專(zhuān)利名稱(chēng)：鏈化合物和配體、及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可以將寡糖等糖固定在表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振中所用的傳感芯片等蛋白質(zhì)分析用支撐體上的鏈化合物，以及引入了該鏈化合物的配體、配體載體及其制備方法。
背景技術(shù)：
存在于生物體內(nèi)的各種糖在維持生物的活動(dòng)和生命的機(jī)理中起到重要的作用。為了精確地了解糖的這種機(jī)能，必須根據(jù)糖的復(fù)雜的結(jié)構(gòu)而解析其機(jī)能。在糖的機(jī)能解析中所采用的方法是，使用已經(jīng)明確其構(gòu)造的寡糖，一部分一部分地再現(xiàn)糖的結(jié)構(gòu)，由此揭示糖整體的結(jié)構(gòu)與機(jī)能的關(guān)系。
作為上述解析糖的機(jī)能的方法，已知的有例如表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振法(以下記作SPR)。也就是，將含有模擬了糖的一部分的寡糖而形成的配體引入傳感芯片表面，使用引入該配體的傳感芯片，以確定與寡糖具有特異性相互作用的蛋白質(zhì)等物質(zhì)。由此，根據(jù)寡糖的結(jié)構(gòu)可以對(duì)生物活性作出正確的評(píng)價(jià)。
另外，由于1分子寡糖的活性不會(huì)很高，在評(píng)價(jià)寡糖的生物活性時(shí)，必須將寡糖在傳感芯片上集合化。也就是，通過(guò)使用集合化的寡糖，解析其與蛋白質(zhì)等物質(zhì)之間的相互作用，由此可以評(píng)價(jià)寡糖的生物活性。
因此，如“日本專(zhuān)利公開(kāi)公報(bào)2003-836969號(hào)(2003年3月19號(hào)公開(kāi))”(文獻(xiàn)1)、“日本化學(xué)會(huì)第79次春季年會(huì)-講演預(yù)稿集II、社團(tuán)法人日本化學(xué)會(huì)、2001年3月15日，1042頁(yè)”(文獻(xiàn)2)中所公開(kāi)的那樣，本發(fā)明者們已經(jīng)得到了在分子內(nèi)具有可固定于傳感芯片表面的部分和可引入寡糖的部分的鏈化合物，還得到了在該鏈化合物中引入1單元(分子)或2單元的寡糖而形成的配體。因而發(fā)現(xiàn)通過(guò)使用該配體，可以將寡糖集合化后導(dǎo)入至傳感芯片上。
然而，上述現(xiàn)有的配體雖然可以將寡糖的糖鏈2維地排列在傳感芯片的表面上，但是其存在的技術(shù)問(wèn)題在于，很難以良好的再現(xiàn)性實(shí)現(xiàn)這種排列。
即，如上所述，使多個(gè)分子的寡糖在傳感芯片表面上集合化，以對(duì)寡糖的生物活性進(jìn)行解析時(shí)，期望能夠使寡糖糖鏈的集合化狀態(tài)均等，以良好的再現(xiàn)性觀(guān)測(cè)寡糖和蛋白質(zhì)之間的相互作用。特別是為了觀(guān)測(cè)寡糖的生物活性，必須使3單元～4單元的寡糖在傳感芯片的表面集合化，并將其再現(xiàn)性良好地2維排列在這些傳感芯片上。通過(guò)上述的這種排列，可以再現(xiàn)性良好地對(duì)寡糖的生物活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
另外，上述現(xiàn)有的配體中，1個(gè)配體所具有的寡糖為1單元或2單元。換言之，相對(duì)于單個(gè)的鏈化合物，上述配體是由1個(gè)或2個(gè)寡糖結(jié)合而成的。因此，為了觀(guān)測(cè)寡糖的生物活性，當(dāng)把上述配體排列在傳感芯片表面上時(shí)，必須通過(guò)提高配體濃度，使配體互相之間集合化，由此使3單位以上的寡糖在傳感器表面上集合化。
當(dāng)通過(guò)這種方法使寡糖集合化時(shí)，難以實(shí)現(xiàn)將寡糖的糖鏈之間控制在規(guī)定的間隔從而再現(xiàn)性良好地排列寡糖。因此，上述現(xiàn)有的配體不能再現(xiàn)性良好地觀(guān)測(cè)寡糖的生物活性，有時(shí)可能難以進(jìn)行糖的結(jié)構(gòu)的解析和寡糖的生物活性的評(píng)價(jià)。
本發(fā)明是為了克服上述問(wèn)題而完成的，旨在提供一種能夠再現(xiàn)性良好地將糖2維地排列在蛋白質(zhì)分析用等支撐體上的新型鏈化合物，以及將該鏈化合物引入糖分子而得到的新型配體、配體載體及其制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明者們?yōu)榱私鉀Q上述問(wèn)題而進(jìn)行了積極的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使用具有可以引入3單元或4單元糖分子的部位、且具有可以和蛋白質(zhì)分析用支撐體相結(jié)合的部位的新型鏈化合物，其中該蛋白質(zhì)分析用支撐體用于檢測(cè)和分離與糖分子具有特異性相互作用的蛋白質(zhì)，由此可以再現(xiàn)性良好地將3單元或4單元糖分子2維排列在上述支撐體上，從而完成了本發(fā)明。
即，為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的鏈化合物的特征在于，其具有如通式(1) (式中，n為1到6的整數(shù))所示的結(jié)構(gòu)。上述X的結(jié)構(gòu)中，具有由3或4條末端具有芳香族胺基、且主鏈上可以有碳-氮鍵的烴衍生鏈而形成的多分支結(jié)構(gòu)部分。
上述烴衍生鏈?zhǔn)侵?，在由碳和氫形成的烴鏈中，部分的碳和氫可以被其它的原子或取代基取代的烴鏈。即，上述烴衍生鏈包括在末端的芳香族胺基，并且構(gòu)成烴鏈骨架結(jié)構(gòu)的碳-碳鍵(C-C鍵)的一部分可以被碳-氮鍵(C-N鍵)、碳-氧鍵(C-O鍵)或酰胺鍵(CO-NH鍵)所取代。
在上述結(jié)構(gòu)中，上述鏈化合物具有芳香族胺基，該部分可以方便地引入糖分子。由于各烴衍生鏈中含有上述芳香族胺基，因此可以將3單元或4單元的糖分子引入上述鏈化合物中。此外，上述鏈化合物還具有S-S鍵，該部分可以固定在上述蛋白質(zhì)分析用支撐體上。
由此，通過(guò)上述鏈化合物，可以將3單元或4單元的糖分子集合化地引入到上述支撐體中。此外，由于將3單元或4單元的糖分子引入到1個(gè)鏈化合物中，可以再現(xiàn)性良好地將3單元或4單元的糖分子排列在上述支撐體上。由此，可以在上述支撐體表面上觀(guān)測(cè)糖分子和蛋白質(zhì)之間的相互作用，同時(shí)可以再現(xiàn)性良好地評(píng)價(jià)糖分子的生物活性。
在具有上述通式(1)中所示結(jié)構(gòu)的鏈化合物中，上述X優(yōu)選具有通式(2)
(式中m1、m2、m3各自獨(dú)立地是1到6的整數(shù))所示的結(jié)構(gòu)。
上述鏈化合物的X由于具有3條上述的烴衍生鏈，因此通過(guò)該鏈化合物，可以在上述支撐體上引入3單元的糖分子。由此，通過(guò)控制上述支撐體表面上3單元的糖分子之間的間隔，可以再現(xiàn)性良好地實(shí)現(xiàn)糖分子的排列，因此可以再現(xiàn)性良好地評(píng)價(jià)糖分子的生物活性。
此外，在具有上述通式(1)中所示結(jié)構(gòu)的鏈化合物中，上述X優(yōu)選具有通式(3) (式中m4、m5、m6、m7、p1、p2各自獨(dú)立地是1到6的整數(shù))所示的結(jié)構(gòu)。
上述鏈化合物的X由于具有4條上述的烴衍生鏈，因此通過(guò)該鏈化合物，可以在上述支撐體上引入4單元的糖分子。由此，通過(guò)控制上述支撐體表面上4單元的糖分子之間的間隔，可以再現(xiàn)性良好地實(shí)現(xiàn)糖分子的排列，因此可以再現(xiàn)性良好地評(píng)價(jià)糖分子的生物活性。
此外，為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的配體的特征在于其是通過(guò)將糖分子引入到上述任何一個(gè)鏈化合物的芳香族胺基上而形成的。
更具體而言，上述配體優(yōu)選具有通式(4) (式中m1、m2、m3、n各自獨(dú)立地是1到6的整數(shù))所示的結(jié)構(gòu)。
或者上述配體優(yōu)選具有通式(5) (式中m4、m5、m6、m7、n、p1、p2各自獨(dú)立地是1到6的整數(shù))所示的結(jié)構(gòu)。
通過(guò)使用上述的任何一個(gè)配體，可以將3單元(當(dāng)使用具有通式(4)所示結(jié)構(gòu)的配體時(shí))或4單元(當(dāng)使用具有通式(5)所示結(jié)構(gòu)的配體時(shí))的糖分子集合化地固定在上述蛋白質(zhì)分析用支撐體表面。如此，由于一個(gè)配體具有3單元或4單元的糖分子，在支撐體表面上，上述配體互相之間沒(méi)有集合化，由于可以通過(guò)使用一個(gè)配體而使3單元或4單元的糖分子集合化，因此可以再現(xiàn)性良好地測(cè)定糖分子的生物活性。此外，在上述支撐體的表面上可以再現(xiàn)性良好地2維排列多個(gè)糖分子。因此，通過(guò)使用固定了本發(fā)明的配體的蛋白質(zhì)分析用支撐體，可以再現(xiàn)性良好地評(píng)價(jià)糖分子的生物活性。
