化學(xué)合成和重組DNA生產(chǎn)工藝生產(chǎn)這些多肽的方法。
文檔編號(hào)A61P3/00GK1746185SQ200410054300
公開日2006年3月15日 申請(qǐng)日期2004年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月6日
發(fā)明者孫玉琨, 張培璋, 周波 申請(qǐng)人:上海華誼生物技術(shù)有限公司