專利名稱：吐溫介入的锝-99m異腈類配合物、二步法異腈類藥盒及應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種锝-99m(99mTc)標記的異腈類配合物，特別涉及一類吐溫(聚乙氧基油酸山梨醇)介入的锝-99m標記的異腈類配合物。本發(fā)明還涉及一種用于制備上述配合物的二步法異腈類藥盒，及其該二步法藥盒的制備方法；另外，本發(fā)明進一步涉及上述吐溫介入下的锝-99m標記的異腈類配合物在人或動物的器官或組織中作為顯像劑的用途，特別是在心肌或腫瘤中作為顯像劑的用途。
背景技術：
目前，心血管疾病和腫瘤是嚴重危害人類健康的兩大主要疾病。心血管疾病和腫瘤疾病的早期診斷對疾病的預防和治療具有重要的意義。其中，核心臟病學利用放射性核素進行心肌灌注顯像可實現(xiàn)對心血管疾病的早期診斷，目前該項診斷已經(jīng)成為心臟病學檢查的重要內(nèi)容。
99mTc具有半衰期短(6.02h)，γ射線能量適中(140KeV)等優(yōu)良的核性質(zhì)，其能與SPECT(Single-Photon Emission Computed Tomography，單光子發(fā)射計算機斷層術)配合用于體內(nèi)顯像，且病人受到的輻射劑量很低。醫(yī)用99Mo/99mTc發(fā)生器的研制成功，使99mTc核素使用方便，價格低廉，因此99mTc成為研究心肌灌注顯像劑和腫瘤顯像劑的首選標記核素，并且取得了巨大進展。
目前，99mTc標記心肌灌注顯像劑可以分為正一價和零價兩類。Deutsch E等于1981年首次提出99mTc標記正一價脂溶性配合物用于心肌灌注顯像的可能性(Deutsch E，Bushong W，Glavan KA et al.Heart imaging with cationiccomplexes oftechnetium.Science，1981，21485)。1984年，Jones AG等報道了一類99mTc標記烷基異腈類配合物([99mTc(I)(CNR)6]+，R＝烷基)，結構式見(a)。其中99mTc-TBI于同年用于臨床試驗，是世界上第一個在臨床應用取得成功的99mTc標記心肌灌注顯像劑，但它的肝、肺本底高，清除慢，影響心肌成像質(zhì)量(Holman BL，Jones AG，Lister-James J et al.A newTc-99m-labeled myocardial imaging agent，hexakis(t-butylisonitrile)technetium(I)[Tc-99m-TBI]initial experience in the human.J Nucl Med，1984，251350)。
隨后，有關此類配合物的研究十分豐富，并從中篩選出生物性能優(yōu)良的99mTc-CPI(CPI＝Carbomethoxyisopropylisonitrile，甲酯異丙異腈)，其分子中的酯基在體內(nèi)水解，加速其在肝和肺中的代謝，從而改善了其生物性能。臨床試驗表明其肺清除和肝濃集等方面都優(yōu)于99mTc-TBI(Holman BL，Sporn V，Jones AG et al.Myocardial imaging with technetium-99m-CPIinitial experiencein the human.J Nucl Med，1987，2813)。
另一報道的異腈類配合物99mTc-MIBI成為第一個全世界公認的99mTc標記心肌灌注顯像劑，現(xiàn)在臨床廣泛使用。它的心肌顯像質(zhì)量明顯優(yōu)于99mTc-TBI和99mTc-CPI(Wackers FJT，Berman DS，Maddahi J et al.Technetium-99m hexakis-2-methoxy-isobutyl-isonitrilehuman biodistribution，dosimetry，safety，and preliminary comparison to thallium-201 for myocardialperfusion imaging.J Nucl Med，1989，30301)。McKusick等將99mTc-TBI、99mTc-CPI和99mTc-MIBI的心肌與本底攝取之比進行了比較，結果見表1，由此可見99mTc-MIBI的生物性能確實優(yōu)于99mTc-TBI和99mTc-CPI。
表199mTc-TBI、99mTc-CPI、99mTc-MIBI的心肌與本底攝取之比的比較配合物結構簡式 簡稱 30min60minCH3C(CH3)2N≡C TBI 1.2 1.3CH3OC(＝O)C(CH3)2N≡CCPI 1.9 2.4CH3OC(CH3)2CH2N≡C MIBI 2.5 2.8但99mTc-MIBI并非完美，其在肝臟中的濃集影響了對心肌顯像結果的正確評價。
1992年，99mTc(III)-Q12([99mTc(III)(SWL)(TMPP)2])+，又稱99mTc-furifosmin)被報道，結構式見(b)，它的心肌攝取高、滯留好，在5小時時仍無明顯清除和再分布(Rossetti C，Vanoli G，Paganelli G et al.Human biodistribution，dosimetry and clinical use of technetium(III)-99m-Q12.J Nucl Med，1994，351571)。99mTc-Q12的心肌攝取和血、肝清除都很快，而且肺本底又很低，因此，在注射后15min即可得到高質(zhì)量的心肌圖像，但由于其屬于混配配合物，制備較為困難，目前尚未在臨床上得以推廣。