此外，為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的鏈化合物的制備方法的特征在于包含下述工序?qū)⒘蛐了崤c具有3條或4條支鏈的胺化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)的步驟，其中該支鏈的芳香族胺基末端被保護(hù)基團(tuán)保護(hù)，和對(duì)上述芳香族胺基末端的保護(hù)基團(tuán)進(jìn)行脫保護(hù)的步驟。
通過(guò)上述方法，可以得到本發(fā)明的化合物，其具有S-S鍵和芳香族胺基，S-S鍵部分可以固定在上述蛋白質(zhì)分析用支撐體上，芳香族胺基部分可以方便地引入糖分子。
此外，為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的配體的制備方法的特征在于使用上述鏈化合物和糖分子，進(jìn)行還原胺化反應(yīng)。
通過(guò)上述方法，經(jīng)過(guò)還原胺化反應(yīng)，可以方便地向鏈化合物中引入糖分子，從而得到本發(fā)明的配體。
此外，為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的糖分子的引入方法的特征在于，將含有上述配體的溶液和支撐體表面的金屬接觸。
通過(guò)上述的方法，上述配體(配體中包含的鏈化合物)的S-S鍵變?yōu)榕c上述支撐體表面的金屬形成的鍵，從而可以將上述配體固定在支撐體表面。因此，通過(guò)將含有配體的溶液和支撐體接觸這種簡(jiǎn)便的方法，可以將與鏈化合物結(jié)合的糖分子排列在支撐體的表面上。
此外，為了解決上述的問(wèn)題，本發(fā)明的配體載體的特征在于，使上述配體在表面具有金屬的支撐體上固定化。
由上述的方法，通過(guò)硫-金屬鍵，由于可以將配體牢固地固定在支撐體表面上，可以提供使多個(gè)糖分子再現(xiàn)性良好地排列在支撐體表面上而形成的配體載體。因此，若使用上述配體載體，可以再現(xiàn)性良好地觀(guān)測(cè)配體中所含的糖分子和與該糖分子相互作用的蛋白質(zhì)等物質(zhì)之間的相互作用，從而可以定量地評(píng)價(jià)糖分子的生物活性。
通過(guò)以下記載的內(nèi)容可以進(jìn)一步充分地了解本發(fā)明的其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)。此外，通過(guò)下述的說(shuō)明并參照附圖，可以了解到本發(fā)明的效益。


圖1顯示的是將本發(fā)明的配體固定化的配體引入芯片和rvWF結(jié)合，對(duì)該結(jié)合進(jìn)行SPR測(cè)定的結(jié)果的圖。
圖2顯示的是將現(xiàn)有的配體固定化的配體引入芯片和rvWF結(jié)合，對(duì)該結(jié)合進(jìn)行SPR測(cè)定的結(jié)果的圖。
具體實(shí)施例方式
下面對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明，但是本發(fā)明并不限定于此。
本發(fā)明的鏈化合物位于SPR的傳感芯片和親和色譜法的載體等蛋白質(zhì)分析用支撐體與寡糖等糖(以下記作糖分子)之間，用于使糖分子在上述支撐體上固定化。因此，上述鏈化合物在分子內(nèi)必須具有可固定于上述支撐體上的部分和可以方便地引入糖分子的部分。
此外，對(duì)于上述SPR和親和色譜法，其目的是鑒別和分離與糖分子具有特異性相互作用的蛋白質(zhì)等物質(zhì)。因此，上述鏈化合物必須是與蛋白質(zhì)等物質(zhì)不具有非特異性相互作用的物質(zhì)。
因此，如前述通式(1)所示，本發(fā)明的鏈化合物具有雙硫鍵(S-S鍵)，其作為可固定于上述支撐體上的部分。該雙硫鍵的硫(S)例如與涂敷在蛋白質(zhì)分析用支撐體表面上的金(Au)結(jié)合，形成硫-金鍵(S-Au鍵)，可以牢固地與上述支撐體結(jié)合。
此外，為將多個(gè)糖分子2維排列在蛋白質(zhì)分析用支撐體的表面上，同時(shí)控制各個(gè)糖分子的糖鏈之間的距離，上述鏈化合物具有包含多個(gè)胺基的多分支結(jié)構(gòu)，作為可以方便地引入糖分子的部分。即，本發(fā)明的鏈化合物的多分支部分是具有前述通式(1)中X所示結(jié)構(gòu)的部分，如前所述，該X具有包含3條或4條末端具有芳香族胺基、且同時(shí)在主鏈上可以有碳-氮鍵和酰胺鍵的烴衍生鏈的結(jié)構(gòu)。另外，在上述通式(1)中，n只要是1到6的整數(shù)，則沒(méi)有特別的限定。
上述芳香族胺基的胺基(-NH2基)是通過(guò)與寡糖等糖分子的還原胺化反應(yīng)，向上述鏈化合物中引入糖分子的反應(yīng)基團(tuán)。也就是說(shuō)，由糖分子中的平衡而產(chǎn)生的醛基(-CHO基)或酮基(-CRO基，R為烴基)與上述鏈化合物所具有的胺基反應(yīng)。接著，通過(guò)繼續(xù)還原由該反應(yīng)形成的席夫堿，可以容易地將糖分子引入到芳香族胺基中。
由此，前述通式(1)的X通過(guò)含有3條或4條如上述的烴衍生鏈，其具有了同時(shí)包含多個(gè)可引入糖分子的芳香族胺基的多分支型部分。由于在該多分支部分中所含的各芳香族胺基中，引入了寡糖等糖分子，通過(guò)具有前述通式(1)中所示結(jié)構(gòu)的鏈化合物，可以再現(xiàn)性良好地將多個(gè)糖分子2維排列在蛋白質(zhì)分析用支撐體的表面上。
具體而言，上述X如前述通式(2)中所示，3條烴衍生鏈通過(guò)在與芳香族胺基相反側(cè)的末端上與1個(gè)碳原子(C)結(jié)合，形成分支結(jié)構(gòu)。即該碳原子與-NH-結(jié)合。由此，上述X形成具有3條烴衍生鏈的多分支部分，另外，在上述通式(2)中，m1、m2、m3只要是1到6的整數(shù)，則沒(méi)有特別的限定，其可以是彼此不同的整數(shù)，也可以是部分或全部相同的整數(shù)。其中，從便于制造具有上述多分支部分的化合物的角度出發(fā)，上述m1～m3優(yōu)選是彼此相同的整數(shù)，特別優(yōu)選2。
或者也可以如前述通式(2)所示，上述X的2條烴衍生鏈各自在與芳香族胺基相反側(cè)的末端上具有和1個(gè)氮原子(N)結(jié)合的2分支的結(jié)構(gòu)。這時(shí)，2條2分支結(jié)構(gòu)中的上述氮原子通過(guò)-CO-CH2-，連接到1個(gè)氮原子(N)上形成分支結(jié)構(gòu)。由此，上述X形成具有4條烴衍生鏈的作為多分支型部分的結(jié)構(gòu)。另外，在上述通式(3)中，m4、m5、m6、m7只要是1到6的整數(shù)，則沒(méi)有特別的限定，其可以是彼此不同的整數(shù)，也可以是一部分或全部相同的整數(shù)。其中，從便于制造具有上述多分支部分的化合物的角度出發(fā)，上述m4～m7優(yōu)選是彼此相同的整數(shù)，特別優(yōu)選2。此外，p1、p2只要是1到6的整數(shù)，則沒(méi)有特別的限定，其可以是彼此不同的整數(shù)，也可以是部分或全部相同的整數(shù)。其中，從制備的方便性的角度出發(fā)，p1、p2優(yōu)選是彼此相同的整數(shù)，特別優(yōu)選1。
由此，上述X的結(jié)構(gòu)中，具有在碳、氮等原子上形成結(jié)合了多條烴衍生鏈的分支結(jié)構(gòu)的多分支型部分。另外，上述X中所含的多條烴衍生鏈雖然優(yōu)選是全部相同的，但如果在末端具有芳香族胺基，則也可以是彼此不同的結(jié)構(gòu)。
如上所示，具有通式(1)所示結(jié)構(gòu)的鏈化合物具有可與蛋白質(zhì)分析用支撐體結(jié)合的S-S鍵，和可與寡糖等糖分子結(jié)合的胺基。從而，由于通過(guò)例如S-Au鍵使上述鏈化合物固定在蛋白質(zhì)分析用支撐體上，由上述鏈化合物，可以簡(jiǎn)單且牢固地將糖分子與上述支撐體結(jié)合。
此外，上述鏈化合物具有多分支型部分，在該多分支型部分的各末端上具有芳香族胺基。因此，通過(guò)使用在上述鏈化合物中引入糖分子而形成的配體(見(jiàn)后述)，可以高效率地使糖分子在上述支撐體表面上集合化。此外，由于具有多分支型部分，當(dāng)含有鏈化合物而形成的配體與支撐體表面結(jié)合時(shí)，可以再現(xiàn)性良好地2維排列多個(gè)糖分子。
進(jìn)一步的，上述鏈化合物幾乎可以忽略其與蛋白質(zhì)的非特異性相互作用的影響。由此，通過(guò)使用本發(fā)明的鏈化合物，可以再現(xiàn)性良好地評(píng)價(jià)糖分子的生物活性。
上述鏈化合物可以通過(guò)如下所示的制備方法進(jìn)行制備。即，上述化合物可以通過(guò)，將硫辛酸與具有3條或4條支鏈的胺化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，其中該支鏈的芳香族胺基末端被保護(hù)基團(tuán)保護(hù)，然后對(duì)上述芳香族胺基末端的保護(hù)基團(tuán)進(jìn)行脫保護(hù)而制備。
上述硫辛酸具有如下述通式(6)
所示的結(jié)構(gòu)。
此外，上述胺化合物只要含有其芳香族胺基末端被保護(hù)基團(tuán)保護(hù)的支鏈即可，沒(méi)有特別的限定，也可以含有相當(dāng)于上述鏈化合物的多分支部分的結(jié)構(gòu)。
因此，上述支鏈除了具有被保護(hù)基團(tuán)保護(hù)的芳香族胺基末端以代替上述烴衍生鏈中所含的芳香族胺基以外，可以具有上述烴衍生鏈的結(jié)構(gòu)。也就是，上述分支鏈在由碳和氫形成的烴鏈中，一部分的碳和氫可以被其它的原子或取代基取代。更具體而言，上述分支鏈在具有被保護(hù)基團(tuán)保護(hù)的芳香族胺基末端的同時(shí)，以烴鏈為主要結(jié)構(gòu)的碳-碳鍵(C-C鍵)的一部分可以被碳-氮鍵(C-N鍵)或碳-氧鍵(C-O鍵)取代。
此外，上述保護(hù)基團(tuán)是指為了使芳香族胺基的胺基不參加上述縮合反應(yīng)而引入的取代基。這種保護(hù)基團(tuán)只要是在對(duì)仲胺基進(jìn)行脫保護(hù)時(shí)不受其影響的基團(tuán)，則沒(méi)有特別的限定。作為上述保護(hù)基團(tuán)，可以列舉例如叔丁氧基羰基(-COO(CH3)3基；記作Boc基)、芐基、氨基甲酸烯丙酯基(-COOCH2CH＝CH2、Alloc基)等。
作為上述胺化合物，可以列舉例如，具有如下述通式(7)和下述通式(8)所示結(jié)構(gòu)的化合物。
另外，上述通式(7)、(8)中的n、m1～m7、p1、p2各自獨(dú)立地是1到6的整數(shù)。關(guān)于這些胺化合物的合成方法，在后面的實(shí)施例中有詳細(xì)的描述。
通過(guò)上述硫辛酸和胺化合物的縮合反應(yīng)，硫辛酸的羧基(-COO基)和胺化合物的胺基(-NH2)縮合，形成酰胺鍵。然后對(duì)芳香族胺基的保護(hù)基團(tuán)進(jìn)行脫保護(hù)，通過(guò)脫去保護(hù)基團(tuán)而形成胺基，可以得到上述的鏈化合物。
下面，對(duì)于在上述鏈化合物的芳香族胺基上引入糖分子而形成的配體進(jìn)行說(shuō)明。在本發(fā)明的配體中，鏈化合物的胺基與通過(guò)糖分子中的平衡而產(chǎn)生的醛基或酮基反應(yīng)，通過(guò)繼續(xù)還原由該反應(yīng)形成的席夫堿，可以將糖分子引入到芳香族胺基中。即，通過(guò)該還原胺化反應(yīng)，上述鏈化合物和糖分子結(jié)合。
本發(fā)明的配體中所含的糖分子只要在其還原末端具有還原糖，則沒(méi)有特別的限定?？梢粤信e例如，葡萄糖、半乳糖、甘露糖等單糖類(lèi)，結(jié)合的糖數(shù)為2糖～10糖的麥芽糖、乳糖，后述的硫酸化寡糖等寡糖類(lèi)，將單糖類(lèi)和寡糖類(lèi)組合起來(lái)糖數(shù)為11以上的肝素、硫酸軟骨素、硫酸乙酰肝素等多糖類(lèi)。
此外，作為上述寡糖類(lèi)，還可以列舉，在已知具有抗血液凝固活性的硫酸化多糖肝素中，具有下述通式(9) 所示的特定部分的二糖結(jié)構(gòu)(GlcNS6S-IdoA2S)的硫酸化寡糖、具有在該硫酸化寡糖的還原末端的羥基上引入葡萄糖而形成的如下述通式(10) 所示結(jié)構(gòu)的寡糖。
另外，上述寡糖類(lèi)和多糖類(lèi)可以是由同樣的單糖分子形成的單一寡糖或單一多糖，也可以是由各種單糖分子及其衍生物形成的復(fù)合糖族，包含各種單糖分子及其衍生物、寡糖類(lèi)的復(fù)合多糖類(lèi)。此外，上述的任何一種糖分子都可以是從自然界中分離·精制而得到的各種天然的糖，也可以是人工合成的糖。
具體而言，本發(fā)明的配體具有如前述通式(4)所示的結(jié)構(gòu)。具有該通式(4)所示結(jié)構(gòu)的配體是在如前述通式(1)所示、且通式(1)中的X具有如前述通式(2)所示結(jié)構(gòu)的鏈化合物中，引入具有如上述通式(10)所示結(jié)構(gòu)的糖分子而形成的。通式(2)所示的X由于具有包含3條烴衍生鏈的結(jié)構(gòu)，因此具有通式(4)所示結(jié)構(gòu)的配體在上述鏈化合物中結(jié)合了3單元的糖分子。此外，在上述通式(4)中，m1～m3與通式(2)中的m1～m3一樣，只要是1到6的整數(shù)，則沒(méi)有特別的限定，其可以是彼此不同的整數(shù)，也可以是部分或全部相同的整數(shù)。另外，n只要是1到6的整數(shù)，則沒(méi)有特別的限定。
此外，本發(fā)明的其它的配體具有如前述通式(5)所示的結(jié)構(gòu)。具有該通式(5)所示結(jié)構(gòu)的配體是在如前述通式(1)所示、且通式(1)中的X具有如前述通式(3)所示結(jié)構(gòu)的鏈化合物中，引入具有如上述通式(10)所示結(jié)構(gòu)的糖分子而形成的。通式(3)所示的X由于具有包含4條烴衍生鏈的結(jié)構(gòu)，因此具有通式(5)所示結(jié)構(gòu)的配體在上述鏈化合物中結(jié)合了4單元的糖分子。此外，在上述通式(5)中，m4～m7與通式(2)中的m4～m7一樣，只要是1到6的整數(shù)，則沒(méi)有特別的限定，其可以是互相不同的整數(shù)，也可以是部分或全部相同的整數(shù)。另外，在上述通式(5)中，p1、p2與通式(3)中的p1、p2一樣，只要是1到6的整數(shù)，則沒(méi)有特別的限定，其可以是彼此不同的整數(shù)，也可以是部分或全部相同的整數(shù)。另外，n只要是1到6的整數(shù)，則沒(méi)有特別的限定。
由于上述的任一個(gè)配體都含有鏈化合物和糖分子，鏈化合物中的S-S鍵可以和蛋白質(zhì)分析用支撐體表面的金屬以硫(S)-金屬鍵，例如硫-金(S-Au)鍵的形式結(jié)合。由此，通過(guò)該S-Au鍵，可以提供使3單元或4單元的糖分子集合化后固定在上述支撐體表面上而形成的配體載體。因而，通過(guò)使用上述配體，可以實(shí)現(xiàn)能將多個(gè)糖分子再現(xiàn)性良好地2維排列在例如蛋白質(zhì)分析用支撐體表面上的配體載體，通過(guò)使用該配體載體，可以再現(xiàn)性良好地對(duì)糖分子的生物活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。另外，作為上述支撐體表面的金屬，除了上述Au以外，還可以使用Cu、Ag、Pt等金屬，但是優(yōu)選Au。
還有，本發(fā)明還包含通過(guò)S-金屬鍵將配體在支撐體表面固定化而形成的配體載體。該配體載體不局限于蛋白質(zhì)分析用的用途，也可以用于研究蛋白質(zhì)以外的物質(zhì)與糖分子之間的相互作用的分析用途。
上述配體載體通過(guò)將含有該配體的溶液與表面具有金屬膜的支撐體接觸，配體的S-S鍵的各S原子與支撐體表面的金屬以S-金屬鍵的形式結(jié)合，從而在支撐體表面上引入上述配體。具體地說(shuō)，通過(guò)將蛋白質(zhì)分析用的支撐體在上述配體溶液中浸漬一定的時(shí)間，或者向上述支撐體中注入配體溶液(配體溶液在支撐體表面上流動(dòng))，上述配體(配體中所含的鏈化合物)的S-S鍵與上述支撐體表面的金等結(jié)合而變?yōu)镾-Au鍵，由此可以將上述配體固定在支撐體表面上。
作為配體溶液中使用的溶劑，沒(méi)有特別的限定，可以列舉例如，甲醇、水、二甲基乙酰胺(DMAc)及其混合溶劑。此外，浸漬時(shí)間為0.5小時(shí)～12小時(shí)即可，注入量為0.01mM～1mM即可。
如此，由于本發(fā)明的配體具有S-S鍵，可以簡(jiǎn)單地在蛋白質(zhì)分析用支撐體的表面上固定化，可以將糖分子簡(jiǎn)單地引入到上述支撐體上。
另外，如上所述的向支撐體引入糖分子的方法也包含在本發(fā)明中。
本發(fā)明的配體載體可以用于對(duì)糖分子與例如蛋白質(zhì)等其它物質(zhì)的相互作用的分析中。具體而言，上述配體載體可以適用于SPR測(cè)定、親和色譜法等中。
例如，作為蛋白質(zhì)分析，在進(jìn)行SPR測(cè)定時(shí)，可以如下進(jìn)行。即，在蒸鍍了金屬膜等金屬薄膜的支撐體上，使用將本發(fā)明的配體固定化而形成的配體載體，使該配體載體與蛋白質(zhì)接觸，根據(jù)一般方法，若采用表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振裝置測(cè)定共振角度時(shí)，可以觀(guān)察該配體載體和蛋白質(zhì)的結(jié)合作用。另外，作為用于SPR測(cè)定中的上述支撐體(傳感芯片)，可以使用例如，玻璃、塑料等，特別優(yōu)選玻璃。此外，配體載體與蛋白質(zhì)的接觸可以通過(guò)，例如將溶解了蛋白質(zhì)的流態(tài)緩沖劑(running buffer)溶液流過(guò)該配體載體的表面而進(jìn)行。作為該流態(tài)緩沖劑，可以列舉例如，磷酸緩沖溶液等。
本發(fā)明的配體載體由于具有上述配體，可以再現(xiàn)性良好地將多個(gè)糖分子2維排列在支撐體表面上。因而，可以再現(xiàn)性良好地觀(guān)測(cè)糖分子的生物活性，可以進(jìn)行對(duì)糖分子的結(jié)構(gòu)的解析，定量地評(píng)價(jià)糖分子的生物活性。