1993年，Kelly等報道了配合物[99mTc(V)O2(tetrofosmin)2]+(tetrofosmin＝1，2-bis[bis(2-ethoxyethyl)phosphino]ethane，1，2-雙[雙(2-乙氧乙基)膦]乙烷，早期代號為P53)，結構式見(c)，它的非靶本底清除快、心肌攝取高、滯留好(Kelly ID，F(xiàn)orster AM，Higley B et al.Technetium-99m-tetrofosmin as a new radiopharmaceutical for myocardialperfusion imaging.J Nucl Med，1993，34222)。此配合物己被廣泛深入研究，其缺點是配體的合成條件苛刻，產(chǎn)率低。
上述幾種正一價的放射性锝-99m標記的心肌灌注顯像劑的結構式如下 以上介紹的幾種心肌灌注顯像劑均為正一價脂溶性配合物。而在1986年，Nunn等報道了一種新的七配位中性脂溶性配合物99mTc-teboroxime，也是锝肟硼酸加合物(BATOs)中最好的一種(Nunn AD et al.J Nucl Med，1986，27893)，結構式見(d)。它的一次通過攝取高，早期攝取多，清除快，有明顯的再分布性質(zhì)。在2min時可獲得高質(zhì)量心肌圖像，但同樣因清除快而需要多探頭SPECT顯像，這也是其不足之處。
1994年，Pasqualini等報道了另一類基于99mTcN核的中性心肌灌注顯像劑，其中以99mTcN(NOEt)2的心肌顯像效果最好(Pasqualini R，Duatti A，Bellande E et al.Bis(dithiocarbamato)nitrido technetium-99m radio-pharmaceuticalsa class of neutral myocardial imaging agents.J Nucl Med，1994，35334)，結構式見(e)。它的心肌攝取高，而且滯留時間長達2h以上，大大不同于中性BATOs類配合物，其滯留機制尚不清楚。研究表明，其在90分鐘內(nèi)有再分布性質(zhì)。99mTcN(NOEt)2的明顯不足是有較高的肝本底。
上述兩種零價的心肌灌注顯像劑的結構式如下 (d)99mTc-teboroxime (e)99mTcN(NOEt)2的結構在國內(nèi)，自有文獻報道以來，北京師范大學、醫(yī)科院北京阜外醫(yī)院以及江蘇原子醫(yī)學研究所先后開始了異腈原料藥的合成，標記化合物的研制，如99mTc-TBI，99mTc-CPI和99mTc-MIBI等，以及凍干藥盒的研制。1993年北京師范大學、醫(yī)科院北京阜外醫(yī)院以及江蘇原子醫(yī)學研究所獲得了99mTc-MIBI的新藥證書，并將其凍干藥盒作為產(chǎn)品供應國內(nèi)各大醫(yī)院，用于心肌灌注顯像和某些惡性腫瘤的診斷，取得了良好的經(jīng)濟效益和社會效益。
然而由于99mTc-MIBI也存在某些缺點，在肝臟中的濃集影響了對心肌顯像結果的正確評價。由于其代謝較慢，一般需要在注射后60分鐘顯像；有時還需要采取進食方法，以減少肝臟對心肌顯像的干擾等。針對上述不足，北京師范大學一直在進行各種探索，并取得了進展([1]王學斌，張現(xiàn)忠，唐志剛。新型MIBI藥盒生物分布的初步研究，第二屆全國核心臟病學學術會議論文匯編，1999，P7-8；[2]張現(xiàn)忠，王學斌.99mTcN-MIBI的電荷性質(zhì)及其與99mTc-MIBI的比較，核化學與放射化學，2000，22(1)，55-59；[3]Zhang XZh，Wang XB，Tang ZG，Zhang JB，et al.Effects of tween-80 on the Biodistributionof several Lipophilie Technetium-99m Complexes，Nucl Med Biol，2001，28(3)303-308)。
在上述多年研究的基礎上，發(fā)明人提出了一種具有優(yōu)良特性的新型锝-99m標記的異腈類配合物及其二步法藥盒。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的首要目的在于提供具有優(yōu)良顯像性能的一類新型放射性锝-99m標記的異腈類配合物，其為吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物；本發(fā)明的另一目的在于提供一種用于制備上述吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物的二步法異腈類藥盒；本發(fā)明的再一目的在于提供一種上述二步法異腈類藥盒的制備方法；本發(fā)明進一步目的是提供一種所述的吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物在人或動物的器官、組織中作為顯像劑的用途，特別是在心肌或腫瘤中作為顯像劑的用途。
本發(fā)明提供了一種吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物，目前的研究尚不能用特定的結構式來表示其結構，但它的部分結構是清楚的，即是以99mTc-(CNR)6為核心的，其中锝(Tc)是以+1價形式存在的，與該中心核Tc配位的六個CNR異腈配體的結構是清楚的，但該配合物又如何與藥盒中的相關成分吐溫結合構成更復雜的復合體，達到改進原配合物99mTc-(CNR)6生物性能的目的，仍在進行研究之中。對于本發(fā)明所述的吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物來說，可建議用99mTc-CN-R·T表示，T表示吐溫部分。此是一種習慣的示意方法，并非用于確切表示所述放射性配合物的結構。
由于本發(fā)明吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物屬于尚不知確切結構的物質(zhì)，因此只能用它的部分結構和其制備方法進行表征。