此外，作為本發(fā)明的配體載體，即引入了配體的傳感芯片可以用于例如下述的SPR測(cè)定中。也就是，使用將第1糖分子在支撐體表面上固定化而形成的第1傳感芯片和將末端結(jié)構(gòu)與上述第1糖分子不同的第2糖分子在支撐體表面上固定化而形成的第2傳感芯片，比較用第1傳感芯片得到的SPR測(cè)定的檢測(cè)結(jié)果和用第2傳感芯片得到的SPR測(cè)定的檢測(cè)結(jié)果之差，可以觀(guān)測(cè)糖分子的相互作用。這些傳感芯片可以使用固定化的糖分子不同的配體。作為比較的糖分子，可以列舉乳糖和葡萄糖、麥芽糖和葡萄糖、曲二糖和葡萄糖等。其中，使用了2個(gè)傳感芯片，也可以使用多于該個(gè)數(shù)的、所引入的糖分子的種類(lèi)不同的傳感芯片。另外，糖分子的末端是指沒(méi)有固定在傳感芯片上的那一側(cè)。
在上述SPR測(cè)定中，使用對(duì)第1糖分子具有特異性作用的蛋白質(zhì)，規(guī)定測(cè)定條件，使其作用于上述2個(gè)傳感芯片，觀(guān)測(cè)兩者的共振角度。通過(guò)檢測(cè)兩者的共振角度之差，可以測(cè)定糖分子與蛋白質(zhì)等的特異性的相互作用。
此外，觀(guān)測(cè)與糖分子的相互作用的物質(zhì)不局限于蛋白質(zhì)。
以上是同時(shí)測(cè)定2種傳感芯片的，但是也不局限于此，可以測(cè)定2種以上的傳感芯片，也可以不同時(shí)測(cè)定。此外，也可以使用至少在1個(gè)傳感芯片上沒(méi)有引入糖分子的傳感芯片?？梢允褂美?，只固定了鏈化合物的傳感芯片。
若按照上述進(jìn)行SPR測(cè)定，除了糖分子以外，可以使用至少2個(gè)具有同樣結(jié)構(gòu)的配體的傳感器，因此所觀(guān)測(cè)到的該至少2個(gè)傳感器的相互作用之差是由糖分子引起的。因而，若采用上述測(cè)定方法，可以降低糖分子以外的部分和其它物質(zhì)之間的非特異性相互作用，而觀(guān)測(cè)糖分子和其它物質(zhì)之間的特異性的相互作用。
下面通過(guò)實(shí)施例和比較例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說(shuō)明，但是本發(fā)明不受其任何的限制。
通過(guò)下述的步驟，合成作為本發(fā)明的鏈化合物的、前述通式(1)中n為1，X具有如前述通式(2)所示，其中m1、m2、m3為2的結(jié)構(gòu)的鏈化合物。
如下述通式(11)所示，在65-70℃的二甲氧基乙烷中，在氫氧化芐基三甲基銨的存在下，相對(duì)于硝基甲烷(化合物1)邁克爾加成3單位的丙烯酸叔丁酯，以91％的收率得到化合物3。然后在氫氣氛圍下(6kg/cm2)，在50℃的乙醇中，用雷尼鎳(Raney Ni)還原上述化合物3的硝基，以98％的收率得到化合物4。
然后在CH2Cl2中，在1.1當(dāng)量的1-羥基-7-氮雜苯并三唑(式中記作HOAt)、1.1當(dāng)量的水溶性碳二亞胺鹽酸鹽(式中記作WSCI·HCl)的存在下，在上述化合物4中縮合1.1當(dāng)量的Z-甘氨酸，以85％的收率得到Z-甘氨酸體(化合物5)。
更具體而言，根據(jù)文獻(xiàn)(G.R.Newkome等，OPPI BRIEFS，28卷，495頁(yè)，1996)的方法，首先將硝基甲烷(12.2g，200mmol)溶解于50mL 1，2-二甲氧基乙烷中，加熱至65-70℃，加入40％氫氧化芐基三甲基銨-甲醇溶液(2mL)，制成硝基甲苯。然后將該硝基甲烷溶液的溫度升至75℃，緩慢滴加丙烯酸叔丁酯(90.8mL，620mmol)，溶液溫度保持在70-75℃，分4次每次滴加1mL的40％氫氧化芐基三甲基銨-甲醇溶液，攪拌2.5小時(shí)，得到硝基甲烷/丙烯酸叔丁酯反應(yīng)溶液。通過(guò)傾析除去該硝基甲烷/丙烯酸叔丁酯反應(yīng)溶液中的不溶物質(zhì)，得到的殘?jiān)苡谝颐?，通過(guò)用冰塊冷卻的10％鹽酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和水各清洗2次，得到殘?jiān)芤?。然后使用無(wú)水硫酸鈉作為干燥劑，干燥該殘?jiān)芤?，用鈣鐵石除去該干燥劑，減壓濃縮得到濃縮殘余物。然后將濃縮殘?jiān)芙庥谝掖歼M(jìn)行重結(jié)晶，得到白色針狀結(jié)晶的化合物3(81.8g，91％)。
然后加入化合物3的結(jié)晶(10g，22.4mmol)和T-1雷尼鎳(6.0g)以及50mL無(wú)水乙醇，在6kg/cm2的氫氣氛圍下，在50℃下攪拌23小時(shí)后，用鈣鐵石濾去T-1雷尼鎳得到化合物3反應(yīng)溶液，減壓濃縮該溶液。通過(guò)該化合物3反應(yīng)溶液的減壓濃縮得到的濃縮殘?jiān)弥苽涔枘z色譜法(溶劑氯仿/甲醇＝20/1)進(jìn)行精制，得到白色固體的化合物4(產(chǎn)量9.2g，收率98％)。
更具體而言，將Z-甘氨酸(1.26g，6.62mol)、HOAt(0.90g，6.62mmol)、WSCI·HCl(1.27g，6.62mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(25mL)，制成Z-甘氨酸溶液，在0℃的溫度條件下，向該溶液中加入將化合物4(2.50g，6.02mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(2mL)溶液而形成的化合物4溶液，在氬氣氛圍下，在室溫下攪拌36小時(shí)，得到Z-甘氨酸/化合物4反應(yīng)溶液。向該Z-甘氨酸/化合物4反應(yīng)溶液中加入二氯甲烷和10％檸檬酸水溶液，用二氯甲烷進(jìn)行萃取。萃取過(guò)程中的有機(jī)層用水、飽和碳酸氫鈉水溶液、以及水各清洗一次，使用無(wú)水硫酸鈉作為干燥劑干燥后，濾去該干燥劑進(jìn)行減壓濃縮。通過(guò)減壓濃縮得到的濃縮殘?jiān)弥苽涔枘z色譜法(溶劑氯仿/甲醇＝20/1)進(jìn)行精制，得到白色固體的化合物5(產(chǎn)量3.09g，收率85％)。
對(duì)制得的上述化合物5進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定(飛行時(shí)間型質(zhì)譜分析計(jì)測(cè)定)，為m/z(質(zhì)量/電荷比)629.4[(M+Na)+]。由此，可以確認(rèn)化合物5的結(jié)構(gòu)。
然后，如下述通式(12)中所示，在CH2Cl2/H2O＝10/1的混合溶劑中，用三氟乙酸(以下記做TFA)對(duì)上述化合物5的叔丁氧基羰基(-COOC(CH3)3基；通式(12)中的tBu)進(jìn)行脫保護(hù)，以95％的收率得到化合物6。
然后，在4.5當(dāng)量的五氟苯基二苯基磷酸酯(式中的FDPP)、11當(dāng)量的二異丙基乙基胺(式中的DIPEA)和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的存在下，使上述化合物6與被Boc基保護(hù)的間苯二胺衍生物(化合物7，10當(dāng)量)縮合，以99％的收率得到N-Boc胺衍生物(化合物8)。然后，在甲醇(圖中的MeOH)中，在Pd/C(活性炭負(fù)載鈀)的存在下進(jìn)行接觸氫還原，對(duì)與化合物8縮合的上述Z-甘氨酸的芐氧基羰基(式中的Z基)進(jìn)行脫保護(hù)，以79％的收率得到化合物9。
為了制得上述化合物6～9，如下具體地進(jìn)行操作。
即，為了制得化合物6，將化合物5(2.98g，4.90mmol)溶于二氯甲烷(15mL)后，在-10℃下加入TFA(15mL)和水(1.5mL)后，在室溫下攪拌1.5小時(shí)，得到化合物5反應(yīng)溶液。減壓濃縮該化合物5反應(yīng)溶液后，在冰浴中向濃縮殘?jiān)屑尤?0％氫氧化鈉水溶液，直至pH達(dá)到5，進(jìn)而加入濃鹽酸直至pH達(dá)到2，析出白色固體。用水清洗所得的白色固體，得到白色固體的化合物6(產(chǎn)量2.04g，收率95％)。
對(duì)制得的上述化合物6進(jìn)行ESI-MS(負(fù))測(cè)定，為m/z 437.1[(M-H)-]。此外，進(jìn)行核磁共振(1H-NMR、400MHz，d6-DMSO)的結(jié)果為δ＝7.34-7.14(6H，m)，5.00(1H，S)，3.55(2h，d，J＝5.9Hz)，3.33(3H，bs)，2.11(6H，m)，1.81(6H，m)。由此，可以確認(rèn)化合物6的結(jié)構(gòu)。
此外，為了制得化合物7，將間苯二胺(0.50g，4.62mmol)溶于甲醇(35mL)后，在0℃下加入(Boc)2O(1.06mL，4.62mmol)和三乙胺(0.65mL，4.65mmol)后，在室溫下攪拌24小時(shí)，進(jìn)行減壓濃縮。通過(guò)該減壓濃縮得到的濃縮殘?jiān)弥苽涔枘z色譜法(溶劑氯仿/丙酮＝10/1)進(jìn)行精制，得到白色固體的化合物7(產(chǎn)量665mg，收率68％)。
對(duì)制得的上述化合物7進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 231.2[(M+Na)+]。此外，進(jìn)行1H-NMR(400MHz，CD3Cl)的結(jié)果為δ＝7.02(1H，t，J＝8.0Hz)，6.95(1H，bs)，6.54(1H，dd，J＝2.0Hz，J＝8.0Hz)，6.41(1H，bs)，6.35(1H，dd，J＝2.2Hz，J＝7.9Hz)，3.66(2H，bs)，1.53，1.50(9H，s，s)。由此，可以確認(rèn)化合物7的結(jié)構(gòu)。
此外，為了制得化合物8，將上述化合物6(100mg，228μmol)、上述化合物7(475mg，2.28mmol)、FDPP(394mg，1.03mmol)和二異丙基乙基胺(447μL，2.57mmol)溶于無(wú)水二甲基甲酰胺(2mL)，在氬氣氛圍下，在室溫下攪拌29小時(shí)后，加入乙酸乙酯和水，通過(guò)乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用0.5N鹽酸、水、飽和碳酸氫鈉水溶液、以及飽和食鹽水各清洗一次，使用無(wú)水硫酸鈉作為干燥劑干燥，得到干燥反應(yīng)溶液。從得到的干燥反應(yīng)溶液中濾去該干燥劑進(jìn)行減壓濃縮。通過(guò)該減壓濃縮得到的濃縮殘?jiān)弥苽涔枘z色譜法(溶劑氯仿/丙酮＝3/1)進(jìn)行精制，得到白色固體的化合物8(產(chǎn)量228mg，收率99％)。
對(duì)制得的上述化合物8進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 1009.5[(M+H)+]。此外，進(jìn)行1H-NMR(400MHz，CD3Cl)的結(jié)果為δ＝8.75(3H，s)，7.67(3H，s)，7.30-6.95(18H，m)，6.52(1H，bs)，5.04(2H，s)，3.71(2H，d，J＝5.0Hz)，2.23(6H，m)，1.97(6H，m)，1.47(27H，s)。由此，可以確認(rèn)化合物8的結(jié)構(gòu)。
此外，化合物9具體地可以如下得到。即，將化合物8(200mg，198μmol)溶解于甲醇(3mL)，加入10％Pd/C(62.3mg)，在氫氣氛圍下，在室溫下攪拌15小時(shí)后，濾去上述Pd/C，進(jìn)行減壓濃縮。通過(guò)該減壓濃縮得到的濃縮殘?jiān)弥苽涔枘z色譜法(溶劑氯仿/甲醇＝8/1)進(jìn)行精制，得到白色固體的化合物9(產(chǎn)量136mg，收率78％)。
對(duì)制得的上述化合物9進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 875.5[(M+H)+]。由此，可以確認(rèn)化合物9的結(jié)構(gòu)。
進(jìn)而，如下述通式(13)所示，在1.0當(dāng)量的WSCI·HCl、1.0當(dāng)量的1-羥基苯并三唑(通式(13)中，HOBt)和CH2Cl2中，使上述化合物9和1.0當(dāng)量的硫辛酸(化合物10)縮合，以75％的收率得到硫辛酸衍生物(化合物11)。
在CH2Cl2中，在存在氯化三甲基甲硅烷(式中記做TMSCl)和苯酚(PhOH)的酸性條件下，對(duì)上述Boc基進(jìn)行脫保護(hù)，得到化合物12(收率32％以上)，即含有3條具有芳香族胺基的烴衍生鏈的鏈化合物。
為了得到化合物11、12，具體地進(jìn)行如下的操作。
即，為了得到化合物11，將化合物10(23.6mg，114mol)和HOBt(15.4mg，114mmol)溶解于無(wú)水二氯甲烷(2.3mL)，在0℃的溫度條件下，加入化合物9(2.50mg，6.02mmol)，在氬氣氛圍下，遮蔽光線(xiàn)在室溫下攪拌36小時(shí)后，加入10％檸檬酸水溶液，用氯仿萃取。有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液清洗，使用無(wú)水硫酸鈉作為干燥劑干燥。然后，濾去該干燥劑進(jìn)行減壓濃縮。濃縮殘?jiān)弥苽涔枘z色譜法(溶劑氯仿/甲醇＝40/1)進(jìn)行精制，得到白色固體的化合物11(產(chǎn)量91.0g，收率75％)。
對(duì)制得的上述化合物11進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 1085.5[(M+H)+]。此外，進(jìn)行1H-NMR(400MHz，CD3Cl)的結(jié)果為δ＝9.01(3H，bs)，7.67(3H，s)，7.31(1H，bs)，7.27-7.00(12H，m)，3.71(2H，bs)，3.64-3.39(1H，m)，3.12-2.99(2H，m)，2.33(1H，m)，2.32(6H，m)，2.20(2H，m)，2.04(6H，m)，1.82-1.73(1H，m)，1.62-1.47(4H，m)，1.47(27H，s)，1.39-1.25(2H，m)。由此，可以確認(rèn)化合物11的結(jié)構(gòu)。
此外，為了制得化合物12，將氯化三甲基甲硅烷(0.25mL，2.64mmol)溶解于二氯甲烷(0.49mL)中，加入將苯酚(549mg，5.83mmol)溶解于二氯甲烷(1.46mL)中而形成的苯酚溶液，攪拌后進(jìn)一步加入化合物11(34.7mg，32.6μmol)，在室溫下，遮蔽光線(xiàn)攪拌1.5小時(shí)，得到化合物11反應(yīng)溶液。然后向該化合物11反應(yīng)溶液中加入氯仿，有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液清洗，析出黃色固體。析出的黃色固體溶解于乙酸，冷卻至4℃，濾去凝聚的固體，得到白色固體的化合物12(產(chǎn)量7.9mg，收率32％)。
對(duì)制得的上述化合物12進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 736.6[(M+H)+]。此外，進(jìn)行1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)的結(jié)果為δ＝9.57(3H，s)，7.97(1H，m)，6.87(6H，m)，6.67(3H，d，J＝7.7Hz)，6.21(3H，d，J＝7.7Hz)，4.98(6H，bs)，3.67(2H，d，J＝5.1Hz)，3.56(1H，m)，3.16-3.04(2H，m)，2.36(1H，m)，2.25(6H，m)，2.19-2.07(2H，m)，1.93(6H，m)，1.83(1H，m)，1.50(4H，m)，1.33(2H，m)。由此，可以確認(rèn)化合物12的結(jié)構(gòu)。

使用在實(shí)施例1中得到的鏈化合物12，通過(guò)下述的步驟合成具有前述通式(4)中m1、m2、m3為2、且n為1的結(jié)構(gòu)的配體。
如下述通式(14)所示，將實(shí)施例1中得到的鏈化合物12和作為前述通式(10)所示的糖分子的化合物13(5當(dāng)量)溶解于H2O/二甲基乙酰胺(式中為DMAc)/乙酸(AcOH)＝5/20/1的混合溶劑中，在pH3～4，37℃下，形成席夫堿，將溶劑變?yōu)镠2O/DMAc/AcOH＝20/5/24的混合體系，在pH3～4，37℃下，加入30當(dāng)量的NaBH3CN進(jìn)行還原胺化反應(yīng)。然后用Sephadex G-50(アマ—シヤムバイオシステムズ公司制造)，通過(guò)凝膠過(guò)濾色譜法對(duì)得到的化合物進(jìn)行精制，然后進(jìn)行脫鹽處理，得到作為含有3單元糖分子的配體的化合物14。
更具體而言，為了制得化合物14，將實(shí)施例1中得到的鏈化合物12(0.5mg，655nmol)和化合物13(2.8mg，3μmol)溶解于水(25mL)、二甲基乙酰胺(100mμL)和乙酸(5μL)的混合溶劑中，于密封管中在37℃下加熱一晚，得到鏈化合物12/化合物13反應(yīng)液。將NaBH3CN(2.7mg，39.2μmol)溶解于乙酸(20μL)中制成的NaBH3CN溶液加入到上述鏈化合物12/化合物13反應(yīng)液中，在37℃下加熱3天后，減壓濃縮，用SephadexG-50(溶劑加入0.3M NaCl的PBS)進(jìn)行凝膠過(guò)濾色譜法。對(duì)得到的目標(biāo)餾分進(jìn)行減壓濃縮，用Sephadex G-25(溶劑水)對(duì)濃縮殘?jiān)M(jìn)行脫鹽，將其溶解于水進(jìn)行冷凍干燥，得到白色粉末的化合物14(產(chǎn)量1.5mg，收率66％)。
得到的化合物14的質(zhì)量為3291.28道爾頓(dalton)，由飛行時(shí)間型質(zhì)譜分析計(jì)測(cè)定得到的m/z 1008.19的峰是以上述通式(14)中所示化合物14為3價(jià)離子[M-12Na+9H]3-的形式觀(guān)測(cè)到的。此外，進(jìn)行1H-NMR(500MHz，D2O)的結(jié)果為δ＝7.20(3H，m)，6.82(6H，m)，6.64(3H，m)，5.35(3H，d，J＝3.5Hz)，5.13(3H，J＝2.5Hz)，4.51(3H，d，J＝2.4Hz)，4.29(6H，m)，4.18(6H，m)，4.06(6H，m)，3.97(9H，m)，3.87(3H，m)，3.82(3H，m)，3.78(6H，m)，3.68(9H，m)，3.56(9H，s)，3.34(6H，m)，3.24(3H，dd，J＝3.4，10.5Hz)，3.08(4H，m)，2.44(6H，m)，2.33(1H，m)，2.27(2H，t)，1.86(1H，m)，1.56-1.46(2H，m)，1.35-1.14(4H，m)。由此，可以確認(rèn)化合物14的結(jié)構(gòu)。