本發(fā)明提供了一種吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物，該配合物為吐溫和結構為99mTc-(CNR)6的配合物的結合物，其中，所述的R選自被1～4個相同或不相同的C1-4烷基或烷氧基取代或未取代的C1-10烷基或環(huán)烷基，該吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類化合物是通過以下的濕法或藥盒法制備而得濕法將含有異腈配體CNR、吐溫的乙醇溶液，加入含有還原劑、pH值緩沖劑和賦形劑的反應瓶中，攪拌溶解后，再加入18.5～1850兆貝克的高锝酸根99mTcO4-淋洗液，充分混勻，置沸水浴中反應10～15分鐘，得到吐溫介入的锝-99m標記的異腈類配合物。其中，異腈配體CNR、吐溫、還原劑、pH值緩沖劑和賦形劑的重量比為1∶(10～60)∶(0.1～10)∶(0.5～50)∶(20～200)。
藥盒法由下述的A瓶和B瓶進行放射性標記而得。
A瓶的制備將還原劑∶pH值緩沖劑∶賦形劑以(0.1～10)∶(0.5～50)∶(20～200)的重量比溶于充氮二次水中(充氮量足以保證還原劑不被氧化)，pH值調(diào)節(jié)至4.0～5.6，經(jīng)無菌過濾分裝于容器中，再經(jīng)冷凍干燥，充氮氣密封得凍干的藥盒A瓶；將異腈類配體CNR∶吐溫以1∶(10～60)的重量比溶于乙醇中，經(jīng)充分溶解后分裝于容器中，制得藥盒B瓶；在無菌條件下，將藥盒B瓶中的溶液加入到藥盒A瓶中，再將約18.5～1850兆貝克的高锝酸根99mTcO4-淋洗液(從醫(yī)用99Mo/99mTc發(fā)生器獲得)加入到藥盒A瓶中，充分混勻后，于沸水浴中加熱反應10～15分鐘，得到所述吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物。
在制備藥盒A瓶的步驟中，若分裝的容器是西林瓶，則每支凍干藥盒的還原劑用量不低于0.05mg；A瓶中所述的還原劑為可將99mTc+7(99mTcO4-)還原為99mTc+1(99mTc(I))的常規(guī)化學試劑，例如Sn(II)鹵素鹽、二氧硫脲、亞硫酸鈉或連二亞硫酸鈉等；所述的Sn(II)鹵素鹽包括SnCl2·2H2O、SnF2等。還原劑優(yōu)選二氧硫脲和SnCl2·2H2O，尤其優(yōu)選二氧硫脲。
所述的pH值緩沖劑為調(diào)節(jié)體系酸度的物質(zhì)，可以使體系的pH值在較小范圍內(nèi)變動，例如磷酸或其鹽、檸檬酸或其鹽、酒石酸或其鹽、乙酸或其鹽、抗壞血酸，或L-半胱氨酸等。緩沖劑優(yōu)選檸檬酸鈉和磷酸鹽，尤其優(yōu)選磷酸鹽。
所述的賦形劑為保護凍干藥盒中的還原劑以及決定凍干粉末外觀，且不會影響最終配合物制備的化學物質(zhì)，例如氯化鈉、甘露醇、葡萄糖或尿素等。賦形劑優(yōu)選甘露醇和葡萄糖，尤其優(yōu)選甘露醇。
在制備B瓶的步驟中，若分裝容器為安瓿，所用配體CNR的含量不少于0.5mg；所述的吐溫可為吐溫-20，吐溫-40或吐溫-80，優(yōu)選吐溫-80。
所述的異腈類配體CNR，以及所述的吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物中，R選自被1～4個相同或不相同的C1-4烷基或烷氧基取代或未取代的C1-10烷基或環(huán)烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基、甲氧異丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、2-甲基環(huán)己基、2，3-二甲基環(huán)己基、3，3，5-三甲基環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基等。R優(yōu)選為被1～4個相同或不相同的C1-2烷基或烷氧基取代或未取代的C1-4烷基，進一步優(yōu)選特丁基或甲氧異丁基。
同時，本發(fā)明提供了一種制備上述吐溫介入的锝-99m標記的異腈類配合物的二步法異腈藥盒，由A瓶和B瓶組成，其中A瓶為凍干藥盒，其中組分為還原劑、pH值緩沖劑和賦形劑，它們?nèi)叩闹亓勘纫佬驗?0.1～10)∶(0.5～50)∶(20～200)；B瓶為溶液，其中組分為溶解于乙醇中的異腈配體CNR和吐溫，它們二者的重量比為1∶(10～60)，其中，R選自被1～4個相同或不相同的C1-4烷基或烷氧基取代或未取代的C1-10烷基或環(huán)烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基、甲氧異丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、2-甲基環(huán)己基、2，3-二甲基環(huán)己基、3，3，5-三甲基環(huán)己基、環(huán)庚基或環(huán)辛基等。R優(yōu)選為被1～4個相同或不相同的C1-2烷基或烷氧基取代或未取代的C1-4烷基，進一步優(yōu)選特丁基或甲氧異丁基。
A瓶為無菌無熱源的凍干藥盒，當A瓶的分裝容器為西林瓶時，每支凍干藥盒中的還原劑用量不低于0.05mg；A瓶中所述的還原劑為可將99mTc+7(99mTcO4-)還原為99mTc+1(99mTc(I))的常規(guī)化學試劑，例如Sn(II)鹵素鹽、二氧硫脲、亞硫酸鈉或連二亞硫酸鈉等；所述的Sn(II)鹵素鹽包括SnCl2·2H2O、SnF2等。還原劑優(yōu)選二氧硫脲和SnCl2·2H2O，尤其優(yōu)選二氧硫脲。
所述的pH值緩沖劑為調(diào)節(jié)體系酸度的物質(zhì)，可以使體系的pH值在較小范圍內(nèi)變動，例如磷酸或其鹽、檸檬酸或其鹽、酒石酸或其鹽、乙酸或其鹽、抗壞血酸，或L-半胱氨酸等。pH值緩沖劑優(yōu)選檸檬酸鈉和磷酸鹽，尤其優(yōu)選磷酸鹽。
所述的賦形劑為保護凍干藥盒中的還原劑以及決定凍干粉末外觀，且不會影響最終配合物制備的化學物質(zhì)，例如氯化鈉、甘露醇、葡萄糖或尿素等。賦形劑優(yōu)選甘露醇和葡萄糖，尤其優(yōu)選甘露醇。