通過(guò)下述的步驟，合成作為本發(fā)明的鏈化合物的、前述通式(1)中n為1，X具有如前述通式(3)所示且其中m4、m5、m6、m7全為2、p1和p2為1的結(jié)構(gòu)的鏈化合物。
如下述通式(15)中所示，在MeOH中加入2.3當(dāng)量的三氟化硼·乙醚加成物(式中為BF3·OEt2)，在酸性條件下進(jìn)行回流，酯化二元羧酸(化合物15)，以79％的收率得到酯化體(化合物16)。
然后，在1.1當(dāng)量的HOBt、1.1當(dāng)量的二環(huán)己基碳二亞胺(式中為DCC)和CH2Cl2中，將1.1當(dāng)量的Z-甘氨酸與上述化合物16縮合，以94％的收率得到甘氨酸衍生物(化合物17)。
然后，在MeOH中加入2N的NaOH，在堿性條件下水解化合物17的酯基，以98％的收率得到二元羧酸衍生物(化合物18)。
為了制得上述化合物16～19，如下具體地進(jìn)行操作。
即，為了制得化合物16，將化合物15(亞氨基二乙酸；10.0g，75.1mmol)和BF3·OEt2(三氟化硼-乙醚螯合物；22mL，173mmol)溶于50mL無(wú)水甲醇中，在氬氣氛圍下回流5小時(shí)后，加入飽和碳酸氫鈉水溶液中和，用氯仿萃取。然后向水層中加入二乙胺，直至pH達(dá)到9，再用氯仿萃取，使用無(wú)水硫酸鈉作為干燥劑干燥后，濾去該干燥劑進(jìn)行減壓濃縮，得到黃色油狀物的化合物16(產(chǎn)量9.61g，收率79％)。
對(duì)制得的上述化合物16進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 162.1[(M+H)+]。此外，進(jìn)行1H-NMR(400MHz，CD3Cl)的結(jié)果為δ＝3.74(6H，s)，3.48(4H，s)，2.00(1H，s)。由此，可以確認(rèn)化合物16的結(jié)構(gòu)。
此外，為了制得化合物17，將化合物16(1.00g，6.21mmol)和二環(huán)己基碳二亞胺(1.41g，6.83mmol)和HOBt(0.92g，6.83mmol)溶解于25mL無(wú)水二氯甲烷中，在氬氣氛圍下，在0℃下攪拌0.5小時(shí)后，加入Z-甘氨酸(1.42g，6.83mmol)，在室溫下攪拌5天。將通過(guò)攪拌析出的沉淀物濾去，濾液用氯仿萃取，有機(jī)層用1N的鹽酸和飽和碳酸氫鈉水溶液分別清洗2次，再用水清洗1次，使用無(wú)水硫酸鈉作為干燥劑干燥后，濾去該干燥劑進(jìn)行減壓濃縮。通過(guò)減壓濃縮得到的濃縮殘?jiān)弥苽涔枘z色譜法(溶劑氯仿/丙酮＝2/1)進(jìn)行精制，得到白色固體的化合物17(產(chǎn)量2.05g，收率94％)。
對(duì)制得的上述化合物17進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 375.1[(M+Na)+]。此外，進(jìn)行1H-NMR(400MHz，CD3Cl)的結(jié)果為δ＝7.36(5H，m)，5.69(1H，bs t)，5.12(2H，s)，4.22，4.12(4H，s，s)，4.06(2H，d)，3.78，3.73(4H，s，s)。由此，可以確認(rèn)化合物17的結(jié)構(gòu)。
此外，為了得到化合物18，將化合物17(1.50g，4.26mmol)溶解于甲醇(20mL)中，加入2N的NaOH(9mL)，在0℃下攪拌2.5小時(shí)后，加入Dowex 50WX-8(H+型)中和直至pH達(dá)到6，濾去該Dowex 50WX-8進(jìn)行減壓濃縮。在通過(guò)減壓濃縮得到的濃縮殘?jiān)屑尤胨?，濾去不溶物質(zhì)后，進(jìn)行減壓濃縮和冷凍干燥，得到白色固體的化合物18(產(chǎn)量1.30g，收率98％)。
對(duì)制得的上述化合物18進(jìn)行ESI-MS(負(fù))測(cè)定，為m/z 321.1[(M-2H+Na)-]。此外，進(jìn)行1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)的結(jié)果為δ＝7.32(5H，m)，7.21(1H，m)，5.01(2H，s)，3.93，3.84(4H，s，s)，3.72(2H，d，J＝5.4Hz)。由此，可以確認(rèn)化合物18的結(jié)構(gòu)。
然后，如下述通式(16)中所示，在2.5當(dāng)量的FDPP、2.5當(dāng)量的DIPEA、DMF中，將用Boc基保護(hù)芳香族胺基末端的化合物19(2.5當(dāng)量)與上述化合物18反應(yīng)，以60％的收率得到N-Boc胺衍生物(化合物20)。
然后，在MeOH中，在Pd/C存在下，進(jìn)行接觸氫還原。對(duì)和化合物20縮合的上述Z-甘氨酸的Z-基進(jìn)行脫保護(hù)，以92％的收率得到胺衍生物(化合物21)。
為了制得化合物19～21，具體地進(jìn)行如下的操作。
即，為了制得化合物19，將4-氨基苯甲酸(3.33g，14.0mmol)和HOBt(1.93g，14.3mmol)在無(wú)水二氯甲烷(60mL)中懸濁，在氬氣氛圍下，在0℃下攪拌15分鐘后，加入將WSCI·HCl(2.87g，15.0mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(30mL)中而制成的WSCI·HCl溶液，攪拌50分鐘，制成4-氨基苯甲酸/HOBt反應(yīng)溶液。將二乙胺(0.79mL，7.00mmol)加入到該4-氨基苯甲酸/HOBt反應(yīng)溶液中，遮蔽光線(xiàn)在室溫下攪拌一晚，得到白色結(jié)晶。過(guò)濾得到該白色結(jié)晶后，用甲醇重結(jié)晶，得到白色結(jié)晶的化合物19。產(chǎn)量為3.53g(收率92.9％)。
對(duì)上述化合物19進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 542.4[(M+H)+]。此外，進(jìn)行1H-NMR(400MHz，CD3Cl)的結(jié)果為δ＝7.77-7.74(4H，d，J＝8.7Hz)，7.50-7.48(4H，d，J＝8.6Hz)，3.70-3.66(4H，m，J＝5.2Hz)，3.34-3.28(4H，m，J＝5.6Hz)，1.53(18H，s)。由此，可以確認(rèn)化合物19的結(jié)構(gòu)。
此外，為了制得化合物20，將上述化合物18(50.0g，154μmol)、化合物19(209mg，386μmol)、FDPP(148mg，386μmol)溶于無(wú)水二甲基甲酰胺(3mL)后，加入二異丙基乙基胺(67.2μL，386μmol)，在氬氣氛圍下，在室溫下攪拌20小時(shí)后，制得化合物18/化合物19反應(yīng)溶液。減壓濃縮該化合物18/化合物19反應(yīng)溶液，得到的濃縮殘?jiān)寐确螺腿?，有機(jī)層用10％檸檬酸、飽和碳酸氫鈉水溶液清洗，使用無(wú)水硫酸鈉作為干燥劑干燥后，濾去該干燥劑進(jìn)行減壓濃縮。通過(guò)減壓濃縮得到的濃縮殘?jiān)弥苽涔枘z色譜法(溶劑氯仿/甲醇＝10/1)進(jìn)行精制，得到白色固體的化合物20(產(chǎn)量125mg，收率59％)。
對(duì)上述化合物20進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 1393.7[(M+Na)+]。此外，進(jìn)行1H-NMR(400MHz，CD3Cl)的結(jié)果為δ＝7.88(1H，bs)，7.73-7.66(10H，m)，7.56(1H，bs)，7.38(4H，d，J＝8.4Hz)，7.34-7.29(6H，m)，7.17，7.05(2H，bs，bs)，5.35(1H，bs)，5.00(2H，s)，3.96(2H，bs)，3.64(4H，帶)，3.55(4H，帶)，3.51(6H，帶)，3.43，3.27，3.17(6H，bs，bs，bs)，1.50，1.49(36H，s，s)。由此，可以確認(rèn)化合物20的結(jié)構(gòu)。
此外，為了制得化合物21，將化合物20(103mg，74.4μmol)溶解于甲醇(3mL)，加入10％Pd/C(84mg)，在氫氣氛圍下，在室溫下攪拌47小時(shí)后，濾去上述Pd/C，進(jìn)行減壓濃縮。得到白色固體的化合物21(產(chǎn)量84.9mg，收率92％)。
對(duì)制得的上述化合物21進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 630.5[(M+H+Na)2+]。由此，可以確認(rèn)化合物21的結(jié)構(gòu)。
進(jìn)而，如下述通式(17)所示，在CH2Cl2/DMF＝4/1的混合溶劑中，在1.1當(dāng)量的HOBt、1.0當(dāng)量的WSCI·HCl的存在下，使上述化合物21和1.1當(dāng)量的硫辛酸(化合物10)縮合，以75％的收率得到酰胺化合物(化合物22)。
進(jìn)而，在CH2Cl2中，在存在TFA的酸性條件下，對(duì)上述Boc基進(jìn)行脫保護(hù)，得到化合物23(收率91％以上)，即含有4條具有芳香族胺基的烴衍生鏈的鏈化合物。
為了得到化合物22、23，具體地進(jìn)行如下的操作。
即，為了得到化合物22，將化合物10(12.8mg，62.2μmol)和HOBt(8.4mg，62.2μmol)溶解于無(wú)水二氯甲烷(10mL)，在氬氣氛圍下，在0℃下遮蔽光線(xiàn)攪拌，制成化合物10/HOBt反應(yīng)溶液。然后將化合物21(70.0mg，56.5μmol)溶于二甲基甲酰胺(0.5mL)，滴加上述化合物10/HOBt反應(yīng)溶液后，在室溫下攪拌19小時(shí)后，用乙酸乙酯萃取，得到萃取液。該萃取液的有機(jī)層用10％檸檬酸水溶液和飽和碳酸氫鈉水溶液各清洗1次，使用無(wú)水硫酸鈉作為干燥劑干燥后，濾去該干燥劑進(jìn)行減壓濃縮。通過(guò)減壓濃縮得到的濃縮殘?jiān)弥苽涔枘z色譜法(溶劑氯仿/甲醇＝15/1)進(jìn)行精制，得到白色固體的化合物22(產(chǎn)量60.8mg，收率75％)。
對(duì)制得的上述化合物22進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 735.3[(M+2Na)2+]。此外，進(jìn)行1H-NMR(400MHz，CD3Cl)的結(jié)果為δ＝7.76-7.79(11H，m)，7.55(1H，bs)，7.42(4H，d，J＝8.6Hz)，7.35(5H，m)，7.13，7.00，6.97(3H，bs，bs，bs)，5.84(1H，bs)，4.04(2H，bs)，3.67(4H，帶)，3.55(4H，帶)，3.48(8H，帶)，3.41，3.29，3.22(6H，bs，bs，bs)，3.16-3.03(2H，m)，2.39(1H，m)，2.02(2H，m)，1.84(1H，m)，1.58-1.52(4H，m)，1.51，1.49(36H，s，s)，1.35(2H，m)。由此，可以確認(rèn)化合物22的結(jié)構(gòu)。
此外，為了制得化合物23，將化合物22(48.2mg，33.8μmol)溶解于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，遮蔽光線(xiàn)在0℃下攪拌1小時(shí)后，進(jìn)行減壓濃縮，得到的殘?jiān)苡诩状?，加入Dowex MarathonA(OH-型)中和。中和后，濾去該Dowex Marathon A，減壓濃縮，得到白色固體的化合物23(產(chǎn)量31.6mg，收率91％)。
對(duì)制得的上述化合物23進(jìn)行ESI-MS(正)測(cè)定，為m/z 534.2[(M+2Na)2+]。由此，可以確認(rèn)化合物23的結(jié)構(gòu)。
使用在實(shí)施例3中得到的鏈化合物23，通過(guò)下述的步驟，合成具有前述通式(5)中m4、m5、m6、m7全為2、n為1且p1、p2為1的結(jié)構(gòu)的配體。
如下述通式(18)所示，將實(shí)施例3中得到的鏈化合物23和作為下述通式(18)所示的糖分子的鏈化合物23(5當(dāng)量)溶解于H2O/DMAc/AcOH＝5/20/1的混合溶劑中，在pH3～4，37℃下，形成席夫堿(式中的亞胺型)，然后將溶劑變?yōu)镠2O/DMAc/AcOH＝9/20/22的混合體系，在pH3～4，37℃下，加入64當(dāng)量的NaBH3CN進(jìn)行還原反應(yīng)(式中的還原)。然后用Sephadex G-50，通過(guò)凝膠過(guò)濾色譜法對(duì)得到的化合物進(jìn)行精制，再進(jìn)行脫鹽處理，得到作為含有4單元糖分子的配體的化合物24。
為了制得化合物24，將鏈化合物23(0.5mg，488nmol)和化合物13(2.1mg，2.4μmol)溶解于水(25μL)、二甲基乙酰胺(100μL)和乙酸(5μL)的混合溶劑中，于密封管中在37℃下加熱3小時(shí)，得到鏈化合物23/化合物13反應(yīng)液。將NaBH3CN(2.18mg，31.2μmol)溶解于乙酸(45μL)，加入到上述鏈化合物23/化合物13反應(yīng)液中，在37℃下加熱3天后，減壓濃縮，用Sephadex G-50(1.6×80cm，PBS-0.3N NaCl)精制。對(duì)通過(guò)精制得到的目標(biāo)餾分進(jìn)行減壓濃縮，用Sephadex G-25(1.6×40cm，水)對(duì)濃縮殘?jiān)M(jìn)行脫鹽，對(duì)通過(guò)該脫鹽得到的餾分進(jìn)行減壓濃縮，將其溶解于水進(jìn)行冷凍干燥，得到白色粉末的化合物24(產(chǎn)量1.0mg，收率47％)。
得到的化合物24的質(zhì)量為4396.37道爾頓，由飛行時(shí)間型質(zhì)譜分析計(jì)測(cè)定得到的m/z 1368.93的峰是以上述通式(18)中所示化合物24為3價(jià)離子[M-13Na+10H]3-的形式觀(guān)測(cè)到的。此外，質(zhì)譜測(cè)定的結(jié)果為8＝7.70-7.55(8H，m)，6.78-6.64(8H，m)，5.34(4H，s)，5.20(8H，d，J＝3.3Hz)，5.15(4H，bs)，4.52(4H，bs)，4.29(8H，m)，4.19(8H，m)，4.05(4H，m)，3.99(4H，帶)，3.87-3.80(16H，帶)，3.73-3.66(24H，m)，3.87(3H，m)，3.57(12H，s)，3.49(4H，dd，J＝3.8，9.7)，3.39-3.34(14H，m)，3.26-3.19(12H，m)，2.60(1H，m)，2.21-2.13(2H，m)，1.77(1H，m)，1.50-1.13(4H，m)。由此，可以確認(rèn)化合物24的結(jié)構(gòu)。
使用在實(shí)施例2中得到的，具有在前述通式(4)中m1、m2、m3均為2、且n為1的結(jié)構(gòu)的配體的化合物14，進(jìn)行SPR測(cè)定。
即，通過(guò)在蒸鍍金屬膜的玻璃基板表面進(jìn)行下述的操作，使配體(化合物14)固定化，觀(guān)測(cè)化合物14和作為肝素結(jié)合性蛋白質(zhì)的重組[馮]維勒布蘭德因子(recombinant von Willebrand factor)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)為rvWF)的結(jié)合過(guò)程。
(5-1配體引入芯片的制造)首先，把在13×20×0.7mm的玻璃基板上蒸鍍有50nm金薄膜的傳感芯片(日本レ-ザ-電子株式會(huì)社制造)放入U(xiǎn)V臭氧清潔器(商品名NL-UV253，日本レ-ザ-電子株式會(huì)社)中，紫外線(xiàn)照射20分鐘，通過(guò)臭氧清潔傳感芯片的金表面。然后，將該傳感芯片安裝在培養(yǎng)池內(nèi)的特氟隆(注冊(cè)商標(biāo))制培養(yǎng)池支架上，在該培養(yǎng)基內(nèi)加入50mL 0.1mM的化合物14的甲醇溶液密封，在室溫下，使用Bio Dancer(商品名，NewBrunswick Scientific公司)，柔和地振蕩一晚。然后，用100μL甲醇清洗上述培養(yǎng)池6次，從特氟隆制培養(yǎng)池支架上拆下傳感芯片。接著將拆下的傳感器浸漬在充滿(mǎn)甲醇的皿中，平穩(wěn)地振蕩以重復(fù)進(jìn)行2次清洗操作，按照水、甲醇的順序與上述同樣地對(duì)傳感芯片進(jìn)行清洗，得到配體引入芯片(配體載體)。風(fēng)干該配體引入芯片后，安裝到表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振裝置SPR670(商品名日本レ-ザ-電子株式會(huì)社)的傳感芯片盒(玻璃棱柱)中。
(5-2由配體引入芯片和蛋白質(zhì)之間的疏水性相互作用引起的非特異性相互作用的研究)在上述得到的配體引入芯片上，在25℃的溫度條件下，以15μL/分鐘的流速，直到用上述表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振裝置測(cè)定的共振角度變化達(dá)到固定值，排出作為流態(tài)緩沖劑的磷酸緩沖溶液(PBS；pH7.4)。然后，將牛血清白蛋白(BSA)溶解于流態(tài)緩沖劑中配制成BSA溶液，將60μL該BSA溶液以15μL/分鐘的流速注入至配體引入芯片中，以使在SPR測(cè)定中作為蛋白質(zhì)使用的BSA的濃度達(dá)到0.1mg/mL。
為了研究由流入上述BSA溶液的配體引入芯片表面的金和作為蛋白質(zhì)的BSA之間的疏水性相互作用引起的非特異性相互作用，用表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振裝置測(cè)定時(shí)，基本沒(méi)有觀(guān)測(cè)到共鳴角度變化。由此，認(rèn)為在使用引入化合物14而形成的配體引入芯片時(shí)，可以降低由蛋白質(zhì)和配體引入芯片之間的非特異性相互作用產(chǎn)生的影響，因此可以定量地進(jìn)行蛋白質(zhì)和糖之間的結(jié)合相互作用的評(píng)價(jià)。