B瓶為無菌無熱原的溶液，當分裝容器為安瓿時，每支安瓿中配體CNR的含量不少于0.5mg。
所述的吐溫可為吐溫-20，吐溫-40或吐溫-80，優(yōu)選吐溫-80。
上述的二步法異腈藥盒，是按照下述的方法，分別制備A瓶和B瓶而得到1)A瓶的制備將還原劑pH值緩沖劑賦形劑以(0.1～10)∶(0.5～50)∶(20～200)的重量比溶于充氮二次水中(充氮量足以保證還原劑不被氧化)，pH調(diào)節(jié)至4.0～5.6，經(jīng)無菌過濾分裝于容器中，再經(jīng)冷凍干燥，充氮氣密封得凍干的藥盒A瓶；2)B瓶的制備將作為主要原料藥的異腈類配體CNR和吐溫以1∶(10～60)的重量比溶于乙醇中，經(jīng)充分溶解后分裝于容器中，制得藥盒B瓶，其中R選自被1～4個相同或不相同的C1-4烷基或烷氧基取代或未取代的C1-10烷基或環(huán)烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基、甲氧異丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、2-甲基環(huán)己基、2，3-二甲基環(huán)己基、3，3，5-三甲基環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基等。R優(yōu)選為被1～4個相同或不相同的C1-2烷基或烷氧基取代或未取代的C1-4烷基，進一步優(yōu)選特丁基或甲氧異丁基。
A瓶為無菌無熱原的凍干藥盒，在制備藥盒A瓶的步驟中，若分裝的容器是西林瓶，則每支凍干藥盒的還原劑用量不低于0.05mg；
A瓶中所述的還原劑為可將99mTc+7(99mTcO4-)還原為99mTc+1(99mTc(I))的常規(guī)化學試劑，例如Sn(II)鹵素鹽、二氧硫脲、亞硫酸鈉或連二亞硫酸鈉等；所述的Sn(II)鹵素鹽包括SnCl2·2H2O、SnF2等。還原劑優(yōu)選二氧硫脲和SnCl2·2H2O，尤其優(yōu)選二氧硫脲。
所述的pH值緩沖劑為調(diào)節(jié)體系酸度的物質(zhì)，可以使體系的pH值在較小范圍內(nèi)變動，例如磷酸或其鹽、檸檬酸或其鹽、酒石酸或其鹽、乙酸或其鹽、抗壞血酸，或L-半胱氨酸等。pH值緩沖劑優(yōu)選檸檬酸鈉和磷酸鹽，尤其優(yōu)選磷酸鹽。
所述的賦形劑為保護凍干藥盒中的還原劑以及決定凍干粉末外觀，且不會影響最終配合物制備的化學物質(zhì)，例如氯化鈉、甘露醇、葡萄糖或尿素等。賦形劑優(yōu)選甘露醇和葡萄糖，尤其優(yōu)選甘露醇。
B瓶為無菌無熱原的溶液，在制備B瓶的步驟中，若分裝容器為安瓿，所用配體CNR的含量不少于0.5mg；所述的吐溫可為吐溫-20，吐溫-40或吐溫-80，優(yōu)選吐溫-80。
本發(fā)明所述的吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物可在人或動物的器官或組織中用作顯像劑，特別是在心肌或腫瘤中用作顯像劑。


圖1為本發(fā)明的配合物中吐溫-80濃度與99mTc-MIBI·T分配系數(shù)的關系圖。
具體實施例方式
通過下述的制備例、實施例和性能測定實施例可使本發(fā)明得到更清楚的說明一、制備例異腈配體CNR的制備參照中國專利申請00107287.0中公開的方法制備得到異腈配體甲氧異丁基異腈(MIBI)和CNR′，其中CNR′為環(huán)戊基異腈(CPeFI)，環(huán)己基異腈(CHI)，2-甲基環(huán)己基異腈(MCHI)，2，3-二甲基環(huán)己基異腈(DMCHI)，3，3，5-三甲基環(huán)己基異腈(TMCHI)，環(huán)庚基異腈(CHpI)或環(huán)辛基異腈(COI)。
另一種配體特丁基異腈(TBI)為Acros產(chǎn)品。
二、實施例實施例1二步法MIBI(甲氧異丁異腈)藥盒的制備二步法藥盒分為A瓶和B瓶兩部分。其中A瓶為無菌無熱原凍干藥盒，主要含有還原劑、pH值緩沖劑、賦形劑等，A瓶的作用在于將99mTcO4-淋洗液還原為99mTc(I)價，使之形成可與MIBI配體進行螯合的化學狀態(tài)。
1)A瓶凍干藥盒的制備(以100支為例)取二氧硫脲100mg，磷酸二氫鈉500mg，甘露醇2000mg溶于充氮二次水中，并用該充氮二次水將該混合液定容至100mL，pH值會自然控制在4.0～5.6之間，無菌過濾該混合溶液，取100支，每支為10mL的西林瓶，每瓶中分裝1.0mL，然后經(jīng)冷凍干燥后充氮密封得A瓶。
2)B瓶MIBI安瓿的制備(以100支為例)二步法藥盒B瓶為安瓿盛裝的無菌無熱原溶液，其主要提供制備吐溫介入的锝-99m標記的MIBI配合物注射液的主原料藥。
取上述制備例制備的MIBI 100mg和吐溫-80 1500mg溶于無水乙醇20mL中，經(jīng)充分溶解后，取100支每支2mL的安瓿瓶，每瓶中分裝0.2mL該溶液，封口得B瓶。
實施例2吐溫介入的放射性锝-99m標記的MIBI配合物注射液的制備A濕法將含有MIBI配體10mg、吐溫-80 150mg溶于乙醇中，然后加入到含有二氧硫脲10mg，磷酸二氫鈉50mg，甘露醇200mg的反應瓶中，攪拌溶解后，再加入18.5～1850兆貝克的高锝酸根99mTcO4-淋洗液，充分混勻，置沸水浴中反應10～15分鐘，即得到吐溫介入的锝-99m標記的異腈類配合物。
B藥盒法在無菌條件下，將實施例1中制備的二步法藥盒B瓶打開，用注射器將其中的溶液取出注入所述的A瓶中，然后再將約18.5～1850兆貝克的高锝酸根99mTcO4-淋洗液(從醫(yī)用99Mo/99mTc發(fā)生器獲得)加入A瓶中，充分搖勻后，將A瓶置于沸水浴中，加熱反應15min，取出室溫放置冷卻后，即得吐溫介入的放射性锝-99m標記的MIBI配合物99mTc-MIBI·T注射液。
實施例3二步法TBI(特丁基異腈)藥盒的制備二步法藥盒分為A瓶和B瓶兩部分。其中A瓶為無菌無熱原凍干藥盒，其主要含還原劑、pH值緩沖劑、賦形劑等，A瓶的作用在于將99mTcO4-淋洗液還原為99mTc(I)價，使之形成可與TBI配體進行螯合的化學狀態(tài)。
1)A瓶凍干藥盒的制備(以100支為例)取SnCl2·2H2O 10mg，檸檬酸鈉50mg，葡萄糖200mg溶于充氮二次水中，并用該充氮二次水將該混合液定容至100mL，用0.1mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值在4.0～5.6之間，無菌過濾該混合溶液，取100支，每支為10mL的西林瓶，每瓶中分裝1.0mL，然后經(jīng)冷凍干燥后充氮密封得A瓶。
2)B瓶TBI安瓿的制備(以100支為例)二步法藥盒B瓶為安瓿盛裝的無菌無熱原溶液，其主要提供制備吐溫介入的锝-99m標記的TBI配合物注射液的主原料藥。
取Acros產(chǎn)品特丁基異腈TBI(97％)100mg和吐溫-80 1000mg溶于無水乙醇20mL中，經(jīng)充分溶解后，取100支每支2mL的安瓿瓶，每瓶中分裝0.2mL該溶液，封口得B瓶。
實施例4吐溫介入的放射性锝-99m標記的TBI配合物注射液的制備采用實施例3制備得到的二步法TBI(特丁基異腈)藥盒，按照實施例2的藥盒法制備得到吐溫介入的放射性锝-99m標記的TBI配合物99mTc-TBI·T注射液，其中，加熱時間為10min。
實施例5二步法CNR′(CNR′的定義如制備例中所述)藥盒的制備1)A瓶凍干藥盒的制備(以100支為例)取二氧硫脲10mg，磷酸二氫鈉50mg，甘露醇2000mg溶于充氮二次水中，并用該充氮二次水將該混合液定容至100mL，pH值會自然控制在4.0～5.6之間，無菌過濾該混合溶液，取100支，每支為10mL的西林瓶，每瓶中分裝1.0mL，然后經(jīng)冷凍干燥后充氮密封得A瓶。
2)B瓶CNR′安瓿的制備(以100支為例)取制備例所制備的異腈配體CNR′50mg和吐溫-40 3000mg溶于無水乙醇20mL中，經(jīng)充分溶解后，取100支每支2mL的安瓿瓶，每瓶中分裝0.2mL該溶液，封口得B瓶。
實施例6吐溫介入的放射性锝-99m標記的CNR′配合物注射液的制備采用實施例5中制備得到的二步法藥盒，按照實施例2的藥盒法制備得到吐溫介入的放射性锝-99m標記的CNR′配合物99mTc-CNR′·T注射液。
三、性能測定實施例下面對本發(fā)明二步法異腈類藥盒的性能測定描述如下1、99mTc-CNR·T注射液的放射化學純度的測定以實施例2、4、6制備的99mTc-MIBI·T、99mTc-TBI·T和99mTc-CNR′·T注射液為例，對該類配合物的放射化學純度進行測定。
可采用三種展開體系對實施例2，4和6中分別制備得到的99mTc-MIBI·T、99mTc-TBI·T和99mTc-CNR′·T的生成進行層析鑒定，體系1展開劑為氯仿∶丙酮∶濃氨水＝2∶6∶0.1(v/v)，載體為聚酰胺薄片；體系2展開劑為乙腈，載體為聚酰胺薄片；體系3展開劑為乙醇，載體為新華濾紙；結果見表2。
表299mTc-MIBI·T、99mTc-TBI·T和99mTc-CNR′·T注射液的層析結果

從表2的結果可以看出，采用三種體系中的任何一種，都可以將產(chǎn)物99mTc-MIBI·T，99mTc-TBI·T或99mTc-CNR′·T與其他雜質(zhì)分開，進行99mTc-MIBI·T，99mTc-TBI·T或99mTc-CNR′·T的放化純測定。其中尤以體系1將三種不同組分分開得最好，這對于計算每種組分在總產(chǎn)物中所占的比例非常有利。
2、99mTc-CNR·T分配系數(shù)的測定以99mTc-MIBI·T配合物溶液和99mTc-TBI·T配合物溶液為例，對分配系數(shù)進行測定。
分別制備放化純大于95％的99mTc-MIBI配合物溶液和99mTc-TBI配合物溶液，含有0.01％，0.1％，1％，2％，5％和10％吐溫-80濃度的99mTc-MIBI·T配合物溶液和99mTc-TBI·T配合物溶液。取0.1mL(1.11MBq)各種溶液加入到含有0.2mL正辛醇和2.0mL蒸餾水的1 0mL離心試管中，蓋好后充分振蕩5分鐘，分別取有機相和水相各0.1mL于潔凈試管中，在井形γ探測器上測量放射性計數(shù)，其分配系數(shù)P為N有/N水，重復本操作3次后取平均值為該配合物的分配系數(shù)。99mTc-TBI·T和99mTc-MIBI·T顯示出類似的影響趨勢，現(xiàn)列出99mTc-MIBI·T的實驗結果如圖1所示。由此可見吐溫-80的濃度增加，脂水分配系數(shù)不斷降低，直至Tween-80的濃度大于1％后趨于恒定。
3、99mTc-CNR·T穩(wěn)定性的測定以99mTc-MIBI·T配合物溶液和99mTc-TBI·T配合物溶液為例，對該類配合物的穩(wěn)定性進行測定。
將實施例2和4制備的99mTc-MIBI·T配合物溶液99mTc-TBI·T配合物溶液在室溫下放置7小時后進行點樣層析，與剛制備的新鮮溶液對比，測定放化純。實驗結果表明，99mTc-MIBI·T和99mTc-TBI·T在室溫下均可穩(wěn)定存在7小時以上，其放化純及溶液外觀均無明顯變化。
4、二步法異腈類藥盒的穩(wěn)定性研究以實施例1所制備的二步法MIBI藥盒為代表，對穩(wěn)定性進行考察。
1)A瓶藥盒穩(wěn)定性考察將A瓶藥盒樣品分別置于0℃以下，0℃～4℃，室溫下貯存，定期取出進行性狀觀察和放化純度檢測，考察A瓶藥盒在上述條件下的穩(wěn)定性結果如表3、4和5。
表3藥盒A瓶于冰箱條件(0℃～4℃)下貯存的穩(wěn)定性考察放置時間(天)放射化學純度(％) 性狀1 98.0 白色固體1597.3 無明顯改變3098.6 無明顯改變6098.2 無明顯改變9097.8 無明顯改變120 98.0 無明顯改變150 97.5 無明顯改變190 96.7 無明顯改變從以上數(shù)據(jù)可見，樣品放置六個月，其性狀無明顯變化，放射性標記后的放化純?nèi)源笥?5％，符合要求，說明藥盒A瓶在該條件下是比較穩(wěn)定的。