(5-3rvWF的解離常數(shù)的解析)除了在前述(5-1)中得到的配體引入芯片上使用rvWF溶液以代替上述(5-2)的BSA溶液以外，其余按照與上述(5-2)同樣的步驟，將rvWF溶液注入至配體引入芯片表面。另外，配制rvWF溶液時(shí)，將rvWF溶解于上述流態(tài)緩沖劑中進(jìn)行配制，以達(dá)到125nM～1600nM范圍的濃度。
改變上述rvWF溶液的濃度，將rvWF溶液注入至配體引入芯片表面，相對(duì)于rvWF溶液的注入時(shí)間(時(shí)間(秒))的經(jīng)過(guò)，用表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振裝置測(cè)定研究基于化合物14和rvWF的結(jié)合所產(chǎn)生的響應(yīng)(Response(RU；響應(yīng)單位))。其結(jié)構(gòu)如圖1所示。
另外，上述引入了rvWF的配體引入芯片可以通過(guò)在該配體引入芯片的表面上，以60μL/分鐘的流速流過(guò)10mM的NaOH達(dá)1分鐘以上進(jìn)行再生，從而實(shí)現(xiàn)再利用。
此外，使用表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振裝置(SPR670)中附屬的軟件，根據(jù)作為配體的化合物14與rvWF的結(jié)合過(guò)程的觀(guān)測(cè)結(jié)果(圖1)，計(jì)算出解離常數(shù)(KD)、結(jié)合速度常數(shù)(Ka)、解離速度常數(shù)(Kd)的值。其結(jié)果如表1所示。
(表1)

根據(jù)文獻(xiàn)1中記載的步驟，制備含有1單元具有前述通式(10)所示結(jié)構(gòu)的寡糖、具有下述通式(19)所示結(jié)構(gòu)的配體的該化合物25。
然后，除了用上述化合物25代替前述化合物14以外，其余按照和前述實(shí)施例5的(5-1)同樣的步驟，得到配體引入芯片。使用該配體引入芯片，按照和前述實(shí)施例5的(5-2)同樣的步驟，確認(rèn)沒(méi)有發(fā)生由配體引入芯片和蛋白質(zhì)之間的疏水性相互作用而引起的非特異性相互作用。然后，按照和前述實(shí)施例5的(5-3)同樣的步驟，將rvWF溶液注入至配體引入芯片表面，用表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振裝置測(cè)定伴隨著rvWF溶液的注入時(shí)間經(jīng)過(guò)而產(chǎn)生的共振角度變化，研究化合物25和rvWF的結(jié)合過(guò)程。其結(jié)果如圖2所示。
此外，根據(jù)圖2，按照和前述實(shí)施例5的(5-3)同樣的步驟，計(jì)算出解離常數(shù)(KD)、結(jié)合速度常數(shù)(Ka)、解離速度常數(shù)(Kd)的值。其結(jié)果如表1所示。
如上述表1所示，可以看出，使用作為本實(shí)施例的配體的化合物14的配體引入芯片與使用化合物25的配體引入芯片相比，對(duì)于rvWF顯示出較高的親和性。由此可知，若使用本實(shí)施例的配體引入芯片，可以再現(xiàn)性良好地觀(guān)測(cè)糖分子的生物活性，上述配體引入芯片對(duì)于進(jìn)行糖分子的結(jié)構(gòu)解析和評(píng)價(jià)糖分子的生物活性是非常良好的。
另外，對(duì)于在本發(fā)明的最佳實(shí)施方式這部分內(nèi)容中進(jìn)行的具體實(shí)施方式
和實(shí)施例，嚴(yán)格地說(shuō)，其是為了揭示本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容而列舉的，本發(fā)明不應(yīng)該被狹義地解釋為僅限于這些具體的示例，在本發(fā)明的宗旨和下面記載的權(quán)利要求的范圍內(nèi)，可以進(jìn)行各種變化而實(shí)施。
工業(yè)實(shí)用性如上所示，通過(guò)本發(fā)明，可以提供一種能夠?qū)?單元或4單元的糖分子再現(xiàn)性良好地2維排列在蛋白質(zhì)分析用等支撐體上的鏈化合物。此外，上述鏈化合物基本可以忽略由其和蛋白質(zhì)之間的非特異性相互作用而產(chǎn)生的影響。
此外，本發(fā)明的配體是通過(guò)在上述鏈化合物中引入糖分子而形成的，由于可以使3單元或4單元的糖分子集合化，因此可以再現(xiàn)性良好地測(cè)定糖分子的生物活性。
因此，通過(guò)運(yùn)用本發(fā)明的鏈化合物和配體，可以用于生物科技產(chǎn)業(yè)中，以檢測(cè)生物分子之間的相互作用。特別是可以用于采用芯片工藝和親和色譜柱的領(lǐng)域中。此外，也可以用于利用生物探測(cè)器和生物傳感器的領(lǐng)域，以及用于制藥領(lǐng)域和診斷·檢查等醫(yī)療技術(shù)中。
權(quán)利要求
1.一種鏈化合物，其特征在于具有如通式(1) (式中，n為1到6的整數(shù))所示的結(jié)構(gòu)，上述X的結(jié)構(gòu)中，具有由3或4條末端具有芳香族胺基、且主鏈上可以有碳-氮鍵的烴衍生鏈而形成的多分支結(jié)構(gòu)部分。
2.權(quán)利要求1記載的鏈化合物，其特征在于上述X具有通式(2) (式中m1、m2、m3各自獨(dú)立地是1到6的整數(shù))所示的結(jié)構(gòu)。
3.權(quán)利要求2記載的鏈化合物，其特征在于在上述通式(2)中，m1、m2、m3全為2。
4.權(quán)利要求1記載的鏈化合物，其特征在于上述X具有通式(3) (式中m4、m5、m6、m7、p1、p2各自獨(dú)立地是1到6的整數(shù))所示的結(jié)構(gòu)。
5.權(quán)利要求2記載的鏈化合物，其特征在于在上述通式(3)中，m4、m5、m6、m7全為2，p1、p2均為1。
6.一種配體，其特征在于其是通過(guò)在權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)記載的鏈化合物的芳香族胺基上引入糖分子而形成的。
7.權(quán)利要求6記載的配體，其特征在于上述糖分子為選自單糖類(lèi)、寡糖類(lèi)、多糖類(lèi)中的至少一種。
8.一種配體，其特征在于具有通式(4) (式中m1、m2、m3、n各自獨(dú)立地是1到6的整數(shù))所示的結(jié)構(gòu)。
9.權(quán)利要求8記載的配體，其特征在于在上述通式(4)中，m1、m2、m3全為2，n為1。
10.一種配體，其特征在于具有通式(5) (式中m4、m5、m6、m7、n、p1、p2各自獨(dú)立地是1到6的整數(shù))所示的結(jié)構(gòu)。
11.權(quán)利要求10記載的配體，其特征在于在上述通式(5)中，m4、m5、m6、m7全為2，n為1，p1、p2均為1。
12.一種鏈化合物的制備方法，其特征在于包含下述工序?qū)⒘蛐了崤c具有3條或4條支鏈的胺化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)的步驟，其中該支鏈的芳香族胺基末端被保護(hù)基團(tuán)保護(hù)，和對(duì)上述芳香族胺基末端的保護(hù)基團(tuán)進(jìn)行脫保護(hù)的步驟。
13.一種鏈化合物的制備方法，其特征在于使用權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)記載的鏈化合物和糖分子進(jìn)行還原胺化反應(yīng)。
14.一種將糖分子設(shè)置在支撐體表面上的糖分子的引入方法，其特征在于將含有權(quán)利要求6至11中任何一項(xiàng)所記載的配體的溶液和表面具有金屬的支撐體接觸。
15.一種配體載體，其特征在于使權(quán)利要求6至11中任何一項(xiàng)所記載的配體在表面具有金屬的支撐體上固定化。
16.權(quán)利要求15記載的配體載體，其特征在于其用于表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振測(cè)定用的傳感芯片。
17.權(quán)利要求15記載的配體載體，其特征在于其用于親和色譜法所用的柱中。
全文摘要
一種鏈化合物，其具有通式(1)，(式中，n為1到6的整數(shù))所示的結(jié)構(gòu)。上述X的結(jié)構(gòu)中，具有由3或4條末端具有芳香族胺基且主鏈上可以有碳－氮鍵的烴衍生鏈而形成的多分支結(jié)構(gòu)部分。此外，配體是通過(guò)將上述鏈化合物引入糖分子而形成的。
文檔編號(hào)C07K5/00GK1688598SQ0382453
公開(kāi)日2005年10月26日 申請(qǐng)日期2003年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月9日
發(fā)明者隅田泰生, 荒野明男, 楠本正一, 邁克爾·索貝爾 申請(qǐng)人:獨(dú)立行政法人科學(xué)技術(shù)振興機(jī)構(gòu), 國(guó)立大學(xué)法人鹿兒島大學(xué)