表4藥盒A瓶于室溫條件下貯存的穩(wěn)定性考察放置時間(天) 放射化學純度(％) 性狀1 99.0 白色固體5 98.7 無明顯改變1098.2 無明顯改變2097.4 無明顯改變3596.8 無明顯改變以上表4的數(shù)據(jù)說明，藥盒A瓶在室溫下放置30天，其性狀和放化純度均無明顯改變，說明藥盒在該條件下是比較穩(wěn)定的。
表5藥盒A瓶于低于-5℃貯存時間的穩(wěn)定性考察放置時間(天) 放射化學純度(％) 性狀198.5 白色固體30 96.6 無明顯改變60 99.0 無明顯改變90 97.0 無明顯改變150 97.5 無明顯改變300 98.0 無明顯改變450 96.4 無明顯改變600 97.2 無明顯改變由以上數(shù)據(jù)可見，樣品放置在低于-5℃的冰箱內(nèi)，經(jīng)過1年半的存貯，其性狀無明顯變化，標記后的放化純?nèi)源笥?5％，符合要求，說明二步法MIBI藥盒A瓶在該條件下是相當穩(wěn)定的。
2)B瓶藥盒的穩(wěn)定性考察將B瓶藥盒樣品分別置于室溫、0℃～4℃貯存不同時間，定期取出進行性狀觀察和放射化學純度的檢測，考察B瓶藥盒在上述二種條件下的穩(wěn)定性。結果如表6、7所示。
表6藥盒B瓶于室溫下的穩(wěn)定性考察放置時間(天)放射化學純度(％) 性狀1 98.5 無色透明溶液7 99.0 無明顯改變15 98.2 無明顯改變30 97.8 無明顯改變60 97.2 無明顯改變90 96.8 無明顯改變由以上數(shù)據(jù)可見，藥盒B瓶在室溫下放置90天，性狀和放射化學純度均無明顯改變，說明藥盒在該條件下是比較穩(wěn)定的。
表7藥盒B瓶于0℃～4℃貯存條件下的穩(wěn)定性考察放置時間(天) 放射化學純度(％)性狀1 99.0無色透明溶液7 98.5無明顯改變1598.8無明顯改變3097.9無明顯改變6098.2無明顯改變9098.5無明顯改變120 99.0無明顯改變180 98.7無明顯改變360 96.5無明顯改變520 98.2無明顯改變780 98.5無明顯改變由以上表7數(shù)據(jù)可見，藥盒B瓶于0℃～4℃冰箱放置可長達二年，其性狀和放射化學純度均無明顯改變，說明藥盒在該條件下是比較穩(wěn)定的。
5、99mTc-CNR·T配合物的急性毒性試驗參照藥典的有關實驗方法，取實施例2所制備得到的99mTc-MIBI·T注射液各0.5mL，即藥量為人體用量的四分之一，以4～5秒勻速(約0.1mL/s)注射于體重18～20g小鼠的尾靜脈，共5只，按要求觀察48小時小鼠全部存活，72小時后解剖觀察心、肝、脾、肺、腎等各臟器未見異常。以同樣的方法注射實施例4所制備的99mTc-TBI·T注射液，進行毒性實驗，按要求觀察48小時小鼠全部存活，72小時后解剖觀察心、肝、脾、肺、腎等各臟器未見異常。急性毒性試驗表明，按正常人用量的約600倍注入小鼠尾靜脈，在規(guī)定的時間內(nèi)(7天)，觀察注射組與對照組無明顯差別。實驗結果說明注射液毒性較低，經(jīng)無菌無熱原檢查合格后可以進行臨床試用研究。
6、99mTc-CNR·T配合物的生物分布取體重18～22g昆明小白鼠按照藥典方法進行生物分布實驗。尾靜脈注射0.10mL(約0.74MBq)的實施例2制備得到的99mTc-MIBI·T，分別于注射后5分鐘、15分鐘、30分鐘和60分鐘將小鼠斷頸處死，取出心、肝、肺、腎、腦、肌肉和血，分別稱重，并在井型γ探測器內(nèi)測其放射性計數(shù)，計算每克組織的攝取劑量(％ID/g)；并以心臟為靶器官，比較其與肺、肝、血和肌肉的％ID/g比值。百分之一注射劑量的計算是取0.10mL(注射量)配合物溶液，稀釋至100倍后再分別取0.10mL于三支小試管中，在測量組織放射性計數(shù)的同時測量其放射性計數(shù)，百分之一劑量為三支小試管中放射性計數(shù)的平均值。結果如表8、9所示。
用同樣的方法研究實施例4所制備的99mTc-TBI·T的生物分布，結果如表10、11所示。
表899mTc-MIBI·T在小鼠體內(nèi)分布結果(X±S，％ID/g，n＝3)時間/min組織5 15 30 60心 29.00±5.72 28.38±2.86 28.45±5.98 23.00±0.85肝 11.34±1.72 13.98±2.75 13.07±3.13 10.81±3.32肺 10.90±1.61 8.39±0.56 4.99±2.85 2.91±0.45腎 33.57±5.21 33.37±2.12 25.78±1.79 22.54±2.27腦 0.28±0.06 0.26±0.03 0.21±0.02 0.1 3±0.01肌肉 5.99±1.06 5.94±1.58 4.09±0.82 4.58±0.72血 1.57±0.19 0.48±0.04 0.19±0.03 0.14±0.03
表999mTc-MIBI·T的靶/非靶器官的比值項目心/肝心/血 心/肺時間 5min 60min 5min 60min 5min 60min比值 2.56 2.13 18.47 164.29 2.66 7.90表1099mTc-TBI·T在小鼠體內(nèi)的分布結果(X±S，％ID/g，n＝4)時間/min組織5 10 20 60 120心 32.20±2.76 31.30±1.24 32.54±2.59 33.06±3.46 26.95±1.98肝 18.40±1.82 22.24±0.37 23.66±3.34 25.59±2.85 22.13±1.43肺 65.04±7.22 40.35±5.46 19.98±4.88 6.48±1.23 5.70±0.52腎 25.04±1.60 26.18±1.55 28.45±3.24 34.25±1.78 31.55±1.41腦 0.22±0.05 0.21±0.05 0.18±0.03 0.15±0.03 0.12±0.04肌肉 4.23±0.53 5.36±1.33 4.89±0.93 5.84±1.66 5.91±0.48血 2.32±0.20 1.09±0.25 0.47±0.04 0.24±0.02 0.20±0.03表1199mTc-TBI·T的靶/非靶器官的比值項目 心/肝 心/血 心/肺時間 5min 60min5min 60min5min60min比值 1.75 1.29 13.88 137.75 0.504.73從表中數(shù)據(jù)可見，由新型MIBI藥盒制備的標記物溶液99mTc-MIBI·T和99mTc-TBI·T，在小鼠的心肌中有較高的攝取，血清除快，且肝、肺攝取較低，可以用于心肌顯像。
為了便于進一步說明二步法異腈藥盒所制備出的標記物99mTc-CNR·T生物性能的改進，下面通過比較例來說明比較例1二步法藥盒與原一步法配方藥盒制備注射液的小鼠體內(nèi)生物分布比較，由于二步法藥盒中所加入輔料的作用，進一步改善了配合物注射液的生物性能。主要表現(xiàn)在肝的初始攝取明顯降低，和早期心/肝比值的顯著提高，這樣更加有利于在臨床上得到清晰、高質(zhì)量的顯像圖像和實現(xiàn)心肌的提前顯像。
表12、13為按實施例2制得的99mTc-MIBI·T注射液(二步法)，與參考原美國杜邦公司藥盒配方藥盒(Cardiolite)制得的99mTc-MIBI注射液(一步法)，小鼠體內(nèi)生物數(shù)據(jù)比較。
表12兩種注射液在小鼠體內(nèi)的生物分布比較(X±S，％ID/g，n＝3)注射時間(min)組織 注射液 5 15 30 60二步法 29.00±5.72 28.38±2.8628.45±5.9823.00±0.85心一步法 32.14±0.75 27.72±2.6124.93±1.5626.83±4.78二步法 11.34±1.72 13.98±2.7513.07±3.1310.81±3.32肝一步法 34.09±0.37 36.44±0.8127.77±6.8425.88±1.51二步法 1.57±0.19 0.48±0.04 0.19±0.03 0.14±0.03血一步法 2.51±0.48 0.79±0.05 0.28±0.03 0.20±0.01表13兩種注射液在小鼠體內(nèi)的靶/非靶器官的比值心/肝 心/血 心/肺注射液5min60min 5min 60min 5min60min二步法 2.562.13 18.47164.292.667.90一步法 0.941.04 12.80134.152.8712.25由表12和表13可見，與原一步法藥盒配方制備的99mTc-MIBI注射液相比，二步法藥盒制得的99mTc-MIBI·T注射液在小鼠體內(nèi)的心肌攝取仍維持在高水平范圍，而肝的初始攝取明顯降低，血本底也更低，這樣大大提高了心/肝比和心/血比，更加有利于得到清晰、高質(zhì)量的顯像圖像，并可實現(xiàn)心肌的提前顯像，以減少病人排隊等候時間。
比較例2正如比較例1所述的理由，在二步法藥盒中加入輔料的作用也進一步改善了99mTc-CNR·T注射液的生物性能。主要表現(xiàn)在肝的初始攝取明顯降低和早期心/肝比值的顯著提高，因此更加有利于在臨床上得到清晰、高質(zhì)量的顯像圖像和實現(xiàn)心肌的提前顯像。
表14、15為按實施例4制得的99mTc-TBI·T注射液(二步法)，與改進前所普遍采用的常規(guī)方法制得的99mTc-TBI注射液小鼠體內(nèi)生物數(shù)據(jù)比較。
表14兩種注射液在小鼠體內(nèi)的生物分布比較(X±S，％ID/g，n＝4)時間/min組織注射液5 10 20 60A21.78±2.1529.42±3.3723.69±3.3521.83±1.66心B32.20±2.7631.30±1.2432.54±2.5933.06±3.46A40.67±4.9342.28±3.1139.12±2.9538.25±2.87肝B18.40±1.8222.24±0.3723.66±3.3425.59±2.85A50.07±2.2734.56±1.7616.32±3.348.23±1.21肺B65.04±7.2240.35±5.4619.98±4.886.48±1.23A5.66±1.11 3.65±0.25 2.63±0.25 1.67±0.20血B2.32±0.20 1.09±0.25 0.47±0.04 0.24±0.02注A99mTc-TBI B99mTc-TBI·T表15兩種注射液在小鼠體內(nèi)的靶/非靶器官的比值心/肝 心/血 心/肺注射液5min 60min5min 60min5min60min99mTc-TBI 0.54 0.57 3.85 13.070.432.6599mTc-TBI·T1.75 1.25 13.88137.75 0.504.73本發(fā)明所具有的有益效果為1.通過二步法藥盒制備的99mTc-CNR·T結合物，如99mTc-MIBI·T和99mTc-TBI·T是一類新型的心肌顯像劑，其脂水分配系數(shù)及生物性能與現(xiàn)有的國內(nèi)外廣泛使用的99mTc-CNR，如99mTc-MIBI或99mTc-TBI不同，對其結構與組成目前正在進行研究。初步結果表明99mTc-CNR與吐溫，如吐溫-80等有一定的結合，是構成與原99mTc-CNR不同理化狀態(tài)的新的組成物。該標記物與原一步法制備的99mTc-CNR相比，能顯著降低小鼠的初始肝攝取和血本底，這將導致臨床上改善心肌顯像的質(zhì)量，能實現(xiàn)早期心肌顯像，并可減少病人的候診時間。
2.二步法藥盒將不很穩(wěn)定的主原料藥CNR，如MIBI或TBI與其它組分分開，使其保存在穩(wěn)定的介質(zhì)環(huán)境中，這樣不但保存了一步法異腈藥盒在注射液制備方面的方便性，而且延長了藥盒的保質(zhì)期，達一年之多，優(yōu)于國際上規(guī)定的半年保質(zhì)期。
權利要求
1.一種吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物，為吐溫和99mTc-(CNR)6的結合物，其中，所述的R選自被1～4個相同或不相同的C1-4烷基或烷氧基取代或未取代的C1-10烷基或環(huán)烷基；所述的吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類化合物是通過以下的濕法或藥盒法制備而得濕法將含有異腈配體CNR、吐溫的乙醇溶液加入含有還原劑、pH值緩沖劑和賦形劑的反應瓶中，攪拌溶解后，再加入18.5～1850兆貝克的高锝酸根99mTcO4-淋洗液，充分混勻，置沸水浴中反應10～15分鐘，得到吐溫介入的锝-99m標記的異腈類配合物，所述的異腈配體CNR、吐溫、還原劑、pH值緩沖劑和賦形劑的重量比為1∶10～60∶0.1～10∶0.5～50∶20～200；藥盒法將還原劑、pH值緩沖劑和賦形劑以0.1～10∶0.5～50∶20～200的重量比溶于充氮二次水中，pH值調(diào)節(jié)至4.0～5.6，經(jīng)無菌過濾分裝于容器中，再經(jīng)冷凍干燥，充氮氣密封得凍干的藥盒A瓶；將異腈類配體CNR和吐溫以1∶10～60的重量比溶于乙醇中，經(jīng)充分溶解后分裝于容器中，制得藥盒B瓶；將藥盒B瓶中的溶液加入到藥盒A瓶中，再將18.5～1850兆貝克的高锝酸根99mTcO4-淋洗液加入到藥盒A瓶中，充分混勻后，于沸水浴中加熱反應10～15分鐘，得到所述的吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物。
2.根據(jù)權利要求1所述的吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物，其特征在于，所述的R為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基、甲氧異丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、2-甲基環(huán)己基、2，3-二甲基環(huán)己基、3，3，5-三甲基環(huán)己基、環(huán)庚基或環(huán)辛基。
3.根據(jù)權利要求1所述的吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物，其特征在于，所述的吐溫為吐溫-20，吐溫-40或吐溫-80。
4.根據(jù)權利要求1所述的吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物，其特征在于，所述的還原劑為Sn(II)鹵素鹽、二氧硫脲、亞硫酸鈉或連二亞硫酸鈉；所述的pH值緩沖劑為磷酸或其鹽、檸檬酸或其鹽、酒石酸或其鹽、乙酸或其鹽、抗壞血酸，或L-半胱氨酸磷酸；所述的賦形劑為氯化鈉、甘露醇、葡萄糖或尿素。
5.一種用于制備權利要求1所述吐溫介入的锝-99m標記異腈類配合物的二步法異腈藥盒，由A瓶和B瓶組成，其特征在于所述的A瓶為凍干藥盒，其中組分為還原劑、pH值緩沖劑和賦形劑，它們?nèi)叩闹亓勘纫佬驗?.1～10∶0.5～50∶20～200；所述的B瓶為溶液，其中組分為溶解于乙醇中的異腈配體CNR和吐溫，它們二者的重量比為1∶10～60，其中，R選自被1～4個相同或不相同的C1-4烷基或烷氧基取代或未取代的C1-10烷基或環(huán)烷基。
6.根據(jù)權利要求5所述的二步法異腈藥盒，其特征在于，所述的R為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基、甲氧異丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、2-甲基環(huán)己基、2，3-二甲基環(huán)己基、3，3，5-三甲基環(huán)己基、環(huán)庚基或環(huán)辛基。
7.根據(jù)權利要求5所述的二步法異腈藥盒，其特征在于，所述的吐溫為吐溫-20，吐溫-40或吐溫-80。
8.根據(jù)權利要求5所述的二步法異腈藥盒，其特征在于，所述的還原劑為Sn(II)鹵素鹽、二氧硫脲、亞硫酸鈉或連二亞硫酸鈉；所述的pH值緩沖劑為磷酸或其鹽、檸檬酸或其鹽、酒石酸或其鹽、乙酸或其鹽、抗壞血酸，或L-半胱氨酸磷酸；所述的賦形劑為氯化鈉、甘露醇、葡萄糖或尿素。
9.根據(jù)權利要求5所述的二步法異腈類藥盒，其特征在于，所述A瓶的分裝容器為西林瓶，還原劑的含量不低于0.05mg；所述B瓶的分裝容器為安瓿，異腈配體CNR的含量不低于0.5mg。
10.一種權利要求5所述的二步法藥盒的制備方法，其特征在于，所述的二步法藥盒由下述的方法分別制備A瓶和B瓶得到A瓶的制備將還原劑、pH值緩沖劑和賦形劑以0.1～10∶0.5～50∶20～200的重量比溶于充氮二次水中，pH調(diào)節(jié)至4.0～5.6，經(jīng)無菌過濾分裝于容器中，再經(jīng)冷凍干燥，充氮氣密封得凍干的藥盒A瓶；B瓶的制備將異腈類配體CNR和吐溫以1∶10～60的重量比溶于乙醇中，經(jīng)充分溶解后分裝于容器中，制得藥盒B瓶，其中，R選自被1～4個相同或不相同的C1-4烷基或烷氧基取代或未取代的C1-10烷基或環(huán)烷基。
11.權利要求1～4中任意一項所述的吐溫介入的放射性锝-99m標記的異腈類配合物在人或動物的器官或組織作為顯像劑的應用。
12.根據(jù)權利要求11所述的應用，其特征在于，所述的放射性锝-99m標記的異腈類配合物在心肌或腫瘤中用作顯像劑。
全文摘要
一種吐溫(聚乙氧基油酸山梨醇)介入的锝－99m標記的異腈類配合物，為吐溫和
文檔編號C07F11/00GK1510036SQ0215863
公開日2004年7月7日 申請日期2002年12月25日 優(yōu)先權日2002年12月25日
發(fā)明者王學斌, 唐志剛, 呂恭序, 張現(xiàn)忠 申請人:北京師范大學